SADE

Hipertenso Arterial
Bases genticas da hipertenso arterial
Introduo A hipertenso arterial uma doena polignica com grande heterogeneidade e que sofre influncias importantes de fatores ambientais para a manifestao do fentipo. Recentemente, com o advento das tcnicas de biologia molecular e as abordagens de gentica molecular, tornou-se possvel iniciar a investigao sistemtica dos determinantes primrios da hipertenso arterial primria. Existem exemplos de sucesso na identificao dos defeitos primrios responsveis pela gnese de trs formas raras de hipertenso arterial mendelianas ou dependentes de defeito nico para a manifestao do fentipo. Nesses trs casos, o aumento da presso arterial secundrio ao aumento de reabsoro de sal e gua pelo rim. A utilizao dessas tcnicas est permitindo tambm que progressos importantes sejam feitos na compreenso dos mecanismos moleculares que participam dos sistemas de controle da presso arterial. Entretanto, as causas da doena para a grande maioria dos pacientes permanece desconhecida. Acredita-se que, por meio da abordagem multidisciplinar utilizando-se modelos experimentais e populaes humanas, seja possvel, num futuro prximo, a identificao dos determinantes primrios da hipertenso arterial primria. Isso propiciar a identificao precoce de indivduos afetados e a oportunidade de interveno pr-clnica ou o desenvolvimento de teraputica eficaz na causa primria, com reduo da alta morbidade e mortalidade associada doena. Neste artigo, abordaremos especificamente algumas das estratgias que estamos empregando em nosso laboratrio para mapear os genes da hipertenso arterial em um modelo de rato geneticamente hipertenso (SHR). Origem Gentica da Hipertenso Arterial A hipertenso uma doena que afeta milhes de pessoas em todo o mundo e contribui, de maneira expressiva, para um grande nmero de mortes anuais devido ao infarto do miocrdio, a acidente vascular cerebral e a doena renal crnica. Apesar de todos os avanos na rea da fisiologia cardiovascular ainda se desconhecem os determinantes primrios da hipertenso arterial. Existem vrias razes para explicar esse fato, mas, fundamentalmente, reconhecemos hoje que a hipertenso no uma doena simples com causa nica em todos os indivduos afetados. O estudo dos mecanismos de controle da presso arterial, nas ltimas dcadas, evidenciou um grande nmero de substncias e de sistemas fisiolgicos que interagem de maneira complexa e com redundncia para garantir a presso arterial em nveis adequados nas mais diversas situaes. Imagina-se, portanto, que a hipertenso arterial resultaria da disfuno dos sistemas de controle de presso arterial (Figura 1). Entretanto, a complexa interao desses sistemas fisiolgicos, assim como as modificaes que eles sofrem de fatores ambientais como, por exemplo, contedo de sal na dieta, tm dificultado determinar se as alteraes

Prof. Dr. Jos Eduardo Krieger

Dept. Clnica Mdica da FMUSP/LIM 13 Lab. Gentica e Cardiologia Molecular InCor HC-FMUSP krieger@incor.usp.br

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fisiolgicas encontradas em pacientes com hipertenso arterial so causadores primrios da hipertenso ou simplesmente conseqncia de disfunes primrias ainda desconhecidas. Existem vrias linhas de evidncias indicando que a hipertenso arterial multignica, na qual influncias ambientais tm importncia na determinao do fentipo. Estima-se que 3040% da variao da presso arterial em uma populao seja devido a fatores genticos (1). Portanto, a identificao dos fatores genticos determinantes da hipertenso arterial ser fundamental para esclarecer o processo fisiopatolgico da doena. A caracterstica multifatorial e a heterogeneidade etiolgica representam os maiores obstculos para a identificao das alteraes genticas especficas. Apesar dessas dificuldades, progressos importantes esto sendo alcanados na rea pela utilizao de estratgias de gentica molecular e pelo uso de populaes de pacientes hipertensos e animais experimentais. Hipertenso Arterial Primria A causa do aumento de presso arterial na grande maioria dos pacientes permanece desconhecida e, por isso, a patologia denominada hipertenso arterial primria. Acredita-se que essa sndrome seja, na realidade, polignica e que as influncias ambientais desempenhem papel importante na manifestao final do fentipo. Devido a esse alto grau de complexidade, vrias abordagens esto correntemente sendo utilizadas para identificar os genes que participam da gnese da hipertenso arterial. Essas abordagens presumem que a variao interindividual da presso arterial determinada, pelo menos em parte, geneticamente. Estudos de associao ou de casos controles comparam se a frequncia de um determinado alelo polimrfico est alterada em populaes de indivduos normotensos versus hipertensos. Nesse modelo, imagina-se que o marcador molecular sendo testado esteja em desequilbrio de ligao com o alelo responsvel pelo trao gentico. Ou seja, o marcador molecular est sobre ou to prximo ao alelo procurado, que eles so segregados conjuntamente com freqncia maior do que

Figura 1. A hipertenso arterial resulta da disfuno dos sistemas de controle da presso arterial. Imagina-se que ocorra uma ativao dos sistemas vasoativos que aumentam a presso arterial e/ou falta de sistemas vasoativos que causam diminuio da presso arterial. Num primeiro momento, essas alteraes resultariam em vasoconstrio e aumento da reabsoro de sal e gua funcionalmente e, nas fases tardias, essas mesmas substncias vasoativas contribuiriam para o desenvolvimento de alteraes estruturais em vrios rgos como, por exemplo, no corao, nos rins e no sistema nervoso, que representam a assinatura da doena hipertensiva

aquela esperada ao acaso. Investigao de variantes moleculares em genes candidatos uma outra abordagem que vem sendo utilizada, onde as variantes funcionais de vrios genes so identificadas por mtodos que permitem a anlise de muitos indivduos. Por exemplo, o mtodo de anlise do polimorfismo conformacional de uma fita simples de DNA (SSCP) ou de seqenciamento de DNA de forma automatizada. A alterao de DNA correspondente a variantes funcionais pode ser identificada facilmente e a sua significncia funcional avaliada de vrias maneiras. Por exemplo, pode-se empregar estudos de associao semelhantes aos mencionados acima para testar se as variantes funcionais esto associadas hipertenso mais freqentemente que na populao normal. Alternativamente, emprega-se estudos de ligao , onde o impacto das variantes funcionais analisado por meio da segregao das variantes em heredogramas familiares contendo indivduos hipertensos. importante salientar que, devido complexidade caracterstica

da hipertenso arterial, como a heterogeneidade etiolgica, a possibilidade de penetrao incompleta e de modelos de herana desconhecidos, mtodos alternativos aos estudos de ligao tradicionais vem sendo utilizados. Um desses mtodos a anlise de pares de irmos afetados. Finalmente, essas diferentes anlises so complementadas por estudos de expresso funcional, que so utilizados para testar o efeito fisiolgico direto das variantes funcionais em clulas em cultura, ou at mesmo no contexto do animal inteiro, atravs do desenvolvimento de modelos animais geneticamente manipulados (transgnicos, knockout, knockin e congnicos). Uma outra abordagem complementar s discutidas acima, baseia-se na utilizao de animais de experimentao com substrato gentico uniforme, onde cruzamentos genticos controlados podem ser feitos para maximizar os resultados de estudos de ligao gentica. Esses estudos de total genome scan baseiam-se na utilizao de marcadores moleculares distribudos por todos os 21 cromossomos do rato
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Figura 2. O mapeamento dos genes da hipertenso consiste em primeiro combinar aleatoriamente o material gentico de uma cepa de ratos normotensa (Brown-Norway, BN) com uma cepa de ratos geneticamente hipertensa (SHR) atravs do intercruzamento desses animais. A gerao F2, ou seja, os netos dos animais originariamente normotensos e hipertensos , ento, caracterizada fenotipicamente. Depois, 336 marcadores moleculares distribudos ao longo dos 21 pares de cromossomos dos ratos, que permitem estabelecer quando o material herdado proveniente do rato BN ou SHR, so analisados no material gentico de cada animal. Finalmente, correlacionam-se os dados fenotpicos com os dados genotpicos para determinar quais os marcadores moleculares cosegregam com a hipertenso arterial

e que permitem a identificao da origem parental das diversas regies cromossmicas. Dessa forma, podese criar uma gerao de ratos que contenha uma distribuio aleatria do contedo gentico proveniente de uma cepa de animal normotenso e de uma cepa de animal geneticamente hipertenso. A caracterizao fenotpica desses animais, como, por exemplo, a presso arterial sob diversas situaes, pode, ento, ser correlacionada com a herana de regies cromossmicas especficas da cepa de ratos geneticamente hipertenso e/ou a falta de regies cromossmicas da cepa normotensa (Figura 2). Em nosso laboratrio, investigamos cerca de 220 animais provenientes do intercruzamento da cepa normotensa Brown Norway com a cepa geneticamente hipertensa SHR (2) . Atravs da utilizao da anlise de
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24 fentipos relacionados a variveis cardiovasculares e 336 marcadores moleculares, identificamos 5 regies cromossmicas (2 no cromossomo 2 e 1 nos cromossomos 4, 8 e 16) que esto associadas elevao da presso arterial destes animais aps sobrecarga salina. Essas 5 regies devem conter genes associados ao desenvolvimento de hipertenso nestes animais. Com o objetivo de testar esta hiptese, estamos desenvolvendo linhagens de animais congnicos que contm o background gentico do animal SHR, exceto pela regio mapeada, que est sendo transferida do animal normotenso. Esse processo feito por meio de retrocruzamentos e de seleo dos animais que contm a regio a ser transferida do animal normotenso e o restante do genoma do animal hipertenso. Presentemente, estamos desenvolvendo a dcima

segunda gerao dessas diferentes linhagens e, para duas delas, j obtivemos os animais necessrios, que esto sendo estudados. A anlise destes animais permitir testar diretamente se aquelas regies contm os genes que determinam o desenvolvimento da hipertenso no SHR e tambm permitir que estudos de interao gene-gene e gene-fatores ambientais possam ser realizados in vivo. Portanto, a utilizao das tcnicas de biologia molecular e as abordagens da gentica molecular esto permitindo, pela primeira vez, que se explorem, de forma sistemtica, os fatores primrios determinantes da hipertenso arterial. importante enfatizar que este conjunto de tcnicas no somente ampliou nossa capacidade analtica para identificar genes candidatos, mas tambm criou a oportunidade de modificar o genoma de uma clula ou de um organismo para testar as hipteses no contexto complexo do animal inteiro. Estas abordagens fazem uso indiscriminado de experimentao animal e de estudos humanos atravs de tcnicas fisiolgicas e bioqumicas para cruzamento de informaes que levem a identificao de defeitos primrios, reconhecimento de vias celulares e as conseqncias fisiolgicas que advm destas alteraes. O desenvolvimento desse conhecimento permitir que sejam desenvolvidos os meios de identificar os indivduos hipertensos precocemente, formas teraputicas que atuem de forma eficaz na causa primria e a oportunidade para intervenes pr-clnicas que reduzam a morbidade e a mortalidade associadas hipertenso arterial essencial. Bibliografia 1. Ward R. Familial aggregation and genetic epidemiology of blood pressure. In: Laragh JH, Brenner BM, eds. Hypertension: Pathophysiology, Diagnosis and Management. New York: Raven Press, pp 67-88, 1995. 2. Schork NJ, Krieger JE, Troilliet MR, Franchini KG, Koike G, Krieger EM, Lander ES, Dzau VJ and Jacob HJ. A biometrical genome search in rats reveals the multigenic basis of blood pressure variation. Genome Research 5:164-172, 1995.