5 - Relatório Científico

CENTRO UNIVERSITÁRIO FUNDAÇÃO
SANTO ANDRÉ
JULIA PURCINELLI MELO COSTA
TAUANE KETHELEEN DA CUNHA SOUZA
THYAGO BORELLA FERREIRA

ATIVIDADE ALELOPÁTICA DO EXTRATO
DE Hymenaea courbaril L. E ANÁLISE DE
INTERAÇÃO FRENTE À Staphylococcus
aureus, Escherichia coli E Pseudomonas
aeruginosa
SANTO ANDRÉ
2020
1 INTRODUÇÃO
1.1 Metabólicos secundários em vegetais

As plantas são organismos eucariontes,
fotossintetizantes, multicelulares, com
diferenciação de tecidos. Além disto, acreditasse
que as plantas terrestres tenham surgido de um
grupo ancestral de algas verdes, por conta da
existência de várias características que as
aproximam, como presença de parede celular
composta principalmente por celulose e a
existência de clorofilas a e b. Na passagem
evolutiva das algas verdes para as plantas
terrestres, surgiram algumas características que

se mantiveram por seleção natural, pois se
revelaram adaptativas à vida no ambiente
terrestre, possibilitando a expansão das plantas
nesse ambiente. (LOPES, 2004).
Os metabólitos primários são compostos
responsáveis pelo crescimento e no
desenvolvimento dos vegetais, isto inclui
açúcares, aminoácidos, ácidos graxos, lipídeos e
nucleotídeos, proteínas, polissacarídeos,
membranas, DNA e RNA. Os metabólitos
primários são compostos que todas as plantas

produzem diferente dos metabólitos secundários
que são altamente espécie-específico. (TAIZ et
al., 2017).
Os vegetais produzem grande variedade de
compostos orgânicos que não apresentam função
direta no crescimento e desenvolvimento da
planta. Estas substâncias são chamadas de
metabólitos secundários e podem ser restritas a
uma espécie vegetal ou grupo de espécies. Estes
produtos metabólicos secundários protegem as
plantas contra os herbivoria e infecção por

microrganismos patogênicos, também podem
atrair animais polinizadores e como agentes na
competição planta-planta. Estes metabólicos
secundários podem ser divididos em três grupos
quimicamente distintos: terpenos, compostos
fenólicos e compostos nitrogenados. (TAIZ;
ZEIGER, 2006).
As plantas produzem grande quantidade de
compostos fenólicos e por conta disto apresenta
uma variedade de funções nos vegetais. Muitos
agem como compostos de defesa contra

herbivoria e patógenos ou reduzindo o
crescimento de plantas competidoras adjacentes.
Duas rotas metabólicas básicas estão envolvidas
na síntese dos compostos fenólicos: a rota do
ácido chiquímico que participa na biossíntese da
maioria dos fenóis vegetais e a rota do ácido
malônico é uma fonte importante de produtos
secundários fenólicos em fungos e bactérias.
(TAIZ; ZEIGER, 2006).

Os vegetais liberam no ambiente compostos
metabólicos primários e secundários através das
folhas e raízes, os efeitos desses compostos nas
plantas próximas constituem o campo da
alelopatia, assim uma planta pode reduzir o
crescimento das plantas vizinhas e obtendo maior
chance de acesso à luz, água e aos nutrientes
proporcionando sua maior adaptação evolutiva.
Os isoflavonóides constituem um grupo de
flavonóides no qual a posição de um anel

aromático (anel B) está invertida, são
encontrados principalmente em leguminosas e
apresentam potente ação inseticida e outras
apresentam atividade antiestrogênica. Os
isoflavonóides apresentam uma ação
fitoalexinas, compostos antimicrobianos
sintetizados em resposta à infecção por fungos e
bactérias, podem limitar a propagação do
patógeno invasor, estes metabólicos secundários
se acumulam em torno do local de infecção.

No geral as fitoalexinas não estão presentes
nas plantas antes da infecção, são sintetizadas
muito rapidamente após o ataque do
microrganismo devido à ativação de novas rotas
biosintéticas. Embora as fitoalexinas acumulem-
se em concentrações tóxicas aos patógenos em
bioensaios, o significado desses compostos para a
defesa da planta intacta não é completamente
compreendido. (TAIZ et al., 2017).
Uma planta quanto sobrevive ao ataque de um
patógeno, muitas vezes apresenta um aumento na

sua resistência a ataques subsequentes em
qualquer outra região da planta e apresenta
proteção contra uma grande variedade de
espécies de patógenos, este fenômeno é chamado
de resistência sistêmica adquirida (SAR). (TAIZ
et al., 2017).
A ação dos aleloquímicos tem sido usada pelos
humanos como alternativa ao uso de inseticidas,
herbicidas e defensivos agrícolas. A maioria
dessas substâncias é originada do metabolismo
secundário, porque a competição das plantas por

nutrientes, durante toda a sua evolução,
promoveu o desenvolvimento de vias Biosintética
onde são produzidos e acumulados diversos
metabólitos secundários. Outro fator que
estimulou a produção dessas substâncias é o
consumo dos vegetais pela herbivoria ou até
mesmo insetos, vírus e bactérias, sendo uma
resposta defensiva contra esses organismos. É
importante que no ambiente esses aleloquímicos
tenham acúmulo em quantidade suficiente para
que possam afetar outros organismos,

principalmente outras plantas, mantendo-se
constante ou liberado continuamente, causando
efeitos persistentes. A quantidade de produtos
produzidos depende da espécie, constituição e
idade do tecido vegetal e intensidade de lavagem.
(FÁVERO; PAVAN, 1997).
1.2 Plantas medicinais

Na década de 90, a Organização Mundial de
Saúde (OMS) divulgou que 65-80% da população
dos países em desenvolvimento dependiam das
plantas medicinais como única forma de cuidado
básico da saúde. Mesmo com o avanço da
medicina, encontramos muitos registros de vários
procedimentos clínicos tradicionais utilizando
este recurso. Para a população carente que não
consegue ter acesso a procedimento clínicos
avançados, o único recurso possível é utilizar das

plantas medicinais. (VEIGA JUNIOR; PINTO,
2005).
As plantas medicinais têm sido um recurso
utilizado por várias populações, principalmente
as pessoas de baixa renda. Este tipo de planta é
comercializado em feiras livres, mercados
populares e encontradas em quintais residenciais.
As observações populares sobre o uso e a eficácia
deste recurso terapêutico, contribuem de forma
relevante para a divulgação destas virtudes, por
conta dos efeitos medicinais que produzem,

apesar de nem sempre terem seus constituintes
químicos conhecidos (MACIEL et al., 2002).
1.3 Jatobá-verdadeiro
O jatobá-verdadeiro (Hymenaea courbaril L.)
é uma árvore nativa do Brasil, pode atingir de
quinze a vinte metro de altura, de copa ampla e
densa, o tronco é próximo de um cilindro
podendo atingir um metro de diâmetro. As folhas
(Ilustração 1) compostas bifoliadas, de folíolos

coriáceos de seis a quatorze metros de
comprimento. Os frutos (Ilustração 1) são
legumes curtos indeiscentes de até treze
centímetros de comprimento, de cor marrom
escura, contendo de três a oito sementes de cor
marrom, envoltas por uma substância farinácea,
prefere solos argilosos e úmidos. (GRANDI,
2014).
Ilustração 1 - Fruto e folha do jatobá
Fonte: Grandi, 2014. p. 712
O jatobá-verdadeiro (Hymenaea courbaril L.)
é uma árvore da família das fabáceas. É uma
espécie arbórea que ocorre do Piauí ao norte do
Paraná na floresta semidecídua. Pouco exigente
em fertilidade e umidade do solo, geralmente
ocorre em terrenos bem drenados. Nas folhas,

sua forma do limbo é elíptica, ápice acuminado,
base redondeada, superfície glabra, folhas
compostas geminadas e sua filotaxia são opostas.
(CARVALHO FILHO et al., 2003).
Segundo Grandi (2014), na composição
química do jatobá temos terpenos e compostos
fenólicos com propriedades antimicrobianas,
antifúngicas, moluscicidas. Os compostos
químicos são ácido copálico, brasilcopálico,
flavonoides (astilbina, β-sitosterol, β-

bourboneno, αδ-cadineno, cariofileno, capaeno e
cubebeno). (GRANDI, 2014).
Segundo Branco (2016), o jatobá é
considerado para os indígenas latino-americano
como árvore sagrada, utilizada em rituais para
ajudar a clarificar, equilibrar e apaziguar a
mente. Além disto, o jatobá tem pequenas e
abundantes flores melíferas sendo um grande
atrativo para as abelhas nativas da espécie
Tetragonisca angustula, que produzem um mel
medicinal muito utilizado para problemas

respiratórios. A casca e as folhas do jatobá são
consideradas medicinais e possuem propriedades
terapêuticas que incluem ações adstringente,
antibacterianas, antifúngicas e anti-inflamatórias
com indicações para problemas respiratórios
como a asma, bronquite, rinite além dos
problemas gastrointestinais como úlceras,
gastrite, azia e refluxo e utilizada para cistites,
retenção hídrica e cálculo renal. (BRANCO,
2016).
A madeira possui alta durabilidade. A resina
de jatobá, conhecida como jutaicica, também
pode ser usada como remédio. Antigamente, em
tempos de guerra, as tribos indígenas usavam a
resina na ponta da flecha para atear fogo nas
casas dos inimigos. Além disso, o jatobazeiro
fornece fruto comestível (Fotografia 1).
(SHANLEY; MEDINA, 2005).

Fotografia 1 – Fruto de jatobá
A resina do jatobá é utilizada com incenso e
verniz, a casca é utilizada como chá para
tratamento de problemas respiratórios,
gastrointestinais, problemas urinários e cálculo
renal. A semente e fruto do jatobá é rico em
cálcio, fósforo, ferro, potássio, magnésio e

vitamina C, das sementes é tirado a farinha, rica
em amido com uso culinário em doçaria e
fabricação de pães e bolos diversos, as sementes
também pode ser usados em vitaminas de frutas
para organização mental e a purificação dos
sentimentos. (BRANCO, 2016).
1.4 Staphylococcus aureus
O Staphylococcus leva este nome pelo fato
dos cocos gram-positivos crescer em um padrão

que se assemelha a um cacho de uvas, a maioria
tem 0,5 a 1,5 μm de diâmetro, é imóvel e capaz de
crescer em uma variedade de condições, aeróbia
e anaeróbia, na presença de concentração
elevada de sal e em temperaturas que podem
variar entre 18 ºC a 40 ºC. Podem ser
encontradas na pele e nas membranas mucosas
dos seres humanos. (MURRAY; ROSENTHAL;
PFALLER, 2014).
O Staphylococcus aureus (Fotografia 2)
coloniza as narinas, é mais virulento e conhecido

do gênero, patogênicos sendo responsáveis por
um amplo espectro de doenças sistêmicas, de
gravidade considerável incluindo infecções da
pele, tecidos moles, ossos e trato urinários e
infecções oportunistas. Esta espécie é
caracterizada pela presença de coagulase,
proteína A e ribitol ácido teicoico espécie-
específico com resíduos de N-acetil glicosamina
(polissacarídeo A). A transmissão pessoa a
pessoa através de contato direto ou exposição a

fômites contaminados. (MURRAY;
ROSENTHAL; PFALLER, 2014).
Fotografia 2 – Staphylococcus aureus
Fonte: Tortora; Funke; Case, 2012. p. 318
1.5 Escherichia coli

A Escherichia coli (Fotografia 3) é o mais
comum e importante membro do gênero
Escherichia, esta bactéria está associada a
gastroenterite e infecções extra intestinais, são
bacilos gram-negativos, anaeróbios facultativos
mais comum no trato gastrointestinal,
fermentadores e oxidase-negativos. A maioria das
infecções é endógena (microbiota normal do
paciente), embora as que causam gastrenterite
sejam geralmente adquiridas exogenamente.
(MURRAY; ROSENTHAL; PFALLER, 2014).

Fotografia 3 - Escherichia coli
Fonte: Tortora; Funke; Case, 2012. p. 276
As bactérias do gênero Escherichia coli são
habitantes normais do intestino grosso dos
vertebrados, incluindo humanos, e sua presença

é benéfica, pois ajuda na produção de certas
vitaminas e participa da digestão de alimentos
que não seriam digeridos sem a sua presença.
Contudo, a linhagem chamada de E. coli
O157:H7 causa diarreia sanguinolenta quando
cresce no intestino. Essa linhagem foi
identificada em 1982 e, desde então, tem sido
tratada como um problema de saúde pública.
Atualmente, é uma das principais causas de
diarreia no mundo. Em 1996, cerca de 9.000
pessoas no Japão ficaram doentes e sete

morreram como resultado de uma infecção por
E. coli O157:H7. (TORTORA; FUNKE; CASE,
2012).
1.6 Pseudomonas aeruginosa
A Pseudomonas aeruginosa (Fotografia 4) é
um bacilo gram-negativo pequeno, não
fermentador, arranjado tipicamente aos pares,
relacionado aos patogênicos oportunistas de
plantas, animais e seres humanos, são aeróbicos

obrigatórios, oxidantes da glicose, necessidades
nutricionais simples com cápsula polissacarídica
mucoide. Doenças incluem infecções do trato
respiratório, trato urinário, pele e tecidos moles,
olhos, ouvidos, bem como bacteremia e
endocardite. Podem colonizar transitoriamente os
tratos respiratórios e gastrointestinal de pacientes
hospitalizados, particularmente aqueles tratados
com antibióticos de amplo espectro, expostos a
equipamentos de terapia respiratório ou

hospitalizados por longos períodos. (MURRAY;
ROSENTHAL; PFALLER, 2014).
Fotografia 4 - Pseudomonas aeruginosa
Fonte: Murray; Rosenthal; Pfaller, 2014. p. 511
Pseudomonas aeruginosa é um dos principais
agentes de infecção nosocomial em hospitais

brasileiros, onde diversos estudos têm associado
sua presença a uma disseminação clonal da
espécie. A importância clínica da infecção por P.
aeruginosa caracteriza-se pela expressão de
múltipla resistência a antibacterianos, associada
a uma difícil erradicação da doença,
consequentemente com elevados índices de
morbidade e mortalidade. Esse microrganismo
pode apresentar resistência natural ou adquirida
a grande número de antibióticos utilizados na
prática clínica. O intercâmbio de material

genético, que ocorre de forma natural intra ou
interespécies entre os bacilos Gram-negativos, é
apontado como um dos responsáveis pela
aquisição de determinantes de resistência. Assim,
a capacidade que P. aeruginosa possui de
tornar-se resistente durante o tratamento ao
antibiótico é inerente à espécie e muitas vezes,
inevitável. (NEVES et al., 2011).
2 OBJETIVO
2.1 Objetivo geral
Identificar a capacidade de inibição dos
microrganismos Staphylococcus aureus,
Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, pelo
extrato das folhas do Hymenaea courbaril e
testar sua capacidade de inibição de sementes de
alface crespa, alface Hanson, beterraba
maravilha, cenoura Nantes e rúcula cultivada.

2.2 Objetivos específicos
 Observar a presença de substâncias antibióticas
nas folhas do Hymenaea courbaril através da
inibição dos microrganismos Staphylococcus
aureus, Escherichia coli e Pseudomonas
aeruginosa.
 Verificar a concentração do extrato mais eficaz
para essa inibição nos microrganismos testados.
 Obter informações sobre a alelopatia da planta,
analisando a germinação de sementes das

espécies indicadoras Lactuca sativa var. crispa
(alface crespa), Lactuca sativa var. capitata
(alface Hanson), Beta vulgaris (beterraba
maravilha), Daucus carota (cenoura Nantes) e
Eruca sativa (rúcula cultivada).

3 MATERIAL E MÉTODOS
Trabalho de pesquisa experimental, utilizando
uma determinada amostra de folhas de uma
árvore de Jatobá localizada no campus do colégio
da Fundação Santo André para observar a
atividade alelopática e inibitória do crescimento
bacteriano, de forma quantitativa e qualitativa.

3.1 Material botânico
Foi realizado coletas das folhas de Hymenaea
courbaril (Fotografia 5) de um espécime
localizado no prédio Colégio (Fotografia 6),
dentro do Centro Universitário Fundação Santo
André, onde também foi realizado a pesquisa, no
laboratório de microbiologia e no laboratório de
botânica do Centro Universitário Fundação
Santo André, SP.

Fotografia 5 - Folha e fruto de Jatobá do
Colégio da Fundação Santo André

Fotografia 6 - Árvore de Jatobá do Colégio
Fundação Santo André
3.2 Extrato da planta
Para obtenção do extrato, foi retirado folhas
no centro do galho da árvore. Em seguida, as
folhas são lavadas em água destilada para
eliminação de resíduos que podem influenciar

nos testes, depois estas folhas são secas e pesadas
(Fotografia 7).
Fotografia 7 - Folhas de jatobá depois da
lavagem e sendo secas
São utilizadas 100 gramas das folhas frescas
em 400 mL de água destilada, obtendo-se uma
concentração de 0,25g de folhas/mL. Com o

auxílio de um liquidificador, as folhas são
trituradas durante dez minutos com 400 mL de
água destilada e adiciona-se 2,4 mg de ácido
ascórbico, obtendo-se uma concentração de
vitamina C igual a 0,006 mg/mL. A adição de
ácido ascórbico evita a oxidação das folhas no
processo de trituração; essa oxidação libera
compostos fenólicos que interferem na
germinação das sementes, o que pode afetar os
resultados. Depois o extrato passa por um
processo de filtragem, passando por peneira

(Fotografia 8), gaze (Fotografia 9), filtro
qualitativo com bomba a vácuo (Fotografia 10) e
membrana filtrante, com poro de 0,45 μm,
também em bomba de vácuo, para esterilização
(Fotografia 11). O extrato é, então,
acondicionado em frascos de cor âmbar e
mantido congelados até o uso para os biotestes.

Fotografia 8 – Filtragem pela peneira
Fotografia 9 - Filtragem por gaze

Fotografia 10 - Filtragem por filtro qualitativo
Fotografia 11 - Filtragem com poro de 0,45 μm
3.3 Teste de esterilidade do extrato, salina 0,9% e
água destilada
Para a validação dos resultados obtidos é
necessário a confirmação de que não há fatores

que possam interferir com os resultados. Nesse
caso é necessário que as amostras do extrato de
Jatobá, de salina 0,9% e de água destilada esteja
estéreis. Para isso, uma placa de Petri contendo
ágar nutriente é dividida em quatro setores,
conforme o desenho 1.
Desenho 1 – Placa dividida em 4 setores para o
teste de esterilidade
CN-E = Controle negativo –
Extrato. Nesse setor, é semeado

o extrato das folhas de jatobá,
utilizando uma alça de
inoculação.
CN-M = Controle negativo –
Meio. Esse setor serve para o
controle da esterilidade do meio
de cultura.
CN-S = Controle negativo –
Salina Nesse setor, é semeada a
solução salina (NaCl 0,9%),
utilizando uma alça de

inoculação. CN-A = Controle
negativo – Água destilada. Nesse
setor, é semeada a água
destilada, utilizando uma alça de
inoculação.
Após a semeadura, a placa é incubada a 37ºC
por 24 horas. A seguir, é observado se a placa de
Petri não apresenta contaminação.
3.4 Teste de alelopatia

Foram realizadas testes semanais, cada um
com dez placas de Petri, sendo elas: cinco com
sementes irrigadas com três mL de água
destilada, sendo uma placa para cada espécie de
semente; cinco com sementes irrigadas com três
mL de extrato, sendo uma placa para cada
espécie de semente. Na base de cada placa, é
colocado o papel filtro e sobre o papel são
colocadas 30 sementes (Fotografia 12).

Fotografia 12 - Teste de alelopatia
Após a irrigação com água ou extrato, as
placas são mantidas em estufa a 37º com
iluminação artificial da própria estufa
(Fotografia 13). Após uma semana, é registrado
o número de sementes germinaram.

Fotografia 13 - Estufa com iluminação artificial
Para calcular a porcentagem de germinação,
foram comparadas quantidades de sementes que
germinaram na presença do extrato e das
sementes que germinaram na presença de água
destilada.
Para calcular a porcentagem de inibição da
germinação, foram contadas quantas sementes
foram semeadas (160 de cada espécie) e quantas
germinaram, tanto para as placas com água
destilada como para as placas com extrato, sendo
aplicada a fórmula a seguir.
Número de sementes germinadas comextrato de jatobá

%Inibição=100− ∙ 100
Número de sementes germinadas comágua destilada
3.5 Teste de viabilidade das bactérias
As bactérias Staphylococcus aureus,
Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa são
obtidas da bacterioteca, do Centro Universitário
Fundação Santo André, no laboratório de
biologia/microbiologia. Foram utilizadas as
amostras bacterianas discriminadas no quadro 1.
Quadro 1 - Microrganismos e seu número ATCC
MICRORGAN ATCC OBSERVAÇÕ

ISMO ES
Staphylococcu S018 Coco gram +
s aureus
Escherichia E004 Bacilo gram -
coli
Pseudomonas NEWP 0053 Bacilo gram -
aeruginosa
As bactérias são semeadas separadamente, em 5
mL de caldo nutriente e incubadas a 37ºC por 24
horas. A seguir, as culturas em caldo nutriente
são semeadas em uma placa de Petri contendo
ágar nutriente, com auxílio de uma alça de

inoculação. A placa é incubada a 37ºC por 24
horas, para o teste de viabilidade das bactérias.
3.6 Teste de inibição bacteriana
Após a semeadura das placas de ágar
nutriente com as três bactérias em estudo, para o
teste de viabilidade, foi realizado o teste de
inibição bacteriana. Para isso, alíquotas de 2 mL
de extrato de folha de jatobá estéril foram
pipetadas em 3 tubos de ensaio contendo 2 mL de

caldo nutriente estéril. A seguir, as culturas 24 h
a 37 oC em caldo nutriente de Staphylococcus
aureus, Escherichia coli e Pseudomonas
aeruginosa foram semeadas com auxílio de uma
alça de inoculação de 10 uL, sendo repicada uma
alçada de cada cultura em cada um dos três
tubos. O controle foi realizado da mesma
maneira, mas substituindo o extrato de folha de
jatobá por 2 mL de salina estéril. Foi preparado,
também, mais um tubo controle, contendo extrato
de jatobá. Os sete tubos foram incubados a 37oC,

por 24h. Após esse período, foi verificada a
presença de turvação nos tubos.
3.7 Contagem de unidades formadoras de
colônias - UFC
Para contar as unidades formadoras de
colônias (UFC) foram feitas diluições seriadas
das culturas em caldo (tubos teste e tubos
controle) da seguinte maneira: uma alíquota de
100 μL de cada cultura foi transferida para um

tubo eppendorf contendo 900 μL de solução
salina estéril, obtendo-se uma diluição de 1/10
(10-1). Após homogenização, uma alíquota da
diluição 1/10 foi transferida para um segundo
tubo eppendorf, contendo 900 μL de salina
estéril, obtendo-se a diluição de 1/100 (10-2). E
assim sucessivamente até o 10º eppendorf,
quando a diluição foi de 10-10 (Fotografia 14).

Fotografia 14- Eppendorf com a diluição seriada
Alíquotas de 100 μL das diluições 10-6, 10-7,
10-8, 10-9 e 10-10 dos tubos teste e tubos controle
foram plaqueadas, com auxílio de uma alça de
Drigalski, em placas contendo ágar nutriente
(Fotografia 15). As placas foram incubadas a

37ºC, por 24h. Após a incubação, foi realizada a
contagem de colônias.
Fotografia 15 - Plaqueamento
3.8 Quantificação de inibição do crescimento
bacteriano
Após o teste de inibição, os tubos contendo
extrato bruto foram utilizados para montagem de
uma diluição seriada com a finalidade de contar
o número de Unidades Formadoras de Colônias
(UFC) em cada amostra e compará-las com o
número de UFC da amostra com salina para
quantificar o grau de inibição.

O cálculo da porcentagem de inibição do
crescimento bacteriano será feito utilizando a
seguinte fórmula:
Número de colônias crescidas emextrato

% de inibição=100− ∙ 100
Número de colônias crescidas emsolução salina
Para a contagem das colônias foi utilizado o
contador de colônias (Fotografia 16) para obter
uma melhor precisão na quantidade de colônias.

Fotografia 16 - Contador de colônias
4 RESULTADOS E DISCUSSÃO
4.1 Teste de esterilidade do extrato, salina 0,9% e
água destilada
Observando a placa de teste de esterilidade,
podemos contatar que não houve crescimento de
qualquer tipo de colônia microbiana na placa,
comprovante a esterilidade do extrato, salina
0,9% e água destilada (Fotografia 17).

Fotografia 17 - Teste de esterilidade do extrato,
salina 0,9% e água destilada.
4.2 Teste de alelopatia

Os resultados do teste alelopático mostraram
que houve inibição da germinação das sementes
das espécies indicadoras de rúcula cultivada
(Fotografia 18), cenoura Nantes (Fotografia 19),
alface Hanson (Fotografia 20) e alface crespa
(Fotografia 21), porém a beterraba maravilha
(Fotografia 22) houve estimulou para seu
crescimento. Para verificar a porcentagem exata
do potencial alelopático da Hymenaea courbaril
L., foi feita uma análise estatística, no qual

foram contadas quantas sementes germinaram
em cada placa.
Fotografia 18 - Sementes de rúcula cultivada
germinada em água destilada e extrato de jatobá

Fotografia 19 - Sementes de cenoura Nantes

Fotografia 20 - Sementes de alface Hanson

Fotografia 21 - Sementes de alface crespa

Fotografia 22 - Sementes de beterraba
maravilha germinada em água destilada e extrato
de jatobá
Os dados obtidos foram aplicados em uma
fórmula que resultou na porcentagem de inibição
em cada espécie testada. Esses dados foram
dispostos em tabelas (Tabela 1 a Tabela 5) e em

gráfico (Gráfico 1) para uma melhor visualização
dos resultados.
Tabela 1 - Acompanhamento geral do teste de
germinação com sementes de alface crespa
Semente
Semente %
Semen s
Data de s Inibiçã
tes germina
semeaçã germina o da
semea das com
o das com germin
das água
extrato ação
destilada
11/10/20
19 10 06 00
10/03/20 30 11 05
20
17/03/20
20 30 18 10
02/09/20
20 30 30 25
09/09/20
20 30 30 24
01/10/20
20 30 15 26
Total 160 110 90
%
germina
ção 68,75% 56,25% 18,18%

germinação com sementes de alface Hanson
Semente
Semente %
Semen s
Data de s Inibiçã
tes germina
semea das com
o das com germin
das água
extrato ação
destilada
11/10/20
19 10 10 01
10/03/20
20 30 28 15
17/03/20 30 28 27
20
02/09/20
20 30 28 30
09/09/20
20 30 30 30
01/10/20
20 30 29 25
08/10/20
20 30 23 12
Total 190 176 140
%
germina
ção 92,63% 73,68% 20,45%

germinação com sementes de cenoura Nantes
Semente
Semente %
Semen s
Data de s Inibiçã
tes germina
semea das com
o das com germin
das água
extrato ação
destilada
11/10/20
19 10 00 00
10/03/20
20 30 17 03
17/03/20 30 22 11
20
19/08/20
20 30 12 11
02/09/20
20 30 30 10
09/09/20
20 30 28 06
01/10/20
20 30 26 06
08/10/20
20 30 29 13
Total 220 164 60
%
germina
ção 74,55% 27,27% 63,41%

germinação com sementes de rúcula cultivada
Semente
Semente %
Semen s
Data de s Inibiçã
tes germina
semea das com
o das com germin
das água
extrato ação
destilada
11/10/20
19 10 09 00
10/03/20
20 30 29 05
17/03/20
20 30 26 13
02/09/20
20 30 27 02
09/09/20
20 30 30 04
01/10/20
20 30 26 06
08/10/20
20 30 24 13
Total 190 171 43
% 90% 22,63% 74,85%
germina
ção
germinação com sementes de beterraba
maravilha
Semente
Semente %
Semen s
Data de s Estimul
tes germina
semeaçã germina ação da
semea das com
o das com germina
das água
extrato ção
destilada
11/10/20 10 07 04
19
10/03/20
20 30 12 19
17/03/20
20 30 25 24
19/08/20
20 30 19 20
02/09/20
20 30 07 27
09/09/20
20 30 15 21
01/10/20
20 30 10 10
08/10/20
20 30 08 19
Total 220 103 144
%
germinaç
ão 46,82% 65,45% 28,47%
No caso das sementes de beterraba maravilha,
como ocorreu um estímulo à germinação das
sementes, foi utilizada a seguinte fórmula para
calcular a porcentagem desse estímulo:
Número de sementes germinadas emágua destilada

% de estimulo de germinação=100− ∙ 100
Número de sementes germinadas em extrato de jatobá
Gráfico 1 - Porcentagem de germinação das
sementes no extrato e água destilada

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Alface crespa Alface Hanson Beterraba Cenoura Nantes Rúcula cultivada
maravilha
Extrato de Jatobá Água destilada
Analisando o gráfico e as tabelas, verifica-se
que o extrato conseguiu inibir a germinação das
sementes cenoura Nantes em 63,41% e rúcula
cultivada em 74,85%. Já frente às sementes de
alface Hanson a inibição do extrato foi de
20,45% e em sementes de alface crespa foi de

18,18%. A germinação das sementes de beterraba
maravilha não foram inibidas pelo extrato das
folhas e sim estimulada em 28,47%.
Nos testes realizados por Goltara e Negrão
(2018) sobre alelopatia com Coffea arabica L.
teve inibição de germinação de 65,40% com
alface e 36,23% com rúcula, tendo maior efeito
com as sementes de alface. Comparando com os
testes realizados com Hymenaea courbaril L.,
apresentou 18,18% de inibição com a alface, uma
inibição menor comparando com Coffea arabica

L. e 74,85% de inibição com a rúcula, uma
inibição maior comparando com a Coffea
arabica L. (GOLTARA; NEGRÃO, 2018).
Os testes de Januário (2017) sobre alelopatia
com Pinus elliottii Engelm teve inibição de
germinação de 70% com alface e 100% com
rúcula, tendo maior efeito com sementes de
rúcula. Comparando com os testes realizados
com Hymenaea courbaril L., apresentou 18,18%
de inibição com a alface, uma inibição bem
menor comparando com Pinus elliottii Engelm e

74,85%, uma inibição bem menor comparando
com Pinus elliottii Engelm. (JANUÁRIO, 2017).
Nos testes realizados por Silva (2016) sobre
alelopatia com Archontophoenix alexandrae ela
apresentou 37,65% de germinação para alface e
-1,61% de germinação para rúcula. Comparando
com os testes realizados com Hymenaea courbaril
L., apresentou 18,18% de inibição com a alface
resultado maior comparando com o resultado
obtido com e Archontophoenix alexandrae e
74,85% de inibição com a rúcula um maior

resultado do que com Archontophoenix
alexandrae (SILVA, 2016).
4.3 Teste de viabilidade das bactérias
Observando a placa de teste de viabilidade
(Fotografia 23 a 25) podemos constatar que as
cepas eram viáveis.

Fotografia 23 – Teste de viabilidade da
Escherichia coli
Fotografia 24 - Teste de viabilidade de
Staphylococcus aureus
Fotografia 25 – Teste de viabilidade da
Pseudomonas aeruginosa
4.4 Teste de inibição bacteriana
Observando os tubos de ensaio com extrato
(Fotografia 26) e tubos de ensaio com salina

0,9% (Fotografia 27) podemos ver a turvação no
extrato e na salina.
Fotografia 26 - Tubos de ensaio com extrato

Fotografia 27 - Tubos de ensaio com salina 0,9%
4.5 Quantificação de inibição
O teste de inibição bacteriana mostrou que
não houve inibição do crescimento de

Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e
Staphylococcus aureus, e sim, estímulo ao
crescimento bacteriano. Para a contagem de
colônias, foi realizada a diluição seriada dos
tubos e depois o Plaqueamento, após 24 horas foi
contado o número de colônias que cresceram na
placa (Fotografia 28 a 33).
Para o cálculo das taxas de estímulo ao
crescimento bacteriano, foi utilizada a fórmula a
seguir:
Número de colônias crescidas em solução salina
% de estímulo=100− ∙100
Número de colônias crescidas emextrato de jatobá
Fotografia 28 - Placas de Escherichia coli e
extrato
Fotografia 29 - Placas de Escherichia coli e
salina
Fotografia 30 - Placas de Pseudomonas
aeruginosa e extrato
Fotografia 31 - Placas de Pseudomonas
aeruginosa e salina
Fotografia 32 - Placa de Staphylococcus aureus
e extrato
Fotografia 33 - Placa de Staphylococcus aureus
e salina
Os dados foram dispostos em tabelas (Tabela
6 a Tabela 8) em gráfico (Gráfico 2) para uma
melhor visualização dos resultados.

inibição com Escherichia coli.
% de
Número
Número Estímulo
de
de ao
Diluiç colônia
Data colônias crescimen
ão s na
no to
salina
extrato bacterian
0,9%
o
01/10/20 03 243 98,77%
−10
10
20
inibição com Pseudomonas aeruginosa.
% de
Númer
Númer Estímulo
o de
o de ao
Diluiç colônia
Data colônia crescimen
ão s na
s no to
salina
extrato bacterian
0,9%
o
17/09/202 95 353
−6
10
0
17/09/202 10−7
82 268
0
17/09/202 10−8
91 157
0
17/09/202 10−9
22 147
0
17/09/202 10−10
27 138
0
Média: 63 213 70,43%
inibição com Staphylococcus aureus.
% de
Número
Número Estímulo
de
de ao
Diluiç colônia
Data colônias crescimen
ão s na
no to
salina
extrato bacterian
0,9%
o
01/10/20
−6
10
20 21 196
01/10/20 10−7
20 15 173
01/10/20
−8
10
20 14 247
01/10/20
−9
10
20 04 116
01/10/20
−10
10
20 04 86
Média: 12 164 92,7%
Gráfico 2 - Número de colônias em salina 0,9% e
extrato de jatobá.
300
250
200
150
100
50
0
Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus
Número de colônias na salina 0,9% Número de colônias no extrato de jatobá
Analisando o gráfico e as tabelas, pode-se
observar que o extrato não conseguiu inibir a
Escherichia coli pois na diluição 1010 de E. coli
cultivada em caldo nutriente e salina apenas 03

colônias se desenvolveram, enquanto na mesma
diluição da E. coli cultivada em caldo nutriente e
extrato de jatobá ocorreu o desenvolvimento de
243 colônias, ou seja, o extrato de jatobá
estimulou o desenvolvimento das colônias
bacterianas e não a sua inibição, podemos
também observar que o extrato não conseguiu
inibir Pseudomonas aeruginosa pois a média
cultivada em caldo nutriente e salina foi apenas
63 colônias enquanto na mesma diluição de P.
aeruginosa cultivada em caldo nutriente e

em média 213 colônias, ou seja, o extrato de
jatobá estimulou o desenvolvimento das colônias
bacterianas e não a sua inibição, o mesmo
acontece com a Staphylococcus aureus pois a
média cultivada em caldo nutriente e salina foi
apenas 12 colônias enquanto na mesma diluição
de S. aureus cultivada em caldo nutriente e
em média 164 colônias, ou seja, o extrato de
jatobá estimulou o desenvolvimento das colônias

bacterianas e não a sua inibição, isto demonstra
que existe uma possibilidade do extrato de jatobá
possui componentes nutritivos que servem como
nutrientes paras as bactérias.
Nos testes realizados por Silva e Souza (2018)
sobre inibição utilizando Allium cepa L. Pera
(cebola pera) teve inibição de 100% frente à
Staphylococcus aureus e 78% frente a
Escherichia coli e na Allium cepa L. Roxa
(cebola roxa) apresentou 93% de inibição frente

a Staphylococcus aureus e 42% na Escherichia
coli. Comparando com os testes realizados com
Hymenaea courbaril L. apresentou -1266,67% de
inibição, bem menor comparado com Allium
cepa L. Pera e Allium cepa L. Roxa e -8000% de
inibição, bem menor comparado com Allium
cepa L. Pera e Allium cepa L. (SILVA; SOUZA,
2018).
Os testes de Januário (2017) sobre inibição
utilizando Pinus elliottiiEngelm teve inibição de
11,2% frente à Escherichia coli e 97,9% de

inibição frente a Staphylococcus aureus.
Comparando com os testes realizados com
Hymenaea courbaril L. apresentou -1266,67% de
inibição, bem menor comparado com Pinus
elliottiiEngelm e -8000% de inibição, bem menor
comparado com Pinus elliottiiEngelm.
(JANUÁRIO, 2017).
Nos testes realizados por Goltara e Negrão
(2018) sobre inibição utilizando Coffea arabica
L. teve porcentagem de inibição de 50,38% frente
a Escherichia coli e 29,27 frente a

Staphylococcus aureus. Comparando com os
testes realizados com Hymenaea courbaril L.
apresentou -1266,67% de inibição, bem menor
comparado com Coffea arabica L. e -8000% de
inibição, bem menor comparado com Coffea
arabica L. (GOLTARA; NEGRÃO, 2018).

5 CONSIDERAÇÕES FINAIS
O extrato das folhas de Hymenaea courbaril
L. apresentou potencial alelopático, inibindo a
germinação das sementes das espécies
indicadoras Daucus carota (cenoura) e Eruca
sativa (rúcula cultivada), porém em relação a
Lactuca sativa var. crispa (alface crespa) e

Lactuca sativa var. capitata (alface Hanson) não
apresentou tanto potencial comprando com a
Daucus carota e Eruca sativa. A Beta vulgaris
(beterraba maravilha) não apresentou potencial
alelopático, ao contrário houve um grande
estímulo em sua germinação fazendo com que
crescesse mais sementes no extrato de Hymenaea
courbaril L.
O contato do extrato das folhas de Hymenaea
courbaril L. com as bactérias Escherichia coli,
Staphylococcus aureus e Pseudomonas

aeruginosa não apresentou inibição, nos teste de
inibição as bactérias cresceram bem mais neste
contato com o extrato do que em relação a salina
0,9%, demostrando que não houve inibição.

REFERÊNCIAS
BRANCO, Alice. Jatobá: Árvore nativa,
medicinal. Uso da casca e das sementes. 2016.
Disponível em:
https://www.greenme.com.br/remedios-
caseiros/4519-jatoba-arvore-nativa-medicinal-
uso-da-casca-e-das-sementes/. Acesso em: 27 out.
2018
CARVALHO FILHO, José Luiz Sandes de;
ARRIGONI-BLANK, Maria de Fátima; BLANK,
Arie Fitzgerald; RANGEL, Maria Salete Alves.
Produção de mudas de jatobá (Hymenaea
courbaril L.) em diferentes ambientes, recipientes
e composições de substratos. Cerne, Lavras, v. 9,
n. 1, p. 109-118, jan. 2003.
FÁVERO, Oriana A.; PAVAN, Sandra. Botânica
Econômica. São Paulo: Catálise, 1997.

GOLTARA, Laura Massarelli; NEGRÃO, Pedro
Antunes. Atividade alelopática do extrato de
Coffea arabica L. e análise de interação frente a
Escherichia coli e Staphylococcus aureus. 2018.
43 f. Trabalho de Conclusão de Curso
(Graduação em ciências biológicas) - Centro
Universitário Fundação Santo André, Santo
André, 2018.
GRANDI, Telma Sueli Mesquita. Tratado das
plantas medicinais: minerais, nativas e

cultivadas. Belo Horizonte: Adaequatio Estúdio,
2014. 1204 p.
JANUÁRIO, Suelen Regina. Atividade
alelopática da espécie Pinus elliottiiEngelm.
Sobre sementes de rúcula e alface e ação
bactericida. 2017. 40 f. Trabalho de Conclusão de
Curso (Graduação em ciências biológicas) -
Centro Universitário Fundação Santo André,
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LOPES, Sônia. Bio: volume único. São Paulo:
Saraiva, 2004. 606 p.
MACIEL, Maria Aparecida M.; PINTO, Angelo
C.; VEIGA JUNIOR, Valdir F.. Plantas
medicinais: a necessidade de estudos
multidisciplinares. Química Nova, Rio de
Janeiro, v. 25, n. 3, p. 429-438, 25 jul. 2002.

MURRAY, Patrick R.; ROSENTHAL, Ken S.;
PFALLER, Michael A.. Microbiologia Médica.
7. ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2014. 1694 p.
NEVES, Patrícia R.; MAMIZUKA, Elsa M.;
LEVY, Carlos E.; LINCOPAN, Nilton.
Pseudomonas aeruginosa multirresistente: um
problema endêmico no Brasil. Jornal Brasileiro
de Patologia e Medicina Laboratorial. Catete,
Rio de Janeiro, p. 409-420. 20 ago. 2011.

SHANLEY, Patricia; MEDINA,
Gabriel. Frutíferas e Plantas Úteis na Vida
Amazônica. Belém: Cifor, 2005. 300 p.

5 - Relatório Científico

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5 - Relatório Científico

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CENTRO UNIVERSITÁRIO FUNDAÇÃO

JULIA PURCINELLI MELO COSTA

TAUANE KETHELEEN DA CUNHA SOUZA

THYAGO BORELLA FERREIRA

DE Hymenaea courbaril L. E ANÁLISE DE

INTERAÇÃO FRENTE À Staphylococcus

aureus, Escherichia coli E Pseudomonas

1.1 Metabólicos secundários em vegetais

fotossintetizantes, multicelulares, com

diferenciação de tecidos. Além disto, acreditasse

que as plantas terrestres tenham surgido de um

grupo ancestral de algas verdes, por conta da

existência de várias características que as

aproximam, como presença de parede celular

composta principalmente por celulose e a

existência de clorofilas a e b. Na passagem

evolutiva das algas verdes para as plantas

terrestres, surgiram algumas características que

revelaram adaptativas à vida no ambiente

terrestre, possibilitando a expansão das plantas

nesse ambiente. (LOPES, 2004).

Os metabólitos primários são compostos

responsáveis pelo crescimento e no

desenvolvimento dos vegetais, isto inclui

açúcares, aminoácidos, ácidos graxos, lipídeos e

nucleotídeos, proteínas, polissacarídeos,

membranas, DNA e RNA. Os metabólitos

primários são compostos que todas as plantas

que são altamente espécie-específico. (TAIZ et

Os vegetais produzem grande variedade de

compostos orgânicos que não apresentam função

direta no crescimento e desenvolvimento da

planta. Estas substâncias são chamadas de

metabólitos secundários e podem ser restritas a

uma espécie vegetal ou grupo de espécies. Estes

produtos metabólicos secundários protegem as

plantas contra os herbivoria e infecção por

atrair animais polinizadores e como agentes na

competição planta-planta. Estes metabólicos

secundários podem ser divididos em três grupos

quimicamente distintos: terpenos, compostos

fenólicos e compostos nitrogenados. (TAIZ;

As plantas produzem grande quantidade de

compostos fenólicos e por conta disto apresenta

uma variedade de funções nos vegetais. Muitos

agem como compostos de defesa contra

crescimento de plantas competidoras adjacentes.

Duas rotas metabólicas básicas estão envolvidas

na síntese dos compostos fenólicos: a rota do

ácido chiquímico que participa na biossíntese da

maioria dos fenóis vegetais e a rota do ácido

malônico é uma fonte importante de produtos

secundários fenólicos em fungos e bactérias.

(TAIZ; ZEIGER, 2006).

metabólicos primários e secundários através das

folhas e raízes, os efeitos desses compostos nas

plantas próximas constituem o campo da

alelopatia, assim uma planta pode reduzir o

crescimento das plantas vizinhas e obtendo maior

chance de acesso à luz, água e aos nutrientes

proporcionando sua maior adaptação evolutiva.

(TAIZ; ZEIGER, 2006).

Os isoflavonóides constituem um grupo de