Extrato de alcaçuz (Glycyrrhiza glabra L.

): ação antimicrobiana sobre biofilme de

Staphylococcus aureus em resina acrílica

Kely Karina Belato, Jonatas Rafael de Oliveira, Cláudio Antonio Talge Carvalho,
Antonio Olavo Cardoso Jorge, Luciane Dias de Oliveira

Universidade Estadual Paulista – UNESP / Instituto de Ciência e Tecnologia

Departamento de Biosciências e Diagnóstico Bucal
Av. Eng. Francisco José Longo, 777 - Jardim São Dimas - 12245-000 - São José dos Campos, SP
kely_k@msn.com

Resumo – O presente estudo avaliou a atividade antimicrobiana do extrato glicólico de alcaçuz (G. glabra
L.) sobre biofilme de S. aureus em resina acrílica. Para tanto, um disco de resina acrílica foi depositado em
um poço de uma placa de 24 poços e recoberto por caldo Brain Heart Infusion (BHI) sacarosado (5% de
sacarose), em seguida, foi adicionada ao meio a suspensão padronizada de S. aureus (106 células/mL).
Após incubação de cinco dias a 37°C, o biofilme formado foi colocado em contato com o extrato de alcaçuz
(100 mg/mL) por cinco minutos, Em seguida, o biofilme foi desagregado do disco de resina acrílica, diluído
em solução salina (NaCl 0,9%), semeado em ágar BHI e incubado por 48 h. Pela contagem de UFC/mL,
observou-se que houve redução significativa (p<0,01) do biofilme de S. aureus de 0.726±0.295 log10, em
comparação ao grupo controle (NaCl 0,9%), sendo semelhante à redução apresentada pela clorexidina
(0,031%), com redução média de 0.973±0.537 log10. Desta forma, foi constatado que o extrato de alcaçuz
demonstrou efetiva atividade antimicrobiana sobre S. aureus com ação semelhante à clorexidina.

Palavras-chave: Glycyrrhiza glabra L.; alcaçuz; Staphylococcus aureus; biofilme

Área do Conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia

Introdução Biofilme microbiano é um micro-ecossistema

Glycyrrhiza glabra L., conhecida popularmente
por alcaçuz ou raiz doce, pertencente à família
Fabaceae, é uma planta medicinal que cresce em
diversas partes do mundo. É uma das mais
antigas plantas utilizadas como medicamento, e
até mesmo, como condimento para disfarçar o
sabor desagradável de outros fármacos (BIONDI
et al., 2005). Também é utilizada como adoçante e
agente aromatizante em alimentos, doces,
dentifrícios e bebidas (WITTSCHIER et al., 2009).
Em países como Índia e China, suas raízes e
rizomas são utilizados para fins terapêuticos
(WITTSCHIER et al., 2009).
Numerosas atividades biológicas foram
atribuídas ao alcaçuz, como antibacteriana,
antifúngica, anti-ulcerogênica, antitumoral, anti-
inflamatória, antioxidante, anti-aterosclerose,
hepatoprotetora, imunomoduladora, expectorante
e cardioproteroa (ASL et al., 2008; LAU et al.,
2010; OLIVEIRA et al., 2013). Estas atividades
são desempenhadas por inúmeros compostos
bioativos presentes em G. glabra L., como ácido
glicirrízico, glicirrizina, isoliquiritigenina,
hispaglabridina B, paratocarpina B e glabiridina
(BIONDI et al., 2005; LIU et al., 2008)
formado por diversas espécies de micro-
organismos envolvidos em uma matriz extracelular
constituída de polissacarídeos, acredita-se que um
biofilme natural seja formado por cerca de 750
espécies diferentes de micro-organismos em
associação (JENKINSON; LAMONT, 2005). O
crescimento do biofilme ocorre pela comunicação
intra e interespecífica apresentada pelos
indivíduos nesta comunidade, sendo importante
também para o desenvolvimento de infecções
como cárie e periodontite (KURAMITSU et al.,
2007).
Com o surgimento de cepas resistentes aos
antimicrobianos de uso convencional, capazes de
provocar inúmeras patologias, o estudo de
métodos alternativos para controle destes
patógenos, como a utilização de produtos
vegetais, é de grande importância. Diversos
estudos tem sido elaborados no sentido de
verificar a atuação efetiva destes produtos sobre
micro-organismos. Com isso, buscamos avaliar o
potencial antimicrobiano do extrato de alcaçuz
sobre biofilme de S. aureus formado em resina
acrílica.

XVII Encontro Latino Americano de Iniciação Científica, XIII Encontro Latino Americano de Pós- 1
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Metodologia
Foi utilizada uma cepa-padrão de S. aureus
(ATCC 6538) cultivada por 24 h em ágar BHI
(Difco, Detroit, MI, EUA) a 37°C. O inóculo foi
padronizado em solução fisiológica estéril (NaCl
0,9%) com auxílio de espectrofotômetro (Micronal
B-582, São Paulo, Brasil), com comprimento de
onda de 490 nm e densidade optica de
0,374±0,020, para obtenção da concentração final
6
de 10 células/mL.
Para a formação do biofilme in vitro (PEREIRA
et al., 2010), foram adicionados em placas de 24
poços estéreis com tampa (TPP, Suiça), 2 ml de
caldo BHI sacarosado (5% de sacarose), um disco
de resina acrílica estéril (Clássico, São Paulo,
Brasil) para a formação do biofilme e 100 µL da
suspensão padronizada de S. aureus, por poço.
Foram utilizados 10 discos para o grupo controle
(NaCl 0,9%), 10 discos para o grupo tratado com
extrato de alcaçuz (100 mg/mL) e 10 discos para o
grupo tratado com clorexidina (0,031%). As placas
foram incubadas a 37°C por cinco dias.
Posteriormente, os discos passaram por três
lavagens com solução fisiológica estéril, sob
agitação, a fim de remover células não aderidas.
Os grupos tratados foram submetidos ao
contato por cinco minutos com o extrato de
alcaçuz ou com a clorexidina, em seguida,
passaram por mais uma lavagem e foram
colocados em tubos com solução fisiológica
estéril. Para desagregação do biofilme, as
amostras foram levadas ao homogeneizador
ultrassônico (Sonoplus HD 2200, 50 W, Bandelin
Eletronic) por 30 segundos com potência de cerca
-1 -2
de 25%. Quatro diluições decimais (10 , 10 , 10
-3
-4
e 10 ) das suspensões foram realizadas e 100 µL
de cada diluição foram semeados em placas de
BHI que seguiram para incubação por 48 h a
37°C. Em seguida, foram contadas as unidades
formadoras de colônia por mililitro (UFC/mL) e os
resultados foram convertidos em log 10. Os valores
foram analisados estatisticamente pelo teste
ANOVA, complementado por Tukey Test (p≤0.05).
Resultados
O extrato de alcaçuz promoveu redução média
significativa (p<0,01) do biofilme de S. aureus de
0.726±0.295 log 10, em comparação ao grupo
controle (NaCl 0,9%), uma vez que o valor de
UFC/mL do grupo tratado com o extrato foi de
6.233±0.275 log10 e do grupo controle foi de
6.959±0.273 log10 (Figura 1).
A clorexidina reduziu em média 0.973±0.537
log10 (p<0,01), sendo observado no tratamento o
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Figura 1 – Valores médios (±DP) das UFC/mL
(log10) do biofilme de S. aureus apresentados pelos
grupos Controle (NaCl 0,9%) e Tratado com extrato
de alcaçuz (100 mg/mL) e reduções do biofilme
*p<0,01; **diferença não significativa (p>0,05).
(ANOVA e Tukey Test)
número de UFC/mL de 6.304±0.538 log10 e para o
controle 7.278±0.011 log10 (Figura 1).
Discussão
De acordo com nossos resultados, o extrato de
alcaçuz apresentou na concentração de
100 mg/mL efeito bacteriostático sobre o biofilme
de S. aureus. No entanto, para formas
planctônicas deste micro-organismo esta
concentração foi bactericida (OLIVEIRA et al.,
2013). Segundo Lewis (2001), os biofilmes são
mais resistentes à ação de antimicrobianos em
comparação às culturas planctônicas. Esta
conformação também proporciona aos micro-
organismos maior resistência aos diversos
componentes da imunidade do hospedeiro
(LEWIS, 2001).
Outro dado relevante do presente estudo é a
similaridade da ação antimicrobiana do extrato de
alcaçuz com a clorexidina, uma vez que, as
reduções de UFC/mL (log10) foram
estatisticamente semelhantes entre esses grupos,
sendo 0.726±0.295 log10 para o grupo tratado com
o extrato de alcaçuz e 0.973±0.537 log10 para o
grupo tratado com a clorexidina.
A ação antimicrobiana de G. glabra L. se
estende a outras espécies de micro-organismos.
Estudos tem demonstrado que o extrato de
alcaçuz também atuou sobre Candida albicans, C.
glabrata, C. tropicalis, Streptococcus mutans,
Staphylococcus epidermidis e fungos filamentosos
(MOTSEI et al., 2003; OLIVEIRA et al., 2013).
Esta atividade biológica do alcaçuz foi atribuída
à presença de importantes compostos naturais
que este vegetal utiliza para se defender de
2
patógenos, foram isoladas e identificadas diversas
destas moléculas, como glabridina, hispaglabridina
B (FATIMA et al., 2009) e ácido glicirretínico
(PELLATI et al., 2009). Foi demonstrado que o
composto glabridina exibiu atividade inibidora
contra C. albicans (FATIMA et al., 2009) e também
contra S. aureus sensíveis e resistentes à
meticilina (FUKAY et al., 2002).
Estudos devem ser conduzidos no objetivo de
se verificar a biocompatibilidade destes produtos,
uma vez que, obtendo-se resultados satisfatórios
de viabilidade para seres humanos, poderiam ser
aplicados em produtos como dentifrícios,
enxaguatórios bucais, saponáceos e até mesmo
em medicamentos, no intuito de controlar micro-
organismos oportunistas causadores de infecções.
Conclusão
De acordo com os resultados obtidos, o extrato
de alcaçuz (G. glabra L.) apresentou ação
antimicrobiana, reduzindo significativamente a
quantidade de UFC/mL do biofilme de S. aureus
formado em resina acrílica, demonstrando
também, ação antimicrobiana semelhante à
clorexidina.
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