artigo técnico
Qualificação de um programa de Monitoramento
Ambiental – seleção / justificativa dos locais
de amostragem
Autor: Scott Sutton, Ph.D.
Vectech Consultoria Farmacêutica
Contato: sbcc@sbcc.com.br
Tradução: Eliane Bennett e Elisa Krippner (Coordenadoras
do Comitê de Recomendações Normativas da SBCC e
ABNT/CB 46), e J. Fernando B. Britto (Secretário do GEC-4)
O departamento de microbiologia desempenha um
papel crítico na qualificação ou requalificação de uma
instalação. Existem algumas áreas de atuação nas quais
a qualificação é mais relevante:
Estudos de Limpeza.
Planejamento de Controle de Contaminação.
Estudos de tempo de espera do Equipamento.
(Determinação dos tempos de espera para equipa-
mento limpo e contaminado).
Seleção de pontos de amostragem para monitora-
mento ambiental.
Estabelecimento de níveis de alerta e de ação.
Este artigo focará a seleção dos pontos de amos-
tragem, uma vez que este tema causa uma série de
confusões no campo. Isto não quer dizer que esta é a
única abordagem para a seleção e, sim, a metodologia
que o autor utilizou no passado. Dadas as limitações de
espaço, esta discussão não envolverá amostragem do
sistema de água, de gases ou de pessoal (tópicos impor-
tantes a serem discutidos em artigos posteriores).
O número de pontos a serem avaliados em um estu-
do de qualificação deve ser dividido por tipo de ensaio e
superfície:
Contagem de partículas em suspensão no ar (não-
viáveis).
Amostragem ativa de partículas viáveis em suspen-
são no ar.
Amostragem passiva de partículas viáveis em sus-
pensão no ar (placas de deposição).
Amostragem de superfície para paredes e pisos.
Amostragem de superfície para equipamentos.
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Por: Scott Sutton
Número de pontos para estudos
de Qualificação
O anexo B da norma NBR/ISO 14644-1 estabelece a
seguinte equação para determinação do número mínimo
de pontos de amostragem para contagem de partículas
em suspensão no ar, durante a qualificação do ambiente:
NL = A
Onde:
NL é o número mínimo de pontos de amostragem
(arredondado para um número inteiro imediatamente
superior)
A é a área da sala ou zona limpa em metros quadra-
dos.
Esta equação pode funcionar bem para contagem
de partículas não-viáveis (que, afinal, é o objetivo da
referida norma), porém, devemos considerar também a
amostragem de ar quanto a partículas viáveis (em am-
bos os métodos: ativo e passivo) e o monitoramento de
superfícies com relação a partículas viáveis.
Para simplificar, podemos dizer que, é recomenda-
do que as amostragens ativas, tanto de viáveis quanto
de não-viáveis, sejam feitas no mesmo local (ou o mais
próximo possível para evitar o comprometimento da
outra medição ou da integridade do produto). Portanto,
podemos dizer que o número de pontos de amostragem
de partículas viáveis em suspensão no ar é determinado
segundo o cálculo utilizado para partículas não-viáveis.
As amostragens passivas (placas de deposição) de
partículas viáveis em suspensão no ar são frequente-
mente utilizadas para controle da sala (ou zona) limpa.
Estas amostragens possuem várias vantagens,
entre as quais a principal vantagem é a possibilida-
de de manter a placa em exposição contínua por até
4 horas (o tempo de exposição precisa ser demons-
trado) e não gerar perturbação ao ambiente próximo,
possibilitando, assim, o posicionamento das placas em
locais extremamente próximos de onde o produto se
encontra exposto (veja Whyte, 1996, a respeito desta
e de outras vantagens).
Adicionalmente, as amostragens passivas são me-
nos suscetíveis às variações de fornecedores como no
caso dos amostradores ativos (Yao e Mainelis, 2006).
Contudo, não fica claro como os dados devem ser
interpretados nos casos de áreas de fluxo de ar unidire-
cional, usadas nas salas limpas modernas.
A necessidade da amostragem passiva é evidente.
As regulamentações internacionais atuais para o moni-
toramento de ar incluem a sua utilização e a justificativa
dos locais de amostragem.
Uma abordagem prudente é usar para as placas de
deposição, o mesmo número de pontos de amostragem
utilizado para os programas de amostragem ativa de par-
tículas viáveis e não-viáveis. Os pontos de amostragem
podem não ser necessariamente nos mesmos locais,
mas similares em número. Lembre-se que não estamos
falando sobre os locais de amostragem para o programa
de monitoramento ambiental em curso, mas, sim, sobre
a qualificação dos locais de amostragem a serem usa-
dos no programa de monitoramento de rotina.
Resta-nos ainda, determinar o número de pontos de
amostragem em superfícies para o estudo de qualifica-
ção. Não há diretrizes regulatórias para indústria farma-
cêutica internacional para a determinação de pontos de
amostragem em superfícies (mesmo o PIC/S, que geral-
mente pode ser consultado para obtenção de detalhes
sobre quase tudo em microbiologia, não faz comentários
nesse sentido - PIC/S 2004). O mesmo ocorre no caso
da PDA (Parenteral Drug Association) Relatório Técnico
n° 13. Para esta determinação, devemos utilizar nossos
próprios critérios. Uma abordagem para a determinação
do número de pontos de amostragem em superfícies
(paredes e pisos) seria usar o mesmo procedimento da
NBR/ISO 14644-1, tratando cada superfície separada-
mente e determinando o número mínimo de pontos em
cada superfície, como a raiz quadrada da sua área.
Após a determinação de número de pontos de amos-
tragem em paredes e pisos, ainda temos a questão de
como determinar o número de pontos de amostragem
em superfícies de equipamentos. Na minha opinião, esta
questão não pode ser respondida adequadamente com
a mesma abordagem. Esta definição, deve ser avaliada
em cada instalação e o número de pontos deve ser defi-
nido em função da natureza de cada equipamento, bem
como dos processos produtivos associados.
Seleção de pontos
de amostragem
Após determinar o número de pontos para cada sala,
precisamos agora definir sua localização. Aqui o Relató-
rio Técnico da PDA fornece uma diretriz útil:
“Os fatores a serem considerados na seleção dos
pontos para monitoramento de rotina são:
Em quais pontos a contaminação microbiana tem
maior efeito adverso na qualidade do produto?
Quais pontos melhor demonstram uma proliferação
microbiana mais intensa durante a produção?
A seleção do ponto pode envolver um modelo esta-
tístico (por exemplo, segundo os cálculos da NBR
ISO 14644-1) ou a seleção dos pontos pode ser feita
baseada em uma grade? Alguns pontos de monitora-
mento de rotina devem ser rotativos?
Quais pontos representam as áreas com maior difi-
culdade de acesso ou de serem limpas, higienizadas
e desinfetadas?
Quais atividades na área contribuem para a dissemi-
nação da contaminação?
O próprio ato de amostragem em um determinado
local perturba o ambiente o suficiente para provocar
erros nos dados ao serem coletados ou pode conta-
minar o produto?”
O Guia do FDA para Processamento Asséptico
(Aseptic Precessing Guidance - FDA 2004) também pro-
porciona alguma orientação na seção IV.A:
“A qualidade do ar na proximidade imediata de re-
cipientes/frascos esterilizados expostos e das opera-
ções de envase e tamponamento deve ser adequada
com relação à concentração de partículas, sendo a sua
contagem de partículas por metro cúbico com valor não
superior a 3520 partículas de diâmetro maior ou igual
a 0,5 micrometros, contadas em locais representativos,
normalmente a uma distância não superior a 1 pé (0,3 m)
do local de trabalho, dentro do fluxo de ar e durante as
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artigo técnico
operações de envase e tamponamento.
Este nível de limpeza do ar é também conhecido com
Classe 100 (ISO classe 5).
Recomendamos que as medições para confirmar a
classe de limpeza do ar em áreas críticas sejam feitas
em locais onde há maior potencial de risco para reci-
pientes, frascos e produto exposto esterilizados. É re-
comendado que a sonda do contador de partículas seja
posicionada em uma orientação demonstrada para obter
uma amostra significativa.
É recomendado que o monitoramento regular seja
executado em cada turno da produção. Recomendamos
conduzir o monitoramento de partículas não-viáveis com
um sistema de contagem remoto
NOTA 1. Estes sistemas são capazes de coletar
dados mais abrangentes e geralmente são menos in-
vasivos do que os contadores portáteis de partículas.
Veja a Seção X.E para orientação adicional em monito-
ramento de partícula. Algumas operações podem gerar
altas concentrações de particulado do próprio produto
(por exemplo: envase de pós) que, por sua natureza, não
constituem um risco de contaminação ao produto. Nes-
ses casos, pode não ser viável avaliar a qualidade do ar
dentro da distância de um pé (0,3 m) e ainda diferenciar a
concentração de partículas de contaminantes do ar das
partículas geradas pelo próprio produto. Nestes casos,
o ar pode ser amostrado de tal modo que, até onde seja
possível, caracterize o verdadeiro nível de contaminação
de partícula extrínseca, à qual o produto está exposto.
NOTA 2. A qualificação inicial da área sob con-
dições dinâmicas, sem executar a operação real
de envase, pode proporcionar informações de base so-
bre a geração de partículas oriundas da operação sem
produto.
Notas dos tradutores:
A. O uso de sondas remotas para contagem de par-
tícula em áreas com elevados graus de limpeza,
pode introduzir erros na contagem de partículas de
maior diâmetro (maiores ou iguais a 5 micrometros),
em função de aumentar a probabilidade de adesão
destas partículas na mangueira existente entre os
captores isocinéticos e a entrada dos contadores.
Recomenda-se consultar o fabricante do contador
de partículas para avaliar as máximas distâncias e
quantidade de curvas recomendadas.
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B. Recomenda-se realizar ao menos uma contagem de
partículas imediatamente a montante do ponto do
envase (seguindo o sentido de fluxo de ar), para com-
provar a qualidade do ar antes de entrar em contato
com o produto. Por exemplo: em um fluxo unidire-
cional vertical, executar uma amostragem dentro da
faixa de 0,3m acima do ponto de envase.
Mais adiante na Seção X.A lemos :
“Tempo de amostragem, frequência e local, devem
ser selecionados cuidadosamente, baseados na sua
relação com a operação executada. ...
É importante que os pontos de monitoramento ava-
liem o maior risco microbiológico do produto, sendo
esta a parte chave do programa. É particularmente im-
portante monitorar a qualidade microbiológica da área
crítica para determinar se foram mantidas condições
assépticas durante as atividades de envase e tampona-
mento. As amostragens do ar e das superfícies devem
ser coletadas no local onde ocorre manipulação ou
exposição significativa do produto durante a produção.
Superfícies críticas que entram em contato com o pro-
duto estéril devem ser mantidas estéreis durante todo o
processo. Quando identificados os pontos críticos para
amostragem, deve-se levar em consideração os riscos
de contaminação no processo, incluindo fatores como:
dificuldade de montagem, duração do processamento e
impacto de intervenções.”
O guia EU “Manufatura de produtos Medicinais
Estéries” (Manufacture of Sterile Medicinal Products -
EU2008) proporciona algumas diretrizes para seleção
de pontos de amostragem:
“18. Onde ocorrem operações assépticas, o moni-
toramento precisa ser frequente, usando métodos como
os de colocação de placas, amostragem volumétrica do
ar e de superfície. (e.g. hastes com algodão - swabs e
placas de contato). Os métodos de amostragem usados
na operação não devem interferir na zona de proteção.”
Da mesma forma, na mais recente revisão proposta
pelo capítulo <1116> da USP (USP2007) indica:
“Pontos de amostragem microbiológica são melho-
res selecionados quando a atividade humana durante as
operações de manufatura é considerada. Observação
cuidadosa e mapeamento de uma sala limpa durante a
fase de qualificação podem fornecer informações a cer-
ca do posicionamento e da movimentação do pessoal
dentro dos ambientes. Tal observação também pode
fornecer informações importantes a respeito das mani-
pulações e das intervenções frequentemente realizadas
durante o processo.
Outra área de interesse com respeito à entrada de
contaminantes em salas limpas diz respeito aos pontos
onde a entrada de equipamentos e materiais é realizada
a partir de áreas de menor classificação para outras de
maior classificação. Portanto, as áreas dentro e em tor-
no das portas e das antecâmara devem ser incluídas no
plano de monitoramento.”
Vamos resumir algumas considerações relativas à
seleção dos pontos de amostragem para o estudo de
qualificação.
Após determinar o número mínimo de pontos numa
sala, devemos determinar sua localização mais útil. Esta
determinação deve ser documentada por escrito e deve
considerar:
Vetores de contaminação (maçanetas, painéis de
controle, portas, etc.)
Áreas de intenso tráfego
Fluxo de pessoas
Fluxo de materiais
Fluxo de rejeitos
Superfícies difíceis de ser desenfeitadas
HVAC (retorna primeiramente neste caso)
Risco ao produto
Extensão da exposição do produto
Tipo de atividade desenvolvida próximo ao local
Potencial de Contaminação através de intervenções
e manipulações
Seleção de pontos de rotina
após o estudo de Qualificação
O estudo de qualificação deve contemplar uma
amostragem suficiente, tanto sob condições “em repou-
so” como “em operação”, para permitir uma identificação
adequada de pontos que forneçam informações úteis.
Deve ficar claro que o termo “informação útil” não
deve descrever “os pontos que proporcionam as conta-
gens mais desejadas”, mas aqueles que, ou forneçam as
contagens mais altas (indicando o valor mais sensível
ou crítico do estado de controle da sala) ou se mostra-
ram adequados para constatar um eventual problema
na sala. É recomendado que o número de pontos em
uma sala ou zona seja igualmente norteado por dados
gerados durante este estudo. Tanto o número como a
localização dos pontos em cada área ou zona limpa deve
ser justificado no relatório deste estudo de qualificação.
A seção X.1.A do guia do FDA é relevante para a se-
guinte consideração:
“Todos os pontos de monitoramento ambiental de-
vem ser descritos em POPs com detalhe suficiente para
permitir amostragem reprodutível deste ponto. POPs
escritos devem também levar em consideração os se-
guintes aspectos:
1. Frequência de amostragem
2. Quando as amostras foram tomadas (por exemplo:
durante a operação ou após a conclusão das opera-
ções)
3. Duração da amostragem
4. Tamanho da amostra (e.g, área da superfície, volume
do ar)
5. Equipamento específico de amostragem e técnicas
específicas
6. Níveis de alerta e de ação
7. Respostas apropriadas a desvios oriundos dos níveis
de alerta e ação”
Nota sobre o “Catálogo
de micro-organismos”
O FDA recomendou claramente que se estabeleces-
se uma listagem de micro-organismos comuns encon-
trados em ambientes assépticos de manufatura. Esta
expectativa é demonstrada na seção X.B (FDA 2004).
“A caracterização de micro-organismos recuperados
proporciona informação vital para o programa de moni-
toramento ambiental. Os micro-organismos isolados no
monitoramento ambiental frequentemente podem ser
relacionados com os contaminantes encontrados no
“media fill” ou no teste de esterilidade de produto que foi
contaminado. Todo o processo de monitoramento am-
biental proporciona informações valiosas para a investi-
gação. É recomendado que o monitoramento das áreas
limpas críticas e as áreas imediatamente ao redor, bem
como o monitoramento do pessoal, inclua a identificação
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artigo técnico
de rotina de micro-organismos no nível de espécie (ou
do gênero, quando necessário).
Em alguns casos, dados de tendência de ambientes
revelaram a migração de micro-organismos para dentro
da sala de processamento asséptica, oriundos das áreas
não controladas ou de áreas menos controladas.
Estabelecer um programa adequado para detecção/
diferenciação dos micro-organismos nos ambientes me-
nos controlados, como no caso dos ambientes Classe
100.000 (ISO classe 8), pode frequentemente ser fun-
damental para detecção de tais tendências. No mínimo,
é recomendado que o programa requeira a identificação
das espécies (ou do gênero, quando necessário) de
micro-organismos nesses ambientes auxiliares, a inter-
valos frequentes, para estabelecer um banco de dados
válido dos contaminantes presentes no local durante o
processamento (e para demonstrar que os procedimen-
tos de limpeza e sanitização continuam eficazes).”
O estudo de qualificação de Monitoramento Ambien-
tal é uma oportunidade excelente para dar início a este
catálogo e para gerar informações a respeito da eficácia
do programa de limpeza e sanitização sob o ponto de
vista microbiológico.
Referências
EU. 2008. – EudraLex The Rules Governing Me-
dicinal Products in the European Union Volume
4: EU Guidelines to Good Manufacturing Practi-
ce Medicinal Products for Human and Veterinary
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ducts.
PIC/S. 2004 – PI-006-2 Recommendations on Vali-
dation Master Plan, Installation and Operational Qua-
lification, Non-sterile Process Validation, Cleaning
Validation
PDA. 2001 – PDA Tech Report #13 (Revised): Fun-
damentals of an Environmental Monitoring Program
USP 2007 <1116> – Microbiological Control andMo-
nitoring Environments Used for the Manufacture of
Healthcare Products Pharm Forum. 33(3).
Whyte, W. 1996 – In Support of Settle Plates. PDA J
Pharm Sci Tech. 50(4):201-204.
Yao, M. and Mainelis, G. 2006 – Investigation of
Cut-Off Sizes and Collection Efficiencies of Portable
Microbial Samplers. Aerosol Sci Technol. 40: 595 –
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