RAPP - Volume 24, 2016

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RREVISO A NUAL DE
RAPP
EVISO ANUAL DE
PPATOLOGIA D E PLANTAS
ATOLOGIA DE PLANTAS
REVISO A23,NUAL
Volume 24,
Volume 2016
2015
DE
PATOLOGIA DE PLANTAS
Volume 23, 2015

Valorize sua formao profissional,

seu futuro e sua conscincia.

Valorize sua formao profissional,

RAPP - Volume 23, 2015 seu futuro e sua conscincia.

RAPP - Volume 23, 2015

II RAPP - Volume 24, 2016

 REVISO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS
COPYRIGHT REVISO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS
2016

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REVISO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS

Nenhuma parte desta publicao poder ser reproduzida sem prvia

autorizao, por escrito, do editor.

RAPP - REVISO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS

SGAS 902 Bloco B Salas 102 e 103
Edifcio Athenas Asa Sul
Braslia DF Brasil
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Site RAPP: rappsbf.weebly.com

Publicado no Brasil

Diagramao:
Grfica Diagrama

RAPP - Volume 24, 2016 III

 RAPP

VOLUME 24, 2016

COMISSO EDITORIAL

Edson L. Furtado
Fernando Cezar Juliatti
Francisco Murilo Zerbini
Mario Lcio V. Resende
Marcos A. Machado
Srgio F. Pascholati

RONALDO J. D. DALIO

Editor chefe
RAPP

Uma publicao da REVISO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS

Braslia DF
ISSN 0104 - 0383

IV RAPP - Volume 24, 2016

 EDITORIAL

Renovar para avanar

T oda a comunidade da fitopatologia brasileira concordar que a Reviso Anual de Patologia de

Plantas se incorporou definitivamente como obra de referncia para todos os profissionais e
estudantes que atuam nessa rea. Com seus captulos atualizados e abrangendo no s assuntos
especficos do Brasil, mas de toda a cincia da fitopatologia ela, juntamente com a Tropical Plant Pa-
thology e a Summa Phytopathologica, consolidam e difundem informaes cientficas e tecnolgicas
essenciais para o avano ainda maior da agricultura brasileira.
Ao ser definitivamente incorporada Sociedade Brasileira de Fitopatologia a RAPP tornou-
-se institucional e passa a ter abrangncia maior, sendo uma publicao que continuar consolidando
assuntos atuais e importantes. Ao ser disponibilizada eletronicamente ela segue a tendncia irre-
versvel de publicaes cientficas. Quando se tornar completamente aberta seu ndice de citao
aumentar expressivamente.
Seu novo formato editorial demonstra leveza e alinha-se com outras publicaes de revi-
ses. Melhoria contnua no contedo e formato sinalizar que ela est no caminho de ser compara-
da, em futuro prximo, s melhores publicaes do gnero. evidente que a comunidade cientfica
que mantm dinmica e competitiva a Fitopatologia Brasileira est mais que habilitada a enriquecer
e elevar o nvel das revises publicadas pela RAPP.
Como toda rea da cincia, a Fitopatologia defronta-se com desafios crescentes, principal-
mente face s questes relacionadas a sustentabilidade de produo agrcola, aumento e agrava-
mento de problemas fitossanitrios e a problemas ambientais, principalmente aqueles associados
a mudanas climticas, cada vez mais determinantes na agricultura. A resposta a isso dever vir na
forma de novas tecnologias de manejo, novos cultivares e novas tecnologia de produo. O caminho
para todos esses desafios passa necessariamente pela cincia da Fitopatologia. Avanos somente
podem alcanados se o caminho da cincia for mantido e fortalecido. Fora disso no h milagres. A
RAPP a medida que seguir o caminho da qualidade de suas revises dever contribuir em muito para
que os avanos se concretizem.
A RAPP passa tambm a adotar o sistema de trabalho com reviso submetidas ao invs
de revises convidadas. Com isso espera-se que maior nmero de revises sero submetidas para
avaliao e eventual publicao, ampliando sobremaneira o nmero de colaboradores. Revises con-
vidadas podem sugerir que sejam revises aceitas, o que nunca foi o caso. Somente mantendo sua
qualidade editorial que ela se fortalecer como veculo importante na Fitopatologia Brasileira. To-
das as frentes de avano do conhecimento e da tecnologia devem ser priorizados. A diversidade e a
amplitude da Fitopatologia permitem isso.
Toda a comunidade da Fitopatologia Brasileira est convidada a fazer com que a RAPP ali-
nhe-se cada vez maiss mais prestigiadas publicaes brasileiras.

Dr. Marcos A. Machado

Membro do corpo editorial da RAPP e
Diretor do Centro de Citricultura Sylvio Moreira IA- SP

RAPP - Volume 24, 2016 V

 CONTEDO

VRUS TRANSMITIDOS POR MOSCAS-BRANCAS Alice Kazuko Inoue-Nagata 8-9

NO BRASIL: VETORES, PRINCIPAIS
DOENAS E MANEJO
Claudine Mrcia Carvalho
Francisco Murilo Zerbini
Jorge Alberto Marques Rezende
Renate Krause Sakate
Tatsuya Nagata

MANCHA DE MICOSFERELA: O GRANDE Martha Maria Passador 30-41

OBSTCULO PARA O CULTIVO DEEUCALYPTUS Edson Luiz Furtado
GLOBULUSNO BRASIL

MANEJO DO MLDIO DA CEBOLA: AVANOS E Edivnio R. Arajo 42-54

BARREIRAS DA PESQUISA CIENTFICA Daniel P. Alves

FUNGOS DARK SEPTATE E SUA RELAO Peter Soares Medeiros 55-69

COM AS PLANTAS E Carlos Vergara Torres Jnior
FITOPATGENOS Claudia Maria Xavier Faria
Kerly Martnez Andrade
Jerri dson Zilli
Carlos Antonio Incio

NEMATOIDES QUARENTENRIOS PARA O BRASIL - Paulo Sergio Torres Brioso 70-103

DIAGNOSE, CONTROLE E PERSPECTIVAS Ricardo Moreira de Souza

RISCOS POTENCIAIS DE PATGENOS FLORESTAIS Celso Garcia Auer 104-114

EXTICOS PARA O SETOR FLORESTAL BRASILEIRO lvaro Figueredo dos Santos

BACTRIAS ENDOFTICAS: PASSADO, PRESENTE E Bruna Canabarro Pozzebon 115-129

PERSPECTIVAS VISANDO UM FUTURO SUSTENTVEL Juliano dos Santos

EFEITO DAS MUDANAS CLIMTICAS NO Mathias Ferrari Rockenbach 130-144

SISTEMA DE DEFESA DAS PLANTAS Mateus Brusco de Freitas
Marciel Joo Stadnik

RESISTNCIA DE MONILINIA SPP. AOS FUNGICIDAS
DOS GRUPOS DOS INIBIDORES DA DESMETILAO
(IDM), DOS INIBIDORES DA QUINONA
EXTERNA (IQE) E DOS METILO BENZIMIDAZOL
CARBAMATOS (MBC)
Paulo dos Santos Faria Lichtemberg 145-173
Isabela Vescove Primiano
Juliana Muehlmann Fischer
Chirley Glienke
Lilian Amorim
Louise Larissa May De Mio

SCLEROTINIA SCLEROTIORUM: MOLECULAR Wei Wei 174-189

ASPECTS IN PLANT-PATHOGENIC INTERACTIONS Steven J. Clough

VI RAPP - Volume 24, 2016

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)

VRUS TRANSMITIDOS POR

MOSCAS-BRANCAS NO BRASIL: VETORES,
PRINCIPAIS DOENAS E MANEJO
Alice Kazuko Inoue-Nagata1; Claudine Mrcia Carvalho2;
Francisco Murilo Zerbini2; Jorge Alberto Marques Rezende3;
Renate Krause Sakate4; Tatsuya Nagata5

RESUMO
A mosca-branca Bemisia tabaci tem sido considerada a praga do scu-
lo. Ainda no conseguimos conviver com essa praga cosmopolita, que alm de
produzir prejuzos diretos para a agricultura tem nos efeitos indiretos a principal
fonte de preocupao dos produtores. A sua capacidade de atuar como vetor
de diferentes espcies de vrus e a extrema dificuldade de seu controle resulta-
ram na emergncia de doenas srias para a agricultura brasileira. Esta reviso
aborda as principais viroses associadas a B. tabaci no Brasil, com descries dos
vrus, das doenas e dos prejuzos que estas vm causando cadeia de produo
agrcola. Ainda h muito o que aprender para viabilizar um manejo adequado
dessas viroses e esta reviso tem como propsito apresentar as informaes
atualizadas sobre os vrus e incentivar os interessados a trabalharem com esse
tema que complexo e ao mesmo tempo atrativo e desafiador.

1. Introduo das pragas mais srias da agricultura mundial. Junto

No Brasil, at o final da dcada de 1980, os com ela, emergiram viroses devastadoras para a
insetos vetores de vrus mais relevantes eram os agricultura, destacando-se o mosaico dourado do
afdeos (pulges) e os tripes. Algumas espcies de tomateiro, o amarelo do meloeiro e o amarelo
vrus dos gneros Potyvirus, Polerovirus, Closterovirus, do tomateiro. Fomos testemunhas da rpida e
Cucumovirus e Tospovirus representavam os vrus extensiva invaso do complexo mosca-branca-
de maior ocorrncia em vrias culturas. A nica vrus. Atualmente, as viroses associadas s moscas-
exceo era o mosaico dourado do feijoeiro, causado brancas despontam em todo o Brasil pela alta
por um begomovrus transmitido pela mosca- incidncia e pelas perdas que elas causam. O seu
branca Bemisia tabaci. Esse cenrio se modificou manejo dificultado pela complexidade do sistema
radicalmente a partir da dcada de 1990, quando agrcola brasileiro, onde reas de produo contm
ocorreu a introduo de um novo bitipo de Bemisia bons hospedeiros da mosca-branca, presentes ao
tabaci. O bitipo B (atualmente considerado uma longo de todo o ano. Sendo um inseto polfago, a
espcie crptica, B. tabaci Middle East-Asia Minor mosca-branca coloniza e multiplica-se em inmeras
1, MEAM1) rapidamente se dispersou em todo o plantas cultivadas, silvestres e invasoras, sendo,
territrio nacional e hoje considerado como uma porm, as plantas cultivadas as mais prejudicadas.
1
Embrapa Hortalias, Braslia, DF, 70351-970 - E-mail: alice.nagata@embrapa.br; 2Dep. de Fitopatologia/BIOAGRO, Universidade Fe-
deral de Viosa, Viosa, MG, 36570-900 - E-mail: claudine.carvalho@ufv.br e zerbini@ufv.br; 3Dep. de Fitopatologia e Nematologia,
Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Universidade de So Paulo, Piracicaba, SP, 13418-900 - E-mail: jrezende@usp.br;
4
Dep. de Defesa Fitossanitria, FCA/UNESP, Botucatu, SP, 18610-370 - E-mail: renatekrause@fca.unesp.br; 5Dep. de Biologia Celular,
Universidade de Braslia, Braslia, DF, 70910-000 - E-mail: tatsuya@unb.br

RAPP - Volume 24, 2016 7

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)

Dentre as grandes culturas mais afetadas destacam-
se a soja, o algodoeiro e o feijoeiro, e dentre as
hortalias, o tomateiro, a batateira, as brssicas e
as cucurbitceas. Verdadeiras nuvens de moscas-
brancas so regularmente observadas nas lavouras e
no raro nas cidades nas pocas de pico populacional,
particularmente na poca de senescncia da soja.
O controle da mosca-branca muitas vezes
negligenciado, principalmente em culturas onde as
viroses associadas a esse vetor no causam prejuzos
relevantes, como o caso da soja e do algodoeiro.
Considerando-se as graves perdas registradas em
cultivos de feijoeiro e tomateiro, medidas extremas
como o estabelecimento de vazios fitossanitrios
foram regulamentadas na tentativa de conter o
mosaico dourado do feijoeiro e do tomateiro,
respectivamente. O perodo de vazio fitossanitrio,
nestes casos, serve para reduzir a fonte de inculo e
no a populao do vetor.
Esta reviso tem a finalidade de reunir de
forma concisa as informaes disponveis sobre as
viroses associadas mosca-branca e as principais
caractersticas de B. tabaci, seguidas de um
detalhamento sobre os principais vrus transmitidos
por esse vetor no Brasil (listados na Tabela 1).

Tabela 1. Vrus transmitidos por mosca-branca relatados no Brasil em plantas cultivadas.

Nome (acrnimo) Genoma Vetor(es) Hospedeiros naturais Nome comum da Importncia
doena (se existir) econmica
Gnero Begomovirus
Bean golden mosaic virus ssDNA, dois B. tabaci, feijoeiro, soja, mosaico dourado alta
(BGMV) componentes persistente Macroptilium spp. do feijoeiro
Macroptilium yellow spot virus ssDNA, dois B. tabaci, feijoeiro, P. lunatus, mosaico dourado baixa
(MaYSV) componentes persistente Macroptilium spp. do feijoeiro (predominante
em AL)
Cotton chlorotic spot virus ssDNA, dois B. tabaci, algodoeiro -- baixa
(CCSV) componentes persistente
Okra mottle virus ssDNA, dois B. tabaci, quiabeiro -- baixa
(OMoV) componentes persistente
Sweet potato leaf curl virus ssDNA, um B. tabaci, batata-doce enrolamento das baixa (?)
(SPLCV) componente persistente folhas
Sweet potato leaf curl So ssDNA, um B. tabaci, batata-doce enrolamento das baixa (?)
Paulo virus (SPLCSPV) componente persistente folhas
Tomato chlorotic mottle virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado baixa
(ToCMoV) componentes persistente
Tomato common mosaic virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado baixa
(ToCmMV) componentes persistente (predominante
no ES)
Tomato golden vein virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado baixa
(TGVV) componentes persistente
Tomato mottle leaf curl virus ssDNA, um B. tabaci, tomateiro mosaico dourado alta (NE)
(ToMoLCV) componente persistente
Tomato rugose mosaic virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado/ baixa
(ToRMV) componentes persistente rugoso
Tomato severe rugose virus ssDNA, dois B. tabaci, batateira, tomateiro, mosaico dourado/ alta (SE, CO)
(ToSRV) componentes persistente pimento, Nicandra rugoso
physaloides
Tomato yellow vein streak ssDNA, dois B. tabaci, batateira, tomateiro mosaico dourado baixa
virus (ToYVSV) componentes persistente
Tomato yellow spot virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro, feijoeiro, mosaico dourado baixa
(ToYSV) componentes persistente soja, Leonurus
sibiricus
Gnero Crinivirus
Tomato chlorosis virus (+)ssRNA, dois B. tabaci e T. tomateiro, pimento amarelo do intermediria
(ToCV) componentes vaporariorum, tomateiro
semi-persistente
Gnero Carlavirus
Cowpea mild mottle virus (+)ssRNA, um B. tabaci, no- soja, feijoeiro necrose da haste intermediria
(CPMMV) componente persistente
Melon yellowing-associated (+)ssRNA, um B. tabaci, no- meloeiro amarelo do intermediria
virus (MYaV) componente persistente meloeiro

8 RAPP - Volume 24, 2016

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
2. A mosca-branca Bemisia tabaci
Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera:
Aleyrodidae), comumente denominada mosca-
branca, passou a ter destaque como praga global a
partir da dcada de 1980, quando principalmente
pelo comrcio de plantas ornamentais este inseto
foi disseminado a partir de seu centro de origem
(Oriente Mdio e sia Menor Middle East-Asia
Minor) para ao menos 54 pases. Nas Amricas sua
introduo se deu inicialmente nos Estados Unidos,
associada a infestaes em poinstia (Euphorbia
pulcherrima) e mais tarde ao sintoma do prateamento
das folhas da aboboreira (Maynard e Cantliffe, 1989
citados por Morales, 2006a, b). Rapidamente a praga
se dispersou aos demais pases, chegando ao Brasil
na dcada de 1990 (Loureno, 1994). Seguiram-
se relatos de vrus transmitidos pela mosca-branca,
principalmente para solanceas (Ribeiro et al., 1998;
Zerbini et al., 2002).
B. tabaci causa danos diretos planta
como o aparecimento de desordens fisiolgicas,
perda de vigor e liberao de secreo aucarada
(honeydew) que favorece o desenvolvimento de
fungos, dentre outros (Brown et al., 1995). Alm
disso, excelente vetora de vrus, sendo capaz de
transmitir mais de 200 espcies de vrus pertencentes
aos gneros Begomovirus, Carlavirus, Crinivirus,
Ipomovirus e Torradovirus (Gilbertson et al., 2015;
Navas-Castillo et al., 2011; ipomovrus e torradovrus
no foram relatados no Brasil at o presente, e no
sero abordados nesta reviso). Os begomovrus e os
crinivrus causam impacto econmico relevante em
vrias culturas, sendo reconhecidos como os mais
importantes vrus de plantas emergentes em regies
tropicais e subtropicais (Navas-Castillo et al., 2011a).
Por ser um inseto altamente polfago alimentando-
se de plantas de mais de 500 espcies de plantas de
74 famlias botnicas (Brown et al., 1995), apresentar
alta taxa de fecundidade e excelente habilidade
de disperso, B. tabaci considerada uma super-
vetora de vrus (Gilbertson et al., 2015), facilitando
a transferncia de vrus nativos de plantas no-
cultivadas para plantas cultivadas (Bedford et al.,
1994; Navas-Castillo et al., 2011a; Rocha et al., 2013).
A reproduo em B. tabaci sexuada ou
por partenognese arrentoca, na qual ovos no
fertilizados originam machos e ovos fertilizados
originam fmeas. A taxa de oviposio pode atingir
at 394 ovos por fmea (Byrne, 1991). Seu ciclo de
RAPP - Volume 24, 2016
vida compreendido por seis estdios: ovo, ninfa de
primeiro, segundo, terceiro e quarto instares (esta
ltima referida como pupa) e adulto (Loureno,
2015). B. tabaci um inseto multivoltino, que no
apresenta diapausa ou estdio quiescente, de forma
que as populaes so mantidas por meio dos recursos
vegetais existentes. No Brasil as principais culturas
infestadas e prejudicadas por este inseto incluem o
tomateiro, feijoeiro, meloeiro e a batateira, em que
a transmisso de vrus expressiva, alm de culturas
como algodoeiro, soja, aboboreira, melancia, videira,
hortalias diversas e ornamentais em que o ataque
do inseto tem se manifestado de forma cada vez mais
intensa. Diversas plantas da vegetao espontnea
tambm so hospedeiras do inseto, bem como de
alguns vrus (Loureno, 2015).
As populaes de B. tabaci, apesar de
morfologicamente idnticas, exibem variabilidade
biolgica quanto aos hospedeiros preferencialmente
colonizados, polimorfismo gentico, diferenas na
fecundidade e na capacidade de causar fitotoxicidade.
H tambm diferenas na composio de procariotas
endossimbiontes e na capacidade de transmisso
de vrus, tendo sido tradicionalmente classificadas
em bitipos (Brown et al., 1995). Recentemente,
baseado na anlise molecular do gene mitocondrial
citocromo oxidase I (mtCOI), passou-se a considerar
B. tabaci como um complexo de 37 espcies crpticas
(De Barro e Ahmed, 2011; Dinsdale et al., 2010;
Firdaus et al., 2013; Alemandri et al., 2012; Chowda-
Reddy et al., 2012; Esterhuizen, 2013; Hu et al., 2011;
Parrella et al., 2014), das quais as espcies MEAM1
(correspondente ao bitipo B) e Mediterranean (MED
- correspondente ao bitipo Q), so consideradas
mundialmente as mais invasivas e danosas (Dinsdale
et al., 2010).
No Brasil j foram relatadas quatro espcies
crpticas de B. tabaci, das quais New World 1
(NW1) e New World 2 (NW2), correspondentes ao
bitipo A, so consideradas nativas das Amricas
e foram quase extintas aps a disseminao de
MEAM1 (Marubayashi, 2013; Barbosa et al., 2014).
Mais recentemente a espcie MED foi relatada,
inicialmente no Rio Grande do Sul (Barbosa et al.,
2015) e em seguida no estado de So Paulo (R.
Krause-Sakate, dados no publicados). B. tabaci
MED tem sua origem na Bacia do Mediterrneo
e sua presena nas Amricas mais restrita, com
relatos nos Estados Unidos (Dalton, 2006), Mxico
9
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
(Martinez-Carrillo, 2007), Guatemala (Bethke et al.,
2008), Costa Rica (Guevara-Coto, 2011), Argentina,
Uruguai (Grille, 2011) e Brasil (Barbosa et al., 2015).
Como importantes caractersticas desta espcie
ressaltam-se a alta resistncia aos inseticidas
neonicotinoides; a adaptao a ambientes fechados,
como estufas e casas-de-vegetao (Horowitz et
al., 2005); a adaptao a culturas como o pimento
(Muniz, 2001), atualmente pouco afetadas por
begomovrus no Brasil; e a excelente habilidade em
transmitir o begomovrus Tomato yellow leaf curl
virus (TYLCV) (Li, 2010), ainda no relatado no Brasil
e um dos patgenos mais devastadores do tomateiro
(Moriones e Navas-Castillo, 2000). Nas Amricas, o
TYLCV j foi relatado no Caribe, Mxico, Sudeste dos
EUA e Venezuela (Navas-Castillo et al., 2011a).
3. Begomovrus
Historicamente, a primeira descrio de uma
doena de planta causada por um begomovrus
encontrada em um poema escrito pela imperatriz
Koken, no Japo. Ela descreve as folhas amareladas
(clorticas) da planta conhecida como Eupatorium
makinoi. Alguns trabalhos sucederam essa descrio,
porm somente aps mais de 1200 anos foi
confirmada a associao do begomovrus Eupatorium
yellow vein virus, suposto causador da virose naquela
poca (Saunders et al., 2003). No Brasil h relatos de
begomovrus em diversas plantas desde a dcada de
1930 (Costa, 1937; Costa, 1955; Costa e Bennett, 1950).
A etiologia viral foi comprovada com a transmisso
para plantas sadias pelas moscas-brancas, reproduo
de sintomas e tambm pela presena de partculas
virais geminadas (Costa, 1955; Costa e Bennett, 1950;
Matyis et al., 1975; Orlando, 1945; Orlando, 1946).
Muitas doenas com sintomatologia semelhante,
como o mosaico do algodoeiro e a clorose variegada
das malvceas, no tiveram a etiologia confirmada
na poca (Costa, 1955, Flores et al., 1960; Orlando,
1945; Orlando, 1946). Apesar da falta de identificao
definitiva do patgeno, esses relatos constituem
registros preciosos sobre as doenas e refletem
as contribuies altamente relevantes de grandes
pesquisadores como A. A. Bitancourt, E. W. Kitajima,
A. S. Costa, A. Orlando e K. Silberschmidt.
Estudos com begomovrus progrediram
lentamente no sculo XX, principalmente por
eles no serem transmitidos por extrato vegetal
tamponado e serem detectados com dificuldade por
10 RAPP - Volume 24, 2016
sorologia. Somente a partir de meados da dcada de
1990, com a popularizao de tcnicas moleculares
de diagnose e clonagem, a deteco e identificao
rpida e precisa do agente causal tornou-se possvel.
Assim, a compreenso da situao dos begomovrus
experimentou um progresso rpido no s no Brasil,
mas em todo o mundo.
Os begomovrus possuem genoma de DNA
circular de fita simples, com um ou dois componentes.
A absoluta maioria dos begomovrus encontrados nas
Amricas possuem genoma com dois componentes
(bissegmentado), denominados DNA-A e DNA-B.
Cada componente possui aproximadamente
2600 nucleotdeos (nt) e uma regio comum de
aproximadamente 200 nt na qual est localizada a
origem de replicao. O DNA-A possui cinco genes
que codificam protenas associadas replicao
do genoma viral, supresso de respostas de defesa
do hospedeiro e formao das partculas. O DNA-B
possui dois genes envolvidos no movimento clula-a-
clula do vrus na planta (Brown et al., 2012).
3.1. Begomovrus em fabceas
O Brasil um centro de diversidade gentica
de begomovrus, com relatos de sua deteco em
plantas no-cultivadas desde a dcada de 1950
(Costa e Bennett, 1950; Flores et al., 1960; Costa,
1955). A partir da dcada de 1970, o grande aumento
da rea plantada com soja favoreceu a emergncia
de begomovrus na cultura do feijoeiro (Costa, 1975).
A soja um excelente hospedeiro de B. tabaci e sofre
poucos danos com a presena da praga e, por isso, o
seu controle frequentemente negligenciado pelos
produtores. Essa falha permite que as populaes
de insetos atinjam nveis altssimos, com a posterior
migrao para outras plantas no perodo de
senescncia das plantas de soja. Esse contexto levou
disseminao do begomovrus Bean golden mosaic
virus (BGMV), agente causal do mosaico dourado do
feijoeiro, nos plantios de feijoeiro prximos a reas
de cultivo de soja (Menten e Roston, 1980; Vicente
et al., 1985). O mosaico dourado tornou-se um fator
limitante cultura do feijoeiro ao longo das dcadas
de 1970 e 1980, essencialmente impedindo o cultivo
em regies de clima quente e seco. O problema foi
agravado com a disperso de B. tabaci MEAM1, que
coloniza bem o feijoeiro.
O mosaico dourado apresenta como
caracterstica o aparecimento nas folhas de clorose
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)

intensa, mosaico, bolhas, rugosidade, deformao,
diminuio da rea foliar e nanismo da planta (Figura
1A). Em muitos casos, a forte clorose produz uma
cor amarelo-ouro nas folhas, o que originou o nome
comum da doena. Frequentemente o vrus causa
reduo da produo de vagens, resultando em
drstica diminuio de produtividade. Os prejuzos
so altos e essa doena tornou-se uma das principais
preocupaes dos produtores de feijo do pas na
atualidade. A frequente ocorrncia de epidemias
em feijoeiro evidencia que o controle do mosaico
dourado permanece como um grande desafio para
a cadeia produtiva. No h cultivares de feijoeiro
com bom nvel de resistncia ao mosaico dourado.
O controle qumico do vetor com inseticidas nem
sempre satisfatrio, devido alta eficincia de
transmisso e presena de hospedeiros da mosca-
branca nas regies agrcolas ao longo de todo o ano.
Em vista das frequentes epidemias que
ocorreram nos ltimos anos, destacando-se aquelas
do ano agrcola 2012/2013 (Figura 1A), houve uma
presso forte da cadeia produtiva para que medidas
enrgicas fossem tomadas pelos rgos pblicos
para conter a doena. Aps intenso debate entre
todos os elos da cadeia de produo, foi decidida a
implementao de um vazio fitossanitrio em GO,
DF e MG (IN 15, SDA, MAPA, 16/06/2014). As regies
produtoras foram divididas em duas sub-regies. A
primeira sub-regio abrange os municpios ao sul de
GO, onde o vazio fitossanitrio do feijoeiro ocorre
entre 5 de setembro e 5 de outubro. Na sub-regio 2,
compreendendo MG, DF e o norte de GO, o perodo
foi institudo entre os dias 20 de setembro e 20 de
outubro. A incidncia da virose foi reduzida (Canal
Rural, 2015), porm a medida ainda questionada
por alguns produtores. O vazio fitossanitrio tem
como objetivo principal a reduo do inculo do
vrus no incio da estao de cultivo, pelo fato de
os begomovrus no apresentarem transmisso
transovariana e infectarem uma gama reduzida de
hospedeiros. Entretanto, durante o perodo h a
presena de outras plantas hospedeiras da mosca-
branca, como o tomateiro e a soja, que multiplicam
eficientemente o vetor. Apesar da controvrsia,
acredita-se que a medida tem contribudo
efetivamente para a diminuio dos prejuzos.
At o momento, no se conseguiu por
melhoramento gentico clssico o desenvolvimento

A B C

D E F
Figura 1. Plantas expressando sintomas de infeco por vrus transmitidos por B. tabaci. A. Lavoura de feijoeiro em que
100% das plantas apresentam sintomas de clorose, bolhas e mosaico, causados por infeco pelo begomovrus Bean
golden mosaic virus (BGMV). B. Tomateiro de crescimento determinado infectado pelo begomovrus Tomato severe ru-
gose virus (ToSRV), apresentando sintomas de clorose internerval, enrolamento foliar e nanismo. C. Planta de pimento
infectado pelo ToSRV com sintoma de manchas clorticas, bolhosidade e deformao foliar. D. Planta de soja infectada
pelo carlavrus Cowpea mild mottle virus, com necrose severa do ponteiro. E. Tomateiro de crescimento indeterminado
infectado pelo crinivrus Tomato chlorosis virus, apresentando mosaico e clorose internerval. F. Meloeiro com infeco
pelo carlavrus Melon yellowing-associated virus apresentando sintomas de clorose foliar intensa.

RAPP - Volume 24, 2016 11

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
de uma cultivar de feijoeiro com resistncia ao
mosaico dourado. Devido a essa dificuldade, um
programa de produo de uma planta geneticamente
modificada (GM) com resistncia foi iniciado com
base na estratgia do silenciamento gnico. A planta
GM expressa uma fita dupla de RNA correspondente
parte do genoma viral e desencadeia uma
resposta de defesa da planta com a destruio do
RNA especfico do vrus, o que leva a uma reduo
expressiva de protenas essenciais para o ciclo
replicativo do patgeno. No caso do BGMV, as
plantas transgnicas expressam parte do gene Rep
e so altamente resistentes infeco viral (Aragao
et al., 2013). Aps anos de testes em ambiente
confinado e no campo, e todas as avaliaes de
biossegurana, o feijoeiro transgnico foi liberado
para cultivo comercial em 2011 (http://ctnbio.mcti.
gov.br/publicacoes/-/document_library_display/
cwksGAQxt1lp/view/678011). Essa uma ferramenta
a mais que dever fazer parte de um programa de
manejo integrado de pragas (Gilbertson et al., 2011)
para um manejo efetivo do mosaico dourado do
feijoeiro.
No Brasil, a diversidade de espcies de
begomovrus que infectam fabceas baixa. O
BGMV foi a nica espcie encontrada em amostras
de feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris) e de
Macroptilium lathyroides coletadas em 2011 e 2012
nas regies Sudeste e Centro-Oeste (Ramos-Sobrinho
et al., 2014). Na regio Nordeste, alm do BGMV,
foi detectada tambm a presena do Macroptilium
yellow spot virus (MaYSV) (Ramos-Sobrinho et al.,
2014; Silva et al., 2012). O BGMV foi o begomovrus
predominante em amostras de fabceas cultivadas
e no-cultivadas coletadas em 2003-2005 em trs
estados do Nordeste (AL, BA e PE) (Wyant et al.,
2012; Ramos-Sobrinho et al., 2014). Entretanto, em
amostras coletadas em 2011 em Alagoas, o MaYSV
foi o vrus predominante (Ramos-Sobrinho et al.,
2014). O MaYSV foi relatado pela primeira vez em
amostras de M. lathyroides coletadas em 2010 (Silva
et al., 2012). Os resultados de Ramos-Sobrinho et al.
(2014) sugerem que o MaYSV pode estar substituindo
o BGMV como o begomovrus predominante em
fabceas em AL. Caso essa tendncia se confirme e o
MaYSV se torne comum em cultivos de feijoeiro em
outras regies, o sucesso do plantio do feijoeiro GM
com resistncia ao BGMV poder ser comprometido
(alm disso, esse feijoeiro transgnico poder ser
12 RAPP - Volume 24, 2016
alvo de infeco com outro vrus transmitido por
mosca-branca, o carlavrus Cowpea mild mottle virus,
descrito mais frente). Mais recentemente, houve um
relato da ocorrncia de Sida micrantha mosaic virus
(SiMMV), um begomovrus que infecta naturalmente
malvceas, infectando o feijoeiro no estado de
Gois (Fernandes-Acioli, 2011). A importncia e a
distribuio desta espcie em feijoeiro ainda no so
conhecidas.
Em termos de variabilidade gentica, existem
diferenas significativas entre o BGMV e o MaYSV.
Populaes de BGMV obtidas de feijoeiro comum (P.
vulgaris) apresentam baixa variabilidade, enquanto
populaes obtidas de feijo-fava (P. lunatus) so
recombinantes e mais variveis (Faria e Maxwell,
1999; Ramos-Sobrinho et al., 2014). J o MaYSV
apresenta um elevado grau de variabilidade gentica,
independentemente do hospedeiro (P. vulgaris,
P. lunatus ou M. lathyroides), em parte devido a
vrios eventos de recombinao (Silva et al., 2012;
Ramos-Sobrinho et al., 2014; Lima et al., 2013). Alm
disso, a populao de BGMV analisada por Ramos-
Sobrinho et al. (2014) estava estruturada com base
em hospedeiro/regio geogrfica, o que no foi
observado para a populao de MaYSV.
Apesar da ocorrncia frequente de BGMV
em feijoeiro, infeces de begomovrus em soja
no so comuns no Brasil. Ocorrncias espordicas,
sem impacto econmico, tm sido relatadas desde
1980, com a deteco de BGMV, SiMMV, Okra mottle
virus (OMoV), Tomato yellow spot virus (ToYSV) e
Soybean chlorotic spot virus (SoCSV) (Coco et al.,
2013; Fernandes et al., 2009; Rodrguez-Pardina
et al., 2011). Este cenrio est em contraste com a
Argentina, onde a infeco de soja pelos begomovrus
Soybean blistering mosaic virus (SbBMV) e ToYSV
frequente na regio Noroeste, causando perdas
moderadas a severas na produo (Rodrguez-
Pardina et al., 2011). Como os sintomas causados
pelos begomovrus, caracterizados como mosqueado
e manchas clorticas, so suaves, possvel que
sua ocorrncia no esteja sendo percebida pelos
tcnicos e produtores brasileiros. Considerando-se
a presena de vrus capazes de infectar as plantas
de soja e a alta preferncia de B. tabaci MEAM1 por
essas plantas, acredita-se que em um futuro prximo
os begomovrus possam emergir como um problema
srio para a sojicultura nacional. Considerando que
a soja excelente multiplicador da mosca-branca, o
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
manejo eficiente do inseto nessa cultura essencial
para a agricultura brasileira.
3.2. Begomovrus em solanceas
Uma situao oposta a que ocorre em
fabceas observada para begomovrus que
infectam solanceas, a exemplo do tomateiro, onde
um grande nmero de espcies tem sido descritas
e a variabilidade gentica entre os isolados de uma
determinada espcie normalmente muito alta
(Rocha et al., 2013; Zerbini et al., 2005).
Os primeiros relatos de begomovrus em
tomateiro no Brasil datam da dcada de 1960 (Costa
et al., 1975; Flores et al., 1960). Plantas de tomateiro
apresentando sintomas de deformao foliar,
encrespamento e clorose internerval difusa foram
relatadas. O vrus foi caracterizado e denominado
Tomato golden mosaic virus (TGMV). Alm do TGMV,
cinco outros vrus transmitidos por mosca-branca
foram identificados, porm sem causar danos de
importncia econmica (Matyis et al., 1975). Isso
provavelmente ocorria porque as moscas-brancas
nativas do grupo NW, nicas que ocorriam no Pas
naquela poca, colonizam o tomateiro com baixa
eficincia (Bedford et al., 1994). No entanto, no incio
da dcada de 1990 um complexo de begomovrus
surgiu em tomateiro no Brasil, coincidindo com a
introduo e disseminao de B. tabaci MEAM1
(Ambrozevicius et al., 2002; Ribeiro et al., 2003).
Desde ento, dezesseis espcies de begomovrus
j foram descritas, incluindo o Tomato chlorotic
mottle virus (ToCMoV), Tomato rugose mosaic
virus (ToRMV), Tomato severe rugose virus (ToSRV),
Tomato yellow spot virus (ToYSV), Tomato golden
vein virus (TGVV) e Tomato yellow vein streak virus
(ToYVSV) (Calegario et al., 2007; Fernandes et al.,
2006; Ribeiro et al., 2007; Firmino et al., 2009). A
introduo de B. tabaci MEAM1 causou um grande
impacto para a tomaticultura brasileira, e no se
sabe se a recente introduo de B. tabaci MED pode
resultar em impactos semelhantes ou ainda maiores.
Os begomovrus causam uma grande
diversidade de sintomas em tomateiro, incluindo
clareamento de nervuras, manchas clorticas, clorose
internerval, mosaico de diferentes intensidades,
deformao foliar, diminuio do limbo foliar,
enrolamento foliar e nanismo (Figura 1B) (Inoue-
Nagata et al., 2006) . Em infeces precoces, os
sintomas so severos com uma dramtica reduo
de produtividade (Giordano et al., 2005). De forma
RAPP - Volume 24, 2016
anloga ao que observado para begomovrus em
outras culturas (feijoeiro, algodoeiro, mandioca), uma
alta taxa de infeco frequentemente observada,
particularmente em tomateiro de crescimento
determinado, quando perdas de 100% podem ser
observadas (Bergamin Filho et al., 2016). O controle
qumico do vetor uma das estratgias mais
empregadas na tentativa de reduo da incidncia
da doena, porm apresenta baixa eficincia em
perodos de alta populao de moscas-brancas.
Evidncias crescentes apontam que o controle
dever ser voltado para conter a disperso primria
da doena, isto , as moscas-brancas virulferas que
vm de fora da lavoura de tomateiro (Bergamin Filho
et al., 2016).
O uso de plantas com resistncia gentica a
begomovrus representa uma realidade para a cultura
do tomateiro. H no mercado um considervel leque
de ofertas de hbridos F1 com resistncia moderada
ou tolerncia. Esses hbridos possuem um ou mais
dos principais genes de resistncia conhecidos,
como Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4, Ty-5, ty-5, tcm-1e tgr-
1. Esses genes foram identificados em programas
de melhoramento visando resistncia ao TYLCV, um
begomovrus monossegmentado que no ocorre no
Brasil. A resistncia conferida por esses genes aos
begomovrus bissegmentados existentes no Brasil
no completa. As cultivares so menos suscetveis
infeco, e quando infectadas, os sintomas so
mais brandos, com expresso de leves manchas
clorticas. Em situaes de alta presso de inculo,
os sintomas podem ser severos (Boiteux et al., 2007;
Gonzales-Aguilera et al., 2011). O uso de cultivares
com resistncia mandatrio em regies de alta
incidncia, como GO, DF, MG, CE e SP.
Levantamentos realizados ao longo dos
ltimos 20 anos para acessar a distribuio relativa
de begomovrus em tomateiro indicam que
determinadas espcies tornaram-se prevalentes
em diferentes regies do pas (Rocha et al., 2013;
Fernandes et al., 2008; Albuquerque et al., 2012b).
O sequenciamento direto de fragmentos de PCR
de amostras de tomateiro coletadas nos quatro
estados da regio Sudeste entre os anos de 1998 e
2004 indicou o ToYVSV e o ToSRV como as espcies
predominantes em SP, o ToCMoV e o ToSRV como as
espcies predominantes em MG e ES, e o ToCMoV
e o ToYVSV como as espcies predominantes no RJ
(Cotrim et al., 2007; Ambrozevicius et al., 2002).
13
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
A mesma estratgia foi utilizada para identificar
begomovrus em amostras de tomateiro coletadas
entre 2002 e 2004 no DF e nos estados de SP, MG, GO,
BA e PE. O ToSRV foi o vrus predominante no Sudeste
e Centro-Oeste, enquanto o Tomato mottle leaf curl
virus (ToMoLCV) foi predominante no Nordeste
(Fernandes et al., 2008). A prevalncia do ToMoLCV
no Nordeste foi confirmada por Albuquerque et al.
(2012b) [interessantemente, resultados recentes
sugerem que esse begomovrus pode ter o genoma
monossegmentado (Vu et al., 2015)]. Nos anos
de 2005 e 2007, foi realizado um estudo sobre a
diversidade de begomovrus em duas importantes
regies produtoras de tomate na regio Sudeste,
Paty do Alferes (RJ) e Coimbra (Zona da Mata de
MG). A anlise de sequncias de nucleotdeos do
DNA-A revelou que em Paty do Alferes o ToYVSV
era o begomovrus predominante, encontrado em
56,4% das amostras analisadas, seguido pelo Tomato
common mosaic virus (ToCmMV). J em Coimbra
o ToCmMV foi o nico begomovrus encontrado
infectando tomateiro. Dados mais recentes
confirmaram a prevalncia do ToSRV e ToCMoV na
Zona Metalrgica de MG (municpios de Caranda e
Florestal) e do ToSRV e ToCmMV na Zona da Mata de
MG e na Regio Serrana do Esprito Santo (Gonzlez-
Aguilera et al., 2012; Rocha et al., 2013; Barbosa et
al., 2016).
Rocha et al. (2013) observaram que as
populaes de begomovrus que infectam o
tomateiro no Brasil so altamente recombinantes,
possuem uma rpida taxa de evoluo molecular e
so estruturadas com base em localizao geogrfica.
A hiptese mais aceita para explicar a emergncia
dos begomovrus que infectam tomateiro no Brasil
a transferncia horizontal de vrus nativos que
infectam plantas no-cultivadas por B. tabaci MEAM1,
inseto que possui uma gama de hospedeiros muito
maior do que B. tabaci NW. Uma vez presentes no
novo hospedeiro, esses vrus evoluem rapidamente,
dando origem s espcies detectadas em plantas
cultivadas (Zerbini et al., 2010; Rocha et al.,
2013). A predominncia de algumas espcies pode
ser devido a diferenas na adaptao ao tomateiro
(Alves-Junior et al., 2009) ou diferenas na eficincia
de transmisso pelo vetor (Macedo et al., 2015). Uma
vez que os vrus estejam estabelecidos no tomateiro,
as plantas no-cultivadas passam a servir como
reservatrio natural e fonte de inculo primrio
14 RAPP - Volume 24, 2016
(Barreto et al., 2013; Silva et al., 2010), mas so
dispensveis epidemiologicamente caso o tomateiro
esteja presente no campo durante todo o ano. Assim,
uma das medidas mais eficientes de controle de
begomovrus em tomateiro o estabelecimento do
vazio fitossanitrio (Salati et al., 2002).
Devido aos srios prejuzos causados pelos
begomovrus em tomateiros, foi implementado em
2003 um perodo de vazio fitossanitrio (IN 024, SDA,
MAPA, 15/03/2003). Essa normativa tem o objetivo
de reduzir a populao de tomateiro, considerado a
principal fonte de vrus, e no de moscas-brancas. Uma
Instruo Normativa da Agrodefesa instituiu o vazio
fitossanitrio em Gois a partir de 2007 (Agrodefesa,
IN 05/2007) e foi reeditada em 2011 (Agrodefesa, IN
06/2011). Desde ento, no permitido o plantio
de tomateiro para processamento nos meses de
dezembro e janeiro, isto , o transplantio somente
pode ser realizado entre os meses de fevereiro a
junho. Entretanto, a normativa restrita a tomateiro
de crescimento determinado e no restringe o cultivo
de tomateiro de crescimento indeterminado. Essa
situao leva em conta a dificuldade de fiscalizao
de pequenos produtores, porm contribui para a
reduo da eficincia da medida. Considerando-se
a importncia da tomaticultura para processamento
industrial em certas regies, a Instruo Normativa de
2011 estendeu o vazio fitossanitrio para o tomateiro
estaqueado em alguns municpios. A realizao de
medidas de manejo integrado de pragas tambm
preconizada pela Instruo Normativa. Outros
estados como SP e MG tambm seguem este perodo
de vazio fitossanitrio, apesar de no regulamentado
oficialmente.
O controle qumico do vetor baseado na
aplicao sistemtica e frequente de inseticidas
na lavoura, o que resulta na baixa eficincia do
controle. O controle do vetor precisa ser realizado
em escala regional, abrangendo as culturas vizinhas
e considerando a flora nativa e plantas invasoras. A
complexidade do sistema agrcola brasileiro, que
consiste de cultivos contnuos de hospedeiros de
moscas-brancas e de vrus, dificulta esse controle.
Assim como em fabceas, o manejo de begomovrus
em tomateiro requer um programa de manejo
integrado de pragas (Gilbertson et al., 2011).
Em pimenteiras (Capsicum annuum, C.
frutescens, C. chinense e C. baccatum), a ocorrncia
de begomovrus parece ser menos expressiva,
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
provavelmente pela baixa atratividade dessas plantas
s populaes de B. tabaci presentes no Brasil (em
contraste com outros pases como ndia e Mxico).
Os begomovrus causam em pimenteiras sintomas
de manchas clorticas e deformao foliar (Figura
1C). Em 2001, Lima e colaboradores relataram a
ocorrncia de begomovrus em C. annuum (Lima,
2001), seguido do relato de ToSRV em C. baccatum
(Bezerra-Agasie et al., 2006) e Tomato golden vein
virus (TGVV) e ToYVSV em pimento (Nozaki, 2010).
Em batateira, houve nos anos recentes
um destacado aumento da infestao de moscas-
brancas. Junto com a alta populao de moscas-
brancas, cresceu a incidncia da virose conhecida
como mosaico deformante da batateira. O primeiro
relato de begomovrus em batateira data da dcada
de 1980, mais tarde confirmado como uma infeco
causada por ToYVSV (Ribeiro, 2006). Atualmente
so relatadas a ocorrncia de ToYVSV e ToSRV nas
principais regies produtoras de batata do Brasil
(Albuquerque et al., 2010; Souza-Dias et al., 2008).
Assim, verifica-se que os mesmos begomovrus
infectam tomateiros, pimenteiras e batateiras.
Os begomovrus constituem o grupo mais
numeroso de geminivrus, e certamente so os
mais importantes economicamente no Brasil. No
entanto, h relatos da ocorrncia de vrus causando
encrespamento apical em fumo e tomateiro no Brasil,
e que seriam transmitidos por cigarrinhas (Agallia
albidul) (Bennett, 1949). Embora a identidade
desses vrus no tenha sido confirmada por mtodos
moleculares, os sintomas e a transmisso por
cigarrinha sugerem que seriam curtovrus (um outro
gnero da famlia Geminiviridae). No h relatos
recentes desses vrus no Brasil e, portanto, essa
questo permanece indefinida.
3.3. Begomovrus em batateira-doce
A batata-doce, devido a sua caracterstica
de propagao vegetativa, enfrenta uma srie de
problemas fitossanitrios, principalmente pela
ausncia de um programa de produo de material
propagativo livre de vrus. Justamente devido falta
de propgulos comprovadamente sadios, a avaliao
da importncia dos vrus que infectam a batata-doce
dificultada. Os begomovrus causam sintomas
como enrolamento foliar, mosqueado e clareamento
de nervuras, porm a diagnose complexa pela
possvel ocorrncia de infeco mista com outros
RAPP - Volume 24, 2016
vrus. Os begomovrus tm sido observados em
batata-doce em todo o mundo, inclusive no Brasil.
At o momento, dois begomovrus foram relatados
na cultura: Sweet potato leaf curl virus (SPLCV) e
Sweet potato leaf curl Sao Paulo virus (SPLCSPV)
(Albuquerque et al., 2012a; Albuquerque et al.,
2011; Paprotka et al., 2010a; Brown et al., 2015).
Ambos possuem genoma monossegmentado, em
contraste com os begomovrus relatados em outras
culturas cujos genomas so bissegmentados. Apesar
de estarem amplamente disseminados no pas,
no h conhecimento sobre danos causados por
begomovrus nesta cultura.
3.4. Begomovrus em malvceas
Uma paisagem comum pode ser
frequentemente observada em reas rurais,
principalmente em pastagens: pontos amarelos em
meio vegetao verde. Ao se aproximar, verifica-
se que so malvceas cujas folhas apresentam forte
sintoma de clorose e mosaico. Trata-se da clorose
variegada das malvceas. Essas plantas chamaram a
ateno de inmeros pesquisadores no Brasil e foram
alvo de relatos pioneiros nas dcadas de 1930-1960.
Foi possvel verificar naquela poca que o agente
causal da clorose variegada das malvceas tinha
como vetor a mosca-branca e que o agente etiolgico
[que se acreditava ser o Abutilon mosaic virus,
descrito no incio do sculo XX na Alemanha (Baur,
1906)] causava mosaico em diversas malvceas,
incluindo Sida spp. e algodoeiro (Costa, 1937;
Costa, 1955; Orlando, 1946; Costa, 1960; Costa,
1954 ). Entretanto, a caracterizao de begomovrus
em malvceas, realizada utilizando ferramentas
moleculares, no confirmou a presena de Abutilon
mosaic virus no Brasil. Todos os begomovrus
relatados em malvceas no pas at o presente so
de ocorrncia exclusiva no Brasil: Cotton chlorotic
spot virus (CCSV), Melochia mosaic virus (MelMV),
Melochia yellow mosaic virus (MelYMV), Okra mottle
virus (OMoV), Pavonia mosaic virus (PavMV), Pavonia
yellow mosaic virus (PavYMV), Sida common mosaic
virus (SiCmMV), Sida mottle Alagoas virus (SiMoAV),
Sida mottle virus (SiMoV), SiMMV, Sida yellow blotch
virus (SiYBV),Sida yellow leaf curl virus (SiYLCV), Sida
yellow mosaic Alagoas virus (SiYMAV), Sida yellow
mosaic virus (SiYMV), Sida yellow net virus (SiYNV)
(Almeida et al., 2013, Barreto et al., 2013, Castillo-
Urquiza et al., 2008, Fiallo-Oliv et al., 2015, Jovel et
15
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
al., 2004, Pinto et al., 2015, Tavares et al., 2012). Uma
ou mais dessas espcies podem ter sido responsveis
pela clorose variegada das malvceas estudada nas
dcadas de 1930-1960.
3.5. A alta diversidade dos begomovrus no Brasil
Um grande nmero de begomovrus
infectando plantas no-cultivadas tem sido
caracterizado no Brasil (Arnaud et al., 2007; Castillo-
Urquiza et al., 2008; Silva et al., 2012; Silva et al.,
2011; Tavares et al., 2012; Fernandes et al., 2011;
Pinto et al., 2015; Fiallo-Oliv et al., 2015; Blawid
et al., 2013; Paprotka et al., 2010b; Paprotka et al.,
2010a). A anlise comparativa de populaes de
begomovrus encontradas em plantas cultivadas
e no-cultivadas indicou que aquelas infectando
plantas no-cultivadas apresentam um grau de
variabilidade gentica mais elevado em comparao
quelas presentes em plantas cultivadas (Lima et al.,
2013; Rocha et al., 2013). Um estudo comparando
populaes dos begomovrus MaYSV (proveniente
de Macroptilium lathyroides) e ToSRV (proveniente
de tomateiro) sugeriu que a recombinao, e no a
seleo adaptativa, explica a maior variabilidade de
begomovrus em hospedeiros no-cultivados (Lima et
al., 2013). Os resultados desses trabalhos do suporte
hiptese de que os begomovrus encontrados em
tomateiro no Brasil so originados de vrus nativos
presentes em plantas no-cultivadas, e que aps a
transferncia para o tomateiro as populaes virais
evoluram rapidamente, originando novas espcies
mais adaptadas ao novo hospedeiro.
A presena de diversas espcies no campo,
todas transmitidas pelo mesmo inseto vetor, torna
comum a ocorrncia de infeces mistas, com
dois ou mais vrus presentes simultaneamente na
mesma planta, aumentando a probabilidade da
ocorrncia de eventos de recombinao e pseudo-
recombinao, o que pode levar ao surgimento de
espcies melhor adaptadas ao hospedeiro (Andrade
et al., 2006; Inoue-Nagata et al., 2006; Ribeiro et
al., 2007). Evidncias de recombinao e pseudo-
recombinao j foram encontradas em associao
ao complexo de begomovrus infectando o tomateiro
no Brasil. Galvo et al. (2003)2003 e Ribeiro et al.
(2007) sugeriram que os isolados MG-Bt1 e BA-Se1 do
ToCMoV possuem origem recombinante. A formao
de pseudo-recombinantes viveis entre clones
infecciosos do TGMV (DNA-A) e ToYSV (DNA-B), e
entre o ToYSV (DNA-A) e o Tomato crinkle leaf yellow
16 RAPP - Volume 24, 2016
virus (ToCrLYV) j foi demonstrada (Andrade et al.,
2006).
Um exemplo do grau de promiscuidade entre
os begomovrus que infectam o tomateiro no Brasil,
com infeces mistas que facilitam a ocorrncia de
eventos de recombinao e pseudo-recombinao,
aquele envolvendo o Tomato rugose mosaic virus
(ToRMV) e o ToSRV. A identidade das sequncias de
nucleotdeos do DNA-A dos dois vrus de 86%, porm
para o DNA-B de 98%, indicando que na verdade
esses dois vrus constituem pseudo-recombinantes
naturais, no qual dois DNA-A distintos compartilham
o mesmo DNA-B. Todas as combinaes possveis
entre o DNA-A e o DNA-B de isolados dos dois
vrus apresentam o mesmo grau de infectividade e
induzem os mesmos sintomas em tomateiro (Silva
et al., 2014). Alm disso, o DNA-A do ToRMV inclui
um fragmento recombinante doado pelo ToSRV, com
cerca de 1400 nt, incluindo a maior parte do gene
Rep (Ribeiro et al., 2007; Silva et al., 2014). Assim, a
origem do ToRMV envolve eventos de recombinao
e pseudo-recombinao com o ToSRV. interessante
ressaltar que o ToSRV muito mais comumente
encontrado no campo do que o ToRMV. Entretanto,
em infeces mistas envolvendo componentes
genmicos dos dois vrus, os componentes do ToRMV
so replicados preferencialmente em relao aos do
ToSRV (Silva et al., 2014). Os autores propem que
a prevalncia do ToSRV no campo pode ser devida
transmisso preferencial pelo inseto vetor, somado
ocorrncia de infeces simples apenas pelo ToSRV.
3.6. Caractersticas da transmisso de
begomovrus por B. tabaci
O gnero Begomovirus contm o maior
nmero de vrus transmitidos por B. tabaci (Navas-
Castillo et al., 2011a; Gilbertson et al., 2015) e
o vrus-modelo para estudos de transmisso o
TYLCV. Vrios estudos demonstram que a eficincia
de transmisso de begomovrus varia de acordo
com as diferentes espcies crpticas de B. tabaci, e
mesmo entre populaes da mesma espcie. As
diferenas na habilidade de transmisso podem ser
atribudas a hbitos alimentares, aos hospedeiros
preferencialmente colonizados, constituio de
endossimbiontes secundrios na mosca branca, e
principalmente constituio gentica (Ghanim,
2014; revisado por Rosen et al., 2015).
Ghanim et al. (1998) verificaram que um
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
isolado de TYLCV proveniente de Israel foi transmitido
de forma transovariana de fmeas virulferas para
sua prognie, bem como entre copulaes entre
fmeas e machos (Ghanim e Czosnek, 2000). Bosco
et al. (2004) detectaram o DNA do Tomato yellow
leaf curl Sardinia virus (TYLCSV) em ovos, ninfas
e raramente em adultos da primeira gerao da
prognie, indicando transmisso do DNA de forma
transovariana, porm este DNA no foi infectivo,
sendo portanto sem relevncia epidemiolgica.
A relao vrus-vetor do tipo persistente
circulativa. O incio da transmisso ocorre aps um
perodo de latncia, que corresponde ao tempo
necessrio para que as partculas virais atravessem
todas as barreiras do inseto e alcancem as glndulas
salivares (Ghanim, 2014). O perodo de latncia para
o TYLCV foi inicialmente definido como sendo de 21
horas (Cohen e Nitzany, 1966; citados por Ghanim,
2014) e mais recentemente de 8 horas (Ghanim et
al., 2001). O estilete de B. tabaci penetra a epiderme
da planta e move intracelularmente pelo parnquima
at alcanar o floema, local onde os begomovrus
so adquiridos e transmitidos. O perodo mnimo
de acesso aquisio (PAA) do TYLCV (isolados do
Oriente Mdio) varia de 15 a 60 minutos e o perodo
mnimo de inoculao (PAI) de 15 a 30 minutos. No
inseto, os vrus se movem pelo canal alimentar at
alcanar o intestino mdio (midgut), atravessam as
clulas epiteliais do intestino para cair na hemolinfa
e serem levados s glndulas salivares, de onde sero
liberados no interior da planta pela salivao do
inseto durante o processo de alimentao (Ghanim,
2014).
A presena do endossimbionte secundrio
de B. tabaci, Hamiltonella defensa, essencial para
a transmisso do TYLCV pela mosca-branca. Este
endossimbionte produz uma protena de 63kDa,
homloga protena GroEL de E. coli, com a provvel
funo de proteger as partculas virais da protelise
incitada pelo sistema imune do inseto (Morin et
al., 1999; Morin et al., 2000). Bemisia tabaci pode
transmitir o TYLCV por vrias semanas e muitas
vezes durante todo o seu perodo de vida, porm a
eficincia de transmisso reduz com a idade do inseto
(Rubinstein e Czosnek, 1997). Insetos da espcie MED
passam mais tempo se alimentando e salivando em
comparao com a espcie MEAM1 (Liu et al., 2012;
Liu et al., 2013), e consequentemente adquirem
e transmitem o TYLCV com maior eficincia (Ning
RAPP - Volume 24, 2016
et al., 2015). Alm disso, a alimentao em plantas
infectadas pelo TYLCV tem um efeito negativo sobre
MEAM1 e positivo sobre MED. Estas diferenas de
comportamento das duas espcies podem explicar
a substituio de MEAM1 por MED como a espcie
dominante na China (Liu et al., 2013), e sugerem que
a espcie MED pode se tornar prevalente tambm no
Brasil.
No caso de begomovrus brasileiros, os
primeiros estudos apontaram que os vrus podem
ser adquiridos pelos insetos durante perodos muito
curtos (~10 min) de alimentao, e que a taxa de
transmisso aumenta com o aumento do tempo de
alimentao na fonte de vrus, at 24 horas, e com o
perodo de inoculao na planta sadia (Costa, 1998).
Trabalhos realizados com o ToSRV confirmaram que
a aquisio do vrus pode ocorrer com um minuto
de alimentao na planta (J.A.M. Rezende, dados
no publicados), porm a eficincia de transmisso
aumenta medida que o inseto tem maior perodo
de acesso aquisio do vrus (Freitas, 2012). O
perodo de reteno do ToSRV na mosca-branca pode
chegar a 25 dias (Freitas et al., 2012). Com relao
ao ToYVSV, verificou-se que o perodo mnimo de
acesso de aquisio de 30 minutos e o perodo de
acesso de inoculao de 10 minutos (Firmino et al.,
2009). Estudos realizados com o ToRMV constataram
que os perodos mnimos de acesso de aquisio e
inoculao do vrus foram de 15 minutos e de 30
minutos, respectivamente. O perodo de latncia
foi superior a 16 horas. A capacidade do inseto em
transmitir o vrus aumentou com o aumento do
perodo de aquisio (Santos et al., 2003).
A populao predominante do vetor e a
capacidade de transmisso de cada espcie de
begomovrus podem influenciar de forma decisiva
a prevalncia de espcies virais no campo e, por
conseguinte, impactar a incidncia, a severidade e a
distribuio das viroses, e a resistncia das plantas.
Acredita-se que B. tabaci NW era a nica espcie
presente no Brasil at a dcada de 1990, quando
os begomovrus ocorriam em feijoeiro, malvceas e
euforbiceas. Aps a introduo de B. tabaci MEAM1,
verificou-se a rpida emergncia de begomovrus em
tomateiro, o amarelo em meloeiro e o amarelo em
tomateiro, alm do mosaico dourado do feijoeiro.
O carter polfago de B. tabaci MEAM1 certamente
contribuiu para a transferncia dos begomovrus
nativos no pas, presentes em espcies silvestres
17
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
e daninhas, para plantas cultivadas. Isso tambm
influenciou de forma decisiva a elevao da taxa
de infeco mista de vrus na mesma planta,
desencadeando a ocorrncia de processos de
recombinao e pseudo-recombinao entre os
vrus, descritos anteriormente. Um exemplo do efeito
da relevncia desta inter-relao entre vrus-vetor o
relato da maior taxa de transmisso de um isolado
de ToSRV quando em infeco mista com o TGVV
(Macedo et al., 2015). Isso sugere que a prevalncia
atual de ToSRV em tomateiro relacionada com a
ampla disperso de B. tabaci MEAM1 e eficiente
transmisso de ToSRV por esse vetor. Um outro
estudo foi realizado com Euphorbia yellow mosaic
virus (EuYMV) em Euphorbia heterophylla. A espcie
nativa B. tabaci NW2 uma excelente vetora do
EuYMV comparada a MEAM1, sugerindo que NW2
pode ter um papel crucial na disperso desse vrus
no Brasil (Marchi, 2014). Conforme mencionado
anteriormente, a recente introduo de B. tabaci
MED pode ocasionar mudanas significativas na
ocorrncia de viroses no Brasil, seja em culturas
onde as viroses associadas a moscas-brancas j so
importantes ou em culturas em que essas viroses no
so relatadas ou ocorrem em baixa incidncia.
4. Crinivrus em tomateiro e pimento
Tomato chlorosis virus (ToCV) e Tomato
infectious chlorosis virus (TICV) so as duas nicas
espcies do gnero Crinivirus (famlia Closteroviridae)
associadas com doenas de importncia econmica,
principalmente na cultura do tomateiro, em diferentes
pases. O TICV j foi relatado em 12 pases, localizados
principalmente na Amrica do Norte, Europa e sia,
mas at o presente no foi encontrado no Brasil
(Navas-Castillo et al., 2011). O ToCV j foi relatado
em 23 pases, entre os quais o Brasil (Barbosa et al.,
2008).
O ToCV foi identificado pela primeira vez
infectando tomateiros na Florida, EUA, causando
a doena denominada yellow dwarf disorder,
inicialmente atribuda a fatores nutricionais
(Simone et al., 1996; Wisler et al., 1998). A partir
de ento esta espcie de crinivrus foi encontrada
infectando tomateiro e pimento em mais de 20
pases (Navas-Castillo et al., 2011b). No Brasil, o
ToCV foi primeiramente constatado em tomateiros
no municpio de Sumar, So Paulo (Barbosa et al.,
2008), causando a doena denominada amarelo.
18 RAPP - Volume 24, 2016
Um relato de infeco dessa solancea por um
closterovrus, no completamente caracterizado,
na regio de Campinas, SP, em 1998, cuja descrio
dos sintomas semelhante descrita para o ToCV,
foi feito por Pavan et al. (1999). Mais tarde o ToCV
foi encontrado nos estados de MG, RJ, ES, GO e BA
(Barbosa et al., 2011). possvel que o ToCV ocorra
em outras regies do pas, visto infectar espcies de
solanceas que ocorrem em todo territrio nacional
e ser transmitido por um vetor cosmopolita.
No Brasil, alm do tomateiro e do pimento,
o ToCV j foi encontrado infectando naturalmente
outras espcies cultivadas de solanceas como a
batateira (Freitas et al., 2012), a berinjela e o jiloeiro
(Fonseca et al., 2015). A incidncia do ToCV, tanto
no Brasil como em outros pases, principalmente em
tomateiro e pimenteira bastante varivel, podendo
em alguns casos chegar a 100% (Barbosa et al., 2008;
Dovas et al., 2002; Fortes et al., 2012; Macedo et al.,
2014; Navas-Castillo et al., 2000; Orfanidou et al.,
2014; Velasco, 2008). O efeito do ToCV na produo
ainda no foi avaliado de maneira quantitativa para
a maioria das solanceas cultivadas, com exceo
do pimento (Fortes et al., 2012) e do tomateiro
(Mansilla, 2015). Para o pimento, em avaliaes
experimentais em casa-de-vegetao, encontraram-
se redues na produo da ordem de 45-75%, em
funo da variedade. Em ensaios de avaliao de
resistncia/tolerncia de diferentes gentipos de
tomateiro ao amarelo causado pelo ToCV, a reduo
do peso dos frutos colhidos das plantas infectadas
quando jovens variou de 21 a 52 %, dependendo do
gentipo.
Os sintomas induzidos pelo ToCV em
tomateiros aparecem normalmente aps trs a
quatro semanas da inoculao e caracterizam-se
principalmente por reas clorticas internervais
nas folhas baixeiras (Figura 1E). Esse sintoma pode
vir acompanhado por bronzeamentos ou manchas
avermelhadas, enrolamento das margens das folhas
para cima e engrossamento do limbo foliar, que se
torna quebradio. No h sintomas em flores e frutos
(Wisler et al., 1998). Os mesmos sintomas j foram
observados em plantas de pimento e batateira.
Apesar de no ocorrerem sintomas bvios nas frutas,
a produo frequentemente afetada pela reduo
do tamanho e do nmero de frutos.
O ToCV apresenta partculas alongadas e
flexuosas, com comprimentos que variam de 800 -
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
850 nm (Liu et al., 2000). O genoma composto por
duas molculas de RNA de fita simples, senso positivo.
Os RNA1 e RNA2 do isolado brasileiro possuem 8594
e 8242 nt, respectivamente (Albuquerque et al.,
2013), e apresentam as caractersticas tpicas de
outros isolados do ToCV cujos genomas completos
esto depositados em bancos de dados pblicos:
o RNA1 apresenta quatro genes, dos quais os dois
maiores codificam protenas associadas replicao,
e o RNA2 possui nove genes que codificam protenas
associadas com a proteo do genoma, movimento,
transmisso pelo vetor e outras funes ainda no
identificadas (Albuquerque et al., 2013; Wintermantel
e Wisler, 2006). Ambos componentes genmicos
codificam protenas com atividade de supresso do
silenciamento de RNA (Canizares et al., 2008).
Anlises filogenticas realizadas com base nas
sequncias de nucleotdeos dos genes que codificam
a protena HSP70h (homloga da heat shock
protein) e do genoma completo de isolados do ToCV
indicaram alto nvel de conservao dos isolados
brasileiros, com identidades de sequncia superiores
a 99% (Albuquerque et al., 2013; Barbosa et al., 2013).
Em ambos os trabalhos, as maiores identidades nas
sequncias de nucleotdeos ocorreram entre isolados
de ToCV de pases do Mediterrneo, sugerindo que
os isolados brasileiros devem ter origem a partir de
uma nica introduo. Wintermantel e Wisler (2006)
tambm constataram um alto grau de identidade
gentica quando compararam as sequncias de
nucleotdeos do gene que codifica a protena capsidial
de isolados do ToCV dos EUA (incluindo Porto Rico)
com as sequncias correspondentes de isolados de
outros pases. Tendo em conta que o ToCV no
transmitido verticalmente e a relao com o vetor
semi-persistente, o mais provvel que a introduo
desse vrus no Brasil tenha acontecido por meio de
material vegetativo infectado (Barbosa et al., 2013).
Dados recentes apontam que a gama de
hospedeiros do ToCV envolve 52 espcies de plantas
pertencentes a 18 famlias (Kil et al., 2015) e este
quadro no parece definitivo, pois mais recentemente
foram includas as espcies Raphanus sativus, R.
raphanistrume Eruca sativa (Boiteux et al., 2015).
O ToCV um vrus limitado ao floema e
transmitido de forma semi-persistente por vrias
espcies de mosca-branca: B. tabaci NW1, MEAM1
e MED, Trialeurodes abutilonea e T. vaporariorum
(Navas-Castillo et al., 2011b; Wintermantel e
RAPP - Volume 24, 2016
Wisler, 2006). B. tabaci MEAM1 e T. abutilonea so
os vetores mais eficientes do vrus. Este persiste
por at cinco dias em T. abutilonea, trs dias em B.
tabaci MEAM1, e apenas um dia em B. tabaci NW1
e T. vaporariorum (Wintermantel e Wisler, 2006).
A aquisio e a transmisso do vrus pelos vetores
ocorrem aps curtos perodos de alimentao,
embora a transmisso seja mais eficiente aps
algumas horas. No Brasil no h relato da presena
de T. abutilonea, porm sabe-se que T. vaporariorum
tambm transmite o ToCV (Freitas et al., 2012). O
ToCV no transmitido por extrato vegetal (Dovas et
al., 2002). Tambm no h evidncia de transmisso
por sementes. Ressalte-se que o TICV transmitido
de maneira semi-persistente somente por T.
vaporariorum (Navas-Castillo et al., 2011).
A deteco do ToCV em plantas sintomticas,
bem como a sua diferenciao do TICV, pode ser
feita por RT-PCR (Dovas et al., 2002; Wintermantel
e Hladky, 2010) e hibridizao com sonda de cido
nuclico (Fortes et al., 2012; Garca-Cano et al.,
2010). Adicionalmente, o ToCV e o TICV podem ser
diferenciados e identificados por meio da transmisso
pelo vetor, visto que o TICV transmitido somente
por T. vaporariorum (Navas-Castillo et al., 2011).
O manejo do amarelo em tomateiro, bem
como em outras solanceas cultivadas, baseia-se
principalmente no manejo do vetor, por meio de
pulverizaes com inseticidas e prticas culturais.
Embora os inseticidas possam reduzir a populao
do vetor, eles no so eficientes no controle da
doena, pois geralmente no impedem que insetos
virulferos inoculem o vrus antes de serem mortos.
Eliminao de plantaes velhas de solanceas e de
hospedeiros alternativos do vrus, para reduo de
fontes de inculo, deve ser implementada antes do
incio da nova plantao (Tzanetakis et al., 2013). No
h variedades ou hbridos de tomateiros comerciais
resistentes ao ToCV. O mesmo verdadeiro para as
outras espcies de solanceas cultivadas. Solanum
peruvianum fonte de resistncia ao ToCV que pode
ser usada em programas de melhoramento para
desenvolvimento de hbridos de tomateiro resistentes
a esse crinivrus (Garca-Cano et al., 2010).
5. Carlavrus em soja e feijoeiro
Na safra de 2000/01, os produtores de
soja do estado de Gois observaram plantas com
sintomas de nanismo, queima do broto e necrose
19
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
da haste (Figura 1D), denominando a nova doena
de necrose da haste. Acreditava-se que a doena
seria de origem fngica, porm estudos com enxertia
comprovaram que a doena tem etiologia viral e a
caracterizao molecular, sorolgica, com ensaios
de transmisso e microscopia eletrnica revelaram
que o vrus causador pertence espcie Cowpea
mild mottle virus (CPMMV), um carlavrus (Almeida
et al., 2005). Nos anos seguintes, ocorrncias severas
foram relatadas nos estados do MT, BA, MA, PR e
MG, limitando a produo de soja (Almeida et al.,
2005; Zanardo et al., 2014b).
O CPMMV foi descrito pela primeira vez
infectando caupi (Vigna unguiculata) em Gana,
onde foram observados sintomas como mosqueado,
manchas clorticas e deformao foliar (Brunt e
Kenten, 1973; Menzel et al., 2010; Naidu et al., 1998;
Tavassoli et al., 2008). Desde ento sua ocorrncia
tem sido relatada em diversos hospedeiros da famlia
Fabaceae em diferentes regies geogrficas (Menzel
et al., 2010; Naidu et al., 1998; Tavassoli et al., 2008).
O primeiro relato de CPMMV no Brasil ocorreu em
1979, causando uma virose do feijoeiro denominada
mosaico angular (Costa et al., 1983). O vrus causador
do mosaico angular, na poca denominado Bean
angular mosaic virus (BAMV), foi observado tambm
no Paran infectando outras fabceas, incluindo a soja
(Costa et al., 1983). Mais tarde, estudos sorolgicos
realizados por Gaspar e Costa (1993) comprovaram
que o BAMV era idntico ao CPMMV descrito em
Gana (Brunt e Kenten, 1973).
O CPMMV pertence ao gnero Carlavirus,
famlia Betaflexiviridae, que inclui vrus de partculas
flexuosas com dimenses de aproximadamente 610-
700 nm de comprimento e 12-15 nm de dimetro
(Adams et al., 2012). Seu genoma composto de
RNA fita simples, sentido positivo, com comprimento
entre 6500 e 8600 nt. Sequncias completas de nove
isolados de CPMMV esto disponveis em bancos de
dados pblicos.
A transmisso natural de CPMMV ocorre de
forma no-persistente pelo vetor B. tabaci MEAM1
(Marubayashi et al., 2010). O CPMMV, juntamente
com o Melon yellowing-associated virus (MYaV),
so os nicos carlavrus transmitidos por mosca-
branca, sendo os demais comumente transmitidos
por afdeos (Nagata et al., 2003). Tambm h relatos
da ocorrncia de transmisso de alguns isolados do
CPMMV via extrato vegetal e semente (Horn et al.,
20 RAPP - Volume 24, 2016
1991; Thouvenel et al., 1982).
Hospedeiros naturais do CPMMV pertencem
famlia Fabaceae, e a gama de hospedeiros
experimentais inclui plantas das famlias
Chenopodiaceae e Solanaceae (Marubayashi et al.,
2010; Zanardo et al., 2014a). Os sintomas variam
de acordo com o hospedeiro e a poca do ano. Em
caupi, o CPMMV causa manchas clorticas nas folhas
primrias e distoro foliar (Brunt e Kenten, 1973).
Em feijoeiro, o CPMMV causa clorose das nervuras,
clorose internerval, faixa verde das nervuras e mosaico
em forma de manchas angulares amarelas limitadas
pelas nervuras (mosaico angular) (Costa et al., 1983).
Em plantas de soja, causa clorose e mosaico nas
folhas, necrose apical, distoro e nanismo (Figura
1D). Os sintomas em soja tornam-se mais aparentes
na poca de surgimento das vagens: queima do broto
e necrose das hastes, que pode levar morte das
plantas (Almeida et al., 2005; Zanardo et al., 2014a).
As caracterizaes biolgica, molecular e de
diversidade gentica do CPMMV mostraram que os
seis isolados brasileiros cujos genomas completos
foram sequenciados constituem uma estirpe do
CPMMV, denominada CPMMV-BR, enquanto o
isolado relatado em Gana corresponderia a uma
estirpe distinta (Zanardo et al., 2014b)2014b. Dentre
os seis isolados brasileiros, cinco so altamente
relacionados, e um isolado (BR:GO:01:1) possui um
relacionamento um pouco mais distante devido a um
evento de recombinao englobando as ORFs 2 a 6
(Zanardo et al., 2014b).
A emergncia da necrose da haste em soja
preocupou os sojicultores inicialmente, porm o uso
de cultivares com tolerncia doena (Arias et al.,
2015) amenizou o problema. No h informaes
na literatura sobre danos causados pelo CPMMV em
outras culturas no Brasil.
6. Carlavrus em meloeiro
A doena conhecida como amarelo do
meloeiro foi observada em plantios comerciais do
municpio de Baranas, RN, em 1997. O sintoma
principal a clorose generalizada nas folhas mais
velhas (Figura 1F), de colorao amarelo intensa.
O sintoma de amarelecimento foliar aparece
inicialmente nas folhas velhas e depois atinge as
folhas mais novas (Nagata et al., 2003). Nas folhas
medianas, sintomas de mosaico so normalmente
observados. Nas plantas doentes no se observa
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (7-29)
alterao no tamanho e peso dos frutos, porm h
diminuio do contedo de slidos solveis (grau
Brix), o que restringe a exportao dos frutos. A causa
da doena ficou por muitos anos desconhecida, com
a hiptese de alguma desordem nutricional sendo a
mais favorecida. Testes de transmisso por enxertia
demonstraram o carter patognico da doena
(Nagata et al., 2003). Verificou-se tambm que o
vrus transmitido por mosca-branca (Santos, 2004;
Nagata et al., 2003). Mais tarde, verificou-se em
tecido de meloeiro doente a presena de incluses
citoplasmticas semelhantes queles produzidos por
carlavrus. Foi detectada, em seguida, a presena
de um vrus de RNA com organizao genmica
semelhante a um carlavrus e a sequncia parcial do
seu genoma demonstrou ser um vrus desconhecido,
nomeado como Melon yellowing-associated virus
(MYaV) (Nagata et al., 2005, Nagata et al., 2003).
Esse vrus distinto de outros carlavrus, que so em
geral transmitidos por afdeos (exceo tambm do
CPMMV).
O MYaV apresenta partculas alongadas e
flexuosas, com comprimentos que variam de 600 -
700 nm (Nagata et al., 2003). O genoma formado por
uma molcula de RNA de fita simples. Apenas parte
da sequncia genmica foi determinada, incluindo
os 1612 nt da extremidade 3 (Nagata et al., 2005).
Esta regio contm duas ORFs em sobreposio, a
que codifica a protena capsidial e a possvel protena
que se liga a cidos nucleicos, seguida da regio 3
no-traduzida (3UTR) e uma cauda poliadenilada.
Essa organizao genmica tpica dos carlavrus.
A protena capdisial apresenta a maior identidade
com a sequncia do carlavrus Garlic latent virus, um
carlavrus relatado somente no Brasil.
O MYaV um vrus restrito ao floema,
que se encontra em baixa concentrao na planta
infectada e no transmissvel via extrato vegetal.
Testes sorolgicos demonstraram a associao entre
plantas de meloeiro com sintomas e a presena do
MYaV (vila et al., 2008, Lima et al., 2009). Esforos
para o desenvolvimento de cultivares resistentes
esto sendo realizados, porm ainda no h oferta
de meloeiros com resistncia ao vrus. Atualmente,
a doena controlada com o uso de um tnel de
TNT (tecido-no-tecido) sobre as plantas desde a
fase inicial de desenvolvimento at a florao, aps o
qual a transmisso do vrus ocorre e afeta o meloeiro
no final de cultivo. A doena particularmente
RAPP - Volume 24, 2016
importante no Nordeste em cultivos de meloeiro,
tanto para exportao como para o consumo interno
dos frutos.
7. Consideraes finais
A mosca-branca representa um dos problemas
mais preocupantes da agricultura mundial. No Brasil,
contrastando com a ocorrncia de viroses associadas
a B. tabaci anteriormente restrita a fabceas e
malvceas, a lista atual de culturas afetadas pelo
inseto extensa. Acredita-se que dois fatores
estejam particularmente envolvidos com a exploso
da mosca-branca no Brasil, notadamente a partir da
dcada de 1990: a expanso da cultura da soja e a
introduo de B. tabaci MEAM1. Levando-se em
conta tambm o aumento da rea irrigada na regio
do cerrado, o sistema agrcola brasileiro propicia a
constante e abundante presena de alimento para B.
tabaci. A caracterstica de alta polifagia de B. tabaci
MEAM1, em comparao a B. tabaci NW, tambm
foi essencial para disperso e estabelecimento deste
inseto por todo territrio brasileiro. A presena
de grande diversidade de vrus eficientemente
transmitidos por este inseto em plantas nativas e
invasoras desencadeou a emergncia de diversas
doenas de importncia econmica. Hoje, viroses
importantes so relatadas em fabceas, solanceas
e cucurbitceas, causando prejuzos altssimos para
a cadeia produtiva. possvel que os danos causados
pelos vrus associados a B. tabaci aumentem, face
os relatos recentes de ocorrncia de begomovrus
em culturas como soja, algodoeiro e maracujazeiro;
ou com a introduo de novo begomovrus em
cucurbitceas e brssicas, crinivrus em cucurbitceas
e torradovrus em tomateiro. Fica claro que a
introduo de B. tabaci MEAM1 no Brasil, seguido da
sua rpida disperso em todas as reas agrcolas, foi
decisiva para os problemas atuais. Entretanto, ainda
no se sabe o que acontecer com a disperso de
B. tabaci MED, recentemente encontrada no Brasil.
Necessita-se de mais grupos atuando na pesquisa
com esses vrus e insetos. H tambm necessidade
de viabilizar a realizao de um conjunto de prticas
visando o manejo integrado de pragas em nvel
regional, considerando toda a paisagem agrcola e
natural.
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29
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

MANCHA DE MICOSFERELA: O
GRANDE OBSTCULO PARA O CULTIVO
DEEUCALYPTUS GLOBULUSNO BRASIL
Martha Maria Passador1 e Edson Luiz Furtado2

RESUMO
OEucalyptus globulus uma espcie que apresenta boa capacidade de
produo e adapta-se bem em diversos tipos de solos, e em regies de clima
temperado. O avano das reas reflorestadas, o plantio de espcies mais sus-
cetveis a determinadas pragas e patgenos e a utilizao repetitiva de uma
mesma rea para plantio, criaram condies favorveis ocorrncia de muitos
problemas fitossanitrios. Algumas doenas foram constatadas concomitantes
ao crescimento do cultivo de eucalipto no Brasil, como a doena causada por
espcies deMyscosphaerellae Teratosphaeria.No Brasil, surtos epidmicos de
manchas foliares, devido esses agentes causais eram pouco comuns, porm
a partir do ano de 2007 essa doena proporcionou grandes perdas em plan-
tios dessa espcie no Sul do Brasil. Nos anos seguintes, j foi possvel constatar
a mancha de micosferela em plantios comerciais localizados no estado de So
Paulo.

SUMMARY
Eucalyptus globulus is a species that has good production capacity and
can easily adapt in different types of soils and temperate regions. The advance
of reforested areas, the planting of species more susceptible to certain pests
and pathogens and the repetitive use of the same area for planting created
favorable conditions to the occurrence of many plant health problems. Some
diseases were found concomitant with the growth of eucalyptus plantations in
Brazil, among them, the disease caused by species of Myscosphaerella and Ter-
atosphaeria. In Brazil, outbreaks of leaf spots, due to these causative agents
were unusual, but from 2007 this disease brought great losses in crops of this
species in southern Brazil. In the following years, it has been possible to verify
Mycosphaerella leaf disease in commercial plantations in So Paulo state.

Introduo pertencem aos gneros Mycosphaerella e Teratos-

Muitos patgenos, principalmente fungos,
ocorrem em vrias espcies de eucalipto, desde a
fase de viveiro at os plantios adultos. Dentre as do-
enas fngicas, destaca-se a mancha de micosferela,
causada por um complexo de espcies de fungos que
phaeria. Os fungos T. nubilosa e T. cryptica so con-
siderados os mais importantes em nvel mundial e
so responsveis pela doena foliar mais significati-
va para espcies de eucalipto, especialmente para o
Eucalyptus globulus (Labill) (Carnegie e Ades, 2002;

1
Centro de Fitossanidade- Quarentenrio IAC, CEP-13020-902, Campinas-SP. 2Departamento Cincias Florestais, Faculdade de
Cincias Agronmicas UNESP, CEP-18.610-307, Botucatu-SP.

30 RAPP - Volume 24, 2016

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
Hunter et al., 2009).
Outras espcies de Mycosphaerella e Tera-
tosphaeria demonstram patogenicidade aparen-
temente fraca ou podem atuar como saprfitas no
tecido necrtico, seguidas pela infeco de outras
espcies patognicas, insetos ou senescncia natu-
ral da folha. Devido a alguns rearranjos taxonmi-
cos, principalmente relacionados a anlises filogen-
ticas, algumas espcies que pertenciam ao gnero
Mycosphaerella, foram transferidas para o gnero
Teratosphaeria (Crous, 2009).
Os sintomas associados a essa doena so
variveis, e diferem entre si, dependendo da espcie
do hospedeiro e do patgeno. Nas folhas os sinto-
mas so caracterizados por manchas necrticas lo-
calizadas, que reduzem a capacidade fotossinttica
das folhas ocasionando desfolha precoce em plantas
juvenis.
Em muitos casos, as manchas crescem e coa-
lescem formando leses muito grandes que podem
ocupar toda a superfcie da rea foliar resultando na
degradao da folha. As manchas podem ser arre-
dondadas ou irregulares, de colorao variando de
amarelo-pardo a marrom-escuro, onde se formam
pontuaes escuras, que correspondem aos corpos
de frutificao do patgeno (pseudotcios). Devido
a fatores relacionados estrutura e constituio ce-
lular do parnquima, a intensidade dos sintomas
maior em folhas jovens quando comparadas s fo-
lhas adultas (Smith et al., 2007).
Os danos causados por esses patgenos tam-
bm incluem cancros e morte prematura dos ramos,
e em alguns casos, atrofia e morte da rvore do topo
para a base. As alteraes no metabolismo das r-
vores resultam em reduo do crescimento, alm
disso, essa doena pode contribuir para infeces
provocadas por patgenos secundrios e promover
considerveis prejuzos econmicos.
Quando h condies de umidade favorveis,
os esporos (ascsporos) do fungo so liberados dos
pseudotcios e infectam o hospedeiro por meio da
abertura dos estmatos. Em condies de campo os
ascsporos so dispersos pelo vento, gua de chuva
e insetos. Em condies de viveiro a doena tambm
disseminada por gua de irrigao, circulao de
pessoas, ferramentas, maquinrio entre outras ma-
neiras que permitam que os esporos alcancem os
hospedeiros suscetveis.
Para identificao de muitos fitopatgenos,
RAPP - Volume 24, 2016
um fator importante a especificidade, porm, mui-
tas espcies podem tambm infectar outros hospe-
deiros. Portanto, a taxonomia de Mycosphaerella
spp. e Teratosphaeria spp. baseada em uma srie
de dados e caractersticas, incluindo sintomas no
hospedeiro, padres de germinao dos esporos,
morfologia do fungo em meio de cultivo, e filogenia.
A metodologia mais efetiva de controle para essa do-
ena pode estar relacionada com o desenvolvimento
de variedades resistentes, ou a substituio de plan-
tas suscetveis por espcies mais resistentes.
As fontes de inculo podem ser provenien-
tes de qualquer pas com o qual o Brasil realize im-
portaes de materiais. provvel que esses fungos
tenham sido introduzidos no pas por meio de ascs-
poros dispersos pelo vento ou por insetos, ou tam-
bm pelo movimento de sementes e mudas entre
Brasil, Uruguai e Argentina, devido deteco de al-
gumas espcies que tambm foram constatadas nos
referidos pases.
O hospedeiro: Eucalyptus globulus
A qualidade da madeira e o seu rpido de-
senvolvimento fazem com que o eucalipto seja a r-
vore mais plantada, impulsionando o crescimento de
cultivos comerciais em muitas regies onde foi intro-
duzido (Alfenas et al., 2009; Medrado et al., 2005).
Atualmente, espcies de eucalipto so cultivadas
para os mais diversos fins, tais como papel, celulose,
lenha, carvo, serraria, leos para indstrias farma-
cuticas, mel, ornamentao e quebra-vento, dentre
outros. No Brasil, os plantios de eucalipto ocupam
5,56 milhes de hectares da rea de rvores planta-
das no Pas, localizados principalmente nos Estados
de Minas Gerais (25,2%), So Paulo (17,6%) e Mato
Grosso do Sul (14,5%) (IB, 2015).
O E. globulus foi a primeira espcie de eu-
calipto introduzida no Brasil, no incio do sculo XX
(Braga, 1971; Vitti e Brito, 2003). Originria do su-
deste da Austrlia, incluindo a Ilha da Tasmnia, o sul
de Vitria e as ilhas de Bass Strait (Lavrabre, 2001;
Vitti e Brito, 2003; Barrela, 2011). Apresenta boa ca-
pacidade de produo podendo chegar a at dois ci-
clos de produo vegetativa aps a primeira explora-
o integral (Vitti e Brito, 2003). capaz de suportar
invernos chuvosos e temperaturas mais baixas, e por
este motivo foi introduzida no Rio Grande do Sul de-
vido s condies de clima favorveis (Xavier et al.,
2007).
31
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
Apresenta heterofilia muito aparente. As
folhasjuvenis so ssseis, ovaladas e reco bertas
poruma camada cerosa de cor azulada, surgindo
opostasem caules de seco quadrangular. As folhas
dasrvores adultas so estreitas, alongadas, falci-
formescom uma camada cerosa verde acinzentada
(particularmentena face abaxial), surgindo alterna-
damenteao longo de caules arredondados (Johnson,
1926; Rocha e Santos, 2007).
Devido sua rpida taxa de crescimento, da
polpa de madeira macia e da excelente qualidade
para produo de papel e celulose, uma das es-
pcies de maior demanda no mercado internacional
(Yang e Fife, 2000). Apresenta madeira clara de co-
lorao amarelo-plido, compacta, rija, muito forte
e de grande durabilidade (30 a 50 anos), muito utili-
zada em construo naval, pilares de pontes e quais-
quer obras hidrulicas, marcenaria, lenha e carvo
(Correa, 1931).
Existem quatro subespcies de E. globulus:
E. globulus subesp. bicostata, E. globulus subesp.
maideni, E. globulus subesp. globulus, E .globulus
subesp. pseudoglobulus (Boland et al., 1991, citado
por Vitti e Brito, 2003). Seus principais sinnimos po-
pulares no Brasil so: rvore-de-febre, gomeiro-azul,
eucalipto-limo (Lorenzi e Matos, 2002).
O avano das reas reflorestadas para regi-
es mais quentes e midas, o plantio de espcies
mais suscetveis e a utilizao repetitiva de uma
mesma rea para plantio criaram condies favor-
veis ocorrncia de doenas (Furtado et al., 2008).
Algumas doenas foram constatadas concomitantes
ao crescimento do cultivo de eucalipto no Brasil,
como as manchas causadas por espcies de Myscos-
phaerella e Teratosphaeria, responsveis por gran-
des perdas econmicas em plantios de E. globulus.
A mancha de Micosferela
A doena e seus agentes causais: Mycosphaerella
spp. e Teratoaphaeria spp.
Dentre as doenas foliares mais significati-
vas para o eucalipto, est a mancha de Micosferela
(Mycosphaerella leaf disease - MLD) tambm cha-
mada de mancha de Teratosferia (Teratosphaeria
leaf disease- TLD), causada por um complexo de es-
pcies de Mycosphaerella e Teratosphaeria (Crous et
al., 2009; Hunter et al., 2011). Os fungos T. nubilosa
e T. cryptica so considerados os mais importantes
32 RAPP - Volume 24, 2016
em nvel mundial (Carnegie e Ades, 2002; Hunter et
al., 2009), e segundo Park e Keane (1982b) e Hun-
ter et al. (2009), so as primeiras espcies a infec-
tar tecidos jovens e suculentos, adquirindo nutrien-
tes por meio de uma relao hemibiotrfica com o
hospedeiro. Essas duas espcies de Teratosphaeria
so relevantes para as espcies de eucalipto E. glo-
bulus (Labill) e E. nitens (Deane and Maid.) Maid.,
das quais muitos plantios concentram-se em regies
temperadas (Hunter et al., 2004).
Os gneros de fungos Mycosphaerella e Te-
ratosphaeria (Capnodiales, Dothideomycetes, As-
comycota), se caracterizam pela formao dos
ascos no interior de lculos e estroma unilocular
periteciide, denominado pseudotcio (Alexo-
poulos et al., 1996, Putzke e Putzke, 1998). Os
pseudotcios so produzidos em um aglomerado
de hifas entrelaadas junto ao substrato prprio
bem desenvolvido composto por hifas de colora-
o marrom a marrom acinzentada (Alexopoulos
et al., 1996), caractersticas da ordem Capnodia-
les (Crous, 1998). Atualmente so conhecidas
mais de 150 espcies de fungos dentro dos g-
neros Mycosphaerella e Teratosphaeria, e vrios
gneros anamorfos (alguns ainda no identifica-
dos) associados ao eucalipto, causando manchas
foliares e cancros na haste. (Jackson et al., 2004;
Crous et al., 2007b; Hunter et al., 2011). Segundo
Crous (1998) e Crous et al. (2006), outras espcies de
Mycosphaerella e Teratosphaeria demonstram pato-
genicidade aparente fraca ou podem atuar como sa-
prfitas no tecido necrtico, seguidas pela infeco
de outras espcies patognicas, insetos ou senes-
cncia natural da folha.
Alm de E. globulus, existem relatos na Aus-
trlia de T. cryptica associada com E. marginata e E.
patens (Carnegie e Keane, 1998). Espcies de agen-
tes causais de mancha de micosferela tambm fo-
ram isoladas de E. dunnii, E. benthamii, E. grandis,
E. moluccana, E.nitens, E. saligna, E. urophylla, E.
tereticornis, E. platyphylla, E. deanei, E. grandis,
E. aglomerata, E. camaldulensis, E. botryoides, E.
quadrangulata, E. smithii, E. viminalis, E. maide-
nii, E. grandiflora, Corymbia henryii, C. variegata e
seus hbridos (Ganapathi, 1979; Carnegie e Keane,
1994,1998; Crous, 1998; Crous et al., 2000; Carne-
gie e Ades, 2002; Maxwell et al., 2003; Alfenas et al.,
2009; Hunter et al., 2004; Crous et al., 2007a, 2007b;
Smith et al., 2007; Crous et al., 2009; Perez et al.,
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

2009a; Perez et al. 2009b, 2009c; Teodoro et al.,

2012; Passador et al.,, 2013; Garrett, 2015;Cndido
et al., 2014; Perez et al., 2014; Soria et al., 2014).

Sintomas nos hospedeiros e ciclo vital do patgeno
Os sintomas podem variar de acordo com a
espcie do hospedeiro e do patgeno, bem como o
estdio foliar. Primeiramente, so observadas man-
chas necrticas localizadas que reduzem a capaci-
dade fotossinttica das folhas, ocasionando desfo-
lha precoce em plantas juvenis (Ganapathi, 1979),
segundo Carnegie (2007), o fungo T. nubilosa pode
causar 95% de desfolha das rvores.
Quando no h metodologias eficientes para
o controle, a desfolha pode se repetir ao longo do
ciclo da cultura ocasionando perdas de produtivida- Figura 1. Sintomas de MLD em diferentes estdios foliares
de E. gobulus. Juvenil (). Transio - juvenil para adulta
de, bem como perdas econmicas (Wingfield et al., (T). Adulta (*). Foto: Martha Maria Passador.
2013). No vero, que corresponde ao perodo de
maior converso de energia solar em crescimento,
a desfolha diminui a eficincia dessa converso. No
inverno alm da reduo de temperatura e pluvio-
sidade que afeta naturalmente o desenvolvimento
vegetal, a desfolha leva a planta a redirecionar ener-
gia destinada ao crescimento secundrio para a re-
composio de sua rea foliar, o que prejudica o de-
senvolvimento da planta (Freitas e Berti Filho, 1994;
Garrett, 2015).
As manchas ocasionadas podem ser arre-
dondadas ou irregulares com colorao amarelo-
-pardo a marrom-escuro, e para algumas espcies,
com bordas de cor marrom escuro (Park e Keane,
1982b; Crous, 1998) (Figura 1). Frequentemente, as
leses crescem e coalescem formando leses mui-
to grandes que podem ocupar toda a superfcie da
rea foliar e devido a isso, pode ocorrer a degra-
dao e queda da folha. Os patgenos podem ser
encontrados de maneira unitria ou associados na
mesma folha, bem como na mesma mancha, com
possvel contato de miclios de diferentes espcies
de Mycosphaerella e Teratosphaeria levando anas-
Figura 2. rvores de E. globulus em plantio comercial. r-
tomose e troca de material gentico (Hunter et al., vores com desfolha causada pela mancha de micosferela
2009). Dependendo da espcie do fungo e hospedei- (esq.); rvore tolerante (dir.). Foto: Martha Maria Passa-
ro, possvel observar os pseudotcios do patgeno dor.
na regio das manchas, na face abaxial ou em ambas
as faces da folha. Tambm possvel a formao de o que pode levar morte da rvore (Smith et al.,
cancros nas hastes, como por exemplo, T. cryptica 2007) (Figura 2). As rvores frequentemente tm o
em E. delegatensis. seu metabolismo alterado e isto ocasiona reduo
As plantas altamente suscetveis podem do crescimento. O estresse resultante da doena
ter o seu rendimento comprometido pela doena, faz com que a rvore esteja pr-disposta a outros

RAPP - Volume 24, 2016 33

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

patgenos e insetos, bem como a fatores abiticos
desfavorveis (Carnegie e Keane, 1994; Hunter et al.,
2004).
Os ascsporos consistem na primeira fonte
de inculo, para a maioria das espcies de Mycos-
phaerella e Teratosphaeria (Crous, 2007b; Park e
Keane, 1987). Para ocorrncia da doena e necess-
rio que haja condies favorveis, umidade a partir
de 90% e temperaturas entre 15oC e 25oC (Alfenas,
2009; Crous, 2009). Quando h condies de umida-
de favorveis os ascsporos so liberados dos pseu-
dotcios, dispersos pelo vento e infectam o hospe-
deiro por meio da abertura dos estmatos (Figura 3)
(Park, 1988; Alfenas, 2009).
Aps a infeco, os primeiros sintomas da
doena podem aparecer em um perodo de trs a
quatro semanas em materiais genticos mais susce-
tveis, e seis semanas em materiais mais tolerantes
(Park et al., 2000). Os pseudotcios formam-se aps
oito semanas (Park e Keane, 1987), individualmente
abaixo dos estmatos no tecido necrtico, que por
sua vez, fornecem lugar para a formao dos pseu-
dotcios, e assim a distribuio dos estmatos pode
refletir a quantidade dos pseudotcios. Em Mycos-
phaerella so submersos, pequenos, simples, globo-
sos e pretos com paredes espessas, alguns podem
estar proeminentes, e possuem ostolos centrais fre-
quentemente revestidos por perfises (Crous, 2009).
Os pseudotcios de Teratosphaeria no se encon-
tram totalmente imersos no tecido do hospedeiro,
sendo parcialmente superficiais, e possuem partes
de hamatcios (Crous, 1998; Crous, 2009).
Nos pseudotcios se formaro as ascas,
com oito ascsporos bicelulares ou tricelulares
dependo da espcie (Park et al., 2000), que aps
24 horas germinam formando tubos germinativos
que se desenvolvem a partir das duas extremi-
dades dos esporos. Os ascsporos so altamente
adaptados para sobreviverem desidratao na
superfcie das folhas, por um perodo de at oito
semanas, com baixa perda da infectividade. Estes
esporos em geral podem apresentar forma elip-
soidal, fusiforme ou com extremidades arredon-
dadas, e possuem um ou mais septos. Em Mycos-
phaerella so hialinos, lisos, possuem um septo, e
no apresentam apndices e camadas, e formam-
-se em ascas bitunicadas e fasciculadas (Crous,
2009). Os ascsporos de Teratosphaeria diferem

Figura 3. Ciclo vital de Teratosphaeria nubilosa. Adaptado de Mansilla, P. et al. (2005).Fotos: Martha M. Passador.

34 RAPP - Volume 24, 2016

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

de Mycosphaerella por possurem com camadas j se encontrava amplamente distribudo na Nova

que geralmente se tornam marrons quando ainda
esto nos seus ascos (Crous, 2009).
Muitos estudos sobre esses patgenos apre-
sentam algumas dificuldades relacionadas espo-
rulao para realizao de inoculaes artificiais,
sendo de grande importncia a formao do estado
anamorfo. Os estdios conidiais de anamorfos de es-
pcies de Mycosphaerella e Teratosphaeria so va-
riados, algumas espcies produzem condios em pic-
ndios, outras em acrvulos, outras em conidiforos
(Alexopoulos et al., 1997).
Algumas espcies infectam primeiramente
por condios, porm certos estados anamorfos ainda
so desconhecidos, incluindo o estado anamorfo de
T. nubilosa (Jackson et al., 2008, Alfenas et al., 2009).
Embora este fungo tenha sido relacionado Uwe-
braunia juvenis, essa relao foi considerada duvido-
sa devido rara ocorrncia de condios em meio de
cultura (Crous et al., 2006).
Distribuio mundial da doena
A introduo de espcies de eucalipto em
muitos pases do Hemisfrio Sul no sculo XX con-
tribuiu consideravelmente para a distribuio geo-
grfica de T. nubilosa (Hunter et al., 2009). A pri-
meira constatao desse fungo, fora da Austrlia,
foi no ano de 1950 na frica do Sul. Porm, Lund-
quist e Purnell (1987) acreditam que o fungo j po-
deria estar presente no pas desde 1930. Posterior-
mente, foi relatado em outros pases e, em 1982,
Zelndia (Mohamed et al., 2003). Segundo Lindquist
e Purnell (1987), surtos epidmicos em plantaes
de E. nitens, promoveram um comprometimento de
at 32% de rea foliar por manchas causadas por es-
ses patgenos, causando desfolha de 35 a 50% em
plantas de at trs anos de idade, e tendo como con-
sequncia uma reduo de at 17% no incremento
de madeira.
A ocorrncia de mancha de micosferela, cau-
sada pelo complexo Mycospharella e Teratosphae-
ria, principalmente por T. nubilosa em plantios de
eucalipto, apresentam distribuio mundial (Fi-
gura 4). Alm da Austrlia (Park e Keane, 1982a;
Carnegie e Keane, 1994, Maxwell et al., 2003) e
Nova Zelndia (Hunter, 2004), h relatos na fri-
ca do Sul (Lundquist & Purnell, 1987), Etipia
(Gezahgne et al., 2006), Zimbabwe (Jimu et al.,
2015) e China (Hunter et al., 2009). Os agentes
causais tambm foram relatados em alguns pa-
ses da Amrica do Sul, como Uruguai (Perez et
al., 2009a, 2009b; Soria et al., 2014), Argentina
(Crouset al., 2006; Ramos e Perez, 2014), Chile
(Ahumada et al., 2003) e Brasil (Perez et al., 2009c,
Passador et al., 2012; Teodoro et al., 2012; Passador
et al., 2013; Cndido, 2014).
A primeira constatao de T. nubilosa no Qu-
nia, Tanznia e Zmbia foi em 1995 como Mycos-
phaerella juvenis (Crous, 1998), e na Etipia em 2000
(Hunter et al., 2009). provvel que esse fungo te-
nha chegado Europa por volta do ano 2001, pos-

Figura 4. Distribuio mundial dos agentes causais de mancha de micosferela em eucalipto.

RAPP - Volume 24, 2016 35

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

teriormente constatado em E. globulus na Espanha Existem relatos no Brasil em E. dunnii, E.

(Crous et al, 2004) e em Portugal (Silva et al., 2008;
Hunter et al., 2009; Silva et al., 2009).
No Brasil, surtos epidmicos de manchas fo-
liares, devido a esses agentes causais eram pouco
comuns. At o ano de 2004, foram relatadas apenas
quatro espcies, sem muita importncia epidemio-
lgica, sendo elas M. heimii, M. parkii, M. suttoniae e
T. suberosa, em E. globulus e E. nitens (Alfenas et al.,
2009) e tambm M. scytalidii em E. globulus (Crous
et al., 2006). A preocupao com relao doena
teve seu incio em 2007, com a primeira constata-
o de T. nubilosa (Figura 5) no Rio Grande do Sul, o
que resultou em muitos danos em plantaes de E.
globulus (Perez et al., 2009a). Estudos realizados em
plantios nesta regio constataram que 50 a 90% das
rvores de E. globulus apresentavam sintomas cla-
ros desta doena, bem como a morte de 2,5 a 18,4%
das rvores em plantios de 16 meses, tambm foi as-
sociada referida doena (Ramiro et al., 2007). Nos
anos seguintes, j foi possvel constatar esse patge-
no em plantios comerciais localizados no estado de
So Paulo (Passador et al., 2012).
globulus, E. benthamii, E. grandis, E. moluccana,
E.nitens, E. saligna, E. urophylla e seus hbridos,
ocorrendo em reas de temperaturas entre 15oC
e 25oC e presena de gua nas folhas (Alfenas et
al., 2009; Perez et al, 2009c; Cndido et al., 2014).
Alm de T. nubilosa, outras espcies tambm foram
constatadas no pas: T. pseudafricana, T. ohnowa,
T. pseudoeucalypti, T. flexuosa, T. perpendicularis,
Mycosphaerella heimii,, M. marksii, M. lateralis, M.
gregaria, M. communis, M. crystallina, M. scytali-
dii, Dissoconium dekkeri (=M. lateralis) (Perez et al,
2009c; Passador et al, 2012; Teodoro et al., 2012;
Passador et al., 2013; Cndido et al., 2014).
A deteco de espcies de agentes causais de
mancha de micosferela no Brasil sugere que foram
introduzidas por meio de mudas e sementes, e as-
sim tambm promoveu a introduo em diferentes
locais no pas. Tambm possvel que a introduo
e disseminao tenham ocorrido por meio da dis-
perso natural de ascsporos pelo vento, sendo esse
um grande fator responsvel pela distribuio destes
fungos (Park e Keane, 1982b; Park, 1988; Hunter et

Figura 5. A-D: Folhas de Eucalyptus globulus com manchas causadas por T. nubilosa. A: manchas em folha jovem. B:
face abaxial de folha jovem. C: manchas em folha adulta. D: face abaxial de folha adulta. E: pseudotcio contendo ascas
e ascsporos. F: ascsporos germinados em meio de extrato de malte (MEA). F: cultura de T. nubilosa em meio MEA.
Barras: 5 mm (B, D) e 20 m (E, F). Fonte: Passador et al., 2012.

36 RAPP - Volume 24, 2016

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
al., 2009).
provvel tambm que a introduo dos
patgenos tenha ocorrido pelo movimento de se-
mentes e mudas entre Brasil, Uruguai e Argentina.
Algumas das espcies Mycosphaerella e Teratospha-
eria isoladas no Brasil, tambm foram constatadas
no Uruguai como M. lateralis, M. marksii, T. nubilosa
e T. ohnowa, T. nubilosa (Prez et al., 2009a, 2009b).
Alm do Uruguai, as fontes de inculo podem ser
provenientes de qualquer pas com o qual o Brasil
realize importaes de materiais.
Os agentes causais e suas distncias taxonmicas
Algumas espcies podem ser diferenciadas
umas das outras por meio dos padres de germina-
o dos ascsporos (Ganapathi, 1979; Park e Keane,
1982a; Crous, 1998), e quando cultivadas em meio
de cultura podem apresentar miclio cotonoso ou
no, e coloraes distintas (Crous, 1998; Maxwell,
2003). Por exemplo: germinao bipolar em linha
reta e com tubo germinativo sem ramificaes como
o fungo T. nubilosa; em apenas em um dos plos do
esporo como em M. gregaria; ou germinao bipo-
lar com ramificaes perpendiculares como em M.
lateralis.
Na maioria das espcies, no ocorre forma-
o do pseudotcio em meio de cultura, mesmo
que sejam axnicas, e so encontradas somente nas
manchas em folhas (Park e Keane, 1982a; 1982b).
Em meio de cultura (extrato de malte MEA), o cres-
cimento micelial e a colorao podem variar entre
tons de cinza, marrom e verde escuro, porm com
velocidades de crescimento semelhantes, crescen-
do cerca de dois centmetros em quatro semanas
(Crous, 1998, Maxwell, 2003).
A taxonomia relacionada Mycosphaerella
e Teratosphaeria e a identificao de espcies que
pertencem a estes gneros torna-se difcil algumas
vezes, principalmente em funo dos hospedeiros,
o que j foi considerado como fator primrio para
identificao. Atualmente, caractersticas morfol-
gicas, conexes com teleomorfos, bem como os pa-
dres de germinao dos ascsporos, tm sido ca-
ractersticas taxonmicas teis para a classificao
desses patgenos (Crous, 1998, Hunter et al., 2011).
Devido a alguns rearranjos taxonmicos,
principalmente relacionados a anlises filogenticas
(Crous 2001, Crous, 2006, 2007b; Perez 2009c), al-
gumas espcies que pertenciam ao gnero Mycos-
RAPP - Volume 24, 2016
phaerella, foram transferidas para o gnero Teratos-
phaeria, como: T. molleriana, T. nubilosa, T.cryptica,
T. ohnowa, T. parva, T. africana. Porm, muitas con-
tinuam em Mycosphaerella, como: M. crystalina, M.
lateralis, M. marksii, M. gregaria, M. parkii. Apesar
das mudanas nos nomes das espcies dos agentes
causais, o nome comum para a doena no foi al-
terado (Crous, et al., 2007a, 2007b; Hunter et al.,
2009). Recentemente os termos mancha de Micos-
ferela (Mycosphaerella leaf disease - MLD) e man-
cha de Teratosphaeria (Teratosphaeria leaf disease
- MLD) foram propostos para as doenas causadas
por Mycosphaerella spp. e Teratosphaeria spp, res-
pectivamente (Hunter et al., 2011).
Metodologias para controle
Tcnicas de melhoramento gentico so bas-
tante importantes para o controle de mancha de
micosferela, principalmente em plantios de E. glo-
bulus, nos quais acarreta grandes prejuzos. A forma
mais efetiva de controle para essa doena pode estar
relacionada com o desenvolvimento de variedades
resistentes, ou a substituio de plantas suscetveis
por espcies consideradas mais resistentes, como foi
aplicado em alguns locais como frica do Sul (Lund-
quist e Purnell, 1987) e noroeste da Austrlia (Mo-
hammed et al., 2003). Esta estratgia tambm foi
utilizada em plantaes jovens com E. delegatensis
e E. regnans, na Nova Zelndia, que foram toma-
das pela doena, o que conduziu ao uso de espcies
como o E. nitens (Crous, 2009).
Em viveiros, o controle com produtos qumi-
cos torna-se mais fcil, porm, no a melhor solu-
o quando se trata de condies de campo. Fatores
como a penetrao exclusivamente por aberturas es-
tomticas podem ser levados em considerao para
o desenvolvimento de plantas por meio de melhora-
mento gentico. Por exemplo, o atraso na abertura
dos estmatos pode contribuir para resistncia, pois
os ascsporos germinados na superfcie do hospe-
deiro durante o perodo noturno no encontrariam
os estmatos abertos e dessecariam, evitando a en-
trada do patgeno e, consequentemente, a infeco
do hospedeiro.
A utilizao de hbridos entre espcies resis-
tentes e suscetveis tambm uma alternativa vi-
vel, por exemplo, hbridos de E. globulus (suscetvel
a T. nubilosa) e E. grandis (resistente a T. nubilosa)
(Carnegie e Ades, 2002; Carnegie e Keane., 1998;
37
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
Milgate et al. 2005). Hbridos interespecficos que
apresentem transio mais rpida de folhas jovens
para adultas tambm podem ser utilizados como for-
ma de controle (Hamilton et al., 2010).
A busca de material gentico resistente, tam-
bm pode envolver estudos relacionados aos meca-
nismos de defesa estruturais pr-formados do hos-
pedeiro, como pilosidade, espessamento da cutcula,
nmero e distribuio dos estmatos, lignificao
das paredes celulares, nmero e espaamento das
clulas do parnquima, xilema e fibras esclerenqui-
mticas presentes nas nervuras das folhas. Segundo
Silva et al. (2005), tecidos parenquimticos tambm
podem exibir resistncia aos patgenos, atravs da
organizao e caractersticas das clulas. Smith et al.
(2007) verificaram que E. nitens, uma espcie consi-
derada resistente aos agentes causais de mancha de
micosferela, possui uma maior proporo de parn-
quima palidico e uma menor quantidade de espa-
os intercelulares em suas folhas.
Outro fator que pode contribuir fortemente
o gerenciamento de aes quarentenrias, pois o
primeiro passo para o controle de doenas. Tais me-
didas devem ser aplicadas e atualizadas para reduzir
o risco da disperso de fungos fitopatognicos (Auer
e Santos, 2009), assim como para T. nubilosa, que
est cada vez mais presente em novos ambientes
(Hunter et al., 2009; Garret, 2015). Portanto, im-
portante que as espcies de Mycosphaerella e Tera-
tosphaeria, relatadas no Brasil e em pases vizinhos
sejam incorporadas em normas quarentenrias e lis-
tas de discusso para controlar o avano da doena
no Brasil.
De maneira geral, para o desenvolvimento
de metodologias de controle torna-se necessrio o
conhecimento dos patgenos, seu habitat e exign-
cias fisiolgicas para sua sobrevivncia, no somente
para espcies de Mycosphaerella e Teratosphaeria,
como tambm para agentes causais de muitas doen-
as. Desta maneira, podero ser desenvolvidas solu-
es eficazes e menos agressivas ao meio ambiente.
Dentre as medidas adotadas atualmente por
empresas localizadas na regio Sul do pas, assim
como no Uruguai, a seleo de plantas resistentes,
principalmente aquelas remanescentes dos campos
atacados e sem sintomas uma metodologia vivel.
A partir destas plantas possvel obter clones e fa-
zer cruzamentos para futuros testes de prognies, e
inoculaes em ambientes controlados para a sele-
38 RAPP - Volume 24, 2016
o de materiais ainda mais resistentes dentro de E.
globulus.
A hibridao interespecfica outro caminho
que est sendo seguido visando incorporao do
carter da qualidade da madeira presente em E. glo-
bulus em outras espcies como: E. grandis,E. uro-
phyllae E. saligna. Estes materiais mais resistentes
selecionados apresentam atualmente grande valor
pra obteno de hbridos.
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41
 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)

MANEJO DO MLDIO DA CEBOLA:

AVANOS E BARREIRAS DA PESQUISA
CIENTFICA
Edivnio R. Arajo1 e Daniel P. Alves1

RESUMO
A cebola uma hortalia de grande importncia econmica e social no
Brasil e no mundo. Contudo, estudos mais recentes sobre agentes etiolgicos
que causam danos cultura so relativamente escassos. Entre esses agentes, o
causador do mldio, Peronospora destructor, um dos mais destrutivos, uma vez
que no existem cultivares resistentes disponveis no Brasil, o que leva ao uso
intensivo de defensivos. Pretende-se, nesta reviso, abordar a ocorrncia global
do patgeno, bem como relatar os principais grupos de pesquisa que trabalham
com o patossistema. Questes relacionadas ao manejo da doena sero trata-
das, destacando-se os sistemas de alerta j documentados ou ainda em fase de
validao. Os principais avanos e obstculos na busca de resistncia tambm
sero discutidos, abordando tpicos sobre: descoberta de genes de resistncia;
dificuldade de introgresso de genes de resistncia em materiais comerciais; e
utilizao de marcadores moleculares citoplasmticos e nucleares, que auxilia-
ro no desenvolvimento de hbridos. Espera-se, a partir dessas abordagens, es-
clarecer aspectos biolgicos, epidemiolgicos e de manejo do mldio da cebola,
contribuindo para o debate e avano das fronteiras do conhecimento sobre esse
patossistema.

SUMMARY
Onion is a vegetable of great economic and social importance in Brazil
and worldwide. However, there are few recent studies on etiological agents that
cause crop damages. Among these agents, the causal agent of onion downy mil-
dew, Peronospora destructor, is one of the most destructive, since there are no
resistant cultivars available in Brazil, leading to the intensive use of fungicides.
In this review, we intend to address the overall occurrence of the pathogen as
well as report the main research groups working with the pathosystem. Issues
related to disease management will be addressed, especially the forecasting sys-
tems already documented or still in the validation step. The main progress and
obstacles in resistance search will also be discussed, addressing topics: finding
resistance genes; difficulty of the resistance gene introgression into commercial
materials; and use of cytoplasmic and nuclear molecular markers that will assist
in the development of hybrids. We hope, from these approaches, to clarify to-
pics about biological, epidemiological and management of onion downy mildew,
contributing to the debate and advance the knowledge frontiers about this pa-
thosystem.

1
Epagri/Estao Experimental de Ituporanga, Estrada Geral Lageado guas Negras, 453, Ituporanga SC, 88400-000

42 RAPP - Volume 24, 2016

 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)
Introduo
A cebola (Allium cepa L.) a terceira hortalia
em importncia econmica no mbito nacional. Em
2015, a rea estimada de plantio foi de aproximada-
mente 58 mil hectares, enquanto a produo brasi-
leira esteve prxima a 1,6 milhes de toneladas. A
produo estimada da cultura se distribui da seguin-
te maneira: regio Nordeste (18,3%), Sudeste (22%),
Sul (53,1%) e Centro-Oeste (6,6%). No h registros
significativos de produo de cebola na regio Norte
do pas (IBGE, 2015). Apesar da relevncia da cultu-
ra, estudos que abordam aspectos fitopatolgicos
ainda so relativamente escassos quando compara-
dos com os j existentes para outras hortalias, ci-
tando o tomate e a batata.
As doenas que acometem a cebola tm inci-
dncia e/ou severidade dependente de diversos fa-
tores, tais como tolerncia/resistncia dos cultivares
utilizados, sistema de produo (mudas em canteiros
ou semeadura direta); poca de semeadura; popula-
o de plantas; condies climticas locais; presen-
a ou ausncia de outras plantas da mesma famlia;
prticas de manejo do solo e equilbrio nutricional;
diversidade da populao do fitopatgeno; entre ou-
tros. Dessa forma, possvel observar diferenas de
relevncia das doenas entre regies. Nota-se que,
enquanto em regies com clima tropical, a mancha
prpura (Alternaria porri) uma doena muito preo-
cupante (Reis & Henz, 2009); na regio Sul, o mldio
est entre os principais fatores biticos limitantes da
produo (Wordell Filho & Boff, 2006).
A seguir, sero abordados tpicos relaciona-
dos ao histrico, epidemiologia, manejo e resistn-
cia gentica ao mldio da cebola, relatando os prin-
cipais avanos e barreiras nas tentativas de reduo
de prejuzos causados pela doena.
Etiologia e histrico do mldio da cebola
O primeiro relato documentado de mldio em
cebola ocorreu em 1841, na Inglaterra. Berkeley, ao
descrever as caractersticas morfolgicas do patge-
no que causava a doena, o classificou em um primei-
ro momento como Botrytis destructor. A ausncia
de visualizao ou descrio ilustrativa de osporos
(esporos sexuais) causaram controvrsias na aloca-
o do patgeno dentro do gnero Peronospora nos
anos seguintes. Em 1847, Unger prope o nome P.
schleideni, aceito entre taxonomistas da rea por
vrios anos. Algumas outras propostas de classifi-
RAPP - Volume 24, 2016
cao foram apresentadas at o incio do sculo XX,
citando B. parasitica, P. schleideniana e P. alliorum
(Yarwood, 1943). Porm, o nome P. destructor, pro-
posto aps reviso realizada por Berkeley, em 1860,
o utilizado atualmente nos trabalhos e manuscritos
produzidos. Assim sendo, o agente causal do mldio
da cebola, Peronospora destructor (Berkeley) Caspa-
ry ex Berkeley pertence famlia Peronosporaceae,
ordem Peronosporales, classe Oomicetos e subdivi-
so Mastigomicotina.
O mldio da cebola tem ocorrncia global,
sendo relatado nos principais pases produtores
da hortalia. Estimativas de perdas mais atuais no
esto relatadas, mas segundo Develash & Sugha
(1997), em condies favorveis, a doena pode cau-
sar uma reduo na produtividade de at 75%.
Os sintomas da doena podem ser observa-
dos em qualquer estdio de desenvolvimento da
cultura, tanto em folhas como em hastes florais. Ini-
cialmente observam-se manchas ovaladas de tonali-
dade verde-claro no sentido longitudinal das folhas
(Figura 1A). Um mofo violeta-acinzentado, corres-
pondente s estruturas do patgeno, pode ser ob-
servado em condies de alta umidade (Figura 1B),
nas primeiras horas da manh (Wordell Filho & Boff,
2006). comum, aps a infeco por P. destructor e
a formao de eventuais leses necrticas, que estas
sejam colonizadas por fungos saprfitas, em especial
por espcies de Stemphylium, o que pode causar al-
guma incerteza quanto diagnose. Por se tratar de
um organismo biotrfico, dificilmente o patgeno
causar a morte da planta, sendo o subdesenvol-
vimento (Figura 1C), com consequente reduo de
produtividade, os principais danos causados pelo
oomiceto.
A vasta distribuio do patgeno (Figura 2)
pode ser explicada pela ampla faixa trmica na qual
P. destructor consegue sobreviver e reproduzir. Por
se tratar de um parasita obrigatrio, restos culturais
e plantas invasoras podem ser fontes de inculo,
como demonstrado parcialmente no ciclo de vida
esquematizado do patgeno (Figura 3), contudo,
ainda no existem estudos aprofundados que com-
provem a importncia epidemiolgica dessas fon-
tes, em especial, das plantas invasoras. Apesar da
adaptabilidade trmica, P. destructor possui tempe-
raturas timas de desenvolvimento e esporulao.
Segundo Hildebrand & Sutton (1982), a esporulao
do patgeno ocorrer apenas em temperaturas in-
43
 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)

Figura 1. Sintomatologia do mldio em folhas da cebola, causado por Peronospora destructor. A manchas ovaladas
de tonalidade verde-claro em sentido longitudinal da folha; B sinais do patgeno sobre a folha, dando um aspecto de
mofo acinzentado; C plantas sob infeco da doena, apresentando subdesenvolvimento. A seta e o crculo indicam
sintoma da doena e sinais do patgeno, respectivamente.

feriores a 24C, associado a umidade relativa do ar
95%. Bashi & Aylor (1983) relataram que a tempe-
ratura de 10C foi a ideal para esporulao do pat-
geno, sendo a esporulao reduzida em funo do
aumento da temperatura e de horas de exposio
luz solar. Por sua vez, Bulovien & Survilien (2006)
constataram que uma alternncia na temperatura
(15C por oito dias, seguido de cinco dias a 22C),
sob elevada umidade, favoreceram a esporulao de
P. destructor. O que se tem como consenso que a
doena favorecida por condies de alta umidade
associada a temperaturas amenas. Isso explica, em
parte, a razo de o mldio da cebola no ser uma
doena to preocupante na regio central do Brasil,
que caracterizada por umidade relativa mais baixa
e temperatura mais elevada quando comparada s
regies Sudeste e Sul.
Principais grupos e linhas de pesquisa sobre mldio
da cebola no mundo
Embora a doena tenha sido relatada em
mais de 40 pases (Farr & Rossman, 2016), o nmero
de grupos de pesquisa que trabalham com o patos-
sistema bem mais reduzido. Pases como a ndia
(Thakur & Mathur, 2002) e o Brasil (Wordell Filho &
Boff, 2006) classificam a doena como de alta rele-
vncia em virtude do seu potencial destrutivo e do
valor comercial da cultura. Em pases onde a rea de
cultivo da cebola no to extensa ou o monocul-
tivo no to evidente, a doena pode no causar
perdas elevadas, mesmo sendo endmica. Alm dis-
so, as diferentes pocas de cultivo adotadas nos di-
versos pases tambm influenciam no surgimento de
epidemias. Nota-se que os grupos atuais de pesquisa
(publicaes de fcil acesso entre 2005-2016) esto
localizados na Europa, sia e Amrica do Sul (Figura
2). Centros de pesquisa com relevncia em estudos
sobre cebola, como a Washington State University,
nos Estados Unidos, e o Agriculture and Agri-Food
Canada, no Canad, vem se dedicando nos ltimos
anos a estudos com bacterioses ps-colheita (com-
plexo de gneros e espcies) e queima das pontas da
cebola (Botrytis squamosa), respectivamente. Sendo
assim, no listam entre os centros de pesquisa que
tm publicado trabalhos sobre mldio da cebola re-
centemente.
Outros fatores que podem estar associados a
uma limitada produo cientfica sobre o mldio da

44 RAPP - Volume 24, 2016

 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)

Figura 2. Pases com relatos registrados de ocorrncia do mldio da cebola (Peronospora destructor) e centros de pes-
quisa com artigos tcnico-cientficos sobre o patossistema, publicados em peridicos especializados no perodo de
2005-2016. Pases com registro de ocorrncia de mldio Amrica: Argentina, Bolvia, Brasil, Canad, Costa Rica, Cuba,
El Salvador, Estados Unidos, Guatemala, Mxico, Panam, Uruguai e Venezuela. frica: frica do Sul, Ilhas Maurcio,
Lbia, Qunia, Tanznia e Zimbbue. Europa: Alemanha, ustria, Bulgria, Ilhas Canrias, Esccia, Espanha, Finlndia,
Inglaterra, Irlanda, Itlia, Grcia, Holanda, Litunia, Polnia, Portugal, Repblica Checa e Rssia. sia: China, Coria,
ndia, Japo, Paquisto, Tailndia e Taiwan. Oceania: Austrlia e Nova Zelndia (Farr e Rossman, 2016; Yarwood, 1943;
Moreno e Hernndez, 1992; Develash e Sugha, 1997).

cebola so: i) o patgeno um organismo biotrfi- anteriormente, a utilizao de molculas com ao

co, o que faz necessria a manuteno do inculo
in planta; ii) a eficincia das molculas de controle,
em especial o metalaxyl, que at o presente tem
controlado de forma satisfatria a doena; iii) e a
dificuldade de obteno de cultivares com elevado
nvel de resistncia. Na figura 2 apresentado um
mapeamento com a ocorrncia relatada do mldio
da cebola no mundo, alm dos principais grupos que
realizam pesquisas sobre a doena, com respectivas
reas de estudo. O mapeamento foi realizado com
base nas produes tcnico-cientficas publicadas
em peridicos especializados no perodo de 2005-
2016.
Manejo e racionalizao no uso de defensivos qu-
micos
O manejo do mldio da cebola baseia-se, prin-
cipalmente, no controle qumico. Como mencionado
sistmica, em especial o metalaxyl, tem sido a for-
ma mais eficiente de controlar a doena at o pre-
sente momento (Develash & Sugha, 1997; Wordell
Filho et al., 2007). Molculas alternativas, tais como
fosfito de potssio, acibenzolar-s-metil e extrato de
alga mostraram baixa eficincia de controle (Wordell
Filho et al., 2007). Sendo assim, o metalaxyl, asso-
ciado a algumas molculas de efeito protetor, tais
como clorotalonil e mancozeb, vem sendo utilizadas
no Brasil h pelo menos 20 anos. intrigante notar,
que apesar do monocultivo da cebola nas princi-
pais regies produtoras do sul do pas e da aplica-
o frequente da mesma molcula, ainda no foram
constatadas populaes insensveis do patgeno aos
produtos aplicados, em especial o metalaxyl. Uma hi-
ptese para a explicao desse fato seria a perda de
fitness ou competitividade j relatada para outros
oomicetos. Essa alterao na competitividade pode

RAPP - Volume 24, 2016 45

 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)

Figura 3. Esquema simplificado do ciclo de vida de Peronospora destructor, agente causal do mldio da cebola. Adaptado
de Bayer CropScience (http://wwwbayercropscience.com.mx).

ser distinta conforme o patossistema. Em estudo re-
alizado com Plasmopara viticola, causador do mldio
da videira, no municpio de Holambra, Brasil, Gisi
& Sierotzki (2008) relatam que isolados resistentes
azoxistrobina tendem a desaparecer quando no
submetidos aplicao do produto. Essa prevalncia
de isolados sensveis azoxistrobina na ausncia do
fungicida indica uma perda de competitividade da-
queles que j adquiriram resistncia. Por outro lado,
isolados de espcies de Phytophthora resistentes
mefenoxam j foram caracterizados como sendo
igualmente ou at mais agressivos que isolados sen-
sveis (Caf-Filho & Ristaino, 2008; Chapara et al.,
2011). Ainda no existem dados publicados nessa
linha de pesquisa para o mldio da cebola.
Outras estratgias vm sendo desenvolvidas
no intuito de racionalizar o uso dos defensivos qu-
micos utilizados no controle do mldio. A reduo
ou o uso de forma mais racional de agrotxicos vai
ao encontro de demandas da sociedade e polticas
pblicas, que exigem ambiente e alimentos menos
contaminados pelo homem.
No final da dcada de 1950, na Holanda, fo-
ram realizados os primeiros trabalhos que visavam
estabelecer um sistema de previso para o mldio da
cebola (Figura 4), baseados em parmetros clim-
ticos (Palti, 1989). Contudo, o primeiro sistema de
previso a ser nomeado foi desenvolvido por Jesper-
son & Sutton (1987) e foi chamado de DOWNCAST
(acrnimo de downy mildew forecaster). O siste-
ma foi desenvolvido no Canad e baseia-se em tem-
peratura, umidade relativa do ar e precipitao para
prever esporulao e infeco do patgeno. Os au-
tores testaram fungicidas com ao sistmica e pro-

46 RAPP - Volume 24, 2016

 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)
tetora dentro do sistema. Concluiu-se que, apesar
do DOWNCAST ter uma boa preciso na previso
da doena, a aplicao prtica do sistema ainda no
poderia ser efetuada pela dificuldade de previso do
primeiro ciclo de infeco, o qual seria decisivo para
uma maior ou menor intensidade da doena. Apro-
ximadamente 10 anos mais tarde, Visser (1998) re-
latou um aprimoramento do modelo DOWNCAST,
utilizando mais parmetros, como a quantificao do
molhamento foliar. Mesmo com esse avano, o autor
recomenda mais esforos para que o sistema funcio-
ne plenamente e possa ser aplicado na prtica.
Entre o primeiro modelo nomeado e seu apri-
moramento, Battilani et al., (1996), na Itlia, props
um modelo tambm baseado em parmetros clim-
ticos (temperatura, umidade relativa e molhamento
foliar), o qual foi nomeado como ONIMIL (acrnimo
de onion downy mildew). Segundo os autores, o
modelo, que utiliza regras empricas e matemticas,
seria capaz de determinar, diariamente, a probabili-
dade de ocorrncia do primeiro ciclo infeccioso, que
seria o momento mais adequado para o incio das
pulverizaes com fungicidas. Nesse caso tambm
foi sugerido maiores ajustes para que ocorra aplica-
o prtica a nvel de campo.
Os modelos supracitados so melhor clas-
sificados como sistemas de aviso ou sistemas
de alerta. O termo sistema de previso induz a
pensar que as medidas de controle sero tomadas
antes mesmo do processo de infeco e/ou esporu-
lao do patgeno. No entanto, para tais modelos,
os dados climticos utilizados correspondem a um
Figura 4. Histrico em ordem cronolgica dos sistemas de aviso/previso para o mldio da cebola (Peronospora destruc-
tor), com respectivos avanos e aprimoramentos.
RAPP - Volume 24, 2016
perodo j passado, ou seja, possvel que o proces-
so infeccioso tenha iniciado. Esse fato ressaltado
pelos autores do modelo ZWIPERO, os quais afir-
mam que este se trata de um verdadeiro sistema de
previso. Friedrich et al., (2003), ao desenvolverem
o ZWIPERO (acrnimo de ZwiebelPeronospora
forecast), modelo alemo baseado em variveis cli-
mticas (temperatura, umidade, molhamento foliar
e precipitao), afirmavam que o modelo matemti-
co ZWIPERO, por considerar dados previstos, e no
apenas dados j coletados, possuia a capacidade de
predizer os riscos de esporulao e infeco de P.
destructor, e consequentemente, realizar o manejo
com fungicidas protetores, e no apenas com sist-
micos, como ocorrido nos modelos anteriores.
Outro sistema, elaborado no Reino Unido,
e que considera temperatura e umidade relativa
para previso do mldio da cebola, foi desenvolvi-
do por Gilles et al., (2004). J dispondo dos dados
anteriores, os autores compararam o sistema que
elaboraram, denominado MILIONCAST (acrnimo
de mildew on onion forecast), com aqueles rela-
tados na literatura. Segundo os autores, sob condi-
o controlada, esporngios foram produzidos mais
rapidamente entre 8 a 12 C, aps cinco horas de
alta umidade, durante perodos escuros. O modelo
MILIONCAST teve predies de esporulao mais
precisas que os sistemas DOWNCAST e ONIMIL
nos diferentes ensaios avaliados.
Nota-se que apesar do desenvolvimento de
modelos matemticos e/ou empricos cada vez mais
precisos com relao previso dos processos de
47
 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)
esporulao e infeco de P. destructor, poucos so
os dados sobre a aplicao prtica desses modelos.
O objetivo primordial dos sistemas de aviso ou sis-
temas de previso racionalizar a aplicao de de-
fensivos qumicos, preferencialmente por meio de
um racionamento do produto. Contudo, regies com
condies ambientais altamente favorveis ocor-
rncia da doena, associado a alta concentrao de
inculo podem dificultar esse racionamento. Logo,
um sistema de previso de doena deve ser validado
para determinada regio, antes da adoo do mes-
mo naquele local. Mais recentemente, Arajo et al.,
(2015) avaliaram a campo, na regio Sul do Brasil,
um sistema de aviso do mldio da cebola, baseado
em uma modificao da tabela de Wallin, proposta
para requeima da batata, a qual considera diferentes
combinaes de temperatura e umidade relativa do
ar. Nesse ensaio inicial foi possvel reduzir considera-
velmente o nmero de aplicaes de metalaxyl-m/
clorotalonil, sem afetar significativamente a produ-
tividade. Repeties do ensaio sero realizadas para
validao do sistema. A correlao entre a quantida-
de de esporngios de P. destructor no ar e a seve-
ridade do mldio, realizada por Marcuzzo & Duffeck
(2015) na regio Sul do Brasil, poder ser mais uma
ferramenta e/ou indicador a compor o sistema de
aviso em desenvolvimento.
importante salientar que os sistemas de avi-
so ou previso no so imutveis. Ao contrrio dis-
so, eles precisam sempre sofrer atualizaes, tanto
no que diz respeito ao uso de produtos com elevada
eficincia de controle, como a fatores relacionados
a histrico da rea e da cultura nas regies onde se
pretende adot-los. Nos tpicos seguintes sero tra-
tados aspectos relacionados a uma das principais,
se no a principal forma de manejo de doenas de
plantas: resistncia gentica.
Genes de resistncia e a dificuldade de introgresso
A interao entre plantas e patgenos com-
plexa e envolve constantes mudanas, em mbito
gentico, para que os organismos envolvidos consi-
gam atingir o objetivo frente ao processo de infec-
o. A essas constantes mudanas adaptativas que
ocorrem decorrentes da interao planta-patgeno
d-se o nome de coevoluo. Enquanto os patge-
nos buscam superar as barreiras de defesa das plan-
tas e iniciar a colonizao nos tecidos, as plantas por
sua vez apresentam um complexo sistema de defesa
48 RAPP - Volume 24, 2016
para impedir a invaso dos patgenos e o processo
de doena (Dalio et al., 2014). Essa a mesma ao
observada quando uma planta de cebola submeti-
da ao ataque de P. destructor. Entender esta intera-
o indispensvel para que se tenha um eficiente
sistema de manejo.
Atualmente, o nmero de cultivares de cebo-
la com genes de resistncia ao mldio disponvel no
mercado limitado, logo a presso de seleo sobre
populaes de P. destructor baixa. Essa uma das
possveis explicaes para a inexistncia de classifi-
cao subespecfica, em nvel de raa, para o pat-
geno. Outra possvel razo para esse fato seria uma
reduzida diversidade gentica inerente espcie.
Contudo, estudos mais aprofundados nessas reas
ainda precisam ser realizados.
A resistncia de plantas a patgenos consi-
derada o mtodo de controle mais eficaz e economi-
camente vivel para o controle de doenas de plan-
tas, uma vez que a tecnologia j est disponvel na
semente, no onerando o custo de produo. Adi-
cionalmente, o uso de resistncia gentica o m-
todo de controle que menos agride ao ecossistema,
pois dispensa ou reduz significativamente a necessi-
dade de utilizao de defensivos qumicos.
No Brasil, se faz necessrio um grande nme-
ro de pesquisas com o patossistema, principalmente
para grupos alocados no sul do pas. A regio sul do
Brasil concentra mais de 50% da produo nacional,
sendo o mldio um dos principais fatores biticos res-
ponsvel pela queda de produo. Alm das perdas
diretas, existe tambm um elevado custo despendi-
do para controle da doena, uma vez que no raro
encontrar produtores que utilizam o controle qumi-
co uma a duas vezes por semana. A doena tambm
causa considervel dano durante a fase de produo
de sementes, com relatos de perdas entre 30 a 70%
no Brasil (Verona et al., 1996).
Os primeiros registros de busca por resistn-
cia ao mldio da cebola datam do incio da dcada
de 1950 (Figura 5), com trabalhos que visavam iden-
tificar e estudar a herana da resistncia. Em 1952,
Warid & Tims (citados por Cramer & Havey, 1999)
propuseram que a resistncia ao mldio encontrada
no cultivar Calread era determinada por dois locus
denominados s1 e s2. A resistncia ao patgeno foi
determinada como sendo recessiva, expressando-se
em maior magnitude quando ambos os genes esti-
vessem em homozigose, s1s1s2s2. No entanto, segun-
 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)
Figura 5. Esquema resumindo e ordenando de forma cronolgica dos principais trabalhos envolvendo identificao e
estudo do gene de resistncia ao mldio da cebola.
do Scholten et al., (2007), essa resistncia era res-
trita s hastes florais, no havendo resistncia nas
folhas. Wordell Filho & Boff (2006) citam uma fonte
de resistncia ao mldio em germoplasma brasileiro,
o cultivar Conquista, que teria apresentado boa to-
lerncia ao mldio no escapo floral durante a produ-
o de semente.
Em 1990, van der Meer & de Vries relataram
uma resistncia completa ao mldio encontrada em
Allium roylei, e mostraram que essa espcie poderia
ser cruzada com A. cepa gerando hbridos parcial-
mente frteis. Allium roylei uma espcie silvestre
originada do subcontinente Indiano. A espcie tam-
bm pode ser fonte de resistncia queima das pon-
tas, causada por Botrytis squamosa, e antracnose
causada por Colletotrichum gloeosporioides (Galvan
et al., 1997; Scholten et al., 2007; Kohli & Gohil,
2009).
Kofoet et al., (1990) realizaram o retrocruza-
mento do hbrido interespecfico (A. roylei x A. cepa)
com cebola (A. cepa) e obtiveram uma proporo
de plantas resistentes e suscetveis que suportou a
hiptese de que a resistncia originria de A. roylei
era devida a um gene dominante, denominado Pd.
Segundo Thakur & Mathur (2002), quando plantas
de cebola portadoras de gene de resistncia so con-
frontadas com P. destructor ocorre uma tpica reao
RAPP - Volume 24, 2016
de hipersensibilidade, devido ao acumulo de subs-
tncias de defesa, como fitoalexinas.
Posteriormente, de Vries et al., (1992b), anali-
sando a gerao filial da autofecundao de um hbri-
do interespecfico de A. roylei x A. cepa observaram
uma taxa de segregao diferente da esperada (3 re-
sistente: 1 suscetvel), sugerindo a existncia de um
segundo gene, Pd2, envolvido na resistncia. Segun-
do os autores esse segundo gene estaria fracamente
ligado ao locus Pd (r=0,32). Contudo, trabalhos pos-
teriores com marcadores moleculares demonstra-
ram que a resistncia ao mldio derivada de A. roylei
era realmente devido a um nico gene (Scholten et
al., 2007). Shiguo & Kik (2008) relatam que so co-
muns os casos de distoro na segregao em popu-
laes originrias de cruzamentos interespecficos.
Scholten et al. (2007) consideram tambm que a
porcentagem do genoma de A. roylei nos indivduos
F2 poderia causar a distoro nas segregaes espe-
radas. Van Heusden et al., (2000b) mostraram que
em populaes F2, a mdia de alelos provenientes
de A. roylei eram de 56%, contudo, entre indivduos
isolados essa porcentagem poderia variar de 32% a
85%. Todas essas situaes contriburam para a con-
fuso inicial quanto ao nmero de genes envolvidos
na resistncia ao mldio. Entretanto, essa questo se
elucidou por completo com o trabalho de Scholten
49
 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)
et al., (2007), o qual demonstrou a presena de um
gene recessivo letal proximamente ligado ao gene de
resistncia introgredido de A. roylei. A presena des-
se gene letal o principal fator daquela distoro na
segregao, observada nas populaes F2.
A partir da dcada de 1990, diversos traba-
lhos com marcadores moleculares foram conduzidos
no intuito de mapear o gene de resistncia. De Vries
et al., (1992a) encontraram marcadores RAPD (Ran-
dom Amplified Polymorphism DNA) a 2,6 cM do gene
de resistncia. Posteriormente foram desenvolvidos
marcadores SCAR (Sequence Characterized Amplified
Region) para amplificar uma regio de 20 pb proxi-
mamente ligada ao locus Pd. No entanto, medida
que prosseguiam os retrocruzamentos, esses mar-
cadores comeavam a perder o poder de identificar
plantas com o gene de resistncia (Brewster, 2008;
van Heusden et al., 2000b; Kik et al., 1997). Tentan-
do aumentar a eficincia da seleo de indivduos
resistentes por meio de marcadores moleculares,
Scholten et al., (2007) desenvolveram quatro mar-
cadores AFLP (Amplied Fragment Length Polymor-
phism) para selecionar a introgresso proveniente
de A. roylei.
Recentemente, Kim et al., (2015) desenvolve-
ram um marcador para o gene de A. roylei que con-
fere resistncia ao mldio da cebola. Esses autores
buscavam por marcadores capazes de discriminar
plantas resistentes e suscetveis em retrocruzamen-
tos com cebola, facilitando o desenvolvimento de
linhas resistentes ao mldio. Baseado em PCR (Poly-
merase Chain Reaction), eles obtiveram o DMR1
(Tabela 1), um marcador codominante, confivel e
de fcil utilizao, que ancora o gene de resistncia.
Com esse marcador os autores conseguiram identifi-
car exatamente as plantas com o gene de resistncia
proveniente de A. roylei (Figura 6). Os autores afir-
mam ainda que esse marcador til para diferen-
tes germoplasmas de cebola, tendo sido testado em
mais de 120 acessos oriundos de diversos pases, e
sendo eficaz na discriminao de plantas resistentes
e suscetveis em todos os casos.
A construo de mapas moleculares satura-
Tabela 1. Sequncia do primer DMR1 ligado ao gene de resistncia ao mldio.
Marcador Nome do Primer
DMR1-F1
DMR1
DMR1-R1
Fonte: Retirado de Kim et al., (2015).
50 RAPP - Volume 24, 2016
Figura 6. Produtos da amplificao de uma reao de PCR
utilizando o marcador DMR1, ligado ao gene de resis-
tncia (Pd) ao mldio da cebola. Sendo 1: linha de duplo
haploide; 2: linha avanada de melhoramento; 3: cultivar
Santero F1, resistente ao mldio; 4: acesso de Allium roy-
lei. Fonte: Retirado de Kim et al., 2015.
dos por marcadores de diversas naturezas possibili-
tou localizar o gene de resistncia ao mldio. O locus
Pd estaria localizado na extremidade do cromosso-
mo 2 em A. roylei (Brewster, 2008). O posterior ma-
peamento de hbridos interespecficos de A. roylei
x A. cepa mostrou que este gene est localizado na
parte distal do cromossomo 3 em cebola (Scholten
et al., 2007; Van Heusden et al., 2000ab).
Sabe-se que o processo de melhoramento
demorado, sendo necessrio muitos anos at a ob-
teno de um cultivar comercial. O melhoramento
de cebola ainda apresenta uma peculiaridade pois
so necessrios dois anos para completar o ciclo
reprodutivo na cultura. No caso do melhoramento
visando resistncia ao mldio, o processo foi ainda
mais moroso que o normal, sendo necessrios cerca
de 20 anos desde a identificao da resistncia em
A. roylei at o lanamento de um cultivar comercial
com resistncia (Scholten et al., 2007). Diversos fato-
res contriburam para esse extenso perodo de tem-
po, dentre esses fatores pode-se destacar a existn-
cia de um gene recessivo letal prximo ao locus Pd.
Gene letal e a resistncia ao mldio da cebola
Desde a descoberta do gene de resistncia ao
mldio em A. roylei e a obteno de cultivares hbri-
dos com o gene, muitos anos se passaram, haja visto
que essas primeiras descobertas foram anteriores
dcada de 1990.
Sequncia do primer (5-3)
TGAGGCTCAAGTTGACATGC
TTCGTAGCAGCATCAAGGTG
 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)

Tabela 2. Possveis gentipos e cruzamentos envolvendo o sistema de macho esterilidade gentico citoplasmtico S
(CMS-S).
Macho-estril Macho-frtil* Gentipo da prognie F1 Plantas frteis na prognie F1 (%)
Linha A
Smsms NMsMs 100% SMsms 100
Smsms NMsms 50% SMsms e 50% Smsms 50
Smsms Nmsms (Linha B)** 100% Smsms 0
Smsms SMsMs 100% SMsms 100
Smsms SMsms 50% SMsms e 50% Smsms 50
*Linhas macho frteis so utilizadas para a polinizao das linhas A. Todos os gentipos das linhas macho frteis podem
ser uma linha C. **As plantas que so da linha B, mantenedoras da macho esterilidade, devem obrigatoriamente ter
esse gentipo, para que 100% da prognie seja macho estril.

Anos aps a descoberta do gene de resistn-
cia, Scholten et al. (2007) demonstraram a existncia
de uma regio no genoma de A. roylei que quando
em homozigose letal em A. cepa, sendo esta regio
proximamente ligada ao locus Pd. No entanto, foi
obtido um indivduo contendo um evento de cros-
sing over entre o gene de resistncia ao mldio e o
gene recessivo letal. Logo, a planta possua o gene
de resistncia, mas no tinha o gene letal comple-
to (Scholten et al., 2007). Dessa forma, tornou-se
possvel a obteno de indivduos homozigotos
para o gene de resistncia ao mldio, permitin-
do que 100% da prognie dessas plantas fossem
resistentes, independendo do genoma do outro
genitor, questo essa fundamental no desenvol-
vimento de hbridos F1. A obteno dessas linhas
homozigotas possibilitou o recente lanamento, na
Europa, de cultivares de cebola resistentes ao mldio
(Kim et al., 2015).
Desenvolvimento de hbridos assistido por marca-
dores moleculares
Hbridos so obtidos aps o cruzamento de
duas ou mais prognies endogmicas. A produo
de sementes hbridas pode ocorrer por meio de cru-
zamentos manuais para muitas culturas hortcolas,
entretanto, essa estratgia para a cultura da cebola
economicamente invivel. Dessa forma, a produo
de hbridos comerciais de cebola somente se tornou
possvel aps a descoberta do sistema de macho es-
terilidade na cultura (Jones & Emsweller, 1936; Jones
& Emsweller, 1933). A macho esterilidade na cebola
do tipo gentica-citoplasmtica (CMS), ou seja, en-
volve interao entre genes do ncleo (Ms) e fatores
citoplasmticos (S) (Jones & Clark, 1943). Para que
a macho-esterilidade ocorra, portanto, necessrio
que a planta apresente citoplasma estril (S) e gene
nuclear em homozigose recessiva, ou seja, gentipo
Smsms (Tabela 2).
Para a produo de hbridos de cebola so
necessrios: i) genitores femininos macho estreis,
denominados linhas A; ii) genitores masculinos man-
tenedores de macho esterilidade, denominados li-
nhas B e iii) linhas C (linhas endogmicas), genitoras
masculinas doadoras de plen (Tabela 2). As linhas
B so essenciais para a manuteno do programa e
seu genoma precisa ser especfico de tal forma que
aps fertilizar a linha A a gerao filial seja toda ma-
cho estril.
Em geral programas de melhoramento que
visam a obteno de cultivares de cebola de polini-
zao livre demoram de 10 a 12 anos. Um programa
de melhoramento de hbridos no pode ser planeja-
do para menos de 15 a 18 anos, pois demanda um
tempo considervel at a identificao das linhas A
e B, alm das etapas posteriores de testes de com-
binaes hbridas e o lanamento do cultivar. A se-
leo de linhas A e B assistida por marcadores pode
acelerar esse processo, que normalmente duraria de
quatro a oito anos (Havey, 2013), possibilitando a se-
leo das linhas no segundo ano.
Diversos marcadores tm sido disponibiliza-
dos para a seleo assistida de linhas A e B. Enquanto
os marcadores de citoplasma disponveis so bastan-
te confiveis, os marcadores ligados ao locus Ms/ms
no tm se mostrado totalmente seguros, podendo
haver erro na identificao (Kim, 2014; Yang et al.,
2013; Bang et al., 2011). Todavia, recentemente Huo
et al., (2015) desenvolveram um marcador, denomi-
nado AcSKP1, que est em completo desequilbrio
de ligao com o locus Ms apresentando alta acu-
rcia na predio gentipos portadores de alelo res-

RAPP - Volume 24, 2016 51

 Edivnio R. Arajo e Daniel P. Alves (42-54)
taurador da macho-fertilidade.
Consideraes finais
Apesar de ser uma cultura milenar e de gran-
de importncia econmica e social, os avanos no
mbito molecular de estudos com cebola tm sido
bastante recentes e em pequeno nmero quando
comparado com outras culturas tradicionais. Mc-
Callum (2007) atribui esse cenrio a algumas pecu-
liaridades da cultura, tais como: ciclo de vida bienal;
ser algama com alta depresso em cruzamentos
consanguneos; comunidade cientifica que estuda a
cultura relativamente pequena; e ao grande tama-
nho do genoma.
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54 RAPP - Volume 24, 2016

 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)

FUNGOS DARK SEPTATE E SUA RELAO

COM AS PLANTAS E FITOPATGENOS
Peter Soares Medeiros1, Carlos Vergara Torres Jnior1,
Claudia Maria Xavier Faria2, Kerly Martnez Andrade2,
Jerri dson Zilli3, Carlos Antonio Incio2.

RESUMO
Os fungos dark septate (DSE - dark septate endophytes) so microrga-
nismos endofticos de ampla distribuio englobando dezenas de ordens e pou-
co investigados nos trpicos. Possuem potencial de aplicabilidade na agricultura,
seja como promotores de crescimento vegetal ou no biocontrole. Estudos tm
demonstrado que os DSE podem contribuir para o crescimento vegetal atravs
da acumulao de nutrientes como o nitrognio (N) e o fsforo (P), incrementar
a biomassa vegetal, a capacidade fotossinttica das plantas e, promover o per-
filhamento de plantas de arroz. Adicionalmente, os DSE tambm tm sido estu-
dados visando o biocontrole de fitopatgenos. No caso de fungos, os DSE pare-
cem atuar de forma direta, colonizando abundantemente a superfcie das razes,
ocupando o stio de infeco e por competio impedindo o crescimento do pa-
tgeno e, ainda produzindo siderforos capazes de complexar ons de ferro (Fe),
restringindo sua disponibilidade ao patgeno. De forma indireta os DSE induzem
a resistncia sistmica na planta auxiliando-a na manuteno do equilbrio entre
as formas reativas de oxignio e os antioxidantes e/ou produzindo metablitos
secundrios que possuem ao antifngica. O presente captulo visa apresentar
as pesquisas que vm sendo conduzidas com este grupo de microrganismos que
possui potencial de aplicabilidade na agricultura com nfase em fitopatologia.

Introduo tceos (EC) e no clavicipitceos (ENC) (Rodriguez et

Plantas so hospedeiros potenciais de bact- al., 2009; Andrades-Linares & Franken, 2013). Os ECs
rias e fungos que colonizam sua superfcie associa- pertencem famlia Clavicipitaceae (Hypocreales,
dos epifiticamente ou no interior dos seus tecidos Ascomycota) (Kirk et al., 2008; Hibbet et al., 2007;
como endofticos, podendo desenvolver relaes Sung et al., 2007), conhecidos como simbiontes mu-
mutualsticas (Andrades-Linares & Franken, 2013). tualsticos que crescem nos espaos intercelulares
Acredita-se que a relao entre plantas e microrga- da parte area e raiz de um grupo restrito de vege-
nismos endofticos tenha surgido cerca de 400 mi- tais em ambientes tanto de clima frio quanto quen-
lhes de anos, atravs de membros da diviso Glo- te e so transmitidos via sementes (Clay & Schardl,
meromycota, que formam associaes micorrzicas 2002; Schardl et al., 2004; Kuldau & Bacon, 2008).
com a maioria das plantas (Mohanta & Bae, 2015). Distintamente, os ENC so filogeneticamente diver-
Os fungos endofticos (FE) tm sido agrupa- sos e a maioria deles pertence ao filo Ascomycota;
dos em dois grandes grupos: os endofticos clavicipi- muitos deles so capazes de crescer em meio de cul-
1
Departamento de Solos, Instituto de Agronomia. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR 465, Km 07, Seropdica, RJ, CEP
23890-000. Rio de Janeiro. 2Departamento de Entomologia e Fitopatologia, DENF/ Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro,
Rodovia BR-465, Km 7, CEP 23.897-000, Seropdica, Rio de Janeiro. 3Embrapa Agrobiologia. Rodovia BR-465, Km 7, CEP 23891-
000, Seropdica, Rio de Janeiro.

RAPP - Volume 24, 2016 55

 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
tura, devido sua versatilidade metablica (Andrades-
-Linares & Franken, 2013). Os ENC se subdividem em
diferentes grupos funcionais de acordo com a faixa
de hospedeiros associados, a sua biodiversidade, o
seu padro de colonizao e os tecidos que coloni-
zam na planta (Rodriguez et al., 2009). Um destes
grupos dos ENC representado principalmente pe-
los fungos dark septate (DSE, do ingls dark septate
endophytes), distribudos em diferentes grupos de
Ascomycota (Jumpponen & Trappe, 1998; Weiss et
al., 2004) e membros da ordem Sebacinales (Agari-
comycetes, Basidiomycota), que apenas colonizam
o sistema radicular (Andrades-Linares & Franken,
2013). Nota: Cabe lembrar que, o termo dark sep-
tate endophytes foi eventualmente introduzido por
Stoyke & Currah (1991).
Os DSE comearam a ser estudados no incio
do sculo passado, quando Melin (1922) observou
um fungo de pigmentao escura associado s razes
de plantas terrestres enquanto estudava e isolava
fungos ectomicorrzicos, o qual denominou Myce-
lium radicis-atrovirens (MRA), pois colonizava as
razes de conferas inter e intracelularmente, distin-
guindo-se das ectomicorrizas que apenas colonizam
os espaos entre as clulas (Melin, 1922, 1923; Ri-
chard & Fortin, 1973). Este fungo foi encontrado co-
existindo com fungos micorrzicos e declarado como
pseudomicorrzico por Melin (1922). Em curto
espao de tempo foram relatadas 135 espcies de
angiospermas associadas com fungos de pigmento
negro nos tecidos das razes (Peyronel, 1924).
Ao longo do sculo passado, o estudo com es-
tes fungos foi reduzido e apenas mais recentemen-
te foi mostrada a capacidade dos DSE colonizarem
as razes de uma ampla variedade de hospedeiros,
biomas e ecossistemas (Jumpponen & Trappe, 1998;
Kovacs & Szigetvari, 2002; Knapp et al., 2015; Man-
dyam & Jumpponen, 2005; Kageyama et al., 2008;
Pereira et al., 2011).
De forma geral, os DSE podem ser definidos
como ascomicetos conidiais (anamrficos) ou est-
reis (mycelia sterilia) caracterizados pela formao
de miclio de hifas septadas (apocticas) e microes-
clercios (microesclerdios) melanizados (Figura 1,
2). Estes fungos, geralmente vivem de forma sapro-
ftica e habitam frequentemente solos oligotrficos
em todas as regies climticas (Kovcs & Szigetvri,
2002; Mandyam & Jumponnen, 2005; Rodriguez et
al., 2009; Khidir et al. 2010; Porras-Alfaro & Bay-
56 RAPP - Volume 24, 2016
man, 2011; Sharma & Jha, 2012). Muitas espcies
so capazes de colonizar inter e intracelularmente
a epiderme e crtex radicular de plantas saudveis,
especialmente em razes finas, sem causar efeitos
negativos ou desorganizao dos tecidos vegetais
(Jumpponen & Trappe, 1998; Barrow & Aaltonen,
2001; Yu et al., 2001; Addy et al., 2005; Mandyam &
Jumponnen, 2008; Peterson et al., 2008; Vohnk et
al., 2015).
O objetivo deste trabalho reunir as princi-
pais pesquisas com dark-septate, citando suas ca-
ractersticas morfo-fisiolgicas, demonstrando sua
relao com os hospedeiros e os possveis mecanis-
mos de promoo de crescimento vegetal e biocon-
trole de fitopatgenos.
Ecologia
Embora haja um crescente interesse sobre
os DSE, o conhecimento a respeito da diversidade,
ecologia e funes destes fungos continua limitado
quando comparado a outros, exemplo os micorr-
zicos. Sua abundncia em diferentes habitats e sua
ocorrncia em diferentes plantas hospedeiras ain-
da em grande parte desconhecida. Alm de ampla-
mente distribudos na natureza colonizando razes
de plantas, tambm so isolados frequentemente
a partir de ambientes com forte estresse abitico e
sua presena em vrios nichos ecolgicos sugere no
s a presena ubqua e falta de especificidade em
relao aos hospedeiros, como tambm um papel de
importncia em ecossistemas naturais (Jumpponen
& Trappe, 1998).
Figura 1. Microesclerdios no interior da raiz de arroz sil-
vestre (Oryza glumaepatula S.). (M) Microesclerdios
(Barra = 0,5 mm). Adaptado de Perreira et al., (2011).
Com autorizao da revista Pesquisa Agropecuria Brasi-
leira e dos autores.
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)
A B
Figura 2. Fungo DSE cultivado em meio BDA (A). Detalhe da placa mostrando a colorao escura da colnia (B). Detalhes
das hifas escuras e septadas (C) (Barra = 20 mm).
A associao fungo DSE/raiz tem sido repor-
tada como uma interao benfica, evidenciando
uma alta taxa de colonizao, o que possivelmente
favorece uma melhor resistncia a doenas, indi-
cando um papel ecolgico importante (Jumpponen,
2001; Linares et al., 2011; Ribeiro et al., 2011).
Fungos DSE j foram observados em mais de
600 espcies vegetais representando cerca de 320
gneros e ultrapassando 100 famlias. Estas famlias
incluem plantas com estratgias de vida bem dife-
rentes denotando pouca ou nenhuma especificida-
de em relao ao hospedeiro. Relatos mostram que
fungos DSE colonizam razes de plantas em pratica-
mente todos os ecossistemas naturais e apresentam
a capacidade de colonizar simultaneamente plantas
com diferentes preferncias micorrzicas, tais como:
arbusculares, ericides, orqudides, ectomicorrzi-
cas, e no micorrzicas (Jumpponen & Trappe, 1998).
Alm disso, so encontrados em habitats rticos,
antrticos, subalpinos, alpinos, temperados e tropi-
cais (Read & Haselwandter, 1981; Jumpponen & Tra-
ppe, 1998; Grnig et al., 2008). No Brasil, estudos
mostraram que a colonizao de razes pelos DSE
em plantas de arroz silvestre Oryza glumaepatula
Steud., significativa e independente da condio
de desenvolvimento da planta em reas alagadas ou
no, porm a tendncia a ocorrncia de uma maior
colonizao em plantas mais velhas (Pereira et al.,
2011; Ribeiro et al., 2011).
A sobrevivncia dos fungos DSE em ambien-
tes inspitos como rtico e alpino, por exemplo, tem
sido relacionada presena de melanina nas clu-
las da parede, uma das principais caractersticas de
identificao desse grupo de fungos. A produo de
melanina pelo DSE provavelmente torna-os mais re-
sistentes a condies extremas, principalmente devi-
RAPP - Volume 24, 2016
C
do sua funo como um tampo redox extracelular
que pode neutralizar oxidantes formando complexos
com radicais de oxignio gerados por tais ambientes
(Redman et al., 2002; Diene et al., 2014). Estudos de-
monstram que a melanina pode estar envolvida no
aumento da tolerncia aos metais pesados presen-
tes no solo. Por exemplo, a espcie DSE Exophiala
pisciphila McGinnis & Ajello (anamorfo de Capronia
Sacc., Chaeothyriales, Chaetothyriomycetidae) (Kirk
et al., 2008; Index Fungorum, 2016) aumentou a sn-
tese de melanina na presena de Cdmio - Cd (II) em
condies de laboratrio (Zhan et al., 2011). Por ou-
tro lado, as espcies Veronaeopsis simplex (Papen-
dorf) Arzanlou & Crous (Venturiaceae, Pleosporales,
Pleosporomycetidae) e Pseudosigmoidea ibarakien-
sis O. Diene & K. Narisawa (Pezizomycotina, Pezi-
zales, Pezizomycetidae) diminuram o acmulo de
csio (Cs) em plantas de tomate possivelmente em
resposta a um maior acmulo de melanina em suas
hifas (Diene et al., 2014). Neste caso, a melanina
funcionaria como uma barreira impedindo a entra-
da dos elementos txicos nas clulas vegetais, pro-
porcionando um melhor desenvolvimento planta
hospedeira e favorecendo a sobrevivncia do fungo
(Redman et al., 2002; Zhan et al., 2011; Diene et al.,
2014).
Phialocephala fortinii C.J.K. Wang & H.E. Wil-
cox (Vibrisseaceae, Helotiales, Leotiomycetidae)
um dos DSE mais conhecidos e parece dominar a mi-
cobiota endoftica em razes de conferas, membros
da famlia Ericaceae, florestas e ecossistemas alpinos
(Wang & Wincox, 1985; Stoyke et al., 1992; O Dell
et al., 1993). Ecologicamente e filogeneticamente
prxima a esta espcie, temos Acephala aplanata
Grnig & T.N. Sieber (Vibrisseaceae, Helotiales, Leo-
tiomycetidae), que outra espcie de DSE presente
57
 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
em razes de conferas. Este grupo de fungos dema-
ticeos designado de P. fortinii A. aplanata spe-
cies complex (PAC) (Grnig et al., 2005; 2008). Alm
de sua presena no solo associado a razes saudveis
de espcies hospedeiras que pertencem a diferentes
famlias de plantas, membros do PAC tambm foram
encontrados em razes deterioradas, caules, cascas
de troncos de rvores e madeiras velhas (O Dell et
al., 1993; Menkis et al., 2004; Hou & Guo, 2008; Gr-
nig et al., 2008).
De modo geral, o habitat preferido dos fun-
gos DSE na planta o crtex de razes finas e a peri-
derme de razes lignificadas (Grnig et al., 2008). Os
mecanismos que regulam os processos de infeco
pelos fungos DSE ainda no foram elucidados. Entre-
tanto, nveis de atividade de enzimas pcticas como
poligalacturonase e pectinesterase facilitam a pene-
trao nas paredes das clulas da planta hospedeira
e so consideradas como o fator primrio no pro-
cesso de infeco (Haselwandter, 1983; Mandyam &
Jumpponen, 2005).
O padro de colonizao de razes por DSE
tem se mostrado diferente dependendo do hospe-
deiro, do DSE e do sistema/ambiente de cultivo. O
padro mais comumente observado representado
pela colonizao das razes das plantas por Phialo-
cephala fortinii (Currah & Van Dyk, 1986), que tem
incio com a formao de uma rede de hifas soltas
sobre a superfcie da raiz e, estas hifas penetram iso-
ladamente as razes colonizando paralelamente ao
seu eixo principal, ou entre as clulas da epiderme e
do crtex (ODell et al., 1993; Peterson et al., 2008).
A colonizao tambm pode ser intracelular sem
causar nenhuma distoro s razes formando aglo-
merados de clulas de paredes espessas dentro das
clulas corticais denominados como massa espessa
pseudoparenquimatosa, esclerdios, microescler-
dios ou corpos esclerticos (Wang & Wilcox, 1985;
Jumpponen & Trappe, 1998; Peterson et al., 2008).
Alm disso, alguns DSE formam uma rede tipo Har-
tig e/ou tecido labirntico, e s vezes, a colonizao
da camada cortical da raiz resulta na formao de
clulas arredondadas dentro das clulas corticais se-
melhante a clamidsporos (ODell et al., 1993). Em
estudo conduzido por Diene et al. (2010) foi verifi-
cado atravs de tcnicas de microscopia de luz com
sees finas da raiz e colorao das hifas, que um
isolado do fungo Helminthosporium velutinum Link
(1809), cresce abundantemente sobre a superfcie
58 RAPP - Volume 24, 2016
da raiz formando um manto fngico, o qual tambm
penetra entre as clulas da epiderme (Figura 3). Da
mesma forma, Su et al. (2013) observaram que a
colonizao de Oryza sativa por Harpophora oryzae
Z.L. Yan, Chu L. Zhang & F.C. Lin se inicia na superfcie
das razes pelo fungo, o qual invade o seu interior
e aumentada com a maturidade das razes. Neste
caso a maior colonizao observada em razes mais
velhas e menor nas razes mais jovens e meristemas
(coifa), sugerindo que a colonizao fngica tem um
aumento gradual de acordo com a maturidade radi-
cular (Figura 2A, Figura 4A-F).
Por outro lado, alguns DSE tm sido documen-
tados como formadores de estruturas intra-radicula-
res que lembram aquelas formadas em micorrizas e
que poderiam ser a interface de transferncia de nu-
trientes dos fungos s plantas. Por exemplo, Acepha-
la macrosclerotiorum Mnzenb. & Bubner (2009),
foi observada formando estruturas ectomicorrzicas
em pinheiro (Pinus sp.) e abeto (Picea sp.) (Lukeov
et al., 2015), Heteroconium chaetospira Munzenb. &
Bubne (Vibrisseaceae) forma um lao de hifa intrace-
lular solta em Rhododendron obtusum (Lindl.) Plan-
ch., morfologicamente lembrando micorriza ericide
(Usuki & Narisawa, 2005). Contudo, o papel destas
hifas intra-radiculares permanece ainda em nvel de
hiptese e a maioria dos DSE aparentemente no
formam estruturas especializadas no interior das ra-
zes ou ainda no foram definidos uma categorizao
dos padres de colonizao.
Figura 3. Interaes entre razes de sorgo-sacarino e Hel-
minthosporium velutinum. Hifa do fungo pode ser vista na
superfcie da raiz (setas), e entre as clulas da epiderme
(EP). Adaptado de Diene et al. 2010 com permisso dos
autores e da revista Microbes Environment.
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)

Figura 4. Padro de colonizao de Harpophora oryzae em razes de arroz. (a)- Em seces transversais da raiz, hifas
marcadas com eGFP (Protena Fluorescente Verde Melhorada) estendo-se gradualmente da epiderme para o cortex
sem penetrar os feixes vasculares (Barra = 200 mm); (c)- Incremento gradual de colonizao fngica associada com a
maturao da raiz; (d)- Colonizao fngica mostrando uma forte colonizao na zona de diferenciao; (e)- Leve colo-
nizao na zona de elongao, e no colonizao na zona meristemtica (Barras = 500 mm); (b, f)- Representaes es-
quemticas da colonizao da raiz por H. oryzae. (b)- Padro de colonizao como visto em seo transversal; (f)- Seo
longitudinal mostrando a associao da colonizao fngica com a maturao da raiz (obs. Azul e verde indicam clulas
vivas e mortas respectivamente; Linhas e pontos vermelhos: hifas; pontos negros: clamidsporos; manchas prpuras:
microesclerdios). Adaptado de Su et al. (2013). Com autorizao dos autores e da revista PLoS ONE.

RAPP - Volume 24, 2016 59

 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
O mais provvel que a transmisso dos DSE
ocorra horizontalmente, visto sua presena no solo e
nas razes das plantas, mas nas condies laborato-
riais os meios de transmisso parecem ser fragmen-
tao micelial e disperso de condios (Jumpponen
& Trappe, 1998). Embora as conexes entre ana-
morfo e teleomorfo no tenham sido identificadas,
a possibilidade de reproduo sexual no deve ser
descartada. As estruturas assexuadas de reproduo
e a morfologia das razes colonizadas por DSE foram
descritas como semelhantes aos das ectomicorrizas
e endomicorrizas (Wang & Wilcox, 1985).
Caracterstica de dse in vitro
Pesquisas com fungos DSE mostram que a es-
porulao de muitas estirpes extremamente difcil,
como ocorre para muitos isolados de ascomicetos de
uma forma geral (Knapp et al., 2015). No existem
ainda descries morfolgicas de sua fase sexuada, e
at mesmo a conidiognese incomum para muitas
espcies. A fase assexuada de estirpes conhecidas
somente foi alcanada atravs da induo do proces-
so conidiognico em condies especficas de labo-
ratrio, utilizando-se diferentes meios de cultura e
em diferentes condies ambientes como tempera-
tura, umidade e luz (Wang & Wilcox, 1985; Jumppo-
nen & Trappe, 1998; Grnig et al., 2008).
A induo da esporulao de isolados DSE
teve um grande avano com estudos de Wang & Wil-
cox (1985) ao utilizar o meio de cultura gar Melin
Norkrans Modificado (MMN). Segundo os autores
a esporulao pode ocorrer em longos perodos de
incubao podendo levar de seis meses a um ano.
Su et al. (2013) estudando duas linhagens de Har-
pophora oryzae Z.L. Yuan, Chu L. Zhang & F.C. Lin
(2010), R5-6-1 e RC-3-1, isoladas de razes de arroz
selvagem, obtiveram resultados positivos ao cultivar
em meio gar Completo (CM) a 25oC no escuro. Die-
ne et al., (2010) conseguiram induzir a esporulao
do isolado Helminthosporium velutinum, aps um
perodo de incubao de um ms a temperatura de
23 C utilizando o meio Aveia gar.
Estudos realizados no Brasil demonstram que
estirpes de DSE isoladas a partir de arroz silvestre
crescem com extrema facilidade em temperaturas
de 28 a 30 C e umidade de 45% quando inocula-
das em meios de cultura como: Batata Dextrose
gar, gar Malte, Extrato de Arroz modo, Extrato de
Aveia, Extrato de Mandioca (Ribeiro et al., 2011; Me-
60 RAPP - Volume 24, 2016
deiros, 2015). Entretanto, o cultivo dos DSE desde o
isolamento at a identificao taxonmica de dife-
rentes isolados ainda so muito incipientes, sobre-
tudo no Brasil. E, resultados negativos na tentativa
de induo esporulao so comuns, dificultando
desta forma uma melhor caracterizao morfolgica
e elucidao dos diferentes txons (Medeiros, 2015;
Knapp et al., 2015).
Taxonomia
Em termos taxonmicos os DSE constituem
um grupo polifiltico (Yuan et al., 2011) classifica-
do dentro dos fungos endofticos, e avanos recen-
tes, sobretudo com base em tcnicas moleculares,
tm permitido um melhor entendimento da sua
taxonomia. Atualmente os fungos endofticos so
agrupados pelas distintas histrias evolutivas, taxo-
nomia, plantas hospedeiras e funes ecolgicas.
Os endofticos clavicipitceos (EC), que colonizam
algumas gramneas, e os endofticos no clavicipi-
tceos (ENC), que podem ser isolados de tecidos
assintomticos de brifitas, pteridfitas, gimnos-
permas e angiospermas (Rodriguez et al., 2009). Os
EC, denominados classe 1, so representados pelos
integrantes da famlia Clavicipitaceae (Hypocreales;
Ascomycota) que inclui representantes de vida li-
vre e simbiontes associados insetos e fungos (por
exemplo, Cordyceps spp.) ou gramneas, juncos e ci-
perceas (por exemplo, Balansia spp., Epichlo spp.
e Claviceps spp.) (Bacon & White, 2000). Esta famlia
derivada de Hipocreales, com fungos patgenos de
plantas, saprofticos e endofticos, sendo que alguns
produzem compostos bioativos.
Os ENC tm sido tratados como um nico
grupo funcional, mas h evidncias que estes fun-
gos podem ser classificados em pelo menos trs gru-
pos classe 2, classe 3 e classe 4 devido s suas
diferenas na biologia, nas interaes ecolgicas e
em critrios simbiticos, tais como: tipo de tecido
vegetal colonizado e a abundncia na colonizao
(Rodriguez et al., 2009). Os ENC classe 2 so compre-
endidos por uma diversidade de espcies includas
em Ascomycota (Pezizomycotina) na sua maioria e,
com alguns representantes de Basidiomycota (Aga-
ricomycotina e Pucciniomycotina). Da mesma forma,
a maioria dos endfitos da Classe 3 Ascomycota,
mas tambm Basidiomycota, sendo representados
por Pezizomycotina. Contudo, so relatados end-
fitos em Saccaromycotina (Higgins et al., 2007). Os
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)
endofticos Classe 3 ocorrem em todos os principais
clados no liquenizados, sendo comuns em Pezi-
zomycetes, Leotiomycetes e Eurotiomycetes e mais
abundantes em Sordariomycetes e Dothideomycetes
(Arnold et al., 2007; Higgins et al., 2007; Arnold et
al., 2009). Os ENC classe 4 (DSE) distinguem-se como
um grupo funcional pela presena de septos mela-
nizados e por sua restrio colonizao nas razes
das plantas. A diversidade de espcies de DSE e suas
plantas hospedeiras permanecem no definidas at
que seja realizado um estudo abrangente desta inte-
rao em todas as partes do mundo.
De forma geral, os DSE distribuem-se em deze-
nas de famlias e centenas de gneros de Ascomyco-
ta dentro das ordens Capnodiales, Chaetothyriales,
Eurotiales, Helotiales, Hypocreales, Microascales,
Pleosporales, Sordariales e Xylariales (Jumpponen
& Trappe, 1998; Addy et al., 2005; Newsham, 2011;
Knapp et al., 2012, 2015; Andrade-Linares & Franken,
2013). Entretanto, o estudo filogentico taxonmico
de DSE ainda muito limitado, sobretudo pelas difi-
culdades de muitos isolados esporularem em meio
de cultivo, o que restringe o uso de muitas chaves ta-
xonmicas (Medeiros, 2015). Estudos recentes tm
revelado que a ordem Pleosporales abrange muitos
dos DSE (Zhang et al., 2009), sendo considerada a
ordem mais representativa deste grupo de fungos
para regies semiridas (PorrasAlfaro et al., 2008).
Cabe mencionar que baseado em anlise multilocos
e dados morfolgicos, trs novos gneros represen-
tantes dos DSE provenientes de regio semirida fo-
ram recentemente propostos na ordem Pleosporales
denominados: Aquilomyces pertencendo a famlia
Morosphaeriaceae, Flavomyces representando um
grupo incertae sedis de Massarinaceae e Darksidea
com seis novas espcies da famlia Lentitheciaceae
(Knapp et al., 2015).
A anlise molecular baseada na amplificao
e sequenciamento de regies alvos especficas no
DNA uma ferramenta til para diferenciar grupos
estreitamente relacionados e espcies morfologica-
mente semelhantes. Entretanto, dados fornecidos a
partir de marcadores moleculares como ITS muitas
vezes no so suficientes para discriminar espcies,
gneros ou mesmo famlias, ou seja, a resoluo
geralmente muito pobre, resultando em rvores filo-
genticas com estruturas politmicas (Bensch et al.,
2012). Muitas pesquisas buscando solucionar a ta-
xonomia de vrios txons tm mostrado que a partir
RAPP - Volume 24, 2016
de uma abordagem multilocos com regies alvo ITS,
-tubulina, TEF1, actina, calmodulina, entre outras,
proporcionaram uma melhor resoluo e distino
entre txons relacionados (Schubert et al., 2007;
Crous et al., 2007; Bensch et al., 2012; Maharachchi-
kumbura et al., 2014).
O principal critrio atual para classificar um
fungo como DSE ele ser endfito de razes de plan-
tas, septado e melanizado (Figura 2). Entretanto,
fungos endofticos de outras classes com pigmento
escuro tm sido erroneamente identificados como
DSE. Como exemplo, a Curvularia protuberata R.R.
Nelson & Hodges (1965), endoftico Classe 2 que
simbioticamente confere tolerncia temperatura
para a planta Dicanthelium lanuginosum (Ell.) Gould,
um fungo com pigmento escuro, assexual e septa-
do que coloniza razes de planta. Entretanto, no
um verdadeiro DSE, pois capaz de colonizar todas
as partes da planta (razes, coroa, caule, folhas e cas-
ca da semente). Para evitar classificaes errneas
necessrio analisar todas as partes das plantas e,
usar corante especfico para avaliao dos septos
(Ormsby et al., 2007).
Promoo do crescimento de plantas
DSE so abundantes no ambiente e hbeis
para viverem em nichos e habitats variados, o que
tem atrado ateno pela possibilidade de serem
explorados como promotores de crescimento de
plantas (Newshan, 2011; Mandyam & Jumpponen,
2005). O fato de no serem biotrficos obrigatrios
uma caracterstica que chama ateno, pois faci-
litaria o desenvolvimento de bioprocessos para a
produo de inoculantes, o que tem sido uma gran-
de limitao, para a maioria dos fungos micorrzicos
(Jumpponen & Trappe, 1998; Pereira et al., 2011).
Entretanto, generalizaes so complicadas, pois es-
tes fungos so muito diversos e, se conhece muito
pouco sobre a filogenia, a fisiologia e o comporta-
mento dos mesmos quando inoculados em plantas
domesticadas de uso comercial (Mayerhofer et al.,
2013; Mandyam & Jumpponen, 2015; Knapp et al.,
2015).
Ao longo dos ltimos anos, diversas pesqui-
sas tm demostrado que os efeitos da inoculao
dos DSE no crescimento de plantas variam desde
negativas, neutras positivas e os mecanismos que
levam a esta variabilidade parecem ser contexto-
-dependentes, a exemplo do que ocorre com as sim-
61
 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
biontes micorrizas arbusculares e ecto-micorrzicas
(Mandyam & Jumpponen, 2005; Grnig et al., 2008;
Alberton et al., 2010; Newsham, 2011; Mayerhofer
et al., 2013; Torres-Jnior et al., 2014). Neste con-
texto, uma meta-anlise realizada por Newsham
(2011) sobre a resposta de plantas colonizao
por fungos dark septate, baseado em dados publi-
cados oriundos de 18 artigos cientficos nos ltimos
40 anos, revelou que esses fungos em sua maioria
promoveram o crescimento da parte area e razes
vegetais, podendo os ganhos de biomassa chega-
rem a 100%, quando comparado testemunha no
inoculada. Alm disso, o estudo mostrou que os DSE
contribuem de forma significativa para o aumento
do contedo de fsforo e nitrognio nos tecidos ve-
getais, indicando melhoria na eficincia do uso des-
tes nutrientes. Portanto, em uma outra meta-anlise
(Mayerhofer et al., 2013) a qual incluiu o estudo de
fungos endofticos (no clavicipitceos), entre eles
os dark septate, baseada em 34 artigos cientficos
foi mostrado que os efeitos da inoculao de fungos
vo de negativos a neutros quanto ao acmulo de
biomassa e nitrognio da planta, sendo as respos-
tas variveis de acordo com os vegetais e as espcies
dos fungos. Disso, deduz-se que existem diferentes
respostas quando da inoculao por dark septate e
que as mesmas precisam ser melhor estudadas.
No Brasil, estudos recentes mostraram ocor-
rncia de fungos dark septate em razes saudveis
de Oryza glumaepatula em ambiente natural, sen-
do que os isolados obtidos demonstraram capaci-
dade para colonizar tambm razes de Oryza sativa
L. sem causar sintomas de doenas e contribuindo
para desenvolvimento do sistema radicular (Pereira
et al., 2011; Ribeiro et al., 2011; Ribeiro, 2011). De
forma semelhante, na China foi identificada uma es-
pcie de DSE (Harpophora oryzae) em razes saud-
veis de Oryza granulata Nees & Arn. Ex. Hook. F, que
tambm se mostrou capaz de aumentar a biomassa
de O. sativa sem desencadear sintomas de doenas
(Yuan et al., 2010).
A forma como os DSE estabelecem associa-
o com seu hospedeiro ainda no foi compreendida
com profundidade, mas estudos indicam que a pro-
moo do crescimento pode se dar tanto de forma
direta pela facilitao de absoro de nutrientes -
em Brassica campestris L., foi constatado uma asso-
ciao mutualstica com Heteroconium chaetospira
(Grove) M.B. Ellis 1976 [=Cladophialophora chaetos-
62 RAPP - Volume 24, 2016
pira (Grove) Crous & Arzanlou (2007)], na qual o fun-
go facilita a absoro de N para a planta e a mesma
fornece carbono ao fungo, incrementando significa-
tivamente a biomassa da planta (Usuki & Narisawa,
2007), quanto indireta, tais como: a mitigao de
estresses ambientais como seca, salinidade, defici-
ncia nutricional, alta concentrao de metais pesa-
dos, reduo de compostos txicos s plantas, como
os super-perxidos, competio direta com patge-
nos e pela produo de reguladores de crescimen-
to e/ou substncias anlogas (Schulz & Boyle, 2005;
Usuki & Narisawa, 2007; Newsham, 2011; Mandyam
& Jumpponen, 2015; Wei et al., 2016).
As melhores respostas de promoo de cres-
cimento de plantas por DSE foram inicialmente ob-
servadas quando eram utilizadas fontes orgnicas
de N (Usuki & Narisawa, 2007; Upson et al., 2009;
Newsham, 2011; Mahmoud & Narisawa, 2013).
Contudo, devido ocorrncia generalizada dos DSE
nos mais diversos ambientes (Sharma & Jha, 2012;
Gardes & Dahlberg, 1996), provvel que ocorram
fungos DSE tambm capazes de auxiliar o vegetal na
absoro de nutrientes de fontes inorgnicas (Usuki
& Narisawa, 2007). Ao se avaliar a capacidade do
DSE Heteroconium chaetospira utilizar diferentes
aminocidos e fontes inorgnicas de N observou-se
tambm, um aumento significativo na massa seca
do fungo nos meios modificados com fontes orgni-
cas de N, comparativamente ao meio suplementado
com nitrato de amnio ou sem N (Usuki & Narisa-
wa, 2007). Os mesmos autores, ao inocularem este
fungo em plantas de repolho chins suplementadas
com as mesmas fontes de N, observaram que a ino-
culao promoveu a utilizao de todos os aminoci-
dos e, tambm nitrato de sdio (NaNO3), com efeitos
significativos no crescimento da planta (Diene et al.,
2013; Mamoud & Narisawa, 2013). Alm disso, em
plantas de arroz e tomate inoculadas com DSE, cul-
tivadas em condies controladas e suplementadas
com nitrato de amnio foram observados incremen-
tos significativos na matria seca da planta, N-ami-
no, acares solveis, nmero de perfilhos (plantas
de arroz) e alterao dos parmetros cinticos (KM e
Vmx) da absoro de NO3- (Torres-Jnior, 2014). Os
autores deduziram que os acmulos de acares so-
lveis relatados podem estar relacionados com au-
mento do contedo de clorofila e eficincia quntica
do fotossistema II em plantas inoculadas com DSE,
indicando que estes fungos podem tambm melho-
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)

rar a eficincia da atividade fotossinttica do seu
hospedeiro (Zhang et al., 2012).
Biocontrole
Fungos endofticos so um grande grupo de
microrganismos pouco investigados que represen-
tam uma fonte potencial para explorao por sua
ampla variedade de aplicaes na agricultura. Estu-
dos vm demonstrando que a associao simbitica
de DSE com as razes das plantas hospedeiras vo
alm da aquisio de nutrientes e estmulo ao ac-
mulo de biomassa, podendo atuar no biocontrole de
doenas (Diene et al., 2014).
Um exemplo recente de sucesso foi obtido
com uma estirpe de Veronaeopsis simplex, um mem-
bro DSE, a qual reduziu em 71% a doena da murcha
causada pelo patgeno Fusarium oxysporum Schl-
tdl. (1824) quando inoculado em mudas de repo-
lho, Brassica campestris L. (Khastini et al., 2012). Em
outro estudo com o mesmo hospedeiro vegetal em
condies de campo, um txon DSE no identificado
denominado LtVB3 reduziu em mais de 80% os sin-
tomas da Murcha-de-verticlio amarelo causada por
Verticillium longisporum (C. Stark) Karapapa, Bainbr.
& Heale (1997), enquanto a espcie Heteroconium
chaetospira reduziu cerca de 50% esta infeco,
mostrando diferentes nveis de biocontrole de doen-
as entre os DSE (Narisawa et al., 2004). Ainda, neste
estudo, entretanto, duas estirpes de Phialocephala
fortinii - um dos principais representantes do grupo
de fungos DSE - inoculadas na mesma planta hospe-
deira e nas mesmas condies de campo causaram
danos severos nas mudas, sugerindo haver um siner-
gismo entre P. fortinni e o patgeno ao parasitar as
razes (Narisawa et al., 2004). Tais resultados mos-
tram claramente que embora os DSE desempenhem
papel benfico no controle de outros fungos, porm
as interaes que ocorrem entre eles carecem de in-
vestigaes contundentes no sentido de evitar riscos
de patogenicidade. De fato, at onde se conhece re-
sultados negativos envolvendo interao entre esp-
cies de P. fortinni e razes de plantas hospedeiras so
extremamente raros e considerados pouco expressi-
vos (Wang & Wilcox, 1985).
Testes de inoculao de DSE tm demonstra-
do que os mecanismos de controle biolgico podem
atuar em vrios alvos sobre um agente patognico e
que respostas de defesa da planta envolvem, como
mencionado anteriormente, interaes diretas e in-
diretas no interior ou superfcie das razes, podendo
estar associadas com modificaes da parede celular
das clulas da epiderme e do crtex.
Um mecanismo primrio direto de biocon-
trole contra possveis fitopatgenos parece ser a
habilidade dos DSE formarem uma barreira criada
por uma densa rede de hifas na superfcie das razes
colonizadas por DSE que impediriam fisicamente a
entrada de outro patgeno (Narisawa et al., 2004).
Esta intensa colonizao foi recentemente observa-
da em estudo realizado no Brasil (Figura 5) (Torres
Jnior, 2014).
Outro fator envolvido diretamente no contro-
le biolgico de doenas de planta a produo de
siderforos por microrganismos presentes no solo,
os quais normalmente competem por nutrientes de
baixa disponibilidade. Devido ao seu baixo peso mo-
lecular, siderforos so substncias capazes de com-
plexar Fe3+ com grande especificidade e afinidade

A B C
Figura 5. Detalhes da interao do arroz (Oryza sativa) e fungo DSE. (A) Razes de arroz do tratamento controle sem ino-
culao de DSE (Barra = 20 mm). (B) Razes de plantas de arroz com a presena de abundante massa fngica. (C) Razes
de arroz colonizadas por DSE em experimento de inoculao (Barra = 100 mm).. Fotos: Torres Jr., C.V.

RAPP - Volume 24, 2016 63

 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
tornando-o indisponvel para potenciais microrga-
nismos patognicos, limitando assim seu crescimen-
to. A espcie P. fortinii capaz de biosintetizar como
principal agente quelante a ferricrocina, seguindo a
ferrirubina e ferricromo C em baixo pH e concentra-
o de ferro (Barthold et al., 2001). Da mesma for-
ma, a estirpe Y34 Veronaeopsis simplex (Papendorf)
Arzanlou & Crous (2007) inibiu o crescimento do
patgeno F. oxysporum indisponibilizando ferro por
uma ao antagnica em meio de cultura (Khastini
et al., 2012). Os efeitos da produo de siderforos
por DSE sobre agentes fitopatognicos, entretanto,
ainda so desconhecidos em condies de cultivo
vegetal fora de laboratrios.
Mecanismos indiretos de interao da plan-
ta com o microrganismo surgem quando as plantas
so inoculadas com DSE. Um desses mecanismos
observados o espessamento nos tecidos radicula-
res colonizados e uma colorao marrom escuro nas
clulas quando da presena do fungo, indicando que
as clulas vegetais recebem sinais, provavelmente os
quais a induzem proteger-se atravs da produo
de substncias antifngicas (Narisawa et al., 2004).
A produo de metablitos fenlicos desencadeada
na planta quando inoculada com DSE pode ser uma
resposta contra o patgeno e, neste caso, estes com-
postos antimicrobianos promoveriam uma resistn-
cia induzida, que inibiria o crescimento do patgeno
e protegeria indiretamente os tecidos epidermais e
corticais subjacentes s reas invadidas, agindo
como uma barreira capaz de restringir a entrada
do patgeno (Schulz et al., 1999; Benhamou &
Garand, 2001).
Alm disso, no somente o aumento da
concentrao de metablitos de defesa, mas ou-
tros padres de resposta incluindo a produo de
antioxidantes e espcies reativas de oxignio (ROS)
e a manuteno do equilbrio destes compostos so
respostas expressas pelo vegetal quando na presen-
a de DSE. De fato, a produo de ROS e, consequen-
temente, antioxidantes representam uma resposta
geral que ocorre no vegetal quando do ataque de
patgenos e, tambm, em situaes de estresses
abiticos. ROS agem de forma crucial sobre a morte
programada de clulas, sinalizao celular e defesas
da planta e, adicionalmente, acredita-se que possam
exercer papel importante nas interaes simbiticas,
especialmente na sinalizao (Su et al., 2013; Wang
et al., 2016). Por outro lado, o aumento da produ-
64 RAPP - Volume 24, 2016
o de antioxidantes leva a reduo de ROS evitando
danos s clulas ntegras (Zhao et al., 2015). Neste
sentido, acredita-se que a colonizao por DSE au-
xilie o vegetal na regulao e equilbrio dos sinais e
defesas contra os patgenos, possibilitando o desen-
volvimento de resistncia sistmica do vegetal.
Estudos avaliando a capacidade biocontro-
ladora do fungo DSE Harpophora oryzae contra o
patgeno Pyricularia oryzae Cavara (=Magnaporthe
oryzae B.C. Couch.) agente patolgico da brusone,
considerada uma das mais severas doenas da cul-
tura do arroz, mostraram que a colonizao por H.
oryzae foi capaz de controlar a infeco pelo pa-
tgeno (Figura 6). Este controle ocorreu seguido
do aumento dos nveis e da atividade enzimtica
de antioxidantes como superxido desmutase,
catalase, peroxidase, dehidroascorbato redutase,
glutationa redutase e glutationa, alm de elevar
os nveis de cido ascrbico. Tais antioxidantes
so uma importante linha de defesa da planta,
capazes de neutralizar radicais livres produzidos
durante o processo de infeco por um patge-
no. Uma acumulao abundante de perxido de
hidrognio (H2O2) (Figura 6) observada nas clu-
las externas da epiderme e corticais parece ser
proporcional ao tempo de infeco e do volume de
hifas fngica. O acumulo de H2O2 um processo de
defesa da planta na tentativa de matar o patgeno
ou restringi-lo apenas nas clulas j infectadas (Su
et al., 2013).
Figura 6. Reduo dos sintomas devastadores da brusone
nas folhas de arroz mediante a proteo sistmica pro-
movida pela inoculao de Harpophora oryzae. Adptado
de Su et al. (2013) (esta figura no tem escala no trabalho
original). Com autorizao dos autores e da revista PLoS
ONE.
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)

Figura 7. Acmulo de Perxido de Hidrognio (H2O2) por Harpophora. oryzae. Microscopia de luz e fluorescncia de
razes de arroz da testemunha e infectadas com H. oryzae em diferentes perodos aps a inoculao. Os pontos marrons
indicam o acmulo de H2O2 (Barras na extremidade direita = 100 m e outras 30 m). Adaptado de Su et al. (2013). Com
autorizao dos autores e da revista PLoS ONE.

Consideraes para futuras pesquisas que englobariam diferentes famlias contendo g-

Como discutido anteriormente, as pesquisas
com fungos dark septate tm sido globalmente de-
senvolvidas, porm no Brasil ainda so restritas. Pelo
fato dos DSE, em sua grande maioria no serem bio-
trficos obrigatrios, um caminho importante para a
produo de inoculante existe, pois possibilita o cul-
tivo em laboratrio. A partir desta caracterstica, es-
tudos tm mostrado que muitos destes fungos esta-
belecem uma associao benfica ao vegetal, porm
a simbiose mutualista foi provada em poucos casos.
De forma geral, pode-se dizer que nos casos
onde os DSE mostraram benefcios, os mesmos con-
triburam para o crescimento vegetal atravs do ac-
mulo de nutrientes como o N e o P, incrementaram a
produo de biomassa vegetal e a capacidade fotos-
sinttica das plantas e, aumentaram o perfilhamento
de plantas de arroz. Adicionalmente, os DSE tambm
tm sido estudados quanto capacidade de atua-
rem como biocontrole de patgenos, especialmente
fungos. Neste caso, os DSE parecem estabelecer bio-
controle de forma direta por colonizarem abundan-
temente a superfcie das razes, ocupando o stio de
infeco e impedindo o crescimento do patgeno e,
ainda produzindo siderforos capazes de complexar
ons de Fe, diminuindo a disponibilidade ao patge-
no. De forma indireta, os DSE induzem a resistncia
sistmica na planta especialmente por auxiliariam a
planta a manter o equilbrio entre formas reativas de
oxignio e antioxidantes e/ou produzir metablitos
secundrios, que possuem ao antifngica.
Acima de tudo, importante destacar que
muito pouco se conhece sobre os dark septate, seja
em relao a taxonomia e filogenia, seja sobre a for-
ma como os estes fungos colonizam o tecido vegetal,
como transferem nutrientes para a planta, ou como
estimulam o seu crescimento. O pouco conhecimen-
to que se possui decorre principalmente de pesqui-
sas com o gnero Phialocephala que parece ser mais
abundante em conferas. Dentre as diversas ordens
neros e espcies de fungos DSE, uma que chama a
ateno no Brasil a Pleosporales que predominou
em estudos realizados com arroz silvestre realizado
na Amaznia (Ribeiro, 2011). Portanto, a partir do
tpico aqui abordado, verifica-se que existe um vas-
to campo de pesquisa e potencialmente significativo
a ser explorado na agricultura, particularmente den-
tro da fitopatologia, o que abrange desde a pesquisa
bsica at testes com as culturas em condies de
campo.
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69
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)

NEMATOIDES QUARENTENRIOS PARA

O BRASIL - DIAGNOSE, CONTROLE E
PERSPECTIVAS
Paulo Sergio Torres Brioso1 e Ricardo Moreira de Souza2

RESUMO
Esta reviso aborda tpicos relacionados ao risco de introduo de ne-
matoides quarentenrios no Brasil, apresentando informaes de cada uma das
espcies de nematoides constantes na Lista de Pragas Quarentenrias Ausentes
do Brasil; relaciona aspectos relativos diagnose e controle; e discorre sobre as
tendncias futuras quanto ao risco de introduo dessas pragas.

SUMMARY
This review deals with topics related with the risk of introducing exotic
nematodes in the country; presents information on all species of nematodes on
the List of Quarantine Species Absent to Brazil; discuss aspects concerning diag-
nosis and control; and the trends regarding the risk of introducing these pests
into Brazil.

Introduo
A Norma Internacional de Medidas Fitos-
sanitrias n 19: Diretriz sobre listas de pragas re-
gulamentadas descreve os procedimentos para se
preparar, manter e disponibilizar as Listas de Pragas
Regulamentadas pelas Organizaes Nacionais de
Proteo Fitossanitria (ONPF). A ONPF brasileira
representada pelo Departamento de Sanidade
Vegetal (DSV) Ministrio da Agricultura, Pecuria
e Abastecimento (MAPA), que responsvel pelos
procedimentos para estabelecer a lista de pragas
regulamentadas, bem como pela sua manuteno,
atualizao, registro apropriado e pelo fornecimen-
to dessas listas s partes contratantes, se requisita-
das. Tais listas auxiliam na preveno da introduo
e/ou disseminao de pragas e tambm facilitam o
comrcio seguro, garantindo a transparncia.
A Lista de Pragas Regulamentadas de um
pas no fixa ou permanente (disponvel no site
https://www.ippc.int/index.php?id=draft_ispms
&no_cache=1&L=0). A atualizao dessas listas
necessria quando a categoria das pragas lista-
das alterada, ou quando as informaes para as
pragas listadas so modificadas, por mudana da
taxonomia, por exemplo, devendo ser feita a atua-
lizao assim que a necessidade de modificao for
identificada atravs de levantamentos, notificaes
de ocorrncia e realizao de Anlises de Risco de
Pragas.
As diversas Instrues Normativas (IN) e Por-
tarias publicadas pelo MAPA e citadas nesse texto
podem ser visualizadas, na ntegra, no Sistema de
Consulta Legislao do MAPA, no endereo eletr-
nico http://www.agricultura.gov.br/legislacao.
A Lista de Pragas Quarentenrias Ausentes
(A1) e a Lista de Pragas Quarentenrias Presentes
(A2) do Brasil, revisadas e atualizadas, constam dos
Anexos I e II, respectivamente, da Instruo Norma-

1
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Instituto de Cincias Biolgicas e da Sade, Laboratrio Oficial de Diagnstico Fitossa-
nitrio, Caixa Postal 74585, 23897-970 - Seropdica, RJ, brioso@bighost.com.br; 2Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy
Ribeiro, CCTA/ Laboratrio de Entomologia e Fitopatologia, 28015-620 - Campos dos Goytacazes, RJ, ricmsouza@censanet.com.br

70 RAPP - Volume 24, 2016

 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
tiva (IN) 41/2008 e retificao [publicada no Dirio
Oficial da Unio (D.O.U.) n 125, de02/07/2008,Se-
o 1, p.8-10 e a retificao no D.O.U. n131,
de10/07/2008,Seo1,p.4],da IN 59/2013 e retifica-
o [publicada no D.O.U. n 249, de24/12/2013,Se-
o1,p.4-5,e no D.O.U. n 252, de30/12/2013,Se-
o1,p.81] e da IN 21/2015 (publicada no D.O.U. n
126, de06/07/2015,Seo1,p.4).
Como j ocorreram alteraes taxonmicas
aps revises publicadas sobre vrus, virides e fi-
toplasmas quarentenrios (Brioso & Pozzer, 2013;
2014), o mesmo poder ocorrer em relao aos ne-
matoides quarentenrios. Esta reviso, que trata dos
nematoides considerados como Pragas Quarenten-
rias Ausentes (A1) para o Brasil at o momento, ser
mantida e atualizada pelos autores dessa reviso nos
endereos eletrnicos http://www.fito2009.com/fi-
top/fitoplablistanemat.htm e http://www.fito2009.
com/fitop/fitoplabnematquar.html.
A seguir, sero repassadas algumas informa-
es bsicas sobre cada uma dessas pragas. Des-
taca-se que as informaes, principalmente quanto
distribuio geogrfica, so muito dinmicas em
funo de novos registros, retificao de relatos e
at de erradicao da praga na rea geogrfica em
considerao.
Divulgao e pesquisa de pragas quarentenrias
Em 1996 foi publicada a Portaria Interministe-
rial n 290, assinada pelo MAPA, Ministrio da Educa-
o (MEC) e Ministrio da Cincia e Tecnologia (MCT)
(D.O.U. n 75, de 18/04/1996, Seo 1, p.6575). A
mesma considera que a divulgao da ocorrncia de
qualquer praga, supostamente inexistente no ter-
ritrio nacional, de forma precipitada e sem o em-
basamento cientfico adequado, poder ocasionar
restries s exportaes brasileiras, com srios
prejuzos economia nacional. Em funo disso, a
lei determina que a deteco ou a caracterizao
de qualquer praga inexistente no territrio nacio-
nal deve imediatamente ser notificada ao MAPA,
antes de qualquer divulgao. Uma vez notificada a
ocorrncia da nova praga, caber ao MAPA efetuar
levantamento de sua distribuio geogrfica no ter-
ritrio nacional e de suas possibilidades de controle
e erradicao.
A IN 52/2007 (D.O.U. n 223, de 21/11/
2007, Seo 1, p.31-34) reitera que a deteco
de qualquer Praga Quarentenria Ausente ou ou-
RAPP - Volume 24, 2016
tra praga extica dever ser notificada ao MAPA,
de acordo com a legislao vigente, bem como de
uma Praga Quarentenria Presente fora da rea de
controle oficial. Em funo da distribuio da pra-
ga no territrio nacional, a ONPF adotar as provi-
dncias necessrias para notificao Conveno
Internacional de Proteo dos Vegetais (CPIV), para
a alterao da Lista de Pragas Quarentenrias e a
autorizao da divulgao da informao (Portaria
Interministerial 290/1996). As normas para noti-
ficao de ocorrncia de pragas exticas no pas
esto estabelecidas na IN 02/2002. Havendo inte-
resse em realizar pesquisa com praga quarenten-
ria, necessria a autorizao prvia do MAPA. Se
a pesquisa for com Pragas Quarentenrias Ausen-
tes, o pedido de autorizao dever ser protocola-
do contendo o plano de trabalho, a justificativa da
necessidade de realizao da pesquisa e o termo de
responsabilidade da instituio qual pertence o
pesquisador; se a pesquisa for com Praga Quaren-
tenria Presente, a solicitao dever ser realizada
conforme legislao especfica relacionada essa
praga.
No caso especfico de nematoides, diversos
sites nacionais e internacionais trazem informaes
dos mesmos, seja como fitoparasita ou como vetor
de vrus e doenas correlacionadas, por exemplo
nos endereos eletrnicos: http://www.apsnet.org/
edcenter/intropp/PathogenGroups/Pages/IntroNe-
matodes.aspx, http://nematologia.com.br/about-
-sbn/revisoes-rapp/.
Nematoides fitoparasitas como vetores de vrus
Reviso sobre nematoides vetores de esp-
cies virais dos gneros Cheravirus, Nepovirus, To-
bravirus (http://www.fito2009.com/fitop/fitoplab-
virtaxon.html) foram publicados por Costa (1999),
Brown et al. (2004) e Almeida & Drecaemer (2005).
Essas revises, disponveis no endereo eletrnico
http://nematologia.com.br/about-sbn/revisoes-
-rapp/, abordam aspectos relevantes inerentes
aos nematoides dos gneros Longidorus, Paralon-
gidorus (Subfamlia Longidorinae, Famlia Longido-
ridae), Xiphinema (Subfamlia Xiphinematinae, Fa-
mlia Longidoridae); Trichodorus, Paratrichodorus
(Subfamlia Trichodorinae, Famlia Trichodoridae)
e suas espcies correlatas. Nesses gneros temos
como espcies vetoras de vrus e quarentenrias
para o Brasil Xiphinema diversicaudatum e X. rivesi.
71
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Sintomas
A ao dos nematoides quarentenrios nas
diversas hospedeiras, dependendo da espcie de ne-
matoide e de sua hospedeira, pode ou no gerar sin-
tomas como amarelecimento, murcha, leses necr-
ticas, podrido, tombamento, senescncia precoce,
deformaes foliares, galhas, nanismo, reduo da
lmina foliar, inflorescncias deformadas, sementes
manchadas, queda da produo e do nmero de flo-
res, bem como do peso de tubrculos, vagens, gros
e sementes. E, em certos casos, pode levar a planta
morte.
Sintomas especficos e associados aos nema-
toides quarentenrios podem ser visualizados con-
sultando-se as referncias citadas no texto e associa-
da espcie de nematoide quarentenrio.
Detecco de nematoides quarentenrios para o
brasil
Na deteco de nematoides, podem ser uti-
lizadas anlises baseadas nas caractersticas morfo-
lgicas e morfomtricas, sorolgicas, fsico-qumicas
e moleculares, por meio de Testes Biolgicos ob-
servao direta de sintomas, iscas biolgicas; Testes
Fsico-qumicos - teste de triturao, peneiramento e
flutuao; eletroforese em gel (agarose ou poliacrila-
mida) para isoenzima, microscopia tica, microsco-
pia eletrnica de varredura; Testes Sorolgicos - ELI-
SA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), Western
Blot; Testes Moleculares - Polymerase Chain Reaction
(PCR) com primers especficos ou degenerados, AFLP
(Amplified Fragment Length Polymorphism)-PCR,
LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification)
PCR, Multiplex PCR, PCR-RFLP (Polymerase Chain Re-
action - Restriction Fragment Length Polymorphism),
RAPD (RandomAmplification ofPolymorphicDNA)-
-PCR, Real Time PCR, SCAR (Sequence Characterized
Amplified Region)-PCR, sequenciamento de nucleo-
tdeos (Charchar, 1997; Perry et al., 2009; Oliveira et
al., 2011; Subbotin et al., 2013; Brioso &Dias, 2015).
No entanto, em termos de rotina de labora-
trio para a deteco e diagnose de nematoides, em
especial os quarentenrios para o Brasil, se utiliza
principalmente a observao de sintomas associa-
dos s caractersticas morfolgicas e morfomtricas
do nematoide via microscopia (tica e/ou eletrni-
ca) e/ou associado aos testes moleculares (PCR com
primers especficos, LAMP PCR, multiplex PCR, PCR-
-RAPD, PCR-RFLP, Real Time PCR, SCAR-PCR, Sequen-
72 RAPP - Volume 24, 2016
ciamento de nucleotdeos) devido rapidez, sensibi-
lidade e especificidade.
Atualmente, os pases tm padronizado a n-
vel internacional a metodologia de deteco e de
diagnose destes nematoides quarentenrios, bem
como de outros fitopatgenos e pragas. O objetivo
que todos os pases adotem o mesmo protocolo de
deteco com o intuito de evitar resultados contradi-
trios, em funo da metodologia utilizada.
Essas adequaes so referendadas e publi-
cadas no endereo eletrnico (https://www.ippc.
int/es/core-activities/standards-setting/ispms) sen-
do, posteriormente, divulgadas atravs das INs do
MAPA para aplicao nos ensaios de deteco e de
diagnose de pragas da Rede Nacional de Laborat-
rios Agropecurios do Sistema Unificado de Ateno
Sanidade Agropecuria (SUASA/ MAPA) (http://
www.fito2009.com/fitop/labmapa.html).
No que se refere nematoides, at 2016, fo-
ram editados os protocolos padres para deteco
de Ditylenchus dipsaci e D. destructor (IPPC, 2015),
Bursaphelenchus xylophilus (IPPC, 2016a) e Xiphine-
ma americanum sensu lato (IPPC, 2016b), estando
em fase de edio pela IPPC o referente Anguina
spp..
Taxonomia
A identificao taxonmica de nematoides se
d por via morfolgica e morfomtrica, associada ou
no informao molecular.
Chaves taxonmicas baseadas em caracteres
morfolgicos e morfomtricos, para os principais
gneros e espcies existentes no Brasil, podem ser
encontradas em Charchar (1997), Cares & Huang
(2000), Cares & Huang (2001), Cares & Andrade
(2006), Cares & Tenente (2007) e Cares et al. (2008).
Nestas chaves, os nematoides esto inseridos dentro
do Reino Animalia, Subreino Metazoa, Filo Nemato-
da que se subdivide em Classes, Subclasses, Ordens,
Subordens, Superfamlia, Famlia, Subfamlia, Gne-
ros e espcies, conforme exemplificado no endereo
eletrnico http://plpnemweb.ucdavis.edu/nema-
plex/Taxadata/Nemata.htm.
Quanto s categorias mais elevadas da clas-
sificao, que sofreram alteraes nos ltimos anos
a partir da anlise da menor subunidade do compo-
nente 16S do DNA ribossomal (SSU 16SrDNA) passou
a inserir os nematoides dentro do Domnio Eukarya,
Superreino Opisthokonta, Reino Animalia, Subreino
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Metazoa, Ramo Bilateralia, Subramo Protostomia,
Superfilo Ecdysozoa,Filo Nematoda que se subdi-
vide em Classes, Subclasses, Ordens, Subordens,
Superfamlia, Famlia, Subfamlia, Gneros e diver-
sas espcies, conforme exemplificado no endereo
eletrnico http://plpnemweb.ucdavis.edu/nema-
plex/Taxadata/Classes.htm#Molecular_Phylogeny_
Menu. Informaes relativas s sequncias gen-
micas ou de genes mitocondriais de nematoides
quarentenrios para o Brasil esto disponveis no Q-
-bank Nematodes database (http://www.q-bank.eu/
Nematodes/) e NCBI - National Center for Biotech-
nology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
Nematoides quarentenrios para o Brasil
Na Tabela 1 est indicada a posio taxonmi-
ca dos gneros de nematoides quarentenrios para o
Brasil, de acordo com o sistema de classificao que
adota dados morfolgicos, morfomtricos e molecu-
lares (http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Ta-
xadata/Classes.htm#Molecular_Phylogeny_Menu).
Os nematoides quarentenrios para o Brasil
podem ser transmitidos por sementes ou gros, ele-
mentos de propagao vegetativa (bulbos, estacas,
mudas, tubrculos, rizomas), plantas, solo, substra-
to, fardos e embalagens de madeira, inseto-vetor,
dependendo do gnero, conforme descrito nas infor-
maes de cada um dos nematoides quarentenrios.
Segue, abaixo, informaes das espcies de
nematoides quarentenrios para o Brasil relaciona-
dos aos gneros citados na Tabela 1.
Anguina agrostis (Steinbuch, 1799) Filipjev, 1936
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio tendo como
fase infectante o segundo estdio juvenil (J2). Infor-
maes gerais esto disponveis nas publicaes de
Krall (1991), Brzeski (1998), Cares et al. (2008) e nos
endereos eletrnicos https://www.ippc.int/static/
media/files/publication/en/2016/02/2013-0033A_
Draft_Annex_to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc,
http://nematode.unl.edu/aagrost.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Anguina associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
Anguina agrostis: Disponveis nas publicaes de
Krall (1991), Brzeski (1998), Cares et al. (2008) e no
endereo eletrnico https://www.ippc.int/static/
RAPP - Volume 24, 2016
media/files/publication/en/2016/02/2013-0033A_
Draft_Annex_to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc.
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Alema-
nha, Austrlia, Canad, China, Eslovquia, Estnia,
Estados Unidos, Finlndia, Gergia, Holanda, Norue-
ga, Nova Zelndia, Polnia, Quirguisto, Reino Uni-
do, Repblica Tcheca, Rssia, Sucia, Ucrnia.
Hospedeiros: Agrostis canina, A. capillaris, A.
castellana, A. exarata, A. gigantea, A. polymorpha,
A. stolonifera, A. sylvatica, A. tenuis, Apera sp., Arc-
tagrostis latifolia, Bromus erecta, Buchloe dactyloi-
des, Calamagrostis canadensis, Dactylis sp., Eragros-
tis sp., Festuca sp., Hordeum sp., Koeleria glauca, K.
gracilis, K. macrantha, K. talievi, Leymus chinensis,
Lolium multiflorum, Lolium rigidum, Phalaris arundi-
nacea, Phleum sp., Poa sp. Puccinellia sp., Sporobo-
lus brockmanii, Trisetum sp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Subbotin etal., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Powers etal., 2001); Teste de Real Time PCR
(Ma etal., 2011; Li etal., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 27/2011, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para A. agrostis em importao
de gros ou sementes de Lolium multiflorum.
Anguina pacificae Vera & Maggenti, 1984
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmi-
ca: Trata-se de um ectoparasita migratrio, sen-
do o J2 a fase infectante. Informaes gerais esto
disponveis nas publicaes de Vera & Maggenti
(1984), Cares et al. (2008) e no endereo eletrni-
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cation/en/2016/02/2013-0033A_Draft_Annex_to_
ISPM_27__Anguina_spp._4.doc e http://nematode.
unl.edu/anguipac.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Anguina associadas s informaes morfolgicas e
morfomtricas que permitem a identificao de An-
guina pacificae: Disponveis na publicao de Vera &
Maggenti (1984), Cares et al. (2008) e no endereo
eletrnico https://www.ippc.int/static/media/files/
publication/en/2016/02/2013-0033A_Draft_Annex_
to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc.
Distribuio geogrfica: Estados Unidos, Ir-
landa.
73
 74
Tabela 1. Posio taxonmica dos gneros de nematoides quarentenrios para o Brasil, de acordo com o sistema de classificao que adota dados morfolgicos, mor-
fomtricos e moleculares a partir do Filo Nematoda*.
Filo Classe Sub classe Ordem Sub ordem Super familia Familia Sub familia Gnero
Chromadorea Chromadoria Tylenchina Aphelenchoidea Aphelenchoididae Bursaphelenchinae Bursaphelenchus
Tylenchina Sphaerularioidea Anguinidae Anguininae Anguina
Tylenchina Sphaerularioidea Anguinidae Anguininae Ditylenchus
Tylenchina Sphaerularioidea Anguinidae Anguininae Subanguina
Tylenchina Criconematoidea Criconematidae Criconematinae Criconema
Tylenchoidea Belonolaimidae Belonolaiminae Belonolaimus
Rhabditida Tylenchoidea Heteroderidae Heteroderinae Globodera
Nematoda
Tylenchoidea Heteroderidae Heteroderinae Heterodera
Tylenchoidea Heteroderidae Meloidogyninae Meloidogyne
Tylenchoidea Pratylenchidae Nacobbinae Nacobbus
Tylenchoidea Pratylenchidae Pratylenchinae Pratylenchus
Tylenchoidea Heteroderidae Punctoderinae Punctodera
Tylenchoidea Pratylenchidae Pratylenchinae Radopholus

RAPP - Volume 24, 2016

Tylenchoidea Hoplolaimidae Rotylenchulinae Rotylenchulus
Enoplea Dorylaimia Dorylaimida Dorylaimina Dorylaimoidea Longidoridae Xiphinematinae Xiphinema
*Adaptado de http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/Classes.htm#Molecular_Phylogeny_Menu
Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Hospedeiros: Agrostis canina, Paspalum va-
ginatum, Poa annua.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Subbotin etal., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Powers etal., 2001); Teste de Real Time PCR
(Ma etal., 2011; Li etal., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 04/2007,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para A. pacificae em importao de mudas
de Paspalum vaginatum.
Anguina tritici (Steinbuch, 1799) Chitwood, 1935
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmi-
ca: Trata-se de um ectoparasita migratrio, sen-
do o J2 a fase infectante. Informaes gerais esto
disponveis nas publicaes de Krall (1991), Brzeski
(1998), Cares et al. (2008) e no endereo eletrni-
co https://www.ippc.int/static/media/files/publi-
cation/en/2016/02/2013-0033A_Draft_Annex_to_
ISPM_27__Anguina_spp._4.doc e http://nematode.
unl.edu/angutrit.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Anguina associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
Anguina tritici: Disponveis nas publicaes de Krall
(1991), Brzeski (1998), Cares et al. (2008) e no ende-
reo eletrnico https://www.ippc.int/static/media/
files/publication/en/2016/02/2013-0033A_Draft_
Annex_to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc.
Distribuio geogrfica: Afeganisto, Ale-
manha, Arbia Saudita, Austrlia, ustria, Azerbai-
jo, Bulgria, China, Crocia, Chipre, Coria, Egito,
Espanha, Estados Unidos, Etipia, Frana, Grcia,
Holanda, Hungria, India, Inglaterra, Ir, Iraque, Irlan-
da, Israel, Itlia, Iugoslvia, Nova Zelndia, Paquis-
to, Polnia, Romnia, Rssia, Sria, Sucia, Sua,
Taiwan, Turquia, Ucrnia. Embora haja um relato de
1959 desse nematoide no Brasil, considera-se que o
mesmo no ocorre no pas (Tenente et al., 2007).
Hospedeiros: Avena sativa, Avena sp., Hor-
deum vulgare, Phalaris minor, Secale cereale Triti-
cum aestivum, T. dicoccum, T. durum, T. monococ-
cum, T. spelta, T. ventricosum, T. vulgare.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Subbotin etal., 2004); Teste de PCR-
RAPP - Volume 24, 2016
-RFLP (Powers etal., 2001); Teste de Real Time PCR
(Ma etal., 2011; Li etal., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 12/2000,
IN 04/2001, IN 42/2003, IN 6/2005, IN 44/2005, IN
52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para A. tritici em importao de gros ou se-
mentes de Avena sativa, Triticum aestivum, Triticum
spp..
Belonolaimus longicaudatus Rau, 1958
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
na publicao de Rau (1958) e no endereo eletrni-
co http://entnemdept.ufl.edu/creatures/nematode/
sting_nematode.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Belonolaimus associadas s informaes morfol-
gicas e morfomtricas que permitem a identifica-
o de Belonolaimus longicaudatus: Disponvel na
publicao de Vera & Subbotin (2012).
Distribuio geogrfica: Arbia Saudita, Cos-
ta Rica, Estados Unidos, Mxico, Paquisto, Porto
Rico, Turquia.
Hospedeiros: Acer rubrum, Aeschynome-
ne americana, Alysicarpus ovalifolius, A. vaginalis,
Apium graveolens, Arachis hypogaea, Brassica olera-
cea var. capitata, Brassica rapa, Capsicum annuum,
Capsicum frutescens, Chrysanthemum morifolium,
Chrysanthemum spp.,Citrus spp., Cornus florida,
Cucumis melo, Cucurbita maxima, Cucurbita pepo,
Cynodon dactylon, Cyperus rotundus, Desmodium
tortuosum, Eremochloa ophiuroides, Festuca elatior,
Fragaria spp., Gerbera spp.,Glycine hispida, G. max,
Gossypium hirsutum, Ipomoea pes-caprae, Lactuca
sativa, Liquidambar styraciflua, Lolium multiflorum,
L. perenne, Magnolia virginiana, Mentha spicata,
Ocimum basilicum, Panicum ramosum, Paspalum
vaginatum, Pennisetum glaucum, P. purpureum,
Phaseolus vulgaris, Pinus cubensis, Pisum sativum,
Pittosporum tobira, Platanus occidentalis, Prunus
persica, Raphanus sativus, Ricinus communis, Sac-
charum sp., Sambucus canadensis, Secale cereale,
Solanum lycopersicum, S. melongena, S. tuberosum,
Sorghum bicolor, S. bicolor x S. sudanense, S. vulgare,
Stenotaphrum secundatum, Tagetes patula, Uniola
paniculata, Vaccinium corymbosum, Vaccinium spp.,
75
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Vicia villosa, Vigna unguiculata, Vitis sp., Zea mays,
Zoysia matrella.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Vera & Subbotin, 2012; Kutsuwa et
al., 2015; Kanan et al., 2015); Teste de Real Time PCR
(Kanan et al., 2015). Conforme o DOC SAC/CGAL n
06 Escopo da rea de Diagnstico Fitossanitrio -
Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo s IN 25/2001, IN 14/2002,
IN 06/2005, IN 04/2007, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, obrigatria a anlise para B. longicauda-
tus em importao de mudas de Chrysanthemum
spp., Cynodon dactylon, Fragaria ananassa, Gerbe-
ra jamesonii, Gerbera spp., Paspalum vaginatum,
Vaccinium corymbosum, Vaccinium spp.; plantas de
Gerbera jamesonii, Gerbera spp., Vaccinium corym-
bosum, Vaccinium spp.; sementes de Capsicum an-
nuum, Capsicum frutescens.
Bursaphelenchus mucronatus Mamya & Endo, 1979
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio transmitido
pelo inseto vetor Monochamus spp., sendo o J4 a fase
infectante. Informaes gerais esto disponveis na
publicao de Mamya & Endo (1979) e no endereo
eletrnico http://nematode.unl.edu/pest2.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Bursaphelenchus associadas s informaes mor-
folgicas e morfomtricas que permitem a identi-
ficao de Bursaphelenchus mucronatus: Dispon-
vel nas publicaes de Yinet al. (1988), Pereira et al.
(2013), Braasch & Schnfeld (2015) e IPPC (2016a).
Distribuio geogrfica: Alemanha, Armnia,
ustria, Azerbaijo, Belarus, Canad, China, Coria,
Cazaquisto, Eslovnia, Espanha, Estnia, Finlndia,
Frana, Gergia, Grcia, Itlia, Japo, Letnia, Litu-
nia, Moldova, Noruega, Polnia, Portugal, Rssia, Su-
cia, Sua, Ucrnia, Taiwan, Tailndia, Turquia.
Hospedeiros: Larix olgen, L. sibirica, Picea
spp., Pinus densiflora, P. halepensis, P. nigra, P. pi-
naster, P. silvestris, P. thunbergiana, Quercus robur.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Matsunaga & Togashi, 2004; Pereira
et al., 2013; IPPC, 2016a); PCR-RFLP (Burgermeister
etal., 2005; Burgermeister etal., 2009; IPPC, 2016a);
Teste de Real Time PCR (Ye& Giblin-Davis, 2013; Fili-
piak & Hasiw-Jaroszewska, 2016; IPPC, 2016a). Con-
76 RAPP - Volume 24, 2016
forme o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de
Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
s IN 05/2005, IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008,
IN 59/2013, obrigatria a anlise para B. mucro-
natus em importao de embalagens de madeira de
todas as espcies vegetais que produzem madeira.
Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer,
1934) Nickle, 1970
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio transmitido
pelo inseto vetor Monochamus spp., sendo o J4 a fase
infectante. Informaes gerais esto disponveis nas
publicaes de Nickle (1970), Auer & Santos (2012),
IPPC (2016a) e no endereo eletrnico http://nema-
tode.unl.edu/bxyloph.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Bursaphelenchus associadas s informaes morfo-
lgicas e morfomtricas que permitem a identifica-
o de Bursaphelenchus xylophilus: Disponvel nas
publicaes de Yinet al. (1988), Pereira et al. (2013),
Braasch & Schnfeld (2015) e IPPC (2016a).
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Cana-
d, China, Coria do Sul, Espanha, Estados Unidos,
Hong Kong, Japo, Mxico, Portugal, Taiwan.
Hospedeiros: As espcies mais suscetveis es-
to no gnero Pinus, incluindo P. densiflora, P. echina-
ta, P. elliottii, P. estevesii, P. halepensis, P.koraiensis,
P. leiophylla, P. luchuensis, P. luchuensis, P. massonia-
na, P. mugo, P. muricata, P. nigra, P. pinaster, P. pnea,
P. radiata, P. resinosa, P. silvestres, P. strobus, P. syl-
vestris, P. thunbergiana, P. thunbergii. Tambm tm
sido relatadas espcies dos gneros Abies, Chama-
ecyparis, Cedrus, Larix, Picea e Pseudotsuga como
hospedeiros.
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Matsunaga and Togashi, 2004;
Pereira et al., 2013; IPPC, 2016a); PCR-RFLP (Bur-
germeister etal., 2005; Burgermeister etal., 2009;
IPPC, 2016a); Teste de Real Time PCR (Franois etal.,
2007; IPPC, 2016a); LAMP-PCR (Kikuchi etal., 2009;
Aikawa et al., 2012; IPPC, 2016a). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 05/2005,
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para B. xylophilus em importa-
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
o de embalagens de madeira de todas as espcies
vegetais que produzem madeira; de estacas e plan-
tas de Pinus spp..
Criconema mutabile (Taylor) Raski & Luc, 1985
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Raski (1952), Edward & Misra
(1964), Raski & Luc (1987) e no endereo eletrnico
http://keys.lucidcentral.org/keys/nematodes/html/
Criconema%20note.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Criconema associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
Criconema mutabile: Disponveis nas publicaes de
Yeates et al. (1997) e Hunt et al. (2005).
Distribuio Geogrfica: frica do Sul, Aus-
trlia, Costa Rica, Estados Unidos, Peru. No Brasil,
segundo Sharma & Loof (1977) e Ferraz (1980), tal
espcie ocorre no pas. No entanto, tal informao
merece posterior confirmao visando confirma-
o da presena desta espcie no pas, uma vez que
em 1987 houve a publicao de Raski & Luc.
Hospedeiros: Acanthus sp., Acer sp., Aralia
sp., Arctium lappa, Arrhenatherum sp., Avena sati-
va, Axonopus sp., Baccharis sp., Bambusa sp., Beta
vulgaris, B. vulgaris cicla, Billbergia sp., Bougainvil-
lea sp., Camellia sp., Citrus sp., Cynodon dactylon,
Dahlia sp., Dichondra sp., Dioscorea sp., Echinochloa
sp., Fragaria chiloensis, Gossypium hirsutum, Hor-
deum vulgare, Ilex sp., Ipomoea batatas, Juglans hin-
dsii, Litchi chinensis, Ligustrum sp., Liquidambar sp.,
Malus sylvestris, Medicago sativa, Morus sp., Musa
sp., Nicotiana sp., Persea americana, Philodendron
sp., Pinus sp., Prunus domestica, P. dulcis, P. persica,
Pyracantha sp., Pyrus communis, Rhododendron sp.,
Rosa sp., Solanum lycopersicum, Sorghum bicolor,
Syringa sp., Tagetes sp., Trifolium repens, Typha sp.,
Vigna unguiculata var. sesquipedalis, Vitis vinifera,
Yucca sp., Zea mays, Zingiber sp., Zoysia sp. Tambm
inclui algumas espcies de Bromeliaceae, Cactaceae
e de Palmaceae.
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Cordero et al., 2012). Conforme
o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diag-
nstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo IN
RAPP - Volume 24, 2016
63/2004, obrigatria a anlise para C. mutabile em
importao de alporques de Litchi chinensis.
Ditylenchus africanus Wendt, Swart, Vrain & Webs-
ter, 1995
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J3 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Wendt et al. (1995), IPPC (2015),
Steenkamp et al. (2016) e no endereo eletrnico
http://nematode.unl.edu/pest3.htm.
Chave para a identificao de espcies de Di-
tylenchus associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
D. africanus: Disponveis nas publicaes de Wendt
et al. (1995) e IPPC (2015).
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Mo-
ambique.
Hospedeiros: Arachis hypogaea, Chenopo-
dium album, Datura stramonium, Eleusine indica,
Glycine max, Gossypium hirsutum, Helianthus an-
nuus, Lupinus albus, Medicago sativa, Nicotiana ta-
bacum, Phaseolus vulgaris, Pisum sativum, Solanum
tuberosum, Sorghum bicolor, Tagetes minuta, Triti-
cum aestivum, Vigna unguiculata, Xanthium struma-
rium, Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de PCR-RFLP (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para D. africanus em importao de semen-
tes de Arachis hypogaea.
Ditylenchus angustus (Butler, 1913) Filipjev, 1936
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J3 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Wendt et al. (1995), Das & Bajaj
(2008), Oliveira et al. (2013) e IPPC (2015).
Chave para a identificao de espcies de Di-
tylenchus associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
D. angustus: Disponveis nas publicaes de Wendt
et al. (1995), Das & Bajaj (2008) e IPPC (2015).
77
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Distribuio geogrfica: Bangladesh, Filipi-
nas, India, Indonsia, Malsia, Myanmar, Tailndia,
Vietn.
Hospedeiros: Echinochloa colona, Leersia he-
xandra, Medicago sativa, Oryza sativa, Sacciolepsis
interrupta.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Ibrahim et al., 1994; Wendt et al.,
1995; IPPC, 2015); Teste de PCR-RFLP (Ibrahim et
al., 1994; Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Teste de
RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme o DOC SAC/
CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitos-
sanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para D. angustus em importao de gros e
sementes de Oryza sativa.
Ditylenchus destructor Thorne, 1945
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J3 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Wendt et al. (1995) e IPPC (2015).
Chave para a identificao de espcies de Di-
tylenchus associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
D. destructor: Disponveis nas publicaes de Wendt
et al. (1995) e IPPC (2015).
Distribuio geogrfica: Albnia, Alemanha,
Arbia Saudita, ustria, Azerbaijo, Blgica, Bulgria,
Canad, China, Coria, Eslovquia, Estados Unidos,
Estnia, Frana, Grcia, Holanda, Hungria, Ir, Japo,
Letnia, Luxemburgo, Mxico, Moldova, Noruega,
Paquisto, Polnia, Quirguisto, Reino Unido, Re-
pblica Tcheca, Romnia, Sucia, Sua, Tajiquisto,
Turquia, Ucrnia, Uzbequisto.
Hospedeiros: Allium sativum, Arachis hypo-
gaea, Allium cepa, Apium graveolens, Babiana nana,
Begonia elatior, B. semperflorens, B. tuberhybrida,
Begonia x hiemalis, Bellis perennis, Beta vulgaris,
Calathea spp., Canna indica, Chenopodium album,
Chloris virgata, Chrysanthemum spp., Cimicifuga
racemosa, Colchicum giganteum, C. speciosum, Cro-
cus sp., Cyperus rotundus, Dahlia spp., Datura stra-
monium, Daucus carota, Eleusine indica, Gladiolus
hybridus, G. colvillei, Gladiolus spp., Glycine max,
Gossypium hirsutum, Helianthus annuus, Hyacinthus
spp., Hydrangea acuminata, H. altssima, H. ano-
78 RAPP - Volume 24, 2016
mala, Humulus lupulus, Ipomoea batatas, Iris sp.,
Liatris spicata callilepis, Lilium spp., Linaria vulga-
ris, Lupinus albus, Medicago sativa, Mentha arven-
sis, Nicotiana tabacum, Panax ginseng, Pastinaca
sativa, Phaseolus vulgaris, Pinus ponderosa, Pisum
sativum, Plantago major, Raphanus sativus, Rumex
obtusifolius, Sisyrinchium angustifolium, Solanum
tuberosum, Solidago graminifolia, Sonchus arvensis,
S. asper, Sorghum bicolor, Stachys palustris, Syringa
vulgaris, Tagetes minuta, Taraxacum officinale, Tigri-
dia pavonia, Tigridia sp., Trifolium hybridum, T. pra-
tense, Tropaeolum polyphyllum, Tulipa australis, T.
fosterana, T. gesneriana,T. hageri, T. linifolia, T. pra-
estans, T. pulchella, T. saxatilis, T. tarda, T. violacea,
Tussilago farfara, Vicia sativa, Vigna unguiculata,
Xanthium spp., Zantedeschia spp., Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de PCR-RFLP (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 04/2001,
IN 20/2003, IN 06/2005, IN 06/2006, IN 03/2007,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria
a anlise para D. destructor em importao de bul-
bos de Allium sativum, Dahlia spp., Gladiolus spp.,
Hyacinthus spp., Lilium spp., Tigridia pavonia, Tuli-
pa fosterana, Tulipa gesneriana, Tulipa spp., Zan-
tedeschia aethiopica, Zantedeschia spp.; mudas de
Begonia elatior, B. semperflorens, B. tuberhybrida,
Begonia x hiemalis, Chrysanthemum spp., Dahlia
spp., Fragaria ananassa, Hydrangea acuminata, H.
altissima, H. anomala, estacas com raiz de Begonia
elatior, B. semperflorens, B. tuberhybrida, Begonia x
hiemalis, Chrysanthemum spp., Dahlia spp.; semen-
tes de Allium sativum, Arachis hypogaea, tubrculos
de Solanum tuberosum; plantas de Begonia elatior,
B. semperflorens, B. tuberhybrida, Begonia x hiema-
lis; rizoma de Calathea spp..
Ditylenchus dipsaci (Khn, 1857) Filipjev, 1936
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J3 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Wendt et al. (1995) e IPPC (2015).
Chave para a identificao de espcies de Di-
tylenchus associadas s informaes morfolgicas e
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
morfomtricas que permitem a identificao de D.
dipsaci: Disponveis nas publicaes de Wendt et al.
(1995) e IPPC (2015).
Distribuio geogrfica: Albnia, Alemanha,
Arglia, Argentina, Armnia, Austrlia, ustria, Azer-
baijo, Belarus, Blgica, Bsnia-Herzegovina, Bolvia,
Bulgria, Canad, Cazaquisto, Chile, China, Chipre,
Colmbia, Coria, Crocia, Costa Rica, Dinamarca,
Equador, Eslovquia, Eslovnia, Espanha, Estados
Unidos, Estnia, Finlndia, Frana, Gergia, Grcia,
Haiti, Holanda, Hungria, Ir, Iraque, Israel, Itlia, Ja-
po, Jordnia, Letnia, Litunia, Macednia, Malta,
Marrocos, Mxico, Moldova, Noruega, Nova Zeln-
dia, Oman, Paquisto, Paraguai, Peru, Polnia, Por-
tugal, Qunia, Quirguisto, Reino Unido, Repblica
Domenicana, Repblica Tcheca, Rssia, Srvia &
Montenegro, Sria, Sucia, Sua, Tunsia, Turquia,
Ucrnia, Uruguai, Uzbequisto, Venezuela, Yemen.
No Brasil ocorre somente a raa do alho, que even-
tualmente parasita a cebola (Tenente et al., 2000).
Hospedeiros: o nmero de plantas hospe-
deiras ultrapassa a 450 espcies, incluindo Aethusa
cynapium, Agropyron repens, Agrostemma githa-
go, Allium spp., Alopecurus geniculatu, Alstroeme-
ria spp., Aster spp., Amaryllis sp., Ambrosia elatior,
Ammi majus, Amsinckia intermdia, Anagallis ar-
vensis, Anemone coronaria, A. hupehensis, Stearn
japonica, Angelica archangelica, Anthoxanthum
odoratum, Anthriscus sylvestris, Anthyllis vulneraria,
Apera spica-venti, Apium graveolens, Arabidopsis
thaliana, Arabis alpina, A. aubrietioides, Arenaria
serpyllifolia, Armoracia rusticana, Arnoseris minima,
Arrhenatherum elatius, Asparagus setaceus, Aspho-
deline lutea, Aster squamatus, Atriplex sp., Aubrieta
deltoidea, Aucuba japonica, Avena spp., Baccharis
subpingraea, Begonia spp., Beta vulgaris, Bouvar-
dia humboldtii, Brachypodium pinnatum, Brassica
campestris var. pekinensis, Brassica napus, B. nigra,
Brassica oleracea var. acephala, Brassica oleracea
var. botrytis, B. oleracea var. bullata, Brassica olera-
cea var. capitata, Brassica oleracea var. gemmifera,
Brassica oleracea var. gongylodes, Brassica oleracea
var. italica, Brassica rapa, Bromus inermis, Calathe-
alindbergii, Calceolaria spp.,Callistephus chinensis,
Camelina sativa, Campanula medium, C. persicifo-
lia, Cannabis sativa, Capsella bursa-pastoris, Cap-
sicum annuum, Cardamine pratensis, Cardaria dra-
ba, Carduus acanthoide, Carex sp., Carlina vulgaris,
Centaurea spp., Cerastium arvense, C. vulgatum,
RAPP - Volume 24, 2016
Ceratochloa sp.,Chaetochloa sp.,Cheiranthus cheiri,
C. mutabilis, Chelone glabra, Chenopodium album,
C. polyspermum, Chionodoxa luciliae, C. sardensis,
Chrysanthemum spp., Cicer arietinum, Cichorium in-
tybus, Cirsium spp., Colchicum spp., Coleus blumei,
Collomia coccinea, C. grandiflora, Consolida orien-
talis, Convallaria majalis, Convolvulus arvensis, Co-
ronopus squamatus, Crepis spp., Cucumis sativus,
Cyclamen persicum,Cynara cardunculus, Cynosurus
cristatus, Dactylis glomerata, Daucus carota, Del-
phinium trolliifolium, Dianthus spp.,Digitalis spp.,
Digitaria sanguinalis, Dipsacus spp., Disa uniflora,
Duchesnea indica, Echinochloa crus-galli, Endymion
hispanicus, E. non-scriptus, Equisetum arvense, Ere-
chtites praealta, Eremurus stenophyllus X E. olgae,
Erigeron annuus, E. canadensis, Erodium cicutarium,
Erysimum allionii, Eucharis sp., Fagopyrum escu-
lentum, Festuca spp., Ficus elastica, Fragaria spp.,
Fumaria officinalis, Galanthus hybridus, G. nivalis,
Galinsoga parviflora, Galium aparine, G. tricorne,
Galtonia candicans, Geranium dissectum, G. molle,
Gilia achilleifolia, G. minima, Gladiolus spp., Gerbera
spp., Glycine hispida, G. max, Gossypium sp., Gyp-
sophila spp., Helenium sp., Helianthus annuus, H.
tuberosus, Helichrysum orientale, Helleborus orien-
talis, Hepatica americana, Heuchera spp., Hibiscus
spp., Hieracium pilosella, Holcus lanatus, H. mollis,
Hordeum vulgare, Hyacinthus spp, Hydrangea ma-
crophylla, Hymenocallis calathin, Hyoscyamus niger,
Hypochaeris radicata, Ipomoea batatas, Ipomopsis
rubra, Iris sp., Isatis tinctoria, Juncus bufonius, Kick-
xia spuria, Knautia arvensis, Kniphofia sp., Koeleria
pyramidata, Lactuca canadensis, Lamium spp., La-
thyrus odoratus, L. sativus,Lavandula angustifolia,
Leontodon spp., Lepidium sativum, L. virginicum,
Leucojum sp., Liatris spicata, Lilium spp., Linaria ca-
nadensis, L. vulgaris, Linum usitatissimum, Lolium
multiflorum, L. perenne, Lupinus angustifolius, L.
luteus, Lotus corniculatus,Lycopsis arvensis, Lycoris
radiata, Lysimachia sp., Manihot esculenta, Medi-
cago spp., Melampyrum arvense, Melilotus Alba,
Mentha arvensis, Mercurialis annua, Mollugo ver-
ticillata, Monarda spp., Muscari botryoides, M. ne-
glectum, Myosotis spp., Myriophyllum verticillatum,
Narcissus spp., Nicotiana tabacum,Odontites verna,
Oenothera spp., Onobrychis viciifolia, Ornithogalum
spp., Oxalis sp., Paeonia officinalis, Panicum milia-
ceum, Papaver rhoeas, P. somniferum, Pastinaca
sativa, Penstemon barbatus, Penstemon spp., Pe-
79
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
troselinum crispum, Phacelia heterophylla, P. tana-
cetifolia, Phaseolus spp., Philodendron spp., Phleum
pratense, Phlox spp., Physalis pubescens, Pisum sa-
tivum, Plantago spp., Poa spp., Polianthes tuberosa,
Polygonum spp., Potamogeton mucronatus, Poten-
tilla anserina, Primula spp., Prunus sp., Puschkinia
scilloides, Ranunculus spp., Raphanus raphanistrum,
Raphanus sativus, Rheum rhaponticum, Rhododen-
dron simsii, Rosa sp., Rumex sp., Saccharum offici-
narum, Saponaria officinalis, Saxifraga cotyledon,
Schizanthus retusus, S. wisetonensis, Scilla bifolia, S.
siberica, Scleranthus annuus, Scorzonera tau-saghyz,
Secale cereale, Senecio vulgaris, Sherardia arvensis,
Silene noctiflora, S. schafta, Simethis planifolia, Si-
napis alba, Solanum spp., Sorghum spp., Spergula
arvensis, Spinacia oleracea, Sprekelia formosissima,
Stachys arvensis, S. palustris, Stellaria media, Stern-
bergia lutea, Tagetes patula, Taraxacum spp., Thlas-
pi arvense, Tigridia pavonia, Tragopogon porrifolius,
Trifolium spp., Tripleurospermum maritimum, Triti-
cum aestivum, Tuberaria guttata, Tulipa spp., Urti-
ca urens, Valerianella spp., Veronica spp., Vicia spp.,
Viola spp., Vitis vinifera, Yucca flaccida, Zantedes-
chia spp., Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015);
Teste de PCR-RFLP (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015);
Teste de RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme
oDOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diag-
nstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo s
Port. 129/1997, IN 04/2001, IN 62/2004, IN 6/2005,
IN 06/2006, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 74/2009
(Mercosul), IN 11/2010, IN 13/2010, IN 05/2011,
IN 27/2011, IN 05/2013, IN 59/2013, IN 23/2015,
obrigatria a anlise para D. dipsaci (no caso de to-
das as raas, exceto as do alho) em importao de
bulbos de Allium sativum, Gladiolus spp., Hyacin-
thus spp, Lilium spp., Narcissus spp., Ornithogalum
spp., Tulipa fosterana, T. gesneriana, Tulipa spp.,
Zantedeschia aethiopica, Zantedeschia spp.; mudas
de Alstroemeria spp., Begonia elatior, B. semperflo-
rens, B. tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Calceola-
ria integriflia, Chrysanthemum spp., Coleus blumei,
Cyclamen persicum, Dianthus barbatus, Dianthus
caryophyllus, Dianthus chinensis, Dianthus purpu-
rea, Fragaria ananassa, Gerbera jamesonii, Gerbe-
ra spp., Gypsophila spp., Hibiscus spp., Hydrangea
80 RAPP - Volume 24, 2016
macrophylla, Philodendron spp., Rhododendron sim-
sii; estacas de Begonia elatior, B. semperflorens, B.
tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Chrysanthemum
spp., Coleus blumei, Fardos de Medicago sativa;
plantas de Alstroemeria spp., Begonia semperflo-
rens, Chrysanthemum spp., Coleus blumei, Cyclamen
persicum, Fragaria ananassa, Gerbera jamesonii,
Gerbera spp.; sementes de Allium cepa, Allium sa-
tivum, Aster spp., Begonia elatior, B. semperflorens,
B. tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Brassica cam-
pestris var. pekinensis, Brassica napus, Brassica ole-
racea var. acephala, Brassica oleracea var. botrytis,
Brassica oleracea var. capitata, Brassica oleracea var.
gemmifera, Brassica oleracea var. gongylodes, Bras-
sica oleracea var. italica, Calceolaria spp., Campanu-
la medium, Capsicum annuum, Cheiranthus cheiri,
Gypsophila spp., Helianthus annuus, Heuchera spp.,
Lolium multiflorum, Lotus corniculatus, Lysimachia
congestiflora, Medicago sativa, Monarda spp., Nico-
tiana tabacum, Ornithogalum spp., Penstemon spp.,
Phaseolus vulgaris, Pisum sativum, Primula spp., Ra-
phanus sativus, Sorghum spp., Trifolium alexandri-
num, Trifolium spp., Vicia spp., Zea mays; tubrculos
de Solanum tuberosum.
Globodera pallida (Stone, 1973) Behrens, 1975
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmi-
ca: Trata-se de um endoparasita sedentrio, sen-
do o J2 a fase infectante. Informaes gerais esto
disponveis nas publicaes de Stone et al. (1973),
Behrens (1975), Cotton et al. (2014)e, nos endere-
os eletrnicos http://nematode.unl.edu/pest5.htm
e http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxada-
ta/G053S1.HTM.
Chave para a identificao de espcies de
Globodera associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao cor-
reta de G. pallida: Disponveis nas publicaes de
Stone et al. (1973), Behrens (1975), Subbotin et al.
(2010) e Subbotin et al. (2011).
Distribuio geogrfica: Alemanha, Arglia,
Argentina, ustria, Blgica, Bolvia, Bulgria, Bsnia-
-Herzegovina, Canad, Chile, Colmbia, Costa Rica,
Crocia, Chipre, Dinamarca, Equador, Eslovnia, Es-
tados Unidos, Espanha, Finlndia, Frana, Grcia,
Holanda, Hungria, ndia, Ir, Itlia, Luxemburgo,
Malta, Nova Zelndia, Noruega, Panam, Paquisto,
Peru, Polnia, Portugal, Reino Unido, Romnia, Su-
cia, Sua, Tunsia, Turquia, Venezuela.
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Hospedeiros: Datura spp., Solanum acaule, S.
americanum, S. aviculare, S. cardiophyllum, S. dulca-
mara, S. ehrenbergii, S. gilo, S. indicum, S. lycopersi-
cum, S. marginatum, S. mauritianum, S. melongena,
S. multidissectum, S. muricatum, S. nigrum, S. oplo-
cense, S. quitoense, S. sarrachoides, S. scabrum, S.
spegazzinii, S. triflorum, S. tuberosum, S. vernei.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Skantaret al., 2007; Hockland et al.,
2012; Tirchet al., 2016); Teste de PCR-RFLP (Sirca et
al., 2010; Tirchet al., 2016); Teste de Multiplex Real
Time PCR (Nakhla et al., 2010). Conforme o DOC SAC/
CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitossa-
nitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal
que demanda o ensaio relativo s Port. 129/1997,
IN 20/2003, IN 27/2004, IN 06/2005, IN 52/2007, IN
41/2008, IN 59/2013, obrigatria a anlise para G.
pallida em importao de mudas de Rosa spp.; plan-
tas de Fragaria spp., Rosa spp.; tubrculos de Sola-
num tuberosum.
Globodera rostochiensis (Wollenweber, 1923),
Skarbilovich, 1959
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis na publicao de Salinas-Castro et al. (2016) e,
nos endereos eletrnicos http://download.ceris.
purdue.edu/file/2334 e http://nematode.unl.edu/
pest6.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Globodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de G. rostochiensis: Disponveis nas publicaes de
Subbotin et al. (2010) e Subbotin et al. (2011).
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Alb-
nia, Alemanha, Arglia, Armnia, ustria, Austrlia,
Belarus, Blgica, Bolvia, Bsnia-Herzegovina, Bul-
gria, Canad, Chile, Colmbia, Crocia, Chipre, Di-
namarca, Equador, Eslovquia, Eslovnia, Espanha,
Estados Unidos, Estnia, Filipinas, Finlndia, Frana,
Grcia, Holanda, Hungria, India, Indonsia, Ir, It-
lia, Japo, Letnia, Lbano, Lbia, Liechtenstein, Li-
tunia, Luxemburgo, Malta, Mxico, Noruega, Nova
Zelndia, Oman, Panam, Paquisto, Peru, Polnia,
Portugal, Qunia, Reino Unido, Repblica Tcheca,
Romnia, Rssia, Serra Leoa, Srvia, Sri Lanka, Su-
cia, Sua, Tajiquisto, Tunsia, Turquia, Ucrnia, Ve-
RAPP - Volume 24, 2016
nezuela.
Hospedeiros: Atropa belladonna, Chenopo-
dium spp., Cyphomandra betacea, Datura ferox, D.
stramonium, Hyoscyamus niger, Nicotiana acumi-
nata, Oxalis tuberosa, Physalis philadelphica, Phy-
sochlaina orientalis, Salpiglossis sinuata, Solanum
andigenum, S. anomalocalyx, S. antipoviczii, S. ar-
matum, S. ascasabii, S. asperum, S. polyacanthos, S.
polyadenium, S. pyriforme, S. racemigerum, S. tube-
rosum, Ullucus tuberosus.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Skantaret al., 2007; Hockland et al.,
2012; Tirchet al., 2016); Teste de PCR-RFLP (Tirchet
al., 2016); Teste de Multiplex Real Time PCR (Nakhla
et al., 2010). Conforme o DOC SAC/CGAL n 06 Es-
copo da rea de Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02
- 10.12.2015, e baseado no ato legal que demanda
o ensaio relativo s Port. 129/1997, IN 20/2003, IN
27/2004, IN 06/2005, IN 06/2006, IN 52/2007, IN
41/2008, IN 59/2013, obrigatria a anlise para
G. rostochiensis em importao de bulbos de Lilium
spp.; mudas de Rosa spp.; plantas de Fragaria spp.,
Prunus cerasus, Rhododendron indicum, Rosa spp.,
Salvia spp.; tubrculos de Solanum tuberosum.
Heterodera avenae Wollenweber, 1924
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
na publicao de Handoo (2002) e nos endereos
eletrnicos http://nematode.unl.edu/hetaven.htm
e https://gd.eppo.int/taxon/HETDMA.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. avenae: Disponveis nas publicaes de Shar-
ma (1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereo
eletrnicohttp://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Ale-
manha, Arbia Saudita, Arglia, Austrlia, Blgica,
Bulgria, Canad, China, Dinamarca, Eslovquia, Es-
panha, Estados Unidos, Estnia, Frana, Grcia, Ho-
landa, ndia, Ir, Israel, Itlia, Iugoslvia, Japo, Let-
nia, Lbia, Malta, Marrocos, Nova Zelndia, Noruega,
Paquisto, Peru, Polnia, Portugal, Reino Unido, Re-
pblica Tcheca, Rssia, Sria, Sucia, Sua, Tunsia,
Turquia, Ucrnia.
Hospedeiros: Agropyron repens, Agrostis
81
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
spp., Alopecurus pratensis., Anisantha spp., Apera
spica-venti, Arrhenatherum elatius, Avena spp., Bra-
chypodium ponticum, B. sylvaticum, Bromus spp.,
Dactylis glomerata, Digitaria sanguinalis, Elymus
caninus, Festuca spp., Hordeum spp., Triticum aes-
tivum, Koeleria spp., Lolium spp., Phalaris spp., Ph-
leum pratense, Poa spp., Polypogon monspeliensis,
Secale cereale, Setaria viridis, Sorghum vulgare, Sti-
pa lagascae, Trisetum flavescens, Triticum spp., Vul-
pia ciliata, V. muralis,V. myuro, Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Yan et al., 2013); Teste de PCR-RFLP
(Subbotin et al., 1999). Conforme o DOC SAC/CGAL
n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitossanitrio
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo s IN 06/2005, IN 44/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para H. avenae em importao de gros de
Triticum aestivum, Triticum spp.; sementes de Triti-
cum spp.
Heterodera cajani Koshi, 1967
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis na publicao de Rao et al. (2011) e nos endere-
os eletrnicos http://download.ceris.purdue.edu/
file/2455 e https://gd.eppo.int/taxon/HETDCJ.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. cajani: Disponveis nas publicaes de Sharma
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereo ele-
trnicohttp://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: Egito, India, Myan-
mar, Paquisto.
Hospedeiros: Cajanus cajan, C. platycarpus,
Cicer arietinum, Crotalaria juncea, Cyamopsis tetra-
gonolobus, Dolichos spp., Glycine max, Lablab pur-
pureus, Phaseolus vulgaris, Phyllanthus maderaspa-
tensis, Pisum sativum, Sesamum indicum, Sesbania
spp., Vicia narbonensis, V. sativa, Vigna aconitifolia,
Vigna mungo, V. radiata, V. unguiculata.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Rao et al., 2011); Teste de Real Time
PCR (Katsuta et al., 2016). Conforme o DOC SAC/
CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitos-
82 RAPP - Volume 24, 2016
sanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para H. cajani em importao de sementes
de Phaseolus vulgaris, Pisum sativum com partculas
de solo.
Heterodera ciceri Volvas, Greco & Di Vito, 1985
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
na publicao de Vovlas et al. (1985) e nos endere-
os eletrnicos https://www.google.com.br/url?sa=
t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&cad=rja&u
act=8&ved=0ahUKEwjx2v6O8uPNAhUIH5AKHWFQ
AN4QFgg2MAI&url=http%3A%2F%2Fdownload.ce-
ris.purdue.edu%2Ffile%2F2456&usg=AFQjCNEmzG_
4KnCtVcNT_bXtsaTNk1Xxhw e https://gd.eppo.int/
taxon/HETDCI e
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. ciceri: Disponveis nas publicaes de Sharma
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereo ele-
trnico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: Espanha, Itlia, Jor-
dnia, Lbano, Sria, Turquia.
Hospedeiros: Cicer spp., Dianthus caryo-
phillus, Lathyrus sativus, Lens culinaris, Lupinus al-
bus, Medicago rigidula, M. sativa, Phaseolus vulga-
ris, Pisum sativum, Trifolium incarnatum, T. pratense,
Vicia faba, V. sativa, Vigna unguiculata.
Deteco: Teste de Triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Mandani et al., 2004). Conforme o DOC SAC/
CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitos-
sanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para H. ciceri em importao de mudas ou
plantas de Dianthus caryophyllus.
Heterodera goettingiana Liebscher, 1892
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
na publicao de Mulvey et al. (1979) e nos endere-
os eletrnicos http://nematode.unl.edu/hgoettin.
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
htm e https://gd.eppo.int/taxon/HETDGO.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. goettingiana: Disponveis nas publicaes de
Sharma (1998), de Subbotin et al. (2010) e no en-
dereo eletrnico http://nematode.unl.edu/heteds.
htm.
Distribuio geogrfica: Alemanha, Arglia,
Blgica, Bulgria, China, Espanha, Estados Unidos,
Frana, Holanda, Israel, Itlia, Japo, Jordnia, Mal-
ta, Polnia, Portugal, Reino Unido, Rssia, Turquia,
Ucrnia.
Hospedeiros: Asperula arvensis, Cicer arie-
tinum, Glycine hispida, G. max, Lathyrus spp., Lens
culinaris, Lupinus spp., Medicago sativa, Pisum spp.,
Vicia spp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Szalanski et al., 1997; Mandani et al., 2004).
Conforme o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea
de Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015,
e baseado no ato legal que demanda o ensaio re-
lativo s IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, obrigatria a anlise para H. goettingiana
em importao de sementes de Glycine max e Pisum
sativum com partculas de solo.
Heterodera mediterranea Vovlas, Inserra, Stone,
19810
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
na publicao de Vovlas et al. (1981) e no endereo
eletrnico https://gd.eppo.int/taxon/HETDMD.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. mediterranea: Disponveis nas publicaes de
Sharma (1998), de Subbotin et al. (2010) e no en-
dereo eletrnico http://nematode.unl.edu/heteds.
htm.
Distribuio geogrfica: Espanha, Itlia.
Hospedeiros: Olea europaea, Pistacia lentis-
cus, P. vera.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
RAPP - Volume 24, 2016
-RFLP (Mandani et al., 2004). Conforme o DOC SAC/
CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitos-
sanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para H. mediterranea em importao de es-
tacas com raiz, mudas ou plantas de Olea europaea.
Heterodera oryzae Luc & Berdon-Brizuela, 1961
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis nas publicaes de Luc & Brizuela (1961), Nobbs
et al. (1992), Rathore & Tiwari (2015) e nos endere-
os eletrnicos https://gd.eppo.int/taxon/HETDOR e
http://nematode.unl.edu/pest13.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. oryzae: Disponveis nas publicaes de Sharma
(1998), Subbotin et al. (2010) e no endereo eletr-
nico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: Bangladesh, Costa
do Marfim, Ghana, ndia, Ir, Libria, Paquisto, Se-
negal.
Hospedeiros: Cyperus umbellatus, Musa acu-
minata, Oryza sativa, Pennisetum purpureum, Zea
mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR-RFLP
(Subbotin et al., 2000). Conforme o DOC SAC/CGAL
n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitossanitrio
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo s IN 06/2005, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a anlise para
H. oryzae em importao de sementes com partcu-
las de solo de Oryza sativa.
Heterodera oryzicola Rao&Jayaprakash, 1978
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis nas publicaes de Rao & Jayaprakash (1978),
Nobbs et al. (1992) e no endereo eletrnico https://
gd.eppo.int/taxon/HETDOC.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. oryzicola: Disponveis nas publicaes de Shar-
83
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
ma (1998), Subbotin et al. (2010) e no endereo ele-
trnico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: ndia.
Gama de Hospedeiros: Brachiaria decum-
bens, Cynodon dactylon, Musa paradisiaca, Oryza
sativa.
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Subbotin et al., 2001). Conforme
o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diag-
nstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo s
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para H. oryzicola em importa-
o de sementes de Oryza sativa com partculas de
solo.
Heterodera sacchari Luc & Merni, 1963
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Audebert et al. (2000) nos ende-
reos eletrnicos https://gd.eppo.int/taxon/HETDSA
e http://nematode.unl.edu/pest14.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. sacchari: Disponveis nas publicaes de Shar-
ma (1998), Subbotin et al. (2010) e no endereo ele-
trnico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: Benin, Burkina Faso,
Chade, Congo, Costa do Marfim, Gmbia, Ghana, In-
dia, Jamaica, Libria, Nigria, Paquisto, Tailndia,
Senegal.
Hospedeiros: Oryza sativa e Saccharum offi-
cinarum so os hospedeiros principais, outros hos-
pedeiros incluem Axonopus compressus, Brachiaria
brizantha, Cynodon dactylon, Echinochloa colona,
Eleusine indica, Paspalum conjugatum, Saccharum
sp., Urochloa brizantha.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Maafi et al., 2007). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para H. sacchari em importao de mudas de
Cynodon dactylon, Oryza sativa, Paspalum conjuga-
84 RAPP - Volume 24, 2016
tum, Saccharum officinarum.
Heterodera schachtii Schmidt, 1871
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Fosu-Nyarko et al. (2016) nos en-
dereos eletrnicos http://nematode.unl.edu/hets-
chach.htm e https://gd.eppo.int/taxon/HETDSC.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. schachtii: Disponveis nas publicaes de Shar-
ma (1998), Subbotin et al. (2010) e no endereo ele-
trnico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Alb-
nia, Alemanha, Arglia, Austrlia, ustria, Azerbai-
jo, Blgica, Bulgria, Canad, Cazaquisto, Cabo
Verde, Chile, China, Crocia, Dinamarca, Eslovquia,
Espanha, Estados Unidos, Estnia, Finlndia, Frana,
Gmbia, Grcia, Holanda, Hungria, Ir, Iraque, Israel,
Itlia, Iuguslvia, Jordnia, Letnia, Lbia, Marrocos,
Mxico, Moldova, Paquisto, Peru, Polnia, Portugal,
Quirquisto, Reino Unido, Repblica Tcheca, Rom-
nia, Rssia, Senegal, Srvia, Sria, Sua, Tunsia, Tur-
quia, Ucrnia, Uruguai, Nova Zelndia.
Hospedeiros: Agrostemma githago, Alliaria
petiolata, Allium sativum, Alyssum argenteum, A.
borzaeanum, A. maritimum, A. spinosum, Amaran-
thus spp., Ammophila arenaria, Ananas comosus,
Anchusa officinalis, Anethum graveolens, Apium
graveolen, Arabidopsis thaliana, Arabis alpina, A.
arenosa, A. bellidifolia, A. caucasica, A. hirsuta, A.
muralis, A. perfoliata, A. turrita, A. verna, Arachis
hypogea, Armoracia rusticana, Atriplex confertifolia,
A. hastata, A. hortensis, A. littoralis, A. patula, A. ro-
sea, Aubrieta columnae, Aurinia saxatilis, Barbarea
longirostris, B. verna, B. vulgaris, Berteroa incana,
Beta spp., Beta vulgaris var. conditiva, Biscutella au-
riculata, B. laevigata, Brassica acephala,B. cernua,
B.juncea, B. napus, B. nigra, B. oleracea, B. oleracea
var. botrytis, B. oleracea var. capitata, B. oleracea var.
gemmifera, B. oleracea var. gongyloides, B. oleracea
var. acephala, B. oleracea var. italica, B. oleracea var.
sabauda, B. rapa, B. sinapis, Bunias orientalis, Calepi-
na corvini, Camelina sativa, Capsella bursa-pastoris,
Cardamine impatiens, C. pratensis, Cardaria draba,
Chaenorrhinum minus, Cheiranthus spp., Chenopo-
dium spp., Chorispora tenella, Cicer arietinum, Ci-
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
chorium intybus, Cochlearia glastifolia, C. officinalis,
Consolida orientalis, Crambe abyssinica, Descurainia
sophia, Dianthus spp., Diplotaxis erucoides, D. tenui-
folia, Erodium cicutarium, Erysimum spp., Euphor-
bia peplus, Galeopsis spp., Galium aparine, Glycine
hispida, Gypsophila acutifolia, G. elegans, Hablitzia
tamnoides, Halimione portulacoides, Helianthus
annuus, H. tuberosus, Holosteum umbellatum, Hor-
deum vulgare, Iberis spp., Isatis tinctoria, Lactuca
sativa, Lamium spp., Lathyrus spp., Lens culinaris,
Lepidium sativum, Linaria vulgaris, Lobularia mar-
tima, Lopezia coronata, Lunaria annua, L. redeviva,
Lupinus mutabilis, Lupinus nanus, Lycopsis arvensis,
Malcolmia martima, Matricaria sp., Medicago lu-
pulina, M. sativa, Mentha arvensis, Moricandia son-
chifolia, Myagrum perfoliatum, Myosotis sylvatica,
Myosurus minimus, Nasturtium microphyllum, N.
officinale, Neslia paniculata, Papaver rhoeas, Pasti-
naca sativa, Peltaria alliacea, Petroselinum crispum,
Phaseolus spp., Phleum pratense, Phytolacca acino-
sa, Pisum sativum, Plantago lanceolata, Polygonum
spp., Portulaca grandiflora, P. oleracea, Raphanus
spp., Rapistrum perenne, R. rugosum, Reseda ltea,
R. odorata, Rheum rhabarbarum, R. rhaponticum,
Rhynchosinapis erucastrum, Rorippa amphibia, R.
islandica, Rumex spp., Saccharum officinarum, Sa-
ponaria ocymoide, S. officinalis, Senecio vernalis,
S. vulgaris, Sesbania exaltata, S. macrocarpa,Silene
spp., Sinapis spp., Sisymbrium spp., Solanum lyco-
persicum, S. nigrum, S. peruvianum, S. pimpinellifo-
lium, S. sarrachoides, S. tuberosum, Sonchus asper,
S. oleraceus, Spinacia glabra, S. oleracea, Stellaria
media, Taraxacum officinale, Teesdalia nudicaulis,
Tetragonia tetragonioides, Thlaspi arvense, Trifolium
spp., Tropaeolum majus, T. peregrinum, U. dioica, U.
uren, Vaccaria pyramidata, Veronica officina, Vicia
benghalensis, V. faba, V. hirsuta, Vigna angularis, V.
unguiculata, Viola tricolor, Vitis sp. Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Szalanski et al., 1997; Mandani et al., 2004).
Conforme o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea
de Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
s IN 20/2007, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para H. schachtiiem importa-
o de sementes de Beta vulgaris var. conditiva.
RAPP - Volume 24, 2016
Heterodera trifolii Goffart, 1932
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Wouts & Sturhan (1978), Inserra
et al. (1993) e nos endereos eletrnicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/G060S8.
HTM e https://gd.eppo.int/taxon/HETDTR.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. trifolii: Disponveis nas publicaes de Sharma
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereo ele-
trnicohttp://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: Austrlia, Canad,
Costa do Marfim, Cuba, Espanha, Estados Unidos,
Frana, Hava, India, Israel, Itlia, Nova Zelndia, Por-
to Rico, Repblica Dominicana, Guiana.
Hospedeiros: Ataca 86 espcies em nove fa-
mlias botnicas, incluindo Agrostemma githago,
Beta corolliflora, B. lomatogona, B. macrocarpa, B.
martima, B. ptula, B. vulgaris, B. vulgaris x procum-
bens, B. juncea, B. napus, B. oleracea var. sabauda, B.
oleracea var. gongyloides, B. oleracea var. capitata,
B. oleracea var. gemmifera, B. oleracea var. botrytis,
B. rapa, Cerastium arvense, C. perfoliatum, Chenopo-
dium glaucum, Cicer arietinum, C. songaricum, Cucu-
mis sativus, Cucurbita maxima, C. pepo, Desmodium
canum, D. uncinatum, Dianthus spp., Galeopsis spp.,
Glycine hispida, Gypsophila acutifolia, G. elegans,
Hebe X andersonii, Isatis tinctoria, Lamium molle,
Lathyrus spp., Lens spp., Lespedeza stipulacea, L.
striata, Lilium spp., Lotus corniculatus, Lupinus spp.,
Lychnis chalcedonica, L. coronria, L. floscuculi, Me-
dicago sativa, M. truncatula, Melandrium rubrum,
Melilotus alba, M. officinalis, Phaseolus vulgaris,
Pisum sativum, Polygonum persicaria, Raphanus sa-
tivus, Rheum rhabarbarum, R. rhaponticum, Rumex
spp., Saponaria spp., Scleranthus annuus, Sesbania
grandiflora, S. macrocarpa, Silene spp., Sinapis alba,
Sinningia speciosa, Solanum lycopersicum, S. peru-
vianum, S. pimpinellifolium, S. tuberosum, Spergula
arvensis, Spinacia oleracea, Stellaria media, Trifo-
lium spp., Vaccaria pyramidata, Veronica persica,
Vicia spp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Amiri et al., 2002); Teste de PCR-
-RFLP (Szalanski et al., 1997; Amiri et al., 2002). Con-
85
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
forme o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de
Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
s IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para H. trifolii em importao
de bulbos de Lilium spp.; mudas com raiz ou plantas
de Dianthus spp.
Heterodera zeae Koshy, Swarup, and Sethi, 1970
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Koshyet al. (1970)e, nos ende-
reos eletrnicos http://nematode.unl.edu/pest15.
htm, http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Ta-
xadata/G060S57.HTM e https://gd.eppo.int/taxon/
HETDZE.
Chave para a identificao de espcies de
Heterodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de H. zeae: Disponveis nas publicaes de Sharma
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereo ele-
trnicohttp://nematode.unl.edu/hzeae.htm.
Distribuio geogrfica: Afeganisto, Egito,
Estados Unidos, Grcia, India, Paquisto, Portugal,
Tailndia.
Gama de Hospedeiros: Agropyron smithii,
Alopecurus pratensis, Avena sativa, Bambusa sp.,
Bouteloua curtipendula, Brachiaria platyphylla, Ca-
lamagrostis epigeios, Capsicum annuum, Citrus sp.,
Coix lachryma-jobi, Corchorus capsularis, Echino-
chloa spp., Festuca elatior, F. rubra, Hordeum vulga-
re, Leptochloa dubia, Lolium perenne, Muhlenbergia
montana, Oryza sativa, Panicum capillare, Pennise-
tum setaceum, Phalaris arundinacea, Phleum pra-
tense, Phragmites australis, Poa spp., Prunus dulcis,
Pyrus communis, Raphanus sativus, Saccharum spp.,
Setaria indica, S. italica, Sorghum bicolor, Solanum
lycopersicon, Stipa viridula, Tripsacum dactyloides,
Triticum aestivum, Zea mays, Zea mexicana.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR-RFLP
(Szalanski et al., 1997; Skantar et al., 2012). Con-
forme o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de
Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
s IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para H. zeae em importao
de sementes com partculas de solo de Avena sativa,
86 RAPP - Volume 24, 2016
Oryza sativa, Triticum aestivum, Triticum spp., Zea
mays.
Meloidogyne chitwoodi Golden, OBannon, Santo
& Finley, 1980
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis nas publicaes de Golden et al. (1980), Perry
et al. (2009) e nos endereos eletrnicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/G076S8.
htm e http://www.inspection.gc.ca/plants/plant-
-pests-invasive-species/nematodes-other/columbia-
-root-knot-nematode/fact-sheet/eng/13273369998
15/1327337651479.
Chave para a identificao de espcies de
Meloidogyne associadas s informaes morfol-
gicas e morfomtricas que permitem a identifica-
o de M. chitwoodi: Disponveis nas publicaes
de Perry et al. (2009), Humphreys-Pereira& Elling
(2014) e no endereo eletrnico http://nematode.
unl.edu/melchit.htm.
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Ale-
manha, Argentina, Blgica, Estados Unidos, Frana,
Holanda, Itlia, Mxico, Moambique, Portugal, Tur-
quia.
Hospedeiros: Acer spp., Adiantum sp., Aegi-
lops squarrosa, Agropyron spp., Allium cepa, A. moly,
Apium graveolens, Arrhenatherum elatius, Astraga-
lus spp., Avena sativa, Beta vulgaris, Betula spp.,
Borago officinalis, Brassica campestris, B. napus, B.
oleracea var. botritys, B. oleracea var. italica, Bromus
spp., Canavalia ensiformis, Capsella bursa-pastoris,
Capsicum annuum, Cichorium endivia, Cichorium
intybus, Cirsium arvense, C. vulgare, Clematis sp.,
Coronilla varia, Cotoneaster dielsianus, Dactylis glo-
merata, Dahlia sp., Delphinium sp., Dicentra spp.,
Erica cinerea, Fagopyrum spp., Festuca spp., Fra-
garia ananassa, Galinsoga parviflora, Gladiolus sp.,
Helianthus annuus, Hordeum spp., Iris sp., Laburnum
anagyroides, Leymus cinereus, Lilium sp., Lonicera
spp., Lotus corniculatus, Lupinus albus, Medicago
spp., Melilotus officinalis, Mucuna deeringiana, Nar-
cissus sp., Oenothera speciosa, Panicum capillare,
Pascopyrum smithii, Paspalum vaginatum, Petroseli-
num crispum, Phaseolus vulgaris, Pisum sativum, Po-
tentilla fruticosa, Psathyrostachys spp., Pseudoroeg-
neria spp., Raphanus sativus, Scilla siberica, Secale
cereale, Senecio vulgaris, Sinapis alba, Solanum spp.,
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Sonchus asper, Sorghum bicolor, S. vulgare, Tagetes
spp., Thinopyrum bessarabicum, Triticum spp., Tuli-
pa spp., Valeriana officinalis, Vitis spp., Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Petersen &Vrain, 1996; Wishart et
al., 2002; Adam et al., 2007); Teste de Multiplex Real
Time PCR (Zijlstra & Van Hoof, 2006); Teste de SCAR-
-PCR (Adam et al., 2007). Conforme o DOC SAC/CGAL
n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitossanitrio
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo s IN 18/2004, IN 06/2005,
IN 06/2006, IN 04/2007, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, obrigatria a anlise para M. chitwoodi
em importao de estacas com raiz de Vitis vinifera;
mudas de Dahlia spp., Paspalum vaginatum, Vitis vi-
nifera; tubrculos de Solanum tuberosum.
Meloidogyne fallax Karssen, 1996
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis nas publicaes de Karssen (1996), de Perry et
al. (2009), nos endereos eletrnicos http://nema-
tode.unl.edu/pest39.htm e http://download.ceris.
purdue.edu/file/2284.
Chave para a identificao de espcies de
Meloidogyne (endoparasita sedentrio) associadas
s informaes morfolgicas e morfomtricas que
permitem a identificao de M. fallax: Disponveis
na publicao de Perry et al. (2009) e no endereo
eletrnico http://nematode.unl.edu/melfallax.htm
Distribuio geogrfica: Alemanha, Austrlia,
Blgica, Frana, Holanda, Nova Zelndia, Reino Uni-
do, Sua.
Hospedeiros: Acer palmatum, Aconitum na-
pellus, Adiantum sp., Allium moly, Apium graveolens,
Asparagus officinalis, Astilbe sp., Avena ludoviciana,
Beta vulgaris, Betula pendula, Borago officinalis,
Capsicum annuum, Caragana arborescens, Chiono-
doxa luciliae, Cichorium endivia, Cichorium intybus,
Clematis sp., Convallaria majalis, Cornus sanguinea,
Crocus sp., Dahlia sp., Daucus carota, Delphinium
sp., Dicentra spp., Fagopyrum sp., Foeniculum vulga-
re, Fragaria ananassa, Galanthus nivalis, Gladiolus
sp., Hemerocallis sp., Hordeum vulgare, Hyacinthus
sp., Iris sp., Laburnum anagyroides, Lilium sp., Lo-
lium multiflorum, Lonicera xylosteum, Medicago sa-
tiva, Muscari armeniacum, Narcissus sp., Oenothera
RAPP - Volume 24, 2016
erythrosepala, O. speciosa, Petroselinum crispum,
Phacelia tanacetifolia, Phaseolus vulgaris, Potentilla
fruticosa, Prunus avium, Raphanus sativus, Scilla si-
berica, Scorzonera hispanica, Secale cereale, Sinapis
alba, Solanum spp., Solanum tuberosum, Tagetes
spp., Triticum spp., Tulipa sp., Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Petersen &Vrain, 1996; Wishart et
al., 2002; Adam et al., 2007); Teste de Multiplex Real
Time PCR (Zijlstra & Van Hoof, 2006); Teste de SCAR-
-PCR (Adam et al., 2007). Conforme o DOC SAC/CGAL
n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitossanitrio
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo s IN 06/2005, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a anlise para
M. fallax em importao de mudas ou plantas de Fra-
garia ananassa; de substrato e meio de crescimento
que acompanham plantas; de tubrculos de Sola-
num tuberosum.
Nacobbus aberrans (Thorne, 1935) Thorne & Allen,
1944
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Stone & Burrows (1985), Souza
(2001), Harveson (2014) e nos endereos eletrnicos
http://nematode.unl.edu/naberrans.htm e https://
gd.eppo.int/taxon/NACOBA.
Chave para a identificao de espcies de
Nacobbus associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
N. aberrans: Disponveis nas publicaes de Man-
zanilla-Lpezet al. (2002), de Laxet al. (2006) e no
endereo eletrnico http://nematode.unl.edu/na-
cobbsp.htm.
Distribuio geogrfica: Argentina, Bolvia,
Chile, Equador, Estados Unidos, Mxico, Peru, Reino
Unido, Rssia.
Hospedeiros: Atriplex confertifolia, Beta vul-
garis, Brassica napus, B. nigra, B. oleracea acephala,
B. oleracea var. gemmifera, B. oleracea var. botrytis,
B. oleracea var. capitata, B. oleracea var. gongyloides,
B. rapa, Capsicum, Chenopodium album, Coryphan-
tha vivpara, Cucumis sativus, Cucurbita pepo, Dau-
cus carota, Gaillardia pulchella, Kochia scoparia,
Lactuca sativa, Matthiola sp., Opuntia fragilis, O.
macorrhiza, Pisum sativum, Raphanus sativus, Sal-
87
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
sola kali, Spinacia oleracea, Solanum esculentum,
S. melongena, S. peruvianum, S. pimpinellifolium, S.
sparsipilum, S. tuberosum, Stellaria media, Tragopo-
gon porrifolius, Tribulus terrestres.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Anthoine & Mugniry, 2005; Atkin-
set al., 2005; Vovlaset al., 2007; Lax et al., 2014);
Teste de PCR-RFLP (Vovlaset al., 2007). Conforme o
DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagns-
tico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado
no ato legal que demanda o ensaio relativo s Port.
129/1997, IN 74/2003, IN 18/2004, IN 27/2004, IN
06/2005, IN 06/2006, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, obrigatria a anlise para N. aberrans em
importao de raiz de Beta vulgaris; sementes de
Cucurbita pepo; tubrculos de Solanum tuberosum.
Nacobbus dorsalis Thorne & Allen, 1944
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
vis na publicao de Thorne & Allen (1944) e nos
endereos eletrnicos http://plpnemweb.ucdavis.
edu/nemaplex/Taxamnus/G085mnu.htm e https://
gd.eppo.int/taxon/NACODO/documents.
Chave para a identificao de espcies de
Nacobbus (endoparasita sedentrio) associadas
s informaes morfolgicas e morfomtricas que
permitem a identificao de N. dorsalis: Disponveis
na publicao de Manzanilla-Lpezet al. (2002) e no
endereo eletrnico http://nematode.unl.edu/na-
cobbsp.htm.
Distribuio geogrfica: Estados Unidos.
Hospedeiros: Amsinckia sp., Citrullus lanatus,
Erodium cicutarium, Hordeum vulgare, Olea europa-
ea, Prunus spp., Salsola kali, Salvia sp., Solanum tu-
berosum, Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Atkinset al., 2005). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 06/2006, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para N. dorsalis em importao
de mudas de Olea europaea; tubrculos de Solanum
tuberosum.
88 RAPP - Volume 24, 2016
Pratylenchus crenatus Loof, 1960
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Castillo& Vovlas (2007), Kuma-
ri (2015), Chaaska et al. (2016) e, nos endereos
eletrnicos http://plant-clinic.bpp.oregonstate.edu/
nematodes-pratylenchus e http://nematode.unl.
edu/pcrenat.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Pratylenchus associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de P. crenatus: Disponveis nas publicaes de Cas-
tillo& Vovlas (2007) e Kumari (2015).
Distribuio geogrfica: Alemanha, Argenti-
na, Austrlia, Blgica, Canad, Chile, Chipre, Eslov-
nia, Estados Unidos, Estnia, Holanda, Itlia, Japo,
Noruega, Polnia, Repblica Tcheca, Sucia, Ucrnia.
Hospedeiros: Abies sp., Acer sp., Aira caryo-
phyllea, Alnus sp., Anthurium andreanum, Anthu-
rium scherzerianum, Anthurium spp., Asparagus
officinalis, Aster sp., Astilbe spp., Avena sativa, Be-
gonia elatior, Begonia semperflorens, Begonia tu-
berhybrida, Begonia x hiemalis, Begonia sp., Beta
vulgaris, Betula sp., Chrysanthemum coccineum, C.
leucanthemum, C. maximum, Cichorium endvia, C.
intybus, Cimicifuga sp., Convallaria majalis, Corylus
sp., Crataegus sp., Cucumis melo, Cynara scolymus,
Dahlia spp., Daucus carota, Fragaria chiloensis, Fra-
garia spp., Fuchsia spp., Helleborus niger, Hordeum
distichum, H. vulgare, Humulus lupulus, Hydrangea
spp., Iris sp., Jasminum sp., Laburnum anagyroi-
des, Lactuca sativa, Lilium spp., Lotus corniculatus,
Malus sylvestris, Miscanthus giganteus, Musa sp.,
Narcissus sp., Nolana sp., Olea europaea, Panicum
virga, Papaver somniferum, Pernettya sp., Petunia
spp., Phlox sp., Picea sp., Pinus spp., Pisum sativum,
Poa annua, Polypodiaceae sp., Populus sp., Prunus
armeniaca, P. avium, P. dulcis, P. persica, Pseudotsu-
ga menziesii, P. communis,Prunus spp., Pyrus com-
munis, Raphanus raphanistrum, Rhododendron sp.,
Rosa spp., Rubus sp., Scabiosa caucasica, Scorzonera
hispanica, Secale cereale, Sequoia sp., Solanum lyco-
persicum, S. tuberosum, Sorbus aucuparia, Spergula
arvensis, Stellaria media, Trifolium pratense, T. re-
pen, Vaccinium sp., Vicia sp., Vitis vinifera, Wisteria
sp., Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
quenciamento (Kumari, 2015); Teste de Multiplex
PCR (Mekete et al., 2011). Conforme o DOC SAC/
CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitos-
sanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para P. crenatus em importao de estacas
com raiz de Fragaria spp., Fuchsia spp., Hydrangea
spp., Olea europaea, Petunia spp., Pinus spp., Pru-
nus spp., Pyrus communis, Rhododendron spp., Rosa
spp.; mudas de Anthurium andreanum, Anthurium
scherzerianum, Anthurium spp., Aster spp., Astilbe
spp., Begonia elatior, Begonia semperflorens, Be-
gonia tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Chrysanthe-
mum coccineum, Chrysanthemum leucanthemum,
Chrysanthemum maximum, Dahlia spp., Fragaria
spp., Fuchsia spp., Hydrangea spp., Olea europaea,
Petunia spp., Pinus spp., Prunus spp., Pyrus com-
munis, Rhododendron spp., Rosa spp.; plantas de
Anthurium andreanum, Anthurium scherzerianum,
Anthurium spp., Aster spp., Astilbe spp., Begonia
elatior, Begonia semperflorens, Begonia tuberhybri-
da, Begonia x hiemalis, Chrysanthemum coccineum,
Chrysanthemum leucanthemum, Chrysanthemum
maximum, Fragaria spp., Fuchsia spp., Hydrangea
spp., Olea europaea, Petunia spp., Pinus spp., Pru-
nus spp., Pyrus communis, Rhododendron spp., Rosa
spp.; rizomas de Anthurium andreanum, Anthurium
scherzerianum, Anthurium spp.; tubrculos de Sola-
num tuberosum.
Pratylenchus fallax Seinhorst 1968
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis na publicao de Castillo& Vovlas (2007) e nos
endereos eletrnicos http://nematode.unl.edu/
pest65.htm e http://nematode.unl.edu/pfallax.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Pratylenchus associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de P. fallax: Disponveis nas publicaes de Handoo
et al. (2001) e Castillo& Vovlas (2007).
Distribuio geogrfica: Blgica, Canad, Rei-
no Unido, Frana, Holanda, Itlia, Japo.
Hospedeiros: Avena sativa, Beta vulgaris,
Brassica napus var. oleifera, Chrysanthemum sp.,
Convallaria majalis, Hordeum vulgare, Malus do-
mestica, Medicago sativa, Poa pratensis, Rosa sp.,
RAPP - Volume 24, 2016
Trifolium sp.,Triticum aestivum, Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Handoo et al., 2001). Conforme
o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diag-
nstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015 e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo s
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para P. fallax em importao de
estacas com raiz, mudas ou plantas de Chrysanthe-
mum spp., Malus domestica, Rosa spp.
Pratylenchus goodeyi Sher & Allen, 1953
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Castillo& Vovlas (2007), Zhang et
al. (2015) e nos endereos eletrnicos http://www.
promusa.org/Pratylenchus+goodeyi e http://plpne-
mweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/G105s11.
HTM.
Chave para a identificao de espcies de
Pratylenchus associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de P. goodeyi: Disponveis nas publicaes de Cas-
tillo& Vovlas (2007), Handoo et al. (2008) e Zhang
et al. (2015).
Distribuio geogrfica: Austrlia, Burundi,
Camares, China, Egito, Etipia, Espanha, Grcia,
Portugal, Qunia, Ruanda, Tanznia, Uganda.
Hospedeiros: Ananas comosus, Ensete ven-
tricosum, Heliconia sp., Huechera sp., Musa acumi-
nata, Musa ornata, Musa x paradisaca, Phaseolus
vulgaris, Strelitzia sp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Zhang et al., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria
a anlise para P. goodeyi em importao de mudas
com raiz ou rizomas de Heliconia spp., Musa spp..
Pratylenchus scribneri Steiner, 1943
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Castillo & Vovlas (2007), Yan et
89
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
al. (2016) e no endereo eletrnico http://nemato-
de.unl.edu/pscrib.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Pratylenchus associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de P. scribneri: Disponveis nas publicaes de Cas-
tillo& Vovlas (2007) e Yan et al. (2016).
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Ale-
manha, Argentina, Bulgria, Canad, Chile, Crocia,
Egito, Eslovnia, Estados Unidos, Holanda, ndia, Ir,
Israel, Itlia, Japo, Jordnia, Oman, Mxico, Sua,
Turquia.
Hospedeiros: Allium cepa, Amaranthus sp.,
Amaryllis sp., Anthurium sp., Beta vulgaris, Brassi-
ca oleracea var. botrytis, Brassica oleracea var. ca-
pitata, Capsicum frutescens, Carpinus caroliniana,
Celtis laevigata, Chenopodium sp., Chrysanthemum
morifolium, Cymbidium sp., Cypripedium sp., Dahlia
sp., Daucus carota, Digitaria sanguinalis, Fragaria
chiloensis, F. ananassa, Glycine max, Hordeum vul-
gare, Malus spp., Medicago sativa, Mentha spicata,
Miscanthus giganteus, Musa sp., Nicotiana taba-
cum, Ocimum basilicum, Panicum virgatum, Phase-
olus limensis, P. lunatus, P. vulgaris, Prunus persica,
Raphanus sativus, Rosa sp., Saccharum officinarum,
Solanum lycopersicum, Sorghum bicolor, S. vulgare,
Tribulus terrestris, Trifolium pratense, Triticum aesti-
vum, Uniola sp., Vitis sp., Zea mays, Zoysia matrella.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Yan et al., 2016). Conforme a DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico
Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no
ato legal que demanda o ensaio relativo s Port.
129/1997, IN 06/2005, IN 06/2006, IN 52/2007, IN
41/2008, IN 59/2013, obrigatria a anlise para P.
scribneri em importao de bulbos de Amaryllis spp.,
Dahlia spp.; estacas com raiz de Chrysanthemum
spp., Dahlia spp., Fragaria ananassa, Malus spp.,
Prunus persica, Rosa spp., Vitis vinifera; mudas ou
plantas de Anthurium andreanum, Anthurium scher-
zerianum, Anthurium spp., Chrysanthemum spp.,
Dahlia spp., Fragaria ananassa, Malus spp., Prunus
persica, Rosa spp., Vitis vinifera, rizomas de Anthu-
rium spp.; tubrculos de Solanum tuberosum.
Pratylenchus thornei Sher & Allen, 1953
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio, sendo o J2
90 RAPP - Volume 24, 2016
a fase infectante. Informaes gerais esto dispo-
nveis nas publicaes de Castillo & Vovlas (2007),
Chaaskaet al. (2016) e no endereo eletrnico
https://grdc.com.au/Research-and-Development/
GRDC-Update-Papers/2016/02/how-long-does-it-
-take-to-reduce-Pratylenchus-thornei-populations-
-in-the-soil.
Chave para a identificao de espcies de
Pratylenchus associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de P. thornei: Disponveis nas publicaes de Cas-
tillo& Vovlas (2007) e Troccoli et al. (2008).
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Ale-
manha, Arbia Saudita, Arglia, Argentina, Austr-
lia, Blgica, Bulgria, Canad, Chile, Coria, Crocia,
Chipre, Dinamarca, Egito, Eslovquia, Eslovnia, Es-
panha, Estados Unidos, Grcia, Holanda, India, In-
glaterra, Ir, Israel, Itlia, Japo, Jordnia, Lbia, Mar-
rocos, Mxico, Paquisto, Polnia, Portugal, Qunia,
Romnia, Sria, Sudo, Tajiquisto, Turquia, Tunsia,
Uruguai, Venezuela.
Hospedeiros: Aegilops spp., Agropyron spp.,
Agrostis sp., Allium cepa, A. sativum, Amaranthus
palmeri, A. retroflexus, Ammi visnaga, Anethum
graveolens, Apium graveolens, Araucaria sp., Ara-
chis hypogaea, Asparagus officinalis, Avena fatua,
A. sativa, Bassia scoparia, Beta vulgaris, Brassica
campestris, B. juncea, B. napus, B. oleracea, Bromus
spp., Camelina sativa, Capsicum frutescens, Cartha-
mus tinctorius, Carya illinoinensis, Casuarina sp., Ce-
drus deodara, Cedrus sp., Chenopodium album, Cicer
arietinum, Cichorium intybus, Citrus sinensis, Conyza
canadensis, Coriandrum sativum, Crotalaria juncea,
Cucumis melo,Cupressus sp., Cynara scolymus, Cy-
nodon dactylon, Dahlia sp., Daucus carota, Dichon-
dra sp., Digitaria sanguinalis, Dystaenia ibukiensis,
Elymus spp., Elytrigia spp., Eucalyptus sp., Euphor-
bia humistrata, Festuca sp., Ficus carica, Foenicu-
lum vulgare, Fragaria ananassa, Fragaria chiloensis,
Fraxinus sp., Gleditsia sp., Glycine max, Gossypium
hirsutum, Helianthus annuus, Helichrysum bracte-
atum, Hordeum murinum, H. vulgare, Hydrangea
sp., Hyoscyamus spp., H. niger, Hypericum sp., Iberis
sp., Iris sp., Juglans sp., Juncus sp., Lactuca sativa,
Lens culinaris, Ligustrum sp., Lilium sp., Linum sp.,
Lippia sp., Lotus purshianus, Lupinus sp., Magnolia
sp., Malus domestica, M. sylvestris, Malva rotundi-
folia, M. sylvestris, Matricaria chamomilla, Medica-
go spp., Mentha piperita, Mesembryanthemum sp.,
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Musa ornata, Olea europaea, Oryza sativa, Panicum
virgatum, Pascopyrum smithii, Paspalum dilatatum,
Pennisetum clandestinum, Peperomia sp., Persea
americana, Phaseolus spp., Philodendron spp., Pinus
radiata, Pisum sativum, Plantago ovata, Platanus sp.,
Poa annua, P. secunda, Prunus armeniaca, P. avium,
P. cerasifera, P. cerasus, P. domestica, P. dulcis, P. per-
sica, Prunus spp., Pyrus communis, Pseudoroegneria
spicata, Quercus sp., Raphanus sativus, Rosa spp.,
Rubus sp., Rumex sp., Salix sp., Salsola tragus, Scin-
dapsus sp., Secale cereale, Solanum tuberosum, Sor-
ghum bicolor, S. halepense, S. drummondii, Spinacia
oleracea, Sequoiadendron giganteum, Setaria viri-
dis, Sinapis alba, Sisymbrium altissimum, Solanum
lycopersicum, S. tuberosum, Taraxacum officinale,
Thuja sp., Trachyspermum ammi, Trifolium repens,
T. resupinatum, T. subterraneum, Trigonella foenum-
-graecum, Tripsacum dactyloides, Triticosecale sp.,
Triticum aestivum, T. durum,T. turgidum, T. vulgare,
Typha sp., Ulmus sp., Vicia benghalensis, V. faba, V.
sativa, V. villosa, Vigna unguiculata, Vitis vinifera,
Vulpia myuros, Zea mays, Zingiber sp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mokriniet al., 2016); Teste de Real
Time PCR (Yan et al., 2012). Conforme o DOC SAC/
CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fitos-
sanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 72/2004,
IN 06/2005, IN 27/2006, IN 03/2007, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 59/2013, IN 23/2015, obrigatria
a anlise para P. thornei em importao de estacas
com raiz de Rosa spp. Vitis vinifera; mudas ou plan-
tas de Helichrysum bracteatum, Hydrangea spp.,
Olea europaea, Philodendron spp., Prunus spp., Rosa
spp., Vitis vinifera, Fragaria ananassa; sementes de
Arachis hypogaea; tubrculos de Solanum tubero-
sum.
Punctodera chalcoensis Stone, Sosa Moss &
Mulvey, 1976
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
na publicao de Stone et al. (1976) e nos endereos
eletrnicos http://nematode.unl.edu/puncds.htm e
http://nematode.unl.edu/pest29.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Punctodera associadas s informaes morfolgi-
RAPP - Volume 24, 2016
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de P. chalcoensis: Disponveis nas publicaes de
Stone et al. (1976), Mulvey & Golden (1983) e Sub-
botin et al. (2010).
Distribuio geogrfica: Mxico
Gama de Hospedeiros: Zea mays, Zea mexi-
cana.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013), Teste de PCR e Se-
quenciamento (Sabo et al., 2002; Gibson et al., 2011;
De Luca et al., 2013; Doboszet al., 2013). Conforme
o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diag-
nstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo s
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, IN
23/2015, obrigatria a anlise para P. chalcoensis
em importao de sementes com partculas de solo
de Zea mays.
Punctodera punctata (Thorne, 1928) Mulvey & Sto-
ne, 1976 (syn. Heterodera punctata Thorne, 1928)
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita sedentrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Sharma (1998), Mulvey & Stone
(1976) e nos endereos eletrnicos https://gd.eppo.
int/taxon/HETDPU e http://plpnemweb.ucdavis.
edu/nemaplex/Taxadata/G109s1.HTM.
Chave para a identificao de espcies de
Punctodera associadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de Punctodera punctata: Disponveis nas publica-
es de Sharma (1998), Sabo et al. (2002), Subbotin
et al. (2010) e no endereo eletrnico http://nema-
tode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuio geogrfica: Alemanha, Canad,
Estados Unidos, Holanda, Hungria, Inglaterra, Mxi-
co, Polnia, Rssia.
Hospedeiros: Agrostis capillaris, A. stolonife-
ra, A. stolonifera var. palustris, Avena sativa, Festuca
rubra, Hordeum vulgare, Lolium perenne, Poa an-
nua, P. pratensis, Triticum sp., Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Sabo et al., 2002). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
91
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
anlise para H. punctata em importao de semen-
tes com partculas de solo de Zea mays.
Radopholus citrophilus Huettel, Dickson and Ka-
plan, 1984 (anteriormente denominado como Ra-
dopholus similis raa citri)
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um endoparasita migratrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Huettel et al. (1984), Huettel &
Yaegashi (1988) e no endereo eletrnico http://ne-
matode.unl.edu/rcitrop.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Radopholusassociadas s informaes morfolgi-
cas e morfomtricas que permitem a identificao
de R. citrophilus: Disponiveis nas publicaes de Ca-
res & Andrade (2006), Huettel et al. (1984) e Huettel
& Yaegashi (1988).
Distribuio geogrfica: Costa do Marfim,
Cuba, Estados Unidos, Porto Rico, Repblica Domi-
nicana, Guiana.
Hospedeiros: Anthurium spp., Calathea spp.,
Citrofortunella microcarpa, Citrus limon, Citrus para-
disi, Citrus sinensis x Poncirus trifoliata, Daucus ca-
rota, Rotylenchulus parvus, Bougainvillea sp., Carica
papaya, Carissa sp., Crotalaria juncea, Cupressus
sp., Cynodon dactylon, Cyperus sp., Fortunella spp.,
Glycine max, Gossypium hirsutum, Hordeum vulga-
re, Lactuca sativa, Macadamia sp., Medicago sati-
va, Musa spp., Nicotiana tabacum, Olea europaea,
Pennisetum americanum,Persea americana, Phase-
olus vulgaris, Philodendron spp., Pittosporum sp.,
Poncirus trifoliata, Saccharum officinalis, Saccharum
officinarum, Solanum lycopersicum, S. tuberosum,
Sorghum bicolor, Strelitzia spp., Thymus sp., Vigna
unguiculata, Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR -RFLP
(Fallas et al., 1996; Elbadri et al., 2002); Teste de
SCAR-PCR (Kaplan et al., 1996). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 6/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, obrigatria a
anlise para R. citrophilus em importao de estacas
com raiz de Philodendron spp.; mudas ou plantas de
Anthurium andreanum, Anthurium scherzerianum,
Anthurium spp., Calathea spp., Musa spp., Philoden-
dron spp., Strelitzia spp.; rizomas de A. andreanum,
92 RAPP - Volume 24, 2016
A. scherzerianum, Anthurium spp., Musa spp., Stre-
litzia spp..
Rotylenchulus parvus Sher, 1961
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um semi-endoparasita sedentrio, sen-
do o J2 a fase infectante. Informaes gerais esto
disponveis nas publicaes de Robson et al. (1997),
Van Den Berg et al. (2016) e no endereo eletrnico
http://www.plantwise.org/KnowledgeBank/Data-
sheet.aspx?dsid=47891.
Chave para a identificao de espcies de
Rotylenchulus associadas s informaes morfol-
gicas e morfomtricas que permitem a identifica-
o de R. parvus: Disponvel na publicao de Rob-
son et al. (1997).
Distribuio Geogrfica: frica do Sul, Austr-
lia, Chipre, Costa do Marfim, Egito, Estados Unidos,
Ilhas Virgens, Ilhas Maurcio, ndia, Ir, Malawi, Mo-
ambique, Paquisto, Qunia, Repblica Dominica-
na, Somlia, Tanznia, Uganda, Zmbia, Zimbabwe.
Hospedeiros: Arachis hypogaea, Carica pa-
paya, Crotalaria juncea, Cynodon dactylon, Gos-
sypium hirsutum, Hordeum vulgare, Nicotiana
tabacum, Olea europaea, Pennisetum glaucum, Sac-
charum officinarum, Vigna unguiculata, Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Van Den Berg et al., 2016). Con-
forme o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de
Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
s IN 6/2005, IN 03/2007, IN 52/2007, IN 41/2008,
IN 59/2013, obrigatria a anlise para R. parvus em
importao de estacas com raiz ou mudas de Olea
europaea; sementes de Arachis hypogaea.
Subanguina radicicola (Greeff, 1872) Para-
monov, 1968
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis nas publicaes de Mitkowski (2007), Singh et
al. (2013) e nos endereos eletrnicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/Nemaplex/Taxadata/G124S1.
HTM e http://nematode.unl.edu/tylench/anguin/
subangui/subads.htm.
Chave para a identificao de espcies de Su-
banguina associadas s informaes morfolgicas
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
e morfomtricas que permitem a identificao de
S. radicicola: Disponveis nas publicaes de Brzeski
(1981), Siddiqi (2000) e Hons (2008).
Distribuio geogrfica: Alemanha, Arbia
Saudita, Argentina, Bulgria, Canad, China, Equa-
dor, Estados Unidos, Estnia, Holanda, Inglaterra,
India, Nova Zelndia, Noruega, Polnia, Romnia,
Srvia, Ucrnia.
Hospedeiros: Poa annua, P. pratensis, P. tri-
vialis, Triticum spp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mitkowski, 2007; Hons, 2008). Con-
forme o DOC SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de
Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
s IN 6/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
obrigatria a anlise para S. radicicola em importa-
o de mudas de grama.
Xiphinema diversicaudatum (Micoletzky, 1927)
Thorne, 1939
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Brown & Topham (1985), Perry &
Moens (2013) e no endereo eletrnico http://ent-
nemdept.ufl.edu/creatures/nematode/dagger_ne-
matode.htm.
Chave para a identificao de espcies de
Xiphinema associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
X. diversicaudatum: Disponveis nas publicaes de
Coomans et al. (2001), Siddiqi (2000) e Hons (2008).
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Ale-
manha, ustria, Blgica, Bulgria, Crocia, Dinamar-
ca, Eslovquia, Eslovnia, Espanha, Estados Unidos,
Frana, Holanda, India, Itlia, Iuguslvia, Marrocos,
Moldvia, Nova Zelndia, Noruega, Polnia, Portu-
gal, Reino Unido, Repblica Tcheca, Rssia, Sucia,
Sua, Turquia, Ucrnia.
Hospedeiro: Abelmoschus esculentus, Apium
graveolens, Arabidopsis thaliana, Arachis hypogaea,
Chamaecyparis lawsoniana, Chrysanthemum spp.,
Citrus sp., Cucumis sativus, Dianthus caryophyllus,
Ficus sp., Rosa sp., Fragaria sp., Glycine hispida, Gly-
cine max, Impatiens balsamina, Juniperus commu-
nis, Lilium spp., Lolium perenne, Mercurialis perenni,
Persea americana, Petunia hybrida, Prunus armenia-
RAPP - Volume 24, 2016
ca, P. persica, Pyrus communis, Ribes nigrum, Rosa
canina, R. chinensis, R. multiflora, Rubus idaeus, Sac-
charum officinarum, Sambucus nigra, Solanum lyco-
persicum, Triticum spelta, Vitis sp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Wang et al., 2002; Mokrini et al.,
2014); Teste de Real Time PCR (Van Ghelder et al.,
2015). Conforme o DOC SAC/CGAL n 06 Esco-
po da rea de Diagnstico Fitossanitrio - Rev. 02 -
10.12.2015, e baseado no ato legal que demanda o
ensaio relativo s IN 6/2005, IN 52/2007, IN 41/2008,
IN 59/2013, IN 8/2015, IN 23/2015, obrigatria a
anlise para X. diversicaudatum em importao de
bulbos de Lilium spp.; mudas de Chrysanthemum
spp., Fragaria ananassa, Pyrus communis, Rosa spp.,
Vitis vinifera; mudas de raiz nua de Vitis vinifera;
plantas de Chrysanthemum spp., Fragaria ananassa,
Pyrus communis, Rosa spp., Vitis vinifera.
Xiphinema italiae Meyl, 1953
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J2
a fase infectante. Informaes gerais esto dispon-
veis nas publicaes de Mitkowski (2007), Singh et
al. (2013) e nos endereos eletrnicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/Nemaplex/Taxadata/G124S1.
HTM e http://nematode.unl.edu/pest34.htm.
Chave para a identificao de espcies de Xi-
phinema (ectoparasita migratrio) associadas s in-
formaes morfolgicas e morfomtricas que per-
mitem a identificao de X. italiae: Disponveis nas
publicaes de Coomans et al. (2001) e Hons (2008).
Distribuio geogrfica: frica do Sul, Arg-
lia, Bulgria, Camares, Chipre, Egito, Espanha, Fran-
a, Grcia, Israel, Itlia, Lbia, Nigria, Portugal, Ro-
mnia, Tunsia, Turquia.
Hospedeiros: Cicer arietinum, Citrus auran-
tium, Cocos nucifera, Eucaliptus sp., Euphorbia sp.,
Ficus carica, Morus sp., Olea europaea, Opuntia fi-
cus-indica, Prunus spp., Vitis sp..
Deteco: Teste de triturao, peneiramento
e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Kumari & Liskov, 2009); Real Time
PCR (Van Ghelder et al., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL n 06 Escopo da rea de Diagnstico Fi-
tossanitrio - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo s IN 6/2005, IN
52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, IN 8/2015, obri-
93
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
gatria a anlise para X. italiae em importao de
estacas com raiz, mudas ou plantas de Prunus spp.,
Vitis vinifera; mudas de raiz nua de V. vinifera.
Xiphinema rivesi Dalmasso, 1969
Aspectos Gerais e Identificao Taxonmica:
Trata-se de um ectoparasita migratrio, sendo o J2 a
fase infectante. Informaes gerais esto disponveis
nas publicaes de Ebsaryet al. (1984), Handooet al.
(2015), IPPC (2016b) e no endereo eletrnico ht-
tps://gd.eppo.int/taxon/XIPHRI.
Chave para a identificao de espcies de
Xiphinema associadas s informaes morfolgicas
e morfomtricas que permitem a identificao de
X.rivesi: Disponveis nas publicaes de Coomans
et al. (2001), Archidona-Yuste et al. (2016) e IPPC
(2016b).
Distribuio geogrfica: Alemanha, Argenti-
na, Australia, Canad, Chile, Egito, Eslovnia, Espa-
nha, Estados Unidos, Frana, Ir, Itlia, Paquisto,
Portugal, Peru, Samoa, Tonga.
Hospedeiros: Acer negundo, Allium sativum,
Celtis spp., Citrus sp., Cucumis sativus, Eucalyptus
sp., Fragaria ananassa, Juglans regia, Juniperus sp.,
Malus spp., Mangifera indica, Medicago sativa, Po-
pulus sp., Prunus spp., Quercus spp., Rubus idaeus,
Rubus spp., Solanum tuberosum, Sorghum bicolor,
Vaccinium spp., Vitis vinifera, Zea mays.
Deteco: Teste de triturao, peneiramen-
to e flutuao (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Akinbadeet al., 2014; Archidona-
-Yuste et al., 2016). Conforme o DOC SAC/CGAL n
06 Escopo da rea de Diagnstico Fitossanitrio
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que
demanda o ensaio relativo s IN 6/2005, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 70/2009, IN 05/2011, IN 59/2013, IN
8/2015, IN 23/2015, obrigatria a anlise para X.
rivesi em importao de estacas com raiz de Vacci-
nium corymbosum, Vaccinium spp.; mudas de raiz
nua de Vitis vinifera; mudas ou plantas de Fragaria
ananassa, Vaccinium spp..
Perspectivas futuras
Segundo Brioso & Pozzer (2013), apesar de
contarmos com tcnicas, ferramentas e processos
para identificao de pragas quarentenrias nas tro-
cas comerciais, estamos sempre lidando com a in-
certeza. Ela pode ser caracterizada pela metodologia
do processo, falha humana e o desconhecimento
94 RAPP - Volume 24, 2016
biolgico das pragas. Esses trs tipos de incertezas
continuaro a existir independentemente de desen-
volvimentos futuros e sempre devem ser considera-
dos quando se objetiva reduzir a incerteza o mximo
possvel em cada um desses grupos para que haja
trocas comerciais seguras, a serem estabelecidas em
marcos regulatrios, mantendo-se dessa forma a sa-
nidade vegetal e, com isso, ganhando mercados para
a exportao, alm de reduzir os custos econmicos
e sociais da produo nacional.
Inerente a todos os problemas e dificuldades
existentes, responsabilidade de toda a sociedade
brasileira preservar a sanidade vegetal, seja atravs
da importao de material vegetal de forma legal,
com os devidos trmites, que garantam que o pro-
duto esteja livre de pragas e fitopatgenos, do in-
centivo e desenvolvimento pesquisa de tcnicas
de diagnose mais rpidas, prticas e sensveis das
pragas e fitopatgenos, das garantias legais para que
seja exercida a fiscalizao de forma eficiente e du-
radoura no pas.
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RAPP - Volume 24, 2016 103

 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)

RISCOS POTENCIAIS DE PATGENOS

FLORESTAIS EXTICOS PARA O SETOR
FLORESTAL BRASILEIRO
Celso Garcia Auer1 e lvaro Figueredo dos Santos1

RESUMO
Listas de pragas exticas so elaboradas visando proteger as culturas
agrcolas e florestais dos pases e blocos continentais. Essas pragas so avalia-
das por sistemas de vigilncia sanitria vegetal, a partir de anlises de risco e
aquelas de maior impacto e potencial de entrada e de estabelecimento podem
ser classificadas como pragas quarentenrias. No caso dos patgenos florestais
existem fungos, bactrias, nematoides e vrus que podem representar riscos po-
tenciais. Alm dos patgenos quarentenrios colocados na lista A1 de pragas
quarentenrias para o Brasil, outros patgenos exticos no quarentenrios po-
dem tambm representar riscos aos cultivos florestais. Essa reviso aborda as
principais espcies florestais plantadas no Brasil: eucalipto, pnus, accia-negra,
teca e lamo, seus patgenos presentes mais importantes, os patgenos con-
siderados quarentenrios e patgenos exticos no quarentenrios. nfase foi
dada s possveis formas de introduo de patgenos, a necessidade de cons-
tante atualizao das listas de pragas quarentenrias e capacitao de tcnicos
em relao ao tema patgenos quarentenrios e exticos.

SUMMARY
Lists of exotic pests are designed to protect agricultural and forest cul-
tures of countries and continental blocks. These pests are evaluated by plant
health surveillance systems, from risk analysis and those of greater impact and
potential entry and establishment may be classified as quarantine pests. In the
case of forest pathogens are fungi, bacteria, nematodes, and viruses that can
pose potential risks. In addition to the quarantine pathogens placed in the A1 list
of quarantine pests for Brazil, other non-quarantine exotic pathogens can also
pose risks to forest crops. This review addresses the main tree species plant-
ed in Brazil: eucalyptus, pine, black wattle, teak and poplar, its most important
pathogens present, pathogens considered quarantine and non-quarantine ex-
otic pathogens. Emphasis was given to possible ways of introducing pathogens,
the need for constant updating of the lists of quarantine pests and training of
technicians on topics of quarantine and exotic pathogens.

Introduo pido crescimento, tais como eucalipto (Eucalyptus

O Setor Florestal Brasileiro constitudo, em spp.) e pnus (Pinus spp.) que fornecem matria-
sua maioria, por espcies florestais exticas de r- -prima para vrios setores industriais (IB, 2015). A

1
Laboratrio de Patologia Florestal, Embrapa Florestas, Estrada da Ribeira, Km 111, 83411-000, Colombo, PR. celso.auer@embra-
pa.br, alvaro.santos@embrapa.br.

104 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)
madeira produzida se constitui em fonte de fibras
celulsicas destinada produo de papel e chapas,
bem como produtos mais nobres destacando-se a
produo de laminados e madeira serrada, para os
mais diversos usos. Na gerao de energia, a biomas-
sa pode ser utilizada in natura na forma de cavacos,
lenha, carvo e at como substrato para produo
de lcool de segunda gerao. A madeira tambm
serve para outros usos como mobilirio, construo
civil e uso residencial. Em 2014, as reas com flores-
tas plantadas representaram 7,74 milhes de hecta-
res, correspondendo a 0,9 % do territrio brasileiro
(IB, 2015). Desse total, o eucalipto respondeu pela
maior rea plantada com 5,56 milhes de hectares,
seguido pelo pnus com 1,59 milho, accia negra
e accia mangium com 160 mil, teca com 87 mil, e
outras espcies florestais para a indstria fosforeira
como o caso do lamo com 4 mil (IB, 2015). Neste
ano, o setor florestal brasileiro gerou 610.000 em-
pregos diretos e indiretos, em vrias regies brasilei-
ras, com uma participao no produto interno bruto
(PIB) de 1,1 % (IB, 2015).
A importncia socioeconmica da rea flo-
restal brasileira e o risco de entrada de patgenos
exticos tem sido uma preocupao constante do
setor florestal. Os impactos potenciais podem ser es-
perados na reduo da produtividade das florestas,
da qualidade da matria-prima (madeira) produzida
e, em casos mais graves, o impedimento do uso de
determinadas espcies ou de materiais genticos al-
tamente suscetveis aos patgenos exticos. Vrias
introdues foram constatadas nos ltimos 20 anos:
Teratosphaeria nubilosa e Teratosphaeria pseudoeu-
calypti em eucaliptos (Perez et al., 2009; Candido et
al., 2014) e Olivea neotectonae (Olivea tectonae) em
teca (Cabral et al., 2010; Bonaldo et al., 2011, Pieri
et al., 2011).
No Ministrio de Agricultura, Pecuria e Abas-
tecimento (MAPA), o tema pragas quarentenrias (o
conceito de forma abrangente inclui doenas, inse-
tos e plantas daninhas) tratado no Departamen-
to de Sanidade Vegetal (DSV). Nas listas elaboradas
pelo MAPA h uma diferenciao entre patgenos
quarentenrios ainda no encontrados no territrio
brasileiro, chamados de pragas A1, e aqueles que
foram introduzidos, mas se encontram localizados,
chamados de pragas A2.
Neste trabalho, a sistemtica adotada para
o tema ser a abordagem de patgenos quarente-
RAPP - Volume 24, 2016
nrios constantes nas listas A1 e A2 do MAPA, para
cada uma das espcies florestais eucalipto, pnus,
accia negra, teca e lamo - e a incluso de pat-
genos exticos, ainda no normatizados pelo MAPA,
mas que podero representar riscos potenciais para
a rea florestal. A anlise dos patgenos quarente-
nrios foi baseada na lista A1 publicada na Instruo
Normativa n. 41 de 2008 (BRASIL, 2008) e que foi
no alterada pela Instruo Normativa n. 59 de 2013
(BRASIL, 2013).
Eucalipto
Patgenos existentes no Brasil
O eucalipto plantado em quase todo o terri-
trio nacional, especialmente nos estados de Minas
Gerais, So Paulo e Mato Grosso do Sul (IB, 2015)
com a maioria dos plantios constituda por clones de
Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla denomi-
nado de urograndis (Alfenas et al. 2009). O eucalipto
possui vrios patgenos registrados no Brasil (Tabela
1). Os principais patgenos so Puccinia psidii (fer-
rugem), Ceratocystis fimbriata e Ralstonia solana-
cearum (murcha vascular), Chrysoporthe cubensis e
Botryosphaeria spp. (cancros), Cylindrocladium spp.
Mycosphaerella/Teratosphaeria, Xanthomonas axo-
nopodis e Erwinia psidii (cancro e murcha) em plan-
tios comerciais.
Patgenos oficialmente listados como qua-
rentenrios
A atual lista A1 de pragas quarentenrias
para o Brasil apresenta oito patgenos fngicos, des-
tacando-se como patgenos radiculares Armillaria
luteobubalina (importante em eucaliptos na Austr-
lia), Armillaria tabescens e Heterobasidion annosum
(polfagos) e para patgenos de tronco, somente foi
relacionado Chondrostereum purpureum (Tabela 2).
Patgenos exticos no quarentenrios
Os patgenos que podem ser destacados
como importantes para a cultura do eucalipto e que
ainda no foram normatizados como pragas quaren-
tenrias so patgenos foliares como Teratosphaeria
spp., e Quambalaria pitereka (Tabela 2). Esses fun-
gos causam desfolha, declnio e morte das rvores,
com impactos significativos na produtividade das
florestas de eucalipto na Austrlia (Carnegie, 2007).
De acordo com este autor, Teratosphaeria eucalyp-
ti causou severa desfolha (> 95 %) em Eucalyptus
105
 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 1. Lista de patgenos registrados para a cultura do eucalipto no Brasil.

Patgeno Doena Danos ou Sintomas
Alternaria tenuissima Mancha foliar de Leso foliar em mudas.
Alternaria
Aulographina eucalypti Mancha de Leses necrticas sobre nervuras, pecolo, galhos e
Aulographina ramos mais finos.
Botryosphaeria ribis (= Neofusicoccum ribis) Cancro de Leses em casca, em vrias partes do caule, com
Botryosphaeria dothidea (= Fusicoccum aesculi) Botryosphaeria quebra no ponto de infeco, exsudao de goma,
Botryosphaeria rhodina (= Lasiodiplodia theobromae) estrangulamento de rvores jovens.
Botrytis cinerea (= Botryotinia fuckeliana) Mofo cinzento; Queima e seca de ponteiros de mudas e rvores
Podrido de Botrytis jovens; morte de miniestacas.
Ceratocystis fimbriata Murcha de Declnio, cancro, escurecimento radial do lenho;
Ceratocystis murcha e morte de minicepas, miniestacas e rvores
jovens.
Cercospora eucalypti Mancha de Cercospora Manchas foliares que podem tomar todo o limbo.
Colletotrichum gloesporioides Antracnose Mancha foliar, desfolha e secamento descendente da
haste de mudas.
Cryptosporiopsis eucalypti Mancha de Manchas foliares com ou sem desfolha.
Cryptosporiopsis
Crysoporthe cubensis (= Cryphonectria cubensis) Cancro Leses na casca de rvores jovens e adultas;
estrangulamento e morte de rvores.
Coniothyrium sp. Cancro de Leses necrticas pequenas ou longas, deprimidas no
Coniothyrium caule, gomose, declnio e reduo no crescimento da
rvore.
Cylindrocladium spp. Mancha foliar de Manchas e secamento de folhas e ramos em mudas
Cylindrocladium candelabrum (= Calonectria scoparia) Cylindrocladium; e rvores jovens; secamento da haste de mudas;
Cylindrocladium clavatum Canela preta; Tombamento de plntulas; Morte de estacas e
Cylindrocladium ovatum Tombamento de miniestacas.
Cylindrocladium parasiticum (= Calonectria ilicilola) mudas;
Cylindrocladium pteridis Morte de miniestacas
Cylindrocladium scoparium (= Calonectria morganii)
Cylindrocladium ilicicola (= Calonectria pyrochroa)
Cylindrocladium floridanum
Cylindrocladium quinqueseptatum (= Calonectria quinqueseptata)
Cytospora eucalypticola (= Valsa certosperma) Cancro de Cytospora Leses na casca e cancro em tronco.
Erwinia psidii Cancro e murcha Seca de ramos e ponteiros, murcha.
Erythricium salmonicolor (= Corticium salmonicolor) Enfermidade rosada Leses na casca e anelamento de hastes e galhos de
ou rubelose rvores jovens, formao de cancros, quebra do caule.
Inocutis jamaicensis Cancro e podrido de Leso em tronco, trincamento da casca, cancro e
Inocutis apodrecimento de lenho e quebra de caule.
Hainesia lythri Mancha de Hainesia Leso foliar em mudas; anelamento da haste e morte
apical de mudas.
Harknessia sp. Mancha de Harknessia Manchas foliares
Mycosphaerella/Teratosphaeria Mancha foliar de Manchas foliares de vrios tipos, com ou sem desfolha.
Mycospharella parkii (= Stenella parkii) Mycosphaerella /
Mycosphaerella marksii Teratosphaeria
Teratosphaeria suberosa
Teratosphaeria suttonii (= Kirramyces epicoccoides)
Teratosphaeria molleriana (= Colletogloeopsis molleriana)
Teratosphaeria nubilosa
Oidium eucalypti; Erysiphe cichoracearum; Sphaerotheca pannosa Odio Queima, seca e queda de folhas em mudas e rvores
jovens.
Pestalotiopsis spp. Mancha foliar e Leses necrticas em folhas e hastes de estacas e
anelamento da haste miniestacas.
Phytophthora sp. Podrido de raiz Tombamento e morte de plntulas em viveiro.
Pilidiella eucalyptorum (= Coniella fragariae) Mancha foliar de Manchas foliares extensas com ou sem desfolha em
Pilidiella rvores.
Puccinia psidii Ferrugem Queima de folhas e brotaes de mudas e rvores
jovens.
Quambalaria eucalypti (= Sporothrix eucalypti) Mancha foliar e Estrangulamento da haste de mudas; leso foliar
anelamento da haste de mudas, minicepas, miniestacas e rvores jovens;
anelamento de hastes e ramos, leses na casca e
cancros no caule de rvores jovens.
Ralstonia solanacearum biovar I Murcha bacteriana Necrose foliar, murcha e morte de minicepas; murcha
vascular e morte de rvores jovens.
Rhizoctonia solani (AG1-1B); espcies binucleadas de Rhizoctonia; Mela e mancha de Crescimento epiftico sobre folhas, miniestacas, mudas
Thanatephorus cucumeris Rhizoctonia e rvores jovens, causando secamento e morte.
Trimmatostroma excentricum Mancha de Manchas foliares pequenas.
Trimmatostroma
Xanthomonas axonopodis Mancha foliar Manchas foliares necrticas em mudas e rvores
bacteriana jovens.
Fonte: Ferreira (1989), Alfenas et al. (2009), Krugner & Auer (2005a).

106 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 2. Listagem de patgenos exticos quarentenrios ou no considerados importantes para a cultura do eucalipto.
Patgeno Doena Danos Status Referncias
quarentenrio*
Armillaria luteobubalina Podrido de Apodrecimento de razes e morte PQ BRASIL (2008)
Armillaria tabescens razes de rvores.
Chondrostereum purpureum Podrido do Infeco em rvores vivas, declnio PQ BRASIL (2008)
tronco e apodrecimento da madeira Farr & Rossman (2016)**
Hetereobasidion annosum (= Podrido de Apodrecimento de razes e morte PQ BRASIL (2008)
Spiniger meineckellus) razes de rvores. Farr & Rossman (2016)**
Teratosphaeria destructans (= Mancha foliar Manchas foliares e desfolha. - Andjic et al. (2011)
Kirramyces destructans)
Kirramyces eucalypti Mancha foliar Manchas foliares e desfolha. - Alfenas et al. (2009)
Pilidiella destruens Seca de Declnio de rvores. - Alfenas et al. (2009)
ponteiros
Quambalaria pitereka Mancha foliar Manchas foliares e deformao de - Roux et al. (2006)
rgos.
*PQ praga quarentenria, de acordo com lista A1 de pragas quarentenrias para o Brasil. **Base de dados utilizada
para busca de espcies de eucalipto hospedeiras aos patgenos florestais listados como quarentenrios.

nitens provocando a morte de ponteiros e rvores
enquanto que Quambalaria pitereka levou a danos
significativos na copa (25 % de severidade) e queima
de ponteiros, principalmente em plantios jovens de
Corymbia spp.
Pinus
Patgenos existentes no Brasil
O pnus plantado principalmente nos esta-
dos do Paran, Santa Catarina e Rio Grande do Sul
(IB, 2015) e as principais espcies plantadas so Pi-
nus taeda e Pinus elliottii var. elliottii (subtropicais) e
Pinus caribaea var. hondurensis (tropical) (Shimizu &
Sebben, 2008).
Os principais patgenos que ocorrem no p-
nus so os fungos Armillaria sp. (podrido de razes)
e Diplodia pinea (seca de ponteiros) (Tabela 3). At o
momento, desconhece-se qual a espcie de Armilla-
ria que ataca o pnus no Brasil.
Patgenos oficialmente listados como qua-
rentenrios
A lista A1 apresenta 10 fungos e 2 nemati-
des quarentenrios que podem representar riscos
para a cultura de pnus (Tabela 4). Destacam-se os
patgenos radiculares dos gneros Armillaria e He-
terobasidion, os nematides vasculares do gnero
Bursaphelenchus, as ferrugens dos gneros Cronar-
tium e Endocronartium, de cancro de Gibberella
circinata e de acculas e copa dos gneros Mycos-
phaerella. Todos so patgenos importantes e com
grandes danos e prejuzos relatados em vrias partes
do mundo.
Patgenos exticos no quarentenrios
O patgeno que pode ser destacado para
a cultura do pnus ainda no registrado no Brasil
Phytophthora pinifolia, restrito ao Chile (Santos et
al., 2013). Os impactos desse oomiceto so rele-

Tabela 3. Lista de patgenos registrados para a cultura do pnus no Brasil.

Patgeno
Armillaria sp.
Cylindrocladium clavatum
Cylindrocladium pteridis
Diplodia pinea (= Sphaeropsis sapinea)
Dothistroma septospora (=
Mycosphaerella pini)
Fusarium sp.
Lophodermium sp.
Rhizoctonia solani (= Thanathephorus
cucumeris)
Fonte: Ferreira (1989), Krugner & Auer (2005b).
Doena Danos
Podrido de razes Apodrecimento de razes e morte de rvores.
Podrido de razes Podrido de razes de mudas e rvores, morte de plantas.
Queima de acculas Leses em acculas com estrangulamento e morte;
desfolha em mudas e rvores jovens.
Seca de ponteiros Queima de brotos de mudas, seca de ponteiros de rvores
jovens, cancros em caule, manchamento da madeira.
Queima de acculas Leses em acculas com estrangulamento e morte;
desfolha em mudas e rvores jovens.
Podrido de razes Podrido de razes de mudas.
Mancha de Lophodermium Leses em acculas com estrangulamento e morte;
desfolha em mudas e rvores jovens.
Podrido de razes Apodrecimento de razes e da base de estacas e
miniestacas de mudas.

RAPP - Volume 24, 2016 107

 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 4. Listagem de patgenos exticos considerados importantes para a cultura do pnus no exterior.
Patgeno Doena Danos Status quarentenrio* Referncias
Armillaria luteobubalina Podrido de razes Apodrecimento de razes e PQ BRASIL (2008)
Armillaria ostoyae morte de rvores.
Armillaria tabescens
Bursaphelenchus xylophilus Murcha vascular Colonizao dos traquedeos PQ BRASIL (2008)
Bursaphelenchus mucronatus da rvore; murcha da copa e
morte de rvores
Cronartium fusiforme Ferrugem Formao de galhas, PQ BRASIL (2008)
Cronartium quercuum deformao do tronco, morte
da planta.
Endocronartium harknessii Ferrugem Formao de galhas, PQ BRASIL (2008)
deformao do tronco, morte
da planta.
Gibberella circinata Cancro resinoso do Tombamento de mudas; PQ BRASIL (2008)
(= Fusarium circinatum) pnus Infeces sistmicas em ramos
e tronco, cancro, declnio e
morte.
Hetereobasidion annosum Podrido de razes Apodrecimento de razes e PQ BRASIL (2008)
morte de rvores.
Mycosphaerella dearnessii Queima de acculas Leses em acculas, desfolha e PQ BRASIL (2008)
(= Lecanosticta acicola) morte de rvores jovens.
Mycosphaerella gibsonii
(= Pseudocercospora
pini-densiflorae)
Phytophthora pinifolia Dano foliar do pnus Leses em acculas e - Santos et al.
secamento, leses necrticas (2013)
no caule e morte de plantas
*PQ praga quarentenria, de acordo com lista A1 de pragas quarentenrias para o Brasil.

vantes atacando acculas e a copa das rvores e de
acordo com Ahumada et al. (2013) cerca de 54 mil
hectares foram atacados em surto ocorrido durante
2004 a 2006.
Accia-negra
Patgenos existentes no Brasil
A accia-negra plantada no estado do Rio
Grande do Sul em mais de 100.000 hectares (ABRAF,
2013). A accia negra possui algumas doenas regis-
tradas no Brasil (Tabela 5) e os principais patgenos
so Phytophthora nicotianae e Phytophthora boeh-
meriae, causando a gomose em plantios comerciais.
Patgenos oficialmente listados como qua-
rentenrios
A lista A1 apresenta somente Armillaria lute-
obubalina que pode ser danoso para a acacicultura
(Tabela 6).
Patgenos exticos no quarentenrios
Para a accia negra podem ser destacados
Uromycladium notabile e Uromycladium bisporum
(Tabela 6), que causam ferrugem e desfolha em plan-
tios comerciais no exterior.
Teca
Patgenos existentes no Brasil
A teca plantada principalmente nos esta-
dos de Mato Grosso, Par e Roraima (ABRAF, 2013) e
possui algumas doenas registradas no Brasil (Tabela
7). O principal patgeno Olivea neotectonae (= Oli-
vea tectonae) causador da ferrugem em plantios co-
merciais, reduzindo a produtividade (Caldeira et al.,

Tabela 5. Lista de patgenos registrados para a cultura da accia-negra no Brasil.

Patgeno
Ceratocystis fimbriata
Phytophthora boehmeriae
Phytophthora nicotianae
Uromycladium alpinum
Fonte: Santos et al. (2007).
Doena Danos
Murcha de Ceratocystis Declnio, cancro, escurecimento radial do lenho; murcha de
ponteiro em rvores jovens.
Gomose de tronco Leses na casca, exsudao de goma, reduo na produo de
casca
Gomose basal Leses na casca, exsudao de goma, reduo na produo de
casca
Ferrugem Amarelecimento e queda de fololos.

108 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 6. Lista de patgenos exticos considerados importantes para a cultura da accia-negra no exterior.
Patgeno Doena Danos Status quarentenrio* Referncias
Armillaria Podrido de Apodrecimento de razes e PQ BRASIL (2008)
luteobubalina razes morte de rvores
Ceratocystis albifundus Murcha de Declnio, cancro, - Roux et al. (2005)
Ceratocystis escurecimento radial do
lenho; murcha de ponteiro em
rvores jovens
Uromycladium notabile Ferrugem Amarelecimento e - Santos et al. (2007)
queda de fololos
Uromycladium Ferrugem Amarelecimento e - Santos et al. (2007)
bisporum queda de fololos
*PQ praga quarentenria, de acordo com lista A1 de pragas quarentenrias para o Brasil.

Tabela 7. Lista de patgenos registrados para a cultura da teca no Brasil.

Patgeno
Agrobacterium tumefaciens
Alternaria sp.
Ceratocystis fimbriata
Colletotrichum gloesporioides
Cylindrocladium parasiticum
Lasiodiplodia theobromae
Olivea tectonae
Meloidogyne javanica
Rhizoctonia solani
Fonte: Caldeira et al. (2014), Borges et al. (2015).
Doena Danos
Galha-da-coroa Deformao basal e presena de galhas.
Mancha de Alternaria Leses necrticas em folhas.
Murcha de Ceratocystis Declnio, cancro, escurecimento radial do lenho; murcha de
ponteiro em rvores jovens.
Antracnose Manchas foliares e desfolha.
Mancha de Cylindrocladium Manchas foliares e desfolha.
Cancro no tronco Leses no tronco, manchamento e podrido do cerne e
morte de rvores.
Ferrugem Desfolha prematura em mudas e rvores jovens e adultas.
Galhas das razes Formao de galhas em razes.
Queima de folhas Leses foliares e crescimento epiftico.

2014). Destaca-se, tambm, a murcha de Ceratocys- (Tabela 9). Os principais patgenos so Melampso-
tis afetando a produtividade decorrente da morte de ra medusae (ferrugem) e Septoria musiva (manchas
rvores e a qualidade da madeira pela colonizao e foliares e cancros) em plantios comerciais (May-de
manchamento interno. Mio & Amorim, 2005).

Patgenos oficialmente listados como qua-
rentenrios
A lista A1 no apresenta patgenos quarente-
nrios para Tectona grandis.
Patgenos exticos no quarentenrios
Os patgenos Phellinus noxius (podrido de
raiz), Phomopsis tectonae e Pseudoepicoccum tecto-
nae (manchas foliares) e Dothiorella sp e Nectria spp.
(cancros) podem ser destacados como importantes
(Tabela 8). Alm destes, os patgenos Erythricium
salmonicolor (rubelose) e Ralstonia solanacearum
(murcha vascular) que causam doenas em eucalipto
no Brasil (Alfenas et al., 2009).
lamo
Patgenos existentes no Brasil
A cultura do lamo est concentrada nos esta-
dos do Paran e de Santa Catarina (ABRAF, 2013). O
lamo possui algumas doenas registradas no Brasil
Patgenos oficialmente listados como qua-
rentenrios
Para o lamo, a lista A1 apresenta 10 fungos
e um vrus (Tabela 10). A lista relaciona os patgenos
radiculares Armillaria ostoyae e Heterobasidion an-
nosum, patgenos de tronco como Chondrostereum
purpureum, Neonectria ditssima e Valsa nivea e os
patgenos foliares do gnero Drepanopeziza, Taphri-
na populina, Venturia populina e vrus do mosaico
do Populus.
Patgenos exticos no quarentenrios
A princpio, os patgenos que podem ser des-
tacados como importantes para a cultura do lamo
foram listadas como quarentenrios (Tabela 10).
Doenas causadas por patgenos quarente-
nrios
Com relao s doenas causadas pelos pa-

RAPP - Volume 24, 2016 109

 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 8. Lista de patgenos exticos considerados importantes para a cultura da teca no exterior.
Patgeno Doena Danos Status Referncias
quarentenrio*
Erythricium salmonicolor Enfermidade Leses na casca e anelamento - Caldeira et al. (2014)
(= Corticium salmonicolor) rosada ou rubelose de hastes e galhos de rvores
jovens, formao de cancros,
quebra do caule
Dothiorella sp. Cancro de Cancros em caule - Caldeira et al. (2014)
Dothiorella
Nectria spp. Cancro de Nectria Cancros em caule - Caldeira et al. (2014)
Phellinus noxius Podrido de raiz Apodrecimento de razes e CROP (2016b)
caule
Phomopsis tectonae Mancha de Manchas foliares, desfolha e - Caldeira et al. (2014)
Phomopsis morte de plntulas
Pseudoepicoccum tectonae Mancha de Manchas foliares, desfolha. - Caldeira et al. (2014)
Pseudoepicoccum
Ralstonia solanacearum Murcha bacteriana Murcha vascular e morte de - Caldeira et al. (2014)
rvores jovens
*PQ praga quarentenria, de acordo com lista A1 de pragas quarentenrias para o Brasil.

Tabela 9. Lista de patgenos registrados para a cultura do lamo no Brasil.

Patgeno Doena Danos
Melampsora medusae Ferrugem Desfolha prematura em mudas e rvores jovens e adultas.
Rosellinia bunodes Podrido de razes Apodrecimento de razes e morte de rvores.
Septoria musiva Mancha foliar e cancro de Septoria Leses necrticas em folhas; Cancros em tronco.
Fonte: Santos et al. (2010), Santos et al. (2015), May-de-Mio & Amorim (2005).

Tabela 10. Lista de patgenos exticos considerados importantes para a cultura do lamo no exterior.
Patgeno Doena Danos Status Referncias
quarentenrio*
Armillaria ostoyae Podrido de razes Apodrecimento de razes e PQ BRASIL (2008)
morte de rvores.
Chondrostereum purpureum Podrido do tronco Infeco em rvores vivas, PQ BRASIL (2008)
declnio e apodrecimento da
madeira
Drepanopeziza populi-albae Mancha foliar Leses foliares, queima de PQ BRASIL (2008)
(= Marssonina castagnei) ponteiros, desfolha prematura
Drepanopeziza populorum da copa.
(= Marssonina populi)
Drepanopeziza punctiformis
(= Marssonina brunnea )
Hetereobasidion annosum Podrido de razes Apodrecimento de razes e PQ BRASIL (2008)
morte de rvores.
Neonectria ditissima Cancro Formao de cancros em PQ BRASIL (2008)
(= Neonectria galligena) ramos e troncos, secamento de
ponteiros.
Taphrina populina Galhas foliares Enrolamento do limbo foliar e PQ BRASIL (2008)
formao de galhas.
Valsa nivea Cancros Formao de cancros em PQ BRASIL (2008)
ramos e troncos, secamento de
ponteiros.
Venturia populina Mancha foliar Manchas foliares e queima de PQ BRASIL (2008)
ponteiros em rvores.
Poplar mosaic vrus - Popmv Mancha foliar Manchas foliares PQ BRASIL (2008)
*PQ praga quarentenria, de acordo com lista A1 de pragas quarentenrias para o Brasil.

tgenos quarentenrios, os impactos podem ser vasculares, patgenos de caule e patgenos de parte
agrupados em funo do tipo de parasitismo nas area (Auer & Santos, 2012).
espcies florestais: patgenos de razes, patgenos Os patgenos de razes pertencem aos gne-

110 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)
ros Armillaria (Armillaria tabescens, Armillaria os-
toyae e Armillaria luteobubalina) e Heterobasidion
(Heterobasidion annosum). O principal stio de
ataque so as razes e o colo da rvore, colonizan-
do a casca, o cmbio e o lenho. As plantas doentes
apresentam declnio e morte por falta de gua e
nutrientes, em consequncia da destruio das ra-
zes. A incidncia de rvores mortas varia em fun-
o do potencial de inculo presente no solo do
talho e leva reduo do estande, e consequente
queda na produtividade de madeira por rea.
Os patgenos vasculares pertencem aos g-
neros Bursaphelenchus (Bursaphelenchus mucro-
natus e Bursaphelenchus xylophilus). O principal
stio de ataque o sistema vascular da planta, que
colonizado pelo patgeno impedindo a passa-
gem de gua e de nutrientes entre as razes (gua
e nutrientes) e a copa (fotossintetizados). Como
resultado, tambm ocorre o declnio das plantas e
sua morte em casos de intensa colonizao dos va-
sos condutores. A paralisao no desenvolvimento
das plantas e sua morte concorrem para a reduo
na produtividade de madeira por rea.
Os patgenos de tronco pertencem aos g-
neros fngicos Giberella (Fusarium circinatum),
Cronartium (Cronartium fusiforme) e Endocronar-
tium (Endocronartium harknessii). Estes fungos
afetam a casca da rvore, podendo causar sua
morte, tendo como consequncia principal a que-
bra do tronco e a reduo da qualidade da madei-
ra de rvores doentes.
Os patgenos da parte area pertencem
aos gneros fngicos Drepanopeziza (Drepano-
peziza populi-albae, Drepanopeziza populorum
e Drepanopeziza punctiformis), Mycosphaerella
(Mycosphaerella dearnessii e Mycosphaerella
gibsonii), Neonectria (Neonectria galligena), Ta-
phrina (Taphrina populina) e Venturia (Venturia
populina), alm do Poplar Mosaic Virus (vrus). Os
principais stios de ataque so: as folhas e a copa
das rvores, impedindo a fotossntese e o desen-
volvimento total da planta e, em casos mais seve-
ros, a queima e queda das folhas. Como resultado,
tambm h ocorrncia do declnio das plantas e
sua morte em casos de intensa colonizao. A pa-
ralisao no crescimento das plantas e sua morte
concorrem para a reduo na produtividade de ma-
deira por rea.
RAPP - Volume 24, 2016
Consideraes finais
Os impactos da ao de patgenos exticos
florestais, quarentenrios ou no, so relatados nos
plantios nativos ou comerciais estabelecidos nos
pases de origem das espcies florestais exticas ou
em outros pases onde tenham sido introduzidos. A
preocupao constante do setor florestal a possi-
bilidade que ocorram com a mesma magnitude de
danos ou maior em plantios brasileiros. Os impactos
potenciais podem ser esperados na reduo da pro-
dutividade das florestas, da qualidade da matria-
-prima (madeira) produzida e, em casos mais graves,
o impedimento do uso de determinadas espcies ou
de materiais genticos altamente produtivos, devido
a sua suscetibilidade aos patgenos exticos. Outro
tipo de impacto negativo o caso de patgenos ex-
ticos parasitarem espcies florestais nativas promo-
vendo a mortalidade e reduo de florestas e biomas
(Garbelotto & Pautasso, 2012). Em qualquer um dos
tipos de impactos apontados, esperam-se impactos
sociais negativos tanto pela reduo de postos de
empregos como pela falta de produtos madeireiros
ou no oriundos das florestas nativas.
Os patgenos florestais exticos podem ter
sido introduzidos no Brasil, pela forma tradicional
mais conhecida, que atravs de material gentico
(sementes, mudas e estacas) durante as introdues
de espcies florestais, em diferentes perodos de ex-
panso do setor florestal. Como exemplo, podemos
mencionar os fungos Diplodia pinea e Mycosphae-
rella pini, em Pinus (Ferreira, 1989; Krugner & Auer,
2005a e b), que provavelmente foram introduzidos
nas dcadas de 1940 e 1960. Outra forma a disse-
minao de propgulos de patgenos por meio de
eventos meteorolgicos que podem levar esporos
de fungos e de bactrias a longas distncias, como
foram os casos de ferrugens e manchas foliares em
culturas agrcolas (Brown & Hovmller, 2002).
Nos ltimos 20 anos, com o forte intercm-
bio comercial, especialmente de produtos agrcolas
e florestais entre os pases e regies, aumentam os
riscos (Wingfield et al. 2002; Cushman & Meente-
meyer, 2008; Andjic et al. 2011) e vias alternativas de
introduo podem estar ocorrendo. Uma dessas for-
mas seria a presena de esporos e estruturas vege-
tativas e de resistncia em manufaturados de origem
florestal, como artesanatos em madeira, que passam
por vias que no passam pelo crivo da fiscalizao de
portos e aeroportos. Outra possibilidade a aquisi-
111
 Celso Garcia Auer e lvaro Figueredo dos Santos (104-114)
o de sementes e produtos naturais do exterior e
que so despachados pelo correio, sem fiscalizao
sanitria. Tambm, pode ser comentada a presen-
a de patgenos em material utilizados nas deco-
raes de festas (arranjos de plantas ornamentais)
em navios transatlnticos de turismo que percorrem
o mundo e que so descartados comumente nas
praias ou nos portos. O uso de embalagens e madei-
ra de suporte nos transportes areos, normalmente
de origem desconhecida, podem abrigar patgenos
e sua introduo facilitada principalmente pela
dificuldade de constatao da presena durante os
trabalhos de fiscalizao sanitria. No entanto, estas
formas de introduo no tm sido documentadas.
Um aspecto a ser salientado a dificuldade
de levantamento bibliogrfico de patgenos existen-
tes devido s constantes mudanas na classificao
taxonmica. Tal reordenamento do nome cientfico
dificulta, s vezes, pela falta de especialistas, a busca
de informaes sobre patgenos considerados ex-
ticos.
A atual listagem A1 de pragas quarentenrias
para o Brasil (BRASIL, 2008) no especifica a qual
cultura um dado patgeno est associado. Desse
modo, um dado patgeno considerado quarenten-
rio poder ser importante tanto para culturas agr-
colas como culturas florestais ou somente para uma
dessas. Outro aspecto a ser levantado a presena
de patgenos que no atacam as espcies florestais
plantadas no Brasil. Um exemplo o caso de Brenne-
ria salicis (= Erwinia salicis). Segundo CROP (2016a),
esta bactria est presente somente em salicceas
do gnero Salix, o qual no plantado comercial-
mente no Brasil e assim pode ser questionada sua
colocao na lista A1. Esta bactria poder causar ris-
cos ambientais se for patognica s espcies nativas
de salicceas como Salix humboldtiana. Dois exem-
plos de riscos ambientais em espcies florestais na-
tivas so a introduo de Phytophthora cinnamomi
na Austrlia (Shearer at al. 2004) e o surgimento de
Phytophthora ramorum nos Estados Unidos e Gr-
-Bretanha (Grnwald et al., 2012), ambos afetando
a ecologia das florestas nativas e causando danos
irreversveis nas populaes de espcies suscetveis.
A lista de patgenos quarentenrios para flo-
restas poderia ser maior, caso houvesse um estudo
especfico para patgenos em espcies florestais,
como foi apontado para cada um dos gneros flores-
tais estudados. Uma das culturas de maior expresso
112 RAPP - Volume 24, 2016
nacional o eucalipto presente em todo o territrio
nacional em profuso de espcies e clones (deriva-
dos ou no de hbridos artificialmente produzidos),
em variados biomas. Tal situao deve favorecer o
estabelecimento de ciclo de vida de diferentes tipos
de patgenos exticos. Tais aspectos criam preocu-
pao quanto possibilidade de patgenos exticos
se desenvolverem muito melhor do que no pas de
origem pela presena de ambientes favorveis no
Brasil, de hospedeiros suscetveis e a ausncia de ini-
migos naturais (controle biolgico natural), a exem-
plo do que ocorre com novos insetos introduzidos
(Alfenas et al., 2009).
A atualizao da lista A1 pela incluso de al-
guns patgenos exticos como por exemplo Phyto-
phthora pinifolia (em pnus) e Teratosphaeria spp.
(em eucalipto), impactantes ao cultivo de seus
hospedeiros no exterior, seria plenamente justifica-
da pelo risco que podem representar silvicultura
nacional. Uma maior discusso sobre estes e outros
patgenos poderia ser estabelecida com o envolvi-
mento das universidades, institutos de pesquisa e o
setor privado .
A identificao e diagnose das doenas de
patgenos de plantas requer treinamento especfico
quanto s caractersticas dos patgenos, dos sinto-
mas e sinais produzidos nas plantas hospedeiras. A
diagnose rpida feita a olho nu ou com o auxlio de
uma lupa, no garante a sua qualidade, tornando-se
necessrio o uso de ferramentas laboratoriais, alm
dos mtodos moleculares. No entanto, faltam proto-
colos especficos rotineiros e, ainda, alta a relao
custo-benefcio.
A capacitao dos futuros tcnicos nos cur-
sos de graduao e ps-graduao sobre os patge-
nos exticos quarentenrios deveria ser estimulada
(Auer & Santos, 2013), alm dos cursos de capacita-
o tcnica em Sanidade Florestal para os profissio-
nais do sistema de defesa vegetal sobre taxonomia,
morfologia, hospedeiros, biologia e ecologia, meios
de disperso, impactos, sintomas, mtodos de de-
teco e inspeo e medidas de controle.
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BACTRIAS ENDOFTICAS: PASSADO,

PRESENTE E PERSPECTIVAS VISANDO UM
FUTURO SUSTENTVEL
Bruna Canabarro Pozzebon1 e Juliano dos Santos2

RESUMO
Bactrias endofticas so conhecidas por colonizar os tecidos internos
das plantas sem desencadear sintomas de doenas. Estudos moleculares re-
centes sobre a diversidade de bactrias endofticas revelaram que existe uma
grande riqueza de espcies, e que estas podem advir de sementes, da rizosfera,
do filoplano de material propagativo, e penetrar na planta via estmatos, feri-
mentos e microferimentos causados pela emergncia das razes laterais. Muitos
estudos tm demonstrado que esses micro-organismos podem ser uma alterna-
tiva aos mtodos de controle de pragas e doenas praticados atualmente, pois
so capazes de prevenir ou reduzir efeitos deletrios causados por patgenos a
partir da multiplicao e ao de mecanismos de biocontrole, desempenhados
pela sntese de siderforos, volteis, substncias antimicrobianas, competio
por espao e nutrientes e resistncia sistmica. Bactrias endofticas tambm
podem promover o crescimento de plantas, atravs da solubilizao de nutrien-
tes, sntese de fitohormnios e fornecimento de vitaminas, bem como promo-
ver efeitos benficos adicionais planta, conduzindo para a resistncia contra o
estresse abitico, ataque de insetos e fitorremediao. Desta forma, explorar o
uso de bactrias endofticas pode colaborar para a agricultura sustentvel, por
reduzir os custos de produo com agrotxicos e insumos qumicos, alm de
reduzir os riscos ao meio ambiente e sade humana.

Introduo do mecanismos de adaptao ao meio ambiente e

A teoria de que bactrias no patognicas
habitam os tecidos internos de plantas iniciou com
Perrotti em 1926, porm somente a partir de 1940,
comearam a ser divulgadas pesquisas relatando
a presena de bactrias endofticas em rgos dis-
tintos da planta, como flores, frutos, folhas, caules,
razes, e sementes (Hallmann et al., 1997; Sturz et
al., 2000; Thomas et al., 2007; Melnick et al,. 2008;
Barretti et al., 2009; Piccolo et al., 2010; Qin et al.,
2011).
Evolutivamente, as plantas tm desenvolvi-
muitos deles so possveis devido s interaes en-
tre os micro-organismos e a planta (Peixoto Neto et
al., 2004). As bactrias so habitantes comuns dos
tecidos internos e externos de plantas, e so consi-
deradas endofticas quando colonizam internamen-
te os tecidos vegetais sem mostrar qualquer sinal
externo de infeco ou efeito negativo no hospe-
deiro (Holliday, 1989; Schulz e Boyle, 2006). Esses
micro-organismos se estabelecem nos espaos in-
ter- e intracelulares, dentre os quais destacam-se
o parnquima, epiderme, bainha do feixe vascular,

1
Departamento de Fitopatologia, Universidade Federal de Lavras. Av. Doutor Sylvio Menicucci, 1001 - Kennedy, Lavras - MG, 37200-
000. 2Departamento de Biologia, Universidade Federal do Maranho. Av. dos Portugueses, 1966 - Bacanga, So Luis - MA, 65080-805.

RAPP - Volume 24, 2016 115

 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
xilema e floema (Elbeltagy et al., 2001; Yonezawa
et al., 2004; Franke-Whittle et al., 2005; Almeida et
al., 2009; Esposito-Polesi, 2010; Piccolo et al., 2010).
Alm disso, podem mover-se do solo para as plan-
tas, principalmente atravs de fissuras que surgem
devido emergncia de razes laterais, ou penetrar
no hospedeiro pelas folhas, flores e frutos atravs do
sistema vascular do hospedeiro, tirando proveito de
uma grande disponibilidade de nutrientes (Hardoim
et al., 2008; Compant et al., 2011).
Os micro-organismos endofticos podem ser
classificados em obrigatrios, quando so estrita-
mente dependentes da planta hospedeira, ou facul-
tativos, quando possuem uma fase do ciclo de vida
dentro da planta hospedeira e outra fase do ciclo de
vida livre (Hardoim et al., 2008). As associaes dos
endofticos com seus hospedeiros geralmente so
simbiticas e/ou mutualsticas (Guo et al., 2008; Me-
lnick et al., 2008). Outro fator importante a relao
da planta hospedeira com a comunidade endoftica,
que envolve um processo co-evolutivo que conduz
a mudanas nas relaes em nvel celular e molecu-
lar, contribuindo de diferentes formas na sanidade
e desenvolvimento da planta (Aravind et al., 2010).
Notadamente, esses micro-organismos apresentam
vantagem adicional em comparao a outros, pois
so protegidos contra flutuaes bruscas de tempe-
ratura, dessecao, radiaes solares e competio
microbiana, por habitarem o interior do hospedeiro
(Francis et al., 2010).
A maioria das pesquisas sobre bactrias asso-
ciadas a plantas se concentram principalmente em
trabalhos cientficos que utilizam rizobactrias no
biocontrole de patgenos (Malfanova et al., 2011).
Entretanto, pesquisas sobre a diversidade, interao
e o papel das bactrias endofticas, tem se tornado
objeto de estudo em todo o mundo, visando eluci-
dar os mecanismos de proteo e crescimento por
elas promovidos (Rosemblueth e Martnez-Romero,
2006; Ryan et al., 2008). Fundamentado nisso, vrios
trabalhos tm sido desenvolvidos com essas duas te-
mticas, haja vista que a demanda pelo consumo dos
produtos orgnicos est em ascenso, principalmen-
te devido busca por alimentos saudveis e a pre-
ocupao com a sade (Alves e Cunha, 2012), bem
como a preservao do meio ambiente e a constante
busca dos produtores rurais por menores custos de
produo no manejo da lavoura.
Como promotoras de crescimento de plantas,
116 RAPP - Volume 24, 2016
as bactrias endofticas podem trazer benefcios por
fornecer vitaminas essenciais planta, aumentar a
captao e solubilizao de minerais, regular o ajus-
te osmtico e a abertura e fechamento dos estma-
tos, alm de modificar a morfologia radicular (Ryan
et al., 2008). No tocante ao biocontrole, esses mi-
cro-organismos so capazes de prevenir ou reduzir
efeitos deletrios causados por patgenos a partir
de mltiplos mecanismos de ao, desempenha-
dos pela sntese de siderforos, compostos volteis,
substncias antimicrobianas, competio por espa-
o e nutrientes, resistncia sistmica (Rosenblueth e
Martnez-Romero, 2006; Compant et al., 2010).
O uso de bactrias endofticas na agricultu-
ra se apresenta como uma alternativa de manejo
ao controle de doenas e promoo de crescimen-
to de plantas, devido relao custo/benefcio que
apresentam para o produtor. Com a utilizao de
produtos de base biolgica, possvel reduzir o uso
excessivo de agrotxicos e insumos qumicos, o que
consequentemente colabora para a reduo dos cus-
tos de produo. Contudo, esses micro-organismos
ainda precisam ser estudados minuciosamente, para
que se possa conhecer e elucidar os mecanismos
que esto envolvidos nos processos de controle bio-
lgico e/ou promoo de crescimento. Assim, a pre-
sente reviso aborda o uso de bactrias endofticas
na agricultura, englobando o passado, presente e as
perspectivas do uso desses micro-organismos visan-
do um futuro sustentvel para a produo agrcola, e
principalmente para o produtor.
Bactrias endofticas um breve histrico
O termo endoftico ou endfito (do grego en-
don = dentro e phyton = planta) foi atribudo por De
Bary, em meados de 1866, ao estudar a colonizao
de tecidos internos de plantas por micro-organismos
(Baldani et al., 2002; Saikkonen et al., 2004). Entre-
tanto, existem autores que atribuem a Perotti, em
1926, a descrio dessa relao natural de bact-
rias endofticas e seus hospedeiros (Hallmann et al.,
1997). Os primeiros relatos consideraram as bac-
trias endofticas como contaminantes resultantes
da desinfestao superficial incompleta dos tecidos
vegetais, ou como patgenos fracamente virulentos
(Hollis, 1951). Por mais de meio sculo, esses micro-
-organismos permaneceram ignorados e conside-
rados de pouca importncia no meio cientifico, e
s ento, depois de muitos anos, o papel biolgico
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)

exercido por esses agentes microbiolgicos come- o da diversidade de bactrias endofticas que po-
ou a ser estudado. dem levar descoberta de novos agentes potenciais
Evolutivamente, os micro-organismos endof- de biocontrole e/ou promotores de crescimento e
ticos foram mencionados pela primeira vez no incio estudos de fitorremediao.
do sculo XIX, mas foi apenas no final dos anos 70 do
sculo XX que eles passaram a ter maior nfase em
trabalhos cientficos (Santos e Varavallo, 2011). Um
dos primeiros estudos com bactrias endofticas foi
realizado por Colombo (1978), que sugeriu a ocor-
rncia de um equilbrio fisiolgico entre bactrias
e algas, pois em seu estudo relatou a ocorrncia de
bactrias endofticas entre sifes e dentro dos fila-
mentos cenocticos das algas. Entretanto, a partir dos
anos 80, os trabalhos com agentes endofticos pas-
saram a ser mais frequentes, principalmente aque-
les relacionados com a ocorrncia e diversidade de
bactrias endofticas em plantas. Jacobs et al. (1985)
enumeraram, localizaram e caracterizaram bactrias
endofticas nas razes de beterraba aucareira (Beta
vulgaris altissima) utilizando tcnicas imunolgicas e
microscopia eletrnica de varredura. Nesse estudo,
os autores verificaram que a maior ocorrncia das
bactrias endofticas foi nas regies centrais e peri-
fricas da raiz, ocorrendo principalmente as espcies
Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Coryne- Figura 1. Etapas do isolamento de bactrias endofticas
de diferentes tecidos vegetais de arroz. (A) Isolamento de
bacterium sp, e Erwinia herbicola. J nos anos 90, bactrias endofticas de colmos de plantas sadias de ar-
surgiram estudos que demonstraram que esses mi- roz. (B) Isolamento de bactrias endofticas de razes de
cro-organismos possuem funes importantes para plantas sadias de arroz. (C) Macerao dos tecidos para
seus hospedeiros, como a proteo de plantas ao liberao das bactrias do interior para o exterior do teci-
do vegetal. (D) Plaqueamento da suspenso previamente
ataque de insetos, proteo contra a infestao de macerada. (E-F) Colnias de bactrias endofticas aps 24
doenas causadas por fitopatgenos e proteo do h em cmara de crescimento tipo BOD. Foto: Pozzebon,
ataque de mamferos herbvoros por meio da produ- 2013.
o de toxinas (Azevedo, 1998; Azevedo, 1999; Aze-
vedo et al., 2000; Peixoto Neto et al., 2002). Bactrias endofticas e o controle biolgico
Atualmente, a interao de bactrias endof- medida que a agricultura aumenta, cresce
ticas e seus hospedeiros tem sido objeto de estudo tambm o uso desordenado de produtos qumicos
em todo mundo (Sun et al., 2008). Bactrias endof- para assegurar a produtividade das culturas, porm
ticas tm sido isoladas de diferentes culturas, como, causando efeitos negativos para o meio ambiente
batata-doce (Ipomoea batatas) (Khan e Doty, 2009), e consequentemente aos alimentos e microbiota
algodo (Populus deltoides) (Xin et al., 2009), videi- benfica e natural das plantas. Nesse contexto, o
ra (Vitis vinifera) (West et al., 2010), soja (Glycine controle biolgico por bactrias endofticas tem sido
max) (Hung et al., 2007), tomateiro (Solanum lyco- amplamente estudado e surge como uma forma al-
persicum) (Marquez-Santacruz et al., 2010), batata ternativa de controle para uma agricultura mais sus-
(Solanum tuberosum) (Andreote et al., 2009; Manter tentvel.
et al., 2010), arroz (Oryza sativa) (Rangjaroen et al., Resumidamente, os princpios de controle
2015) (Figura 1). Esses estudos tem sido importan- biolgico se baseiam principalmente na relao an-
tes para a compreenso das interaes ecolgicas e tagnica entre micro-organismos, como a antibiose
para o desenvolvimento de aplicaes biotecnolgi- (Figura 2), competio, parasitismo, hipovirulncia,
cas (Ryan et al., 2008), bem como para a identifica- predao e induo de defesas do hospedeiro (Fi-

RAPP - Volume 24, 2016 117

 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)

gura 3) (Bettiol e Ghini, 1995). Desta forma, poderia

se utilizar no controle de uma determinada doena,
um micro-organismo no patognico que apresenta
necessidades nutricionais semelhantes as do pat-
geno, visando promover a competio por espao e
nutrientes, que consequentemente reduziria a dis-
seminao da doena, ou ainda usufruir da capaci-
dade que determinados micro-organismos possuem
de produzir substncias com ao antibitica ou an- Figura 2. Antibiose desencadeada em teste in vitro contra
tifngica (Santos e Varavallo, 2011). o fungo Bipolaris oryzae. Setas pretas indicam a presena
Com relao ao biocontrole de doenas, h da bactria endoftica e a formao de halo de antibiose
inmeros trabalhos tanto in vitro quanto in vivo re- no meio de cultura. Foto: Pozzebon, 2014.
portando o sucesso do uso de bactrias endofticas
contra diversos patgenos, principalmente porque et al., 2009; Lin et al., 2013; Purnawati et al., 2014)
essas bactrias possuem capacidade de reduzir ou (Tabela 1).
prevenir os efeitos deletrios de patgenos (Barretti Silva et al. (2008), mostraram que o isolado

Tabela 1. Bactrias endofticas com atividade fngica, bactericida, nematicida e inseticida sobre diferentes patgenos
e pragas.
Endfito
Bacillus subtilis
B. amyloliquefaciens
B. vallismortis
B. thuringiensis
Brevibacillus choshinensis
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas sp.
Streptomyces spp.
Acinetobacter lwoffii
Pantoea agglomerans
Ochrobactrum sp.
Patgeno Atividade Referncia
Macrophomina phaseolina Fungicida Singh et al. (2008)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
Lasiodiplodia crassispora Fungicida Yuan et al. (2012)
L. rubropurpurea Fungicida Yuan et al. (2012)
L. theobromae Fungicida Yuan et al. (2012)
Ralstonia solanacearum Bactericida Nawangsih et al. (2011)
Fusarium graminearum, Fungicida Zhao et al. (2010)
Alternaria alternata, Fungicida Zhao et al. (2010)
Rhizoctonia solani, Fungicida Zhao et al. (2010)
Cryphonectria parasitica, Fungicida Zhao et al. (2010)
Phytophthora capsici Fungicida Zhao et al. (2010)
Melnick et al. (2008)
Acromyrmexsp. Inseticida Pinto et al. (2003)
Nasutitermes ehrhardti Inseticida Castilhos-Fortes et al. (2002)
Meloidogyne javanica Nematicida Khan et al. (2010)
M. incognita Nematicida Mohammed et al. (2008)
Hemileia vastatrix Fungicida Silva et al. (2008)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
Pectobacterium atrosepticum Bactericida Ardanovet al. (2011)
R. solanacearum Bactericida Tanet al. (2006)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
F. semitectum Fungicida Assumpo et al. (2009)

F. oxysporum Fungicida Assumpo et al. (2009)

Cercospora kikuchii Fungicida Assumpo et al. (2009)
Cedecea davisae Hemileia vastatrix Fungicida Silva et al. (2008)
Staphylococcus epidermidis Ralstonia solanacearum Bactericida Nawangsih et al. (2011)

118 RAPP - Volume 24, 2016

 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
endoftico 119G reduziu significativamente a severi-
dade da ferrugem do cafeeiro em nveis de controle
acima de 60% em mudas previamente tratadas com
essa bactria. Da mesma forma, Nawangsih et al.
(2011), estudaram dois isolados de bactrias endo-
fticas para o biocontrole da murcha bacteriana do
tomateiro, em que os isolados BC4 e BL10 reduziram
significativamente a intensidade da doena em 33%
e 43%, respectivamente. Assumpo et al. (2009),
avaliaram o potencial biotecnolgico da comunidade
bacteriana endoftica de sementes de soja e detecta-
ram que 18% dos isolados controlaram o crescimen-
to de fungos fitopatognicos, 100% produziram ci-
do indol actico (AIA), e 39% solubilizaram fosfato.
Kuss et al. (2006) avaliaram a fixao de nitrognio e
produo de AIA in vitro por bactrias diazotrficas
endofticas associadas a razes de arroz (Oryza sati-
va) e obtiveram resultados promissores.
Alm de atuarem no controle biolgico de
doenas de plantas, as bactrias endofticas tam-
bm so capazes de proteger as plantas contra o
ataque de insetos praga. Inseticidas microbiolgicos,
especialmente base de bactrias, tem sido desen-
volvidos desde a dcada de 70 como alternativa de
controle biolgico, e atualmente, muitos produtos
esto disponveis no mercado para controlar uma
ampla gama de pragas (Federici et al., 2010), sendo
considerados uma das mais importantes tticas de
controle, devido crescente preocupao com a re-
duo do uso de produtos qumicos e principalmen-
te, para o desenvolvimento de uma agricultura mais
sustentvel e produtiva (Moreira e Siqueira, 2006).
O controle de pragas por bactrias endofti-
Figura 3. Induo de resistncia sistmica (ISR) em plan-
tas de arroz com 21 dias aps a inoculao de B. oryzae.
(A) Tratamento Controle (gua). (B) Tratamento com o
isolado endoftico 76. Foto: Pozzebon, 2014.
RAPP - Volume 24, 2016
cas pode ser feito atravs do uso direto de bact-
rias que apresentam atividade entomopatognica
natural, ou atravs do uso desses micro-organismos
como hospedeiros para expressarem genes oriundos
de outros micro-organismos do solo, ou mesmo ge-
nes sintticos (Pleban et al., 1995). Um dos princi-
pais e mais estudados agentes de controle biolgico
a bactria Bacillus thuringiensis, que responsvel
por 95% do mercado mundial de biopesticidas, prin-
cipalmente devido produo de corpos de incluso
cristalinos, que so ingeridos por lagartas e resultam
na morte das mesmas (Polli et al., 2012).
B. thuringiensis pode ser encontrado em
diferentes substratos, principalmente no solo, e se
caracteriza por produzir incluses proteicas com
propriedades inseticidas, acaricidas e nematicidas
(Crickmore, 2005). Sua especificidade em razo da
presena de genes cry que codificam as protenas
txicas ou protenas Cry (delta-endotoxinas) (Hfte
e Whiteley 1989; Crickmore et al. 1998; Pinto e Fiu-
za 2002), as quais apresentam atividade inseticida
em diferentes ordens de insetos, como Lepidopte-
ra, Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Hemiptera,
Isoptera, Orthopera, Siphonaptera e Thisanoptera
(Feitelson et al., 1992; Aranda et al., 1996; Cavados
et al., 2001; Castilhos-Fortes et al., 2002; De Maagd
et al., 2003; Pinto et al., 2003), alm de apresentar
efeito nematicida (Khyami-Horani e Al-Banna 2006;
Mohammed et al., 2008; Khan et al., 2010).
Outro tipo de protena produzida por B. thu-
ringiensis so as protenas Cyt, que apresentam ativi-
dade txica moderada para dpteros e para algumas
espcies de colepteros, ocorrendo tipicamente em
subespcies de B. thuringiensis com atividade mos-
quitocida (Federici et al., 2010). Trabalhos com o
uso dessa bactria endoftica visando o controle de
insetos praga vem sendo desenvolvidos em todo o
mundo. Por exemplo, no estudo publicado por Via-
na et al. (2009), os autores constataram que dos 58
isolados de B. thuringiensis testados em lagartas de
Plutella xylostella, 12 causaram 100% de mortalida-
de num intervalo de tempo entre 24-48 h. Em outro
estudo, conduzido por Macedo et al. (2012), os au-
tores selecionaram e caracterizaram estirpes nativas
de B. thuringiensis, entre as quais observaram que
trs isolados causaram mais de 75% de mortalidade
de Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae).
Zhang et al. (2010), isolaram bactrias endo-
fticas de razes, caules, folhas e sementes de menta
119
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
do Turquisto (Achnatherum inebrians), em que o
isolado Streptomyces rochei aumentou 85% a taxa
de mortalidade do pulgo do algodoeiro (Aphis gos-
sypii). Rampelotti-Ferreira et al. (2010) avaliaram a
colonizao de bactrias endofticas em plntulas
e em larvas de Spodoptera frugiperda. Nesse estu-
do, o isolado Methylobacterium mesophilicum cepa
SR1.6/6 foi marcado com gfp (protena verde fluores-
cente), que foi encontrado nas larvas que se alimen-
taram das plntulas inoculadas com essa bactria,
por meio de anlises de microscopia fluorescente.
Desta forma, pode-se afirmar que as bac-
trias endofticas atuam como agentes de controle
biolgico, e so capazes de proteger o hospedeiro
pela sntese de molculas antimicrobianas, produ-
o de siderforos para captao de ferro, compe-
tio de nutrientes com patgenos e produzindo
outras molculas que so capazes de induzir resis-
tncia sistmica induzida (ISR) na planta colonizada
(Compant et al., 2010). Alm disso, podem agir atra-
vs da produo de toxinas que atuam no controle
de insetos, podendo se tornar uma tima alternativa
para os produtores, no manejo de diversas culturas,
corroborando a reduo do uso de agroqumicos e
consequentemente, reduo da contaminao am-
biental, humana e animal por esses produtos.
Bactrias endofticas e a promoo de crescimento
de plantas
Estudos sugerem que alm de exercer me-
canismos de biocontrole, as bactrias endofticas
tambm so capazes de promover o crescimento de
plantas (Figura 4) (Bandara et al., 2006; Ting et al.,
2008; Silva et al., 2012; Hidayati et al., 2014; Ran-
gjaroen et al., 2015), que em grande parte se d
pela produo de fitohormnios como o cido indol
actico (Piromyou et al., 2011; Arun et al., 2012.),
cido abscsico, cido giberlico, citocininas (Feng
et al., 2006), fixao de nitrognio, solubilizao de
fosfato, produo de ons de amnio (Nigris et al.,
2013), mineralizao de fosfato orgnico (Jha e Ku-
mar, 2007), fornecimento de vitaminas essenciais,
aumento da captao e solubilizao de minerais,
ajuste osmtico, regulao dos estmatos e modifi-
cao da morfologia radicular, induo da produo hormnios como o cido indol actico, cido indol
de cido actico e produo de siderforos (Ryan et
al., 2008), o que torna esses agentes agronomica-
mente relevantes para fins de desenvolvimento de
biofertilizantes, sendo eles uma alternativa aos insu-
120 RAPP - Volume 24, 2016
Figura 4. Promoo de crescimento de plantas de arroz
com cinco dias de idade, em meio de cultura pobre. (A)
Tratamento controle (gua) apresentando reduo no
crescimento de plntulas de arroz. (B) Tratamento com o
isolado endoftico 209, demonstrando o potencial da bac-
tria em promover o crescimento de plntulas de arroz.
Foto: Pozzebon, 2014.
mos qumicos utilizados em grande escala em lavou-
ras agrcolas.
Micro-organismos capazes de solubilizar fos-
fato podem ser uma alternativa economicamente vi-
vel para o produtor, pois reduzem os custos com in-
sumos na lavoura. O principal mecanismo envolvido
na solubilizao de fsforo a produo e liberao
de cidos pelas bactrias, como o cido lctico, ita-
cnico, isovalrico, isobutrico e actico (Vazquez et
al., 2000; Dias et al., 2009). Gneros como Bacillus,
Pseudomonas, Enterobacter, Erwinia e Ochrobac-
trum, podem solubilizar complexos de fosfato pela
secreo de cidos orgnicos. Uma vez na forma
solvel, esses fosfatos podem ser absorvidos pela
bactria ou pela planta (Costa, 2012) e atuar na
promoo do crescimento vegetal (Babalola, 2010).
Bacillus pumilus e Acinetobacter calcoaceticus so
bactrias endofticas capazes de solubilizar fosfato
e promover o crescimento de plantas (Kang et al.,
2009; Prez-Garca et al., 2011). Estudos in vitro com
plantas de ervilha (Pisum sativum L.), realizados por
Tariq et al. (2014) demonstraram o potencial de bac-
trias endofticas em promover o crescimento de
plantas, onde seis isolados foram capazes de produ-
zir cido indol actico, dois foram capazes de fixar
nitrognio e nove solubilizaram fsforo inorgnico.
Gneros Acinetobacter, Azospirillum, Azo-
tobacter, Pseudomonas e Bacillus, produzem fito-
butrico, giberelinas, citocininas, octadecanides, e
compostos que mimetizam a ao dos jasmonatos
(Forchetti et al., 2007; Kang et al., 2009; Prez-Garca
et al., 2011). Ji et al. (2014) estudaram a promoo
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
de crescimento vegetal induzido por bactrias en-
dofticas e observaram que alguns de seus isolados
foram capazes de produzir auxina, siderforos e so-
lubilizar fosfato. Alm disso, esses autores demons-
traram que bactrias endofticas diazotrficas autc-
tones de arroz, proporcionaram maior crescimento
das plantas e acrscimo no peso seco, bem como
promoveram efeitos antagnicos contra fungos pa-
tognicos. Quecine et al. (2012) tambm verificaram
acumulao de biomassa em plantas de cana-de-
-acar tratadas com a endoftica Pantoea agglome-
rans, tanto da parte area quanto da raiz.
Bactrias promotoras de crescimento vege-
tal, como as dos gneros Pseudomonas, Bacillus, Ar-
throbacter, Enterobacter e Agrobacterium (Yuan et
al., 2010), produzem compostos indlicos, como ci-
do indol actico, que quando sintetizado e secretado
pela bactria, age como hormnio de crescimento
vegetal e induz o aumento das razes e folhas das
plantas (Babalola, 2010; Hayat et al., 2010). Burkhol-
deria vietnamiensis foi uma das primeiras espcies
desse gnero, relatada como fixadora de nitrognio.
Entretanto, outras espcies, como Burkholderia bal-
dani e Burkholderia unamae tambm so capazes
de desempenhar a funo de promotoras de cres-
cimento de plantas atravs da fixao de nitrognio
(Govindarajan et al., 2006). Gluconacetobacter, Ace-
tobacter, Azoarcus, Herbaspirillum e Methylobac-
terium so conhecidas como bactrias endofticas
capazes de fixar biologicamente o nitrognio em
plantas (Donato et al., 2005; Balachandar et al.,
2006).
Bactrias endofticas e a fitorremediao
Compostos orgnicos, liberados no ambiente
por diversas atividades humanas, podem causar s-
rios danos ao meio ambiente devido a sua toxicida-
de, natureza hidrofbica e persistncia por um longo
perodo de tempo. A presena de compostos org-
nicos, tais como hidrocarbonetos poliaromticos,
fenis, clorofenis, benzeno, herbicidas e pesticidas,
inibem o crescimento e as atividades metablicas
de micro-organismos no solo, mesmo em pequenas
concentraes (Kukla et al., 2014).
Mtodos fsicos e qumicos tradicionais para
a recuperao do solo e gua contaminados por
poluentes orgnicos so geralmente caros e destru-
tivos ao ambiente. Neste sentido, existem muitos
agentes biolgicos que remediam tais contamina-
RAPP - Volume 24, 2016
es (Esposito-Polesi, 2011), sendo que o uso de
plantas para a recuperao de ambientes poludos,
processo chamado de fitorremediao, pode ser um
modo eficiente e de baixo custo, alm de no causar
danos adicionais ao ambiente (Gerhardt et al., 2009;
Marques et al., 2011; Phillips et al., 2012).
Embora as plantas disponveis para a fitorre-
mediao tenham se adaptado a locais poludos, a
presena de poluentes orgnicos no solo geralmen-
te reduzem o desenvolvimento normal da planta e,
eventualmente, a eficcia da fitorremediao. A in-
terao das plantas com bactrias endofticas pode
superar essas limitaes quando estas bactrias fo-
rem capazes de degradar os poluentes, promover o
crescimento da planta, ou ambos (Peng et al., 2013;
Glick, 2010; Khan et al., 2013). Assim, uma das for-
mas estudadas para as plantas superarem as condi-
es adversas do solo so as associaes simbiticas
com micro-organismos, sendo um mtodo menos
oneroso e ecologicamente correto (Newman e Rey-
nolds, 2005; Postma et al., 2007; Zhang et al., 2011).
Sob o ponto de vista da fitorremediao, nos ltimos
anos, tem havido grande interesse em comunidades
endofticas, principalmente na interao de micro-
-organismos da parte area com as razes e com o
solo (Mengoni et al., 2009; Li et al., 2011).
Genes que codificam enzimas envolvidas na
degradao de hidrocarbonetos tm sido descritos
em uma ampla gama de bactrias endofticas per-
tencentes aos gneros Arthrobacter, Bacillus, Ente-
robacter, Pantoea e Pseudomonas. Alm disso, tem
sido observado que plantas que crescem em solos
contaminados por petrleo podem recrutar bact-
rias endofticas que possuem genes capazes de de-
gradar hidrocarbonetos (Andria et al., 2009; Khan et
al., 2013).
A importncia do sinergismo planta-endfito
na remoo dos poluentes orgnicos do solo e da
gua ainda subestimada. Como muitas bactrias
endofticas tem se mostrado eficazes na degradao
de poluentes, em atividades de promoo de cres-
cimento ou em ambos, um melhor conhecimento
dos mecanismos que regulam estas atividades deve
ser explorado a fim de melhorar a fitorremediao
de poluentes orgnicos presentes no solo e na gua
(Afzal et al., 2014).
Por outro lado, o papel das bactrias endof-
ticas para melhorar a fitorremediao de metais pe-
sados em solos contaminados tem sido revisado em
121
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
vrios artigos. A contaminao de metais pesados
em solos um dos maiores problemas ambientais
devido ao antropognica, sendo que excessivas
concentraes de cobre (Cu) possuem significante
risco a sade pblica e ao ecossistema (Rajkumar et
al., 2009a; Ma et al., 2011a; Sessitsch et al., 2013).
As associaes entre plantas e micro-orga-
nismos metal tolerantes aumentam a absoro de
metais e o crescimento das plantas, alm do uso si-
nrgico de plantas e micro-organismos ser favorvel
para a descontaminao de solos metlicos (Jing et
al., 2007; Glick, 2010; Ma, 2011b). Estes micro-orga-
nismos contribuem para a reduo da fitotoxicidade
atravs de mecanismos de biossoro e bioacumu-
lao, haja vista que as clulas bacterianas apresen-
tam elevada superfcie de contato e desta forma, so
capazes de absorver maior quantidade de metais pe-
sados do que os componentes inorgnicos do solo
(Ma et al., 2011b).
Estudos realizados por Zaidi et al. (2006),
Madhayian et al. (2007) e Kumar et al. (2009), re-
portaram que mecanismos de biossoro e/ou bio-
acumulao bacterianos, associados aos fatores re-
lacionados promoo de crescimento de plantas
(incluindo a atividade de ACC deaminase e fitohor-
mnios) foram responsveis por um melhor cresci-
mento das plantas em solos contaminados por me-
tais, comprovando essa teoria. Dessa forma, o uso
de micro-organismos associados s espcies vege-
tais, ajudam a promover a utilizao mais eficiente
das plantas nas prticas de fitorremediao, atravs
do aproveitamento da sua flora bacteriana natural
(Mengoni et al., 2009).
Diversos estudos revelam que as plantas hi-
peracumuladoras de metais so colonizadas simul-
taneamente por um elevado nmero de diferentes
bactrias endofticas, dentre as quais pode-se citar
as do gnero Methylobacterium, que so tolerantes
aos metais Nquel (Ni), Cdmio (Cd), Cobalto (Co),
Zinco (Zn) e Cromo (Cr) (Idris et al., 2006; Mengo-
ni et al., 2009), e as dos gneros Bacillus, Acineto-
bacter e Pantoea tolerantes a Cu (Sun et al., 2010;
Zhang et al., 2011). Alm disso, gneros como Ba-
cillus, Brevibacillus, Burkholderia, Curtobacterium,
Herbaspirillum, Klebsiella, Leifsonia, Methylobacte-
rium, Microbacterium, Micrococcus, Paenibacillus,
Pseudomonas, Serratia e Staphylococcus tambm
apresentaram genes responsveis pela resistncia a
metais pesados (Rajkumar et al., 2009a; 2009b).
122 RAPP - Volume 24, 2016
Bactrias endofticas, portanto, tem se cons-
titudo em uma fonte mais confivel de biocenose
natural do que rizobactrias na degradao de me-
tais pesados, devido sua ntima associao com as
plantas. A explorao das interaes bactria-plan-
ta-metal pode resultar na promoo do estabeleci-
mento, crescimento e desenvolvimento da planta
e alm disso, desempenham um papel significativo
nas aplicaes sustentveis de baixo custo de fitor-
remediao de metais em solos contaminados. No
entanto, uma compreenso dos mecanismos que
permitem que bactrias endofticas interajam com
as plantas hospedeiras em solos contaminados com
metais pesados so essenciais para otimizar as apli-
caes biotecnolgicas das eficientes relaes plan-
ta-bactria (Ma et al., 2016).
Bactrias endofticas perspectivas para o futuro
Evidencia-se que o uso de bactrias endofti-
cas na agricultura e em outras atividades econmi-
cas pode ser melhorado pela compreenso desses
micro-organismos com seus hospedeiros. fato que
as possibilidades de aplicaes de agentes endofti-
cos tem crescido cada vez mais, pois estudos com
essa temtica tem se intensificado nos ltimos anos.
Inicialmente o grande interesse com relao ao po-
tencial de bactrias endofticas no controle biolgico
e/ou promoo de crescimento de plantas alavancou
os estudos, pois desde o princpio vislumbrava-se al-
ternativas ecologicamente corretas, principalmente
com potencial para a reduo da demanda contnua
de insumos qumicos e agrotxicos necessrios atu-
almente para manter a produtividade das lavouras,
reduzindo assim, os custos de produo para o pro-
dutor rural.
Este aumento na gama de possibilidades de
utilizao das bactrias endofticas se deve muito ao
desenvolvimento de tcnicas modernas de estudo,
principalmente as tcnicas de deteco e identifica-
o de micro-organismos independentes de cultivo,
com base no contedo gentico contido no DNA
ou RNA dos mesmos. Como muitos procariotos de
amostras ambientais so recalcitrantes, ou seja, no
podem ser isolados ou cultivados em condies de
laboratrio, os mtodos moleculares independen-
tes de cultivo tm sido amplamente utilizados para
caracterizar comunidades microbianas in situ. Para
a identificao de bactrias, geralmente se tem utili-
zado a sequncia do gene que codifica a poro 16S
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
do rRNA; porm para estudos de caracterizao de
comunidades microbianas com capacidades fisiol-
gicas especializadas, se tem utilizado a comparao
de sequncias de uma srie de genes que codificam
protenas especficas (Ikeda, 2010; Reinhold-Hurek,
2011).
Alm do controle biolgico e promoo de
crescimento de plantas, outras possibilidades de
utilizao das bactrias endofticas tem ganhado im-
portncia nos ltimos anos. Muitas delas possuem
metabolismo capaz de degradar as mais variadas
substncias, sendo que seu uso na remediao de
ambientes contaminados merece uma ateno es-
pecial, devido importncia para a recuperao de
solos degradados, como foi enfatizado anteriormen-
te nesta reviso. Em um planeta saturado onde sus-
tentabilidade a palavra-chave para um desenvol-
vimento que no comprometa os recursos naturais,
principalmente gua e solo, as bactrias endofticas
surgem, portanto, como interessante alternativa.
No campo da biotecnologia, podemos sa-
lientar que as bactrias, juntamente com os fungos,
tm sido bastante utilizadas como produtoras de
diferentes substncias de interesse econmico, tais
como enzimas, antibiticos, vitaminas, aminocidos
e esteroides (Santos e Varavallo, 2011), que podem
ser explorados na agricultura, na medicina e na in-
dstria (Tejesvi et al., 2007). Um exemplo disto o
trabalho desenvolvido por Carrim et al. (2006), que
selecionaram enzimas de interesse biotecnolgico a
partir de bactrias endofticas isoladas de Jacaran-
da decurrens Cham. Dez espcies de bactrias foram
isoladas e identificadas; todas apresentaram ativida-
de enzimtica, com maior predominncia de ativida-
de proteoltica e amiloltica, seguidas das atividades
lipoltica e estersica. Essas enzimas, produzidas por
diversos microrganismos, apresentam potencial de
aplicabilidade em diversos campos, como no pro-
cessamento de alimentos, na fabricao de deter-
gentes, tecidos, produtos farmacuticos, na terapia
mdica e na biologia molecular (Carrim et al., 2006).
Portanto, esta apenas a ponta do grande
iceberg, que representa os estudos a respeito das
bactrias endofticas. Evidncias sugerem que bact-
rias endofticas tem um elevado potencial na produ-
o de uma vasta gama de metablitos, muitos deles
ainda no descritos. No entanto, a concentrao e as
circunstncias em que estes metablitos so produ-
zidos ainda no so bem compreendidas, mas a revo-
RAPP - Volume 24, 2016
luo genmica juntamente com o desenvolvimento
constante de tcnicas analticas certamente vai ace-
lerar a descoberta destes metablitos e possibilitar
a deteco destes em circunstncias especficas sob
condies naturais (Brader et al., 2014). Alm disso,
estudos sobre os mecanismos pelos quais as bact-
rias endofticas se estabelecem em tecidos vegetais
em nmero elevado, e como eles contornam as res-
postas de defesa do hospedeiro tambm esto pro-
gredindo. Combinaes de estudos sobre a comuni-
dade bacteriana, anlises mutacionais de bactrias
e de plantas hospedeiras, anlises comparativas do
genoma e metagenoma facilitaro a evoluo neste
fascinante campo de pesquisa.
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129
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)

EFEITO DAS MUDANAS CLIMTICAS NO

SISTEMA DE DEFESA DAS PLANTAS
Mathias Ferrari Rockenbach1; Mateus Brusco de Freitas1
e Marciel Joo Stadnik1

RESUMO
As mudanas climticas previstas para este sculo, relacionadas direta-
mente com o aquecimento atmosfrico global, consistem em um dos maiores
desafios na histria da agricultura. Nesse contexto, incrementos nos nveis de
gases de efeito estufa tais como o dixido de carbono (CO2) e oznio (O3), so
capazes de provocar aumentos significativos na temperatura global e na radia-
o solar, que podem afetar os sistemas de defesa das plantas tornando-as mais
suscetveis ao ataque por patgenos. Neste captulo, abordam-se os principais
sistemas de defesa das plantas e como eles so afetados pela exposio a nveis
elevados de CO2, O3 e radiao ultravioleta, assim como por altas temperaturas.
Por fim, discute-se tambm o efeito direto que as mudanas climticas podem
ter sobre os patgenos e as perspectivas futuras dentro dos cenrios ambientais
previstos para as prximas dcadas.

Introduo condies ambientais. Um advento inesperado na

Durante a sua evoluo, as plantas vm se
adaptando gradativamente a novos ambientes e
foram desenvolvendo sistemas de defesa contra di-
ferentes tipos de estresses biticos e abiticos. Isso
tem permitido a sua sobrevivncia aos constantes
desafios impostos por patgenos das mais variadas
naturezas, bem como a oscilaes dos fatores am-
bientais ao longo dos ltimos 450 - 500 milhes de
anos (Raven & Edwards, 2001; Bennici, 2008; Rubins-
tein et al., 2010). Neste cenrio, as plantas terrestres
tiveram que desenvolver diversas adaptaes mor-
folgicas/estruturais, assim como mecanismos fisio-
lgicos, que as tm possibilitado enfrentar constan-
temente a espcies patognicas (Thaler et al., 2012).
Em conjunto, estas estratgias conformam sistemas
de defesa bem especializados capazes de atuar fren-
te ao ataque por patgenos.
Os sistemas de defesa das plantas podem,
contudo, ser afetados por alteraes drsticas nas
1
Laboratrio de Fitopatologia, Centro de Cincias Agrrias, Universidade Federal de Santa Catarina, Rodovia Admar Gonzaga 1346,
CEP 88034-001, Itacorubi, Florianpolis, Brasil.
evoluo das espcies aquele relacionado inter-
ferncia do homem no meio ambiente. Neste con-
texto, o clima vem sofrendo mudanas significativas
desde os tempos pr-industriais, devido principal-
mente s atividades antrpicas que geram aumen-
tos dos chamados gases de efeito estufa (dixido de
carbono CO2 e oznio O3). Estas mudanas vm
contribuindo diretamente para o aumento da tem-
peratura global, causando diversos impactos climti-
cos sobre os oceanos e continentes. De fato, as pre-
dies para o futuro no so alentadoras na medida
em que todos os modelos preveem para os prximos
cem anos, aumentos nos nveis dos gases de efeito
estufa e da temperatura global (Araujo et al., 2005;
Pachauri & Reisinger, 2007). Assim, caso no sejam
tomadas as medidas necessrias, estas mudanas
podero trazer futuramente consequncias drsti-
cas para a produo agrcola mundial (Howden et al.,
2007).

130 RAPP - Volume 24, 2016

 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)

Este captulo descreve os principais siste-
mas de defesa das plantas e como os incrementos
na concentrao ambiental dos principais gases de
efeito estufa, CO2 e O3, podem afetar as respostas
dos hospedeiros ao ataque por patgenos. Tambm
sero expostos os principais resultados associados
s interferncias que a temperatura e radiao UV
podem exercer sobre tais sistemas de defesa.
Sistema de defesa das plantas
A ativao dos sistemas de defesa nas plan-
tas em resposta ao ataque patognico determina-
da pela especificidade da interao patgeno-hos-
pedeiro. De forma geral, existem classificados dois
tipos de sistema de defesa em plantas. O primeiro,
denominado sistema de defesa basal ou inato,
ativado pela interao entre protenas receptoras
(PRRs) expressadas pelo hospedeiro, e padres mo-
leculares associados aos patgenos ou micrbios
(PAMPs ou MAMPs, respectivamente) (Jones & Dan-
gl, 2006). As interaes PAMPs/MAMPs PRRs in-
duzem uma srie de reaes a nvel molecular nas
clulas do hospedeiro que levam rapidamente a um
estado de resistncia basal, conhecida como imuni-
dade disparada por PAMPs (PTI PAMPS-triggered
immunity) (Ingle et al., 2006). O segundo sistema de
defesa definido como sistema de defesa gene a
gene ou mediado por genes de resistncia (R), e
ativado pelo reconhecimento especfico entre efeto-
res de avirulncia liberados pelos patgenos e pro-
tenas do hospedeiro conhecidas como protenas R
(codificadas pelos genes R). As respostas mediadas
pelas interaes entre efetores de avirulncia e as
protenas R induzem no hospedeiro um estado de
resistncia conhecido como imunidade disparada
por efetores (ETI Effector-triggered immunity) (In-
gle et al.,2006; Jones & Dangl, 2006) (Figura 1).
Vrios mecanismos e componentes molecu-
lares envolvidos no disparo da PTI e ETI tm sido es-
clarecidos nos ltimos anos. Os receptores proteicos
de reconhecimento de PAMPs/MAMPs so classifi-
cados como protenas transmembrana do tipo qui-
nase (RLKs- receptors-like kinases). Estas protenas
esto constitudas por um domnio extracelular de
reconhecimento aos PAMPs/MAMPs, um domnio
transmembrana, e um domnio quinase intracelular
(Greef et al., 2012). Um exemplo bem estudado des-
te tipo de receptores o receptor de flagelina (flg22)
FLS2 (Flagellin sensing2) (Ali & Reddy, 2008). FLS2
capaz de interagir com vrias protenas quinases da

Figura 1. Sistemas de defesa disparados pelo ataque de patgenos em plantas. A interao PAMPs/MAMPs-protenas
RLKs promove a expresso de genes e protenas relacionadas patogenicidade (PRs), induzindo um estado de resis-
tncia basal denominada imunidade disparada por PAMPs (PTI) (1). Efetores liberados pelos patgenos durante a PTI
podem atuar sobre alvos especficos do hospedeiro, induzindo um estado de suscetibilidade disparada por efetores
(ETS) (2). O reconhecimento especfico dos efetores patognicos por parte das protenas R, expressas no hospedeiro,
capaz de reverter a ETS e induzir resistncia sistmica denominada imunidade disparada por efetores (ETI) (3). A ETI
est geralmente associada reao de hipersensibilidade (RH), morte celular programada (MCP) e resistncia sistmica
adquirida (SAR).

RAPP - Volume 24, 2016 131

 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
famlia SERK (Somatic embriogenesis receptor kina-
se) tais como SERK1, SERK2, SERK5, BKK e SERK3/
BAK1 (BR1-associated kinase 1) (Ali & Reddy, 2008).
O complexo FLS2-BAK1 capaz de fosforilar vrias
protenas quinases, tais como BIK1, BIR1 e KAPP, in-
duzindo uma cascata de fosforilaes intracelulares
que promovem a expresso de genes e protenas
associados PTI (Lu et al., 2010; Roux et al., 2011).
Outros exemplos so os receptores EFR (EF-Tu re-
ceptor), PEPR1 (Pep1 receptor 1), CERK1 (Chitin eli-
citor receptor kinase 1, protena receptora da famlia
LysM), e Xa21 (Wan et al., 2008; Lee et al., 2009; Pos-
tel et al., 2010; Roux et al., 2011). Entretanto, vrios
componentes moleculares das vias de sinalizao
aparentam atuar em vias comuns a diferentes
receptores de reconhecimento de PAMPs/MAMPs
(Greef et al., 2012). Estas interaes entre diferentes
vias de sinalizaes determinam, em ltima instn-
cia, a especificidade das respostas a patgenos bio-
trficos ou necrotficos (Roux et al., 2011).
Os eventos iniciais da PTI esto associados a
vrias respostas celulares e moleculares no hospe-
deiro. Estas respostas incluem variaes na permea-
bilidade inica da membrana plasmtica, a produo
de espcies reativas de oxignio (EROs), a produo
de xido ntrico (ON), a sntese de etileno (ET), ci-
do saliclico (AS) e/ou cido jasmnico (AJ), e a ex-
presso de genes e protenas R (Ingle et al., 2006).
Incrementos na permeabilidade da membrana plas-
mtica e dos nveis intracelulares do on Ca2+ tm
sido associados ativao das vias de sinalizaes
mediadas pelas MAPKs (Mitogen-activated protein
kinases), produo de EROs dependentes de Ca2+
e s reorganizaes do citoesqueleto durante o
disparo da Morte Celular Programada (MCP), (Ku-
rusuet al., 2005, 2011; Higaki et al., 2011). A pro-
duo apoplstica de EROs (superxido e perxido
de hidrognio) produzido pelas NADPH-oxidases da
membrana plasmtica (NOX1) e peroxidases do tipo
III da parede celular (PRX33 e PRX34), assim como
o EROs produzido por outras organelas (mitocn-
drias, cloroplastos e peroxissomos) so essenciais
para o disparo da reao de hipersensibilidade (RH)
e da resistncia sistmica adquirida (SAR) (Nanda et
al., 2010; Torres, 2010; OBrien et al., 2012). PAMPs
constitudos por lipopolissacardeos (LPS) so capa-
zes de induzir a produo e acmulo de ON, o qual
tambm tm sido associado ao disparo da RH e ex-
presso de genes R (Zeidler et al., 2004; Ingle et al.,
132 RAPP - Volume 24, 2016
2006). O AS, um composto fenlico, atua na expres-
so de vrias protenas relacionadas patogenici-
dade (protenas PR), tais como enzimas detoxifican-
tes e antioxidantes como a glutationa-S-transferase
(GST) e a glicosil-transferases (GTs) (Nawrath & Me-
traux, 1999; Edwards et al., 2000; Wang et al., 2002).
A RH e o estabelecimento de estados de resistncia
a nvel sistmico tambm envolvem acmulos de AS,
tanto a nvel local quanto a nvel distal ao stio de
infeco (Heath, 2000). O AS tambm possui funes
regulatrias relacionadas com a induo ou inibio
da sntese de outros compostos, como por exemplo,
promovendo a sntese de ET e inibindo a sntese do
AJ (Vlot et al., 2009).
Vrias das sinalizaes moleculares associa-
das PTI parecem ser comuns ETI, o que demons-
tra a existncia de uma regulao mutua entre o
sistema de defesa inato e o mediado por genes R.
Mesmo assim, a ETI disparada posteriormente
PTI devido a um reconhecimento especfico entre as
protenas R e efetores patognicos especficos, sen-
do estes liberados pelos patgenos durante a colo-
nizao do hospedeiro (Howden & Huitema, 2012).
Existem identificados e classificados vrios tipos de
efetores patognicos, sendo um dos mais conheci-
dos o sistema de secreo do tipo III (TTSS). Os efe-
tores patognicos so capazes de atuar sobre alvos
(protenas) especficos do hospedeiro de forma dire-
ta ou indireta, interferindo em vias de sinalizaes
(p. ex. MAPKs) e induzindo modificaes sobre esses
alvos que promovem um estado de suscetibilidade
disparada por efetores (ETS) (Figura 1). No caso em
que certos efetores sejam especificamente reco-
nhecidos por protenas R, estas induzem a nvel no
hospedeiro um estado de imunidade disparado por
efetores (ETI) (Howden & Huitema, 2012).
Os principais fatores moleculares envolvidos
no disparo da ETI, tais como os genes e as protenas
R, vm sendo amplamente estudados nas plantas. Os
genes R so classificados segundo as caractersticas
estruturais das protenas R para os quais codificam
(Richter & Ronald, 2000; Lehman, 2002). Em geral,
as protenas R atuam a nvel citoplasmtico e so
constitudas basicamente por um domnio N-termi-
nal NBS (Nucleotide binding site) de unio a trifos-
fato de adenosina (ATP) ou trifosfato de guanosina
(GTP) e, um domnio C-terminal LRR (Leucine rich re-
peats) rico em leucinas. Sua classificao baseada
pela homologia estrutural do domnio NBS com pro-
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
tenas do sistema imune de vertebrado, tais como
protenas do tipo Toll e Interleucina-1. Desta forma,
o domnio NBS pode ser classificado como do tipo
TIR (pelo domnio tipo Toll e IL-1), ou CC (Coiled coil
ou espiral enrolada) (Tameling & Takken, 2008) (Fi-
gura 1). O domnio N-terminal das protenas R possui
funes de reconhecimento de efetores patognicos
ou protenas do hospedeiro sujeitas ao ataque por
tais efetores. Em outros casos este domnio possui
motivos de unio ao DNA, atuando como regulado-
res da transcrio gnica.
Durante a ETI frequente observar o estabe-
lecimento de um estado de resistncia a nvel sist-
mico no hospedeiro conhecido como SAR. Este tipo
de resistncia opera mais tardiamente em relao
PTI, podendo estar associada RH e MCP (Coll et al.,
2011; Higaki et al., 2011). Estas respostas envolvem a
morte celular no stio de infeco poucas horas aps
o contato com o patgeno (durante a PTI), poden-
do ocorrer desde uma nica clula a extensas reas
necrticas que limitam a colonizao dos patgenos
(Holub et al., 1994; Lam et al., 2001). Este fato faz
com que este tipo de defesa seja efetivo principal-
mente contra patgenos biotrficos ou hemibiotr-
ficos, mas no tanto para os necrotrficos (Belkhadir
et al., 2004; Glazebrook, 2005; Jones & Dangl, 2006).
A resistncia sistmica tambm pode ser induzida
por indutores qumicos ou at mesmo por espcies
simbiontes, sendo conhecida nestes casos como re-
sistncia sistmica induzida (ISR).
Em consequncia da ativao das complexas
vias de sinalizao dos sistemas de defesa das plan-
tas, so disparados vrios mecanismos que, quando
eficientes, conferem planta resistncia completa
a determinados patgenos. Apesar de estarem inti-
mamente relacionados, os mecanismos de defesa de
plantas podem ser classificados para fins didticos
como estruturais ou bioqumicos (Agrios, 2005). Os
mecanismos de defesa estruturais podem ser obser-
vados a nvel histolgico ou celular e envolvem es-
truturas que podem estar presentes nas plantas at
mesmo antes do ataque por patgenos (p. ex. plos,
tricomas, espinhos e cutcula), ou serem induzidas
por ocasio do ataque (p. ex. papilas, caloses, tilo-
ses, halos, lignificaes, camadas de cortia e cama-
das de absciso) (Agrios, 2005; Taiz & Sieger, 2009).
Por outro lado, os mecanismos de defesa bioqumi-
cos envolvem protenas e molculas do metabolis-
mo primrio e secundrio com atividades biolgicas
RAPP - Volume 24, 2016
especficas ou at mesmo txicas aos patgenos
(Bowles, 1990). Enzimas quitinases e glucanases, so
protenas PR expressas especificamente pelas plan-
tas aps o ataque por patgenos. As quitinases so
enzimas hidrolticas capazes de degradar ligaes gli-
cosdicas da molcula de quitina, o principal compo-
nente da parede celular fngica. As glucanases so
enzimas hidrolticas de polmeros de glicose unidos
por ligaes alfa ou beta (e. ex. celulose), as quais
so degradadas pelas enzimas alfa e beta-glucana-
ses, respectivamente. Os produtos hidrolisados por
ambas as enzimas podem atuar como elicitores da
PTI e RH (Agrios, 2005). Alguns compostos relacio-
nados resistncia podem ser sintetizados constitu-
tivamente pelas plantas (p. ex. compostos fenlicos,
alcaloides, lectinas e inibidores proticos) ou ainda
terem sua produo elevada aps o ataque por pat-
genos (p. ex. ET, AS e AJ) (Collinge et al., 1993; Knud-
sen et al., 1993; Pichersky et al., 2002; Chehab et al.,
2008; Taiz & Sieger, 2009).
Efeito do CO2 na defesa das plantas
A elevao na concentrao atmosfrica de
CO2 pode induzir alteraes metablicas nas plantas
capazes de interferir nas respostas ao ataque por pa-
tgenos (Ainsworth et al., 2002; Chakraborty & Dat-
ta, 2003; Kobayashi et al., 2006, Yez-Lpez et al.,
2012). Em geral, os incrementos na concentrao de
CO2 aumentam a resistncia de vrios hospedeiros
vegetais a diversos patgenos, reduzindo a incidn-
cia ou severidade de certas doenas (Hibberd et al.,
1996; Chakraborty et al., 2000; Jwa & Walling, 2001;
Karnosky et al., 2002; Chakraborty & Datta, 2003;
Runion, 2003; Pangga et al., 2004; McElrone et al.,
2005; Kobayashi et al., 2006; Strengborn & Reich,
2006; McElrone et al., 2010; Runion et al., 2010; Shin
& Yun, 2010; Ghini et al., 2014; Li et al., 2015) (Tabela
1).
Por exemplo, plantas de bordo vermelho
(Acer rubrum) expostas a uma concentrao de 200
ppm maior que as concentraes atmosfricas atu-
ais de CO2 (340-350 ppm), apresentaram menor inci-
dncia e severidade de mancha foliar causadas por
Phyllosticta minima. Nessas condies, a incidncia e
severidade da mancha foliar foram reduzidas aproxi-
madamente em 15% e 27%, respectivamente. Alm
disso, ocorreu uma reduo na condutncia estoma-
tal na ordem de 21% a 36%. Desta forma, a reduo
da doena poderia estar associada com a reduo
133
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
na condutncia estomatal e alteraes na compo-
sio qumica das folhas provocadas pelo aumento
na concentrao ambiental de CO2. destacvel que
essas plantas tambm tiveram um aumento de 15%
nos compostos fenlicos totais, 14% nos nveis de ta-
ninos e 20% da proporo C:N (carbono:nitrognio)
(McElrone et al., 2005). Curiosamente, a reduo da
abertura e condutncia estomatal tambm foram
observadas em plantas de tomate (Solanum lycoper-
sicum) cultivadas em ambiente com 800 ppm de CO2.
Nessas condies, essas plantas mostraram-se mais
resistentes infeco por Pseudomonas syringae pv.
tomato (Li et al., 2015). Plantas de Solidago rigida
expostas a concentraes de aproximadamente 900
ppm de CO2 tiveram redues de at 57% na incidn-
cia de manchas foliares provocadas por espcies de
Cercospora e Septoria (Strengborn & Reich, 2006).
Plantas de pinheiro (Pinus taeda) e carvalho (Quercus
robur) expostas a 700 ppm de CO2, inoculadas com
Fusarium circinatum e Cronartium quercum, apre-
sentaram redues na incidncia de cancro e ferru-
gem, respectivamente (Runion et al., 2010). Plantas
de eucalipto cultivadas em concentraes elevadas
de CO2 (508 a 700 ppm) e inoculadas com Puccinia
psidii, apresentaram redues no nmero de pstu-
las de ferrugem por folha, uredsporos por pstula
e rea abaixo da curva de progresso da doena (AA-
CPD) (Ghini et al., 2014). Alm disso, o crescimento
destas plantas foi 23% maior em comparao ao das
plantas em concentraes de CO2 atuais.
Incrementos nas concentraes de CO2 tam-
bm podem afetar a fisiologia, germinao dos es-
poros ou a esporulao dos patgenos, reduzindo a
incidncia de doena em determinados hospedei-
ros. Por exemplo, em plantas de cevada submetidas
a 350 e 700 ppm de CO2 no foram observadas dife-
renas na germinao de condios de Blumeria gra-
minis. Contudo, o nmero de condios que progrediu
a formar colnias foi menor a 700 ppm do que 350
ppm de CO2 (Hibberd et al., 1996). A exposio de
plantas de Stylosanthes scabra a 700 ppm de CO2 re-
duziu a severidade de antracnose causada por Colle-
totrichum gloeosporioides. Tal reduo parece estar
associada inibio da germinao conidial, assim
como o aumento do perodo de incubao e redu-
o da agressividade do patgeno (Chakraborty et
al., 2000). Em outro trabalho, o perodo de latncia
(tempo de esporulao) dos patgenos fngicos Cro-
134 RAPP - Volume 24, 2016
nartium quercum e Fusarium circinatum aumentou
em mudas de carvalho expostas a 700 ppm de CO2
(Runion et al., 2010).
Vrios trabalhos vm fornecendo evidncias
de variaes bioqumicas que podem ocorrer em
plantas expostas a concentraes de CO2 superiores
s ambientais (McElrone et al., 2005; Plessl et al.,
2005; Matros et al., 2006; Li et al., 2008). Em folhas
e razes de plantas de fumo expostas a 1000 ppm de
CO2 foram observados acmulos de fenilpropani-
des e incrementos na atividade da enzima fenilala-
nina amnia-liase (FAL) (Matros et al., 2006). No en-
tanto, no foram detectadas diferenas nos nveis de
AS e protenas PR nessas mesmas condies. Estas
plantas apresentaram maior resistncia ao virus Y da
batata, que foi relacionado com o incremento nos
nveis de fenilpropanides induzido por essas con-
dies ambientais (Matros et al., 2006). Por outro
lado, plantas de cevada cultivadas em 700 ppm de
CO2 mostraram incrementos na proporo C:N e nos
teores de amido, assim como maior resistncia ao
patgeno Drechslera teres (Sacc.) Shoemaker (Pless-
let al., 2005).
Experimentos realizados em OTC (Open-top
chamber) e FACE (Free-air CO2 enrichment) combi-
nando concentraes de CO2 e O3 tm permitido es-
tudar os efeitos simultneos destes dois principais
gases de efeito estufa. Por exemplo, plantas de trigo
crescidas a 550 ppm de CO2 e 80 ppb de O3 sinteti-
zaram mais flavonas e compostos fenlicos totais na
sua maturao. Por outro lado, durante estgios fe-
nolgicos iniciais essas plantas apresentaram nveis
menores de flavonas em relao s plantas cultiva-
das sob concentrao ambiental de CO2 e O3 (Li et
al., 2008). Em outro experimento, observou-se que
plantas de soja submetidas a 550 ppm de CO2 e 66
ppb de O3 apresentaram redues entre 33% e 66%
na severidade de doena provocada por mldio. Con-
tudo, essas plantas tiveram um aumento na severi-
dade de septoriose (Septoria glycines) quando foram
sometidas s mesmas concentraes de CO2 e O3
(Eastburn et al., 2010). Plantas de batata (Solanum
tuberosum) expostas a 700 ppm de CO2 e duas vezes
a concentrao ambiental de O3 exibiram maior re-
sistncia requeima (Phytophtora infestans). Nessas
plantas as atividades de enzimas -1,3 glucanases e
o contedo de acares solveis foram significativa-
mente maiores (Plessl et al., 2007) (Tabela 1).
 Tabela 1. Resumo dos efeitos metablicos em diferentes patossistemas e hospedeiros vegetais em resposta ao aumento da temperatura ambiental, dos principais gases
de efeito estufa (CO2 e O3) e da radiao ultravioleta.
Estresse Patossistema ou Hospedeiro
Acer rubrum / Hphyllosticta minima
Solidago rigida / Cercospora sp.
Nicotiana tabacum / Vrus Y da batata (PVY)
Hordeum vulgare / Drechslera teres
CO2
Solanum tuberosum / Phytophtora infestans
Eucalyptus sp. / Puccinia psidii
Solanum lycopersicum / Pseudomonas syringae pv. tomato
Solanum lycopersicum / Botrytis cinerea
Triticum aestivum / Puccinia recondita
Triticum aestivum / Erysiphae graminis
Triticum aestivum / Septoria nodarum
Triticum aestivum/ Bipolaris sorokiniana
O3 Picea abies / Rhizosphaera kalkhoffi
Nicotiana tabacum
RAPP - Volume 24, 2016
Petroselinum crispum
Lens culinaris
Hordeum vulgare / Blumeria graminis
Hordeum vulgare / Bipolaris sorokiniana
Arabidopsis thaliana / Pseudomonas syringae
Temperatura
Solanum lycopersicum / Cladosporium fulvum
Nicotiana tabacum / TMV
Brassica oleracea
Radiao UV Arabidopsis thaliana / Hyaloperonospora parasitica
Arabidopsis thaliana / Botrytis cinerea
135
Efeitos no hospedeiro Referncia
Reduo da abertura dos estmatos, aumentos nos nveis de compostos MacElrone et al., 2005.
fenlicos, taninos e fitoalexinas. Aumento da resistncia.
Reduo nos nveis de nitrognio nos tecidos. Aumento da resistncia. Strengborn & Reich, 2006.
Aumento nos nveis de fenilpropanides. Aumento da resistncia. Matros et al., 2005.
Aumento dos teores de amido e diminuio dos nveis de protenas. Plessl et al., 2005.
Aumento da resistncia.
Aumento na atividade de -1,3-glucanase e dos nveis foliares de Plessel et al., 2007.
acares solveis. Aumento da resistncia.
Reduo no nmero de pstulas por folha, esporos por pstula e Ghini et al., 2014.
AACPD. Aumento da resistncia.
Reduo da abertura e condutncia estomatal. Aumento da resistncia. Li et al., 2015.
Inibio da expresso de genes PR e de genes relacionados com a Tzortzakis et a., 2011.
transduo de sinais. Aumento da resistncia.
Aumento de injrias provocadas por O3. Aumento da resistncia. von Tiedeman & Firsching, 2000.
Senescncia foliar prematura, diminuio dos nveis de clorofila e
von Tiedeman et al., 1991.
carotenoides. Aumento da suscetibilidade.
Induo da expresso de enzimas envolvidas na sntese da lignina. Galliano et al., 1993.
Induo da expresso de enzimas -1,3-glucanses e quitinase. Ernst et al., 1992.
Induo da expresso de enzimas envolvidas na sntese de composto Pasqualini et al., 2003.
fenlicos. Deposio de calose.
Induo da expresso de genes R. Eckey-Kaltenbach et al., 1997.
Aumento nos nveis de compostos fenlicos. Eckey-Kaltenbach et al., 1994.
Induo da expresso de enzimas lipoxigenase. Maccarone et al., 1997.
Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
Aumento da resistncia. Mikkelsen et al., 2015.
Aumento da suscetibilidade. Mikkelsen et al., 2015.
Reduo da resistncia mediada por genes R Wang et al., 2009.
Aumento da resistncia em plantas mutantes no gene SNC1 Zhu et al., 2010.
Inibio da expresso de genes associados reao de de Jong et al., 2002.
hipersensibilidade.
Inibio da expresso de genes R e do acmulo de cido saliclico. Zhu et al., 2010
Induo da expresso de genes PR e sntese de fitoalexinas, Mewis et al., 2012.
flavonides e terpenides.
Aumento da resistncia. Kunz et al., 2008.
Aumento da resistncia. Demkura & Ballar, 2012.
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
Efeito do O3
Plantas podem responder de modo dife-
rente ao ataque por patgenos quando so expos-
tas a concentraes elevadas de O3 de forma isola-
da, ou em conjunto com CO2. Vrios trabalhos tm
demonstrado que a exposio a nveis de O3 superio-
res aos atuais (oscilantes entre 20 60 ppb) pode afe-
tar a fisiologia e os mecanismos de defesa ativados
pelas plantas em resposta ao ataque por patgenos
(Rosemann et al., 1991; Ernst et al., 1992; Eckey-Kal-
tenbach et al., 1994; Ernst et al., 1996; Sanderman,
1996; Eckey-Kaltenbach et al., 1997; Pell et al., 1997;
Sharma et al., 1997; Sanderman, 1998; Zinser et al.,
1998; Tiedemann & Firsching, 2000; Mikkelsen et al.,
2015).
Por exemplo, plantas de trigo (Triticum aesti-
vum L cv. Turbo) expostas a concentraes entre 61-
62 ppb de O3 durante uma hora diria por 4 meses
e logo inoculadas com Puccinia recondita f.sp. tritici,
apresentaram uma forte inibio da ferrugem foliar
provocada por esse patgeno (Tiedemann & Firs-
ching, 2000). Essas plantas apresentaram, contudo,
leses necrticas de maneira antecipada (entre 2 a
4 semanas) em relao a plantas expostas a O3, mas
no inoculadas. A formao de biomassa, nmero
de gros por plantas e a produo de gros tambm
foram reduzidos nas plantas tratadas com O3 e inocu-
ladas com P. recondita (Von Tiedemann & Firsching,
2000). Por outro lado, o cultivo de plantas de ceva-
da (Hordeum vulgare) em concentraes elevadas
de O3 (60-90 ppb) reduziu em 50% a infeco pelo
odio (Blumeria graminis) porm, incrementou em
130% os sintomas da mancha marrom causados por
Bipolaris sorokiniana (Mikkelsenen et al., 2015). Em
frutos de tomate (S. lycopersicum) expostos durante
6 dias a 50 ppb de O3 e posteriormente inoculados
com Botrytis cinerea, houve reduo no desenvolvi-
mento de leses provocadas por esse patgeno. Os
mesmos frutos apresentaram inibio da expresso
de genes PR codificantes para defensinas, enzimas
quitinases e -glucanases, associados resistncia
(Tzortzakis et al., 2011).
Vrias molculas de fitoalexinas tm sido de-
tectada em hospedeiros vegetais aps a exposio a
elevadas concentraes ambientais de O3. Por exem-
plo, plantas de pinheiro (Pinus sylvestris L.) submeti-
das a 200 ppb de O3 durante 4 horas apresentaram
uma maior sntese de estilbenos (pinosilvina- PS e
pinosilvina 3-metil ter PSM) e concomitante,
136 RAPP - Volume 24, 2016
maior atividade da enzima estilbeno-sintase (Rose-
mann et al.,1991). Neste caso, enzimas que catali-
zam mesmos substratos que a estilbeno-sintase, tais
como a FAL (envolvida na biossntese de compostos
fenlicos) e chalcona-sintase (CHS - envolvida na bio-
sntesse de flavonoides), apresentaram incrementos
de at duas vezes em suas atividades enzimticas
(Rosemann et al.,1991). Plantas de fumo sensveis a
O3 (Nicotina tabacum L. cv. Bel W3) expostas a 150
ppb desse gs durante 5 horas, apresentaram um
pico nos nveis de compostos fenlicos s 10 horas
aps o tratamento, bem como maior expresso dos
genes codificantes para as enzimas FAL-a e FAL-b,
associado a maior atividadede FAL (Pasqualini et al.,
2003). Estas plantas desencadearam uma exploso
oxidativa com uma acumulao mxima de perxido
de hidrognio (H2O2) s 12 horas e desenvolveram
injrias visveis semelhantes quelas desenvolvidas
durante a RH, entre 48 e 72 horas aps o tratamento
com 150 ppb de O3 (Pasqualini et al., 2003).
Em plantas de salsa (Petroselinum crispum
L.) expostas a uma concentrao de 200 ppb de O3
durante 10 horas, foram encontrados maiores nveis
de glucosdeos flavona e furanocumarinas aps 12
e 24 horas aps a exposio ao O3, respectivamente
(Eckey-Kaltenbach et al., 1994). O acmulo mximo
dos transcritos codificantes para as enzimas FAL, CH,
e XMT (S-adenosil-metionina:xantotoxol-O-metil-
transferase envolvida na biossntese de furanocu-
marinas) ocorreu 3 horas aps a exposio a O3, en-
quanto que os picos na atividade enzimtica destas
enzimas foram detectados aps 12 horas de exposi-
o ao gs. Em casos como este, onde so induzidas
duas vias independentes relacionadas defesa, o O3
tem sido denominado como um indutor cruzado
(Eckey-Kaltenbach et al., 1994). Em plantas de es-
pruce-da-Noruega (Picea abies L.) tratadas com 600
ppb durante 8 horas, foram detectados incrementos
de at 3 vezes nos nveis de transcritos codificantes
para a enzima cinamil-lcool desidrogenase (CAD -
envolvida na biossntese da lignina), em relao a
plantas expostas a concentraes ambientais de O3
(Galliano et al., 1993). Neste caso, os nveis mximos
de transcritos e atividade enzimtica para a enzima
CAD foram atingidos aos 17 dias aps o tratamento
com O3 (Galliano et al., 1993).
Outra resposta tpica observada em plantas
expostas a elevadas concentraes de O3 a o au-
mento da sntese de protenas PR. Plantas de fumo
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
sensveis (Nicotiana tabacum cv. Bel W3) e tolerantes
(Nicotiana tabacum cv. Bel B) ao O3, tm sido utiliza-
das como biomonitores para o estudo das respostas
associadas ao estresse com O3 (Schraudner et al.,
1992; Sandermann, 1996). Por exemplo, em plantas
de fumo cv. Bel W3 e cv. Bel B expostas 150 ppb de
O3 durante 5 horas, foram detectados incrementos
nos nveis dos transcritos codificantes para as enzi-
mas quitinase e -1,3glucanase (Schraudner et al.,
1992). Neste caso, plantas da cv. Bel W3 apresenta-
ram incrementos entre 40 e 75 vezes na atividade
-1,3glucanase e de 4 vezes na atividade quitinase,
entre as 5 e 10 horas aps a exposio com O3. Estas
plantas tambm desenvolveram injrias necrticas
com deposio de caloses em clulas adjacentes s
reas necrticas (Schraudner et al., 1992). Resulta-
dos semelhantes foram obtidos em outro trabalho,
onde plantas de fumo cv. Bel W3 e cv. Bel B expostas
a 150 ppb de O3 durante dois dias exibiram maio-
res nveis de transcritos codificantes para as enzimas
-1,3glucanase, quitinase bsica, quitinase cida, e
PR-1b (Ernst et al., 1992). Por outro lado, em folhas
de fumo cv. Bel W3 expostas a 150 ppb durante 5
horas foi detectado um pico nos nveis de transcritos
codificantes para PR-1a (protena marcadora da RH)
24 horas aps a exposio ao O3 (Pasqualini et al.,
2003). Alm disso, observaram-se tambm maiores
nveis de compostos fenlicos, perxido de hidrog-
nio e de deposio de caloses aps 24 horas do tra-
tamento com O3. Estas respostas consideradas em
conjunto, indicam que os mecanismos envolvidos
durante a RH disparada pelo estresse a O3, so se-
melhantes queles disparados durante a RH e MCP
induzidos pelo ataque por patgenos (Pasqualini et
al., 2003). Plantas jovens de espruce-da-Noruega (Pi-
cea abies L.) expostas a 150 ppb durante 7 horas por
dia, at 8 dias, apresentaram maior expresso endo-
-quitinase e -1,3glucanase a partir do segundo
dia (Karenlampi et al.,1994). Ambas estas protenas
so sintetizadas geralmente em resposta ao ataque
por patgenos fngicos, sendo que neste caso o O3
estaria atuando de maneira anloga a os elicitore
fngicos patognicos. Plantas de salsa (P. crispum L.)
expostas primeiro a 200 ppb de O3durante 10 horas
e depois por 8 horas ao ar livre, exibiram maior ex-
presso dos genes codificantes das protenas PR1-3
e PR1-4 (Eckey-Katlenbach et al., 1997).
Em geral, a induo da expresso de prote-
nas PR ocorre junto produo de outras molculas
RAPP - Volume 24, 2016
envolvidas em vrias vias de sinalizaes relaciona-
das com o disparo de estados de resistncia a nvel
sistmico, como por exemplo, AS, AJ e ET (Yalpani
et al., 1994; Sharma et al., 1996; Pell et al., 1997).
Tem sido proposto que ET e AS poderiam atuar como
mensageiros secundrios ou tercirios na ativao
das respostas do tipo SAR induzidas por O3 (San-
derman et al., 1998). Por exemplo, tecido foliar de
plantas de fumo (Nicotiana tabacum L. cv. Xanthi-nc)
expostas a 200 ppb de O3 durante 6 horas, por 4 dias,
mostraram induo da expresso das protenas PR1-
-a e PR1-b ao quinto dias aps o tratamento com O3
(Yalpani et al., 1994). A induo da expresso dessas
protenas foi acompanhada pelo aumento nos nveis
de AS, a partir do primeiro dia aps o tratamento
com O3, o que parece ser a causa do disparo de res-
postas tipo RH e SAR em plantas submetidas a con-
centraes elevadas de O3 (Yalpani et al., 1994). Em
plantas de Arabidopsis thaliana expostas a 300 ppb
de O3 durante 6 horas, foram detectados incremen-
tos nos nveis de transcritos codificantes para PR-1
s 12 horas aps a exposio com O3. Estes incre-
mentos foram acompanhados por maiores nveis de
AS os quais atingiram um pico s 6 horas aps a ex-
posio a elevadas concentraes de O3 (Sharma et
al.,1996). Aparentemente, a induo de AS poderia
ser induzida pela produo de EROs e protenas PR
e, a expresso conjunta destas vias seria necessria
para o disparo da RH e SAR, induzidas pelo estresse
a O3. Plantas de lentilha (Lens culinaris) tratadas com
um fluxo de 5 ml/min de O3, tiveram uma maior ex-
presso dos genes e atividade das enzimas LOX1 e
LOX2 3 horas aps o tratamento com O3 (Maccarro-
ne et al.,1997).
A ativao de sistemas antioxidantes em
plantas induzidos aps o tratamento com O3, tem
sido demonstrado atravs da deteco de EROs
produzidas pela exposio de plantas ao O3 (San-
derman, 1996; Pell et al., 1997; Sharma et al., 1997;
Langerbartels et al., 2002; Mahalingam et al., 2006).
O O3 capaz de induzir a produo de EROs, uma vez
que ingressa nas plantas via estmatos e se translo-
ca atravs do apoplasto, reagindo e produzindo pe-
rxido de hidrognio, on superxido, xido ntrico,
etc. (Langebartels et al., 2002; Sharma et al., 1997).
Esses EROs esto associados s vias metablicas que
induzem RH e SAR, o que demonstra a capacidade
do O3 em atuar como um interlocutor entre vias me-
tablicas disparadas tanto em resposta ao estresse
137
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
por O3 como pelo ataque por patgenos. Por exem-
plo, plantas de Arabidopsis thaliana expostas a 300
ppb de O3 durante 6 horas, por 14 dias, mostraram
incrementos nos nveis de transcritos codificantes
para as enzimas FAL, SOD (superxido dismutase),
POX (Peroxidase) e GST (Glutationa-S-transferase),
aps 6 horas de exposio diria de O3 (Sharma et
al.,1994). Por outro lado, tem-se observado que o O3
tambm capaz de induzir reaes de defesa que
so normalmente induzidas por outros estresses
sem ser o ataque por patgenos, como por exemplo,
estresses relacionados superexposio radiao
UV (Langebartels et al., 2002; Yalpani et al., 1994).
Efeito da temperatura
A temperatura um dos principais fatores
ambientais que regula o desenvolvimento e o cresci-
mento das plantas. O aumento na temperatura glo-
bal no decorrer das prximas dcadas poder afetar
diretamente a durao dos invernos, a distribuio
geogrfica dos hospedeiros e patgenos e, as taxas
de crescimento e reproduo dos mesmos. Desta
forma, as variaes na temperatura em escala global
tambm podem afetar a disperso de doenas infec-
ciosas e a sobrevivncia dos patgenos entre as es-
taes (Yez-Lpez et al., 2012). Alm disso, a tem-
peratura capaz de afetar o desenvolvimento dos
patgenos devido a alteraes na acumulao de
fitoalexinas, e/ou pigmentos protetores nos tecidos
hospedeiros (Newman et al., 2003; Newman, 2004;
Memmot et al., 2007; Ladanyi & Horvath, 2010).
Plantas submetidas a temperaturas elevadas
tm demonstrado geralmente maior suscetibilidade
ao ataque por patgenos e pr-disposio ao desen-
volvimento de doenas. O aumento da temperatura
pode afetar tanto as respostas de defesa associadas
PTI, quanto ETI. Neste sentido, vrios genes re-
lacionados com a defesa contra patgenos so re-
primidos em certos hospedeiros expostos a altas
temperaturas (Xiao et al., 2003, 2005; de Jong et al.,
2002). Por exemplo, a RH disparada pelo gene RPW8
em Arabidopsis, que confere resistncia ao odio,
reprimido em plantas submetidas a temperaturas
acima de 30C (Xiao et al., 2003). A resistncia e RH
disparada pelos genes Cf4 e Cf9 em tomate (codifi-
cantes para duas protenas do tipo RLKs), frente ao
fungo patognico Cladosporium fulvum, tambm
podem ser suprimidas em plantas expostas a tempe-
raturas superiores a 33C (de Jong et al., 2002). No
138 RAPP - Volume 24, 2016
entanto, interessante destacar que respostas autoi-
munes mediadas pelos genes R em plantas hbridas
de Arabidopsis podem ser atenuadas mediante um
incremento moderado na temperatura (Bomblies et
al., 2007), indicando que at mesmo alteraes me-
nores na temperatura global podem afetar os siste-
mas de defesa das plantas.
Em plantas de Arabidopsis e fumo (Nicotiana
benthamiana), a resistncia basal e a resistncia me-
diada pelos genes R frente a Pseudomonas syringae
so inibidas pelo aumento da temperatura (Wang
et al., 2009). Alm disso, foi constatado que em am-
bos os hospedeiros as respostas de defesa sensveis
temperatura no dependem do AS nem AJ, nem
tampouco dos fatores EDS1 e PAD4. Isto tem levado
a pensar que certas respostas de defesa devem estar
mediadas por outros componentes sinalizadores, ou
mesmo, por uma combinao de mltiplos fatores
ainda desconhecidos (Wang et al., 2009). Trabalhos
com Arabidopsis permitiram isolar um mutante re-
sistente a doenas em condies de elevadas tempe-
raturas (Zhu et al., 2010). Este mutante possui uma
mutao no gene snc1, o qual codificante para
uma protena R portadora de um domnio NBS-LRR,
com funes de reconhecimento a elicitores pato-
gnicos. Temperaturas elevadas parecem modular a
conformao destes receptores a ponto de torn-los
funcionalmente ativos na conferncia de resistncia
a doena nessas condies de estresse (Zhu et al.,
2010). Mutaes similares no gene N em plantas
de fumo tambm foram capazes de conferir resis-
tncia doena sob temperaturas elevadas (Zhu et
al., 2010). Em plantas de tabaco foi constatado que
ocorre inibio da expresso dos genes R e do ac-
mulo de AS sob elevadas temperaturas. Contudo, a
aplicao exgena de AS capaz de reverter essa ini-
bio da expresso dos genes R, mas no de impedir
a ocorrncia de RH (Malamy et al., 1992) (Tabela 1).
O efeito de incrementos na temperatura am-
biental nas respostas de defesa de plantas contra pa-
tgenos pode variar de acordo com o gentipo do
hospedeiro, ou conforme os modos de colonizao
do patgeno. Assim, por exemplo, plantas de A. tha-
liana ecotipo Col-0 possuem resistncia a P. syringae
via ETI, sob condies de temperatura alta (30C)
(Menna et al., 2015). Por outro lado, os ecotipos
CIBC-5, Tsu-1 e Wei-0, resistentes a P. syringae em
temperaturas de at 24C, tm sua resistncia via
ETI suprimida, tornando-se suscetveis ao patgeno
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
a 30C (Menna et al., 2015). Em plantas de cevada
(H. vulgare), o incremento da temperatura ambiente
em 5C suficiente para reduzir a infeco por odio
(B. graminis) em aproximadamente 75% (Mikkelsen
et al., 2015). Porm, esta elevao na temperatura
favorece a infeco por B. sorokiniana resultando
em um aumento de cerca de 150% nos sintomas da
mancha marrom (Mikkelsen et al., 2015).
Efeito da radiao ultravioleta
Alm da radiao fotossinteticamente ati-
va (PAR, Photosynthetically Active Radiation, 400
-700 nm), as plantas esto expostas radiao ul-
travioleta (UV). Esta radiao composta pelas fai-
xas UV-C (abaixo de 280 nm), UV-B (280 320 nm)
e UV-A (320 390 nm). Vrios trabalhos mostram
que o aumento na incidncia de radiao UV devido
a nveis reduzidos de O3 estratosfrico, afeta o perfil
metablico de plantas, especialmente os metabli-
tos secundrios (Gunasekera et al., 1997; Kunz et al.,
2008; Mewis et al., 2012; Nawkar et al., 2013; Balla-
r, 2014; Bornman et al., 2015).
Por exemplo, a pr-exposio de plantas de
Arabidopsis thaliana a radiao UV (254 nm, 0,2 kj/
m2) reduz o nmero de conidiforos de Hyalopero-
nospora parasytica por folha em cerca de 80% (Kunz
et al., 2008). Estes efeitos persistem por at 7 dias
aps a exposio radiao UV. Aparentemente, o
disparo de respostas de defesa aps a exposio
radiao UV relacionado com os danos causados
por ela ao DNA vegetal. Alm disso, trabalhos recen-
tes mostram que mitocndrias e cloroplastos podem
produzir EROs em resposta radiao UV que por
sua vez, podem, eventualmente, iniciar uma casca-
ta de eventos que culminar na MCP (Nawkar et al.,
2013).
Alm de poder disparar a MCP, a exposio
radiao UV altera profundamente o metabolismo
vegetal. Assim, por exemplo, a irradiao de plantas
de brcolis (Brassica oleracea) com radiao UV-B
(0,6 kj/m) aumenta a expresso de genes relacio-
nados com a defesa vegetal incluindo a sntese de
fitoalexinas, flavonides, terpenides e protenas PR
(PR-1, PR-2 e PR-4). A exposio de plantas de Ara-
bidopsis thaliana a 5,5 kj/m de radiao UV-B reduz
em cerca de 50% a severidade de Botrytis cinerea
(Demkura & Ballar, 2012). Alm disso, a ativao
de respostas de defesa e, consequentemente, o con-
trole do patgeno, parece estar associado ao locus
RAPP - Volume 24, 2016
de resistncia a UV (uvr8, UV Resistance locus 8) o
receptor primrio da radiao UV-B em plantas. Este
receptor controla a expresso de vrios genes rela-
cionados com a aclimatao e proteo de plantas
contra a radiao UV-B (Demkura & Ballar, 2012).
As plantas esto adaptadas e, possivelmen-
te, utilizam os nveis atuais de radiao UV-B para
o estabelecimento de certos graus de resistncia a
patgenos. Desta forma, quando a quantidade de ra-
diao UV-B incidente reduzida, a suscetibilidade
vegetal ao ataque de patgenos pode ser aumenta-
da. Neste sentido, a reduo na incidncia de radia-
o UV-B em cerca de 80% aumenta a severidade de
Exobasidium vexans em plantas de ch (Camellia si-
nensis) (Gunasekera et al., 1997).
Perspectivas futuras
O incremento na concentrao dos principais
gases de efeito estufa, da temperatura ambiental,
bem como da radiao ultravioleta um problema
potencial que poder afetar diretamente os siste-
mas de defesa das plantas nas prximas dcadas.
Mesmo considerando os cenrios com menor po-
tencial de riscos preditos pelos modelos para os
prximos cinquenta e cem anos, as concentraes
que se atingiriam seriam suficientes para afetar os
sistemas de defesa em vrias espcies de importn-
cia econmica (Pachauri & Reisinger, 2007). Como
demonstram os trabalhos citados nesta reviso, v-
rios hospedeiros respondem mediante os mesmos
mecanismos fisiolgicos que ocorrem durante as
respostas ao ataque por patgenos, o que sugere que
os receptores envolvidos no reconhecimento aos
incrementos de CO2 e O3 so os mesmos envolvidos
no reconhecimento dos patgenos, ou existe uma
grande sobreposio das rotas fisiolgicas entre
ambas as respostas.
A aplicao de engenharia gentica com fins
de produzir plantas mutantes poderia ser uma fer-
ramenta no futuro para o desenvolvimento de cul-
tivares resistentes aos incrementos na temperatura
e nvel dos gases de efeito estufa. A resistncia a
doenas observada em plantas modelos tais como
Arabidopsis e fumo, poderia ser aproveitada para o
desenvolvimento de cultivares resistentes (Zhu et
al., 2010). De qualquer maneira, os trabalhos reali-
zados em laboratrio so parciais e o xito a campo
ainda dever de ser constatado, mesmo porque os
cenrios ambientais propostos para o futuro deri-
139
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
vam apenas de modelos matemticos e critrios a
priori mais ou menos rigorosos. No possvel afir-
mar que as plantas respondero em nvel de campo
da mesma forma que o fazem no laboratrio, j que
no se consideram outros fatores e suas inmeras
interaes, que podem ser alterados pelas mudan-
as climticas e possveis adaptaes evolutivas por
parte dos patgenos e hospedeiros. Portanto, mais
estudos so extremamente necessrios para enten-
der melhor e tentar predizer quais sero os efeitos
das mudanas climticas no sistema de defesa das
plantas.
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 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

RESISTNCIA DE MONILINIA SPP.

AOS FUNGICIDAS DOS GRUPOS DOS
INIBIDORES DA DESMETILAO (IDM),
DOS INIBIDORES DA QUINONA EXTERNA
(IQE) E DOS METILO BENZIMIDAZOL
CARBAMATOS (MBC)
Paulo dos Santos Faria Lichtemberg1, Isabela Vescove Primiano2,
Juliana Muehlmann Fischer3, Chirley Glienke3, Lilian Amorim2
e Louise Larissa May De Mio1*

RESUMO
Esta reviso aborda o desenvolvimento de resistncia de espcies de
Monilinia causadoras de podrido parda em frutferas de caroo a fungicidas em
todo o mundo, discutindo o modo de ao, mecanismos da resistncia, mtodos
para deteco e fatores que afetam a seleo para resistncia aos fungicidas dos
grupos dos inibidores da desmetilao (IDM), dos inibidores da quinona externa
(IQe) e dos Metilo benzimidazol carbamatos (MBC). Alm disso, foi discutida
a adaptabilidade dos isolados com resistncia ou mudana de sensibilidade e
sua relao com as estratgias antirresistncia, especialmente nas condies de
cultivo em reas subtropicais brasileiras. No Brasil, foram realizados monitora-
mentos da sensibilidade das populaes de isolados de Monilinia fructicola, co-
letados entre os anos 2002 e 2014, aos trs grupos relacionados. Os isolados da
coleo so representantes de toda regio produtora do Brasil.

1. Introduo ferramenta no controle dos fungos fitopatognicos

A podrido parda, causada por espcies de
Monilinia, tem seu controle baseado na aplicao de
fungicidas desde a florao at a colheita. Dentre os
fungicidas que vem sendo utilizados para o controle
desta doena, os fungicidas sistmicos, os IDMs, os
IQes e os MBCs podem ter sua eficincia reduzida
pela alterao na sensibilidade ou at perda de efici-
ncia devido ocorrncia de resistncia.
Caractersticas como o amplo espectro de
ao, diversidade qumica e a possibilidade do uso
protetor, curativo e erradicante fazem dos fungicidas
inibidores da biossntese do esterol IBE (do ingls
sterol biosynthesis inhibitors SBI) uma importante
em diversas culturas (Linhares & Ghini, 2001; Brent
& Hollomon, 2007; Oliver & Hewitt, 2014). Entre
as cinco classes de fungicidas IBEs, destacam-se os
inibidores da desmetilao IDM (do ingls deme-
thylation inhibitors - DMI), com ampla utilizao no
controle dos principais ascomicetos e basidiomice-
tos causadores de doenas em plantas (Reis et al.,
2010; Oliver & Hewitt, 2014). Tais caractersticas fa-
zem dos IDMs lderes de venda de fungicidas com
29,2% de participao no mercado mundial (Oliver
& Hewitt, 2014).
Na cultura do pessegueiro, dentre os fungi-
cidas IBEs os azis (triazis e imidazis) desempe-

1
Universidade Federal do Paran, Depto de Fitotecnia e Fitossanitarismo. Curitiba, Brasil; 2 Universidade Estadual de So Paulo,
Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Piracicaba, Brasil; 3 Universidade Federal do Paran, Depto de Gentica. Curitiba,
Brasil. * Autor para correspondncia: maydemio@ufpr.br

RAPP - Volume 24, 2016 145

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
nham um papel importante no controle da podrido
parda (Monilinia spp.), ferrugem (Tranzschelia dis-
color), furo-de-bala (Wilsonomyces carpophilus) e
sarna (Cladosporium carpophilum) (Bleicher, 1997;
Ma et al., 2001; May De Mio et al., 2004; Adaska-
veg et al., 2015). Os fungicidas azis representam o
grupo quimicamente mais diverso entre os fungici-
das IDM, tendo seu modo de ao dado pela inibi-
o da remoo do grupo C14-metilo do eburicol, o
qual impede o processo de formao do ergosterol
em fungos filamentosos. A ausncia ou diminuio
de ergosterol e o acmulo de esteris txicos levam
ao rompimento da membrana e extravasamento do
contedo celular, causando a morte do organismo
(JosephHorne & Hollomon, 1997; Sanglard et al.,
1998b; Oliver & Hewitt, 2014). Casos de resistncia
a este grupo so mais raros; entretanto, redues de
sensibilidade em isolados de diversas regies produ-
toras, j foram relatados.
Os inibidores da quinona externa IQe (do
ingls quinone outside inhibitors - QoI) tm gran-
de importncia no manejo integrado de doenas de
plantas por serem derivados de produtos naturais,
apresentar amplo espectro de ao, alta fungitoxici-
dade inerente, longo perodo residual, alm de baixa
toxicidade ambiental (Sauter et al., 1999; Sierotzki,
2015). Esse grupo de fungicidas, logo aps seu lan-
amento, foi amplamente empregado no controle
de doenas de cucurbitceas no Japo (Ishii et al.,
2001) e de macieiras na Europa (Zheng et al., 2000).
No entanto foram relatados casos de resistncia dois
anos aps sua introduo (Zheng et al., 2000; Ghini
& Kimati, 2000; Ishii et al., 2001; Sierotzki, 2015).
Desde ento, h relatos de resistncia de campo em
mais de 42 patgenos em diversas culturas e pases,
como em Pyricularia grisea, Botrytis cinerea e Cer-
cospora sojina nos Estados Unidos (Kim et al., 2003;
FRAC, 2012a; Amiri et al., 2014; Zeng et al., 2015),
Venturia inaequalis na Sua (Farber et al., 2002) e
Plasmopara viticola na Frana e na Itlia (Genet et
al., 2006).
Alm das caractersticas atrativas destes pro-
dutos, mencionadas anteriormente, outro fator que
contribuiu para a grande adeso dos produtores ao
uso de IQes a disponibilidade dos produtos no mer-
cado. Esse fungicida est amplamente distribudo em
revendas e agropecurias, representando, em 2012,
28% do mercado de fungicidas (Sierotzki, 2015). No
Brasil, os produtores de pssego vm utilizando os
146 RAPP - Volume 24, 2016
ingredientes ativos azoxistrobina e piraclostrobina
(pertencentes classe dos IQe) para o controle da
ferrugem (Tranzschelia discolor) e na preveno da
podrido parda (Monilinia fructicola). Apesar de di-
versos ingredientes ativos estarem registrados para
o controle da podrido parda do pessegueiro, os
nicos fungicidas sistmicos registrados no Minist-
rio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA)
para o seu controle pertencem ao grupo dos triazis
(AGROFIT, 2016). No entanto, o ingrediente ativo
azoxistrobina est na lista de agrotxicos permitidos
na Produo Integrada de Pssego (INMETRO, 2003).
Com o aumento do uso da azoxistrobina pe-
los produtores de pssego e da maior presso de
seleo que eles representam sobre a populao
patognica, isolados resistentes podero vir a ser se-
lecionados com maior frequncia. No Estado de So
Paulo, inclusive, j foi observada uma mudana nos
valores de CE50 (concentrao efetiva capaz de inibir
50 % do crescimento ou germinao da populao
patognica) de M. fructicola azoxistrobina, aumen-
tando de 0,05 g.ml-1 em 2002 para 0,44 g.ml-1 em
2008 (May De Mio et al., 2011).
Alm dos IDMs e dos IQes, espcies de Moni-
linia foram por muito tempo controladas pelos fun-
gicidas metilo benzimidazol carbamatos MBCs (em
ingls como Methyl Benzimidazole Carbamates). Os
MBCs so fungicidas orgnicos, sistmicos e de alta
seletividade em que o mecanismo de ao baseia-se
no comprometimento da integridade das tubulinas.
Neste grupo, esto includos os fungicidas tiofana-
tos (tiofanato e tiofanato-metlico) e benzimidazis
(benomil, carbendazim, fuberidazol e tiabendazol)
(FRAC, 2016). Os tiofanatos tm como base a tiureia,
derivado do cido tialofnico, e ao contrrio dos
benzimidazis, no apresentam um anel heteroccli-
co (Picinini, 1994; Chauhan & Bhattacharya, 2012).
Uma vez que so convertidos em carbendazim, os
tiofanatos so classificados por muitos autores como
benzimidazis (Picinini, 1994; Young, 2015). Alm da
aplicao na agricultura, como ferramenta de con-
trole de diversos fitopatgenos das mais variadas
culturas, alguns derivados do grupo dos benzimida-
zis tm sido utilizados como antiparasitrios huma-
nos e veterinrios e tambm em terapia anticncer
(Navarrete-Vzquez et al., 2001; Andrzejewska et al.,
2002).
A caracterstica de fungitoxicidade dos tiofa-
natos correlacionada com a produo de Metilo
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
Benzimidazol Carbamato (Fuchs et al., 1972; Chau-
han & Bhattacharya, 2012). Os produtos de conver-
so de tiofanatos em soluo aquosa so semelhan-
tes aos benzimidazis, em que o tiofanato-metlico
convertido em metilo benzimidazol carbamato e
o tiofanato no anlogo etil benzimidazol carbamato
(EBC) (Chauhan & Bhattacharya, 2012). O benomil
rapidamente convertido em MBC por hidrlise, en-
quanto o tiofanato-metlico necessita de uma srie
de reaes intermedirias. Logo, esta transformao
mais lenta, faz com que possuam ao antifngica
menor que o benomil (Picinini, 1994).
A popularidade destes grupos de fungicidas e
seu uso contnuo no controle da podrido parda em
rosceas (Penrose & Senn, 1995; May De Mio et al.,
2004; Schnabel & Dai, 2004; Silva et al., 2011; Chen
et al., 2012) resultou na seleo de isolados resisten-
tes de M. fructicola nas principais reas produtoras
de pssego do mundo (Schnabel et al., 2004; May
De Mio et al., 2011; Villani & Cox, 2011; Chen et al.,
2012). O desenvolvimento de resistncia aos fungi-
cidas um dos maiores problemas no controle de
doenas de plantas, causando perdas econmicas
aos produtores e colocando-os em difcil situao
(Dekker, 1987). O conhecimento sobre os fatores
genticos e a dinmica da evoluo de populaes
resistentes, representam um importante passo para
prolongar a eficcia dos fungicidas.
Nesta reviso sero abordados estudos his-
tricos e recentes sobre os mecanismos e evoluo
da resistncia aos IDMs, IQes e MBCs em espcies
de Monilinia, bem como estratgias antirresistncia
para o manejo da podrido parda.
2. Modo de ao e alvo dos fungicidas IDMs, IQes
e MBCs
2.1 Fungicidas IDMs: Apesar de todos IBEs
utilizados na agricultura terem como modo de ao
a inibio da rota sinttica de esteris em fungos,
Figura 1. Esquema da sequncia normal da desmetilao do C14 do lanosterol mediada pelo citocromo P450. Adaptado
de Kller (1988).
RAPP - Volume 24, 2016
cada classe de fungicidas distingue-se quanto aos s-
tios especficos de ao (Linhares & Ghini, 2001; Oli-
ver & Hewitt, 2014). Particularmente, os inibidores
da desmetilao listados no grupo G, classe IBE 1 do
Comit de Ao Resistncia de Fungicidas (FRAC),
tem como stio especfico de ao a enzima C14
desmetilase (enzima Cyp51) do citocromo P450, que
catalisa processos oxidativos necessrios na forma-
o do ergosterol (Lupetti et al., 2002; Shapiro et al.,
2011; Oliver & Hewitt, 2014; FRAC, 2016). A reduo
do ergosterol e acmulo de seus precursores foram
observados em M. fructigena tratada com IBEs (Kato
et al., 1974, 1975). Em M. fructicola, C14 desmeti-
lase codificada pelo gene Cyp51 (Schnabel & Dai,
2004; Luo & Schnabel, 2008a) e desencadeia trs
oxidaes sucessivas a partir da remoo do grupo
metila (CH3) da molcula C14 do lanosterol (Kller,
1988; Sanglard et al., 1998b; Linhares & Ghini, 2001;
Reis et al., 2010) (Figura 1). Os fungicidas azis ini-
bidores da C14 desmetilase, agem atravs de um
tomo livre de nitrognio localizado no anel hete-
rocclico N-2 (imidazol) ou N-3 (triazol) que se liga
ao tomo de ferro-hmico da enzima do citocromo
P450 inibindo o acesso aos substratos necessrios
para sua funo (Sanglard et al., 1998a; Linhares &
Ghini, 2001; Mansfield et al., 2010; Shapiro et al.,
2011; Kelly & Kelly, 2013; Oliver & Hewitt, 2014). A
partir desta inibio, ocorre um acmulo de esteris
txicos do grupo 14-metilo (lanosterol e 14-metil-
3-6-diol), produzidos pela -5,6-desaturase, interfe-
rindo com as funes do ergosterol como compo-
nente predominante da membrana celular (Gadher
et al., 1983; Lupetti et al., 2002) (Figura 2). Sendo
assim, o estresse causado na membrana da clula
resulta no aumento de sua permeabilidade, causan-
do o extravasamento de contedos intracelulares e,
consequentemente, limitando o crescimento fngi-
co (Gadher et al., 1983; Buchenauer, 1987; Lupetti et
al., 2002; Reis et al., 2010).
147
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Figura 2. Mecanismo de ao de compostos antifngicos afetando a rota Biosinttica do ergosterol. Enzimas alvo di-
reita das setas com genes codificadores entre parnteses. Compostos antifngicos esquerda das setas. Setas indicam
passos para a biossntese do ergosterol. Adaptado de Lupetti et al., 2002.

2.2. Fungicidas IQes: A classe dos inibido-
res da quinona externa (IQe) engloba os seguintes
grupos qumicos: estrobilurinas, famoxadona, fena-
midona e pyribencarb (Leadbeater, 2012). O modo
de ao desses produtos a interferncia na produ-
o de energia (ATP) em um passo do metabolismo
primrio comum s clulas fngicas. Por interferir
no metabolismo primrio, essa classe de fungici-
das apresenta amplo espectro de ao sobre dife-
rentes filos do reino Fungi, como Basidiomycota e
Ascomycota (Sierotzki, 2015). Dentro do grupo das
estrobilurinas h diferentes princpios ativos pro-
duzidos por diferentes fabricantes: azoxistrobina,
piraclostrobina, trifloxistrobina e cresoxim-metlico.
Essas molculas atuam em um processo especfico
da respirao fngica, pois ligam-se ao stio da qui-
nona oxidase externa do citocromo b (complexo III)
e inibem o transporte de eltrons na mitocndria,
impedindo a formao de ATP (Fernndez-Ortuo et
al., 2010; Leadbeater, 2012).
2.3. Fungicidas MBCs: Os benzimidazis co-
mearam a ser utilizados entre as dcadas de 1960
e 1970, no tratamento foliar, de sementes e no con-
trole ps-colheita, em aplicaes na forma de pul-
verizao e em tratamentos por imerso (Brent &
Hollomon, 2007). Nesta poca, caractersticas como
a ocorrncia de pouca fitotoxicidade, amplo espec-
tro de ao, eficincia em baixas concentraes, fa-
cilidade de absoro e translocao pelas plantas e
ao ps-infeco, tornaram sua utilizao bastante
comum, apresentando vantagens em relao aos
outros produtos utilizados, como os derivados cpri-
cos, captan e ditiocarbamatos. Em 1979, a mistura
Benomil-Dicloran era o tratamento padro para o
controle da podrido-parda e da podrido causada
por Rhizopus em pessegueiros no Brasil (Feliciano &
Assis, 1979). Em 1992, o benomil foi retirado do mer-
cado no Brasil, sendo assim, os produtores passaram
a utilizar o tiofanato-metlico como MBC alternativo
para o controle da podrido parda em frutos de ca-
roo (May De Mio et al., 2011).
Poucos anos aps o incio da utilizao de
MBCs, em populaes de diversos fungos foram
descritos isolados resistentes a estes fungicidas. Em
1969, relata-se resistncia em Sphaerotheca fuligi-
nea, (Schroeder & Provvidenti, 1969). Posteriormen-
te, a resistncia de M. fructicola a estes fungicidas
relatada em diversos pases. Em 1975, observou-se
resistncia na Austrlia, em Victoria (Whan, 1976) e
em 1976 em New South Wales aps o uso extensivo

148 RAPP - Volume 24, 2016

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
de benomil por um perodo superior a quatro anos
(Koffman & Penrose, 1976). A partir de 1976, ocor-
rem relatos nos Estados Unidos, em Michigan (Jones
& Ehret, 1976), na Carolina do Sul, na Califrnia
(Ogawa et al., 1980; Sonoda et al., 1983; Michailides
et al., 1987; Ma et al., 2003) e Nova Iorque (Szkolnik
& Gilpatrick, 1977). Lim et al. (2006), observaram re-
sistncia na Coria. No sul do Brasil, em 1985, Fortes
& Ferreira (1985), relatam isolados obtidos em diver-
sos pomares resistentes ao benomil. May De Mio et
al. (2011) e Fischer (2015) observaram diferentes pa-
dres de resistncia a tiofanato-metlico em isolados
de M. fructicola, em frutos provenientes de pomares
da regio Sul e estado de So Paulo, coletados no pe-
rodo de 2000 a 2010. Em outras espcies do gne-
ro, como em M. laxa, h tambm relato de resistn-
cia em pases europeus, como na Grcia e tambm
nos Estados Unidos, na Califrnia (Ma et al., 2005;
Thomidis et al., 2009; Malandrakis et al., 2012).
No geral a resistncia transmitida geneti-
camente e resulta de uma ou mais mutaes, que
podem provocar alterao no stio alvo bioqumico,
fazendo com que a ligao ao fungicida no acon-
tea (FRAC, 2012b). Devido ao especfica, existe
maior propenso resistncia para estes compostos
qumicos, ao contrrio do que ocorre em fungicidas
que atuam em vrios pontos do metabolismo. Alm
deste aspecto, outros fatores esto associados re-
sistncia, como o uso intensivo destes produtos e a
existncia de estirpes resistentes na populao ori-
ginal (Delp, 1980). Em fungicidas stio-especficos,
como benzimidazis e tiofanatos, uma nica muta-
o pode levar a incapacidade do fungicida em se
ligar ao ponto de ao nos fungos (McGrath, 2004).
Mutaes no gene da beta-tubulina, que resultam
em sequncias alteradas de aminocidos nos stios
de ligao ao MBC, vm sendo associadas resistn-
cia aos MBCs em diversos microrganismos, dentre
eles, fungos do gnero Monilinia (Ma et al., 2003;
Ma et al., 2005; Zhu et al., 2010; Malandrakis et al.,
2012; Chen et al., 2014).
Os fungicidas MBCs atuam como inibidores
especficos ligando-se s molculas de tubulina, in-
terrompendo a diviso da clula (FRAC, 2012b). As
tubulinas so protenas globulares que compem os
microtbulos, um heterodmero, que constitudo
principalmente por duas cadeias polipeptdicas de
estruturas semelhantes, a alfa () e a beta-tubulina
(). Os microtbulos so filamentos que compem
RAPP - Volume 24, 2016
o citoesqueleto, uma espcie de arcabouo intrace-
lular responsvel pela manuteno da forma e orga-
nizao celular, das clulas eucariticas. Os micro-
tbulos esto diretamente envolvidos na formao
do fuso mittico e consequentemente na segrega-
o de cromossomos durante a diviso celular em
eucariontes. Alm das tubulinas e , atualmente
so conhecidas tambm outras famlias, como , ,
, e , com funes associadas ao centrolo e pro-
vavelmente a outros aspectos basais (McKean et al.,
2001).
Para a formao dos microtbulos ocorre a li-
gao entre GTP (guanosina trifosfato) e os dmeros
de tubulina, estabilizando assim a forma polimrica.
Os microtbulos esto em constante reorganizao,
crescendo em uma extremidade devido polimeri-
zao dos dmeros de tubulina e diminuindo na ou-
tra extremidade em decorrncia da despolimeriza-
o (Junqueira & Carneiro, 1997). O carbendazim
capaz de inibir a polimerizao das tubulinas, afetan-
do tambm a ligao de GTP (guanosina trifosfato)
(Winder et al., 2001).
3. Mecanismos de resistncia aos fungicidas IDMs,
IQes e MBCs
3.1. Fungicidas IDMs: A resistncia de fungos
fitopatognicos aos fungicidas azis de natureza
quantitativa, apresentando uma distribuio unimo-
dal da sensibilidade que eventualmente muda devi-
do ao aumento da frequncia de fentipos/genti-
pos resistentes na populao (Dekker, 1987; Kller
& Scheinpflug, 1987; Linhares & Ghini, 2001; Brent
& Hollomon, 2007; Reis et al., 2010). Sua natureza
polignica, resultante de uma interao positiva
de vrios genes, contribuindo para diferentes nveis
de resistncia (Sanglard et al., 1998b; Lupetti et al.,
2002). Tipicamente, o aumento da dose do fungicida
ou sua substituio por produtos de maior ativida-
de intrnseca so muitas vezes suficientes para obter
novamente o controle em situaes de sensibilidade
reduzida (Brannen & Schnabel, 2006; Holb & Schna-
bel, 2007; Chen et al., 2012; Oliver & Hewitt, 2014).
Em M. fructicola, o mecanismo mais conheci-
do de resistncia aos triazis a superexpresso do
gene MfCyp51 que codifica a enzima C14 desme-
tilase, alvo deste fungicida. Estudos demonstraram
que a presena de uma insero de 65-pb (elemento
Mona) na regio montante deste mesmo gene, pro-
move o aumento do nmero de cpias da enzima
149
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
alvo para triazis (Luo et al., 2008; Luo & Schnabel,
2008a). O elemento Mona foi encontrado em vrios
isolados de M. fructicola em importantes regies
produtoras de pssegos nos Estados Unidos, sendo
importante monitor-lo na genotipagem de isolados
resistentes para estas populaes (Burnett et al.,
2010; Villani & Cox, 2011; Chen et al., 2013b). Villani
& Cox (2011) acreditam que o elemento Mona con-
tribua apenas com uma parte da resistncia quanti-
tativa em resposta ao uso de triazis. Os mesmos au-
tores demonstraram que nem sempre a presena de
Mona associada baixa sensibilidade observada in
vitro. No Brasil, o elemento Mona no est relacio-
nado aos fentipos resistentes de M. fructicola ao
fungicida tebuconazol (Morales et al., 2013). Apesar
disso, estudos mais recentes detectaram o aumento
da expresso do MfCyp51 em populaes do Brasil,
aps induo subletal de tebuconazol em miclio
de M. fructicola (Lichtemberg et al., 2016b). Porm
as alteraes do gene (inseres) que regulam esta
expresso, assim como mutaes ainda esto sendo
estudadas.
A alterao do alvo de ao ou superexpres-
so gentica por mutao um poderoso mecanis-
mo de resistncia aos fungicidas (Oliver & Hewitt,
2014), mas nem sempre resultam em corresponden-
te troca de aminocidos ligados aos fentipos resis-
tentes (Parker et al., 2006; Cox et al., 2007). Kelly &
Kelly (2013) em reviso sobre o citocromo P450, re-
latam que as mutaes do gene Cyp em diferentes
organismos, podem estar relacionadas perda da
afinidade e expresso deste gene, promovidas por
uma ou mais modificaes genticas. Na China, iso-
lados de M. fructicola com fentipos resistentes ao
fungicida IDM SYP-Z048 (derivado do oxazol) foram
relacionados aos gentipos contendo a mutao
Y136F da MfCyp51, causando a substituio do ami-
nocido tirosina pela fenilalanina (Chen et al., 2012).
No mesmo estudo, outras duas substituies foram
observadas pela presena de serina nas posies
161 e 490 de isolados de fentipo resistente e sens-
vel respectivamente.
As protenas do ABC (do ingls ATP-binding
cassete transporter) e maiores facilitadores (do in-
gls major facilitator - MF) representam as duas clas-
ses mais importantes de transportadores de drogas
envolvidos na resistncia de fungos aos azis. Ape-
sar de essas classes utilizarem a energia do ATP para
sua ativao, o MF age pelo efluxo de substncias
150 RAPP - Volume 24, 2016
atravs das membranas, enquanto as protenas ABC
incluem ambos os mecanismos de bombeamento,
influxo e efluxo (Theodoulou, 2000; de Waard et al.,
2006; Shapiro et al., 2011). A resistncia a algumas
drogas podem ser associada com a regulao ascen-
dente de genes codificando o efluxo de substncias
da clula (Lupetti et al., 2002). Este mecanismo foi
estudado nas leveduras Candida albicans, C. glabra-
ta, e Saccharomyces cerevisiae, e fungos Aspergillus
nidulants, Magnaphorte grisea, e Mycosphaerella
graminicola, servindo de referncia para estudos em
M. fructicola (Theodoulou, 2000; Lupetti et al., 2002;
Schnabel et al., 2003; de Waard et al., 2006; Shapiro
et al., 2011).
Com a clonagem do gene MfABC1 (4380-pb)
em M. fructicola, (Schnabel et al., 2003) demons-
traram que fentipos com sensibilidade reduzida
aos triazis miclobutanil e propiconazol apresentam
maiores nmeros de cpias deste gene do que isola-
dos sensveis, ambos tratados com doses crescentes
dos fungicidas. Alm disso, esse estudo revelou que
o transporte de drogas em M. fructicola mediado
pela protena ABC do gene MfABC1, a partir da identi-
ficao de sequncias de aminocidos e sua similari-
dade com sequncias codificadas por gene similares
em outros patgenos (Schnabel et al., 2003). Sendo
assim, alm do gene MfCyp51, o gene MfABC1 pas-
sou a ser considerado como um dos mecanismos de
resistncia para M. fructicola (Schnabel et al., 2003;
Luo & Schnabel, 2008a). Em alguns isolados brasilei-
ros resistentes, o gene MfABC1 apresentou aumen-
to do nmero de cpias, aps a induo de 0,5 e 1
g/ml de tebuconazol, porm com uma frequncia
inferior expresso obtida pelo gene MfCyp51, de-
monstrando ter menor importncia na resistncia de
M. fructicola ao fungicida triazol (Lichtemberg et al.,
2016b).
Em isolados com resistncia mltipla a tria-
zis e benzimidazis, o sequenciamento do gene
MfCyp51 e o estudo da expresso do gene MfABC1
no evidenciaram nenhuma relao ao fentipo en-
contrado, sugerindo a existncia de outros meca-
nismos afetando a sensibilidade de isolados de M.
fructicola aos fungicidas triazis (Chen et al., 2013a).
Para isolados chineses de M. fructicola, Chen et al.
(2012) investigaram as mutaes pontuais nos genes
Erg2 e Erg24, codificando as enzimas 8 7 este-
rol isomerase e C14 esterol redutase (EBI classe II), e
Erg27, codificando enzima 3-keto redutase (EBI clas-
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
se III), como possveis mecanismos alternativos para
os triazis, porm nenhuma alterao foi observada.
O certo que diferentes eventos moleculares acon-
tecem em diferentes partes do mundo moldando o
tipo de mecanismo presente. Dessa forma, novos es-
tudos devero surgir para esclarecer os mecanismos
determinantes na resistncia de espcies de Monili-
nia aos triazis. Enquanto isso mtodos convencio-
nais se mantm indispensveis no monitoramento
da resistncia.
3.2. Fungicidas IQes: O principal mecanismo
relacionado com resistncia de fungos a fungicidas
de stio-especfico, como as estrobilurinas, a alte-
rao (mutao) no stio de ao. A maior parte dos
relatos de isolados resistentes a estrobilurinas indica
que a mutao monognica (Sierotzki et al., 2000;
Gisi et al., 2002; Bolton et al., 2013). As mutaes em
um nico ponto no gene do citocromo b (cyt b) so
os mecanismos mais associados com a resistncia
s estrobilurinas. A mutao que resulta em maior
fator de resistncia (completa ou qualitativa), asso-
ciada total falta de controle da doena no campo,
corresponde mudana de glicina para alanina no
cdon 143 (G143A). Essa mutao no produz efei-
to negativo na atividade enzimtica e, consequen-
temente, na adaptabilidade dos isolados (Gisi et al.,
2002; Leadbeater, 2012). Outras substituies, como
a fenilalanina para leucina no cdon 129 (F129L) e
de glicina para arginina no cdon 137 (G137R), so
relatadas no cyt b, mas expressam moderada (par-
cial) resistncia, de tal forma que os patgenos com
este tipo de mutao so controlados com as do-
ses recomendadas de estrobilurina (Sierotzki et al.,
2007; Fernndez-Ortuo et al., 2008).
Alm das mutaes h outros mecanismos
associados reduo na sensibilidade dos patge-
nos s estrobilurinas (resistncia quantitativa), os
quais podem no conferir a condio de resistncia
prtica (Kller et al., 2004), como a via alternativa de
respirao (via AOX) e o efluxo do fungicida, entre
outros (Dowling, 2015). Esses mecanismos necessi-
tam de mais estudos, principalmente em patgenos
que possuem o ntron tipo I, imediatamente aps o
cdon 143 no cyt b. Nesses patgenos, a substitui-
o do nucleotdeo no cdon 143 impede que ocorra
o splicing para a formao do RNA mensageiro (Si-
erotzki, 2015). Como consequncia, ocorre deficin-
cia no processo de sntese de protena, a qual letal
ao fungo e a resistncia no se desenvolve (Fernn-
RAPP - Volume 24, 2016
dez-Ortuo et al., 2008). No Brasil. isolados de M.
fructicola apresentaram o ntron do tipo I aps o c-
don 143 (Primiano, 2015). Essa caracterstica parece
ser frequente na espcie M. fructicola, pois tambm
foi descrita em isolados dos Estados Unidos, China,
Austrlia e Nova Zelndia (Luo et al., 2010; Miess-
ner & Stammler, 2010; Hily et al., 2011). Outros
fungos tambm apresentaram esse mesmo ntron,
como diferentes espcies de Puccinia (Grasso et al.,
2006a), Phakopsora pachyrhizi (Grasso et al., 2006b)
e Phyllosticta spp. (Stammler et al., 2013; Hincapie
et al., 2014). H raros casos em que a estrutura n-
tron-exon do cyt b do patgeno polimrfica, ou
seja a populao pode conter indivduos que podem
ou no apresentar esse ntron, como por exemplo
em Botrytis cinerea (Banno et al., 2009). Os isolados
com a introduo ntron perdem a capacidade de
desenvolver resistncia azoxistrobina baseada na
mutao do G143A (Yin et al., 2012).
3.2. Fungicidas MBCs: No grupo dos fungi-
cidas MBCs as mutaes que ocorrem no gene da
beta-tubulina levam a alteraes nas sequncias de
aminocidos modificando os stios de ligao das
protenas. Essas mutaes reduzem ou impedem a
ligao dos fungicidas benzimidazis e tiofanatos a
beta-tubulina.
Mutaes nos cdons 50, 167, 198, 200 e
240 do gene da beta-tubulina j foram relatadas em
diversos fitopatgenos como Sclerotinia sclerotio-
rum (Lehner et al., 2015), Botrytis cinerea (Malan-
drakis et al., 2011), Neurospora crassa (Orbach et
al., 1986), Cladobotryum dendroides (McKay et al.,
1998), Penicillium digitatum (Schmidt et al., 2006),
P. expansum (Baraldi et al., 2003), Venturia inaequa-
lis, V. pirina (Koenraadt et al., 1992; Quello et al.,
2010), Tapesia acuformis, T. yallundae (Albertini et
al., 1999). Em Monilinia, mutaes no gene beta-
-tubulina esto correlacionadas resistncia aos
MBCs. Substituies de nucleotdeos nos cdons 6
e 198 foram associadas com diferentes padres de
resistncia em M. fructicola (Ma et al., 2003). No c-
don 6, a substituio de uma de citosina por timi-
na (CAT TAT) codifica o aminocido tirosina (TAT)
no lugar de histidina (CAT), conferindo o fentipo
de baixa resistncia (Low resistance - LR). No cdon
198, a troca de adenina por citosina (GAA GCA)
resulta em alanina (GCA) ao invs de cido glutmi-
co (GAA), caracterizando o padro de alta resistncia
(High resistance HR). A partir destas observaes,
151
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
foi desenvolvida uma PCR especfica para diferenciar
os dois padres de resistncia. Fentipos sensveis
apresentam os nucleotdeos CAT e GAA nos cdons 6
e 198, respectivamente. Em LR, observa-se no cdon
6 a sequnciaTAT enquanto que em HR, no cdon
198 existe a sequncia GCA. Na populao brasileira
foram identificados indivduos com padres de resis-
tncia e mutaes j descritas nos cdon nos cdons
6 e 198, com maior frequncia de isolados com baixa
resistncia (2,5% em HR e 35,9% LR) (May De Mio et
al., 2011).
A mutao E198A no gene da beta-tubulina
em M. fructicola foi descrita em isolados da Carolina
do Sul nos Estados Unidos (Zhu et al., 2010). A mes-
ma mutao foi igualmente observada em isolados
da China (Chen et al., 2014) e da Europa (Weger et
al., 2011). Ma et al. (2005) em estudo com isolados
da Califrnia, relataram que uma mutao no cdon
240, em M. laxa, leva a substituio de uma leucina
por fenilalanina, conferindo baixa resistncia a be-
nomil. Em M. laxa de pomares das regies central e
norte da Grcia, mutao no cdon 198, foi relacio-
nada a alta resistncia (Malandrakis et al., 2011).
4. Mtodos de deteco de isolados resistentes ou
com baixa sensibilidade aos fungicidas
O monitoramento da resistncia funda-
mental para o acompanhamento da eficincia dos
fungicidas, revelando mudanas na sensibilidade de
patgenos antes que a falha de controle no campo
aparea (Brent & Hollomon, 2007; Yuan et al., 2013).
Uma vez detectada a mudana de sensibilidade em
populaes de patgeno, novas recomendaes e
estratgias para o uso de fungicidas devem ser su-
geridas. A sensibilidade inicial de uma populao de
patgenos, anterior ao uso de um determinado fun-
gicida, chamada de linha-base (do ingls baseline),
sendo esta importante para o estabelecimento de
um programa de monitoramento da resistncia ao
longo do tempo (Russell, 2004).
4.1. Mtodos convencionais
A reduo na sensibilidade a um fungicida
pode ser monitorada in vitro antes mesmo de ocorrer
falha no controle da doena (Ghini & Kimati, 2000).
Para esse monitoramento, os nveis de resistncia
podem ser quantificados por curvas de dose-res-
posta com diferentes concentraes do fungicida ou
por uma concentrao discriminatria (tambm co-
152 RAPP - Volume 24, 2016
nhecida por concentrao mnima inibitria CMI)
que inibe 100 % do desenvolvimento dos isolados
sensveis, discriminando-os dos isolados resistentes
que apresentam crescimento (Angelini et al., 2015).
Com as curvas de dose-resposta, possvel estimar
a concentrao efetiva capaz de inibir 50 % (CE50) do
dimetro micelial ou da germinao dos esporos do
fungo e, com os valores de CE50 de diferentes isola-
dos e de diferentes anos, comparar se est ocorren-
do uma mudana na sensibilidade do patgeno ao
fungicida, como observado em isolados de M. fructi-
cola (Russell, 2004; May De Mio et al., 2011). Tanto
o CE50 como o CMI podem ser obtidos por avaliaes
de dimetro micelial ou de germinao de esporos.
A definio de qual varivel (crescimento micelial ou
germinao) utilizar depende do modo de ao do
fungicida (Olaya, 2011).
4.1.1. IDMs: Mtodos convencionais so
amplamente utilizados no monitoramento da sen-
sibilidade de espcies de Monilinia para diversos
fungicidas do grupo IDM nos Estados Unidos (Wil-
cox & Burr, 1994; Penrose & Senn, 1995; Zehr et al.,
1999; Schnabel et al., 2004), Brasil (May De Mio et
al., 2011; Lichtemberg et al., 2016a), China (Chen et
al., 2012; Yuan et al., 2013) e Nova Zelndia (Elmer
et al., 1992). Em M. fructicola a CE50 do crescimento
micelial utilizada para monitorar nveis de resis-
tncia a diversos fungicidas pertencentes aos IDMs
(Braithwaite et al., 1995; Zehr et al., 1999; Schnabel
et al., 2004; Yoshimura et al., 2004; May De Mio et
al., 2011; Lichtemberg et al., 2016a).
O mtodo da dose discriminatria muito
utilizado pela sua praticidade, reduz significante-
mente a quantidade de unidades experimentais, tor-
nando as avaliaes mais rpidas em comparao ao
mtodo anterior (para um mesmo nmero de isola-
dos testados). Este mtodo inclui o uso de uma nica
dose que pode declarar se um isolado resistente ou
sensvel a um determinado produto (Russell, 2004).
O mtodo consiste na transferncia de discos de mi-
clio para duas placas, uma contendo o fungicida na
dose discriminatria e a outra sem fungicida (contro-
le). Aps o perodo de incubao, deve-se calcular o
valor de crescimento relativo (CR), dado pela razo
entre o dimetro da colnia na dose discriminatria
e o dimetro da colnia na ausncia do fungicida,
multiplicando este valor por 100. Com o valor do CR
possvel determinar o fentipo dos isolados testa-
dos. Porm, pequenas modificaes deste mtodo
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
so comumente observadas em diferentes estudos
com M. fructicola. Russell (2004) recomenda que CR
maiores de 50% sirvam para determinar fentipos
resistentes, sendo esta referncia utilizada por Cox
et al. (2007), Amiri et al. (2009), Zhu et al. (2012) e
Lichtemberg et al. (2016a). Cox et al. (2009) e Villani
& Cox (2011) determinaram que valores de CR res-
pectivamente maiores a 75% e 30% seriam utilizados
para determinar fentipos resistentes, enquanto va-
lores respectivamente abaixo de 25% e 10% deter-
minariam fentipos sensveis. Os mesmos autores
ainda classificaram isolados com CR entre os inter-
valos de fentipos resistentes e sensveis como re-
sistncia alterada ou intermediaria. Existem diferen-
tes razes pelas quais os limites de classificao dos
fentipos variam. Chen et al. (2013a) justificam que
a utilizao de CR>30% para fentipos resistentes
foi determinado para compensar a instabilidade da
sensibilidade causada pelo armazenamento e trans-
ferncias sucessivas dos isolados. De acordo com Li-
chtemberg et al. (2016a) o uso do mtodo da dose
discriminatrias auxilia no processo de seleo fen-
tipos resistentes, mas devido natureza qualitativa
de resistncia dos IDMs este mtodo pode ocasio-
nar pequenos erros de classificao. Outros fatores
que devem ser considerados na utilizao da dose
discriminatria so: a atividade intrnseca de cada
produto (Holb & Schnabel, 2007; Yuan et al., 2013)
e a especificidade da dose discriminatria para a po-
pulao na qual est sendo estudada.
Mtodos alternativos foram propostos para
avaliao da sensibilidade de isolados de M. fructi-
cola (Frster et al., 2004; Amiri et al., 2008; Cox et
al., 2009). Entre estes, destacam-se os mtodos do
tubo de batom (lipbalm tube), cotonete (swab) e
tubo (tube), que foram desenvolvidos por Amiri et
al. (2008) para aplicao em campo, evitando assim
a excessiva demanda de tempo e material dos mto-
dos convencionais. Destes mtodos citados, apenas
o mtodo do tubo de batom mostrou resultados
similares aos tradicionais no estudo da resistncia
de M. fructicola para propiconazol, sendo posterior-
mente validado em campo (Amiri et al., 2009). O
teste da resazurina utiliza um corante azul indicador
de xido-reduo em ensaios de viabilidade celular.
Este mtodo foi utilizado por (Cox et al., 2009) re-
sultando em alto e significante valor de correlao
com o mtodo da dose discriminatria para o triazol
fenbuconazol. O mtodo do diluio em gradiente
RAPP - Volume 24, 2016
espiral (do ingls spiral grade dilution, descrito 4.1.2
IQes) foi utilizado por Janisiewicz et al. (2013) para
avaliar a sensibilidade de isolados de M. fructicola ao
fungicida fenbuconazol, comprovando a efetividade
deste processo estabelecido h mais de uma dcada.
4.1.2. IQes: Para os IQes, a etapa de germi-
nao dos esporos (Figura 3) o estgio de desen-
volvimento do fungo com maior sensibilidade, pois
a fase altamente dependente de energia (produzida
na respirao) para o desenvolvimento do patge-
no (Oliver & Hewitt, 2014; Sierotzki, 2015). Apesar
disso, h diversos trabalhos que utilizam o cresci-
mento micelial como varivel de avaliao dos IQes,
como para Botrytis cinerea (Banno et al., 2009; Kim
& Xiao, 2011; Fernndez-Ortuo et al., 2014), Colle-
totrichum siamense, Sclerotinia sclerotiorum (Liang
et al., 2015) e M. fructicola (Schnabel et al., 2003).
Os experimentos de dose-resposta por ava-
liao de dimetro micelial ou germinao dos es-
poros so geralmente realizados em diferentes pla-
cas de Petri contendo diferentes concentraes de
fungicidas difusos no meio de cultura. H variaes
das tcnicas, como a diluio em gradiente espiral
(Figura 4A), na qual M. fructicola foi um dos patge-
nos utilizados para validar o mtodo com diferentes
fungicidas: diclorana, fludioxonil, fenehexamida e
tebuconazol (Frster et al., 2004). Para esse mto-
do, diferentes concentraes de fungicidas so dis-
tribudas em espiral numa mesma placa formando
um gradiente de concentraes, no qual no centro
h as maiores concentraes e nos bordos as meno-
res (Figura 4B). Esporos do patgeno so incubados
em tiras de celofane ou em meio de cultura e, quan-
do apresentarem crescimento micelial uniforme, es-
sas tiras so transferidas para as placas com e sem
fungicida, de forma que o fungo esteja em contato
com todas as diferentes concentraes. Comparan-
do com o crescimento do fungo a partir da tira no
meio sem fungicida, com esta tcnica possvel de-
terminar a concentrao efetiva capaz de inibir 50 %
do dimetro micelial (Figura 4C) de uma forma mais
rpida, econmica e precisa (Frster et al., 2004;
Amiri et al., 2014). Outro mtodo para quantificar
a sensibilidade dos fungos aos fungicidas de forma
rpida o da microtitulao com presena ou ausn-
cia do indicador de respirao resazurina (j descri-
to no item anterior), no qual a avaliao realizada
em espectrofotmetro (Cox et al., 2009; Vega et al.,
2012). Em todos os mtodos, o meio de cultura, a
153
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Figura 3. Avaliao da porcentagem de germinao de isolados Monilinia fructicola com alta (A e B) e baixa (C e D)
sensibilidade azoxistrobina. Placas de poliestireno contendo meio de cultura sem (A e C) e com (B e D) 0,8 g.mL-1 de
azoxistrobina e 100 g.mL-1 de cido salicilhidroxmico (SHAM).

densidade de esporos, o perodo de incubao e o o, ele no interfere diretamente na germinao

dia de avaliao devem ser otimizados para obter o
resultado mais coerente. Uma vez padronizado, esse
protocolo dever ser mantido (Frster et al., 2004;
Cox et al., 2009).
Como os IQes atuam em um processo espe-
cfico da respirao, para os experimentos in vitro
recomenda-se adicionar o cido salicilhidroxmico
(SHAM), a fim de suprimir o uso da via alternativa
de respirao (via AOX). A importncia da via AOX
in vivo desconhecida, mas h a hiptese de que
os compostos antioxidantes das plantas liberados
durante o processo de infeco silenciam os genes
responsveis por essa via (Ma & Michailides, 2005;
Fernndez-Ortuo et al., 2008). Para trabalhos rea-
lizados com M. fructicola, recomenda-se dissolver
o SHAM em metanol e ajustar a concentrao para
100 g. mL-1 de meio de cultura. Nesta concentra-
de esporos ou crescimento micelial de M. fructicola
(Schnabel et al., 2003).
Alm dos experimentos in vitro, a confirma-
o da resistncia prtica, ou seja, quando ocorre a
falha no controle da doena em condies de campo
(Ghini & Kimati, 2000), pode ser realizada em plan-
tas ou em frutos tratados com a concentrao reco-
mendada para o produtor (Figura 5). Por exemplo,
frutos com ferimento e tratados com azoxistrobina
inoculados com isolados resistentes de M. fructicola
a esse fungicida apresentaram sintomas de podri-
do parda, enquanto que aqueles inoculados com
isolados sensveis no apresentaram frutos doentes
(Amiri et al., 2010; Chen et al., 2014).
4.1.3. MBCs: A avaliao da sensibilidade a
MBCs tradicionalmente realizada por meio da ava-
liao de crescimento micelial em placas de Petri

154 RAPP - Volume 24, 2016

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Figura 4. Tcnica da diluio em gradiente espiral: equipamento spiral plater, em ingls (A), placa com meio de cultu-
ra e corante para observar a distribuio do produto em espiral (B) e placa com meio de cultura com fungicida e com
quatro tiras de meio de cultura contendo o patgeno. Para cada isolado, foram depositadas tiras opostas na placa (C).
Foto de J. S. Baggio.

brasileira ao tiofanato-metlico. Isolados com EC50 <1

g/mL, de 1 a 30 g/mL e 30 g/mL, foram consi-
derados S, LR e HR respectivamente.

4.2. Mtodos moleculares

A liar os riscos associados ao uso de um determinado
B zimas de restrio para detectar sua presena (Luo
Figura 5. Resistncia prtica de isolados Monilinia fructi-
cola com alta (A) e baixa (B) sensibilidade azoxistrobi-
na. Frutos foram inoculados com suspenso de esporos
e sem ferimento. Frutos do lado esquerdo foram imersos
somente em gua e frutos do lado direito foram imersos
na concentrao recomendada no Programa de Produo
Integrado de Pssego (10 g do ingrediente ativo por 100
L de gua).
com meio de cultura acrescido do ingrediente ativo
a ser testado. Ma et al. (2003) utilizaram doses de 1 e
500 g/mL de benomil, para diferenciar isolados de
Monilinia pouco resistentes, do termo ingls Low
Resistant (LR) e altamente resistentes, do termo em
ingls High Resistant (HR). May De Mio et al. (2011)
utilizaram doses de 1g/mL para diferenciar isolados
sensveis e resistentes de M. fructicola na populao
4.2.1 IDMs: Quando relao entre fentipo e
gentipo conhecida, os mtodos moleculares po-
dem trazer resultados rpidos e precisos para ava-
fungicida. Porm, a utilizao desta tecnologia de-
pende da identificao prvia dos mecanismos que
conferem resistncia ao patgeno estudado (Russell,
2004).
Nos Estados Unidos, a insero gentica
Mona, presente em isolados de M. fructicola com
fentipos resistentes a triazis, permitiu o desenvol-
vimento de um mtodo de PCR e de digesto por en-
et al., 2008). Para o mtodo de PCR, a amplificao
da regio montante do gene MfCyp51, utilizando os
primers INS65-F e INS65-R descritos por Luo et al.
(2008), devem gerar bandas de 376-pb em isolados
contendo Mona (triazol-resistente) ou 311-pb em
isolados sem o Mona (sensveis). Devido curta dis-
tncia entre o tamanho das bandas (65-pb) geradas
em isolados resistentes e sensveis, sua diferencia-
o em gel de agarose pode ser comprometida. Para
melhor visualizao, pode-se utilizar a enzima de
restrio BsrBI, que resulta em dois fragmentos que
permitem melhor distino entre isolados.
A mutao Y136F do gene MfCyp51 em M.
fructicola conferindo gentipos resistentes em iso-
lados chineses, corresponde a um polimorfismo de
nucleotdeo nico (do ingls single nucleotide poly-

RAPP - Volume 24, 2016 155

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
morphism SNP) que permite o desenvolvimento de
tcnicas de PCR de alelo-especfico (do ingls allele-
-specific AS-PCR) para sua rpida diagnose. Entre as
aplicaes da AS-PCR destaca-se a diferenciao de
um segundo nucleotdeo (em ingls mismatch) que
aumenta a especificidade entre primer e gentipo de
interesse (Latorra et al., 2003). Avenot et al. (2008)
utilizaram esta tcnica para desenvolver uma meto-
dologia simples de identificao da mutao H277Y
do gene AaSdhB em isolados de Alternaria alterna-
ta resistentes aos fungicidas inibidores da succinato
desidrogenase (SDHI). Na ausncia de tcnicas rpi-
das para identificar mutaes pontuais, o sequencia-
mento destas regies contendo a mutao pode ser
realizado e comparado a sequencias cadastradas em
bancos de dados.
Adicionalmente, o PCR de tempo real permite
quantificar a expresso gnica a partir do isolamento
de mRNA e sntese de cDNA para isolados onde os
promotores dessa superexpresso no foram des-
cobertos. Para quantificar a expresso gnica, deve-
-se aplicar o mtodo da curva padro, assim como
utilizado por Ma et al. (2006) em Blumeriella jaapii,
ou o mtodo do Ct comparativo, estabelecido por
Schmittgen & Livak (2008) e aplicado em M. fructi-
cola por Luo & Schnabel (2008a) e Lichtemberg et al.
(2016b). O mtodo da superexpresso gnica pode
ser comparado entre amostras com e sem induo
de doses subletais de fungicidas, ou comparando
fentipos sensveis contra resistentes, assim como
sugerido por Livak & Schmittgen (2001).
4.2.2. IQes: Com o avano das tcnicas mo-
leculares, a identificao e/ou quantificao da mu-
tao responsvel pela resistncia cada vez mais
comum (Karaoglanidis et al., 2011; Michalecka et al.,
2011; Finger et al., 2014). Para identificar a mutao
no cyt b envolvida na resistncia aos IQes, h dife-
rentes mtodos moleculares, como PCR, PCR quan-
titativo, sequenciamento e digesto por enzimas de
restrio (Leroux et al., 2010; Karaoglanidis et al.,
2011; Hincapie et al., 2014; Sierotzki, 2015). O par
de primers utilizado pode no amplificar todos os c-
dons alvos de estudo, por exemplo para amplificar a
regio do cytb de M. fructicola que contm o cdon
129 utiliza-se o par de primers cola0-fwd (5- AGAG-
CACCTAGAACATTAGTT- 3) com o primer cola1-rev
(5- AACCAAAGCTTGAACCCGCT 3), enquanto que
o primer cola2-fwd (5 - CGCGACAGGCTGGGTCACT-
GA - 3) utilizado em par com colaexon4-rev (5-
156 RAPP - Volume 24, 2016
AACTCAACAATATCACCTCCAATTCAT 3) para am-
plificar os cdons 137 e 143 e o ntron de 1166-pb
(Hily et al., 2011; Primiano, 2015). A identificao da
mutao G143A em um determinado isolado , de
modo geral, altamente correlacionada com o fen-
tipo resistente, no qual a resistncia considerada
qualitativa (Sierotzki, 2015). Para o caso de M. fructi-
cola, outras mutaes nos cdons 129 e 137 no fo-
ram observadas nos isolados resistentes (nmero de
acesso KM610207) (Primiano, 2015). Essas anlises
moleculares complementam os resultados obtidos
por mtodos convencionais.
A digesto enzimtica, no qual a enzima de
restrio reconhece o ponto de mutao relaciona-
do com a resistncia, recomendada como um novo
mtodo, mais rpido e especfico para monitorar a
resistncia aos IQes (Leroux et al., 2010; Patel et al.,
2011). Entretanto, deve-se sempre comparar os re-
sultados com outros mtodos, pois os isolados po-
dem apresentar heteroplasmia (por exemplo Colle-
totrichum gloeosporioides) ou polimorfismo do cyt
b (por exemplo Botrytis cinerea) e tanto os produtos
digeridos quanto os no digeridos aparecero no gel
de agarose (Ishii, 2015). Nesse caso, possvel sepa-
rar os isolados baseando-se no nmero de pares de
base observado em gel de agarose, mas h necessi-
dade de conhecimento prvio para a interpretao
dos resultados. Isolados que apresentam o ntron
(no caso de Botrytis cinerea so 1205-pb) possuem
banda de 1765-pb e isolados que no possuem o n-
tron podem no ter a mutao no cdon 143 (apre-
sentam banda de 560-pb) ou apresentar a mutao
(a digesto enzimtica resulta em duas bandas: uma
de 318-pb e outra de 242-pb (Leroux et al., 2010).
Apesar dessa tendncia e de diferentes tc-
nicas moleculares, para alguns fitopatgenos, como
para M. fructicola, no possvel o uso dessa tc-
nica, pois at o momento no h conhecimento de
diferenas moleculares entre os isolados resistentes
e sensveis (Luo et al., 2001; Hily et al., 2011; Primi-
ano, 2015). Uma reduo na sensibilidade de forma
quantitativa e com uma mudana gradual relacio-
nada com resistncia polignica, devido a minor
genes e esses so difceis de serem detectados (An-
gelini et al., 2015). Assim, mtodos convencionais
de avaliao, apesar de trabalhosos e demorados
quando comparados com os moleculares, so mais
recomendados para monitorar a sensibilidade des-
ses patgenos ao fungicida.
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
4.2.3. MBCs: Diversas metodologias conven-
cionais vm sendo substitudas por metodologias
moleculares para estudos de resistncia em espcies
de Monilinia. Estas esto cada vez mais eficientes,
sensveis, simplificadas e acessveis, podendo ser
inseridas na rotina laboratorial, otimizando tempo
e recursos para diagnsticos e monitoramentos na
rea da fitopatologia. Uma vez que para MBCs subs-
tituies de nucleotdeos esto associadas resis-
tncia, as metodologias baseiam-se principalmente
na observao dos polimorfismos que diferenciam
os fentipos de sensibilidade e resistncia.
A PCR convencional tem sido eficaz para a
identificao de resistncia a MBC em espcies de
Monilinia em diversos trabalhos. Baseia-se na utili-
zao de pares de primers especficos que permitem
a amplificao das regies de mutaes no gene da
beta-tubulina que conferem resistncia aos isolados,
destacando-se as regies do cdon 6 e cdon 198.
Ma et al. (2003) desenvolveu PCR especfica para
diferenciar fentipos de baixa resistncia (low resis-
tance-LR) e de alta resistncia (high resistance-HR).
May De Mio et al. (2011) utilizaram protocolo pro-
posto por Ma et al. (2003) associado ao crescimento
micelial para identificao do padro de resistncia
em isolados do Brasil.
Variaes das tcnicas de PCR, como PCR em
tempo real, utilizando-se sondas TaqMan e SYBRGre-
en vm sendo utilizadas para a deteco de resistn-
cia aos MBC. Fan et al. (2014) desenvolveram reao
multiplex da PCR em tempo real utilizando sondas
MGB TaqMan marcadas com fluorforos HEX e FAM
para identificao simultnea das mutaes E198A
e H6Y. Luo et al. (2007) utilizaram SYBRGreen para
identificar isolados com mutao E198A, em popula-
es de M. fructicola obtidas de frutos mumificados
de pssegos, ameixas e nectarinas obtidos em dife-
rentes pomares na Califrnia. Segundo os autores,
a utilizao desta metodologia de PCR eficaz em
substituir os mtodos convencionais para quantifica-
o da resistncia a benzimidazis nas populaes
do patgeno.
O sequenciamento do gene da beta-tubulina
tem sido uma ferramenta citada em diversos estu-
dos envolvendo resistncia aos MBCs em espcies
de Monilinia. A obteno das sequncias de nucleo-
tdeos do gene da beta-tubulina, em associao com
experimentos in vitro, como crescimento micelial
em placa de Petri com doses conhecidas de fungicida
RAPP - Volume 24, 2016
tm possibilitado correlacionar as mutaes existen-
tes nos padres de resistncia em espcies de Moni-
linia (Ma et al., 2003; Malandrakis et al., 2012; Chen
et al., 2013a; Chen et al., 2014). Com esta tcnica
possvel tambm verificar quais os aminocidos se-
ro codificados por cada cdon, observando-se as-
sim as diferenas existentes entre isolados sensveis
e resistentes. Em M. fructicola, isolados sensveis
possuem as sequncias CAT e GAA nos cdons 6 e
cdon 198, respectivamente. Substituies nestes
cdons so responsveis por fentipos diferentes,
chamados de LR e HR. Em LR, observa-se no cdon
6 a sequncia TAT enquanto que em HR, no cdon
198 existe a sequncia GCA. Estas substituies re-
sultam em aminocidos diferentes daqueles obser-
vados nos isolados sensveis (Ma et al., 2003). Em M.
laxa, a anlise da sequncia do gene beta-tubulina
mostrou que a substituio de um par de base est
relacionada a baixa resistncia. A substituio resul-
ta em uma mudana no cdon 240 de CTC (leucina)
em isolados sensveis, para TTC (fenilalanina) em iso-
lados com baixa resistncia (Ma et al., 2005).
Outra tcnica, a PCR-RFLP (do ingls Restric-
tion Fragment Length Polymorphism) tambm foi
utilizada na identificao de resistncia. (Malan-
drakis et al., 2012) baseado no polimorfismo entre
gentipos, verificou que o stio de reconhecimento
da endonuclease Eco31I (BsaI) inclui o cdon 198,
e utilizou assim esta tcnica para a identificao da
mutao E198A em M. laxa obtidas em pomares
das regies norte e central da Grcia. O produto
da amplificao do gene da beta-tubulina por PCR
convencional de tamanho de 356-pb foi submetido
a digesto utilizando-se a enzima Eco31I (BsaI). Em
isolados sensveis, a digesto gerou dois fragmen-
tos, de 243- e 113-pb. J nos resistentes no houve
reconhecimento do stio da enzima, e o fragmento
no foi separado. Os autores destacam que com esta
metodologia em algumas horas possvel verificar
a existncia da resistncia, enquanto que pelas me-
todologias de fungitoxicidade tradicionais so ne-
cessrios dias para obteno do resultado. Ma et al.
(2005) utilizaram a mesma metodologia, entretanto
estabeleceram protocolo com a enzima BSmAI. Esta
endonuclease foi capaz de reconhecer a sequncia
GTCTCC no produto de PCR dos isolados sensveis,
mas no reconhece a sequncia GTTTCC no produto
de PCR dos isolados LR. A digesto do produto de
PCR em 2 fragmentos, com tamanho de 111- e 265-
157
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
pb, identificou desta forma isolados sensveis, sem
mutao no cdon 240, relacionada a isolados LR em
M. laxa.
5. Fatores afetando a seleo de isolados resisten-
tes
5.1. Intensidade de presso de fungicida
A presso de seleo exercida pelo fungicida
um dos principais fatores para a elaborao de es-
tratgias antirresistncia, compreendendo fatores
genticos, biolgicos e operacionais. diretamente
proporcional s doses e frequncia de aplicaes, ao
grau de cobertura obtido e persistncia na cultura
ou no solo (Ghini & Kimati, 2000).
Os IDMs so considerados de mdio ris-
co para o desenvolvimento de resistncia, a qual
quantitativa (Georgopoulos, 1985; FRAC, 2016).
Mesmo quando isolados mutantes foram induzidos
em laboratrio no foi observada a resistncia qua-
litativa (Kller & Scheinpflug, 1987). A populao
do patgeno apresenta variaes na sensibilidade,
as quais so inerentes espcie em questo. A re-
sistncia quantitativa difcil de ser confirmada em
campo e mesmo em laboratrio, devido mudana
gradual que pode ocorrer na sensibilidade de isola-
dos a um determinado fungicida. Assim, para detec-
tar a mudana do comportamento da populao
necessrio monitorar um grande nmero de isola-
dos em anos consecutivos de uma dada regio. No
caso de M. fructicola, nos Estados Unidos, isolados
com sensibilidade reduzida ao propiconazol foram
observados aps trs anos de uso do fungicida, mas
a dificuldade no controle foi relatada apenas 5 anos
mais tarde (Zehr et al., 1999; Schnabel et al., 2004;
Brannen & Schnabel, 2006; Villani & Cox, 2011). No
estado da Califrnia, Estados Unidos, mesmo aps
cinco anos de uso de tebuconazol, a distribuio da
sensibilidade de isolados de M. fructicola no foi al-
terada (Yoshimura et al., 2004). No Brasil, observou-
-se ampla distribuio da sensibilidade de isolados
de M. fructicola para o tebuconazol, e esta foi direta-
mente proporcional ao nmero de aplicaes deste
fungicida (May De Mio et al., 2011).
Estas diferenas observadas entre os triazis
(tebuconazol e propiconazol) podem ser explicadas
pelas variaes na afinidade entre o ingrediente ati-
vo e o stio de ao no patgeno. Esta afinidade de-
termina a intensidade da atividade fungitxica entre
os fungicida e seus alvo de ao (Gadher et al., 1983).
158 RAPP - Volume 24, 2016
Outros estudos sobre o controle de M. fructicola in-
dicam maior atividade fungitxica do ingrediente
ativo tebuconazol em comparao com outros tria-
zis incluindo o propiconazol (Schnabel & Dai, 2004;
Holb & Schnabel, 2007). Portanto, essa afinidade
pode ser determinante para perda da sensibilidade
de patgenos aos fungicidas. Enquanto a resistncia
aos triazis se tornou comum em algumas localida-
des, em outras reas diferentes populaes de Mo-
nilinia se mantiveram predominantemente sensveis
(Yoshimura et al., 2004; Stevic & Vuksa, 2006; Mar-
tini et al., 2012). Outras caractersticas como a adap-
tabilidade da populao do patgenos em diferentes
ambientes, devem ser consideradas.
O risco de seleo de populaes resistentes
est relacionado com caractersticas do fungicida,
como, por exemplo, modo de ao especfico e alta
persistncia da atividade, e caractersticas do pat-
geno, como alta variabilidade gentica, esporulao
abundante, tempo de gerao curto e alta adapta-
bilidade dos isolados resistentes (Leadbeater, 2012).
Alm desses fatores, caractersticas da situao de
produo e do manejo das doenas, como pulveriza-
es do mesmo ingrediente ativo ou grupo qumico
de forma frequente para o controle de patgenos
tambm aumentam esse risco. A elevada frequncia
do uso de IQes pode proporcionar uma mudana na
distribuio da sensibilidade do fungo ao fungicida,
selecionando os resistentes, e pode gerar menor di-
versidade gentica na populao (Grnwald et al.,
2006). Em populaes de Plasmopara viticola expos-
tas a frequente aplicao de metade da dose de azo-
xistrobina foi observada uma reduo na diversidade
gentica (Matasci et al., 2008).
Experimentos para verificar a influncia de
intensas pulverizaes de um mesmo fungicida na
populao patognica devem ser realizados em mais
de uma safra e em diversas localidades para abran-
ger a ocorrncia dos processos evolutivos, como a
mutao nos cdons associados resistncia. Um
exemplo disso so isolados de Venturia inaequalis
resistentes trifloxistrobina e ao cresoxim-metlico,
no qual foi observado que a resistncia qualitativa
(governada por mutaes no cdon 143) foi precedi-
da pela quantitativa (Kller et al., 2004).
Os produtores, alm dos setores pblicos e
privados, devem seguir estratgias antirresistncia
(ver item 6 para mais detalhes) para evitar que a ele-
vada frequncia e a ampla rea tratada com os IQes
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
proporcione uma alta e contnua presso de seleo
na populao do fitopatgeno, levando seleo
de isolados resistentes (Sierotzki, 2015). O monito-
ramento de M. fructicola em relao ao fungicida
azoxistrobina deve ser contnuo e estratgias antir-
resistncia devem ser intensificadas, pois a reduo
na sensibilidade vem sido observada e os isolados
com sensibilidade reduzida apresentaram a mesma
adaptabilidade e habilidade competitiva que isola-
dos altamente sensveis (May De Mio et al., 2011;
Primiano, 2015).
5.2 Adaptabilidade de isolados resistentes
O risco de aumento de uma populao de
fungos resistentes a fungicidas frequentemente as-
sociado a sua capacidade de adaptao na ausncia
da presso de seleo (Shaw, 1989; Reis et al., 2010).
A persistncia de populaes resistentes no campo
e sua implicao no controle de doena, esto rela-
cionadas preservao e estabilidade da resistn-
cia, adaptabilidade in vitro e in vivo e habilidade
competitiva dos isolados na ausncia do fungicida.
O conhecimento destas caractersticas essencial
para estabelecer estratgias antirresistncia, pois,
o mecanismo de resistncia do fungo pode ou no
ocasionar um custo adaptativo para o patgeno. A
adaptabilidade, referida como fitness em ingls, de
um isolado resistente sempre comparativa de
isolados selvagens e consiste na capacidade do pa-
tgeno se desenvolver, reproduzir e sobreviver no
ambiente, na ausncia do fungicida (Ghini & Kimati,
2000). Caso os isolados resistentes possuam uma
menor adaptabilidade que os sensveis, a estabilida-
de da resistncia e sua seleo em uma populao
sero reduzidas, facilitando o manejo da doena com
estratgias antirresistncia (Cox et al., 2007; Lead-
beater, 2012). Por outro lado, se isolados resistentes
apresentarem alta adaptabilidade em relao aos
sensveis, o uso do fungicida ameaado e diferen-
tes estratgias antirresistncia devem ser adotadas.
5.2.1. IDMs: A caracterizao da adaptabilida-
de de isolados resistentes de M. fructicola aos tria-
zis importante para determinar o comportamen-
to dessa populao frente a estratgias de manejo.
A seleo de isolados de M. fructicola resistentes a
triazis em pomares de fruta de caroo favorecida
pela sua exposio prolongada a fungicidas perten-
centes a esse grupo. Porm, o comportamento de
isolados com reduo de sensibilidade ou resistentes
RAPP - Volume 24, 2016
ainda no bem conhecido na ausncia da presso
de seleo. J foi demonstrado que isolados de M.
fructicola com dupla-resistncia (IDM-propiconazol
e SDHI-boscalida) no tiveram custo adaptativo nem
reduo de sensibilidade ao IDM mesmo aps cinco
transferncias sucessivas na ausncia dos fungicidas
(Chen et al., 2013b). Por outro lado estudos com
comparao de variveis de crescimento vegetativo
e reprodutivo entre isolados de M. fructicola sens-
veis e resistentes a triazis evidenciaram vantagens
adaptativas pelo primeiro grupo (Nuninger-Ney et
al., 1989; Elmer et al., 1992; Cox et al., 2007).
Alm da desvantagem demonstrada por iso-
lados IDM-resistentes, quanto sua capacidade de
crescimento micelial e esporulao, populaes
mistas inoculadas em pssegos aps cinco gera-
es, evidenciaram tambm baixa competitividade
dos isolados resistentes (Nuninger-Ney et al., 1989;
Lichtemberg, 2015). Como consequncia, a popu-
lao mantida na ausncia da presso de fungicida
tende a retomar a sensibilidade original, favorecen-
do o uso de estratgias antirresistncia (Cox et al.,
2007). No Brasil, tambm se observou que isolados
de M. fructicola com baixa sensibilidade a tebuco-
nazol apresentaram desvantagens frente a isolados
sensveis quanto a sua capacidade de esporulao,
tamanho de leso e perodo de incubao (Lichtem-
berg, 2015). Fato relevante que esses dados foram
obtidos em condies controladas em laboratrio,
assim estudos em campo devem ser realizados para
comprovar ou confirmar a relevncia prtica destes
estudos.
5.2.2. IQes: Isolados de M. fructicola com
sensibilidade reduzida azoxistrobina apresentaram
resistncia estvel durante dez ciclos consecutivos,
na ausncia do fungicida (Primiano, 2015), assim
como isolados resistentes de Magnaporthe grisea e
de Didymella bryoniae azoxistrobina tambm apre-
sentaram resistncia estvel durante quatro ciclos
consecutivos da doena, na ausncia do fungicida
(Avila-Adame & Kller, 2003; Finger et al., 2013).
Quando a resistncia s estrobilurinas go-
vernada por mutaes no cyt b, principalmente a
G143A, no esperada uma desvantagem adaptativa
nos isolados resistentes (Sierotzki, 2015). Na maioria
dos casos, o rearranjo no genoma mitocondrial de
fungos resistentes s estrobilurinas, por causa da
mutao, no afeta outros processos metablicos
(Gisi et al., 2002). O comportamento da estabilida-
159
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
de da resistncia azoxistrobina em isolados sem a
mutao no cyt b foi pouco explorado na literatura e
o mecanismo responsvel pela resistncia a essa es-
trobilurina pode ou no ser influenciado pelas con-
secutivas transferncias.
A adaptabilidade de isolados resistentes em
relao a sensveis pode ser avaliada por meio de
mtodos aplicados in vitro ou in vivo em cada isola-
do separadamente. Um conjunto de diferentes vari-
veis pode ser utilizado para medir a adaptabilidade,
como, por exemplo, a taxa do crescimento micelial,
a esporulao, a germinao, a sensibilidade osm-
tica, o perodo de latncia, a incidncia da doena e
o dimetro da leso (Baraldi et al., 2003; Luo & Sch-
nabel, 2008b; Karaoglanidis et al., 2011). Os estudos
in vivo so importantes, pois h casos em que os
isolados resistentes e sensveis apresentam a mes-
ma adaptabilidade in vitro, mas exibem diferenas
in vivo, como isolados resistentes de Penicillium ex-
pansum a tiabendazol que apresentaram maior se-
veridade de infeco nos frutos do que os sensveis,
apesar de possurem o mesmo crescimento in vitro
(Baraldi et al., 2003). Essa diferena entre os estudos
in vivo e in vitro no foi observada nos isolados de M.
fructicola (Primiano, 2015) e de Alternaria alternata
(Karaoglanidis et al., 2011), no qual os isolados com
baixa sensibilidade azoxistrobina apresentaram a
mesma adaptabilidade que os sensveis
Outra forma de avaliar a adaptabilidade de
isolados com nveis diferentes de sensibilidade a
um determinado fungicida confront-los por uma
ou mais geraes na ausncia da presso de sele-
o. Nesse caso, mede-se a habilidade competitiva
dos isolados. Experimentalmente, promove-se uma
competio entre isolados resistentes e sensveis,
misturando-os em propores conhecidas e avalian-
do o comportamento resultante ao longo do tempo
(Pringle & Taylor, 2002; Ma & Uddin, 2009; Karao-
glanidis et al., 2011). Os testes de habilidade compe-
titiva entre isolados resistentes e sensveis fornecem
outras informaes sobre adaptabilidade, pois os
fungos fitopatognicos podem apresentar estabili-
dade da resistncia na ausncia do fungicida quando
estudados isoladamente, por exemplo apresentam
maior taxa de crescimento ou maior reproduo,
mas no serem competitivos quando misturados
com isolados sensveis, como visto em isolados de
Botrytis cinerea resistentes piraclostrobina (Kim
& Xiao, 2011; Zhan & McDonald, 2013). Em muitos
160 RAPP - Volume 24, 2016
casos, os isolados resistentes a um determinado fun-
gicida so incapazes de competir com isolados sen-
sveis se houver reduo ou ausncia da presso de
seleo (Oliver & Hewitt, 2014). A menor habilida-
de competitiva do fungo resistente, na ausncia do
fungicida, j foi verificada em misturas de isolados
resistentes com sensveis de Erysiphe graminis f. sp.
tritici a triadimefon (Almughrabi & Gray, 1995) e em
diferentes misturas entre um isolado resistente e um
isolado sensvel de M. fructicola dicarboximida, su-
gerindo uma desvantagem associada com a resistn-
cia (Almughrabi & Gray, 1995; Taeheon et al., 2001).
Os estudos de habilidade competitiva entre
isolados resistentes e sensveis ao longo do tempo,
em diferentes geraes do patgeno, devem ser re-
alizados em condies com a maior homogeneidade
possvel, por exemplo, ambiente com temperatura e
umidade controladas, idade do inculo semelhante
e uso do mesmo cultivar. A mudana do cultivar en-
tre uma gerao e outra pode influenciar o resultado
da competio entre os isolados (Zhan & McDonald,
2013). Ao utilizar o mesmo cultivar, o estado fisio-
lgico da planta ou do fruto tambm pode influen-
ciar no resultado, assim, uma alternativa para testes
em ps-colheita a substituio de frutos in natura
por frutos processados, por exemplo pssego enla-
tado (Lim et al., 2001; Cox et al., 2007; Pariaud et
al., 2009). Do ponto de vista prtico, o uso de fru-
tos processados vantajoso, pois permite que expe-
rimentos sejam conduzidos em qualquer poca do
ano, uma vez que a maioria das culturas frutferas
tem sua safra limitada a apenas alguns meses.
Apesar dos experimentos de habilidade com-
petitiva fornecerem informaes que auxiliaro em
estratgias antirresistncia, os mtodos de avalia-
o so limitados a um curto perodo de tempo e,
de modo geral, obtidos em ambiente controlado.
A competio em condies de campo, apesar de
relevante, pouco utilizada. H poucos estudos de
anlise espao-temporal e de persistncia na safra e
na entressafra dos isolados resistentes e h necessi-
dade de se desenvolverem avaliaes mais precisas
(Elmer et al., 1998; Zhan & McDonald, 2013).
5.2.3. MBCs: A resistncia aos MBCs con-
siderada do tipo qualitativa, uma vez que est asso-
ciada a um nico gene. Neste caso, a adaptabilidade
de isolados resistentes tem sido semelhante a de
isolados sensveis, Caractersticas como crescimento
micelial, esporulao, sensibilidade a altas tempera-
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
turas e severidade so variveis avaliadas para quan-
tificar ou estudar a adaptabilidade em fungos.
Em M. fructicola, Ma et al. (2003) verificaram
que isolados LR e HR apresentaram diferentes fen-
tipos de acordo com a temperatura de incubao em
meio de cultura com benomil. Em meio de cultura
com 500 g do i.a./mL, isolados HR (Ec50 > 50 g/
mL) no cresceram quando incubados a 31C, mas
crescem a 10, 15 e 24C. Isolados LR (Ec50= 0,61 a
0.96 g /mL para benomil e Ec50= 2.34 a 6.42 g /
mL para tiofanato metlico) no apresentaram cres-
cimento quanto incubados a 10 e 15C em meio de
cultura acrescido de 1 g do i.a./mL. Entretanto, es-
ses mesmos isolados cresceram a 24 e 31C. Os au-
tores concluram que isolados LR no apresentaram
resistncia em baixas temperaturas (em torno de
15C). Desta forma, como a temperatura na regio
do Vale Central na Califrnia de 6 a 15C durante
a florao, o uso de MBCs poderia ser eficaz para o
controle de M. fructicola.
Egen et al. (2015) observaram isolados de
M. fructicola com diferentes fentipos de resistncia
mltipla aos fungicidas tiofanato-metlico, iprodione
e ciproconazol. De acordo com resultados de testes
de competitividade, observou-se que indivduos com
alguma resistncia foram to competitivos quanto
aqueles sensveis aos trs fungicidas. No geral, iso-
lados com resistncia ao tiofanato-metlico eram
mais competitivos. O isolado resistente ao iprodione
e sensvel aos demais e isolado triplamente sensvel
foram os menos competitivos.
5.3. Resistncia cruzada e mltipla
Um patgeno pode ser resistente a mais de
uma molcula do mesmo ou de diferentes grupos
qumicos. O primeiro caso denominado resistncia
cruzada e o segundo, de resistncia mltipla (Ghini
& Kimati, 2000).
5.3.1. IDMs: A resistncia cruzada comu-
mente observada nos fungicidas IDMs (Buchenauer,
1987; Kller & Scheinpflug, 1987; FRAC, 2016), es-
tendendo-se para todos componentes deste grupo
qumico (Gisi et al., 2005). Devido emergente resis-
tncia de M. fructicola aos IDMs e sua popularidade
entre os produtores de frutas de caroo, de grande
importncia o conhecimento do grau de resistncia
cruzada de uma populao para o estabelecimen-
to de estratgias antirresistncia (Penrose & Senn,
1995; Schnabel et al., 2004; Silva et al., 2011). No
RAPP - Volume 24, 2016
incio da dcada de oitenta e mais recentemente,
Gilpatrick (1981) e Villani & Cox (2011) mostraram
similar frequncia entre a sensibilidade de M. fruc-
ticola para fenbuconazol e propiconazol, indicando
possvel correlao entre os fungicidas estudados.
No estado da Carolina do Sul (Estados Unidos), Sch-
nabel & Dai (2004) demonstraram que isolados de
M. fructicola com sensibilidade reduzida para miclo-
butanil, apresentaram significante correlao com a
sensibilidade para os fungicidas tebuconazol, pro-
piconazol e fenbuconazol. Na China, tambm ficou
demonstrada significante resistncia cruzada entre o
fungicida IDM SYP-Z048 e propiconazol testados em
populaes de M. fructicola (Chen et al., 2012). Na
Nova Zelndia, a resistncia cruzada entre diversos
fungicidas IDMs foi observada em ensaios in vitro
para isolados de M. fructicola (Nuninger-Ney et al.,
1989; Braithwaite et al., 1995).
Quando a resistncia cruzada foi estudada
entre duas diferentes classes de fungicidas inibido-
res da biossntese do esterol (IBEs), observou-se que
todos isolados resistentes para IDM foram sensveis
para morfolinas (Nuninger-Ney et al., 1989), corro-
borando as informaes descritas pelo (FRAC, 2016)
para fungicidas deste mesmo modo de ao. Estudos
avaliando a sensibilidade de M. fructicola a diversos
grupos qumicos, incluindo fungicidas com diferen-
tes modos de ao foram realizados em todo mundo
(Penrose & Senn, 1995; Yoshimura et al., 2004; Ste-
vic & Vuksa, 2006; May De Mio et al., 2011; Martini
et al., 2012). Porm, apenas recentemente foram
realizados estudos de resistncia mltipla, incluindo
fungicidas de diferentes modos de ao utilizados
no controle da podrido parda em frutas de caroo
(Chen et al., 2012; Chen et al., 2013b; Chen et al.,
2013a).
Enquanto na China nenhuma resistncia ml-
tipla foi encontrada entre IDMs e os fungicidas pro-
cimidona, azoxystrobina, carbendazim e pirimetanil,
para isolados de M. fructicola (Chen et al., 2012),
nos Estados Unidos novos fentipos de M. fructicola
apresentando resistncia mltipla foram observados
em testes conduzidos com IDMs, metil benzimida-
zol carbamato (MBC) e inibidores do succinato de-
sidrogenase (SDHI) (Chen et al., 2013b; Chen et al.,
2013a). No estudo da dupla resistncia entre IDM
e MBC, Chen et al. (2013a) observaram que o ele-
mento Mona estava presente em todos isolados co-
letados na Carolina do Sul, mas ausente em isolados
161
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
coletados em outros estados americanos, com a hi-
ptese de que um segundo mecanismo esteja tam-
bm relacionado a este novo fentipo. Segundo Oli-
ver & Hewitt (2014) os casos de resistncia mltipla
so principalmente ligados a alteraes no bombea-
mento de efluxo, capazes de restringir a absoro de
fungicidas de diferentes modos de ao.
No Brasil, ainda no foram realizados estudos
avaliando o grau de resistncia cruzada dentro do
grupo dos IDMs ou mesmo a possibilidade da exis-
tncia de fentipos com resistncia mltipla. Reco-
menda-se que futuros estudos em populaes de M
fructicola do Brasil, alm dos IDMs, sejam estudados
outros fungicidas e tambm outras molculas com
potencial de futuro registro pelo Ministrio da Agri-
cultura.
5.3.2 IQes: Como todas as molculas do gru-
po dos IQes atuam no mesmo ponto da respirao
a resistncia cruzada a mais de uma molcula deste
grupo pode ocorrer. Por exemplo, isolados de Cer-
cospora kikuchii resistentes azoxistrobina tambm
mostraram resistncia a piraclostrobina e a trifloxis-
trobina (Price et al., 2015). Pyricularia grisea (Olivei-
ra et al., 2015) e Alternaria alternata (Vega & Dewd-
ney, 2014) resistentes azoxistrobina tambm foram
resistentes a piraclostrobina.
Apesar da mistura e da rotao de grupos
qumicos de fungicidas serem estratgias antirresis-
tncia, o nmero de pulverizaes deve ser limita-
do, pois isolados com resistncia mltipla podem ser
selecionados, dificultando cada vez mais o uso de
fungicidas dentro do manejo (Fernndez-Ortuo et
al., 2015). Isolados de B. cinerea apresentaram resis-
tncia mltipla a boscalida e a piraclostrobina (Kim &
Xiao, 2011) ou ao tiofanato-metlico e a piraclostro-
bina ou a mais de dois fungicidas (Fernndez-Ortu-
o et al., 2014). Estudos envolvendo esse patgeno
foram ampliados e detectou-se resistncia mltipla
em um mesmo isolado a sete grupos qumicos dife-
rentes: anilopirimidina, dicarboximida, benzimida-
zol, fenilpirrol, estrobilurina, hidroxianilida e inibidor
da succinato desidrogenase (Fernndez-Ortuo et
al., 2015).
5.3.3 MBCs: A partir do momento que ocorre
a resistncia gentica para qualquer um dos produ-
tos MBCs o uso dos demais tambm fica comprome-
tido, devido a resistncia cruzada, o que j foi ob-
servado para espcies de Monilinia (Jones & Ehret,
1976; Ma et al., 2005; Malandrakis et al., 2012). O
162 RAPP - Volume 24, 2016
uso concomitante de MBCs e outros fungicidas, bem
como a alta frequncia de aplicaes para o controle
de podrido parda ou mesmo de outras doenas po-
dem contribuir para a ocorrncia de resistncia ml-
tipla. Alguns microrganismos tm apresentado esta
caracterstica, sendo um desafio para o manejo de
variadas doenas. Em testes realizados com M. laxa,
no foi observada resistncia mltipla entre MBCs
e outros fungicidas (Malandrakis et al., 2012). Em
M. fructicola, Egen et al. (2015) encontraram em
isolados coletados de 2006 a 2010, com diferentes
fentipos de resistncia a tiofanato-metlico, ipro-
dione e ciproconazol, incluindo mltipla resistncia
aos trs fungicidas. Chen et al. (2013a) observaram
a existncia de isolados de M. fructicola resistentes
a MBC e DMI em pomares comerciais de pssego na
costa leste dos Estados Unidos.
6. Recomendao de Manejo e estratgia antirre-
sistncia para Monilinia fructicola em frutferas
Primeiramente a manuteno de boa fertili-
dade do solo, a poda de limpeza de inverno, a re-
moo de frutos mumificados do solo e das rvores
figuram entre as prticas culturais mais importantes
na reduo do inculo de M. fructicola dentro dos
pomares de frutas de caroo entre os diversos ciclos
de cultivo (Harvey et al., 1972; Ogawa et al., 1995).
Porm, necessrio garantir que as partes removi-
das da planta sejam devidamente destrudas, quei-
madas ou enterradas (Harvey et al., 1972; May De
Mio et al., 2004), evitando-se assim, o desenvolvi-
mento da fase perfeita do patgeno (formao de
apotcios) em frutos cados no solo (Zehr, 1982) ou
ainda, a reativao das mmias nas rvores como
fontes de inculo primrio para infeces florais.
Entretanto, estes procedimentos, isoladamente, no
so suficientes para controlar a doena; por isso, re-
comenda-se, alm das prticas culturais, a realizao
de tratamento de inverno de natureza erradicante
com produtos base de enxofre ou cobre, os quais
tm ao multistio (Fortes & Martins, 1998). Duran-
te o ciclo vegetativo da cultura so recomendadas
pulverizaes no perodo da florao e no perodo
da pr-colheita dos frutos, alternando ingredien-
tes ativos de diferentes grupos qumicos e utilizan-
do produtos multistio no manejo, conforme reco-
mendaes do Ministrio da Agricultura, Pecuria e
Abastecimento e/ou legislaes especficas como as
do estado do Paran. O nmero de pulverizaes em
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
cada fase depender do inculo do ano anterior e do
clima; variando tambm entre as diferentes regies
produtoras do Brasil.
Prticas de manejo de fungicida devem con-
siderar a presso de seleo dos fungicidas sobre
a populao dos patgenos (Elmer & Gaunt, 1986;
Kller & Scheinpflug, 1987; May De Mio et al., 2004).
O intenso uso de alguns fungicidas direcionados ao
controle da podrido parda, e tambm ao controle
das demais doenas no pessegueiro, nos diferentes
estados do Brasil, associado rpida reproduo e
quantidade de propgulos que M. fructicola produz,
eleva o risco para reduo da sensibilidade ou mes-
mo resistncia deste patgeno aos fungicidas. Por-
tanto, o manejo desta doena deve considerar es-
tratgias antirresistncia para que a frequncia dos
isolados resistentes no aumente no campo.
O Comit de Aes contra Resistncia a Fun-
gicidas (FRAC - Fungicide Resistance Action Com-
mittee) composto por diferentes empresas priva-
das de fungicidas e tem como objetivo fornecer as
diretrizes para o manejo da resistncia a fungicidas
(http://www.frac.info/working-group/qol-fungici-
des/general-use-recommendations). Fungicidas dos
grupos IQes e MBCs so considerados de alto risco,
enquanto as IDMs so considerados de risco mdio
para a seleo de resistncia. No entanto, para todos
eles j houve relato de resistncia cruzada entre as
suas molculas para diferentes patgenos.
No geral algumas diretrizes devem ser segui-
das para evitar a seleo de isolados resistentes: uti-
lizar misturas de fungicidas (por exemplo, misturar
produtos de ao sistmica com produtos residuais);
utilizar fungicidas mais especficos no incio da epi-
demia (com o objetivo de reduzir a populao do
patgeno) e fungicidas multistio no final do ciclo da
cultura; utilizar a dose, a poca e o intervalo de apli-
cao recomendados no rtulo; utilizar diferentes
mtodos de controle de doenas (por exemplo, re-
sistncia gentica, controle cultural, biolgico, entre
outros) quando disponveis e apropriados; evitar uso
como erradicante e aumentar a diversidade de in-
gredientes ativos, como a rotao de fungicidas com
mecanismo de ao distintos (Bartlett et al., 2002).
O uso de fungicidas especficos em mistura ou
em alternncia com outros fungicidas sistmicos de
diferentes modos de ao indicado como estrat-
gia antirresistncia (Leadbeater, 2012). A alternncia
de diferentes ingredientes ativos pode ser mais efe-
RAPP - Volume 24, 2016
tiva que a mistura quando houver um custo adapta-
tivo do isolado resistente a uma das molculas, pois
a populao desses isolados ser mais facilmente
reduzida (Kller & Scheinpflug, 1987; Mikaberidze &
McDonald, 2015). No entanto, o uso preferencial de
misturas contendo IDMs sugerido por Price et al.
(2015) no controle de M. fructicola, corroborando
observaes realizadas por Holb & Schnabel (2008)
que relatam problemas relacionados ao uso alterna-
do de fungicida no controle da podrido parda em
locais onde isolados resistentes de M. fructicola exis-
tiam. Misturas de propiconazol com os fungicidas
benomil, captan, clorotalonil, ciprodinil e vinclozolin
resultaram em baixo sinergismo entre os produtos
testados em dois isolados de M. fructicola (Emery
et al., 2002). O uso preventivo de misturas conten-
do propiconazol e fungicida de enxofre resultou em
grande efeito sinergtico, aliando excelente controle
e custo reduzido, sendo uma opo para o uso em
reas mais difceis de controlar a podrido parda
com IDM (Holb & Schnabel, 2008).
Para garantir a melhor controle de doenas
ainda deve ser considerado que ambos ingredientes
na mistura utilizem doses que promovam eficincia
similar (Oliver & Hewitt, 2014). Ainda assim, muita
contradio encontrada quanto as vantagens de
utilizar misturas ou aplicaes alternadas de fungici-
das. Ambas estratgias devem atrasar mas no evi-
tar o desenvolvimento da resistncia (Brent & Hollo-
mon, 2007). Apesar das distintas opinies, diversos
autores concordam que o uso de misturas comer-
cializadas pela indstria qumica, garante que pro-
dutores de fruta de caroo estejam implementando
estratgias que evitem o aumento da populao re-
sistente (Staub & Sozzi, 1984; Kller & Scheinpflug,
1987; Brent & Hollomon, 2007).
Ao contrrio dos Estados Unidos, produtos
registrados para o controle de M. fructicola na cul-
tura do pessegueiro no Brasil no incluem formula-
es mistas (Tabela 1) podendo este fato resultar em
maiores dificuldades na implementao de estrat-
gias antirresistncia. Entretanto, Lichtemberg et al.
(2016a) relataram o aumento da sensibilidade de
isolados de M. fructicola ao fungicida tebuconazol
nas principais reas produtoras de pssego do Brasil
comparando populaes mais antigas com as atuais.
Os mesmos autores sugerem que estes resultados
esto relacionadas s modificaes que ocorreram
nos programas de controle da podrido parda que
163
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Tabela 1. Lista de fungicidas inibidores da biossntese do ergosterol (IBE) registrados para o controle de Monilinia fruc-
ticola na cultura do pessegueiroa.
Nome do Grupo Grupo Qumico Nome Comum Agrofitb SEAB-PRc California USAd
piperazina Triforina Sonet
Ciproconazol Inspire Super (l)e
Difenoconazol Score Score (l), Quadris Top (l)e
Fenbuconazol Indar (l)
Fungicidas
inibidores da Fluquinconazol Palisade Palisade (nl)
desmetilao Flutriafol Rhyme (rp)
(IDM) triazol
(SBI: Classe I) Metconazol Quash (l)
Miclobutanil Rally
Propiconazol Bumper (l), Tilt (l), Quilt Xcel (l)e
Tebuconazol Constant , Elite, Constant (nl), Elite (nl), Orius (l), Tebuzol (l), Elite (nl), Luna
Folicur, Triade Folicur (l), Triade (nl) Experience (rp)e
(SBI: Classe III) Hidroxianilidas Fenehexamida Elevate (l)
a
Classificao do Comit de Ao Resistncia de Fungicidas (FRAC, 2016). Liberado (l), registro pendente (rp), no
liberado (nl). bFungicidas registrados no Sistema de Agrotxicos Fitossanitrios (Agrofit) do Ministrio da Agricultura do
Brasil (AGROFIT, 2016). cFungicidas registrados na Secretaria da Agricultura e do Abastecimento do Paran (SEAB, 2016).
d
Fungicidas registrados no estado da California, US (Adaskaveg et al., 2015). eFungicidas formulados em misturas: Ins-
pire Super (+AP), Luna Experience (+SDHI), Quadris-Top e Quilt Xcel (+IQes). Informao acessada em Maro de 2016.

resultaram na diminuio do uso de triazis.
No caso dos MBCs, vrios estudos indicam
que isolados resistentes persistem nos pomares,
mesmo aps a interrupo da utilizao destes fun-
gicidas por vrios anos. Em pomares comerciais de
pssegos no estado da Carolina do Sul, Zehr et al.
(1991) observaram isolados resistentes que persis-
tiram por pelo menos dois anos aps a desconti-
nuidade da utilizao de benomil. Perodo maior
relatado por Malandrakis et al. (2012) que encontra-
ram isolados de M. laxa altamente resistentes aos
MBCs em pomares que permaneceram por oito anos
sem utilizao de fungicidas. No Brasil, May De Mio
et al. (2011) constataram aumento na porcentagem
de isolados sensveis ao tiofanato-metlico de 2000
a 2005, considerando isolados de diferentes regies
produtoras. Apesar de em muitos pases a utilizao
de MBCs para controle da podrido parda j ser bem
reduzida, na China, segundo Chen et al. (2014) a re-
sistncia a MBC emergente e deve ser considerada
na elaborao das estratgias de controle.
Diante dos estudos apresentados para os
principais grupos de fungicidas de ao sistmica
para controle de podrido parda, se pode concluir
que o monitoramento nos pomares das diferentes
regies produtoras do Brasil muito importante. O
acompanhamento da sensibilidade e adaptabilidade
das populaes de patgenos ao longo do tempo,
tambm primordial para garantir que as alteraes
no manejo de grupos e/ou ingredientes ativos pos-
sam ser realizadas em tempo, preservando o produ-
to de forma eficiente no mercado como alternativa
segura para o produtor.
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RAPP - Volume 24, 2016 173

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)

SCLEROTINIA SCLEROTIORUM:
MOLECULAR ASPECTS IN PLANT-
PATHOGENIC INTERACTIONS
Wei Wei1 and Steven J. Clough2

SUMMARY
This year, 2016, marks the 130th anniversary of Anton de Barys detai-
led reports summarizing his observations and thoughts on the plant pathogenic
fungus Sclerotinia sclerotiorum. As the most famous pioneer of plant pathology
across the globe, de Bary made many intelligent observations that still hold true
today, such as the secretion of enzymes and oxalic acid. As scientists advanced
the story of S. sclerotiorum pathology through the following decades, they con-
firmed the identity of numerous plant cell-wall-degrading enzymes and oxalic
acid, and they clearly demonstrated the importance of these virulence factors
in establishing disease, plus they added more details. This review summarizes
some of these findings that have occurred in the last 130 years on the molecular
aspects of S. sclerotiorum-host interactions.

1. Introduction macerate plant host tissue. Thus started the studies

Anton de Bary, the father of plant pathology,
was an amazingly observant individual. His extraor-
dinary curiosity and attention to detail led to many
discoveries and understandings of multiple plant pa-
thogen life cycles and behaviors. He studied many
plant pathogens and wrote extensively on several,
such as Sclerotinia sclerotiorum, much of which he
summarized in a series of weekly submissions to
a journal he co-edited with L. Just, the Botanische
Zeitung, in 1886 (de Bary, 1886; available for free
download at http://www.biodiversitylibrary.org/
item/ 105850# page/36/mode/1up) and in his com-
prehensive treatise summarizing his many observa-
tions of plant pathogens (de Bary, 1887). Although
he was light years away from the molecular revolu-
tion that would blossom nearly 100 years after his
death, de Bary successfully identified the two main
molecular factors affecting the ability of S. sclero-
tiorum to be a successful pathogen: the release of
oxalic acid (OA) and ferments (enzymes) that could
on the molecular interactions of S. sclerotiorum and
its hosts--over 130 years ago. Questions asked then,
are still being asked today. Why do the fungal hyphae
release OA, and what is in the fungal ferment that
could dissolve plant host cell walls? And similarly,
how is the plant responding to this aggressive, unin-
vited visitor and these toxic substances to which it i
exposed? What other molecules are involved? How,
and what, are the genes used by the pathogen and
host to create and control these molecular interac-
tions?
Anton de Bary was far ahead of his contem-
poraries, and it would be several decades after his
death in 1888 before scientists would make any fur-
ther substantial progress on the questions he expo-
sed. One of these reports of progress was a very nice
microscopic study by Boyle in 1921 (Boyle) where he
noted that the growing hyphae of S. libertiana (a sy-
nonym of S. sclerotiorum) were coated with a thick
mucilaginous/gelatinous sheath which he described

1
University of Illinois Department of Crop Sciences, 238 National Soybean Research Center, 1101 West Peabody Drive, Urbana, IL
61801, USA. 2USDA-ARS, National Soybean Research Center, 1101 West Peabody Drive, Urbana, IL 61801, USA.

174 RAPP - Volume 24, 2016

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)

as a substance released by the fungus that aided in
the attachment of the mycelia to the host surface.
He also observed, in disagreement with de Bary, that
the fungal hyphae appeared to mechanically force
their way past the plant cuticle. He further obser-
ved that once the cuticle is broken the walls of the
host cells near the point of penetration show signs
of being chemically altered. Interestingly, Boyle also
noted that the cells adjacent to an infected cell could
be negatively affected by the invading fungus as well,
presumably by fungal- or plant-released enzymes or
toxins:
Death of the cells extends some dis-
tance beyond the limits of the invading hypha,
due either to enzymes secreted by the fungus
or to the products of disorganized cells. The le-
thal substance or substances appear to diffuse
more rapidly along the palisade cells of the me-
sophyll than into the spongy parenchyma, as
the chloroplasts of the palisade cells for some
distance on either side of the point of infection
are swollen or disorganized, while those of the
spongy parenchyma immediately underneath
are still unaffected. This is evidently due to the
fact that the palisade cells are in closer contact
and hence allow a more rapid diffusion of the
lethal substance or substances than the cells of
the spongy parenchyma, which are in contact
at comparatively few points.
Although both de Bary and Boyle stated that
their studies suggested the release of plant-cell-wall
degrading ferments or enzymes, the actual identi-
fication of these molecular weapons would not start
until the late 1950s and 1960s. In the meantime,
plant pathologists successfully confirmed de Barys
assumption that S. sclerotiorum produced the toxin
OA. In de Barys work, the fact that the liquid sur-
rounding hyphae, or droplets released by sclerotia,
was acidic and would precipitate with calcium, it
was assumed that this liquid had to be OA (de Bary,
1886). In 1952, when Overell (Overell, 1952) found
that spent culture filtrates of S. sclerotiorum could
macerate carrot slices, he wanted to determine the
cause. He noticed that the maceration ability was pH
dependent and the macerating factor(s) was stable
after autoclaving. Through the use of paper chroma-
tography and similar calcium precipitation assays, he
identified OA as being present, at concentrations in
the 10s of mM in cultures that had grown up to 35
days. Overell also found that similar maceration sho-
wed up when carrot slices were soaked in pure OA in
a pH-dependent manner, with the best maceration
activities occurring at pH levels between 2.6 4.0 for
his studies. Therefore, he hypothesized that OA was
the cause of the deterioration, and that the different
ion forms of oxalate (Figure 1) were affecting the ma-
ceration, as OA would be mostly fully deprotonated
as the pH levels rose past 4, and it would be mostly
in the mono-basic ion form at pH 2.6 to 4.0 (oxalic
acid pKa1 1.2, and pKa2 4.2).
Interestingly, the levels of OA found by Ove-
rell were fairly similar to the levels found in cultures
of the close relative of S. sclerotiorum, Sclerotinia
rolfsii, by Higgins 25 years earlier (Higgins, 1927). Hi-
ggins identified large amounts of OA released from
S. rolfsii, reporting 0.3 3x more grams of OA as gra-
ms of mycelial dry when growing S. rolfsii in various
liquid media for 31 days, and estimated the oxalate
concentrations at 5-70 mM. Higgins, like Overell, also
used precipitation with known amounts of calcium
as a means to calculate the approximate amount

Figure 1. The molecular form of oxalic acid at different pH levels. The pH of the apoplast of plant cells is estimated to be
about 5.6, so during initial S. sclerotiorum infection, most of the oxalic acid entering the plant tissue into the apoplost
would be fully depronated. After continued fungal growth and acid release, the acidity could build up to levels that
would overpower any buffering capacity of the apolplastic fluids, and the pH would lower. The pH of S. sclerotiorum
infected tissue is often measured to be somewhere between 2 and 4, meaning that the oxalic acid would be mostly in
the mono-basic (mono-protonated) form.

RAPP - Volume 24, 2016 175

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
of OA in solution, as oxalate at pH levels above 1.2
readily binds calcium ions and precipitates from so-
lution (i.e., adding known amounts of calcium and
weighing the dried precipitate to estimate oxalate
molarity).
2. Investigations on S. sclerotiorum plant cell-wall-
-degrading enzymes (PCWDEs) calcium. In addition, OA lowers the pH (estimated as
As mentioned previously, since at least the
1800s, scientists have known that some cell-free ex-
tracts, termed ferments and later enzymes, could
stimulate chemical reactions to occur, but the link
between enzymatic activities and actual protein mo-
lecules was not made until the 1920s and 1930s,
with the 1946 Noble Prize in Chemistry awarded to
scientists who helped make this connection. There-
fore, in the 1950s enzymology was a popular resear-
ch focus for scientists, and many biologists, including
plant pathologists, were looking for enzymes. By
the 1960s, the plant pathologists studying S. sclero-
tiorum had clearly identified the release of peptidio-
lytic enzymes in cultures and in planta.
In 1957, Echandi and Walker (Echandi and
Walker, 1957) were the first to report the identifi-
cation of such PCWDEs from S. sclerotiorum. These
scientists identified both pectin methylesterase and
polygalacturonase activities from S. sclerotiorum
grown on wheat bran. These enzymatic activities
were destroyed by heating at 55C for 10 minutes.
The activity of these pectolytic enzymes was highest
at pH levels between 3 and 5, and the most optimal
at pH 4. Enzyme activities were reduced to 44% and
20% at pH 6 and pH 7, respectively. This work was
supported in planta, by analyzing S. sclerotiorum in-
fected tissues (Hancock, 1966). Hancock documen-
ted pectin methylesterase and polygalacturonase
activities in infected stem tissue, together with an
increase in stem acidity, with the pH dropping from
about 6.2 to 4.5 during his infection studies.
A very interesting study came out in 1965
by Bateman and Beer (Bateman and Beer, 1965).
Working on S. rolfsii, they noted the benefits of a pa-
thogen releasing both pectolytic enzymes and OA,
as they found that the effects of the enzyme func-
tion and acid were synergistically enhanced in the
presence of each other. They estimated that S. rolf-
sii culture filtrates contained up to 30 mM OA (80
mg/30 ml) after 6 days growth on carboxymethyl
cellulose (which they found to be a much better in-
176 RAPP - Volume 24, 2016
ducer of OA than glucose). Researchers found that
the activity of purified polygalacturonase was non-
functioning if the substrate was calcium pectate, the
form that is commonly found in plant cell walls, but
if OA was added to the assay, the pectate was degra-
ded, presumably due to the removal of calcium from
the calcium pectate by OAs proven ability to chelate
2.8 in their cultures), and they found that the optimal
pH for the polygalacturonase activity was between 3
and 4, a pH optimum similar to what Echandi and
Walker (1957) noted (see the previous paragraph).
They also noted that pH values below 4 could kill
plant tissue, without the presence of PCWDEs, and
that fluids from diseased lesions was near 4.0. They
therefore concluded that OA was most likely having
its negative effect on plant hosts due to both 1. bin-
ding and removal of calcium out of calcium pectate
to allow the polygalacturonases to function at maxi-
mal efficiency; and 2. to the general toxic effects of a
lowered pH.
The search for extracellular enzymes that
could factor into molecular plant-pathogen interac-
tions, and their detailed characterizations, continued
to be popular in the 1960s and for decades beyond.
Evidence for cellulose degrading enzymes was found
using paper, cotton or carboxymethyl cellulose as
growth substrates in the media (Hancock, 1967).
Marciano et al. (1983) detailed the roles of three
types of PCWDEs, polygalacturonase, cellulose, and
xylanase in virulence, together with the enhanced
effect of OA and its low pH. A survey of the ability
of extracellular fluids of a S. sclerotiorum culture to
degrade cell-wall polysaccharides was conducted by
Riou et al. (1992) in which enzymatic activity was de-
tected for the degradation of cellulolytic, hemicellu-
lolytic, and pectinolytic polysaccharides. Gel analysis
confirmed the presence of at least one pectinase,
beta-xylosidase, and cellobiosidase. Subsequent stu-
dies focused on characterizing the most effective
class of plant-cell-macerating enzyme released by S.
sclerotiorum: the endo-polygalacturonases (Fraissi-
net-Tachet, et al., 1995; Cotton, et al., 2002; Cotton
et al., 2003). The work of Favaron et al. (2004) su-
ggested that there are at least two different endo-
-polygalacturonases in S. sclerotiorum, each with a
different pH optimum for activity, with endo-PGa
being more active at lower pH values (from 3.6-5.0),
and endo-PGb more active at pH 4.5-5.0. In addition
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
to the endo-polygalacturonases, researchers also
conducted further detailed characterization of exo-
-polygalacturonases (Li et al., 2004). Other enzymes
found to be released by S. sclerotiorum include at le-
ast two endo-beta-1,4-glucanases (Waksman, 1991;
Chahed et al., 2014), at least two beta-glucosidases
(Issam et al., 2003) and at least one beta-galactosi-
dase (Waksman, 1989; Riou, et al., 1992a). The se-
arch for cutinases had been elusive, and there were
conflicting reports from microscopic studies as to
whether or not the cuticle was being enzymatically
degraded. Although the microscopy work of Boyle
(1921) did not show any evidence for cuticle degra-
dation, de Bary reported that he had seen evidence
of cuticle degradation, and in 2012, a cutinase was
finally identified (Bashi et al., 2012). PCWDEs have
complex roles and regulation, and Hegedus and Rim-
mer (2005) wrote an excellent mini-review propo-
sing how activation and repression of PCWDEs, as
well as sclerotia development, might be controlled
by a tri-phasic model for infection involving glucose,
cAMP, and pH levels that change during infection.
3. Mechanisms of OA and plant-Sclerotinia interac-
tion
This present review focuses on the effects of
S. sclerotiorum-released molecules, such as OA and
secreted enzymes (and their related genes), on the
plant host. Other reviews on S. sclerotiorum are also
available to the reader. Two excellent reviews were
published in 1979 as part of an APS Symposium of
Sclerotinia. Purdy (1979) described the various, so-
mewhat confusing, nomenclatures used to name
S. sclerotiorum, and gave a superb summary of big
picture aspects of this disease such as histology, di-
sease development and host range; Lumsden (1979)
summarized details on the physiological and histo-
logical changes that occur during S. sclerotiorum pa-
thogenesis. Lumsden put an emphasis on the role
of OA chelating important cations and producing a
gradient of lowering pH values, in conjunction with
the plant PCWDEs, and how these factors would
make the cells at the infection front more permea-
ble, and how that would lead to greater leakage of
nutrients for the fungus, thus weakening the host.
Another very good, comprehensive review (Dutton
and Evans, 1996) on the role of large quantities of
OA in plant diseases caused by numerous fungi, not
only explained how OA could enhance the efficiency
RAPP - Volume 24, 2016
of PCWDEs, but also emphasized the importance of
the ability of OA to strongly chelate biologically im-
portant cations such as calcium, iron, manganese,
magnesium, nickel, aluminum, and copper, affecting
their solubility and thus availability; also of impor-
tance is the effect of OA on destabilizing cytoplas-
mic and chloroplastic membranes, which would aid
in tissue maceration. For additional perspectives on
the molecular interactions between plants and S.
sclerotiorum, readers should also refer to the very
recent mini review by Mbengue et al. (2016).
3.1. Phenotypes of various OA-deficient mu-
tants
Looking at the pathogen side of this host-
-pathogen relationship, the reader can find several
very good papers on the effects of S. sclerotiorum-
produced OA on the fungus itself. As discussed be-
low, S. sclerotiorum produces and metabolizes OA,
which affects various aspects of fungal vegetative
growth, sclerotia development and pathogenesis.
To investigate the critical role of OA throughout the
life cycle of S. sclerotiorum, mutagenesis was used.
Mutants induced by ultraviolet light (UV) were scre-
ened for reduced OA production and these mutants
were found to be non-pathogenic on common bean
(Godoy et al., 1990). These mutants also did not pro-
duce sclerotia, and had low expression of pectinases
and cellulases, showing that sclerotia formation and
some PCWDEs, all required OA. In addition, the OA
deficient mutants provided some clues to the bio-
synthetic pathway for OA production, as the addition
of succinate to culture media led to the production
of some OA, showing the pathway could include suc-
cinate (i.e., the mutation might have occurred in an
enzyme of the biosynthetic pathway upstream of
succinate production).
An enzyme known to be involved in the syn-
thesis of OA is oxaloacetate acetylhydrolase (OAH,
EC 3.7.1.1), which is the enzyme of S. sclerotiorum
that converts oxaloacetate to OA and carbon dioxi-
de. OAH was knocked out by targeted gene replace-
ment via homologous recombination, leading to a
genetically defined mutant that accumulated no OA,
even under highly inductive conditions (Liang et al.,
2015). The radial growth rates of vegetative hyphae
of these mutants were observed to be almost equal
to wild type (WT) on potato dextrose medium bu-
ffered to pH 3.6, whereas growth was severely re-
177
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
duced when the medium was buffered pH 6.9. On
all media tested, the oah mutant, similar to the UV-
induced OA-minus mutants of Godoy et al. (1990),
could not form sclerotia, but mycelia were noted
to form some loose and unmelanized aggregates
as if some sort of futile effort was being made to
produce sclerotia. Moreover, the oah mutant was
also defective in compound appressorium forma-
tion on artificial surfaces. Complementation using
the WT OAH gene on a plasmid was able to fully
restore the radial growth rate and partially resto-
re sclerotia development at a low frequency, but
failed to regain the compound appressorium phe-
notype. The authors suggested that this failure
could possibly have resulted from inconsistences
in the regulation of expression of the transgene
OAH expressed from the plasmid, versus the WT
native expression, or perhaps it was due to the
non-reversing of an unknown epigenetic pro-
cess that occurred in the oah mutants that did
not allow for complementation. In another study
where oah mutants were generated either throu-
gh targeted gene replacement or T-DNA insertion,
involving a different strain (WMA1), again almost
no OA production was detected (Xu et al., 2015).
Interestingly, for these OA-mutants, the authors
observed some phenotypic behavior that differed
from those described by Godoy or Liang that were
generated using Sclerotiorum strain 1980. One diffe-
rence was observed when the authors ran high-per-
formance liquid chromatography and found that the
OA-minus mutants accumulated fumaric acid at high
levels compared to the WT. The production of fuma-
ric acid was not tested in the other reports on OA-
-mutants; however, one could assume that, if they
did produce fumaric acid, it would be at low levels
since the pH of the media for these mutants did not
go below pH 6 after 2 days growth, whereas the mu-
tants of Xu et al. reduced the pH of the media to just
above, or just below, pH 4 by 48 hours. Additionally,
the two mutants in the Xu et al. study were able to
produce sclerotia, (with some noted differences in
color and texture), whereas the Godoy and Liang
mutants could not. A third major difference betwe-
en this study on the WMA1-derived mutants and the
1980-derived mutants was that the WMA1-derived
mutants were quite effective in inducing necrosis
on multiple hosts, whereas the OA-minus mutants
of 1980 could not, or did so very poorly, and only
178 RAPP - Volume 24, 2016
if the plants were wounded first. It is not clear why
these differences occurred, and how much of the-
se differences are strain specific, but it does suggest
that there could be some unknown complexity in OA
metabolism and perhaps in OA-regulated genes, and
that the various OA-minus mutants affect these fac-
tors in different manners.
Another enzyme involved in OA metabolism
in S. sclerotiorum was also recently characterized--
the OA degrading enzyme oxalate decarboxylase
(ODC) (Liang et al., 2015). Deletion of one of the
two putative ODC genes led to hyper-accumulation
of OA and less efficient differentiation of compound
appressoria, implying that fine control of OA levels
regulates appressorium formation. No differences
in vegetative growth or sclerotia development were
reported for this odc mutant, probably because the
expression of the gene for this enzyme was detec-
ted only at mid to late stages of compound appres-
sorium formation. Although the physiological func-
tion of ODC in S. sclerotiorum still requires further
investigation, it is highly possible that this enzyme
is responsible for OA regulation at multiple develo-
pmental stages.
The various OA mutants allowed for more
detailed studies of the role of OA in disease deve-
lopment. Since the deletion of the oah gene caused
defective compound appressorium formation, which
makes it difficult for the pathogen to penetrate the
cuticle layer, Liang et al. (2015) performed wound
inoculations on a variety of hosts (including toma-
toes, soybeans and arabidopsis) to evaluate the role
of OA in pathogenesis. The results showed that the
oah mutant produced very limited leisions that were
brown, green in color and restricted by a thin,
dark border, while the WT produced light brown,
spreading lesions. Moreover, GFP labeling, along
with 3,3-Diaminobenzidine (DAB) and aniline blue
staining, was conducted to characterize the interac-
tion occurring in these different types of lesions. It
was observed that compared to WT hyphae, the GFP
fluorescence of mutant hyphae faded at 5 dpi and
the mutants elicited much more H2O2 accumulation
and callose deposition, indicative of stronger host
defense responses. These phenotypes indicated that
OA was a determinant virulence factor dampening
host defenses, and the critical role it played in patho-
genesis was further confirmed by the observation
that immersing the leaf petiole in OA (pH 5.8) par-
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
tially restored the virulence. However, in the study
of Xu et al. (2015), the oah mutant they generated
caused disease in a host-dependent manner, with
the virulence almost the same as the WT on faba
bean, yet only weakly pathogenic on soybean. They
concluded that these differential disease develop-
ments were related to differences in the buffering
capacity within the host plants. When inoculation of
oah mutants was conducted on green beans infiltrat-
ed with citriate-phosphate buffer at pH 4.2 , or with
non-buffered potassium oxalate (10 mM, pH 4.2),
virulence was recovered under the former treatment
but not the latter. The authors also identified a posi-
tive correlation between lesion size and decreased
pH in the infected tissues, and a negative correla-
tion between lesion size and host leaf tissue buffer-
ing capacity. Based on these evidences, the authors
proposed that the major contribution of OA was due
to its strong acidity rather than the oxalate. Howev-
er, considering the chemical similarty between cit-
ric acid (used as a buffer and for lowering the pH in
controls) and OA: both are small organic acids that
strongly bind divalent cations at physiological pHs;
citric acid pKa1 3.1, pKa2 4.8 and pKa3 6.4, other
functions of OA besides its acidity, such as the chela-
tion of cations, cannot be dismissed. Also, the fact
that the OA mutants produced excess fumaric acid
clouds the interpretations.
3.2. Molecular and physiological studies on
the functions of OA secreted into hosts
Although the fungal-released proteins, in the
form of enzymes, effectors and necrosis-inducing
proteins/peptides, have a real influence on disease
development, many view that the most beneficial
virulence factor of S. sclerotiorum to be OA, and the-
refore numerous studies have focused on the role of
OA in the physiology of molecular plant-pathogen in-
teractions. For example, it was shown that OA incre-
ased stomatal opening in Arabidopsis, presumably
benefitting the pathogen by facilitating the entran-
ce of OA into the host apoplast (Stotz and Guimara,
2004). As introduced above, the acidity of OA and
its chelation properties can produce visual effects on
the plant host, but what is it doing at the molecular
level? A study in 1988 (Favaron et al., 1988) detailed
a defense activation in soybean in response to puri-
fied polygalacturonase and OA. Within 20 minutes of
treatment, measurable amounts of the phytoalexin
RAPP - Volume 24, 2016
glyceollin were induced by two of the four polyga-
lacturonases tested, as well as by millimolar levels
of OA, with 5 mM being the most effective; 10 mM
OA actually gave a 20% reduction in the induction le-
vels as compared to 5 mM. In an actual infection, OA
concentration ranges from very low to high (80 mM
to be the highest reported), thus a dynamic picture
of how OA molecules impact the host cells across a
given region of tissue, seems probable.
An essential role proposed for OA is to mo-
dulate the rapid host reactive oxidative burst (ROS),
one of the earliest and most universal hallmarks of
plant defense (Cessna et al., 2000). Inoculation of an
OA-deficient strain on tobacco leaves led to conside-
rable ROS as measured by oxidation of nitroblue te-
trazolium, while there was no obvious ROS increase
caused by the WT strain. The result suggested that
OA has a role in suppressing ROS in the plant host.
Further experiments were performed to explore
the mechanism of this inhibition, revealing that the
acidity and chelation of cations, two highly popular
hypothetical roles for OA in S. sclerotiorum pathoge-
nesis, did not appear to be largely accountable for
inhibition of ROS. Several additional observations in-
dicated a potential target site of OA was downstream
of the defense-associated Ca2+ influx, but upstream
of the oxidase complex that produces H2O2 and ROS.
However, the exact molecular targets of inhibition
remains unclear. Another study proposed a potential
explanation for this inhibition using a plant-based
redox sensing GFP system (Williams et al., 2011). It
was determined that S. sclerotiorum, by secreting
OA, creates a transient reducing environment rapi-
dly in plant cells after infection, which compromises
the host ROS burst and other host basal defense
responses such as callose deposition. By contrast,
an OA-deficient mutant produced hypersensitive-
-like lesions characterized by restricted growth and
cell death. Consistent with the first study, this redox
alteration of the host cells was also shown to be in-
dependent of acidity. The underlying mechanism of
manipulation of host redox status was proposed by
the authors as involving key redox molecules such as
thioredoxins, leading to the inability to form normal
conformational changes of many redox-sensitive sig-
naling components in the activation of plant defen-
ses.
The defining characteristic of a necrotro-
phic fungus like S. sclerotiorum is to kill plant cells
179
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
and then obtain nutrients from the dead host for its
own use. In this sense, plant programmed cell death
(PCD), which is a strategy that plants use to achieve
complete resistance to some biotrophic pathogens,
may be beneficial to the pathogenesis of S. sclerotio-
rum. OA was suggested to induce apoptotic-like PCD
in hosts, thus facilitating the disease development
(Kim, et al. 2008). DNA fragmentation, which is a fea-
ture of apoptotic-like cells in mammals, was possibly
observed in DNA extracted from tobacco leaf discs
36h after treatment with S. sclerotiorum WT culture
filtrate, and from infiltration with different formula-
tions of oxalate, while it was not obvious in water
and other acids such as citric acid, HCl and succinic
acid. The previous study involving soybean suspen-
sion cells showed that OA inhibited ROS (Cessna
et al. 2000); however, in contrast, for this study on
tobacco discs, oxalate induced ROS generation and
triggered PCD. The tobacco disc assay showed that
OA could elicit PCD and ROS production only in a re-
latively higher pH (5 to 6) milieu, while at lower pH
values (3 to 4), neither DNA laddering nor ROS pro-
duction was significantly detected. The mechanisms
of PCD were further explored (Kabbage et al., 2013)
and was found that plant cell death in response to
S. sclerotiorum may be triggered by either apotosis
or autophagy, and the OA affects this outcome. OA
by itself seems to induce apoptosic PCD (Kim et al.,
2008), but in an OA minus mutant, PCD seemed to
result from autophagy, and the presence of OA su-
ppressed this autophagic cell death (Kabbage et al.,
2013). Autophagy is being associated with plant host
responses to other necrotrophic fungi as well (Lai et
al., 2011).
A comparative transcriptomic study of soybe-
an leaves infiltrated with 5 mM OA versus HCl-aci-
dified water revealed that one of most significantly
up-regulated genes at 2 hours post infiltration inde-
pendent of acidity, was ferritin, which forms comple-
xes to safely store toxic iron ions within cells (Calla,
et al., 2014a). The fact that ferritin was so strongly
induced could have indicated an increase in free iron,
presumably released from iron-binding components
in cells by OA, a strong chelator of iron. The authors
proposed that the loss of iron from enzymes contai-
ning cytochrome co-factors, such as the cytochro-
me P450s involved in secondary metabolism, would
greatly weaken the ability of the host to produce an
active defense. They also suggested that the loss of
180 RAPP - Volume 24, 2016
iron from the electron transfer components of the
mitochondria and chloroplasts, could lead to high
accumulation of ROS, such as when light stimulates
chloroplast photosystem centers under low electron
flux (Zhu, et al. 2105; Zhu, et al., 2015). In spite of
all the circumstantial evidence, precise mechanisms
connecting OA and the observed inductions of ROS
and PCD is still lacking.
If OA can both suppress the oxidative burst
and elicit PCD through stimulating the generation
of ROS, the question becomes How does OA work
to coordinate these two functions which seem to
contradict each other? One possibility suggested
by Kim et al. (2008) was that the induction of PCD
was time and dose dependent, supported by the ob-
servation that no significant difference of cell viabil-
ity of tobacco leaf disks was detected between the
treatment of 20 mM potassium oxalate and water
until 48 h post-treatment, with the time point be-
ing delayed at a lower concentration of potassium
oxalate of 10 mM. With retrospect to the Cessna et
al. study (2000) on the effect of OA on the oxidative
burst, 4 mM was found to be the median inhibitory
concentration, and the inhibition was detected with-
in 10h of treatment, a time much earlier than 48h.
Thus, it is tempting to speculate that in the early in-
fection stage, when OA is at a lower concentration,
OA is more responsible for reducing host oxidant
production, but in the later infection stage and at a
higher concentration, it is more responsible for in-
ducing PCD. Another possibility is related to the pH
dependency exhibited by OA manipulating ROS pro-
duction. It was suggested that the extracellular pH
pertubations had a fast and strong effect on vacuolar
pH while the cytoplasmic pH remained relatively un-
disturbed (Horn et al., 1992). Moreover, histological
investigation of S. sclerotiorum infection process re-
vealed that OA could be metabolized or transferred
to host vacuoles in early infection stage (Heller and
Witt-Geiges, 2013). Combining this information, it is
not unreasonable to postulate that dual functionali-
ty of OA could be executed associated with different
cellular compartmentalization of OA during different
stages of infection, in addition to varying concen-
trations in and near the infection zone. In the early
infection stage, OA would presumably exist mainly
in the apoplast or host vacuoles where the pH de-
creases rapidly, and the oxidative burst is inhibited.
When the concentration of OA increases, OA gra-
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
dually accumulates in the cytoplasm where the pH
is higher than apoplast and the vacuole, but within
the optimal range for PCD induction. This speculati-
ve model would also explain, to some degree, why
the PCD was elicited at a relatively later time during
infection.
3.3. A proposed hemibiotrophic lifestyle
for S. sclerotiorum
The secretion of OA from S. sclerotiorum ini-
tially suppresses host immune response and later
enhances cell death, which suggests that for a his-
torically defined necrotrophic fungus, its strategy
of infection may be much more intricate than just
brutally imposing toxins and PCWDEs. Recently it
has been proposed that S. sclerotiorum is actually a
polyphagous plant pathogen that transitions from
biotrophy to necrotrophy during pathogenesis
(Kabbage et al., 2015). It was observed that the
primary hyphae of S. sclerotiorum killed tobacco
cells during the initial 12 hours of infection, but
soon thereafter the pathogen employed clever
strategies to avoid host recognition and host resis-
tance during this early infection period, similar to
the behavior of biotrophic rust pathogens. Follo-
wing this stealth period, after about 12 hours post
infection, S. sclerotiorum entered a necrotrophic
phase by triggering rapid cell death (and possibly
PCD) of plant cells, while at the same time, the
leading invasive hyphae still maintained a biotro-
phic state. By contrast, microscopy of the infection
of a model necrotrophic fungus, Botrytis cinerea,
revealed that the hyphae were always associated
with dead cells. Moreover, the OA-deficient mu-
tant was not able to suppress host defense ef-
fectively and instead induced host cell death rap-
idly, thus also leading to the restriction of hyphal
growth only in the dead cell area. It was concluded
by the author that the initial biotrophic-like stage
was critical to establishment of S. sclerotiorum pa-
thogenesis (Kabbage et al., 2015).
3.4. Evaluation of S. sclerotiorum-resistant
transgenic lines
Another approach to study the effects of
OA is to look at transgenic plants that degrade OA,
such as the use of the addition of oxalate oxidase
(OxO), an enzyme that catalyzes the degradation
of OA. For example, an OxO soybean transgenic
RAPP - Volume 24, 2016
line carrying the wheat germin transgene (gf-2.8)
coding for OxO, conferred resistance to S. sclero-
tiorum (Donaldson et al., 2001). When attached
flowers were inoculated, an OxO line was able to
reduce OA levels and greatly inhibit ingress of the
fungus, and the disease symptoms largely remai-
ned at the flowers; whereas in the non-transgenic
parent (WT), the disease progressed rapidly, spre-
ading to the main stem and beyond (Davidson et
al., 2016). The authors concluded that the barriers
to fungal invasion in the OxO transgenic tissue
appeared to be living green tissues, (i.e. the pe-
duncle, petiole, stem and leaf tissue) where OA
was required to condition the tissue for coloni-
zation. They also measured OA levels during the
infection period, and found that fully infected WT
flowers contained about 3 mM OA. Davidson et al.
(2016) also used infected, detached flowers, fully
covered with visible mycelia, to inoculate leaves in
a manner that mimics how soybean plants might
be infected in the field (i.e. ascospores infect flo-
wers, and an infected flower that has landed onto
a leaf leads to infection of that leaf). Interestingly,
when detached flowers were inoculated (such as
those to be used in the leaf inoculation studies), both
OxO and the WT were equally fully infected with vi-
sible mycelia covering the flowers within 3 days, and
yet when the inoculation was on a flower that was
attached, it took about 6 days for this stage to be
reached for the WT. This heavy mycelial growth was
almost never seen for the attached flowers of the
OxO inoculated plants, showing that, although the
attached living flower was able to be infected, this
tissue was more resistant than when this same floral
tissue was detached and presumably dying. It was
also shown that the reduced levels of OA in the OxO
infected detached flowers was not effective in pre-
venting the fungus from taking over the flower, whe-
reas the reduced OA levels in the attached OxO flo-
wers was effective, showing that the plants do have
the ability to defend against this pathogen in healthy
living tissue if the OA levels are reduced. Inoculated
detached leaves behaved similarly to inoculated at-
tached flowers in that the OxO transgenics showed
strong resistance, whereas the WT did not. Howe-
ver, that resistance did not become apparent until
the second day post inoculation as hyphae emana-
ting from infected flowers spread in large networks
above and below the leaf cuticle and infiltrated the
181
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
cortical tissue of both hosts. Following the initial 24
hours, the OA levels remained fairly constant, remai-
ning at the day 1 level for the OxO transgenic, and
the lesion did not spread much beyond 1-3 cm du-
ring the 6 day study. However, in the leaves of the
non-transformed parent, the OA levels increased
and the leaves were completely overtaken with fun-
gal growth by 4-6 days post inoculation. The authors
concluded that their results showed that fungal host
interaction is a two-phase process. Phase I occurred
on both hosts but Phase II proceeded only on the
WT parent, indicating that host colonization requires
high levels of OA in order to proceed, and converse-
ly, Phase I may require a lower level of OA or possibly
OA may not be involved and that factors other than
OA have a role during primary lesion formation.
4. Secretory proteins from S. sclerotiorum
As discussed above, S. sclerotiorum has been
shown to release large amounts (up to tens of mM) of
toxic OA, as well as numerous PCWDEs, to aid in the
colonization of its host. Although this seems like an
abundance of weapons, apparently it is only a frac-
tion of the possible arsenal released from this patho-
gen. In addition to the handful of well-characterized
PCWDEs, it has been reported that S. sclerotiorum
releases many other proteins that can influence di-
sease progression. Several potential effectors were
identified to facilitate necrotrophic colonization by
causing host necrosis or plant cell death (PCD). Zup-
pini et al. (2005) discovered that an endo-polygalac-
turonase (endo-PG) could modulate host cytosolic
Ca2+ signaling, in aequorin expressing soybean cells
leading to PCD characterized by chromatin conden-
sation, apoptotic nuclei and activation of the cyto-
chrome c/caspase 9 pathway. However, this study
did not provide evidence to show that the effects of
endo-PG on host cells were independent of cell-wall
-degrading abilities. Subsequently, a protein (IPG-1)
containing a C2 domain (a Ca2+-regulatory domain) in
canola was proposed to be a potential target in host
cells for sspg1d, one of the endo-PGs of S. sclerotio-
rum, since these two factors were observed to inte-
ract with each other both in vivo and in vitro during
early infection (Wang et al., 2009). Moreover, this
protein presented a dynamic subcellular localiza-
tion from the plasma membrane to the cytosol, both
before and after Ca2+ ionophore treatment. Althou-
gh the mechanism of function of endo-PG to be an
182 RAPP - Volume 24, 2016
effector is unclear, the authors postulated that the
interaction between the endo-PG and IPG-1 could
interfere with the successful binding of IPG-1 and
Ca2+, thus promoting PCD. Two recent studies repor-
ted a secretory protein with a putative Ca2+-binding
EF-hand motif, Ss-caf1, and a cysteine-rich small se-
cretory protein, SsSSVP1, to be possible effectors of
S. sclerotiorum (Xiao et al., 2014; Lyu et al., 2016).
Both of these proteins were closely associated with
virulence, and their transient expression in tobacco
leaves led to cell death. The Ss-caf1 gene was iden-
tified by T-DNA mutagenesis isolate Sunf-M, and the
resulting mutant called Sunf-MT6. The mutation cau-
sed Sunf-MT6 to loose the ability to form compound
appressoria, and the ability to induce lesions without
first wounding. Sunf-MT6 produced fewer but larger
sclerotia, and produced more OA than Sunf-M. Com-
plementation studies supported that loss of Ss-caf1
was responsible for the changes in phenotype.
Some of the secretory proteins may play im-
portant roles in modulating host defense responses
during different phases of infection or transition of
lifestyles for S. sclerotiorum, similar to OA as discus-
sed above. Zhu et al. (2013) found that SSITL, an
integrin-like protein, could be a potential effector
protein that suppressed host resistance during initial
biotrophy-like stages of infection. The expression of
this gene was characterized as being highly induced
at 3 days when S. sclerotiorum was grown on PDA
medium, and at 1.5 to 3.0 hours post inoculation
(hpi) on Arabidopsis, suggesting that it could be in-
volved both in sclerotial development and pathoge-
nesis. Immunogold labeling suggested its secretion
into both fungal cell walls and host extracellular
matrix, while immunofluorescence showed its re-
lease through the hyphal tips, supporting its role
as an effector for early infection. SSITL silenced
transformants of S. sclerotiorum by RNAi tech-
nology exhibited a range of abnormal vegetative
growth and significant reduction of virulence on
Brassica napus. More interesting, further investi-
gation of the mechanism showed that this poten-
tial effector could delay the induced expressions
of PDR1.2 and PR1, constituents of jasmonic acid
(JA) and salicylic acid (SA) signaling pathways, res-
pectively. Since the interference with host defen-
se responses is critical for establishment of infec-
tion (Kabbage et al., 2015), it is probable that S.
sclerotiorum possesses other effectors. This emer-
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
ging topic is worthy of further investigation.
Bioinformatic approaches can facilitate
identification of putative effector candidates. A
broad analysis of the S. sclerotiorum genome se-
quence data suggested over 600 secreted pro-
teins, based on the N-terminal leader peptides
predicted by SignalP and elimination of genes co-
ding for carbohydrate-active enzymes and pepti-
dases (Amselem et al., 2011). Using the same da-
taset, another study initially identified more than
700 proteins in the predicted secretome, but then
narrowed the candidate list down to 486 proteins,
based on their expressions in planta, by referring
to the published EST and microarray data (Guyon
et al., 2014). Moreover, looking for proteins that
possessed conserved fungal effector domains,
exhibited signatures of positive selection, had re-
cent gene duplications, and were S. sclerotiorum
specific yet showed analogies to known protein
fold in predicted 3D structure, reduced this candi-
date list to just 78 effector candidates. The authors
highlighted a predicted subtilisin inhibitor and three
S. sclerotiorum-specific toxin-analogous proteins for
further functional investigation. Considering the re-
lease of all these proteins with numerous functions,
in addition to the release of the multi-functional OA,
the host plant faces numerous challenges!
5. High-throughput gene expression studies on
Sclerotinia-host interactions
In attempts to obtain a more comprehensive
view on Sclerotinia-host interactions, several studies
on high-throughput transcriptome expression were
conducted as these analyses shed light on possible
molecular and biological processes involved in both
pathogenesis and plant defense. As early as 2007,
two studies were published using an Arabidopsis
thaliana microarray platform consisting of 26,000
Arabidopsis genes to characterize the transcriptomes
of Brassica napus L. in response to S. sclerotiorum
(Zhao et al., 2007; Yang et al., 2007). Although the
genome sequence was not fully covered with these
early microarrays, both studies identified more than
1,000 differentially expressed genes after infection.
These results suggested the majority of genes signifi-
cantly up- or down-regulated were involved in plant
signal transduction, pathogenesis-related proteins,
ROS metabolism and cell wall integrity. With the
development of microarray slide libraries for many
RAPP - Volume 24, 2016
plants, the study of S. sclerotiorum-plant interactions
was extended to other hosts. In 2009 a soybean-S.
sclerotiorum study, profiled the transcriptomes of
stem tissues from a partially resistant and a suscep-
tible soybean genotype at 8 and 14 hpi using soybe-
an cDNA microarrays (Calla et al., 2009). The results
from this soybean study showed much overlap with
the results from the B. napus study, suggesting a re-
latively conserved behavior of plants in response to
S. sclerotiorum. Among the 1,270 genes that were
significantly differentially expressed between time
points, 30 genes were related to cell wall modifica-
tion and 42 genes were related to direct defense pro-
cesses including several apoptosis-related, putative
R genes with LRR domains and pathogenesis-related
genes. Notably, about 120 genes were identified as
early signal transduction pathway components, with
a significant number of them participating in G-pro-
tein mediated signaling, inositol signaling and the wi-
dely reported ethylene (ET) signaling pathways. Ho-
wever, it was pointed out that the inositol signaling
genes were reduced in abundance between 8 and 14
hpi leading to suggestion that inositol signaling may
be activated during the earliest stages of infection.
Thirty-two genes coding for enzymes on the phenyl-
propanoid pathway showed significant up/down-
-regulation across the time points, suggesting this
to be a major pathway for secondary metabolism in
defense to S. sclerotiorum in soybean. An interesting
pattern was found for genes involved in isoflavonoid
and anthocyanin biosynthesis, as two of the three
sub-pathways of the phenylpropanoid pathway were
induced, while all the differentially expressed genes
in lignin biosynthesis showed reduced expression le-
vels. The authors proposed that reducing the lignin
biosynthesis could divert substrates to the other two
sub-pathways, thus contributing to defense. In addi-
tion to the responses similarly displayed in both ge-
notypes, 105 genes were significantly differentially
expressed between genotypes. The genes in this list
suggested that partial resistance during early infec-
tion could be associated with cell wall reinforcement
such as papilla formation and secondary metabolite
including anthocyanins and anthocyanidins.
The OxO transgenic soybean material descri-
bed above (Donaldson et al. 2001; Davidson et al.
2016) was used in two high-throughput gene ex-
pression studies to investigate the physiological ba-
sis of soybean defense to S. sclerotiorum. The first
183
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
study (Calla et al., 2014b) used soybean leaves of
this transgenic genotype (OxO) and its susceptible
non-transgenic parent genotype (AC) sampled at 12,
24 and 36 hpi using fully colonized detached flowers
as inoculum. Although OA secretion was reduced
in the transgenic line, the comparative transcrip-
tomic data showed that many of the same sets of
genes had changed similarly in the same direction
across genotypes, such as genes related to the cell
wall, ethylene and jasmonic acid signaling pathways,
phenylpropanoid pathway components, and WRKY
transcription factors indicating that a basal defense
was activated similarly in both genotypes, but was
somewhat more robust in the resistant OxO transge-
nic. This quantitative nature of difference between
compatible and incompatible interactions was also
documented for plant responses to Pseudomonas
syringae (Tao et al., 2003; Zou et al., 2005). Des-
pite large similarities, the OxO genotype showed a
higher level of up-regulation for many genes from
12 hpi to 24 hpi compared to AC genotype, but then
dampened off at 36 hpi. The genes that exhibited hi-
gher induction in OxO included several PR proteins,
secondary metabolism-related genes and matrix
metalloproteinases. Among genes with significantly
reduced expression over time, the number of genes
in the AC genotype was about five times as many as
that in OxO. Evidence supporting this pattern came
from photosynthesis-related genes, with 75% genes
more reduced in AC than in OxO. Eight of the ten
genes showing the highest difference in the direc-
tion of expression change across the two genotypes
were associated with photosynthesis or the redox
state of the cell; this suggested that OA had the ca-
pacity to modulate the plant cell redox environment
(perhaps involving chloroplasts) for successful disea-
se establishment, as also proposed by Williams et al.
,(2011). This study also investigated the differential
expressions of critical enzymes in the lignin biosyn-
thesis pathway and found gene expression was in-
duced for lignin-related enzymes, a result conflicting
with the stem-inoculation study (Calla et al., 2009).
The opposing results could be due to different tis-
sues (stem versus leaf) or different time points, but
this requires further investigation.
Another study using AC and OxO soybean
germplasm characterized the role of pure OA (no
fungus) in the S. sclerotiorum-soybean interaction
(Calla et al., 2014a). Soybean leaves from the two
184 RAPP - Volume 24, 2016
genotypes were infiltrated with 5 mM OA at pH 2.4,
water at pH 2.4 (pH adjusted with HCl, an acid that
does not have any chelating properties), and water
at pH 5.5; the transcriptome was characterized at 2
hpi. In agreement with other studies on the impor-
tance of the low pH property of OA for successful
S. sclerotiorum infection (Xu et al., 2015; Favaron et
al., 2004), most genes (>1000) showed statistically
significant expression changes in response to OA
at pH 2.4 versus water at pH 5.5. Many genes indu-
ced by OA at pH 2.4 were closely related to basal
defense and overlap with those identified in the S.
sclerotiorum-infection study described above (Calla
et al. 2014b). For example, the phenylpropanoid pa-
thway, cytochrome P450 and glutathione S-transfe-
rases, peroxidases and PR proteins were all induced.
When looking into the effects of OA independent of
low pH (by comparing expression changes in leaves
in response to OA at pH 2.4 versus water at pH 2.4)
there were 78 genes considered significant, suppor-
ting that OA is affecting the host through its chemical
nature, not just low pH. Notably, eight of the genes
that changed independent of pH coded for ferritin
or ferritin subunits. The induction of ferritins was
confirmed by an additional non-replicated RNA-Seq
experiment conducted to verify the microarray data.
As RNA-Seq advanced the coverage of transcripto-
me, other iron-related genes were also identified as
being induced by OA, such as a cytochrome b561
and ferric reductases/oxidases. Based on the obser-
vations of both datasets, and as mentioned above,
the authors proposed that OA released by S. sclero-
tiorum might be chelating iron out of ferritin, as well
as out of other iron-containing cellular components
in the host, weakening defense, and enhancing
cell death. Interestingly, the author noted that no
ferritin genes were significantly induced by infection
of the pathogen (Calla et al., 2009; Calla et al., 2014),
suggesting that the OA is releasing iron; however,
when the fungus is present, the fungus is taking up
the iron before it accumulates to the threshold levels
needed to trigger ferritin gene expression. These ex-
pression studies again show the complexities of the
S. sclerotiorum host interactions.
A higher-resolution and more comprehen-
sive transcriptomic analysis using RNA-Seq was
conducted a transcriptome analysis to compare
a resistant (R) and a susceptible (S) line of Bras-
sica napus (Wu et al., 2016). They identified more
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)

than 9,000 genes showing significant differences
between the two genotypes, consisting of about
6,000 genes up-regulated and 3,000 genes down-
-regulated in the R line compared to the S line.
Gene ontology enrichment analysis indicated the
potentially important roles of genes responding
to chitin, cadmium ion and hydrogen peroxide in
the defense response. In the R line, genes involved
in glycolysis were significantly up-regulated while
genes involved in starch biosynthesis were down-
-regulated, suggesting B. napus switched from the
anabolic to the catabolic state to provide energy
or substrates for defense. Taking advantage of the
high coverage of RNA-Seq, this study also systema-
tically and thoroughly characterized the regulation
of a variety of biological pathways by searching
the B. napus genome for homologs of genes iden-
tified for these pathways in Arabidopsis. Through

Figure 2. Postulated dynamic molecular events occurring in early and late host-S. sclerotiorum interaction stages. Most
pathways shown here were also mentioned in the text, with some literature to support their assumption. Red: fungal
molecules; blue: host molecules or components; brown arrows: fungal activities or negative impacts on host cells; blue
arrows: host defense response that should benefit host defenses; dashed arrow: unknown pathways could be invol-
ved. PCWDE: plant cell-wall-degrading-enzymes; OA: oxalic acid; PG: polygalacturonase; DAMPs: damage-associated
molecular pattern; MAMP: microbe-associated molecular pattern; PRR: pattern recognition receptors; ETC: electron
transport chain; ROS: reactive oxygen species; PCD: programmed cell death. PCWDEs (A) PCWDEs are enhanced by OA
in several ways. Endo-PGs, as one example, generates DAMPs by degrading cell walls and also interferes with IPG-1 and
calcium signaling, contributing to PCD. In early events, under low OA conditions, the host initiates defense responses
including MAMPs triggered defense signaling pathways (D), transcriptions of host defense-related genes and calcium
influx (F) into cytoplast that induces host oxidative burst and possible autophagy. However even at low concentrations
of OA, many of the diverse defense responses become more and more suppressed by OA (B) leading to reduced calcium
signaling, inhibited callose deposition, modulated redox that suppresses the oxidative burst, and the chelation of va-
rious cations that are needed by numerous host enzymes for healthy metabolism. In later events, as OA concentrations
continue to increase, not only is the host defense further weakened, but also host PCD is elicited by accumulated high
concentrations of OA (G) perhaps stimulating ROS by chelating iron out of the ETC. Other secretory proteins (C) function
by either suppressing host defense in early events or inducing cell death in later events.

RAPP - Volume 24, 2016 185

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
this method, the networks of many genes were
depicted and a more detailed comparison betwe-
en two genotypes was presented, involving RLK-
-mediated pathogen recognition, MAPK signaling
cascades, WRKY transcription regulation, glucana-
ses and chitinases, hormone signaling pathways
and glucosinolate synthesis. The authors noted
a pattern where the R line induced a more dra-
matic basal defense response, in agreement with
the conclusions of the soybean microarray study
(Calla et al., 2014b). Interestingly, in addition to
the large induction of JA and ET that were widely
reported for plant defense to S. sclerotiorum, the
SA, auxin, abscisic acid (ABA) and gibberellic acid
(GA) pathways exhibited noticeable inhibition in
both genotypes. However, the cross-talk between
different hormone-related pathways may be more
complex. Stotz (2007) and Zhu et al., (2013) eva-
luated the expression of PR1 (an SA-responsive
gene) in Arabidopsis after inoculation and both
studies noted a negligible induction. Moreover,
the Arabidopsis npr1 mutant (defective in SA sig-
naling) was found to be hypersusceptible. Several
auxin-related genes were identified as significan-
tly induced in response to OA infiltration or S.
sclerotiorum infection (Calla et al., 2014a; Calla et
al., 2014b). Thus there is a possibility that the plant
defense to S. sclerotiorum may also involve the SA
and auxin pathways, but the detailed mechanisms
await further investigation.
6. Conclusions
From de Barys keen observation of the se-
cretion of PCWDEs and OA, studies on S. sclero-
tiorum continued to focus mainly on these traits
for more than 100 years. This review presents the
story of how scientists have succeeded to delve
deeper towards understanding these two factors,
with additional new revelations and details. The
review also shows how pathologists working on
S. sclerotiorum-host interaction kept up with the
revolutions in science and utilized the new tech-
nologies as they emerged, including new metho-
ds from basic physiology, biochemistry, molecu-
lar biology and bioinformatics. Through these
diligent efforts, a variety of PCWDEs have been
identified, multiple functions of OA have been
explored, a potential life phase transition for the
pathogen has been proposed, and other disease-
186 RAPP - Volume 24, 2016
-contributing factors have been characterized. On
the host side, extensive defense responses at the
gene level have been investigated to enhance our
understanding of quantitative plant resistance to
S. sclerotiorum and to provide options for better so-
lutions in disease control. However, this review has
also shown that many aspects of the S. sclerotiorum-
host molecular interactions still remain unresolved
and debated. Therefore, the research continues at a
rapid pace to further understand these dynamic and
complex host-pathogen systems. Figure 2 diagra-
ms a proposed summary of some of the events that
might be occurring during S. sclerotiorum infection,
much of which was discussed in this review and is at
least partially supported by the literature.
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