Medição em microscopia ótica:

utilização e aplicação da régua

e ocular micrométrica
Constituição, fundamentos e aplicaçóes da
microscopia.
 INTRODUÇÃO
No presente trabalho, foram observadas duas amostras diferentes:
a primeira foi uma amostra da alga verde Spirogyra e a segunda foi
uma preparação temporária de água de mar recolhida em Cais do
Carvão (Funchal).
A análise destas duas amostras envolviu a utilização de um
instrumento que permita a ampliação de objetos minúsculos, este
instrumentos é conhecido como microscópio, neste caso, trabalhou-
se com o microscópio ótico, cujas partes encontram-se
esquematizadas na figura seguinte (Figura nº1).
O pé, o braço, o
canhão e o revolver
funcionam como
suporte das diferentes
partes do microscópio;
a platina será o apoio
do material a observar
e o chariot permite a
movimentação lateral
da lâmina em
Figura nº1 – Partes do microscópio observação. O
parafuso
macrométrico e micrométrico funcionan, respetivamente, para a
deslocação vertical da mesa e o aperfeiçoamento da focagem. A
lâmpada será a fonte de luz e o condensador é responsável pela
uniformidade de dita luz. As
objetivas e os lentes oculares,
atraves dos cuais será possível a
ampliação da imagem, e
adicionalmente, a régua ótica
que servirá para medir as
entidades e cujo comprimento
fisico depende da objetiva a usar.
Para a amostra da Spirogyra
(Figura nº2) realizou-se a
medição da largura e o
comprimento de cinco células
diferentes com ajuda da régua Figura nº2 - Spirogyra
ótica; logo, para a amostra de água de mar, observaram-se diversas
entidades, entre as quais encontram-se algas microcópicas e
pequenos pedradores das referidas algas (Figuras 3 e 4,
respetivamente).

Figura nº3 – Pequeno predador. Figura nº4 – Alga microscópica.

MATERIAIS E MÉTODOS
Nas duas observações, foi utilizado um microcópio ótico Zeiss com
régua ótica.
Foi colocada a amostra de Spirogyra na platina, e foi observada a
amostra inicialmente com a objetiva 5x, uma vez identificada a
espécie em estudo, procedeu-se a mudança para a objetiva de
baixa ampliação (10x) e eventualmente a objetiva seca de alta
ampliação (40x), nesta última, foi possível observar com mais
detalhe as células de Spirogyra.
As medições de altura e comprimento
das cinco células foram realizadas na
objetiva 10x (Figura nº5). Só as
divisões da régua ótica não sáo
suficientes para determinar os
comprimentos físicos de cada medição,
portanto, é necessário então calibrar
cada objetiva com o uso de uma régua
micrométrica.

Figura nº5 – Régua ótica

 Para a observação da água de mar, foi feita uma preparação
temporária sob uma lâmila de vidro; com uma pipeta de Pasteur
foi adicionada uma gota da amostra e foi coberta superiormente por
uma lamela.
Procedeu-se então à ampliação com o microscópio, usando a
mesma técnica empregada na observação da Spirogyra.

A amostra de água de mar foi recolhida fazendo uso de uma

malha de 20 micrómetros (µm) no dia domingo, 25 de outubro de
2020 em Cais do Carvão, Funchal.

RESULTADOS
Tabela nº1 – Calibração de cada uma das objetivas.

Objetivas Divisões Micrómetros

5x 2x0,01 µm 20 µm
10x 1x0,01 µm 10 µm
40x 250x0,01 µm 2,5 µm
100x 100x0,01 µm 1 µm
Na tabela acima, é possível observar que para cada objetiva os
seus divisões (isto é, a sua menor divisão possível) possuem um
determinado valor em micrómetros (µm). No caso da divisão da
objetiva 5x o valor é 20µm, a divisão da objetiva 10x corresponde a
10µm, cada divisão da objetiva 40x é igual a 2,5µm e as divisões da
objetiva 100x é de 1µm. É possível inferir que quanto maior for a
ampliação da objetiva, menor será o valor dos seus divisões em
micrómetros (µm).

Tabela nº2 – Valores do comprimento e a largura de cada célula medida.

Nº da célula Comprimento Largura

#1 60µm 40µm
#2 50µm 40µm
#3 50µm 40µm
#4 50µm 40µm
#5 70µm 40µm
 Tabela nº3 – Cálculo da média, a variância e o desvio padrâo.

Medidas Comprimento Largura

∑𝑥 ∑𝑥
Média =56µm =40µm
5 5
(∑ 𝑥)² (∑ 𝑥)²
∑ 𝑥² − ∑ 𝑥² −
𝑛 𝑛 =
𝑛−1 𝑛−1
Variância (V)/
DP = 8,944 DP = 0
Desvio Padrão
DP² (V)= 80 DP² (V) = 0
(DP)

É possível então concluir que a média dos comprimentos e as

larguras medidas entre as cinco células de Spirogyra são
respetivamente 56µm e 40µm. O desvio padrão para os valores do
comprimento é igual a 8,944 e a variância é igual a 80. Para a
largura, o valor do desvio padrão e da variância foram ambos
nulos.

DISCUSSÃO

A determinação das dimensões das células da Spirogyra foi

possível graças à prévia calibração da objetiva usada, que se
consegue comparando a régua ótima (sem nenhum comprimento
físico) com uma régua micrométrica (permite conceder valores
numéricos às divisões da régua ótica). Foi também graças a este
processo que foi possível conhecer as dimensões standard das
células em estudo.
Esta experiência, além de propiciar informação acerca da natureza
dimensional da Spirogyra serveu também como uma introdução aos
fundamentos e as técnicas necessárias para o uso correto do
microscópio ótico para futuras observações; como foi o caso do
segundo análise (análise da amostra de água de mar).
 REFERÊNCIAS

 Desconhecido, 2016, Microscopia, shorturl.at/bceoF, acedido

em 28/10/2020.
 Desconhecido, 2020, Microscopio,
https://pt.wikipedia.org/wiki/Microsc%C3%B3pio, acedido em
28/10/2020.
 Jimmy Leung, 2012, Estudo do microscopio,
shorturl.at/sOQX8, acedido em 28/10/2020.
 Desconhecido, 2020, Spirogyra,
https://pt.wikipedia.org/wiki/Spirogyra, acedido em 28/10/2020.
 Desconhecido, 2015, Ocular Micrometer,
https://en.wikipedia.org/wiki/Ocular_micrometer, acedido em
28/10/2020.
 Desconhecido, 2013, Microscope calibration,
shorturl.at/dxPS6, acedido em 28/10/2020.
 Desconhecido, 2020, Micrómetro (µm),
https://www.infopedia.pt/$micrometro-(m), acedido em
28/10/2020.
 Kaufmann, M. (s.d.), Microscópio. Acedido em 28/10/2020
 Kaufmann, M. (s.d.), Artigos científicos/relatórios. Acedido
em 28/10/2020
 Desconhecido, 2015, Microscópio Ótico e
observação/medição celular. Acedido em 28/10/2020.