23/10/2021 06:45 Novas técnicas de melhoramento de plantas para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: uma revisão

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Culturas e alimentos GM
Biotecnologia na Agricultura e na Cadeia Alimentar

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Novas técnicas de melhoramento de plantas para avançar

eficiência do uso de nitrogênio no arroz: uma revisão

Sajid Fiaz, Xiukang Wang, Sher Aslam Khan, Sunny Ahmar, Mehmood Ali
Noor, Aamir Riaz, Kazim Ali, Farhat Abbas, Freddy Mora-Poblete, Carlos R.
Figueroa e Badr Alharthi

Para citar este artigo: Sajid Fiaz, Xiukang Wang, Sher Aslam Khan, Sunny Ahmar, Mehmood Ali
Noor, Aamir Riaz, Kazim Ali, Farhat Abbas, Freddy Mora-Poblete, Carlos R. Figueroa e Badr
Alharthi (2021): Novas técnicas de melhoramento de plantas para promover a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: A
revisão, GM Crops & Food, DOI: 10.1080 / 21645698.2021.1921545

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CULTURAS E ALIMENTOS GM
https://doi.org/10.1080/21645698.2021.1921545

REVEJA

Novas técnicas de melhoramento de plantas para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: A
Reveja
Sajid Fiaz uma, Xiukang Wang b , Sher Aslam Khan a, Sunny Ahmar c , Mehmood Ali Noord , Aamir Riaze , Kazim Alif,
Farhat Abbasg, Freddy Mora-Poblete c , Carlos R. Figueroa c , e Badr Alharthi h, i

Departamento de Melhoramento de Plantas e Genética, Universidade de Haripur 22620, Khyber, Pakhtunkhwa, Paquistão; b Faculdade de Ciências da Vida, Yan'an
um

Universidade, Yan'an, Shaanxi, China; c Instituto de Ciências Biológicas, Campus Talca, Universidad deTalca, Talca, Chile; d Institute of Crop Sciences,
Academia Chinesa de Ciências Agrícolas, Laboratório Principal de Fisiologia e Ecologia de Culturas, Ministério da Agricultura, Pequim, China; e chave de estado
Laboratório de Biologia do Arroz, Instituto Nacional de Pesquisa do Arroz da China, Hangzhou, Zhejiang, China; f Instituto Nacional de Genômica e Avançada
Biotecnologia, Centro Nacional de Pesquisa Agrícola, Islamabad, Paquistão; g Centro de Pesquisa de Plantas Ornamentais, Faculdade Florestal e
Arquitetura paisagística, South China Agricultural University, Guangzhou, China; h College of Khurma, Taif University, Taif, Arábia Saudita; eu faculdade
de Ciência e Engenharia, Flinders University, Adelaide, South Australia

RESUMO HISTORIA DO ARTIGO

Recentemente, houve um aumento notável na produção de arroz devido ao melhoramento genético Recebido em 25 de janeiro de 2021

e aumento da aplicação de fertilizantes sintéticos. Para a agricultura sustentável, há uma necessidade urgente de Revisado em 4 de abril de 2021
Aceito em 20 de abril de 2021
manter um equilíbrio entre lucratividade e custo de insumos. Para atender às demandas crescentes constantes de
comunidade agrícola, os pesquisadores estão utilizando todos os recursos disponíveis para identificar o uso de nutrientes PALAVRAS-CHAVE
germoplasma eficiente, mas com muito pouco sucesso. Portanto, é essencial compreender o sub- Revolução verde; sintético
mecanismo genético que controla a eficiência dos nutrientes, com a eficiência do uso do nitrogênio (NUE) fertilizantes; genoma
sendo o traço mais importante. Informações sobre fatores genéticos que controlam o nitrogênio (N) Engenharia; uso de recursos
transportadores, assimiladores e remobilizadores podem ajudar a identificar germoplasmas candidatos via alta eficiência; comida segura

tecnologias de transferência. Ensaios de campo em grande escala forneceram dados morfológicos, fisiológicos e
dados de características bioquímicas para a detecção de regiões genômicas que controlam NUE. Os aspectos funcionais
desses atributos são demorados, caros, trabalhosos e menos precisos. Portanto, o
aplicação de novas técnicas de melhoramento de plantas (NPBTs) com contexto para a engenharia do genoma
abriu novos caminhos de pesquisa para programas de melhoramento de safras. Mais recentemente, edição de genoma
tecnologias (GETs) passaram por um enorme desenvolvimento com várias versões do Cas9,
Cpf1, edição básica e principal. Esses GETs foram vigorosamente adaptados nas ciências das plantas para novos
desenvolvimento de traços para garantir a quantidade e qualidade dos alimentos. A edição da base foi aplicada com sucesso a
melhorar o NUE no arroz, demonstrando o potencial dos GETs para desenvolver germoplasmas com
eficiência no uso de recursos. NPBTs continuam a enfrentar contratempos regulatórios em alguns países devido a
edição do genoma sendo categorizada na mesma categoria que as culturas geneticamente modificadas (GM).
Portanto, é essencial envolver todas as partes interessadas em uma discussão detalhada sobre NPBTs e para
formular políticas uniformes que abordem questões de biossegurança, sociais, éticas e ambientais. No
revisão atual, discutimos o mecanismo genético de NUE e NPBTs para melhoria de safra
programas com provas de conceito, transgênicos e aplicação GET para o desenvolvimento de NUE
germplasmas e aspectos regulatórios de culturas editadas de genoma com orientações futuras, considerando
NUE.

1. Introdução da crescente população humana. 2 arroz

Nas últimas três décadas, a produção global de arroz a produção aumentou notavelmente durante e após
aumentou três vezes, apesar dos aumentos em o período da revolução verde devido ao desenvolvimento
restrições à produção de arroz e custos de insumos. Arroz de germoplasma de arroz com alta resposta a insumos. Contudo,
garante segurança alimentar e nutricional para mais de o germoplasma melhorado requer mais sintéticos
metade da população mundial.1 Como tal, arroz fertilizantes, pesticidas e um suprimento frequente de
exige um grande esforço para o desenvolvimento de alta água de gação. O nitrogênio (N) é um nutriente integral
rendimento, nutritivo, resiliente ao clima e recursos para o crescimento e desenvolvimento da planta. 3 N é principalmente
variedades de uso eficiente para atender às demandas calóricas encontrado em metabólitos fotossintéticos, proteínas e

CONTATO Sajid Fiaz sfiaz@uoh.edu.pk ; wangxiukang@yan.edu.cn Departamento de Melhoramento de Plantas e Genética, Universidade de Haripur 22620, Khyber,
Pakhtunkhwa, Paquistão; Faculdade de Ciências da Vida, Universidade Yan'an, Yan'an, Shaanxi, China
Este artigo foi corrigido com pequenas alterações. Essas mudanças não impactam o conteúdo acadêmico do artigo.
© 2021 O (s) autor (es). Publicado com licença pela Taylor & Francis Group, LLC.
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Figura 1. Ilustração que explica várias características essenciais para a identificação de genótipos NUE e diferentes OMIC S para o funcional
caracterização de genes que controlam NUE em arroz.

ácidos nucleicos e desempenha um papel fundamental no metabolismo no entanto,

atividades relacionadas ao crescimento.4 ,5 Cultural e agro-
práticas de gestão econômica podem ajudar a alcançar
utilização eficiente de fertilizantes nitrogenados. O uso de nitrogênio
eficiência (NUE) de vários agronomicamente importantes
safras tantas é de grande interesse para a academia e
pesquisar. NUE é baseado no benefício econômico
por unidade de aplicação de fertilizante N. Diversos
pesquisadores sugeriram definições para NUE;
e foi unanimemente aceito que
NUE é o resultado da eficiência de absorção de N (NUpE)
e eficiência de utilização de N (NUtE). 6–8 Melhorando
NUE melhora a economia da colheita, ou seja, a qualidade do grão,
rendimento e biomassa. 9 10 N é aplicado principalmente como
fertilizante sintético, enquanto uma porção menor é
tributado por leguminosas de grão a partir da fixação de nitrogênio.
As plantas absorvem N através de suas raízes na forma
de nitrato (NO 3 - ) ou amônio (NH 4 +) e é

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CULTURAS E ALIMENTOS GM 3

utilizado ativamente para completar os processos metabólicos. 11obtido. Além disso, NPBTs permitiram a
Sendo de natureza móvel, as perdas de N do solo são produção de plantas livres de transgene que são categorizadas
maior do que qualquer outro elemento; além disso, cortar tidas como culturas não geneticamente modificadas (GM). o
as espécies diferem em sua capacidade de absorção de N. Apesar plantas
do livres de transgene não contêm exógeno
influência positiva do N na produção e relacionada à produção genes e, portanto, escapar do estrito regulatório
componentes, as plantas podem absorver apenas 30-50% do estrutura das culturas GM. O extraordinário
fornecido N dependendo do tipo de solo, ambiente NPBTs com referência a GETs estão agora disponíveis
condição mental e população de plantas. Perda de 9 N e pode ser utilizado para várias melhorias de safra
do solo é causada por volatilização, desnitrificação, programas para garantir a segurança alimentar e nutricional
e lixiviação, acabando por poluir o ar e para a crescente população humana.
água 12-14 enquanto simultaneamente aumenta o Reconhecendo a importância do NUE e recente
custo de produção. 15 Foi relatado recentemente desenvolvimentos em NPBTs, oferecemos uma
que 24-39% do trigo, arroz, soja e milho revisão abrangente destacando os múltiplos
áreas de produção demonstraram estagnação ou fatores que influenciam o NUE e exploram como
colapso do rendimento.13, 16 Portanto, é fundamental para opti- compreensão irá melhorar nosso conhecimento do
aplicar fertilizante NUE ou melhorar a NUE da cultura utilidade de fatores genéticos para aumentar NUE por meio de
para alcançar alta produção ao mesmo tempo em que reduz vários GETs, com foco em como esses GETs podem
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poluição ambiental e custo de produção. ser aplicado para modificar genes para melhorar NUE em arroz.
Vários estudos desenvolveram germoplasmas com Além disso, informações detalhadas foram fornecidas
melhorou o NUE por meio do melhoramento clássico de plantas,nas políticas regulatórias para culturas editadas de genoma
técnicas moleculares e engenharia genética ao redor do mundo e direções futuras com
métodos. 17 Além disso, engenharia genética spective para NUE.
abordagens ainda não foram amplamente adotadas
em comparação com as técnicas de criação tradicionais para o
2 Mecanismo Genético para NUE
desenvolvimento de germoplasma com NUE melhorado. 15
A identificação de genótipos de arroz NUE requer uma análise detalhada
Avanços na seleção assistida por marcadores, biotecnologia
levantamento de diferentes morfológicos, fisiológicos, ferramentas lógicas e genômica ajudaram a revelar
e características bioquímicas, juntamente com que NUE é de natureza multigênica. Regiões genômicas
estudos genéticos baseados em várias --omics associados com NUE foram investigados em
aproximações18 (Fig. 1 ). Arabidopsis , arroz, milho e trigo.21-23 O agro-
A tecnologia de edição de genoma (GET) é confiável, atributos econômicos, ou seja, peso do grão, rendimento,
abordagem econômica e versátil que tem sido conteúdo tein e características NUE, a saber
amplamente adotado por pesquisadores de ciências vegetais. o Índice de colheita de N, teor de N do grão e
eficiência associada na geração de modificações genéticas N remobilização, são considerados indicadores
cátions para fenótipos desejáveis ​abriu novos para NUE em plantas. No arroz, quatro características quantitativas
avenidas de pesquisa.19 No entanto, planta tradicional loci (QTLs) responsáveis ​pelo teor de N de grãos têm
ferramentas de melhoramento e GETs clássicos têm sido incapazes
foram identificados, sendo dois para conteúdo de filmagem N
para atender às demandas de alta precisão, eficiência, nos cromossomos 8, 9 e 10, tanto em baixo quanto
e pontualidade, levando os pesquisadores a adaptar o romance níveis normais de N. Da mesma forma, dois QTLs controlando
técnicas de melhoramento de plantas (NPBTs). Esses NPBTs índice de colheita e um QTL para NUE fisiológica
incluem palins curtos agrupados regularmente intercalados nos cromossomos 5 e 7 foram identificados, respec-
repetições drômicas e proteína associada a CRISPR ativamente. No trigo, principais QTLs para raiz NUE, rebento
(CRISPR / Cas), CRISPR-CRISPR da Prevotella peso seco e rendimento de grãos foram identificados.24
e Francisella 1 (Cpf1), edição de base (BE), e Além disso, na cevada quinze QTLs influenciando NUE
edição principal (PE), e provou ser poderosa tem sido identificado. 25 Os resultados dos estudos por
ferramentas para modificar sequências genômicas com sucesso formados em diferentes culturas são um desafio para inter-
de forma simples e precisa. 20 O uso destes pret e inconsistente, exigindo, em última análise, maior
GETs de gás foram relatados em várias plantas de cultivo populações de plantas, a existência de diversidade genética,
onde os fenótipos desejáveis ​foram com sucesso e a realização de vários testes em crescimento

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4 S. FIAZ ET AL.

temporadas. 2 Além disso, os QTLs identificados devem ser 22 Mecanismos genéticos de assimilação de N
funcionalmente caracterizado para compreender sua chave
O NH 4 + incorporação em células vegetais é reduzida
funções associadas ao NUE. O mecanismo genético
a nitrito pela enzima nitrato redutase no
ismos de N transportadores, assimiladores e remobili-
citosol. 35 A partir daí, o nitrito é translocado para o
zers são discutidos em detalhes abaixo.
plastídios e cloroplastos, onde é então convertido
a amônio pela redutase de nitrito (NiR)
2.1 Mecanismos genéticos de transportadores de N enzima. Este amônio derivado de nitrato, ou
- aquele produzido por fotorrespiração ou aminoácido
N no solo está normalmente disponível na forma de NO 3
reciclagem, é geralmente assimilado nos plastídios por
sob condições aeróbicas ou como NH 4 + em uma inundação
- o ciclo da glutamato sintase ( GS / GOGAT ). 10 GS /
situação. Mecanicamente, essas duas formas (NO 3
GOGAT , uma enzima vital para a assimilação de N e
e NH 4 + ) são retirados do solo por especialistas
remobilização, tem duas isoformas, a saber GS1 ,
Transportadores de N envolvendo dois fenômenos fisiológicos
que é responsável pelo amônio primário
ena, ou seja, o sistema de transporte de alta afinidade
assimilação nas raízes ou re-assimilação de munição
(HATS) e sistema de transporte de baixa afinidade (LATS).
nium nas folhas, e GS2 , que regula a munição
O HATS funciona sob baixas concentrações de N (<250 μM)
assimilação de nio em cloroplastos. Entre os três
empregando o transportador de nitrato 2 ( NRT2 ) e
Os membros GS em arroz, OsGS1.1 e OsGS1.2 são
Transportador de amônio 1 ( AMT1 ) para a absorção de
supostamente expresso em todos os órgãos e um recíproco
NÃO- e3 NH 4 + , respectivamente. Considerando que, sob o
resposta ao suprimento de amônio nas raízes do arroz tem
Sistema LATS , NPF ( NRT1 / PTR ) trabalha sob ele-
- foram observados. GOGAT é dividido em dois tipos,
concentrações variadas de N (> 250 μM) para absorção de NO 3
que diferem em sua especificidade doador de elétrons,
e NH 4 + . 26, 27 No arroz, transportadores de amônio
ou seja , dependente de ferredoxina ( Fd-GOGAT ) e
(AMT) agrupados em quatro subgrupos de
NADH -dependente ( NADH-GOGAT ). Entre
OsAMT1 a OsAMT4 entre três AMT de
estes, um ferredoxina e dois dependentes de NADH
OsAMT1 envolvido no transporte de alta afinidade, e
enzimas foram identificadas em plantas de arroz. 36 para
sete membros de OsAMT2, OsAMT3 e
aumentar o NUE geral de uma planta de cultivo, é
OsAMT4 atuam como NH 4 de baixa afinidade + transportadores. 28
essencial para aumentar a eficiência de assimilação do N.
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Proteínas transportadoras de AMT são declaradamente mais eficazes Além de melhorias na assimilação de N,
tiva em melhorar o NUE do que os transportadores de nitrato para
a assimilação do carbono (C) também é um fator crítico
cultivares de arroz com preferência por amônio. Dado que
envolvendo várias enzimas; portanto, detectando
NÃO- 3a absorção no arroz é muito menor do que NH 4 +,
a atividade enzimática é essencial para o desenvolvimento de
resultados sugeriram que NO 3 - e NH 4 + eficiente
variedades de arroz com alto NUE. 37
absorção tem o potencial de aumentar NUE junto com
a melhoria da produção de grãos de arroz.15 na raiz
zona do arroz, a oxidação do amônio envolve a raiz
2.3 Mecanismos Genéticos de Remobilização de N
aerênquima, liberando oxigênio que leva a
a formação de NO 3 - que é então assumido por A remobilização é um processo importante que
plantas.29 transportador de nitrato 1 / transportador de peptídeo envolve a translocação de N do envelhecimento antigo
Os genes da família ( NRT1 / PTR ) são reconhecidos como os partes da planta para as partes mais jovens durante um período vegetativo
principais transportadores de nitrato, aminoácidos, peptídeos, estágio ou em órgãos de armazenamento durante o período reprodutivo
glucosinolatos, ácido indol-3-acético, ácido abscísico, estágio.38 Embora a remobilização de N seja composta por
etc. 27 genes desta família regulam o transporte vários eventos metabólicos, é um processo vital para
e alocação de NO 3 - dentro do corpo da planta aumentar NUE em plantas de cultivo.10 Em safras de cereais,
órgãos30 ,31 O NRT1 e NRT2 famílias de genes estão uma grande contribuição do grão N vem de
conhecidos como os principais reguladores de baixa e alta afi- N remobilizado de órgãos vegetativos, e geralmente
transportadores da cidade em ambientes com baixo teor de nitrato. esta32contribuição varia de 60-92%, dependendo de
Mais de 80 genes foram identificados no NRT1 a taxa de remobilização de N e total
e famílias NRT2 , mas apenas alguns poucos foram Eficiência de N remobilização. O conteúdo da Semente N é
considerados pertencentes à família NRT1 .33, 34 importante para a germinação adequada e subsequente

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CULTURAS E ALIMENTOS GM 5

crescimento e estabelecimento de mudas germinadas. Processo de N remobilização.36 estudos mostraram

Coordenação entre N remobilização e senes-
degradação de proteína induzida por cence é necessária para
melhorar a eficiência da remobilização de N porque o
início da senescência desencadeia a translocação de
N para órgãos reprodutivos. Em plantas de arroz,
Translocação de N de relatos de órgãos senescentes
para 80% de N na panícula de arroz. GS e GOGAT
enzimas são conhecidas por regular esta translocação de N
aos órgãos reprodutivos.36 GS1.1 e NADH-
GOGAT1 desempenha um papel importante durante o
que a senescência foliar retardada aumenta o rendimento de grãos
devido a uma longa duração da fotossíntese que
contribui com mais fotossintatos para o grão final
rendimentos; no entanto, esse alongamento reduz a taxa de
N remobilização e posteriormente grão
N content. 10 Vários estudos genômicos e QTL
análises destacaram o envolvimento de GS em
Eficiência de N remobilização em várias culturas.39
Além disso, a Fig. 2 mostra vários genes / famílias de genes
que desempenham papéis importantes no controle de componentes de

Figura 2. Genes / famílias de genes envolvidos na planta NUE (modificado de. 31 ,40

Tabela 1. Uma lista de genes disponíveis no genoma do arroz que controlam a NUE.
Gene Função Fonte Referência
41
NRT1.1 [NPF 6.3, CHL1) Transportador de nitrato Oryza sativa L.
42
NRT2.1 Transportador de nitrato Oryza sativa L.
43
NRT3.1 [NAR2.1] Componente de transporte de nitrato Oryza sativa L.
44
AMT1.1 Transportador de amônio Oryza sativa L.
45
GS1 Glutamina sintetase [citosólica] Oryza sativa L.
46
GS2 Glutamina sintetase [plastídica] Oryza sativa L.
47
GOGAT Glutamato sintase Oryza sativa L.
48
AlaAT Aminotransferase Oryza sativa L.
49
ENOD93-1 Nodulina precoce Oryza sativa L.
50
OsGOGAT1, OsAMT1 Aumente NUpE em condições de baixo N Oryza sativa L.
51
glnA Rendimento de grãos em condições de alto, moderado e baixo N Oryza sativa L.
52
ASN1 Teor de N em grãos Oryza sativa L.
53

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SHMT1 Fotossíntese e número de grãos por panícula Oryza sativa L. 54
AAP1 Número de perfilhos e rendimento de grãos Oryza sativa L.
55
AAP3 Número de perfilhos e rendimento de grãos Oryza sativa L.
56
AAP5 Número de perfilhos e rendimento de grãos Oryza sativa L.
57
AAP6 Absorção de aminoácidos das raízes, transporte de aminoácidos Oryza sativa L.
e teor de proteína do grão
58
Pup1 / OsPupK46 2 / PSTOL1 Concentração de P no tecido e perfilho relativo Oryza sativa L.
número
59
qNGR9 / DEP1 Resposta da altura da planta a N Oryza sativa L.
60
TOND1 Peso seco relativo da planta sob deficiência de N Oryza sativa L.
a N-condições suficientes
61
qNGR2 / GRF4 Absorção de amônio Oryza sativa L.
62
DRO1 Absorção de N e concentração de N na folha após o descabeçamento Oryza sativa L.
63
MADS25 Aumente as expressões de NO 3 - genes transportadores Oryza sativa L.
59
DEP1 Captação e assimilação de amônio Oryza sativa L.
64
SESTA Fator de transcrição NAC regulando positivamente a senescência foliar Oryza sativa L.

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6 S. FIAZ ET AL.

NUE, como remobilização de N, transportadores, 32 Sistema de edição do genoma CRISPR / Cpf1

absorção e assimilação, que pode vir a ser
alvos valiosos para GETs. Além disso, uma lista de genes
disponível no genoma do arroz o controle da NUE foi
dado na Tabela 1. Poucos genes listados na Tabela 1 têm
foi estudado através de abordagens transgênicas como-
sempre, há necessidade de utilizar NPBTs para alcançar
precisão.
3 NPBTs para mutagênese direcionada
NPBTs permitem que cientistas de plantas façam mod-
ificações do genoma. GETs clássicos induzem
quebras de fita dupla (DSBs) em um geno-
localização do microfone e extremidade não homóloga
junção (NHEJ) e reparo dirigido por homologia
(HDR) para reparo. No entanto, o BE e
O sistema PE não requer DSBs para genética
manipulação. Ambos os sistemas têm capacidade para
gerou mutação de par de base único com mais pré-
cisão. NPBTs estão abrindo caminho para novos desenvolvimentos
opções para modificar o genoma de uma forma mais ampla
objetivos, especialmente para alimentos e nutricionais
segurança.
3.1 Sistema de Edição do Genoma CRISPR / Cas9
O sistema CRISPR da Prevotella e Francisella1
é conhecido como Cpf1, até agora Cas12a. O CRISPR /
O Cpf1 chamou a atenção dos pesquisadores devido ao sinal
benefícios significativos de eficiência e precisão no genoma
manipulação. 75 A endonuclease Cpf1 é comparada
tivamente menor para Cas9, portanto, precisa de mais
CRISPR RNA (crRNA) com mais trabalho
eficiência.76 Cpf1 se liga a montante do protoespaçador
motivo adjacente (PAM) guiado por RNA único e
clivar o DNA a uma distância da região da semente,
extremidade proximal do PAM, introduzindo
cortes de 5 pares de bases (bp).77 O sistema Cpf1 ignora o
necessidade de transativar crRNA (tracrRNA) durante
processamento de repetições CRISPR associadas a Cpf1 para
amadurecem em crRNAs.78 Este mecanismo de forma eficiente
cortar a região alvo para um curto PAM rico em T, no entanto
O sistema Cas9 requer sequência PAM rica em G. O Cpf1
sistema mantém a sequência PAM intacta, que pode variar
com base em sua origem de ortólogo enquanto, criar tar-
obteve mutagênese no DNA desejado. Existem
várias ferramentas online, especialmente o banco de dados Cpf1 que
ajuda a encontrar o site de destino potencial e projetar o
gRNA de forma rápida, fácil e simples. Além disso, o
banco de dados Cpf1 online ajuda a identificar Cpf1 e
LbCpf1 através do reconhecimento da sequência de DNA. 79

GETs revolucionaram o campo da genética

através da manipulação eficiente e precisa de
DNA genômico.65 Os GETs categorizados em primeiro
geração, ou seja, meganucleases, dedo de zinco
nucleases (ZFNs), transcrição de segunda geração
ativador como nucleases efetoras (TALENs) e
terceira geração inclui CRISPR (clustered reg-
repetições palindrômicas curtas intercaladas ulatórias) /
Cas9 (proteínas associadas a CRISPR) e relacionadas
Sistemas CRISPR / Cas. 66 Em comparação com outros
GETs, sistema CRISPR / Cas9 é amplamente explorado
por pesquisadores devido ao eficiente, preciso, fácil
no manuseio e custo-benefício.67 O sistema Cas9
requer sequência de guia curta (sgRNA) para direcionar
Cas9 nuclease para clivar o local alvo. 68 The Cas9
possui capacidade de clivar o DNA de fita dupla
local de destino complementar ao sgRNA e sucesso
totalmente implantado em vários ambientes de vida, por exemplo,
bactérias,69 células eucarióticas,70 células animais, mam- mento de modificação de DNA de DSBs, 86, 87 mais
sistema maliano71, 72 e plantas. 73, 74
33 Sistema de edição do genoma BE
A edição de base (BE) é uma adição valiosa aos GETs para
alcançar uma manipulação mais eficiente do genoma com
conversão com base irreversível no site de destino. BE é
muito mais simples e preciso por natureza, permitindo a
versão de nucleotídeos sem formação de DSBs
dentro do DNA alvo.80, 81 A conversão de citosina
(C) a timina (T) chamada citosina BE (CBE) foi
desenvolvido pela primeira vez demonstrou alta eficiência. 82 ,83
O sistema CBE consiste em quatro elementos i) único
sgRNA, ii) dCas9, iii) C desaminase e iv) uracil
Inibidor da glicosilase de DNA (UGI). Com o
compreensão molecular profunda de desaminases,
outro sistema chamado adenina BE (ABE) desenvolvido
com eficiência de conversão de adenina (A) em gua-
nove (G). 82 , 84 ,85 Os BEs restringem a formação de indels
tanto no (s) local (is) de destino e fora do (s) destino (s) sem exigir -
permitindo uma única conversão de bp, ou seja, substituições de bp

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sem depender do DNA do doador. 80 Recentemente, sete
eral outros BEs foram desenvolvidos além do CBE
e ABE, por exemplo, RBEs (conversão de C para U). No
comparação com os GETs anteriores, os BEs provaram
sendo mais eficiente, preciso e menos demorado -
para alcançar a substituição de nucleotídeo / s em diferentes
espécies de plantas.
3.4 Sistema de Edição do Genoma PE
O desenvolvimento recente em GET foi tomado
lugar com a adição de uma nova técnica chamada
edição principal (PE). A técnica de PE permite o
manipulação de todas as 12 conversões base a base
(transição e transversão) ignorando DSBs em
DNA direcionado. 88 PE utiliza ligação de nickase Cas9
com transcriptase reversa e RNA guia de PE
(peg RNA), consistem no sítio de ligação do primer
(PBS), sequência alvo e uma sequência para identificar
tifique o site de destino. O sistema PE tem
alcançou indels de (aproximadamente 44-80bp),
e mutações pontuais com mais precisão e
eficiência. Os investigados nove arroz e sete
linhas de trigo em protoplastos mostraram efeito de mutação
eficiência de aproximadamente 19,2%. 89 O híbrido
zação do alvo DNA-pegRNA PBS e alvo
Transcrição reversa de DNA) mínimo resultante
efeitos fora do alvo. A seguinte técnica ham-
pereceu a modificação no promotor / íntrons
mais fácil, permitindo a substituição alélica no alvo
local viável. É digno de nota, o efeito da mutação
ciência de PE é semelhante ao sistema BE, no entanto,
mostrou especificidade muito maior do que anteriormente
discutidos GETs. O sistema PE está na base
estágio de novos desenvolvimentos e aplicação para
programa de melhoria de safra será realizado com
a passagem do tempo. Por último, os litera-
tura sobre o aplicativo GETs para a cultura do arroz
melhoria provou que é uma abordagem viável
para atingir um objetivo em um período mais curto de
Tempo. A ilustração esquemática para o aplicativo
ção de GETs para programa de melhoria de safra

Figura 3. O fluxograma básico do esquema de edição do genoma para a melhoria do arroz NUE. (1) Seleção do germoplasma desejável. (2) O
extração de DNA genômico de germoplasma selecionado. (3) Principalmente análise do genoma por meio de técnicas de bioinformática para identificar
genes que controlam NUE. (4) Seleção de gene / genes de interesse identificados por meio de análise de bioinformática, literatura disponível / online
base de dados. (5) Seleção do local de destino com base em GETs e disponibilidade / seleção de vetor. (6) Construção do gene que contém o vetor de
interesse / site de destino. (7) Transformação de vetores por meio de diferentes técnicas de transformação (protoplasto, transformação de agrobacterium,
e bombardeio de partículas, etc. (8) Utilização de maquinário de engenharia do genoma Cas para modificação direcionada e extração de
DNA genômico de plantas transgênicas para análise de identificação de mutações. (9) A utilização de primers projetados para amplificação por PCR
do local do gene alvo para obter resultados de sequenciamento Sanger. (10) Triagem de plantas mutantes transgênicas com base no sequenciamento Sanger
resultados (tipo de mutação) e alterações fenotípicas. (11) Seleção de plantas mutantes livres de transgene para posterior coleta de (morfo-
dados lógicos, fisiológicos e bioquímicos) fenotípicos e interpretação dos resultados.

Página 9
8 S. FIAZ ET AL.

foi descrito na Fig. 3 . Os GETs tamanho da panícula28; OsNPF7.3 ( OsPTR6 ) está envolvido em
mecanismo descrito e prova de conceitos em glutamina sintetase e captação de N30; OsNPF6.3

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23/10/2021 06:45 Novas técnicas de melhoramento de plantas para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: uma revisão
plantas de cultivo estabeleceram fatos a serem adotados para ( OsNRT1.1A ) modula a utilização de N dentro do
aumentar NUE no arroz. planta de arroz 103 ; e OsNRT1.1B regula nitrato
captação e translocação.104 Em relação ao alto
grupo transportador de afinidade, quatro NRT2 e dois
4 abordagens transgênicas para melhorar o NUE
Genes NAR2 foram identificados em arroz, entre
Abordagens de engenharia genética têm sido insuficientes. que OsNRT2.3b e OsNRT2.4 trabalham independentemente
tomadas para aumentar a NUE em várias safras; Contudo, dently. Em contraste, OsNRT2.1, OsNRT2.2 e
plantas transgênicas provaram ser incapazes de fazer qualquer OsNRT2.3a interagir com OsNAR2.1 para regular
melhoria significativa no NUE para múltiplos absorção de nitrato. 105 ,106 Além disso, numerosos estudos
razões 90 ,7 Recentemente, foi demonstrado tentou melhorar o NUE por meio do overex-
que uma enzima específica, GS, é essencial para o pressão de genes de assimilação de N,40 mas tive
síntese do gene Gln , que é responsável por sucesso limitado e resultados inconsistentes.
reciclagem de nitrogênio e influencia ainda mais a redução Além disso, as plantas transgênicas devem ser avaliadas
ção de nitrogênio na seiva de petróleo do arroz. 91 Over em condições de N alto e baixo. Algum
a expressão da enzima GS1 fornece estudos demonstraram que a superexpressão de
uma melhoria significativa no rendimento de grãos por planta OsGS1.1 e / ou OsGS1.2 melhora as atividades GS ,
em arroz. 92 No milho, o nocaute de gln1-3 e gln1- mas não houve flutuação significativa no arroz
4 resultou em um número reduzido de grãos e rendimento de grãos,107 enquanto outro estudo descobriu que mais
rendimento de grãos; no entanto, a superexpressão de Gln1-3 expressão de OsGS1.2 causou um aumento na NUE
resultou em um aumento de 30% no rendimento.93 Quando GS1 apenas sob as condições controladas de um crescimento
foi superexpresso em trigo, uma melhoria significativa câmara. 45 Mutação de OsNADH-GOGAT2 (como
na biomassa da raiz, junto com o número de OsGS1.1 ) causou uma redução na espigueta
espigas e grãos por planta.94 Baseado em número, taxa de crescimento e taxa de enchimento de grãos 108.
essas observações em arroz, milho e trigo, pode Além disso, OsNADH-GOGAT1 (como OsGS1.2 )
ser assumido que a enzima GS1 detém mutantes foram encontrados para ter níveis reduzidos
importância para o melhoramento de culturas e transgênicos de aminoácidos e íons de amônio, junto com
abordagens podem ser empregadas para estudos futuros. o um número reduzido de rebentos. 109 Superexpressão de
a expressão fenotípica é amplamente baseada na transcrição Foi relatado que NADH-GOGAT causa
fatores de ção envolvendo redes regulatórias, 95 um aumento significativo no peso do grão de arroz Indica ,47
enzimas, transportadores e genes relacionados a NUE enquanto OsGS1.3 regula assimila-
que influenciam a absorção de nutrientes, redistribuição, ção em grãos de arroz. 36 No arroz, três genes Gln1 foram
assimilação e armazenamento. 96 identificou que codifica GS1 .39 Essesgenes Gln1 são
Anteriormente, arroz mutante transportador OsAMT1.1 expresso diferencialmente dentro do corpo da planta e
foram usados ​para aumentar o NUE em amônio- têm diferentes isoformas e funções em diferentes
preferindo arroz. 97 Em outro estudo, o amônio tecidos vegetais. 110 A este respeito, vários estudos têm
transportador OsAMT2.1 foi expresso sob varia identificou os genes que codificam proteínas envolvidas em
ing fontes de nitrogênio e OsAMT3.1 foi encontrado para os processos de senescência e remobilização de N.21
exibem expressão fraca sob o mesmo Em um estudo realizado por, 111 foi descoberto que a GS citosólica
condições.98 Vários estudos investigaram ( GS1 ) re-assimila amônio liberado de pró-
transporte de amônio em arroz via genes OsAMT hidrólise de teína , que regula a síntese de Gln
mas tiveram sucesso limitado.99, 100 em arroz, esis na seiva do floema e influencia o
OsNPF8.9 ( OsNRT1 ) foi caracterizado como um baixo eficiência de remobilização em arroz. 91 mutantes de arroz
gene transportador de afinidade responsável pela absorção de Nsem OsGS1.1 exibiu crescimento reduzido e
através da epiderme da raiz,101 e um aumento em teve uma diminuição da taxa de enchimento de grãos. 121 Da mesma forma,
O teor de N no arroz foi relatado em resposta a OsGS1.1 também foi encontrado para estar envolvido em
sua superexpressão. 102 Da mesma forma, o gene PTR mediando a geração de glutamina, incluindo durante
OsNPF4.1 ( SP1 ) é responsável por controlar o processo de remobilização de N.112 OsGS1.1 é

Página 10
CULTURAS E ALIMENTOS GM 9

essencial para o crescimento e rendimento do arroz, enquanto OsGS1.2

o arroz transgênico aumentou a capacidade de resposta ao N,
e OsGS1.3 são incapazes de compensar a perda resultando em alto rendimento de grãos.116 Vários estudos têm
de OsGS1.1 .36 documentou o papel-chave da via da proteína G
A molécula de sinalização em plantas é NO 3 - , mas para consumo de N durante o desenvolvimento da planta de arroz.
a sinalização também é influenciada por genes como Uma importante região genômica, Panículas Densas e Eretas 1
AtNPF6.3 / NRT1.1 e proteínas quinases (por exemplo, ( DEP1 ), controla o número de panículas em última instância
AtCIPK8 e AtCIPK23 ). 113 ,114 estudou o potencial rendeu. 117 O alelo mutante, dep1 , foi encontrado para ser
papel inicial de AtNPF6.3 / NRT1.1 na assimilação de N e associado ao transportador de amônio
crescimento da planta no arroz e relatou que a superexpressão OsAMT1.1 , em última análise, aumentando a absorção de N.59, 118
visão de AtNPF6.3 / NRT1.1 elevou o relataram um fator de transcrição, AtHY5 , responsável
Assimilação de N em baixa concentração de N. para regulação de luz. Além disso,,119 revelou o
Transcrição de um dedo de zinco que se liga ao DNA papel potencial de AtHY5 na absorção de N. Em arroz, culti-
( DOF ) controla a sinalização hormonal, a diferença tecidual var com alta atividade GS para reciclar NH 3 deixar menos

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23/10/2021 06:45 Novas técnicas de melhoramento de plantas para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: uma revisão
tiação e outros processos biológicos nas plantas.115
O arroz transgênico para Zea mays Dof1 ( ZmDof1 ) tem
foram desenvolvidos, e essas plantas mutantes demon-
detectou aumento da assimilação de N e C em
as raízes, junto com um aumento da fotossíntese
avaliar.114 Achados semelhantes foram relatados por,17 onde
o gene FERREDOXIN-NADP + REDUCTASE era
introduzido no arroz e no milho, com o transgênico
arroz mostrando maior peso do kernel, enquanto o
o milho transgênico apresentou tamanho de espiga melhorado.
A superexpressão do gene Dof OsRDD1 em
NH 3 comparado a cultivares com menor atividade de GS. 120
Outro gene, DOF18 , induz o amônio
transportadores AMT1, AMT2 e AMT3 para influenciar
absorção de amônio do tecido da raiz do arroz.53
Abordagens transgênicas têm sido utilizadas com sucesso
com DNA estranho para desenvolver safras GM que
passaram por procedimentos éticos estritos, sociais,
e estruturas regulatórias relacionadas à biossegurança.
Mecanismo de engenharia genética manipulando
genes disponíveis no genoma do arroz para melhorar NUE
estão listados na Tabela 2.

Tabela 2. Abordagens transgênicas que manipulam genes que controlam o metabolismo e transporte de aminoácidos para melhorar o uso de nitrogênio
eficiência em arroz.
Promotor
Gene Fonte usado Fenótipo observado Referência
30
PTR6 Oryza sativa L. Ubiquitin Aumento do crescimento da planta
121
AMT1.1 Oryza sativa L. Ubiquitin Aumento de amônio, absorção e rendimento de sementes
98
AMT2.1 Oryza sativa L. CaMV 35S Aumento da absorção de amônio
107
GS1 Oryza sativa L. CaMV 35S N aumentado, rendimento de sementes diminuído
46
GS2 Oryza sativa L. CaMV 35S Capacidade de fotorrespiração aumentada
47
GOGAT Oryza sativa L. CaMV 35S Aumento do peso do grão
122
AlaAT Hordeum OsAnt1 Aumento de biomassa e rendimento de sementes
vulgare L.
51
GDHA Aspergillus CaMV 35S Aumento DW, N, rendimento no campo
123
DOF1 Zea mays L. CaMV 35S Aumentar o conteúdo de nitrogênio em 30%, aumentar a taxa de crescimento sob baixo N, reduzir o nível de glicose
49
ENOD93-1 Oryza sativa L. Ubiquitin Aumento da biomassa da parte aérea e rendimento de sementes
124
glnA Escherichia col CaMV 35S Aumentar o rendimento de grãos em condições de N alto, moderado e baixo
125
GS1.1, GS2 Oryza sativa L. CaMV 35S Aumente a assimilação de N e a biomassa vegetal
126
OsGOGAT1 Oryza sativa L. A activação Aumente o NUpE em condições de baixo N; aumentar o teor de N dos grãos
etiquetagem
linhas
127
ASN1 Oryza sativa L. Ubiquitin Aumentar o teor de N dos grãos; nenhum impacto no rendimento de grãos
51
gdhA Aspergillus CaMV 35S Aumentar a assimilação de amônia e biomassa vegetal sob condições de alto N
Níger
128
GDH Trichurus Ubiquitina Aumenta a assimilação de N, mil grãos
peso, número de grãos e teor de proteína da semente sob condições de campo de N alto, moderado e baixo
53
SHMT1 Oryza sativa L. Actin Aumento da fotossíntese e número de grãos por panícula
122
ALAAT Hordeum Ant1 Aumentar a biomassa vegetal, NUpE e
vulgare L. rendimento final de sementes sob condições de alto N, independentemente da fonte de N do solo [amônia / nitrato]
129
ALAAT2 Cucumis sativa Ant1 Aumentar NUpE e rendimento de grãos em condições de N alto e moderado
EU.
54
AAP1 Oryza sativa L. CaMV 35S Aumente o número de perfilhos e o rendimento de grãos
55
AAP3 Oryza sativa L. CaMV 35S Diminuir o número de perfilhos e o rendimento de grãos
130
AAP5 Oryza sativa L. CaMV 35S Diminuir o número de perfilhos e o rendimento de grãos
57
AAP6 Oryza sativa L. CaMV 35S Aumentar a absorção de aminoácidos das raízes, transporte de aminoácidos e conteúdo de proteína do grão no final
colheita; manter o rendimento de grãos

Página 11
10 S. FIAZ ET AL.

5 NPBTs para melhorar o NUE no arroz técnica em ciências vegetais. A aplicação de var-
técnicas de edição de genoma ious visando vários
A revolução verde provou ser
características em diferentes espécies de plantas foram descritas
um avanço na produção agrícola para garantir
em detalhes, e o aprimoramento do NUE não é exceção.
segurança alimentar e nutricional. No entanto, o germe-
Um sistema CRISPR / Cas9 APOBEC1 BE foi
potencial de produção de plasma permanece dependente de
usado para direcionar um site cada do NRT1.1B
aplicação de fertilizantes,131 requerendo recursos para usar
e genes SLR1 . Os resultados demonstraram 1,4–-
germoplasmas eficientes.132 Os avanços recentes em
11,5% de substituição C / T enquanto 1,6-3,9% da edição
seleção assistida por marcador, abordagens ômicas,
usinas de ted foram responsáveis ​pela substituição de C / G. No
sequenciamento de geração, validação de candidato
outro estudo, a tecnologia BE usando o rato
genes, análises de expressão gênica e GETs têm
enzima citidina desaminase (APOBEC1) foi
auxiliou no desenvolvimento e triagem de potencial
empregado com sucesso para induzir mutações pontuais em
germplasmas para obter genótipos NUE. Sustentável
dois genes importantes para a agricultura, NRT1.1B e
agricultura requer germoplasma de cultivo com prêmio
SLR1 , em arroz. 135 NRT1.1B codifica um nitrogênio trans-
rendimento, resistência a estresses bióticos e abióticos, ambiente
porter e SLR1 codificam uma proteína DELLA. Como
resiliência mental, eficiência no uso de recursos e menos
relatado anteriormente, uma substituição C / T
dependência de fertilizantes artificiais. O NUE é
(Thr327Met) em NRT1.1B poderia aumentar NUE em
uma razão de produção para oferta de N, indicando se
arroz, 104 e uma substituição de aminoácido em ou perto de sua
o germoplasma desenvolvido está ausente no NUE.
Motivo TVHYNP resulta em planta reduzida
Por outro lado, em muitas partes do mundo, especialmente
altura. 104 ,136 A aplicação bem-sucedida de GETs
nos países em desenvolvimento, os solos com poucos nutrientes são
demonstrou o potencial para melhorar
comum e muitas vezes não há fundos nem
NUE não apenas no arroz, mas em muitas outras culturas
a infraestrutura para fornecer fertilizantes à base de N para
importante para a segurança alimentar e nutricional. o
pequenos agricultores. Portanto, os geneticistas estão selecionando

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23/10/2021 06:45 Novas técnicas de melhoramento de plantas para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: uma revisão
genótipos / híbridos com capacidade de alto rendimento aexplorado
disponibilidade de dados
para alcançar genômicos pode
a manipulação ser ainda
fenotípica mais
desejável
sob baixo N para pequenos agricultores. O forte associado
ção para apoiar o desenvolvimento agrícola sustentável
relação entre o rendimento sob alto e baixo N permite
mento. Com base na utilização bem-sucedida, pode ser
criadores para selecionar para ampla adaptabilidade em nutrientes
assumiu que os GETs têm potencial por um segundo
solos repletos. O exemplo clássico de seleção para
revolução verde para alcançar o Reino
a capacidade de uma planta de utilizar N de forma eficiente é Norman
Segundo objetivo de desenvolvimento sustentável das nações de
Introdução e seleção de anões por Borlaug
fome zero. A aplicação bem-sucedida da genética
genes que resultaram em cultivo de alto rendimento semi-anão
abordagens de engenharia e GETs em plantas de cultivo
vars. Esses genes ( Rht-B1 e Rht-D1 ), que foram
são tratados da mesma forma em vários países e um reg-
originalmente derivado de um cruzamento entre um japonês
regimes ulatórios são aplicados, portanto, exigem discussão
variedade de trigo anão (Norin 10) e um alto
entre todas as partes interessadas envolvendo pesquisadores,
produzindo variedade americana (Brevor), tornou-se o
decisores políticos e comunidade agrícola.
modelo para o uso de genes anões para produzir
plantas que usam níveis mais elevados de N sem o lod-
ging que é comum em variedades altas.133 O anão- 6 Aspectos Regulatórios para Culturas de Edição de Genoma
genes alterando a força do caule e planta
O NPBTs é amplamente adaptado para o genoma alternativo
arquitetura e plantas indiretamente geradas que
ção de plantas cultivadas. Os GETs são valiosos
poderia produzir um rendimento muito maior sob alto (stan-
recurso para a melhoria da agricultura
dardizado) níveis de fertilizante e, portanto, tinha
colheitas para resistir a estresses bióticos e abióticos e para
NUE aprimorado.133
desenvolver safras ambientalmente resilientes.20 o
Para resolver as preocupações regulamentares de trans- aplicação de NPBTs em ciências vegetais tem levantado
genics, NPBTs que são mais rápidos, mais previsíveis, preocupações regulamentares tanto a nível nacional como internacional
e pode ser utilizado em uma ampla gama de espécies de plantas arena internacional para garantir a segurança biológica, ecológica,
foi desenvolvido.134 Edição de genoma por meio de gerenciamento de risco associado e diretrizes legais
endonucleases é o mais amplamente adotado sobre o uso indevido de tais tecnologias sofisticadas. 137

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CULTURAS E ALIMENTOS GM 11

Os NPBTs têm potencial para resolver os nutrientes globais conselho estadual da China formulou “Regulamento sobre
preocupação internacional e de segurança alimentar, no entanto,Administração
há de Agricultura Geneticamente
a necessidade de discussão entre as várias partes interessadas para
Segurança de Organismos Modificados ”, genoma categorizado
diferencie entre transgênicos, isto é, GM e gen- editar com culturas GM. 146 Da mesma forma, o índio,
alguns editam plantas de cultivo. A campanha anti-GM é Os órgãos reguladores do Japão e da Nova Zelândia
com base em, i) a inserção de DNA estranho para plantar gorize o genoma, edite as safras semelhantes à aplicação de GM-
genoma causando impacto prejudicial à saúde humana diretrizes estritas de biossegurança. 147, 148 Portanto, o
e ii) a inserção de T-DNA com antibiótico quadro regulamentar já existente, em particular
fatores genéticos de resistência, por exemplo, Golden Rice e Bt países são aplicados em safras de edição de genoma.
Algodão. Esses argumentos estão perfeitamente resolvidos Além disso, os avanços em GETs para produzir
através de NPBTs, GETs modificam o endógeno plantas sem transgene podem ajudar a evitar o forçado
genes semelhantes a variações naturais, além disso, regulamentos relacionados à biossegurança, conforme seguido na convenção
GETs detém a capacidade de introduzir as mutações pontuais plantas transgênicas tradicionais. 142 Resumindo, é o
em qualquer gene de interesse, não é possível alcançar responsabilidade de todas as partes interessadas para debater o reg-
por meio de GETs clássicos.1 A mutação não-alvo quadro ulatório e surgiu com um regulamento uniforme
os efeitos são reduzidos ao nível mínimo por meio de ulações que promovem a segurança de humanos, animais,
empregando variantes Cas9, por exemplo, Cpf1, edição de base plantas e meio ambiente.
e edição principal.138 A transformação do gene
métodos em GETs tornaram essas técnicas reli-
7 direções futuras
capaz e bio-seguro, por exemplo, Agrobacterium tumefaciens ,
uma bactéria transmitida pelo solo usada para transformação de Comgenesbase na revolução da biologia molecular e
contêm DNA natural, permitindo a obtenção do transgene a descoberta de sequências CRISPR na microbiota
limpar as plantas para contornar os rígidos regulamentos da GM.sistema
139 imunológico, os biotecnologistas agora são capazes de
O grande debate sobre plantações de edição de transgênicos emanipular
genoma qualquer genoma de interesse em uma
requerem intervenção governamental para formular e de forma precisa. Esses NPBTs forneceram habilidades
políticas regulatórias claras e uniformes. o facilidade de plantar cientistas para o preciso e rápido
Protocolo de Cartagena sobre Biossegurança avançado sob inserir / manipulação de características desejáveis ​do que conven-
representando o comércio internacional de órgãos GM melhoramento profissional.
ismos / plantas, no entanto, ainda vários governos têm
uma opinião divergente sobre o desenvolvimento,
7.1 Regulação do gene
zação, produção e consumo. 140 Atualmente,
as safras de edição do genoma são tratadas em dois As técnicas de edição de genoma foram utilizadas
diretrizes regulatórias, i) baseada em processos e, ii) pro- não apenas para knockout e knockin de genes, mas também
com base em duto. 141 ,142 Além disso, o regulamento para gen- para regulamentações genéticas. Os regulamentos do genoma

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23/10/2021 06:45 Novas técnicas de melhoramento de plantas para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: uma revisão
algumas safras de edição variam entre os países tão poucos consistem principalmente na ativação ou repressão de
nações lidam com plantações de edição de genoma da mesma forma genesque transgênicos
alcançados através da fusão de transcricionais
outros lidam com essas safras como não transgênicas.141 para ativadores ou repressores com domínios de DNA de vec-
exemplo, Estados Unidos da América e Brasil tor constrói, ou seja, dCas9, visando apenas o regulamento
governo concordou em regular plantações de edição de genoma domínio latório de genes endógenos.73 Cas9
semelhante ao desenvolvido através do convencional tecnologia editou com sucesso a promoção SlCLV3
reprodução, 143 estados de diretrizes regulamentares canadenses ters em Solanum lycopersicum gerando regulamentação
qualquer tecnologia baseada em planta para desenvolver novos atributos
mutação.149 Para modular a tradução de
butes precisam passar pela comida canadense mRNAs o quadro de leitura aberto a montante de
Regulamentos da Agência de Inspeção.144 O Tribunal de LsGGP2 resultou tolerante Lactuca sativa para oxida-
Justiça da União Europeia (TJE) declarou estresse ativo e elevado teor de ascorbato. 81 o
safras produzidas por meio de NPBTs reguladas da mesma forma que influenciam o nível de transcrição e capacidade de retenção
GETs
OGM no entanto, técnicas mutagênicas tradicionais para manipular a função normal de não
com registros de biossegurança estabelecidos estão isentos.145 RNAs canônicos para melhoria da cultura. Os GETs
Para garantir a gestão e avaliação de risco, o pode projetar o mecanismo de transcrição de tais

Página 13
12 S. FIAZ ET AL.

RNAs diretamente para entender sua função subjacente
ção Com base nessas observações, o gene regula
mecanismo de operação pode ser explorado para ativação /
repressão de regiões genômicas controlando NUE em
arroz.
Portanto, a informação genética disponível
para a eficiência do uso de recursos em diferentes safras
espécies podem ser facilmente manipuladas para alcançar
comida segura.

7.4 Modificação Epigenética Direcionada

7.2 Bibliotecas Mutantes
A sequência completa do genoma de várias culturas
por exemplo, Oryza sativa, Triticum aestivum, Zea mays,
Gossypium hirsutum, Glycine max está disponível como-
sempre, analisar os aspectos funcionais dos genes é
desafiador na era pós-genômica. O 3 K arroz gen-
ome projeto permitiu obter a sequência do genoma
dados de megavariáveis ​de arroz cultivadas em grandes áreas elevar as atividades de promotores para genes
e sob diferentes ecossistemas.150 Para validar o
aspectos funcionais dos genes que influenciam NUE em
espécies de plantas por meio de GETs são consideradas como um características para o melhoramento da cultura. A epigenética
estratégia eficaz, portanto, o alto rendimento
bibliotecas mutantes em nível de genoma completo podem provar expressão através do direcionamento de uma proteína de fusão
ser um recurso útil para a elevação do NUE na cultura
programas de melhoria.
7.3 Multiplexação e empilhamento de genes
Nas plantas, as vias metabólicas são responsáveis
suscetível para características com importância econômica. Esses
vias metabólicas são controladas por complexos
redes genéticas dentro de um sistema celular.
Portanto, as técnicas moleculares têm capacidade
manipular vários genes juntos são de
grande importância tanto básica quanto aplicada
pesquisar.32 Os GETs permitem a manipulação genética
ulação de vários genes por meio de multiplexação,
edição de vários sites de destino. 70 O aplicativo
da clonagem Golden Gate ou Assembleia Gibson
método, vários gRNAs foram montados acionados
por diferentes promotores. 151, 152desenvolveu um simples
estratégia para projetar tRNA endógeno por meio de
método simples e robusto de expansão da segmentação
e edição multiplex através de CRISPR / Cas9
sistema. O sistema CRISPR / Cpf1 tinha dupla
nuclease para clivar o DNA direcionado e seu próprio
RNA CRISPR. 153, 154 comprovada viabilidade de
O avanço das tecnologias proporcionou
oportunidades para investigar a modificação da cromatina
cátions, expressão gênica e genoma
estrutura. 155 As plantas são fortemente dependentes de
modificações epigenéticas para responder ao ambiente
estímulos mentais, portanto, essas modificações
são cruciais. A alternância no epigenoma pode
relacionado a estresses bióticos e abióticos, além disso,
pode ativar os genes silenciosos para gerar novos
modificação ativa o gene endógeno
de dCas9 e DNA metil transferase oracetil
transferase para promotores de plantas utilizando gRNAs.
A função da metil transferase pode ser alterada
via dCas9 e gRNA no alvo do genoma da planta
local para modificar a composição epigenética para alcançar
expressão gênica desejável. Existem poucos litera-
tura que descreve a exploração da genética direcionada
modificações para NUE e pode ser recomendado
remendado para geração de germoplasma com
NUE melhorado.
7.5 Edição Gratuita do Transgene
A introdução de DNA estranho na planta
genoma levantou preocupações regulatórias e
considerados como OGM. 156 Seguindo o desenvolvimento
de edição de precisão do genoma que os pesquisadores têm
focado na geração de genoma livre de transgene
editar plantas. A remoção do gene Cas9 também
ajudam a reduzir a mutação fora do alvo. 157 Anterior
a porcentagem de plantas limpas do transgene era muito
inferior, no entanto, os novos desenvolvimentos, por exemplo, BE e
Sistemas PE habilitados para gerar maior número de
plantas limpas do transgene. Uma combinação do sistema BE

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23/10/2021 06:45 Novas técnicas de melhoramento de plantas para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio no arroz: uma revisão
ediçãodisso,
Além multiplex emsgRNAs
vários arroz através
tambémdo podem
sistemaser
Cpf1. e edição
utilizados para trigo comsem DNA implantada
conversão de C para Tcom
de sucesso
1,8%. 158em
, 159 o

elevar a edição do genoma em modelo e não capacidade de gerar plantas sem transgene pode
modelo de plantas cultivadas com baixa transformação genéticaajudar a pular o regime regulatório estrito adaptado por
porcentagem da taxa de mutação induzida. muitos países.

Página 14
CULTURAS E ALIMENTOS GM 13

8 Conclusão Agradecimentos

A elevação da produção global de arroz a baixo custo é Os autores agradecem ao Departamento de Melhoramento de Plantas
vital para a segurança alimentar e nutricional sustentável. e Genética, da Universidade de Haripur, por fornecer
A melhoria no NUE é um constituinte chave para ambiente propício à pesquisa.

aspectos agronômicos, econômicos e ambientais

portanto, melhoristas de plantas e biólogos moleculares
Declaração de Divulgação
estão levando isso como um desafio. O NUE sendo poligênico
e complexo por natureza é um ponto de acesso para dissecar o Os autores declaram que a pesquisa foi realizada no
mecanismo genético por meio de NPBTs clássicos e em ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que
arroz. Até agora, várias regiões genômicas foram identificadas pode ser interpretado como um potencial conflito de interesses.
identificados desempenhando seu papel integral no controle de NUE.
A disponibilidade de 3.000 banco de dados do projeto do genoma do arroz
pode ainda ser utilizado para compreender o subjacente Financiamento
fatores genéticos que influenciam o transporte de N, A publicação do presente trabalho é apoiada pelo
assimilação e remobilização. Anteriormente, o Programa Nacional Chave de Pesquisa e Desenvolvimento da China
abordagens transgênicas exploradas com sucesso (concessão no. 2017YFC0504704) e o National Natural
por meio da superexpressão de genes que controlam NUE, Fundação de Ciências da China (51669034, 41761068,
proporcionando assim a oportunidade de explorar negativamente51809224).
genes de regulação para o desenvolvimento do uso de recursos
culturas eficientes com melhores características agronômicas. o
ORCID
desenvolvimentos recentes em NPBTs permitiram a planta
cientistas para modificar o genoma de um modelo e não Sajid Fiaz http://orcid.org/0000-0001-9097-4359
espécies de plantas modelo por meio de engenharia direcionada Mehmood
de Ali Noor http://orcid.org/0000-0003-2459-2357
Badr Alharthi
atributos essenciais para bióticos, resistentes ao estresse abiótico, http://orcid.org/0000-0003-4515-1171
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