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ENSINO TCNICO INTEGRADO AO MDIO EM QUMICA

MICROBIOLOGIA

PREPARAO DE MEIO DE CULTURA, PROCESSO DE INOCULAO PELO


PROCESSO DE SWAB, CRESCIMENTO DE MICROORGANISMOS DENTRO DA
INCUBADORA, CONTAGEM DE MICRORGANISMOS

Datas: Realizao: 5, 12 e
Entrega: 26/06 Turma: 3 ETIM - Qumica
19/06

Professor Responsvel: Miriam Helena Marcellino


Uso do Professor:
Aluno: Leonardo Guimares Stocco n 17: Relator Meno do Grupo:

Uso do Professor:
Aluno: Mariana de Camargo Silva n 22: Lder
Uso do Professor:
Aluno: Thalles Diniz Vaz n 30: Orador
Uso do Professor:
Aluno: Sabrina Gomide Camargo n 30

TATU, SP

2017
1. INTRODUO PREPARAO DE MEIO DE CULTURA
Os meios de cultura so uma preparao qumica, elaborada com alguns nutrientes
essenciais para que os microrganismos cresam e se multipliquem. Dessa forma,
possvel analisar e pesquisar os resultados dessa multiplicao de microrganismos.
Normalmente, os meios de cultura so compostos principalmente de fontes de
carbono e energia, ou seja, acares, fsforos, nitrognios e outros sais minerais.
Para anlises mais especficas de organismos, outros componentes so usados para
formular um meio de cultura, que denominado de meio seletivo. O crescimento e
multiplicao de microrganismos nos diferentes tipos de meio de cultura, disponibiliza
as informao para termos a sua identificao. de grande importncia ter
conhecimento do potencial do crescimento de cada meio de cultura que analisamos e
relacionar ao perfil bacteriano esperado para cada tipo de material.
Outros tipos de componentes tambm podem ser encontrados em um determinado
meio de cultura para um determinado microrganismo. Cada tipo de meio indicado
para uma funo e um microrganismo especfico.
Alguns meios s tem o objetivo de nutrir e fazer o crescimento do organismo, j outros,
inibem um organismo e at indicam o valor do seu pH.
Os meios de cultura podem ser divididos em vrios grupos, dependendo da sua
finalidade, por exemplo:
Meio de transporte: So aqueles que no possuem nutrientes, e sim apenas
um agente redutor. Esse meio previne a desidratao e a oxidao enzimtica
dos patgenos que esto presentes naquele meio.
Meio de enriquecimento: um meio geralmente no estado lquido e que
promove o crescimento do nmero de bactrias.
Meio Seletivo: um meio usado para selecionar um tipo especfico de espcies
que sero isoladas e impedir o aumento de germes.
Meio indicador: o meio que disponibiliza uma anlise e identificao das
propriedades bioqumicas dos organismo analisado.
Meio diferencial: o determinado meio que promove uma mudana na cor das
colnias de bactrias analisadas, promovendo uma distino de vrios gneros
e espcies de organismos.
Para termos um meio de cultura correto, devemos pesar o gar e coloc-lo em um
bquer com uma determinada capacidade maior do que o volume que ser utilizado,
medir o volume da gua destilada necessrio em uma proveta, homogeneizar o meio
agitando o frasco de modo lento e com movimentos circulares. Em seguida, aquecer
o frasco em um bico de Bunsen sobre uma tela amianto. O meio no deve chegar ao
ponto de ferver e sim apenas ser aquecido at se fundir, os meios devem passar por
um processo de esterilizao antes da utilizao dos mesmos em uma autoclave, e
logo depois a esterilizao, ser distribudo em placas com o recipiente semiaberto para
a esterilizao completa e por igual.
2. OBJETIVOS
Preparar meio de cultura para o crescimento de microrganismos.
3. MATERIAIS E MTODOS
3.1) Materiais Utilizados
1. Bquer de 400 mL;
2. Trip;
3. Tela de Amianto;
4. Esptula;
5. Balana comum;
6. Conjuntos de Placas de petri esterilizadas;
7. Bico de Bunsen;
8. Bagueta;
9. Vidro de relgio.

3.2) Reagentes Utilizados


1. gar de Dextrose de Batata Acumedia;
2. gua destilada.

3.3) Procedimento Experimental


1. Realizamos o clculo para a pesagem do gar, descrito na anlise e discusso dos
resultados.
2. Foi pesado 5,9 g de gar em uma balana semi-analtica, com o auxlio de um vidro
de relgio e uma esptula.
3. Transferiu-se 250 mL de gua destilada para um bquer.
4. Com o bico de Bunsen, trip e tela de amianto, foi aquecida a gua e aos poucos foi
dissolvido o gar anteriormente pesado.
5. Deixamos a mistura ferver por aproximadamente 1 minuto.
6. Retiramos o gar do aquecimento.
7. Dispusemos as placas de Petri esterilizadas na bancada.
8. Com o auxlio de uma luva trmica, colocamos a mistura do gar nas placas de petri,
de maneira que a mistura cobrisse toda a superfcie da placa.
9. Cobrimos as placas de Petri pela metade.
4. ANLISE DOS RESULTADOS
Primeiramente, realizamos os clculos para sabermos a quantidade necessria de
gar para 250 mL de gua. Segundo os dados do fabricante, necessita-se de 23,5g
de gar para 1L de gua. Ento, fizemos a seguinte regra de 3:

23,5g de gar 1000mL de gua


x 250mL de gua

x = 5,875g de gar

Com esse dado em mente, pesamos 5,88g de gar de Dextrose de batata. Ao


pesquisar, descobrimos que este tipo de gar utilizado apenas para o crescimento
de fungos e leveduras, porm, estvamos utilizando-o para o crescimento de
bactrias. Temos aqui uma divergncia da linha de processo terica com a realizada.
Esta divergncia ocorreu devido ao fato de haver apenas um tipo de gar disponvel
para o treino da prtica. Embora houvesse um outro tipo de gar no laboratrio, no
foi aconselhvel utiliz-lo, uma vez que no estvamos utilizando-o para uma anlise
em um laboratrio industrial, e sim para fins didticos. Temos conscincia de que, em
um laboratrio microbiolgico, deve-se sempre utilizar o meio de cultura mais
adequado ao microrganismo a ser cultivado.
Outra divergncia de processo ocorreu no aspecto do gar. Por se tratar de um
material higroscpico, o mesmo se encontrava empedrado dentro do pote. Isso pode
ter ocorrido devido ao mal armazenamento do mesmo e tambm falta de finalizao
da linha de processo. Provavelmente o pote deve ter ficado em contato por muito
tempo com o ar atmosfrico. Para minimizarmos os problemas disso, simplesmente
batemos no gar com uma esptula para que ele se soltasse.
Em seguida, o gar pesado em um vidro de relgio foi transferido para um bquer que
continha 250mL de gua destilada e estava em aquecimento. Com o auxlio de uma
bagueta, dissolvemos o gar e assim que a gua ferveu, esperamos 1 minuto at a
dissoluo completa do mesmo. Assim que o tempo se esgotou, retiramos o bquer
rapidamente do fogo e o colocamos sobre uma tela de amianto em temperatura
ambiente, para que a gua no transbordasse com o calor da placa na qual foi
aquecido.
Antes de realizarmos o prximo passo, o meio de cultura deveria ser tampado e
esterilizado em Autoclave a 121 C, a fim de remover as bactrias que pudessem estar
ao seu redor ou em sua prpria soluo, uma vez que a inoculao deve ocorrer em
um meio de cultura esterilizado. Pela falta de tempo e tambm por estarmos fazendo
a prtica apenas para aprendermos a tcnica correta, pulamos esta etapa.
Logo aps, dispusemos as 32 placas de Petri (4 de cada grupo) na bancada e
comeamos a transferir o gar do bquer para as placas. Para tanto, segurvamos o
bquer com o auxlio de uma luva trmica pela sua parte superior na parte oposta ao
bico e tombvamos o mesmo com o dedo na parte inferior para que o gar escorresse
para a placa de Petri. No entanto, percebemos que ao fazer isso, o lquido acabava
escorrendo at o fundo do bquer pelo lado de fora. Ento, comeamos a colocar de
um maneira mais cuidadosa, para que no vazasse.
Assim que o gar era depositado na placa, espalhvamos o meio de cultura nela para
que ele cobrisse toda a sua extenso, e tambm tomamos o cuidado de no colocar
muito gar em cada placa, pois o excesso de meio de cultura dificulta a inoculao,
que ser abordada mais pra frente. Logo aps o gar ser espalhado, cobramos pela
metade a placa que recebeu o meio com outra placa. No se deve cobrir a placa de
Petri completamente, pois com a temperatura do gar, a umidade do ambiente pode
se condensar na placa superior e pingar nele mesmo, contaminando o meio de cultura
e, consequentemente, toda a linha de processo.
Esperamos o gar esfriar, e procedemos para o processo de inoculao, encerrando
a primeira etapa do processo.
5. CONCLUSO
De acordo com as prticas realizadas, pudemos concluir que os meios de cultura so
usados geralmente para anlises laboratoriais e possuem na sua substncia todas as
condies necessrias para que os micro-organismos inoculados multipliquem-se
para que seja realizada a sua anlise e o seu estudo.
Suas funes so variadas, dentre elas so enriquecedores (permitem o aumento das
bactrias), seletivos (ficam isolados impossibilitando o aumento de germes) e
diferenciadores (possuem a capacidade de distinguir os tipos de micro-organismos).
Damos nfase tambm ao gar, que utilizado para o estabelecimento de meios
seletivos e diferenciais. No primeiro caso, ele pode ser aplicado em determinados
grupos de micro-organismo, impedindo o crescimento de outros no mesmo ambiente
e selecionando um cenrio para estudo. No meio diferencial de cultura, o gar permite
estabelecer diferenas entre microrganismos muito parecidos. So encontrados na
forma de p ou em tiras secas, o gar tem como caracterstica a capacidade de
continuar malevel mesmo quando exposto a temperaturas altas, o que permite sua
utilizao dentro do escopo de investigao laboratorial.
Vemos a importncia de se escolher o meio de cultura mais adequado para o tipo de
microrganismo que se quer analisar. Se utilizarmos um meio de cultura diferente, o
organismo pode no se desenvolver, ou se desenvolver de maneira insatisfatria.
A consistncia gelatinosa do gar permite uma manipulao fcil e segura dentro do
ambiente laboratorial. Vale destacar, por fim, que o gar tambm pode ser utilizado
em estudos biolgicos e na culinria, principalmente na produo de sobremesas.
Percebemos tambm a importncia da utilizao de materiais esterilizados na
realizao da prtica. Por estarmos manipulando substncias vivas, necessrio que
qualquer outro ser que no faa parte do procedimento seja eliminado, a fim de se
evitar falhas de contaminao posteriores.
Com esta prtica, pudemos aprender a maneira correta de se preparar um meio de
cultura, mesmo que com poucas divergncias, se comparado maneira correta de se
faz-lo. Mesmo assim, foi uma prtica cheia de valor agregado e tambm muito
relevante nossa formao.
REFERNCIAS
https://www.portaleducacao.com.br/conteudo/artigos/farmacia/preparo-de-
meios-de-cultura/24351 - Acessado no dia 25/06 s 15:02h
http://www.prolab.com.br/blog/o-que-e-meio-de-cultura-e-para-que-serve/ -
Acessado no dia 25/06 s 15:04h
http://www.plastlabor.com.br/microbiologia-news/156-importancia-meios-de-
cultura-o-que-pra-que-serve - Acessado no dia 25/06 s 15:07h
http://www.prolab.com.br/blog/quais-sao-os-tipos-de-meios-de-cultura/ -
Acessado no dia 25/06 s 15:11h
1. INTRODUO PROCESSO DE INOCULAO PELO MTODO DE SWAB
A inoculao definida como uma transferncia de uma determinada quantidade de
microrganismos para um determinado meio de cultura, ou seja, uma contaminao
proposital de um meio de cultura, com a finalidade de que estes microrganimos se
desenvolvam e possibilite a sua anlise e identificao. A inoculao das bactrias
em diferentes meios envolve vrias tcnicas de semeadura (contaminao).
As tcnicas de contaminao so o mtodo na qual se transferem inculos
bacterianos de um meio de cultura pra outro. Para garantir que apenas o
microrganismo que desejamos seja semeado, importante ter tcnicas asspticas,
como esterilizar as mos e meio de cultura.
Existem diversos tipos de semeaduras, como a semeadura em placas de Petri, por
exemplo. Para fazer essa contaminao, o material que vai ser contaminado deve
possuir poucos microrganismos pois o inculo para o isolamento deve ser leve.
Quanto maior o nmero, menor a possibilidade de isolamento e uma maior
probabilidade de crescimento. E quando o inculo for extrado a partir do meio slido,
o mesmo poder ser diludo.
Outra tcnica a de estrias mltiplas. Esse mtodo onde a ala deve ser deslizada
sobre o local onde tem um inculo bacteriano e posteriormente deve ser passada na
superfcie da placa para a contaminao com movimentos em zig-zag, ou seja, essa
tcnica visa espalhar o material com o auxlio de uma ala bacteriolgica, fazendo
estrias at o esgotamento do material.
Os swabs so normalmente usados na coleta de amostras de microrganismos com a
finalidade de identificar a quantidade de colnias em um meio de cultura. Uma amostra
inadequada pode levar a resultados que no so almejados nem desejados e como
consequncia ter algo inconclusivo.
Os swabs so uma fonte de alternativa para realizar tais procedimentos de uma forma
mais segura e prtica, promovendo uma conservao da amostra coletada.
Em laboratrios de microbiologia, so realizados vrias anlises que precisam de um
isolamento de microrganimos que sero analisados, identificados e estudados. Para
isso, preciso ter em mos materiais que ajudam e que so especficos para a coleta
da amostra, como o swab.
Depois de ter feito a extrao da amostragem, o swab deve ser colocado em um tubo
de cultura isolado, assim, inibindo contaminaes e um comprometimento do material.
Posteriormente, o material deve ser transportado com um certa rapidez para o
laboratrio e depois devidamente descartado.
2. OBJETIVOS
Inocular o meio de cultura com o mtodo de Swab.
3. MATERIAIS E MTODOS
3.1) Materiais Utilizados
1. Placa de petri com meio de cultura preparado;
2. 4 Swabs esterilizados;
3. Bico de Bunsen.

3.2) Procedimento Experimental


1. Contaminamos o Swab em quatro lugares diferentes pela escola; para tanto,
inoculamos o mesmo em superfcies girando-o 360, a fim de obter uma maior
quantidade de amostra.
2. De volta ao laboratrio, ligamos o bico de Bunsen e pegamos uma placa de Petri vazia
para treinarmos a maneira correta de se inocular o Swab. Para tanto, pegamos o
conjunto de placa de Petri com a mo esquerda e colocamos diante de um bico de
Bunsen. Com os 3 dedos apoiando a placa, retiramos sua tampa com o dedo polegar
e o indicador, tomando o cuidado de no expor muito a placa com meio de cultura ao
ar, e fingimos inocular o Swab na mesma. Repetimos o processo algumas vezes a fim
de pegar prtica.
3. Inoculamos o material presente no Swab no meio de cultura, conforme foi nos
instrudo, realizando movimentos de 360 com o Swab, das extremidades at o centro,
diante de um bico de Bunsen e tampando a parte traseira da placa.
4. Identificamos cada placa de Petri de acordo com o lugar de procedncia das amostras:
a. 1 Mesa dos professores;
b. 2 Copo da merenda;
c. 3 Puxador do micro-ondas da cozinha;
d. 4 Colher da merenda
5. Tampamos a placa e inserimos na incubadora a 37C.
4. ANLISE DOS RESULTADOS E DISCUSSO
Aps a inoculao dos Swabs pela escola, voltamos ao laboratrio e treinamos um
pouco a maneira de se inocular o Swab no meio de cultura. Em seguida, procedemos
real inoculao. Ligamos o bico de Bunsen para esterilizar o ar ao seu redor,
pegamos a placa com meio de cultura, abrimos a mesma diante do bico e com o Swab
na mo direita, espalhamos a ponta inoculada do mesmo sobre o meio de cultura pela
tcnica de estrias mltiplas.
Esta tcnica consiste em dividir a placa de Petri em 4 quadrantes. No primeiro, virado
para ns, inoculamos o Swab em ziguezague, da borda ao centro da placa, formando
uma espcie de espiral. Viramos um pouco a placa para os lados e repetimos o
procedimento no segundo e no terceiro quadrante. No quarto quadrante, como manda
a tcnica, apenas arrastamos o Swab, sem nos preocupar em fazer o desenho de
espiral.
Aps o trmino da inoculao, fechamos a placa e em seguida desligamos o bico de
Bunsen. Para conferirmos se a inoculao por estrias mltiplas foi realizada
corretamente, olhamos a silhueta do meio de cultura inoculado contra um flash.
Realizamos este mesmo procedimento com as outras placas. Em uma delas, o Swab
foi pressionado com muita fora e acabou fazendo um pequeno rasgo no meio de
cultura, mas que no atrapalhou de maneira significativa no crescimento dos
microrganismos. Rasgos no meio de cultura fazem com que bactrias se acumulem
no local e podem levar alterao do crescimento dos microrganismos.
A medida que as placas iam sendo inoculadas, identificvamos cada uma, escrevendo
a respectiva legenda em sua lateral como manda a tcnica correta, e no em sua
base, como algumas vezes feito.
5. CONCLUSO
A partir dos experimentos feitos no laboratrio, podemos concluir que o processo de
inoculao de microrganismos consiste em adicionar estes em um meio de cultura
para verificar seu crescimento.
A amostragem por Swab serve para verificar o crescimento microbiano ou determinar
qual o micro-organismo existe em determinado local. Esse mtodo geralmente
usado na indstria alimentcia, em diagnsticos clnicos e em laboratrios. O Swab
serve para coletar os micro-organismos vigentes em qualquer lugar que se queira
analisar. As anlises podem ser feitas em mos, mesas, embalagens, vlvulas ou
aparelhos eletrnicos, porm cada material a ser analisado requer diferentes tipos de
coleta. As coletas podem ser feitas em superfcies planas, irregulares ou em mos.
Para analises em superfcies planas, utilizado um molde estril com rea delimitada.
O mtodo para coleta de mos e em superfcies irregulares semelhante: usa-se o
Swab em toda a superfcie do material, tanto na parte superior quanto inferior. Nesse
tipo de material o Swab deve normalmente friccionado vrias vezes no mesmo local
para que assim se obtenha uma coleta da melhor forma possvel.
A higienizao dos materiais de extrema importncia para garantir a segurana de
produtos e pessoas. A amostragem por Swab uma forma fcil e acessvel de analise
microbiolgica. O teste Swab eficaz para obteno dos micro-organismos,
assegurando assim a limpeza e a sanitizao de equipamentos, alimentos, ou para a
rea da sade.
Vemos tambm que a higiene pessoal um dos fatores mais importantes, pois o
homem direta ou indiretamente responsvel por contaminar matrias primas ou
contaminar amostras durante a manipulao. A anlise feita a partir da tcnica de
Swab tem importncia fundamental no controle microbiolgico dentro de uma indstria
alimentcia tambm. Deve ser feito o controle para minimizar contaminaes
microbiolgicas e ter um processo com qualidade.
Com esta prtica, vemos que a inoculao pode ocorrer de diferentes maneiras, alm
de necessitar de condies ambientes estreis para que no ocorra contaminao
que podem levar a divergncias experimentais.
REFERNCIAS
http://www.ufjf.br/microbiologia/files/2012/11/Meios-de-cultura-usados-no-
laborat%C3%B3rio-e-colora%C3%A7%C3%B5es.pdf - Acessado no dia 25/06
s 20:45h
http://www.uff.br/labac/Apostila_Pratica_Nutricao.pdf - Acessado no dia 25/06
s 20:48h
http://www.prolab.com.br/blog/entenda-o-que-e-um-swab-esteril-e-qual-sua-
utilidade-em-um-laboratorio-de-microbiologia/ - Acessado no dia 25/06h s
20:55h
http://www.kasvi.com.br/swab-com-meio-de-transporte/ - Acessado no dia
25/06 s 20:57h
1. INTRODUO CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS DENTRO DA
INCUBADORA
Uma incubadora de laboratrio geralmente um equipamento que auxilia a
reproduo ou multiplicao de organismos e tambm para amostras orgnicas. E
para ter o que desejamos, esse equipamento promove o aumento da temperatura na
superfcie e tambm proporciona o controle dessa temperatura. Por causa da sua
aplicao, a incubadora de laboratrio muito usada em laboratrios de microbiologia.
Assim, uma incubadora serve para manter ou crescer culturas microbiolgicas, pois
possibilita fatores que proporcionam isso como temperatura, umidade e ventilao.
Alguns tipos de incubadora possuem a capacidade de controlar temperaturas baixas,
nveis de umidade e dixido de carbono.
Incubadoras tambm so usadas para analisar e identificar microrganismos que so
a causa de algumas doenas do corpo humano. Quando h o uso da incubadora, o ar
que est localizado em torno da cultura, pode ser configurado, e assim possibilitando
o crescimento dos organismos que so as causas das doenas, podendo determinar
qual o agente patognico.
As incubadoras normalmente atingem at os 85C, diferente das estufas que atingem
temperaturas mais elevadas que as incubadoras. As estufas so usadas nos
laboratrios para a eliminao de toda ou qualquer manifestao microbiolgica que
pode ter nos instrumentos laboratoriais.
A incubadora utilizada na prtica, a Diagtech DT-6150C, tem um mtodo de
aquecimento por jaqueta de ar e circulao de ar por conveco natural. Essa
incubadora promove uma maior estabilidade na temperatura da cmara, as funes
do timer tm uma proteo contra o superaquecimento, e a sua porta interna tem um
duplo isolamento que garante a configurao da temperatura, a sua temperatura vai
de 5C at 85C. Uma de suas vantagens o fato de possuir um vidro aps sua porta
de metal, que permite visualizar seu interior sem contaminar o ar nem abaixar muito
sua temperatura.
2. OBJETIVOS
Obter o crescimento de microrganismos dentro da estufa a 37C.
3. MATERIAIS E MTODOS
3.1) Materiais Utilizados
1. Placa de petri com meio de cultura inoculado;
2. Estufa Digtech modelo: DT6150C

3.2) Procedimento Experimental


1. Ligamos a estufa;
2. Ajustamos o display da estufa a temperatura de 37C, ideal para o crescimento de
microrganismos;
3. Ajustamos sem tempo definido;
4. Deixamos as placas de Petri no aparelho durante 7 dias;
4. ANLISE DOS RESULTADOS
Aps ligarmos a incubadora na tomada e ajustarmos sua temperatura, transferimos
as placas de Petri com meio de cultura inoculado para o seu interior, a fim de
acelerarmos o processo de crescimento dos microrganismos. Dispusemos as placas
de modo que o meio de cultura ficasse de cabaa para baixo. Isso se deve ao fato de
que sua tampa pode condensar a gua presente no ar, e se o meio estiver de cabea
para cima, receber pingos dgua que podem contaminar o gar e causar erros ao
processo.
Aps a disposio de todas as placas de Petri na incubadora, fechamos a mesma e
programamos para que ela no desligasse. Em seguida, colocamos um aviso para
que ela fosse mantida ligada. Deixamos os meios de cultura l dentro por 7 dias. A
tcnica correta diz que os meio de cultura devem ficar na estufa somente por 48 horas,
mas como no haveria como voltarmos para retirarmos os mesmo de l e contarmos
as colnias, deixamos l e voltamos somente na prxima semana. Em laboratrio,
isso no deve ocorrer, pois pode ocorrer um crescimento exacerbado de bactrias,
alm de no ser logisticamente hbil. Aps o trmino do tempo decorrido, observamos
que houve realmente o crescimento de bactrias, inclusive na placa na qual o gar
rasgou durante a inoculao.
5. CONCLUSO
O crescimento de microrganismos pode ser influenciados por vrios fatores, um deles
a temperatura. Este fator tem enorme importncia uma vez que influencia as
velocidades de todas as reaes qumicas ligadas aos processos de crescimento. A
temperatura para a qual um microrganismo cresce com maior rapidez a temperatura
tima de crescimento.
Os microrganismos so classificados em trs grupos primrios considerando as
variaes na temperatura de crescimento: psicrfilos (crescem em baixas
temperaturas), mesfilos (crescem em temperaturas moderadas) e termfilos
(crescem em altas temperaturas). A maioria dos microrganismos cresce dentro de
variaes limitadas de temperatura, sendo que a temperatura mxima e mnima de
crescimento pode-se distanciar somente em 30C. Os restantes grupos so menos
comuns e ocupam meios muito especficos.
A incubadora bastante utilizada nos laboratrios, diferenciando-se da estufa pela
sua temperatura que vai at 85C, tima opo para esta prtica pois os micro-
organismos morrem em torno de 121C. Tem menor poder de penetrao do que calor
mido usam temperatura e tempos maiores. A caracterstica em comum entre os
mtodos ausncia de umidade, o que torna o processo menos eficiente e demorado.
Com este processo, pudemos perceber a importncia do aparelho em anlises
microbiolgicas, nos dando resultados muito mais rapidamente e sendo um
equipamento indispensvel em laboratrios. Alm disso, pudemos aprender como
operar o mesmo.
REFERNCIAS
http://www.metrixlab.mx/no-cat/uso-de-una-incubadora-de-laboratorio/ -
Acessado no dia 25/06 s 17:02h
http://www.everlab.com.br/estufa-incubadora-laboratorio - Acessado no dia
25/06 s 17:05h
http://www.diagtechbrasil.com.br/files/DT6150C.pdf - Acessado no dia 25/06 s
17:12h
http://www.splabor.com.br/blog/estufa-de-esterilizacao-e-secagem/estufas-de-
esterilizacao-e-secagem-eliminacao-de-microorganismo-atraves-do-calor/ -
Acessado no dia 25/06 s 17:14h
1. INTRODUO CONTAGEM DE MICRORGANISMOS
Em microbiologia existem muitas prticas laboratoriais para fazer uma contagem de
colnias em uma determinada amostra. As tcnicas de espalhamento em superfcie e
plaqueamento em profundidade so as mais comuns utilizadas em contagem de
colnias.
Como foi dito anteriormente, existem diversos mtodos para a contagem do
crescimento microbiano. Alguns mtodos determinam o nmero de clulas, j outros
identificam a massa total de uma populao, que proporcional ao nmero de clulas.
Como as populaes so muito grandes, so utilizadas apenas pequenas amostras
dessas para uma contagem por mtodos indiretos ou direto. E posteriormente, o
resultado posto em frmulas matemticas para se calcular o valor final.
O primeiro mtodo de contagem aquele que consiste em diluir sucessivamente a
amostra e espalhar em duas placas de Petri. Essa forma de contagem denominada
como diluies seriadas, e serve tanto para isolar quanto pra contar microrganismos.
J o segundo mtodo a contagem por meio de cultura o gar fundido. Nele, preciso
garantir que o meio no ir se solidificar e ter cuidado para a temperatura no matar
as bactrias.
O instrumento usado para fazer a contagem o contador de colnias, que contam as
colnias e outros microrganismos que crescem em uma placa de gar. Estes
contadores so usados para estimar a densidade de organismos em uma cultura
lquida. Cada colnia marca o local onde inicialmente estava, assim, o nmero de
colnias na placa igual ao nmero de microrganismos no volume do fluido na placa.
O contador de colnias Marconi MA6000, um contador que faz contagens rpidas
de bactrias e fungos em placas de Petri de at 120mm de dimetro, sua lupa tem um
aumento de 1,5 vezes, a contagem feita a partir de um circuito eletrnico sensvel,
e possui um sistema de memria e regulagem de inclinao para facilitar a contagem
de colnias.
2. OBJETIVOS
Contar a quantidade de microrganismos em um meio de cultura de placa de petri com
o uso do contador de colnias digital.
3. MATERIAIS E MTODOS
3.1) Materiais Utilizados
1. Contador de Colonia digital MA6000 Marconi:
2. Tampa de caneta;
3. Esterilizador tipo Autoclave Stermax 23 L 24750.

3.2) Procedimento Experimental


1. Retiramos a placa de Petri com o meio de cultura inoculado da incubadora.
2. Colocamos as placas de Petri no contador de colnias.
3. Realizamos a contagem com uma tampa de caneta, tocando as colnias formadas em
cada placa de Petri.
4. Anotamos a quantidade de colnias formadas e convertemos para unidade de medida
correta de contagem.
4. ANLISE DOS RESULTADOS
Assim que ligamos o aparelho, colocamos a placa de Petri sobre ele, ajustando o anel
regulador. Em seguida, com o auxlio de sua lupa (tomamos o cuidado de no
manipul-la pelo vidro, e sim pelas laterais) e da tampa de uma caneta Bic, contamos
cada foco de colnias bacterianas, pressionando a tampa na placa. Percebemos que
o equipamento apitava e aumentava uma unidade em seu contador. Repetimos o
processo com todas as placas de Petri, obtendo os seguintes valores:
Cultura de bactrias obtidas da mesa dos professores: 8,96 x 10 UFC/g
Cultura de bactrias obtidas do copo da merenda: 2,8 x 10 UFC/g
Cultura de bactrias obtidas do puxador do micro-ondas: 7,84 x 10 UFC/g
Cultura de bactrias obtida da colher da merenda: 9,52 x 10 UFC/g
Pelo fato de bactrias se multiplicarem em escala logartmica, o nmero de colnias
deve ser expresso na base 10. Alm disso, o nmero de colnias foi multiplicado por
56.
Aps a contagem, finalizamos a linha de processo depositando todas as placas no
autoclave e iniciando um ciclo. Aps o trmino do ciclo, o gar aderido s placas
deveria ser raspado e jogado fora, mas devido inviabilidade do tempo, esta etapa
no foi realizada.
5. CONCLUSO
A partir deste experimento, podemos concluir que existem vrias condies em que
conveniente quantificar a populao microbiana de uma determinada amostra.
Os microrganismos podem ser quantificados de forma direta, contando-se
microscopicamente o nmero de clulas presentes num determinado material ou
superfcie, ou indiretamente, efetuando-se anlises da turbidez, determinao do peso
seco, concentrao de substncias qumicas ou atravs da contagem do nmero de
microrganismos viveis utilizando um meio de cultura apropriado. Essa possibilidade
permite que se avalie a quantidade de microrganismos na gua, em alimentos como
leite, carnes, vegetais, superfcies, ar ou at mesmo em culturas puras.
Existem vrias maneiras de realizar a contagem, pelo mtodo de microscpio direto,
contagem eletrnica ou at mesmo anlise espectrofotomtrica, ou tambm pelo
nosso contador de colnias que utilizamos na prtica.
Todos esses mtodos podem ser usados para contagem dos microrganismos.
Alguns tm aplicaes especficas, como a contagem do nmero de microrganismos
no leite ou numa cultura pura. No entanto, em determinadas circunstncias, como
aquelas em que se avalia as prticas higinico-sanitrias ou processamento
tecnolgico ou conservao, preciso determinar a populao de clulas viveis.
Para efetuar a contagem total de bactrias numa determinada suspenso da
amostra faz-se diluies decimais seriadas da amostra e inocula-se, usualmente,
pela tcnica Swab, em meios de cultura apropriados. Aps o perodo de incubao
em condies de temperatura e atmosfera adequadas faz-se a contagem do nmero
de colnias. preciso, no entanto, tomar determinadas medidas para evitar
interpretaes errneas, tais como perodo em que colhida a amostra, transporte
apropriado, tempo transcorrido entre a coleta e a anlise, dentre outros. Nesse
mtodo conveniente preparar as amostras no mais curto intervalo de tempo para
evitar a multiplicao dos microrganismos.
Vemos tambm a importncia do trmino da linha de processo, ao colocarmos as
vidrarias utilizadas para esterilizar. Isso impede que as bactrias contaminem outros
meios, alm de disponibilizar as placas de Petri utilizadas para novas anlises. A partir
destas prticas, pudemos realizar as diferentes fases de determinada linha de
processo dentro de um laboratrio microbiolgico. Notamos tambm a importncia da
ateno em cada etapa do processo, alm da assepsia correta de vidrarias,
equipamentos e tambm de ns mesmos. Apesar de algumas divergncias do
procedimento se comparada com a maneira correta de execuo, pudemos executar
a maioria das coisas de maneira razovel e dentro do padres estabelecidos, alm de
tomarmos conhecimento daquilo que foi realizado de maneira errada.
REFERNCIAS
http://www.blog.mcientifica.com.br/contador-de-colonias/ - Acessado no dia
25/06 s 19:55h
http://www.maxlabor.com.br/blog/contagem-de-colonias/ - Acessado no dia
25/06 s 20:04h
http://vida-microscopica.blogspot.com.br/2012/05/metodos-para-quantificar-o-
crescimento.html - Acessado no dia 25/06 s 20:07h
http://www.marconi.com.br/capa.asp?idpaginainst=exibeproduto&procodigo=1
04 - Acessado no dia 25/06 s 20:11h