Espectrofotometria

O princípio de espectrofotometria é deixar incidir luz em uma

molécula, e detectar como a molécula afeta a luz. Um
espectrofotômetro é um aparelho que deixe você controlar o
comprimento de onda da luz incidente na sua amostra, e que indique
a razão T entre a intensidade da luz que incidiu e a luz que conseguiu
atravessar a amostra: a transmitância T = I/I0. Oespectro de uma
determinada substância, T, em função do comprimento de onda, é
característico para cada substância.
Lei de Lambert-Beer
Pelo espectro podemos portanto identificar uma substância. No caso
de moléculas dissolvidas em um solvente, em certos condições a
intensidade da luz transmitida (de um determinado comprimento de
onda, luz monocromática) obedece a lei de Lambert-Beer:
T = I/I0 = 10-abc
com a uma constante característico do soluto (absortividade), b a
distância que a luz atravessa, e c a concentração. Esta relação deve
ser válida quando
1. efeitos de espalhamento, reflexão e refração são desprezíveis,
ou seja, a única razão que a luz não chega no detector é
absorção (veja embaixo)
2. a concentração é pequena suficiente que as moléculas
dissolvidas podem ser consideradas independentes.
Neste caso, é útil usar a absorbância
A = -log(T)
porque se a lei de Lambert-Beer é válido a absorbância A = abc é
proporcional à concentração, tornando o espectrofotômetro um
medidor de concentração seletivo para a molécula que tem um pico
de absorção no comprimento de onda sob estudo.

Espectrofotômetros
São instrumentos que medem a transmitância de uma superfície ou
amostra em função do comprimento de onda.
Seu funcionamento ocorre da seguinte forma:
1. A amostra ou padrão cuja cor de deseja medir é posicionada na
abertura ou fenda de medição do instrumento.
2. Um flash ou feixe contínuo de luz branca é emitido pelo
aparelho sobre esta amostra ou padrão.
3. Esta absorve parte dessa luz e reflete ou transmite outra parte.
O instrumente mede a parte da radiação refletida ou transmitida pela
amostra ou padrão.
Alguns componentes são comuns a todos os espectrofotômetros,
como é verificado a seguir. A luz, habitualmente fornecida por uma
lâmpada, é fracionada pelo prisma ou rede de difração
(monocromador) nos comprimentos de onda que a compõem (luzes
monocromáticas). O comprimento de onda selecionado é dirigido para
a solução contida em um recipiente transparente (cubeta). Parte da
luz é absorvida e parte é transmitida. A redução da intensidade
luminosa é medida pelo detector (célula fotelétrica) porque o sinal
elétrico de saída do detector depende da intensidade da luz que
incidiu sobre ele. O sinal elétrico amplificado e visualizado no
galvanômetro em números, é lido como uma absorbância e é
proporcional à concentração da substância absorvene existente na
cubeta.