Análise de Águas

TeSP Análises Laboratoriais 2º ano

Caracterização microbiológica de águas

2020/2021

André Alves Silvério

AAS 1
 Água: veículo de doenças
●A água enquanto alimento ou por uso higiénico pode ser um
veículo de microrganismos que podem causar doença:
●Historicamente, aliás é o principal veículo de doenças como:
Cólera, amebíase, desinteria, viroses, ...
● Deve, por isso, ser isenta de microrganismos patogénicos
●Isenta de bactérias indicadoras de contaminação fecal
(coliformes totais e fecais)
●Coliformes: bacilos Gram-negativos, forma de bastonete,
aeróbios ou anaeróbios facultativos, oxidase-negativos, não
formam esporos fermentam lactose a 35-37 ºC, produzindo ácido
e gás (24-48 h).

AAS 2
 Microbiologia da água
● Praticamente todas as águas naturais contêm bactérias devido à sua
exposição ao ar e ao solo.
● Na sua maioria tratam-se de microrganismos inofensivos, cujo
número e natureza variam consideravelmente de acordo com o lugar e
as condições ambientais.
● Ao longo do seu percurso, as águas naturais, superficiais ou
subterrâneas, podem ser contaminadas com microrganismos
patogénicos como, por exemplo, os protozoários Giardia e
Cryptosporidium, as bactérias Salmonella, Shigella, Vibrio e
Mycobacterium, ou vírus (hepatite A ou polio).
● Alguns destes organismos podem sobreviver longos períodos de
tempo em águas naturais, não necessitando do homem como
hospedeiro, enquanto outros possuem uma capacidade de
sobrevivência muito reduzida. AAS 3
 Microbiologia da água
● Para garantir a ausência de agentes patogénicos, a água destinada
ao consumo humano deve ser analisada periodicamente do ponto de
vista microbiológico.
● A aproximação ideal a este problema seria a pesquisa de todos os
microrganismos causadores de doenças intestinais e outras.
● Na prática corrente, esta pesquisa só se realiza em casos
excepcionais pela dificuldade relativa que apresenta; se presentes numa
água, as bactérias patogénicas encontram-se em número restrito e os
métodos destinados ao seu isolamento e quantificação são
frequentemente longos e complexos.
● A via mais frequente de contaminação ocorre através de esgotos
domésticos contendo excrementos com numerosos microrganismos,
pertencentes a espécies patogénicas importantes.
AAS 4
AAS 5
 Microrganismos indicadores
●A abordagem geralmente utilizada é a pesquisa de microrganismos,
normalmente presentes nos dejectos humanos e de animais que se
tornam assim indicadores de contaminação fecal. Este é um princípio
universalmente aceite para a vigilância e avaliação da qualidade
microbiológica de água para consumo.
●Utilizam-se como indicadores de contaminação fecal: a bactéria
Escherichia coli e espécies próximas agrupadas sob a designação de
coliformes, os estreptococos fecais e os clostrídios sulfito-redutores,
uma vez que todos estes microrganismos obedecem aos seguintes
critérios:
● Encontram-se apenas no conteúdo intestinal de animais de sangue
quente.
● Existem em densidades que excedem consideravelmente as dos
organismos patogénicos presentes em indivíduos infectados.
AAS 6
 Microrganismos indicadores
● Verifica-se uma correlação positiva de uma
contaminação fecal e a presença do microrganismo
indicador.
●A sua persistência na água é igual ou superior à dos
microrganismos patogénicos mais persistentes.
●Apresentam taxas de mortalidade semelhantes às dos
patogénicos mais resistentes após desinfecção ou em
condições de stress.

AAS 7
 Microrganismos indicadores
●A análise microbiológica da água serve, também, para a avaliação das
condições em que o tratamento ocorre e se, de facto, a água fica
potável.
● Historicamente, o número de doença com origem na água, no mundo
ocidental, decresceu muito, desde que a desinfecção/cloração foi
introduzida.
● A presença de microrganismos (bactérias + coliformes) não acarreta
riscos sanitários, mas contribui decisivamente para a perda de qualidade
da água (sabores e odores desagradáveis).

Legionella
Resistência a
Escassez hídrica
antimicrobianos

Bioterrorismo
AAS 8
AAS 9
AAS 10
 Microbiologia das águas
●Alguns microrganismos patogénicos são mais resistentes que os
coliformes aos tratamentos de desinfeção da água (Giardia e
Cryptosporidium e vírus): Falsos negativos
●Os coliformes podem crescer em biofilmes nas paredes das tubagens
usadas na distribuição de água: Falso negativo
●A concentração de coliformes pode aumentar na água, em resultado de
alterações nas condições ambientais (temperatura, presença de matéria
orgânica…)

AAS 11
AAS 12
 Outros indicadores de
contaminação
● Estreptococos ou Enterococos fecais
● Indicadores de poluição recente
●Crescimento e selecção através de meios seletivos (Meio KF) - Inibidor
de crescimento de bactérias Gram-negativas (azida de sódio)
● Enterococcus faecalis – fezes humanas
● Streptococcus equinus, S. bovis – animais
● Razão Coliformes fecais / Streptococos ou enterococos fecais
● > 4 poluição de origem humana Guidelines
● < 0,7 poluição de origem animal (pocilgas)

AAS 13
 Outros indicadores de
contaminação
● Clostridium perfringens
● Intestino humano e animal (menor número)
● Gram-positivos e anaeróbios obrigatórios
●Formação de endósporos (esporos persistem na água durante
períodos longos e resistem ao tratamento com cloro)
● Poluição antiga

AAS 14
 Outros indicadores de
contaminação
● Pseudomonas aeruginosa
● Águas de recreio (piscinas), equipamento hospitalar
● Microrganismo patogénico oportunista (e emergente)
● Resistente a antibióticos

● Vírus entéricos
● Trato intestinal
● Não cultiváveis (recurso a técnicas de biologia molecular)

AAS 15
Decreto-lei nº 306/2007

AAS 16
Decreto-lei nº 306/2007

AAS 17
Decreto-lei nº 306/2007

AAS 18
AAS 19
 Coliformes
●A sua pesquisa laboratorial reveste-se de
interesse porque são bons indicadores da eficácia
do tratamento da água para consumo humano:
– Integridade dos sistemas de distribuição
– Presença de biofilmes
–Eficácia dos tratamentos (sequência, operações,
concentrações)

AAS 20
 Coliformes
●Os factores que afectam os tratamentos
biológicos são o tempo de contacto, a
concentração de matéria orgânica e do agente
aplicado.

AAS 21
 Coliformes
●São, além disso, bons indicadores de
contaminação microbiológica:
–Persistência na amostra;
–Facilidade de detecção;
–Correlação com a presença de microrganismos
indicadores de contaminação fecal como
Escherichia coli.

AAS 22
 Coliformes
● Pesquisa laboratorial com meio VRBL

AAS 23
Coliformes

AAS 24
Escherichia coli

AAS 25
 Escherichia coli
●Enterobactéria muito comum, principal indicador
de contaminação fecal;
● Gram-negativa;
● Não forma esporos;
● Flagelada e móvel;
●Fermenta glucose e lactose com produção de
gás
● Anaeróbio facultativo
AAS 26
 Enterococos fecais
● Indicadores de poluição de origem fecal
● Streptococcus spp, Enterococcus faecalis
●Pesquisa com meio Slanetz & Bartley e
confirmação com meio de esculina e azida sódica

AAS 27
AAS 28
 Clostrídios sulfito-redutores
● Microrganismos anaeróbios Gram-positivos
● Formadores de esporos
● Metabolismo redutor de sulfitos
● Presentes no trato intestinal de animais de sangue quente

AAS 29
Provas bioquímicas -
Enterobactérias

AAS 30
AAS 31
Provas bioquímicas -
Enterococos

AAS 32
AAS 33
 Membrana Filtrante
● https://www.youtube.com/watch?v=w-nkxOkhjMI

AAS 34
 Técnicas laboratoriais
● Enriquecimento em meios líquidos (NMP – semiquantitativo)
● Contagem de colónias
●Microscopia (enumeração directa) – limite de detecção
elevado, melhorado por imunofluorescência
● Métodos impedimétricos
● Métodos imunológicos
● Métodos de ADN
● Medições de ATP – higiene de superfícies
● Métodos turbidimétricos
AAS 35
 Técnicas laboratoriais
●Sensibilidade (limite de detecção/quantificação;
falsos + e falsos - e especificidade
(selectivo/diferencial)
● Validade (ligação com a realidade)
– Recuperação
– Repetibilidade
– Reprodutibilidade
– Robustez
AAS 36