UNIVERSIDADE FEDERAL CEARÁ – UFC

CENTRO DE CIÊNCIAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR

DISCIPLINA: Metodologia científica TURMA: A (10 às 12H /Sex) Créditos: 02

Curso: Biotecnologia PROF: André Luis Coelho

Normas e Modelo (Resumos)

Título: Técnicas de Cultivo e Semeadura de Bactérias.
Autor: Guilherme da Silva Nascimento.

A Biologia Molecular é uma área que utiliza diversas técnicas para o estudo do DNA e
RNA como também os processos de replicação, transcrição, tradução e de regulação
desses processos. A microbiologia é uma área que complementa os estudos da biologia
molecular através do emprego de técnicas de crescimento e cultivo de micro-
organismos. Devido à variedade de micro-organismos presentes no ambiente, se faz
necessário de técnicas que permitam a identificação e o cultivo de organismos
específicos. Os meios de culturas são utilizados como ambientes artificiais capazes de
suprir todas as necessidades requeridas pela cultura estudada ao mesmo tempo em que é
possível o emprego de técnicas de seleção e identificação desta. A prática de cultivo e
seleção de bactérias objetiva apresentar as técnicas básicas de inoculação de bactérias e
semeadura, como também apresentar os principais meios de cultura e suas finalidades e
o modelo de crescimento de uma cultura após a inoculação. Os procedimentos foram
realizados em uma câmara de fluxo laminar, próximos ao raio de ar esterilizado (calor
seco) gerado por uma lamparina. O material biológico utilizado em todas as inoculações
foi uma cultura de Escherichia coli. semeada em tudo de ensaio contendo meio líquido
LB(meio Luria-Bertani). A incubação dos repiques foi realizada em estufa
bacteriológica a 37°C por um período de 16h e os resultados foram observados após 24h
com exceção do repique em meio líquido no qual foi observado apenas após 48h. Na
primeira prática foi realizada a inoculação em meio líquido LB utilizando como vetor
uma alça de platina esterilizada. Nesse experimento foi observado um crescimento
bacteriano devido um aumento na turbidez do meio em comparação com o grupo
controle. Na segunda prática foi realizada a semeadura em meio sólido através da
técnica de picada na qual é utilizado um palito estéril para realização do repique. O
palito é carregado com a amostra e são feitos “furos” no meio. Foi observado
crescimento bacteriano devido à formação de colônias apenas nos pontos em que foram
realizados. Na terceira prática foi utilizado como meio o ágar LB sólido inclinado. A
inoculação foi realizada utilizando uma alça de platina e o repique por meio de
esgotamento do material coletado através da formação de estrias que foram formadas
desde a parte mais profunda do meio. A formação de colônias foi observada
confirmando o crescimento bacteriano. A quarta prática foi realizada através de
esgotamento em meio sólido utilizando-se alças de platina. As alças foram carregadas
com a amostra e repicadas através de técnica de estriamento iniciando com estrias mais
fechadas e tornando-as mais abertas a cada novo quadrante que formado. Foi observado
crescimento de colônias bem próximas nas primeiras estrias e, seguinte distanciamento,
aumento do isolamento das colônias em desenvolvimento. Na última prática, foi
realizada a inoculação de 100microlitros de amostra biológica em meio líquido através
do uso de uma pipeta automática. O crescimento observado nesse meio foi, semelhante
a primeira prática, observado e identificado através da turbidez do meio. Apesar da
avaliação do último meio ter sido realizada em tempo superior ao determinado( 24h
após a inoculação), foi possível determinar o crescimento bacteriano na cultura. Todos
os meios apresentaram resultado positivo para crescimento bacteriano indicando que
tanto o meio era propício para o micro-organismo como também as técnicas foram
aplicadas corretamente.