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RESUMO O carvo ativado possui a propriedade de adsorver os compostos fenlicos liberados pela oxidao dos tecidos lesionados durante
o cultivo in vitro. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da interao entre o carvo ativado e diferentes concentraes de N6-
benzilaminopurina (BAP) na multiplicao in vitro da bananeira, cv. Grande Naine (AAA). O meio de cultura utilizado foi o MS, solidificado com
5 g.L-1 de gar. O cultivo foi mantido em sala de crescimento a 252C, fotoperodo de 16 horas e intensidade luminosa de 30 mol.m-2s-1. Foram
avaliadas a presena e a ausncia de carvo ativado (0 e 3 g.L-1) e quatro concentraes de BAP (0; 2; 4 e 6 mg.L-1) no meio de cultura. O
delineamento foi inteiramente casualizado, com cinco repeties, em um sistema fatorial 2x4. Os explantes foram avaliados a cada 30 dias, por um
perodo de quatro subcultivos. Aps cada subcultivo, o comprimento de brotaes, a taxa de multiplicao, o vigor, o nvel de oxidao das
brotaes emitidas e o nmero de razes formadas foram avaliados. Independentemente das concentraes de BAP, o carvo ativado influenciou
significativamente em todas as variveis analisadas. De maneira geral, a adio de carvo ativado afetou negativamente a taxa de multiplicao,
embora tenha melhorado o vigor e o nmero de razes e diminudo a oxidao dos explantes. Na ausncia de carvo ativado, o BAP proporcionou
as maiores taxas de multiplicao das brotaes.
Termos de indexao: Musa sp., micropropagao, compostos fenlicos, oxidao, citocinina.
ABSTRACT Active charcoal has the capacity to fix phenolic compounds released by the oxidation of manipulated tissues during in vitro
cultivation. The present work objective was to evaluate the interaction effects between active charcoal, combined to different BAP concentrations
in the in vitro banana propagation, cv. Grand Nain (AAA). The culture medium used was the MS, solidified with 5 g.L-1 agar. Cultures were kept
in a growth room at 25 2C with a photoperiod of 16 h at 30 mol.m-2s-1. It was evaluated the presence and the absence of active charcoal (0 and
3 g.L-1) and different concentrations of BAP (0, 2, 4 and 6 mg.L-1) in the culture medium of four subcultures at four-week intervals. The
experimental design was completely randomized in a 2x4 factorial scheme, and five replicas. After each subculture shoot height, multiplication
rate, vigor, oxidation level and number of roots per shoot were evaluated. Independently of BAP concentrations, active charcoal had influenced
significantly on the results. In general, the addition of active charcoal affected negatively the multiplication rate, while it improved the vigor, root
number and decreased the oxidation level of the shoots. In the absence of activated charcoal, BAP provided larger multiplication rates of shoots.
Index terms: Musa sp., micropropagation, phenolic compounds, oxidation, citokinin.
TABELA 1 - Influncia do carvo ativado no meio de cultura sobre as variveis comprimento de brotaes, taxa de multiplicao, oxidao, vigor
e nmero de razes formadas em bananeira, cv. Grand Naine. Rio Branco-AC, 2004.
Meio de cultura Comprimento (cm) Taxa de multiplicao Oxidao Vigor N. razes
Com carvo 4,8a 2,3b 2,1a 2,4a 6,1a
Sem carvo 2,7b 3,5a 2,4b 1,5b 4,3b
C.V. (%) 13,4 8,4 7,2 11,1 9,9
Mdias seguidas por letras distintas dentro de cada item avaliado diferem entre si, a 5 % de probabilidade, pelo teste de Tukey.
et al., 1990; Van Winkle et al., 2003). As avaliaes quanto altura, taxa de multiplicao, vigor
Desta forma, os objetivos deste estudo foram avaliar os das brotaes emitidas, grau de oxidao dos explantes e nmero de
efeitos da interao entre o carvo ativado e diferentes concentraes razes formadas foram realizadas a cada 30 dias de cultivo, por um
de N6-benzilaminopurina (BAP) na multiplicao in vitro da bananeira, perodo de quatro subcultivos. As variveis vigor (desenvolvimento
cv. Grand Naine (AAA). geral) e nvel de oxidao foram analisadas comparativamente entre
as brotaes regeneradas, ao final de cada subcultivo, por meio de
MATERIAL E MTODOS uma escala de notas atribudas arbitrariamente, que variou de 1 a 3,
significando: 1) pouco, 2) medianamente ou 3) brotaes muito
O trabalho foi conduzido no Laboratrio de Cultura de Tecidos vigorosas (desenvolvidas)/oxidadas. Em cada subcultivo, os
da Embrapa Acre. O material vegetal utilizado foi a cultivar Grand explantes eram limpos, retirando-se as partes fenolizadas.
Naine. Como fonte de explantes, utilizou-se de mudas do tipo chifre Os dados foram submetidos anlise de varincia e de
ou chifrinho, obtidas do matrizeiro da Embrapa Acre. regresso, fazendo-se a comparao das mdias pelo Teste de Tukey,
Aps a coleta, foi realizada a limpeza mecnica dos explantes, a 5 % de probabilidade. Dados referentes taxa de multiplicao (x) e
removendo-se parte do rizoma e do pseudocaule at o tamanho nmero de razes foram transformados segundo (x+1)0,5.
aproximado de 5 cm3. Em seguida, os propgulos foram lavados em
gua corrente e levados para cmara de fluxo laminar, onde se realizou RESULTADOS E DISCUSSO
a primeira desinfestao pela imerso em lcool (70%), por cinco
minutos, seguida de 20 minutos em hipoclorito de sdio (50% da Independentemente das diferentes concentraes de N6-BAP
soluo comercial). Aps este perodo, os pices foram lavados por utilizadas, foi observado influncia significativa da adio do carvo
trs vezes em gua destilada e esterilizada e novamente reduzidos at ativado ao meio de cultura, em todas as variveis avaliadas. Brotaes
tamanho mximo de 1cm3. O estabelecimento em meio de cultura foi cultivadas na presena de carvo ativado apresentaram maior altura,
realizado em frascos de vidro tipo baby food (5,0 cm x 7,0 cm) com vigor e nmero de razes formadas quando comparadas quelas
30 mL de meio MS (Murashige & Skoog, 1962), solidificado com 5 g.L-1 cultivadas em meio de cultura, na ausncia deste antioxidante. Por
de gar. outro lado, a presena em meio de cultura provocou a reduo da taxa
O cultivo estabelecido foi mantido por um perodo de 45 de multiplicao e nvel de oxidao dos explantes (Tabela 1),
dias, em sala de crescimento, na ausncia de luz. Aps este perodo, independentemente das concentraes de N6-BAP testadas.
as brotaes desenvolvidas foram transferidas para meios de J quando se avalia a interao carvo ativado x N6-BAP por
proliferao, em frascos de 250 mL de capacidade e 40 mL de meio. meio da anlise de regresso, verifica-se que, para comprimento de
Nesta etapa, foram retiradas as partes fenolizadas dos explantes, brotos, houve efeito negativo dos nveis de N 6-BAP em meio
iniciando-se assim o processo de multiplicao em meio de cultura de desprovido de carvo ativado, o que foi caracterizado pela acentuada
MS. Os tratamentos foram dispostos em um esquema fatorial 2x4, reduo do comprimento medida que se elevou a concentrao
constitudo da presena e ausncia de carvo ativado (0 e 3 g.L-1) desta citocinina (Figura 1a). Este fato pode ser atribudo aos efeitos
associado diferentes concentraes de N6-BAP (0; 2; 4 e 6 mg.L-1), do N6-BAP em quebrar a dominncia apical e favorecer a emisso de
num total de 8 tratamentos. O delineamento foi inteiramente novos brotos (Mok, 1994, citado por Mok et al., 2000). De acordo com
casualizado, com cinco repeties e quatro explantes por parcela. Grattapaglia & Machado (1990), o alongamento pode ser inibido pelo
Durante a multiplicao, os materiais foram mantidos em sala efeito acumulativo do regulador de crescimento presente no meio, no
de crescimento sob temperatura de 25 2 C, fotoperodo de 16 horas caso a N6-benzilaminopurina (BAP). Estudos realizados por Diniz et
e intensidade luminosa de 30 mol. m-2s-1. al. (2003) demonstraram que a adio de BAP no meio de cultura
Comprimento de br otaes
6 5
2,3
Taxa de multiplicao
5
4
4
Raiz x+1
3
(cm)
3
2 1,9
2 y = 3,7786 - 0,3492x 2
y = 1,7829 + 0,2391x - 0,0266x
R2 = 0,93 1 R 2 = 0,97
1
0 0 1,5
0 2 4 6 0 2 4 6
(A) BAP (mg.L-1) (B) BAP (mg.L-1)
Meio sem carvo Meio com carvo Meio sem carvo Meio com carvo
6
FIGURA 1 - Efeito de concentraes de N -BAP e presena e ausncia de carvo ativado no meio de cultura sobre o comprimento de brotaes
e taxa de multiplicao em bananeira, cv. Grand Naine. Rio Branco-AC, 2004.
3
3
2,5 2,5
Oxidao
Vigor
2 2
y = 2,1938 - 0,0421x y = 2,2961 - 0,521x + 0,0524x2
1,5 R2 = 0,94 1,5 R2 = 0,99
1 1
0 2 4 6 0 2 4 6
(A) BAP (mg.L-1) (B) BAP (mg.L-1)
Meio sem carvo Meio com carvo Meio sem carvo Meio com carvo
6
FIGURA 2 - Efeito de concentraes de N -BAP e presena e ausncia de carvo ativado no meio de cultura sobre o nvel de oxidao (a) e vigor
(b) em brotaes de bananeira, cv. Grand Naine. Rio Branco-AC, 2004.
tambm causou reduo no comprimento de brotaes de macela. Em confirmado pelo maior vigor obtido na concentrao de 0 mg.L-1 de
bananeira, Souza & Gonalves (1996) verificaram que, em meio de N6-BAP. J em meio de cultura com carvo ativado, no foram
cultura sem a presena de N6-BAP, a cv. Caipira apresentou forte verificadas diferenas significativas para esta varivel,
dominncia apical, contrrio aos tratamentos com doses crescentes independentemente das concentraes de N6-BAP utilizadas. Porm
desta citocinina. Webb et al. (1978), citados por Pan & Van Standen as brotaes foram mais vigorosas em comparao adio exgena
(1998), relatam que o crescimento de brotos de Pinus strobus foi de N6-BAP em meio sem carvo (Figura 2b), levando a inferir que
promovido pelo carvo ativado. Contudo, a suplementao deste meio houve maior absoro de nutrientes pelas brotaes sob a influncia
de cultura com concentraes de N6-BAP inibiu a induo de novos deste antioxidante, j que brotaes cultivadas nestas condies de
brotos e a rizognese. meio apresentaram reduzida oxidao e maior formao de razes (Figura
Por outro lado, no foram observadas diferenas 3) do que aquelas cultivadas em meio de cultura desprovido de carvo
significativas para comprimento de brotaes quando estas foram ativado.
cultivadas em presena do carvo ativado, independentemente das Para a caracterstica nmero de razes formadas, verificou-se
concentraes de N6-BAP testadas (Figura 1a). Tais resultados se que brotaes cultivadas em meio desprovido de carvo ativado
devem, muito provavelmente, ao fato de o carvo ativado adsorver apresentaram decrscimo no nmero de razes medida que se elevou
reguladores de crescimento e, desta forma, reduzir ou mesmo a concentrao de N6-BAP, enquanto na concentrao de 0 mg.L-1 a
neutralizar sua atividade. Este fato tambm foi observado por mdia foi de 6 razes por explante, e na concentrao de 6 mg.L-1 esse
Buchheim et al. (1989), citados por Pullman et al. (2005), em que a nmero foi prximo a 2,3 (Figura 3). Esse fato confirma a teoria de que
combinao de carvo ativado inibiu os efeitos do cido abscsico as citocininas inibem ou atrasam a formao de razes (Ben-Jaacov et
(ABA), com subseqente perda de sua atividade biolgica. Estes al., 1991). Resultados similares foram obtidos por Diniz et al. (2003),
autores afirmam que o uso de carvo ativado em meio de cultura que observaram reduo no nmero de explantes de macela com razes,
mais recomendado quando se busca o enraizamento in vitro, em meio com elevadas concentraes de N6-BAP.
alongamento de brotos, ou cultura de antera. Entretanto, a suplementao do meio com carvo ativado
Para taxa de multiplicao, a adio de carvo ativado ao favoreceu o enraizamento das brotaes, independentemente das
meio promoveu menor nmero de brotos por explante inicial, em mdia concentraes de N6-BAP testadas (Figura 3). Grattapaglia & Machado
2,3 brotos, independentemente dos nveis de N 6-BAP testados, (1998) reportam que o carvo simula a condio de escuro na qual as
evidenciando o efeito de adsoro do N6-BAP pelo carvo ativado, razes normalmente se desenvolvem melhor, alm de possuir efeito
uma vez que, na ausncia deste antioxidante, o aumento da diluidor, retendo parte de todos os elementos que compem o meio,
concentrao de N6-BAP favoreceu a taxa de multiplicao, at absorvendo compostos fenlicos inibidores do enraizamento. Cronauer
aproximadamente 4 mg.L-1, a partir da qual a adio de N6-BAP ao & Krikorian (1984), comparando o efeito da adio de ANA, AIA e
meio no mais promoveu acrscimos significativos para esta varivel AIB ao meio de cultura em presena de 0,025 % de carvo ativado,
(Figura 1b). Segundo Pullman et al. (2005), para que se obtenham os
benefcios do carvo ativado e dos reguladores adicionados aos meios, 7
Nmero de razes/planta
no observaram diferenas destes sobre o enraizamento in vitro de GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M.A. Micropropagao. In.:
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