INSTITUTO FEDERAL FLUMINENSE CAMPUS ITAPERUNA RJ

CAIO DIAS
ISADORA MARIA
YASMIM AQUINO

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

Itaperuna RJ
2019
 CAIO DIAS
ISADORA MARIA
YASMIM AQUINO

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

Relatório final, apresentado ao Instituto

Federal Fluminense campus Itaperuna RJ
como parte das exigências para a
obtenção do título de Cromatografia em
coluna.

Itaperuna, 24 de Abril de 2019

1- INTRODUÇÃO:
A cromatografia é um método físico-químico de separação e está
fundamentada na migração diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre
devido a diferentes interações, entre duas fases imiscíveis: móvel e estacionária.
A cromatografia em coluna é uma técnica para identificação, separação e
purificação de substâncias químicas. Esta técnica consiste em montar uma fase
estacionária, composta por um líquido poroso, em uma coluna cromatográfica e
então usar um solvente adequado, chamado de fase móvel, para eluir os compostos
químicos através desta fase estacionária.

Figura 1: Representação de uma cromatografia em coluna.

A técnica baseia-se na diferença de velocidade com que as substâncias

químicas movem-se pela fase estacionária quando arrastadas pelo solvente. Isto
acontece porque o grau de polarização de uma substância determina tanto seu grau
de interação com o solvente utilizado (se ele será arrastado pelo solvente a medida
que este desce ou não pela coluna e com que intensidade será arrastado) quanto
seu grau de interação com a fase estacionária, que possui inúmeros sítios polares
disponíveis para interação eletrostática reversível com a substância sendo
arrastada.

2- OBJETIVOS:
Separar os corantes azul de metileno e alaranjado de metila utilizando a
cromatografia em coluna (CLS).

3- MATERIAIS E REAGENTES:
・Sílica-gel;
・Alaranjado de metila;
・Azul de metileno;
・Etanol;
・Béquer (100 mL);
・Suporte universal;
・Funil;
・Coluna cromatográfica;
・Pipeta Pasteur;
・Bastão de vidro;
・Algodão.

4- PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL:
Primeiramente, separou-se por coluna cromatográfica a mistura de 0,5 mL de
alaranjado de metila e azul de metileno e utilizou-se etanol como eluente. Em
seguida, inseriu-se uma pequena quantidade de algodão na parte inferior da coluna
e preencheu-a com sílica-gel em suspensão com o eluente.
Posteriormente, retirou-se o excesso de eluente da coluna e deixou-se uma
camada fina no topo. Aplicou-se, com o auxílio da pipeta de Pasteur, a mistura de
corantes no topo da coluna preparada e eluiu-se com etanol com o objetivo de
separar os mesmos.
Por último, recolheu-se frações em béqueres e visualizou-se a separação dos
corantes.

5- RESULTADOS E DISCUSSÃO:
Como o fluxo de solvente deve ser constante, os diferentes componentes da
mistura se moverão com velocidades distintas dependendo de sua afinidade relativa
pela fase móvel (grupos polares interagem melhor com a fase estacionária) e
também pelo eluente. Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar
um composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do
solvente com relação ao composto.

Figura 1: Pigmentos coletados.

Concluiu-se que o alaranjado de metila foi o primeiro a sair da coluna

cromatográfica, possuindo maior afinidade com a fase móvel (etanol). Já o azul de
metileno demonstrou mais afinidade com a fase estacionária e, por isso, a solução
de etanol foi trocada por água. Por novamente não apresentar boa interação, foi
necessário substituir a água por ácido acético, fazendo com que o azul de metileno
reagisse do modo esperado.

6- CONCLUSÃO:
Com base no experimento realizado e nos resultados obtidos em
cromatografia em coluna, concluiu-se que foi possível separar o azul de metileno do
alaranjado de metila pelas diferentes interações desses componentes com a fase
móvel e estacionária, que depende da polaridade das substâncias e efeitos
específicos de afinidade e solubilidade. Dessa forma, o fator importante na análise
está na escolha da fase móvel mais adequada às substâncias que se quer separar.

7- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
http://www3.uma.pt/quimica_organica/conteudos/cromatografia.html
https://edisciplinas.usp.br/pluginfile.php/1842690/mod_resource/content/1/Aula
%202%20-%20T%C3%A9cnicas%20de%20cromatografia.pdf
https://www.todamateria.com.br/cromatografia/
http://www.ufjf.br/quimica/files/2018/08/Cromatografia.pdf

8- ATIVIDADES DE VERIFICAÇÃO:
8.1) Quais são as aplicações da cromatografia em coluna?
A cromatografia em coluna é utilizada quando se quer separar grandes
quantidades de substâncias.

8.2) Qual a classificação desse método de separação em relação a sua forma

física e em relação ao estado físico das fases móvel e estacionária?
Pela fase móvel é a cromatografia líquida clássica (CLL), onde a fase móvel é
arrastada através da coluna apenas pela força da gravidade. Pela fase estacionária
é a fase estacionária sólida, onde o líquido pode estar adsorvido por um sólido.
Cromatografia em coluna líquido-sólido.

8.3) O que é uma série eluotrópica?

Série eluotrópica é uma lista de diversas substâncias ordenadas segundo seu
poder de eluição para um determinado adsorvente. Tais séries são úteis para
determinar os solventes necessários para o processo de cromatografia de uma
mistura de substâncias.

8.4) Como proceder com a separação de compostos incolores por

cromatografia em coluna?
Quando os compostos são incolores, opta-se por usar quantidades fixas de
cada eluente. Em seguida, deve-se utilizar a quantidade determinada do primeiro
solvente e a eluição é iniciada com um segundo solvente de polaridade maior. O
aumento de polaridade citado, é conseguido com uma mistura do primeiro solvente e
uma porcentagem de um solvente com maior polaridade.