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Aulas 1-4 1o Modulo PDF
Aulas 1-4 1o Modulo PDF
histolgicas e histoqumicas
. Metabolismo do RNA: Uridina 3H
. Protenas: Metionina 35S
. Carboidratos: manose 32P
3) Microscopia:
- ptica:
. Colorao Histolgica
Universidade Federal de Minas Gerais . Colorao Histoqumica
Instituto de Cincias Biolgicas . Imunohistoqumica Unidades de medida
Departamento de Morfologia
- Eletrnica:
Prof. Luciana de Oliveira Andrade (Sala O3-245) . Transmisso
. Varredura
Limites de Resoluo
Microscpio Resoluo Aumento
Microscpio Olho
eletrnico ptico humano
preservar a morfologia e a
- Permite o exame de clulas e composio dos tecidos
a. Em PFA ou MEtOH (MO)
tecidos Fixados e corados. b. Em glutaraldeido (ME)
- Deteco da luz transmitida. A Tcnicas histolgicas e histoqumicas
colorao importante para a - Colorao Histolgica
distino de estruturas. . Preparo de tecidos
Manivela
. Corantes acidfilos e Suporte do bloco
Bloco de parafina
basfilos Fragmento de tecido
remover a gua
dos tecidos e
Navalha
embeber a pea
- Colorao Histoqumica em substncia
miscvel com mat.
. PAS de incluso
a. EtOH e xilol
. Alcian-Blue (MO)
. Feulgen b. acetona (ME)
/ ultramicrotomia
Corantes Montagem
Hematoxilina
(corante bsico)
HE
Eosina
(corante cido)
Tcnicas Histolgicas e Histoqumicas Tcnicas Histolgicas e Histoqumicas
Tcnica histolgica versus Tcnica Histoqumica
2) Tcnica histoqumica
Caracterizao qumica: localizao
P.A.S.
Periodic Acid-Schiff (cido Peridico-Schiff)
Demonstrao de radicais 1,2-glicol presentes em amido, glicognio e celulose
C C - Glicognio
- Glicoprotenas neutras
- Glicoprotenas cidas ricas em cido
OH OH silico: Sialomucinas
A tcnica P.A.S. no especfica para o glicognio, mas serve para evidenciar o Vilosidade intestinal corada pela tcnica de cido-peridico Schiff;
glicognio (...e outros polissacardeos). Contra-colorao: Hematoxilina
Reao intensa indicada pelas setas: alto contedo de polissacardeos
Microscopia de Fluorescncia
Algumas substncias quando excitadas por certos comprimentos de onda emitem
luz de maior comprimento de onda (Fluorescncia)
Microscopia Eletrnica de Transmisso
Microscopia Eletrnica
- A imagem formada pela passagem diferencial do feixe de eltrons pela amostra
- Utiliza feixes de eltrons acelerados como fonte de luz.
(A ME se baseia na interao entre eltrons e componentes dos tecidos)
Microscopia eletrnica
Transmisso Varredura
Manivela
Suporte do bloco
Bloco de parafina
remover a gua
Fragmento de tecido dos tecidos e
Navalha
embeber a pea
em substncia
miscvel com mat.
de incluso
a. EtOH e xilol
(MO)
b. acetona (ME)
/ ultramicrotomia
Microscpia Eletrnica de Varredura
Microscopia Eletrnica de Transmisso - Os eltrons no atravessam a amostra, mas varrem (escaneiam) a sua superfcie;
os eltrons refletidos so coletados por um detector e processados para serem
exibidos em uma imagem.
Estrutura tridimensional
LIPDEOS
Composio
SO MOLCULAS ANFIPTICAS
Cabea polar
! LIPDEOS ! PROTENAS ! CARBOIDRATOS hidroflica
Fosfolipdeos
e
Calda apolar
glicolipdeos
hidrofbica
colesterol
LIPDEOS Lipdeos possuem distribuio
Estrutura trilaminar (ME): ASSIMTRICA
unidades de membrana
Comparao de monocamadas externa e interna
Membrana celular
Meio extracelular
Membrana celular
Meio intracelular
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Fluidez da membrana Fluidez da membrana
Rotacional
Lateral (107 vezes/seg)
Flip-flop (raro; flipases)
+ duplas, +
fluida
Presena de colesterol
Diminui a permeablidade
menor, Fluidez alterada de acordo com a temperatura
+ fluida -37oC: diminui a fluidez
-baixas temp: aumenta a fluidez
PROTENAS PROTENAS
Funes gerais
>Interaes com matriz extracelular
Transmembrana passagem nica / passagem mltipla
>Interaes com meio intracelular(citoesqueleto)
Ancoradas por lipdeos GPI
>Transduo de informaes para o interior da clula Perifricas
PROTENAS CARBOIDRATOS
Adeso celular
Reconhecimento celular
Inibio por contato
...
MET glicoclice
Difuso
passiva
Difuso Passiva
Transporte
mediado por
protenas
Transporte atravs de protenas
Tipos de transportadores
Com ou sem gasto de energia
Gardiente de concentrao
Energia
nico co-transporte
Energia para o transporte ativo Energia para o transporte ativo
1- transporte acoplado 2- ATP
simporte
antiporte
49
PINOCITOSE
Ingesto de fuidos
FAGOCITOSE
Processo seletivo
DEFESA
ALIMENTAO
REMOO DE CORPOS
APOPTTICOS
54
PINOCITOSE PINOCITOSE
NO-SELETIVA SELETIVA ou MICROPINOSITOSE
CLATRINA
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MICROPINOCITOSE
ENDOSSOMO
PRIMRIO
ENDOSSOMO
SECUNDRIO
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OBTENO DE TRANSFERRINA TRS VIAS PARA CHEGAR
AOS LISOSSOMOS
LISOSSOMOS
DIGESTO INTRACELULAR
AULA PRTICA
64
Aula prtica: pranchas Aula prtica: pranchas
67
69 70
71
Aula prtica: Lminas
Lmina 3 corte de Fgado
Tcnica Histoqumica: PAS
Contra-colorao histoqumica: hematoxilina
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Estrutura trilaminar:
Porqu?
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Transporte X Gradiente eletroqumico
*velocidade de transporte*
PROTENAS
~25nm Constituio:
-Protena filamentosa
-Vrios tipos
- Microfilamentos de actina (tecido especfico)
~7nm
MENOS DINMICOS
- Filamentos Intermedirios
~10nm
Filamentos Intermedirios Filamentos Intermedirios
Constituio:
Funes: Arquitetura celular
Suporte mecnico
Sinalizao celular
Flexibilidade e
ALTA RESISTNCIA
Constituio:
GTP GDP
GTP GTP GDP
GTP GTP GTP
GDP GTP GTP GTP GTP
Subunidade
alfa-Tubulina beta-Tubulina
MICROTBULO
[
Protofilamento EXTREMIDADE
-
Despolimerizao
GTP GDP GTP GDP GTP GDP GTP GTP GTP GTP
EXTREMIDADE
+
Polimerizao
Microtbulos: como e onde so encontrados ? Microtbulos: como e onde so encontrados ?
DISPERSOS NO CITOPLASMA DISPERSOS NO CITOPLASMA
Consistem em filamentos nicos, longos e livres
Funo:
- participam do transporte intracelular de
partculas;
-Polimerizao regulada por:
. [ ] de Ca++ (atua nas polimerizaes de - participam no deslocamento dos
curta durao) cromossomos na mitose;
. Subunidades disponveis
- Contribuem para manter a forma das
-Regio onde se inicia a sua clulas.
formao:
.
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Microtbulos: como e onde so encontrados?
CLIOS
Consistem em nove diades de microtbulos ligadas umas s outras e
um par central, por MAPs.
.
-Regio onde se inicia a sua formao:
CORPSCULOS BASAIS- Centro Organizador
do MicroTbulo (MicroTubule Organizing Center
13
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Microtbulos: como e onde so encontrados ? Microtbulos: como e onde so encontrados ?
CENTROLOS E CORPSCULO BASAL
Consistem em nove trincas de microtbulos ligadas umas s outras
por MAPs. Funo:
Constituio:
Monomeros de
Actina G Polmero de
actina-G em
constante
remodelamento
Filamento de
actina F
[Ca2+] [Ca2+]
Microfilamentos
de actina
Filamentos de actina Filamentos de actina
(ou microfilamentos) (ou microfilamentos)
Funo
fora mecnica (sustentao da membrana plasmtica)
Contrao muscular
Movimento celular
forma da clula
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microfilamentos
Cauda
Papel da miosina
-Citocinese
-Movimentos
amebides
Cabea Pescoo -Contrao
Atividade ATPase
Ligao actina
Regula
ativ. cabea
muscular
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Ultra-estrutura da Mitocndria
-Mitos: filamento
-Condria: partcula
Lisa e altamente
permevel
(porinas e colesterol)
Biologia Mitocondrial
Rica em protenas
pouco permevel
(cardiolipina)
Origem da mitocndria
Contudo intra-mitocondrial:
CO2
Fosforilao oxidativa Organizao funcional e
estrutural das mitocndrias
- Degradao do piruvato em CO2 e H2O,
com produo de ATP (36 mols)
corpsculos matriz
elementares mitocondrial
1- Produo de Acetil CoA
espao
Ligao de piruvato + CoA intermembranoso cristas mitocondriais
ou
Quebra de cidos graxos em duas unidades carbnicas + CoA membrana interna
membrana externa
2- Ciclo de Krebs ou Ciclo do cido Ctrico
Liberao de eltrons (captados pelos NADs e FADs)
e
Liberao de prtons (H+) na matriz mitocondrial
3- Transporte de eltrons
Por citocromos e produo de ATP
Constituio:
- Membrana externa: contm porinas p/ o transporte de molculas de at
10 KDa.
- Rica em colesterol.
- Membrana interna: permeabilidade seletiva = impermevel.
- Rica em cardiolipina (fosfolipdeo): dificulta a passagem de
partculas com carga eltrica.
- Espao intermembranoso (perimitocondrial): rea onde se acumula
ons H+.
- Cristas mitocondriais: local da membrana interna onde abriga os
componentes da cadeia transportadora de eltrons.
- Matriz mitocondrial (mitoplasma): compartimento aquoso contendo
ribossomos, DNA.
* Microssomo - consiste no subfracionamento de reticulo endoplasmtico liso e rugoso
A arquitetura da mitocndria Ultra-estrutura da Mitocndria
determina a sua funo celular
Espaco intermembranar
Teoria quimiosmtica: Mecanismo pelo qual
h a formao de ATP na mitocndria.
2
Biologia Celular
O ncleo da clula
- geralmente nico e localiza-se no centro da clula.
Ncleo
- clulas com metabolismo intenso apresentam ncleos volumosos;
Ncleo interfsico
Varivel
a) envoltrio nuclear
b) nucleoplasma
c) cromatina
d) nuclolo
Constituintes do Ncleo interfsico A) Envoltrio Nuclear (EN)
- Carctersticas:
Cromatina - 2 unidades de membrana
- Descontnua (presena de complexo do poro)
Membrana
-associao com Lmina nuclear externa
Lmina
nuclear
Nuclolo
Envoltrio
nuclear Membrana
interna
Nucleoplasma
Transportador
central
Complexos do poro
Complexo protico constitudo
por Anel nuclear
Membrana externa:
protenas presentes no RE
* Aspectos morfolgicos:
NUCLEOPORINAS: denominao locais de fuso da ME com MI
Membrana interna:
dada ao conjunto de protenas que
Protenas que se ligam * Aspectos funcionais
constituem o complexo do poro.
lmina e cromatina Transporte seletivo
- At 9 nm: Livre
- >9nm: Transporte ativo seletivo
Poros/Complexos de poro ao MET Criofratura mostrando poros nucleares
Ncleo
Exportao
-protenas e RNAs (mRNA, tRNA e rRNA).
Retculo Nucleoplasmtico
D) Cromatina Heterocromatina
Cromatina: DNA + protenas especficas presente no ncleo CONSTITUTIVA
- Dois tipos: - formada por sequncias nucleotdicas altamente repetitivas que nunca so
- Heterocromatina
- Eucromatina
transcritas;
1o
Protenas
Nucleofilamento (10nm)
histonas
eucromatina
2o
Associao
Lmina Solenide (30nm)
e matriz
heterocromatina
Protenas
no
histnicas
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E) Nuclolo Ultra-estrutura do nuclolo ao MET
1 . Centro Fibrilar (pars fibrosa): DNA (rDNA, contendo os genes para rRNA),
Constituio RNA e protenas (RNA-polimerase, topoisomerases, fatores de transcrio).
2 . Componente fibrilar denso: envolve o centro fibrilar. rRNAs e enzimas
-60% protenas e rRNAs envolvidas em seu processamento.
3 . Componente granular (pars granulosa): grnulos de rRNA. o local onde ocorre
-Poro do DNA contendo os genes codificadores dos o processamento final dos rRNAs, de onde sero exportados para o citoplasma.
rRNAs
- Local de processamento/sntese do 3
RNA ribossmico. 1
Telfase Citocinese
- descondensao da cromatina (ao de Diviso do citoplasma, deve-se
fosfatases). interao dos filamentos de
actina e miosina II (formam um
- reorganizao dos nuclolos.
anel contrtil na zona equatorial
da clula-me).
- reconstituio do envoltrio nuclear.
Cincias Biolgicas
Apoptose
A maquinaria
molecular central da
apoptose
Sntese e MACROMOLCULAS E
ORGANELAS ENVOLVIDAS NA
SNTESE
Secreo de Macromolculas Organelas
BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE
MACROMOLCULAS NA CLULA
POLIRRIBOSSOMOS LIVRES
8
BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE RETCULO ENDOPLASMTICO (RE)
MACROMOLCULAS NA CLULA RER Retculo Endoplasmtico
Cisterna, lmen ou luz
Rugoso
ribossomos
cidos graxos
mRNA
-Lipdeos -Protenas:
membrana, secretadas, RER/L,
Golgi
- Por exemplo:
- PLASMCITOS: contm Imunoglobulinas;
- FIBROBLASTOS: cadeias de protocolgeno;
- CLULAS EXCRINAS DO PNCREAS: hidrolases cidas.
- CLULAS DA ADRENAL: hormnios esterides.
BIOSSNTESE E TRANSPORTE DE Retculo Endoplasmtico Liso - FUNES
MACROMOLCULAS NA CLULA
-Sntese:
-Lipdeos de membrana (todos)
-Lipdeos -Protenas:
membrana, secretadas, RER/L,
- Desintoxicao do organismo: enzimas localizadas nas
Golgi membranas do REL. (fgado, pele, rins e pulmes).
17
24
Reconhecimento do sinal e interiorizao da
cadeia polipeptdica
TRAM
Sec 61
TRAP
Receptor
PRS
Peptidase
sinal Complexo OST
Translocon
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Todos os passos de sntese, reconhecimento, interiorizao Sequncia sinal nas protenas endereadas
e processamento de polipeptdeos no RER ao RER
Sequncias Sinal determinam o destino da protena na clula.
TRANSPORTE DE MACROMOLCULAS
-Lipdeos -Protenas
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Complexo de Golgi Complexo de Golgi - FUNES
-Carboidratos complexos;
- Modificaes (terminais) ps-traducionais nas
-Modificaes de protenas e lipdeos macromolculas alteraes na forma tridimensional e na
funo.
Glicosilao inicial RER.
Glicosilao terminal CG.
Livre ou associado
Retculo Endoplasmtico
Complexo de Golgi - Funes Complexo de Golgi - Funes
Para assegurar que o transporte ocorra eficientemente, a
- VIA SECRETORA: Destinao e exportao de superfcie citoplasmtica de certas vesculas de transporte so
macromolculas realizados por vesculas de transporte. recobertas com protenas:
Via de fluxo contnuo no-regulada
1- Vesculas cobertas por clatrina e adaptinas: participam da endocitose
Leva secreo contnua de macromolculas que a clula e do transporte de molculas da rede trans do CG para os lisossomos.
libera (exocitose) medida que as elabora. Ex: colgeno pelos
Fibroblastos, protenas do soro pelos hepatcitos. 2- Vesculas do tipo COP-I (Coat Proteins): vesculas que brotam do CG
-> sugere-se que estejam envolvidads no transporte de molculas entre os
sculos de Golgi e recilcagem de molculas.
Via secretora regulada - Compostas por complexos de protenas diferentes de clatrina e adaptina.
Macromolculas especficas so secretadas em resposta a
sinais extra celulares. Ex: hormnios, NTs, enzimas digestivas 3- Vesculas do tipo COP-II (Coat Proteins): vesculas que brotam do RE
pelas clulas do pncreas. -> transporte de molculas do RE para o CG.
- Compostas por complexos de protenas diferentes de clatrina e adaptina.
Sistema de degradao
de macromolculas na
clula
Lisosomas: 0,5 3,0 m Lisosomas funes
Compartimento delimitado por Digerem molculas introduzidas na clula por
membrana que contm pinocitose, fagocitose
enzimas hidrolticas cidas.
Digerem organelas prprias da clulaem um processo
Estas enzimas so sintetizadas
no RER modificadas no CG e denominado autofagia
somente ativadas em pH cido.
Podem se fundir com a membrana plasmtica para
Sua membrana contem reparo da membrana
protenas especficas
caractersticas desta organela
(transportadores e protenas Podem se fundir com a membrana plasmtica para
estruturais)
degradao de protenas extracelulares
(reabsoro matriz ssea no crescimento)
Possuem forma e tamanho
variveis
CR
Proteasoma: funes Proteasoma: funes
Degradao
4 anis proticos
internos: Subunidades
2 anis de 7
subunidades (portes) regulatrias
e dois anis internos de
7 subunidades cada,
contendo os 6 stios
ativos com atividade
protesica
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