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GUIA de biologiaCelMol PDF
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SEMESTRE 2013– I
I – CICLO
1
ASOCIACIÓN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
PRACTICA N°1
EL MËTODO CIENTIFICO
I. OBJETIVOS:
II. MATERIALES:
III PROCEDIMIENTO.
Hacer una descripción de las diferentes etapas que comprende en método científico en base al artículo seleccionado , los
alumnos por grupo revisarán y analizaran el mencionado artículo en base a lo siguiente:
- Observación
- Reconocimiento del problema planteado
- Formulación de la hipótesis
- Formulación de objetivos y métodos
- Prueba de hipótesis mediante la experimentación
- Análisis de resultados y conclusiones.
IV.RESULTADO
- Describir mediante un informe la importancia del artículo evaluado y el correcto uso del método científico.
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PRACTICA N°2
III. OBJETIVOS:
Dar a conocer los lineamientos básicos de organización, instrumental y seguridad en el laboratorio sea de análisis
clínico o de investigación.
Tubos de ensayo
Placas de Petri
Pipetas
Bagetas
Matraces(Erlenmeyer, Fiolas)
Probetas
Beaker (vasos de precipitación)
Pipetas (graduadas y volumétricas
Mecheros de Bunsen y de alcohol
Asas de Kolle
Balanza analítica
Estufa o incubadora
Hornos
Autoclave
Espectrofotómetros o colorímetros
PH metros
3
2
V. PROCEDIMIENTO:
1. ORGANIZACIÓN:
Generalmente los laboratorios funcionan de acuerdo a las actividades que ha de realizar se debe considerar
áreas, estructura y diseño interior, considerando lo siguiente:
Mesas de trabajo y repisa sobre la mesa
Mesa para instrumentales (balanza, microscopio, pH metro, etc.)
Armarios para reactivos y material de vidrio
Extractor de gases.
2. SECCIONES:
Cada laboratorio puede presentar una o varias secciones dependiendo de la naturaleza de la actividad. En
forma general el laboratorio debe contar áreas físicas o secciones:
Toma de muestra
Separación y clasificación de muestras
Lavado y esterilización
Almacén
Sala de trabajo
Todo material de vidrio debe estar ubicado en una zona específica y codificados. El material a guardar debe
estar completamente limpio, para lo cual debe ser sometido a un riguroso lavado, dependiendo del caso se usará
mezcla sulfocrómica o agua regia debiendo ser sometidos posteriormente a numerosos enjuagues con agua
corriente y finalmente con agua destilada o bidestilada, y otros podrán ser autoclavados. Los materiales serán
sometidos a temperaturas de 37- 45° C para el secado respectivo.
Todo equipo o instrumental debe estar ubicado en una zona de poco transito, alta iluminación y en una mesa
sólida. Para el manejo de los mismos se debe tener conocimiento de la manipulación debiéndose contar con el
manual respectivo. Antes de comenzar a operar un equipo verificar el voltaje, resistencia y amperaje del equipo.
Terminado el trabajo el instrumental debe quedar limpio y apagado. Anotar en el cuaderno de control la fecha,
hora de inicio y término de uso del equipo.
4. SEGURIDAD:
5. SÍMBOLOS DE SEGURIDAD:
VI. CUESTIONARIO:
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PRACTICA N° 3
I. OBJETIVO
Reconocer las unidades monoméricas y macromoleculares como componentes fundamentales de todos los seres
vivos.
III. PROCEDIMIENTO
Los Glúcidos o Hidratos de carbono por acción deshidratante del ácido sulfúrico originan compuestos derivados del
furfural, los que en presencia del alfa-naftol presente en el Reactivo de Molish, formarán un compuesto coloreado.
Preparación:
1. Colocar 1 ml. De cada solución del glúcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa y Almidón) en un tubo de
13x100 y roturarlo.
2. Adicionar a cada tubo con glúcido una (1) gota del Reactivo de Molish.
3. Agregar lentamente por la pared del tubo sin agitar 1 ml. de ácido sulfúrico concentrado.
4. Observar si hay cambio de color.
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3.2. Determinación de Azúcares Reductores:
Un Azúcar reductor al ser sometido a la acción del calor en el medio alcalino del Reactivo de Benedict, sufre
fenómenos de enolización y se fragmenta formando cuerpo fuertemente reductores para el cobre del Reactivo de
Benedict que se transforma en Ion cuproso (Cu+) el que reaccionará con los iones OH- del medio para formar Oxido
cuproso (Cu2O) que es de color rojo ladrillo.
Preparación:
1. Colocar 2 ml. de cada solución de glúcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa, Maltosa y Almidón) en un
tubo de 16x150 mm y roturarlo.
2. Adicionar 1 ml. de Reactivo de Benedict a cada tubo.
3. Someter los tubos a ebullición en agua hirviendo con ayuda de una pinza por cinco (5) minutos.
4. Observar la formación de color (rojo ladrillo si es positivo)
El yodo del Lugol es absorbido por el almidón y forma con él compuestos complejos de color azul negruzco (yoduro
de almidón).
Preparación:
IV. PROTOCOLO
A. Determinación de Glúcidos.
C.Determinación de Almidón.
V. CUESTIONARIO
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PRACTICA N° 4
I. OBJETIVO
Reconocer que compuestos orgánicos como los lípidos y proteínas son constituyentes importantes en todos los seres
vivos.
Aceite comestible
Albúmina al 1%
Clara de huevo
Alcohol
Cloroformo
Éter etílico
Sudam III
Hidróxido de sodio al 40%
Sulfato de cobre al 1%
Ácido nítrico concentrado
Tubos de 16 x 150 mm.
Pipetas graduadas de 5 ml.
III. PROCEDIMIENTO
DETERMINACION DE LIPIDOS
Preparación:
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Preparación:
DETERMINACION DE PROTEINAS
A. REACCION DE BIURET
Los compuestos que contienen dos o más enlaces peptídicos forman un complejo con las sales de cobre en
un medio fuertemente alcalino, dando un color púrpura o violeta.
Preparación:
Resultado
La formación de una coloración violeta o púrpura indica que la prueba es positiva.
B. REACCIÓN XANTOPROTEÍCA
Las proteínas que presentan aminoácidos con anillos bencénicos, cuando se someten a la acción del ácido
nítrico, dan derivados nitrogenados que se colorean de amarillo.
Preparación:
Resultado
La formación de una coloración amarillo - claro evidencia la presencia de proteínas.
EXTRACCIÓN DE ADN
Siguiendo las indicaciones de su profesor proceda a extraer el ADN bajo la forma de
fibras.
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PRACTICA Nº5
I. OBJETIVO
1. Conocer e identificar correctamente las partes ópticas y mecánicas del microscopio compuesto.
2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservación del microscopio.
II. MATERIALES
PARTE MECANICA
PARTE OPTICA
Ocular
Objetivos
9
Espejo
Lentes de condensador
Diafragma
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V. PROTOCOLO DE LAS OBSERVACIONES REALIZADAS
VI. CUESTIONARIO
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PRACTICA N° 6
I. OBJETIVO
PROCEDIMIENTO
PROTOCOLO
Aumento
4 X
10 X
40 X
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100 X
ASPERGILLUS (HONGO)
PENICILLUM (HONGO )
CUESTIONARIO
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PRACTICA N° 7
I. OBJETIVO
Poder diferenciar al microscopio las características que presentan la membrana celular de la célula animal y la
pared celular de la célula vegetal.
III. PROCEDIMIENTO
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1- Membrana plasmática, 2- Mitocondria,
3- Retículo endoplásmico rugoso, 4- Ribosomas,
5- Nucleolo, 6- Cromatina,
7- Citosol (=hialoplasma), 8- Diplosoma (=centriolos),
9- Retículo endoplásmico liso, 10- Aparato de Golgi
1. Con ayuda de la pinza separe una de las catáfila de la cebolla y extiéndalo sobre la lámina portaobjeto.
2. Con el bisturí corte cuadritos de medio centímetro de catáfila.
3. Coloque un cuadrito de la catáfila sobre una lámina portaobjeto y agregar una gota de Lugol.
4. Cubrir la preparación con una laminilla cubreobjeto.
5. Observar con objetivos de 10x y 40x
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C) OBSERVACION DE UNA CELULA FUNGICA
1. En una lámina preparada observar un cultivo de hongo coloreada con Azul de Lactofenol.
2. Observar con objetivos de menor y mayor aumento.
CATAFILA DE CEBOLLA
AUMENTO
con Suero fisiológico con Lugol
AUMENTO
10 X
40 X
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V. CUESTIONARIO
1.Qué características presenta la membrana celular de la mucosa epitelial y la pared celular de la células vegetales.
2.Cual es la importancia de los colorantes en las pruebas biológicas
3.Que tipo decolorante es el azul de metileno y cual es su estructura.
4.Que es el lugol y que importancia tiene en la preparación de laminas.
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PRACTICA N° 8
OBJETIVO
II. MATERIALES
Láminas portaobjeto
Laminillas cubreobjetos
Tubos de prueba
Lancetas hematológicas
Solución de NaCl al 0.4%
Solución de NaCl al 0.9%
Solución de NaCl al 2.0%
Agua destilada
Alcohol corriente
Algodón estéril
Pipetas de 1 ml.
Varillas de vidrio macizo
Gradillas
Microscopios
III. PROCEDIMIENTO
IV. RESULTADO:
Sol.NaCl0.4% + sangre
1
4
Sol,NaCl 0.4 + vegetal Hipotónica
VI. CUESTIONARIO
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PRACTICA N°9
I. OBJETIVOS
II. MATERIALES
A. MATERIAL DE LABORATORIO
Microscopios
Placas Petri
Láminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Gotero o Pipeta de 1 ml.
Colorantes: -Lugol al 4%
-Verde de metilo
B. MATERIAL BIOLOGICO
Cultivo de Protozoarios.
III. PROCEDIMIENTO
Cultivo de Protozoarios:
En un frasco mediano de boca ancha, con agua estancada, preparar: arroz, zanahoria, lechuga
picada y levadura
Mantener abierto al aire libre durante 6 días, en un lugar donde no haya luz directa.
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IV. OBSERVACION
1. Sobre una lámina portaobjetos, con un gotero coloque una gota del cultivo de protozoarios que contenga
Amoeba, cubrirlo luego con una laminilla cubreobjetos.
2. Añadir después de haber observado una gota de Verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas a 10x, 20x y 40x.
1. Sobre una lámina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Euglena y cubrir con una
laminilla cubreobjetos.
2. Añadir después de haber observado una gota de verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas.
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C). Movimiento ciliar por cilios: Paramecium caudatum (Clase Ciliophora)
1. Sobre una lámina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Paramecium, y cubrirlo con una
laminilla cubreobjeto.
2. Añadir después de haber observado la muestra anterior, una gota de verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas.
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AUMENTO Amoeba proteus Euglena viridis Paramecium caudatum
(Sarcodina) (Mastigophora) (Ciliophora)
10 X
20 X
40 X
VI. CUESTIONARIO
2. Explique las diferencias entre los diferentes tipos de movimientos: por seudópodos, flagelos, cilios.
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PRACTICA Nº 10
I. OBJETIVO:
Mediante el empleo de la técnica de coloración vital se observarán las mitocondrias presentes sólo en el
citoplasma de las células Eucariotas, que vienen a constituir las “centrales de energía” porque producen y
almacenan energía bajo la forma de ATP.
Con el uso de suero fisiológico observar plastidos en las células vegetales eucarióticas, los que contienen
pigmentos y pueden sintetizar y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son plastidos
incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidón, los Proteinoplastos que acumulan proteínas, los
Elaioplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plastidos coloreados como
el Caroteno que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la Xantofila de color
amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento de color verde y cuya función principal es realizar
la fotosíntesis.
Muestra de:
Células de epitelio bucal
Hoja de Elodea (Cloroplastos)
Ají amarillo (Xantofila)
Zanahoria (caroteno)
Papa (Amiloplastos)
Betarraga (Antocianina)
Harina de arroz (Leucoplastos o Amiloplastos)
Microscopios
Hoja de afeitar
Pinzas en punta
Laminas portaobjeto
Laminillas cubreobjeto
Solución Verde Janus 1/10,000
Frascos con Lugol
Frasco con Suero Fisiológico
Goteros con chupón de jebe
III. PROCEDIMIENTO:
1. Con una lámina limpia y mediante un raspado suave obtener una muestra de la mucosa bucal,
2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre otra lámina,
3. Dejar secar la lámina con la muestra al medio ambiente,
4. Cubrir la muestra con Verde Janus durante 5 minutos,
5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente,
6. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.
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B) OBSERVACION DE PLASTIDOS EN VEGETALES:
1. Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua en una lamina portaobjeto.
2. Cubrir la muestra con una laminilla.
3. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.
CROMOPLASTOS: Son organelas coloreados y presentan formas variadas (redondas, elípticas, o aciculares).
1. Realizar cortes finos de zanahoria, ají amarillo, betarraga sobre una lámina portaobjetos
2. Colocar una gota de agua sobre el corte.
3. Cubrir con una laminilla.
4. Observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento.
IV. PROTOCOLO:
20 X 40 X TIPO DE
PLASTIDIO
EPITELIO BUCAL
HOJA DE ELODEA
AJI AMARILLO
ZANAHORIA
BETARRAGA
PAPA
HARINA DE ARROZ
V. CUESTIONARIO
PRACTICA Nº 11
ACCION ENZIMATICA
I. OBJETIVO:
Conocer el mecanismo de acción de las enzimas durante una reacción química
Conocer como actúa un catalizador
II. MATERIALES:
Gradilla Papa rayada
Mortero con pilón Hígado de pollo
Tubos de prueba de 16 x150 Palito de Ignición
Agua oxigenada Fósforos
Dióxido de Manganeso Placas Petri
III. FUNDAMENTACION:
Las Enzimas tienen como función acelerar la velocidad de una reacción química. El mecanismo de acción se
realiza de la siguiente manera:
Unión de un Sustrato a la Enzima para formar un Complejo Enzima- Sustrato y desdoblamiento del complejo
formado para liberar los Productos.
E+S → E-S—E+P
IV. PROCEDIMIENTO:
1) Numerar los tubos del 1 al 3
2) Colocar en cada tubo 2 ml. de Peróxido de hidrógeno (Agua oxigenada)
3) Agregar al:
Tubo 1: ½ cucharita de Papa
Tubo 2: ½ cucharita de Hígado de pollo
Tubo 3: 2 g. Dióxido de Manganeso
4) Colocar a cada tubo el palito de Ignición encendido en la boca del tubo
5) Si el palito de Ignición aumenta la intensidad del fuego, la reacción es positiva.
V. RESULTADOS:
MnO2 + 2 H2O2 ------ 2 H2O + O2 + MnO2
VI. PROTOCOLO
VII. CUESTIONARIO:
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PRACTICA Nº 12
I. OBJETIVO:
Se estudiará la mitosis y el ciclo de división celular en las células meristemáticas de la raíz de Allium cepa (cebolla).
En este sistema la población celular esta en equilibrio dinámico y los cromosomas son relativamente grandes, con un
número diploide ( 2n =16 ).
II. MATERIALES:
Bulbos de cebolla
Placas Petri
Estiletes y pinzas
Papel de Filtro
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceite de inmersión
Mechero de Alcohol
Orceína acética- clorhídrica
Aceite de inmersión
Papel lente
Microscopios
III. PROCEDIMIENTO:
1. Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeños conteniendo agua corriente, la que deberá cambiarse cada 24
horas, mantener los bulbos en oscuridad a 25°C y sometidos a aireación constante.
2. Después de 48 a 72 horas, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 raíces del bulbo, cortar 2 cm. de la parte apical y
colocarla sobre una placa Petri que contenga Orceína.
3. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente 60°C y se observe la emisión de
vapores blancos, evitar la ebullición del colorante.
4. Dejar enfriar y repetir esta operación cuatro veces.
5. Enfriar y dejar reposar durante 15 minutos.
6. Colocar la raicilla en la lámina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, añadir una agota de Orceína fría, cubrir la
preparación con laminilla.
7. Con la punta de un lápiz golpear suavemente la preparación describiendo círculos concéntricos para permitir la
extensión del tejido meristemático.
8. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.
9. Observar la preparación a mayor aumento y lente de inmersión.
IV. PROTOCOLO:
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Esquematizar las diferentes fases que se observan:
Interfase: Los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados delgados y no puede
absorber suficiente colorante para ser visible.
Profase: Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromátidas.
Metafase: Se observa el huso acromático, los cromosomas están mas condensados y cortos.
Telofase: Los cromosomas están en los polos, empieza la formación de la membrana nuclear
V. CUESTIONARIO:
1. Que es mitosis.
REALIZAR ESQUEMAS:
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PRACTICA N° 13
I. OBJETIVOS
Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre periférica humana,
mediante el uso de una coloración diferencial.
Observar la presencia de núcleos en su interior.
II. MATERIALES
Microscopios
Colorante Wright o Giemsa
Alcohol yodado
Agua destilada
Láminas portaobjetos limpias y desengrasadas
Lancetas hematológicas
Algodón estéril
Varillas de coloración
III. PROCEDIMIENTO
1. Desinfectar el dedo anular con alcohol yodado y algodón y con una lanceta estéril punzar el dedo y dejar
caer una gota de sangre sobre un extremo de la lámina portaobjetos.
2. Con ayuda de otra lámina portaobjeto formar un ángulo de 45° y realizar un frotis, tratando de esparcir
homogéneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lámina.
3. Dejar secar la preparación y proceder luego a la coloración con Wright o Giemsa.
B. Coloración
IV. PROTOCOLO
(Esquematice los siguientes elementos que abajo se indican y que serán observados con ayuda del microscopio).
1. LEUCOCITOS GRANULARES:
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a) Neutrófilos segmentados: presenta un núcleo con varios lóbulos (2-5) unidas por bandas de
cromatinas.
c) Eosinófilos: redondos, voluminosos, con granulaciones acidófilas de color anaranjado, núcleo con dos
lóbulos.
d) Basófilos: son escasos de 0-1, presenta un núcleo difícil de observar, pues se halla cubierto por una
granulación de color violeta o morado oscuro .
2. LEUCOCITOS AGRANULARES:
a) Linfocitos: De forma redonda o irregular, su núcleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte de
la célula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su número aumenta con las infecciones.
b) Monocitos: De forma redonda u ovalada, núcleo variable generalmente en forma de riñón, citoplasma sin
gránulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.
3. PLAQUETAS:
Las más pequeñas de las células de la sangre, de forma redonda y no contienen hemoglobina. Son esenciales
en la coagulación de la sangre.
4. HEMATIES O ERITROCITOS:
De forma generalmente redonda, sin núcleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina. La proteína que se
encarga del transporte de oxígeno y anhídrido carbónico.
Neutrofilos
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Eosinófilos
Basófilo
Monocitos
Linfocitos
V. CUESTIONARIO
PRACTICA Nº 14
I. OBJETIVO:
Al finalizar la práctica el alumno debe saber qué es el grupo sanguíneo, sus aplicaciones en el campo de la medicina
y el grupo sanguíneo al que pertenece.
II. GENERALIDADES:
El serólogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de grupos sanguíneos y en
1938 el Comité de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de Microbiología de 1930 en Londres y la
Internacional de Transfusión Sanguínea de París, se adoptó definitivamente la clasificación de los grupos sanguíneos
humanos heredables, designados como A, B, AB, O.
A A Anti-B
B B Anti-A
AB AB Ninguno
(Receptor universal)
Láminas portaobjetos
Lancetas hematológicas
Sueros Anti-A, Anti-B, Anti-D o Rh.
Algodón
Alcohol yodado
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PROCEDIMIENTO :
GRUPO A GRUPO B
GRUPO AB GRUPO O
IV: CUESTIONARIO :
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