Nervo normal

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MTODOS CORRENTES DE ESTUDO DE BIPSIAS

DE NERVO

Bipsias de nervo (geralmente do nervo sural) so

divididas em

a) fragmentos maiores para fixao em formol e incluso

em parafina e
b) fragmentos menores (mximo de 1 mm de lado) para
fixao em lquido de Karnovsky (glutaraldedo +
paraformaldedo) e incluso em araldite ( =
processamento para microscopia eletrnica). Para tcnica
de microscopia eletrnica em maior detalhe, clique.

Os fragmentos fixados em formol e includos em parafina

so cortados em planos transversal e longitudinal. Os cortes tm
cerca de 6 m e so corados por HE. Neles examina-se a
arquitetura geral do nervo, estrutura dos fascculos, presena de
infiltrado inflamatrio e depsitos de amilide. o mtodo de
escolha para diagnstico de hansenase. Se h suspeita na HE,
solicita-se colorao especial para bacilos de Hansen pelo mtodo
de Ziehl-Nielsen.

Os fragmentos fixados em Karnovsky so ps-fixados em

tetrxido de smio, desidratados em acetona e includos em
araldite. O araldite (resina epxida anloga ao adesivo do mesmo
nome) uma resina viscosa que, aps polimerizao, fica
extremamente dura. Contudo, mantm a plasticidade necessria
para obter cortes muito finos. Estes cortes no so feitos em
micrtomo comum com navalha de ao. So feitos em um
ultramicrtomo com navalhas de vidro.

a) Cortes de 1 m so montados em lminas de vidro comuns

e corados a quente por azul de toluidina. So examinados no
microscpio ptico. A qualidade do preparado melhor que os
cortes de parafina, porque a preservao da estrutura tima (o
smio um excelente fixador) e os cortes so mais finos (cortes
de parafina = 6 m). Este tipo de preparao permite visualizar
bem os axnios (s os mielnicos), cujas banhas de mielina ficam
coradas em azul escuro.

b) Para microscopia eletrnica, escolhe-se o melhor bloco e so

feitos cortes de 0,1 m agora usando navalha de diamante
(preo US$ 3.000,00). Os cortes no podem ser colhidos em
lminas de vidro. So colhidos em microgrades de cobre e
contrastados com citrato de chumbo (um metal pesado) antes de
examinados no ME.
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NERVO NORMAL INCLUDO EM PARAFINA

CORTE TRANSVERSAL DE 6 m, HE

Um nervo perifrico composto por fascculos separados e envolvidos por

tecido conjuntivo colgeno, chamado epinurio. Notar que o epinurio no
somente envolve o nervo por fora. Todas as traves fibrosas entre os
fascculos so tambm epinurio. Cada fascculo envolto por uma camada
de clulas especializadas, o perinurio, e contm axnios mielnicos e
amielnicos em meio a tecido conjuntivo frouxo, o endonurio.
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O perinurio formado por camadas de clulas pavimentosas, intimamente
unidas entre si, constituindo uma barreira que isola o endonurio e os
axnios. A espessura do perinurio, ou seja, o nmero de camadas celulares
proporcional ao dimetro do fascculo.

O endonurio constitudo por fibras colgenas arranjadas

longitudinalmente, sintetizadas por fibroblastos do endonurio. Em meio a
elas so observados os axnios mielnicos de vrios dimetros. (Os axnios
amielnicos no so visveis em HE por serem muito finos. So estudados s
com microscopia eletrnica).

Nos axnios maiores possvel distinguir um ponto central mais denso, que
o axnio propriamente dito, e um anel rseo frouxo em volta, que a
banha de mielina. As estruturas como mostradas aqui esto alteradas pelos
artefatos inevitveis na incluso em parafina. Os axnios sofrem retrao e
adensamento. A mielina esgara-se dando aspecto finamente reticulado. Em
cortes longitudinais podem ser notados nodos de Ranvier, os pontos de
encontro entre a mielina sintetizada por duas clulas de Schwann contguas
(cada gomo de mielina chamado um internodo). Os ncleos das clulas
de Schwann ficam junto face externa da mielina.

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NERVO INCLUDO EM ARALDITE

CORTE DE 1 m CORADO POR AZUL DE TOLUIDINA
Nesta tcnica, a arquitetura geral do nervo observada em mais detalhe, e
recomenda-se objetiva de imerso. Notar as camadas do perinurio, com
seus ncleos alongados. Os axnios mielnicos aparecem como pequenas
argolas azuis, que so as banhas de mielina. O axnio em si a parte
central mais clara. Praticamente no h retrao, e o aspecto mais fiel
realidade in vivo. As rugas que se formam no corte de araldite durante a
colorao a quente so um artefato.
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MICROSCOPIA ELETRNICA
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A alta resoluo do microscpio eletrnico indispensvel para estudar

axnios mielnicos e, especialmente, os amielnicos.

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AXNIOS MIELNICOS so vistos de vrios dimetros,

 sendo a espessura da banha de mielina proporcional ao dimetro
do axnio.

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..
..
A banha de
mielina
constituda
por
dezenas de
voltas da
membrana
da clula
de
Schwann
ao redor do
axnio. A
cada volta
as
membranas
aderem
entre si
pelas
protenas
da mielina
(funcionam
como
pequenos
fechos
velcro) e
so
compactad
as
formando
lamelas. O
conjunto
forma um
timo
isolante
eltrico. A
manuten
o de uma
banha to
espessa e
complexa
feita
atravs de
linguetas
de
citoplasma
da clula
de
Schwann,
chamadas
incisuras
de
Schmidt-
Lanterman
n e pelo
citoplasma
ao longo
 dos nodos
de Ranvier
(abaixo).
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Aqui observa-se como a membrana da clula de Schwann se invagina para

formar a volta mais externa da banha. A isto se chama mesaxnio
externo. O mesaxnio interno no visvel nesta foto. Pode-se ver
tambm a poro externa do citoplasma da clula de Schwann.
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 As incisuras
de Schmidt-
Lantermann
so lingetas
do citoplasma
da clula de
Schwann que
percorrem a
banha de
mielina desde a
face externa
(onde est o
ncleo da clula
de Schwann)
at a face
interna. So
canais que
permitem
acesso rpido
todas as
camadas da
banha, sendo
essenciais na
manuteno e
turnover desta.
Esta incisura foi
cortada
longitudinalme
nte.

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NODO DE RANVIER. Onde os 'gomos' da banha de mielina (os
internodos) formados por duas clulas de Schwann contguas se encontram
est o nodo de Ranvier. Neste ponto se do as trocas inicas da conduo
saltatria.
..
O nodo
de
Ranvier
em corte
longitudi
nal.

A banha
de mielina
de cada
internodo
termina
formando
pequenas
alas que
contm
citoplasma
da clula
de
Schwann.
No nodo
no h
mielina,
sendo o
axnio
recoberto
por
delicadas
formaes
digitiforme
s do
citoplasma
das duas
clulas
contguas.
A
membrana
basal que
recobre
uma clula
de
Schwann
se continua
diretament
e com a da
vizinha,
sem
interrup
o,
formando
um tubo.
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O nodo
de
Ranvier
em corte
transver
sal.

Neste
ponto no
h lamelas
de mielina,
apenas
projees
digitiforme
s. H
ampla
oportunida
de de
trocas
inicas
entre o
axnio e o
endonuri
o. Notar a
membrana
basal
circundand
oo
conjunto.
O axolema
(membran
a do
axnio)
mais densa
no nodo
que em
outros
locais,
devido
riqueza em
canais
inicos
(molculas
proteicas).
Os
microtbul
os,
neurofilam
entos e
organelas
do axnio
tambm
esto mais
compactad
os nesta
 regio.
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AXNIOS AMIELNICOS
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Axnios
amielnicos
so
diminutos
demais para
serem bem
visualizados
em
microscopia
ptica.
Formam
agrupamento
s no
endonurio,
sendo
circundados
individualme
nte por
prolongamen
tos de clulas
de Schwann.
Nesta foto,
em corte
transversal,
os axnios
so as
estruturas
mais claras,
os processos
de clulas de
Schwann
mais escuros.
Aqui e acol
possvel
observar a
parte central
da clula de
Schwann com
seu ncleo.
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 Os axnios
amielnico
s tm
contorno
arredondado
, citoplasma
pouco
eletrodenso,
contm
microtbulos
e
neurofilame
ntos e vrias
mitocndrias
. Os
prolongame
ntos de
clulas de
Schwann os
circundam
completame
nte, e o
conjunto
envolvido
por
membrana
basal. De
permeio h
fibras
colgenas do
endonurio.

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Esta clula de
Schwann abriga
trs axnios
amielnicos em
invaginaes de
sua membrana
plasmtica.
Notar as fibras
colgenas do
endonurio em
corte
transversal.

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PERINURIO
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O perinurio formado por camadas de clulas pavimentosas, unidas entre
si por tight junctions, de modo a constituir uma eficiente barreira
separando o meio externo (epinurio) do interior do fascculo (endonurio).
As clulas perineuriais so revestidas por membrana basal e separadas por
fibras colgenas em arranjo longitudinal.

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