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Efeito das mudanças climáticas no sistema de defesa das plantas

Chapter · December 2016

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3 authors, including:

Mateus Freitas Marciel J. Stadnik

Federal University of Santa Catarina Federal University of Santa Catarina
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Defense mechanisms involved in resistance Phaseolus vulgaris to Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli View project

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RAPP - Volume 24, 2016
 I

RAPP
RAPP
RREVISÃO A NUAL DE
RAPP
EVISÃO ANUAL DE
PPATOLOGIA D E PLANTAS
ATOLOGIA DE PLANTAS
REVISÃO A23,NUAL
Volume 24,
Volume 2016
2015
DE
PATOLOGIA DE PLANTAS
Volume 23, 2015

Valorize sua formação profissional,

seu futuro e sua consciência.

Valorize sua formação profissional,

RAPP - Volume 23, 2015 seu futuro e sua consciência.

RAPP - Volume 23, 2015

II RAPP - Volume 24, 2016

 REVISÃO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS
COPYRIGHT© REVISÃO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS
2016

RAPP
REVISÃO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS

Nenhuma parte desta publicação poderá ser reproduzida sem prévia

autorização, por escrito, do editor.

RAPP - REVISÃO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS

SGAS 902 Bloco B Salas 102 e 103
Edifício Athenas Asa Sul
Brasília DF Brasil
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Site RAPP: rappsbf.weebly.com

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Gráfica Diagrama

RAPP - Volume 24, 2016 III

 RAPP

VOLUME 24, 2016

COMISSÃO EDITORIAL

Edson L. Furtado
Fernando Cezar Juliatti
Francisco Murilo Zerbini
Mario Lúcio V. Resende
Marcos A. Machado
Sérgio F. Pascholati

RONALDO J. D. DALIO

Editor chefe
RAPP

Uma publicação da REVISÃO ANUAL DE PATOLOGIA DE PLANTAS

Brasília DF
ISSN 0104 - 0383

IV RAPP - Volume 24, 2016

 EDITORIAL

Renovar para avançar

T oda a comunidade da fitopatologia brasileira concordará que a Revisão Anual de Patologia de

Plantas se incorporou definitivamente como obra de referência para todos os profissionais e
estudantes que atuam nessa área. Com seus capítulos atualizados e abrangendo não só assuntos
específicos do Brasil, mas de toda a ciência da fitopatologia ela, juntamente com a Tropical Plant Pa-
thology e a Summa Phytopathologica, consolidam e difundem informações científicas e tecnológicas
essenciais para o avanço ainda maior da agricultura brasileira.
Ao ser definitivamente incorporada à Sociedade Brasileira de Fitopatologia a RAPP tornou-
-se institucional e passa a ter abrangência maior, sendo uma publicação que continuará consolidando
assuntos atuais e importantes. Ao ser disponibilizada eletronicamente ela segue a tendência irre-
versível de publicações científicas. Quando se tornar completamente aberta seu índice de citação
aumentará expressivamente.
Seu novo formato editorial demonstra leveza e alinha-se com outras publicações de revi-
sões. Melhoria contínua no conteúdo e formato sinalizará que ela está no caminho de ser compara-
da, em futuro próximo, às melhores publicações do gênero. É evidente que a comunidade científica
que mantém dinâmica e competitiva a Fitopatologia Brasileira está mais que habilitada a enriquecer
e elevar o nível das revisões publicadas pela RAPP.
Como toda área da ciência, a Fitopatologia defronta-se com desafios crescentes, principal-
mente face às questões relacionadas a sustentabilidade de produção agrícola, aumento e agrava-
mento de problemas fitossanitários e a problemas ambientais, principalmente aqueles associados
a mudanças climáticas, cada vez mais determinantes na agricultura. A resposta a isso deverá vir na
forma de novas tecnologias de manejo, novos cultivares e novas tecnologia de produção. O caminho
para todos esses desafios passa necessariamente pela ciência da Fitopatologia. Avanços somente
podem alcançados se o caminho da ciência for mantido e fortalecido. Fora disso não há milagres. A
RAPP a medida que seguir o caminho da qualidade de suas revisões deverá contribuir em muito para
que os avanços se concretizem.
A RAPP passa também a adotar o sistema de trabalho com revisão submetidas ao invés
de revisões convidadas. Com isso espera-se que maior número de revisões serão submetidas para
avaliação e eventual publicação, ampliando sobremaneira o número de colaboradores. Revisões con-
vidadas podem sugerir que sejam revisões aceitas, o que nunca foi o caso. Somente mantendo sua
qualidade editorial é que ela se fortalecerá como veículo importante na Fitopatologia Brasileira. To-
das as frentes de avanço do conhecimento e da tecnologia devem ser priorizados. A diversidade e a
amplitude da Fitopatologia permitem isso.
Toda a comunidade da Fitopatologia Brasileira está convidada a fazer com que a RAPP ali-
nhe-se cada vez maisàs mais prestigiadas publicações brasileiras.

Dr. Marcos A. Machado

Membro do corpo editorial da RAPP e
Diretor do Centro de Citricultura Sylvio Moreira – IA- SP

RAPP - Volume 24, 2016 V

 CONTEÚDO

VÍRUS TRANSMITIDOS POR MOSCAS-BRANCAS Alice Kazuko Inoue-Nagata 8-9

NO BRASIL: VETORES, PRINCIPAIS
DOENÇAS E MANEJO
Claudine Márcia Carvalho
Francisco Murilo Zerbini
Jorge Alberto Marques Rezende
Renate Krause Sakate
Tatsuya Nagata

MANCHA DE MICOSFERELA: O GRANDE Martha Maria Passador 30-41

OBSTÁCULO PARA O CULTIVO DE EUCALYPTUS Edson Luiz Furtado
GLOBULUS NO BRASIL

MANEJO DO MÍLDIO DA CEBOLA: AVANÇOS E Edivânio R. Araújo 42-54

BARREIRAS DA PESQUISA CIENTÍFICA Daniel P. Alves

FUNGOS “DARK SEPTATE” E SUA RELAÇÃO Peter Soares Medeiros 55-69

COM AS PLANTAS E Carlos Vergara Torres Júnior
FITOPATÓGENOS Claudia Maria Xavier Faria
Kerly Martínez Andrade
Jerri Édson Zilli
Carlos Antonio Inácio

NEMATOIDES QUARENTENÁRIOS PARA O BRASIL - Paulo Sergio Torres Brioso 70-103

DIAGNOSE, CONTROLE E PERSPECTIVAS Ricardo Moreira de Souza

RISCOS POTENCIAIS DE PATÓGENOS FLORESTAIS Celso Garcia Auer 104-114

EXÓTICOS PARA O SETOR FLORESTAL BRASILEIRO Álvaro Figueredo dos Santos

BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS: PASSADO, PRESENTE E Bruna Canabarro Pozzebon 115-129

PERSPECTIVAS VISANDO UM FUTURO SUSTENTÁVEL Juliano dos Santos

EFEITO DAS MUDANÇAS CLIMÁTICAS NO Mathias Ferrari Rockenbach 130-144

SISTEMA DE DEFESA DAS PLANTAS Mateus Brusco de Freitas
Marciel João Stadnik

RESISTÊNCIA DE MONILINIA SPP. AOS FUNGICIDAS
DOS GRUPOS DOS INIBIDORES DA DESMETILAÇÃO
(IDM), DOS INIBIDORES DA QUINONA
EXTERNA (IQE) E DOS METILO BENZIMIDAZOL
CARBAMATOS (MBC)
Paulo dos Santos Faria Lichtemberg 145-173
Isabela Vescove Primiano
Juliana Muehlmann Fischer
Chirley Glienke
Lilian Amorim
Louise Larissa May De Mio

SCLEROTINIA SCLEROTIORUM: MOLECULAR Wei Wei 174-189

ASPECTS IN PLANT-PATHOGENIC INTERACTIONS Steven J. Clough

VI RAPP - Volume 24, 2016

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)

VÍRUS TRANSMITIDOS POR

MOSCAS-BRANCAS NO BRASIL: VETORES,
PRINCIPAIS DOENÇAS E MANEJO
Alice Kazuko Inoue-Nagata1; Claudine Márcia Carvalho2;
Francisco Murilo Zerbini2; Jorge Alberto Marques Rezende3;
Renate Krause Sakate4; Tatsuya Nagata5

RESUMO
A mosca-branca Bemisia tabaci tem sido considerada a praga do sécu-
lo. Ainda não conseguimos conviver com essa praga cosmopolita, que além de
produzir prejuízos diretos para a agricultura tem nos efeitos indiretos a principal
fonte de preocupação dos produtores. A sua capacidade de atuar como vetor
de diferentes espécies de vírus e a extrema dificuldade de seu controle resulta-
ram na emergência de doenças sérias para a agricultura brasileira. Esta revisão
aborda as principais viroses associadas a B. tabaci no Brasil com descrições dos
vírus, das doenças e dos prejuízos que estas vêm causando à cadeia de produção
agrícola. Ainda há muito o que aprender para viabilizar um manejo adequado
dessas viroses e esta revisão tem como propósito apresentar as informações
atualizadas sobre os vírus e incentivar os interessados a trabalharem com esse
tema que é complexo e ao mesmo tempo atrativo e desafiador.

1. Introdução mais sérias da agricultura mundial. Junto com ela,

No Brasil, até o final da década de 1980, os emergiram viroses devastadoras para a agricultura,
insetos vetores de vírus mais relevantes eram os afí- destacando-se o mosaico dourado do tomateiro, o
deos (pulgões) e os tripes. Algumas espécies de ví- amarelão do meloeiro e amarelão do tomateiro. Fo-
rus dos gêneros Potyvirus, Polerovirus, Closterovirus, mos testemunhas da rápida e extensiva invasão do
Cucumovirus e Tospovirus representavam os vírus complexo mosca-branca-vírus. Atualmente, as viro-
de maior ocorrência em várias culturas. A única ex- ses associadas às moscas-brancas despontam em
ceção era o mosaico dourado do feijoeiro, causado todo o Brasil pela alta incidência e pelas perdas que
por um begomovírus transmitido pela mosca-branca elas causam. O seu manejo é dificultado pela com-
Bemisia tabaci. Esse cenário se modificou radical- plexidade do sistema agrícola brasileiro, onde áreas
mente a partir da década de 1990, quando ocorreu de produção contêm bons hospedeiros da mosca-
a introdução de um novo biótipo de Bemisia tabaci. -branca, presentes ao longo de todo o ano. Sendo
O biótipo B (atualmente considerado uma espécie um inseto polífago, a mosca-branca coloniza e mul-
críptica, B. tabaci Middle East-Asia Minor 1, MEAM1) tiplica-se em inúmeras plantas cultivadas, silvestres
rapidamente se dispersou em todo o território na- e invasoras, sendo, porém, as plantas cultivadas as
cional e hoje é considerado como uma das pragas mais prejudicadas. Dentre as grandes culturas mais
1
Embrapa Hortaliças, Brasília, DF, 70351-970 - E-mail: alice.nagata@embrapa.br; 2Dep. de Fitopatologia/BIOAGRO, Universidade Fe-
deral de Viçosa, Viçosa, MG, 36570-900 - E-mail: claudine.carvalho@ufv.br e zerbini@ufv.br; 3Dep. de Fitopatologia e Nematologia,
Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo, Piracicaba, SP, 13418-900 - E-mail: jrezende@usp.br;
4
Dep. de Defesa Fitossanitária, FCA/UNESP, Botucatu, SP, 18610-370 - E-mail: renatekrause@fca.unesp.br; 5Dep. de Biologia Celular,
Universidade de Brasília, Brasília, DF, 70910-000 - E-mail: tatsuya@unb.br

RAPP - Volume 24, 2016 7

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)

afetadas destacam-se a soja, o algodoeiro e o feijo- medidas extremas como o estabelecimento de

eiro, e dentre as hortaliças, o tomateiro, a batateira,
as brássicas e as cucurbitáceas. Verdadeiras nuvens
de moscas-brancas são regularmente observadas
nas lavouras e não raro nas cidades nas épocas de
pico populacional, particularmente na época de se-
nescência da soja.
O controle da mosca-branca é muitas vezes
negligenciado, principalmente em culturas onde
as viroses associadas a esse vetor não causam
prejuízos relevantes, como é o caso da soja e do
algodoeiro. Considerando-se as graves perdas
registradas em cultivos de feijoeiro e tomateiro,
vazios fitossanitários foram regulamentadas na
tentativa de conter o mosaico dourado do feijo-
eiro e do tomateiro, respectivamente. O período
de vazio fitossanitário, nestes casos, serve para
reduzir a fonte de inóculo e não a população do
vetor.
Esta revisão tem a finalidade de reunir de
forma concisa as informações disponíveis sobre
as viroses associadas à mosca-branca e as princi-
pais características de B. tabaci, seguidas de um
detalhamento sobre os principais vírus transmiti-
dos por esse vetor no Brasil (listados na Tabela 1).

Tabela 1. Vírus transmitidos por mosca-branca relatados no Brasil em plantas cultivadas.

Nome (acrônimo) Genoma Vetor(es) Hospedeiros naturais Nome comum da Importância
doença (se existir) econômica
Gênero Begomovirus
Bean golden mosaic virus ssDNA, dois B. tabaci, feijoeiro, soja, mosaico dourado alta
(BGMV) componentes persistente Macroptilium spp. do feijoeiro
Macroptilium yellow spot virus ssDNA, dois B. tabaci, feijoeiro, P. lunatus, mosaico dourado baixa
(MaYSV) componentes persistente Macroptilium spp. do feijoeiro (predominante
em AL)
Cotton chlorotic spot virus ssDNA, dois B. tabaci, algodoeiro -- baixa
(CCSV) componentes persistente
Okra mottle virus ssDNA, dois B. tabaci, quiabeiro -- baixa
(OMoV) componentes persistente
Sweet potato leaf curl virus ssDNA, um B. tabaci, batata-doce enrolamento das baixa (?)
(SPLCV) componente persistente folhas
Sweet potato leaf curl São ssDNA, um B. tabaci, batata-doce enrolamento das baixa (?)
Paulo virus (SPLCSPV) componente persistente folhas
Tomato chlorotic mottle virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado baixa
(ToCMoV) componentes persistente
Tomato common mosaic virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado baixa
(ToCmMV) componentes persistente (predominante
no ES)
Tomato golden vein virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado baixa
(TGVV) componentes persistente
Tomato mottle leaf curl virus ssDNA, um B. tabaci, tomateiro mosaico dourado alta (NE)
(ToMoLCV) componente persistente
Tomato rugose mosaic virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro mosaico dourado/ baixa
(ToRMV) componentes persistente rugoso
Tomato severe rugose virus ssDNA, dois B. tabaci, batateira, tomateiro, mosaico dourado/ alta (SE, CO)
(ToSRV) componentes persistente pimentão, Nicandra rugoso
physaloides
Tomato yellow vein streak ssDNA, dois B. tabaci, batateira, tomateiro mosaico dourado baixa
virus (ToYVSV) componentes persistente
Tomato yellow spot virus ssDNA, dois B. tabaci, tomateiro, feijoeiro, mosaico dourado baixa
(ToYSV) componentes persistente soja, Leonurus
sibiricus
Gênero Crinivirus
Tomato chlorosis virus (+)ssRNA, dois B. tabaci e T. tomateiro, pimentão amarelão do intermediária
(ToCV) componentes vaporariorum, tomateiro
semi-persistente
Gênero Carlavirus
Cowpea mild mottle virus (+)ssRNA, um B. tabaci, não- soja, feijoeiro necrose da haste intermediária
(CPMMV) componente persistente
Melon yellowing-associated (+)ssRNA, um B. tabaci, não- meloeiro amarelão do intermediária
virus (MYaV) componente persistente meloeiro

8 RAPP - Volume 24, 2016

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
2. A mosca-branca Bemisia tabaci
Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera:
Aleyrodidae), comumente denominada mosca-
-branca, passou a ter destaque como praga global
a partir da década de 1980, quando principalmen-
te pelo comércio de plantas ornamentais este inse-
to foi disseminado a partir de seu centro de origem
(Oriente Médio e Ásia Menor – “Middle East-Asia
Minor”) para ao menos 54 países. Nas Américas sua
introdução se deu inicialmente nos Estados Unidos,
associada a infestações em poinsétia (Euphorbia pul-
cherrima) e mais tarde ao sintoma do prateamento
das folhas da aboboreira (Maynard e Cantliffe, 1989
citados por Morales, 2006a, b). Rapidamente a praga
se dispersou aos demais países, chegando ao Brasil
na década de 1990 (Lourenção, 1994). Seguiram-se
relatos de vírus transmitidos pela mosca-branca,
principalmente para solanáceas (Ribeiro et al., 1998;
Zerbini et al., 2002).
B. tabaci causa danos diretos à planta como o
aparecimento de desordens fisiológicas, perda de vi-
gor e liberação de secreção açucarada (“honeydew”)
que favorece o desenvolvimento de fungos, dentre
outros (Brown et al., 1995). Além disso, é excelente
vetora de vírus, sendo capaz de transmitir mais de
200 espécies de vírus pertencentes aos gêneros Be-
gomovirus, Carlavirus, Crinivirus, Ipomovirus e Torra-
dovirus (Gilbertson et al., 2015; Navas-Castillo et al.,
2011; ipomovírus e torradovírus não foram relatados
no Brasil até o presente, e não serão abordados nes-
ta revisão). Os begomovírus e os crinivírus causam
impacto econômico relevante em várias culturas,
sendo reconhecidos como os mais importantes vírus
de plantas emergentes em regiões tropicais e sub-
tropicais (Navas-Castillo et al., 2011a). Por ser um in-
seto altamente polífago alimentando-se de plantas
de mais de 500 espécies de plantas de 74 famílias
botânicas (Brown et al., 1995), apresentar alta taxa
de fecundidade e excelente habilidade de dispersão,
B. tabaci é considerada uma “super-vetora” de vírus
(Gilbertson et al., 2015), facilitando a transferência
de vírus nativos de plantas não-cultivadas para plan-
tas cultivadas (Bedford et al., 1994; Navas-Castillo et
al., 2011a; Rocha et al., 2013).
A reprodução em B. tabaci é sexuada ou por
partenogênese arrenótoca, na qual ovos não fertili-
zados originam machos e ovos fertilizados originam
fêmeas. A taxa de oviposição pode atingir até 394
ovos por fêmea (Byrne, 1991). Seu ciclo de vida é
RAPP - Volume 24, 2016
compreendido por seis estádios: ovo, ninfa de pri-
meiro, segundo, terceiro e quarto instares (esta
última referida como pupa) e adulto (Lourenção,
2015). B. tabaci é um inseto multivoltino, que não
apresenta diapausa ou estádio quiescente, de forma
que as populações são mantidas por meio dos recur-
sos vegetais existentes. No Brasil as principais cultu-
ras infestadas e prejudicadas por este inseto incluem
o tomateiro, feijoeiro, meloeiro e a batateira, em
que a transmissão de vírus é expressiva, além de cul-
turas como algodoeiro, soja, aboboreira, melancia,
videira, hortaliças diversas e ornamentais em que o
ataque do inseto tem se manifestado de forma cada
vez mais intensa. Diversas plantas da vegetação es-
pontânea também são hospedeiras do inseto, bem
como de alguns vírus (Lourenção, 2015).
As populações de B. tabaci, apesar de mor-
fologicamente idênticas, exibem variabilidade bio-
lógica quanto aos hospedeiros preferencialmente
colonizados, polimorfismo genético, diferenças na
fecundidade e na capacidade de causar fitotoxi-
cidade. Há também diferenças na composição de
procariotas endossimbiontes e na capacidade de
transmissão de vírus, tendo sido tradicionalmente
classificadas em biótipos (Brown et al., 1995). Re-
centemente, baseado na análise molecular do gene
mitocondrial citocromo oxidase I (mtCOI), passou-
-se a considerar B. tabaci como um complexo de 37
espécies crípticas (De Barro e Ahmed, 2011; Dins-
dale et al., 2010; Firdaus et al., 2013; Alemandri et
al., 2012; Chowda-Reddy et al., 2012; Esterhuizen,
2013; Hu et al., 2011; Parrella et al., 2014), das quais
as espécies MEAM1 (correspondente ao biótipo B)
e Mediterranean (MED - correspondente ao biótipo
Q), são consideradas mundialmente as mais invasi-
vas e danosas (Dinsdale et al., 2010).
No Brasil já foram relatadas quatro espécies
crípticas de B. tabaci, das quais New World 1 (NW1)
e New World 2 (NW2), correspondentes ao biótipo
A, são consideradas nativas das Américas e foram
quase extintas após a disseminação de MEAM1 (Ma-
rubayashi, 2013; Barbosa et al., 2014). Mais recen-
temente a espécie MED foi relatada, inicialmente no
Rio Grande do Sul (Barbosa et al., 2015) e em segui-
da no estado de São Paulo (dados não publicados).
B. tabaci MED tem sua origem na Bacia do Mediter-
râneo e sua presença nas Américas é mais restrita,
com relatos nos Estados Unidos (Dalton, 2006), Mé-
xico (Martinez-Carrillo, 2007), Guatemala (Bethke et
9
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
al., 2008), Costa Rica (Guevara-Coto, 2011), Argen-
tina, Uruguai (Grille, 2011) e Brasil (Barbosa et al.,
2016). Como importantes características desta es-
pécie ressaltam-se a alta resistência aos inseticidas
neonicotinoides; a adaptação a ambientes fechados,
como estufas e casas-de-vegetação (Horowitz et
al., 2005); a adaptação a culturas como o pimen-
tão (Muniz, 2001), atualmente pouco afetadas por
begomovírus no Brasil; e a excelente habilidade em
transmitir o begomovírus Tomato yellow leaf curl vi-
rus (TYLCV) (Li, 2010), ainda não relatado no Brasil e
um dos patógenos mais devastadores do tomateiro
(Moriones e Navas-Castillo, 2000). Nas Américas, o
TYLCV já foi relatado no Caribe, México, Sudeste dos
EUA e Venezuela (Navas-Castillo et al., 2011a).
 
3. Begomovírus
Historicamente, a primeira descrição de uma
doença de planta causada por um begomovírus é
encontrada em um poema escrito pela imperatriz
Koken, no Japão. Ela descreve as folhas amarela-
das (cloróticas) da planta conhecida como Eupa-
torium makinoi. Alguns trabalhos sucederam essa
descrição, porém somente após mais de 1200 anos
foi confirmada a associação do begomovírus Eupa-
torium yellow vein virus, suposto causador da viro-
se naquela época (Saunders et al., 2003)2003. Da
mesma forma, no Brasil há relatos de begomovírus
em diversas plantas desde a década de 1930 (Costa,
1937; Costa, 1955; Costa e Bennett, 1950). A etio-
logia viral foi comprovada com a transmissão para
plantas sadias pelas moscas-brancas, reprodução de
sintomas e também pela presença de partículas vi-
rais geminadas (Costa, 1955; Costa e Bennett, 1950;
Matyis et al., 1975; Orlando, 1945; Orlando, 1946).
Muitas doenças com sintomatologia semelhante,
como o mosaico do algodoeiro e a clorose variegada
das malváceas, não tiveram a etiologia confirmada
na época (Costa, 1955, Flores et al., 1960; Orlando,
1945; Orlando, 1946). Apesar da falta de identifica-
ção definitiva do patógeno, esses relatos constituem
registros preciosos sobre as doenças e refletem as
contribuições altamente relevantes de grandes pes-
quisadores como A. A. Bitancourt, A. S. Costa, A. Or-
lando e K. Silberschmidt.
Estudos com begomovírus progrediram len-
tamente no século XX, principalmente por eles não
serem transmitidos por extrato vegetal tamponado e
serem detectados com dificuldade por sorologia. So-
10 RAPP - Volume 24, 2016
mente a partir de meados da década de 1990, com
a popularização de técnicas moleculares de diagno-
se e clonagem, a detecção e identificação rápida e
precisa do agente causal tornou-se possível. Assim,
a compreensão da situação dos begomovírus expe-
rimentou um progresso rápido não só no Brasil, mas
em todo o mundo.
Os begomovírus possuem genoma de DNA
circular de fita simples, com um ou dois componen-
tes. A absoluta maioria dos begomovírus encontra-
dos nas Américas possuem genoma com dois com-
ponentes (bissegmentado), denominados DNA-A e
DNA-B. Cada componente possui aproximadamente
2600 nucleotídeos (nt) e uma “região comum” de
aproximadamente 200 nt na qual está localizada a
origem de replicação. O DNA-A possui cinco genes
que codificam proteínas associadas à replicação do
genoma viral, supressão de respostas de defesa do
hospedeiro e formação das partículas. O DNA-B pos-
sui dois genes envolvidos no movimento célula-a-
-célula do vírus na planta (Brown et al., 2012).
3.1. Begomovírus em fabáceas
O Brasil é um centro de diversidade genéti-
ca de begomovírus, com relatos de sua detecção em
plantas não-cultivadas desde a década de 1950 (Cos-
ta e Bennett, 1950; Flores et al., 1960; Costa, 1955).
A partir da década de 1970, o grande aumento da
área plantada com soja favoreceu a emergência de
begomovírus na cultura do feijoeiro (Costa, 1975). A
soja é um excelente hospedeiro de B. tabaci e sofre
poucos danos com a presença da praga e, por isso, o
seu controle é frequentemente negligenciado pelos
produtores. Essa falha permite que as populações
de insetos atinjam níveis altíssimos, com a posterior
migração para outras plantas no período de senes-
cência das plantas de soja. Esse contexto levou à
disseminação do begomovírus Bean golden mosaic
virus (BGMV), agente causal do mosaico dourado do
feijoeiro, nos plantios de feijoeiro próximos a áreas
de cultivo de soja (Menten e Roston, 1980; Vicente
et al., 1985). O mosaico dourado tornou-se um fator
limitante à cultura do feijoeiro ao longo das décadas
de 1970 e 1980, essencialmente impedindo o cultivo
em regiões de clima quente e seco. O problema foi
agravado com a dispersão de B. tabaci MEAM1, que
coloniza bem o feijoeiro.
O mosaico dourado apresenta como caracte-
rística o aparecimento nas folhas de clorose intensa,
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)

mosaico, bolhas, rugosidade, deformação, diminui-
ção da área foliar e nanismo da planta (Figura 1A).
Em muitos casos, a forte clorose produz uma cor
amarelo-ouro nas folhas, o que originou o nome
comum da doença. Frequentemente o vírus cau-
sa redução da produção de vagens, resultando em
drástica diminuição de produtividade. Os prejuízos
são altos e essa doença tornou-se uma das princi-
pais preocupações dos produtores de feijão do país
na atualidade. A frequente ocorrência de epidemias
em feijoeiro evidencia que o controle do mosaico
dourado permanece como um grande desafio para a
cadeia produtiva. Não há cultivares de feijoeiro com
bom nível de resistência ao mosaico dourado. O con-
trole químico do vetor com inseticidas nem sempre
é satisfatório, devido à alta eficiência de transmissão
e à presença de hospedeiros da mosca-branca nas
regiões agrícolas ao longo de todo o ano.
Em vista das frequentes epidemias que ocor-
reram nos últimos anos, destacando-se aquelas do
ano agrícola 2012/2013 (Figura 1A), houve uma
pressão forte da cadeia produtiva para que medi-
das enérgicas fossem tomadas pelos órgãos públicos
para conter a doença. Após intenso debate entre to-
dos os elos da cadeia de produção, foi decidida a im-
plementação de um vazio fitossanitário em GO, DF
e MG (IN 15, SDA, MAPA, 16/06/2014). As regiões
produtoras foram divididas em duas sub-regiões. A
primeira sub-região abrange os municípios ao sul de
GO, onde o vazio fitossanitário do feijoeiro ocorre
entre 5 de setembro e 5 de outubro. Na sub-região
2, compreendendo MG, DF e o norte de GO, o pe-
ríodo foi instituído entre os dias 20 de setembro e
20 de outubro. A incidência da virose foi reduzida
(Canal Rural, 2015), porém a medida ainda é ques-
tionada por alguns produtores. O vazio fitossanitário
tem como objetivo principal a redução do inóculo do
vírus no início da estação de cultivo, pelo fato de os
begomovírus não apresentarem transmissão transo-
variana e infectarem uma gama reduzida de hospe-
deiros. Entretanto, durante o período há a presen-
ça de outras plantas hospedeiras da mosca-branca,
como o tomateiro e a soja, que multiplicam eficien-
temente o vetor. Apesar da controvérsia, acredita-se
que a medida tem contribuído efetivamente para a
diminuição dos prejuízos.
Até o momento, não se conseguiu por me-
lhoramento genético clássico o desenvolvimento de

A B C

D E F
Figura 1. Plantas expressando sintomas de infecção por vírus transmitidos por B. tabaci. A. Lavoura de feijoeiro em que
100% das plantas apresentam sintomas de clorose, bolhas e mosaico, causados por infecção pelo begomovírus Bean
golden mosaic virus (BGMV). B. Tomateiro de crescimento determinado infectado pelo begomovírus Tomato severe ru-
gose virus (ToSRV), apresentando sintomas de clorose internerval, enrolamento foliar e nanismo. C. Planta de pimentão
infectado pelo ToSRV com sintoma de manchas cloróticas, bolhosidade e deformação foliar. D. Planta de soja infectada
pelo carlavírus Cowpea mild mottle virus, com necrose severa do ponteiro. E. Tomateiro de crescimento indeterminado
infectado pelo crinivírus Tomato chlorosis virus, apresentando mosaico e clorose internerval. F. Meloeiro com infecção
pelo carlavírus Melon yellowing-associated virus apresentando sintomas de clorose foliar intensa.

RAPP - Volume 24, 2016 11

 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
uma cultivar de feijoeiro com resistência ao mosaico
dourado. Devido a essa dificuldade, um programa
de produção de uma planta geneticamente modi-
ficada (GM) com resistência foi iniciado com base
na estratégia do silenciamento gênico. A planta GM
expressa uma fita dupla de RNA correspondente à
parte do genoma viral e desencadeia uma resposta
de defesa da planta com a destruição do RNA espe-
cífico do vírus, o que leva a uma redução expressiva
de proteínas essenciais para o ciclo replicativo do
patógeno. No caso do BGMV, as plantas transgêni-
cas expressam parte do gene Rep e são altamente
resistentes à infecção viral (Aragao et al., 2013)2013.
Após anos de testes em ambiente confinado e no
campo, e todas as avaliações de biossegurança, o
feijoeiro transgênico foi liberado para cultivo co-
mercial em 2011 (http://ctnbio.mcti.gov.br/publica-
coes/-/document_library_display/ cwksGAQxt1lp/
view/678011). Essa é uma ferramenta a mais que
deverá fazer parte de um programa de manejo in-
tegrado de pragas (Gilbertson et al., 2011) para um
manejo efetivo do mosaico dourado do feijoeiro.
No Brasil, a diversidade de espécies de bego-
movírus que infectam fabáceas é baixa. O BGMV foi
a única espécie encontrada em amostras de feijoeiro
comum (Phaseolus vulgaris) e de Macroptilium la-
thyroides coletadas em 2011 e 2012 nas regiões Su-
deste e Centro-Oeste (Ramos-Sobrinho et al., 2014).
Na região Nordeste, além do BGMV, foi detectada
também a presença do Macroptilium yellow spot vi-
rus (MaYSV) (Ramos-Sobrinho et al., 2014; Silva et
al., 2012). O BGMV foi o begomovírus predominante
em amostras de fabáceas cultivadas e não-cultivadas
coletadas em 2003-2005 em três estados do Nordes-
te (AL, BA e PE) (Wyant et al., 2012; Ramos-Sobrinho
et al., 2014). Entretanto, em amostras coletadas em
2011 em Alagoas, o MaYSV foi o vírus predominante
(Ramos-Sobrinho et al., 2014). O MaYSV foi relatado
pela primeira vez em amostras de M. lathyroides co-
letadas em 2010 (Silva et al., 2012). Os resultados de
Ramos-Sobrinho et al. (2014) sugerem que o MaYSV
pode estar substituindo o BGMV como o begomo-
vírus predominante em fabáceas em AL. Caso essa
tendência se confirme e o MaYSV se torne comum
em cultivos de feijoeiro em outras regiões, o sucesso
do plantio do feijoeiro GM com resistência ao BGMV
poderá ser comprometido (além disso, esse feijoeiro
transgênico poderá ser alvo de infecção com outro
vírus transmitido por mosca-branca, o carlavírus Co-
12 RAPP - Volume 24, 2016
wpea mild mottle virus, descrito mais à frente). Mais
recentemente, houve um relato da ocorrência de
Sida micrantha mosaic virus (SiMMV), um begomo-
vírus que infecta naturalmente malváceas, infectan-
do o feijoeiro no estado de Goiás (Fernandes-Acioli,
2011). A importância e a distribuição desta espécie
em feijoeiro ainda não são conhecidas.
Em termos de variabilidade genética, existem
diferenças significativas entre o BGMV e o MaYSV.
Populações de BGMV obtidas de feijoeiro comum (P.
vulgaris) apresentam baixa variabilidade, enquanto
populações obtidas de feijão-fava (P. lunatus) são re-
combinantes e mais variáveis (Faria e Maxwell, 1999;
Ramos-Sobrinho et al., 2014). Já o MaYSV apresenta
um elevado grau de variabilidade genética, indepen-
dentemente do hospedeiro (P. vulgaris, P. lunatus ou
M. lathyroides), em parte devido a vários eventos de
recombinação (Silva et al., 2012; Ramos-Sobrinho et
al., 2014; Lima et al., 2013). Além disso, a popula-
ção de BGMV analisada por Ramos-Sobrinho et al.
(2014) estava estruturada com base em hospedeiro/
região geográfica, o que não foi observado para a
população de MaYSV.
Apesar da ocorrência frequente de BGMV
em feijoeiro, infecções de begomovírus em soja não
são comuns no Brasil. Ocorrências esporádicas, sem
impacto econômico, têm sido relatadas desde 1980,
com a detecção de BGMV, SiMMV, Okra mottle virus
(OMoV), Tomato yellow spot virus (ToYSV) e Soybean
chlorotic spot virus (SoCSV) (Coco et al., 2013; Fer-
nandes et al., 2009; Rodríguez-Pardina et al., 2011).
Este cenário está em contraste com a Argentina,
onde a infecção de soja pelos begomovírus Soybean
blistering mosaic virus (SbBMV) e ToYSV é frequen-
te na região Noroeste, causando perdas moderadas
a severas na produção (Rodríguez-Pardina et al.,
2011). Como os sintomas causados pelos begomo-
vírus, caracterizados como mosqueado e manchas
cloróticas, são suaves, é possível que sua ocorrên-
cia não esteja sendo percebida pelos técnicos e pro-
dutores brasileiros. Considerando-se a presença de
vírus capazes de infectar as plantas de soja e a alta
preferência de B. tabaci MEAM1 por essas plantas,
acredita-se que em um futuro próximo os begomo-
vírus possam emergir como um problema sério para
a sojicultura nacional. Considerando que a soja é
excelente multiplicador da mosca-branca, o manejo
eficiente do inseto nessa cultura é essencial para a
agricultura brasileira.
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
3.2. Begomovírus em solanáceas
Uma situação oposta a que ocorre em fabá-
ceas é observada para begomovírus que infectam
solanáceas, a exemplo do tomateiro, onde um gran-
de número de espécies tem sido descritas e a varia-
bilidade genética entre os isolados de uma determi-
nada espécie é normalmente muito alta (Rocha et
al., 2013; Zerbini et al., 2005).
Os primeiros relatos de begomovírus em to-
mateiro no Brasil datam da década de 1960 (Costa
et al., 1975; Flores et al., 1960). Plantas de toma-
teiro apresentando sintomas de deformação foliar,
encrespamento e clorose internerval difusa foram
relatadas. O vírus foi caracterizado e denominado
Tomato golden mosaic virus (TGMV). Além do TGMV,
cinco outros vírus transmitidos por mosca-branca
foram identificados, porém sem causar danos de
importância econômica (Matyis et al., 1975). Isso
provavelmente ocorria porque as moscas-brancas
nativas do grupo NW, únicas que ocorriam no País
naquela época, colonizam o tomateiro com baixa efi-
ciência (Bedford et al., 1994). No entanto, no início
da década de 1990 um complexo de begomovírus
surgiu em tomateiro no Brasil, coincidindo com a in-
trodução e disseminação de B. tabaci MEAM1 (Am-
brozevicius et al., 2002; Ribeiro et al., 2003). Desde
então, dezesseis espécies de begomovírus já foram
descritas, incluindo o Tomato chlorotic mottle virus
(ToCMoV), Tomato rugose mosaic virus (ToRMV),
Tomato severe rugose virus (ToSRV), Tomato yellow
spot virus (ToYSV), Tomato golden vein virus (TGVV)
e Tomato yellow vein streak virus (ToYVSV) (Calega-
rio et al., 2007; Fernandes et al., 2006; Ribeiro et al.,
2007; Firmino et al., 2009). A introdução de B. tabaci
MEAM1 causou um grande impacto para a tomati-
cultura brasileira, e não se sabe se a recente intro-
dução de B. tabaci MED pode resultar em impactos
semelhantes ou ainda maiores.
Os begomovírus causam uma grande diver-
sidade de sintomas em tomateiro, incluindo clare-
amento de nervuras, manchas cloróticas, clorose
internerval, mosaico de diferentes intensidades, de-
formação foliar, diminuição do limbo foliar, enrola-
mento foliar e nanismo (Figura 1B) (Inoue-Nagata et
al., 2006) . Em infecções precoces, os sintomas são
severos com uma dramática redução de produtivida-
de (Giordano et al., 2005). De forma análoga ao que
é observado para begomovírus em outras culturas
(feijoeiro, algodoeiro, mandioca), uma alta taxa de
RAPP - Volume 24, 2016
infecção é frequentemente observada, particular-
mente em tomateiro de crescimento determinado,
quando perdas de 100% podem ser observadas (Ber-
gamin Filho et al., 2016). O controle químico do vetor
é uma das estratégias mais empregadas na tentativa
de redução da incidência da doença, porém apresen-
ta baixa eficiência em períodos de alta população de
moscas-brancas. Evidências crescentes apontam que
o controle deverá ser voltado para conter a disper-
são primária da doença, isto é, as moscas-brancas
virulíferas que vêm de fora da lavoura de tomateiro
(Bergamin Filho et al., 2016).
O uso de plantas com resistência genética a
begomovírus representa uma realidade para a cul-
tura do tomateiro. Há no mercado um considerável
leque de ofertas de híbridos F1 com resistência mo-
derada ou tolerância. Esses híbridos possuem um
ou mais dos principais genes de resistência conhe-
cidos, como Ty-1, Ty-2, Ty-3, Ty-4, Ty-5, ty-5, tcm-1e
tgr-1. Esses genes foram identificados em programas
de melhoramento visando resistência ao TYLCV, um
begomovírus monossegmentado que não ocorre no
Brasil. A resistência conferida por esses genes aos
begomovírus bissegmentados existentes no Bra-
sil não é completa. As cultivares são menos susce-
tíveis à infecção, e quando infectadas, os sintomas
são mais brandos, com expressão de leves manchas
cloróticas. Em situações de alta pressão de inóculo,
os sintomas podem ser severos (Boiteux et al., 2007;
Gonzales-Aguilera et al., 2011). O uso de cultivares
com resistência é mandatório em certas regiões de
alta incidência, como GO, DF, MG, CE e SP.
Levantamentos realizados ao longo dos últi-
mos 20 anos para acessar a distribuição relativa de
begomovírus em tomateiro indicam que determina-
das espécies tornaram-se prevalentes em diferentes
regiões do país (Rocha et al., 2013; Fernandes et al.,
2008; Albuquerque et al., 2012b). O sequenciamen-
to direto de fragmentos de PCR de amostras de to-
mateiro coletadas nos quatro estados da região Su-
deste entre os anos de 1998 e 2004 indicou o ToYVSV
e o ToSRV como as espécies predominantes em SP, o
ToCMoV e o ToSRV como as espécies predominan-
tes em MG e ES, e o ToCMoV e o ToYVSV como as
espécies predominantes no RJ (Cotrim et al., 2007;
Ambrozevicius et al., 2002). A mesma estratégia foi
utilizada para identificar begomovírus em amostras
de tomateiro coletadas entre 2002 e 2004 no DF e
nos estados de SP, MG, GO, BA e PE. O ToSRV foi o
13
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
vírus predominante no Sudeste e Centro-Oeste, en-
quanto o Tomato mottle leaf curl virus (ToMoLCV) foi
predominante no Nordeste (Fernandes et al., 2008).
A prevalência do ToMoLCV no Nordeste foi confir-
mada por Albuquerque et al. (2012b) [interessante-
mente, resultados recentes sugerem que esse bego-
movírus pode ter o genoma monossegmentado (Vu
et al., 2015)]. Nos anos de 2005 e 2007, foi realizado
um estudo sobre a diversidade de begomovírus em
duas importantes regiões produtoras de tomate na
região Sudeste, Paty do Alferes (RJ) e Coimbra (Zona
da Mata de MG). A análise de sequências de nucle-
otídeos do DNA-A completo revelou que em Paty do
Alferes o ToYVSV era o begomovírus predominante,
encontrado em 56,4% das amostras analisadas, se-
guido pelo Tomato common mosaic virus (ToCmMV).
Já em Coimbra o ToCmMV foi o único begomovírus
encontrado infectando tomateiro. Dados mais re-
centes confirmaram a prevalência do ToSRV e ToC-
MoV na Zona Metalúrgica de MG (municípios de Ca-
randaí e Florestal) e do ToSRV e ToCmMV na Zona da
Mata de MG e na Região Serrana do Espírito Santo
(González-Aguilera et al., 2012; Rocha et al., 2013;
Barbosa et al., 2016).
Rocha et al. (2013) observaram que as popu-
lações de begomovírus que infectam o tomateiro no
Brasil são altamente recombinantes, possuem uma
rápida taxa de evolução molecular e são estruturadas
com base em localização geográfica. A hipótese mais
aceita para explicar a emergência dos begomovírus
que infectam tomateiro no Brasil é a transferência
horizontal de vírus nativos que infectam plantas não-
-cultivadas por B. tabaci MEAM1, inseto que possui
uma gama de hospedeiros muito maior do que B.
tabaci NW. Uma vez presentes no novo hospedeiro,
esses vírus evoluem rapidamente, dando origem às
espécies detectadas em plantas cultivadas (Zerbi-
ni et al., 2010; Rocha et al., 2013). A predominância
de algumas espécies pode ser devido a diferenças na
adaptação ao tomateiro (Alves-Junior et al., 2009)
ou diferenças na eficiência de transmissão pelo ve-
tor (Macedo et al., 2015). Uma vez que os vírus este-
jam estabelecidos no tomateiro, as plantas não-cul-
tivadas passam a servir como reservatório natural e
fonte de inóculo primário (Barreto et al., 2013; Silva
et al., 2010), mas são dispensáveis epidemiologica-
mente caso o tomateiro esteja presente no campo
durante todo o ano. Assim, uma das medidas mais
eficientes de controle de begomovírus em tomateiro
14 RAPP - Volume 24, 2016
é o estabelecimento do vazio fitossanitário (Salati et
al., 2002).
Devido aos sérios prejuízos causados pe-
los begomovírus em tomateiros, foi implemen-
tado em 2003 um período de vazio fitossanitário
(IN 024, SDA, MAPA, 15/03/2003). Essa normativa
tem o objetivo de reduzir a população de toma-
teiro, considerado a principal fonte de vírus, e não
de moscas-brancas. Uma Instrução Normativa da
Agrodefesa instituiu o vazio fitossanitário em Goiás
a partir de 2007 (Agrodefesa, IN 05/2007) e foi re-
editada em 2011 (Agrodefesa, IN 06/2011). Desde
então, não é permitido o plantio de tomateiro para
processamento nos meses de dezembro e janeiro,
isto é, o transplantio somente pode ser realizado
entre os meses de fevereiro a junho. Entretanto,
a normativa é restrita a tomateiro de crescimento
determinado e não restringe o cultivo de tomateiro
de crescimento indeterminado. Essa situação leva
em conta a dificuldade de fiscalização de pequenos
produtores, porém contribui para a redução da efici-
ência da medida. Considerando-se a importância da
tomaticultura para processamento industrial em cer-
tas regiões, a Instrução Normativa de 2011 estendeu
o vazio fitossanitário para o tomateiro estaqueado
em alguns municípios. A realização de medidas de
manejo integrado de pragas também é preconizada
pela Instrução Normativa. Outros estados como SP e
MG também seguem este período de vazio fitossa-
nitário, apesar de não regulamentado oficialmente.
O controle químico do vetor é baseado na
aplicação sistemática e frequente de inseticidas na
lavoura, o que resulta na baixa eficiência do controle.
O controle do vetor precisa ser realizado em escala
regional, abrangendo as culturas vizinhas e conside-
rando a flora nativa e plantas invasoras. A complexi-
dade do sistema agrícola brasileiro, que consiste de
cultivos contínuos de hospedeiros de moscas-bran-
cas e de vírus, dificulta esse controle. Assim como
em fabáceas, o manejo de begomovírus em toma-
teiro requer um programa de manejo integrado de
pragas (Gilbertson et al., 2011).
Em pimenteiras (Capsicum annuum, C. fru-
tescens, C. chinense e C. baccatum), a ocorrência
de begomovírus parece ser menos expressiva, pro-
vavelmente pela baixa atratividade dessas plantas
às populações de B. tabaci presentes no Brasil (em
contraste com outros países como Índia e México).
Os begomovírus causam em pimenteiras sintomas
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
de manchas cloróticas e deformação foliar (Figu-
ra 1C). Em 2001, Lima e colaboradores relataram a
ocorrência de begomovírus em C. annuum (Lima,
2001), seguido do relato de ToSRV em C. baccatum
(Bezerra-Agasie et al., 2006) e Tomato golden vein
virus (TGVV) e ToYVSV em pimentão (Nozaki, 2010).
Em batateira, houve nos anos recentes um
destacado aumento da infestação de moscas-bran-
cas. Junto com a alta população de moscas-brancas,
cresceu a incidência da virose conhecida como “mo-
saico deformante da batateira”. O primeiro relato de
begomovírus em batateira data da década de 1980,
mais tarde confirmado como uma infecção causada
por ToYVSV (Ribeiro, 2006). Atualmente são relata-
das a ocorrência de ToYVSV e ToSRV nas principais
regiões produtoras de batata do Brasil (Albuquerque
et al., 2010, Souza-Dias et al., 2008). Assim, verifica-
-se que os mesmos begomovírus infectam tomatei-
ros, pimenteiras e batateiras.
Os begomovírus constituem o grupo mais
numeroso de geminivírus, e certamente são os mais
importantes economicamente no Brasil. No entanto,
há relatos da ocorrência de vírus causando encres-
pamento apical em fumo e tomateiro no Brasil, e
que seriam transmitidos por cigarrinhas (Agallia al-
bidul) (Bennett, 1949). Embora a identidade desses
vírus não tenha sido confirmada por métodos mole-
culares, os sintomas e a transmissão por cigarrinha
sugerem que seriam curtovírus (um outro gênero da
família Geminiviridae). Não há relatos recentes des-
ses vírus no Brasil e, portanto, essa questão perma-
nece indefinida.
3.3. Begomovírus em batateira-doce
A batata-doce, devido a sua característica de
propagação vegetativa, enfrenta uma série de pro-
blemas fitossanitários, principalmente pela ausência
de um programa de produção de material propaga-
tivo livre de vírus. Justamente devido à falta de pro-
págulos comprovadamente sadios, a avaliação da
importância dos vírus que infectam a batata-doce é
dificultada. Os begomovírus causam sintomas como
enrolamento foliar, mosqueado e clareamento de
nervuras, porém a diagnose é complexa pela possí-
vel ocorrência de infecção mista com outros vírus. Os
begomovírus têm sido observados em batata-doce
em todo o mundo, inclusive no Brasil. Até o momen-
to, dois begomovírus foram relatados na cultura:
Sweet potato leaf curl virus (SPLCV) e Sweet potato
RAPP - Volume 24, 2016
leaf curl Sao Paulo virus (SPLCSPV) (Albuquerque et
al., 2012a; Albuquerque et al., 2011; Paprotka et al.,
2010a; Brown et al., 2015). Ambos possuem genoma
monossegmentado, em contraste com os begomoví-
rus relatados em outras culturas cujos genomas são
bissegmentados. Apesar de estarem amplamente
disseminados no país, não há conhecimento sobre
danos causados por begomovírus nesta cultura.
3.4. Begomovírus em malváceas
Uma paisagem comum pode ser frequen-
temente observada em áreas rurais, principal-
mente em pastagens: pontos amarelos em meio
à vegetação verde. Ao se aproximar, verifica-se
que são malváceas cujas folhas apresentam forte
sintoma de clorose e mosaico. Trata-se da “cloro-
se variegada das malváceas”. Essas plantas cha-
maram a atenção de inúmeros pesquisadores no
Brasil e foram alvo de relatos pioneiros nas déca-
das de 1930-1960. Foi possível verificar naquela
época que o agente causal da clorose variegada
das malváceas tinha como vetor a mosca-branca
e que o agente etiológico [que se acreditava ser
o Abutilon mosaic virus, descrito no início do sé-
culo XX na Alemanha (Baur, 1906)] causava mo-
saico em diversas malváceas, incluindo Sida spp.
e algodoeiro (Costa, 1937; Costa, 1955; Orlando,
1946; Costa, 1960; Costa, 1954 ). Entretanto, a
caracterização de begomovírus em malváceas, re-
alizada utilizando ferramentas moleculares, não
confirmou a presença de Abutilon mosaic virus no
Brasil. Todos os begomovírus relatados em mal-
váceas no país até o presente são de ocorrência
exclusiva no Brasil: Cotton chlorotic spot virus
(CCSV), Melochia mosaic virus (MelMV), Melo-
chia yellow mosaic virus (MelYMV), Okra mottle
virus (OMoV), Pavonia mosaic virus (PavMV), Pa-
vonia yellow mosaic virus (PavYMV), Sida com-
mon mosaic virus (SiCmMV), Sida mottle Alagoas
virus (SiMoAV), Sida mottle virus (SiMoV), SiMMV,
Sida yellow blotch virus (SiYBV), Sida yellow leaf curl
virus (SiYLCV), Sida yellow mosaic Alagoas virus (SiY-
MAV), Sida yellow mosaic virus (SiYMV), Sida yellow
net virus (SiYNV) (Almeida et al., 2013, Barreto et al.,
2013, Castillo-Urquiza et al., 2008, Fiallo-Olivé et al.,
2015, Jovel et al., 2004, Pinto et al., 2015, Tavares et
al., 2012). Uma ou mais dessas espécies podem ter
sido responsáveis pela clorose variegada das malvá-
ceas estudada nas décadas de 1930-1960.
15
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
3.5. A alta diversidade dos begomovírus no Brasil
Um grande número de begomovírus infec-
tando plantas não-cultivadas tem sido caracterizado
no Brasil (Arnaud et al., 2007; Castillo-Urquiza et al.,
2008; Silva et al., 2012; Silva et al., 2011; Tavares et
al., 2012; Fernandes et al., 2011; Pinto et al., 2015;
Fiallo-Olivé et al., 2015; Blawid et al., 2013; Papro-
tka et al., 2010b; Paprotka et al., 2010a). A análise
comparativa de populações de begomovírus encon-
tradas em plantas cultivadas e não-cultivadas indi-
cou que aquelas infectando plantas não-cultivadas
apresentam um grau de variabilidade genética mais
elevado em comparação àquelas presentes em plan-
tas cultivadas (Lima et al., 2013; Rocha et al., 2013).
Um estudo comparando populações dos begomoví-
rus MaYSV (proveniente de Macroptilium lathyroi-
des) e ToSRV (proveniente de tomateiro) sugeriu que
a recombinação, e não a seleção adaptativa, explica
a maior variabilidade de begomovírus em hospedei-
ros não-cultivados (Lima et al., 2013). Os resultados
desses trabalhos dão suporte à hipótese de que os
begomovírus encontrados em tomateiro no Brasil
são originados de vírus nativos presentes em plan-
tas não-cultivadas, e que após a transferência para
o tomateiro as populações virais evoluíram rapida-
mente, originando novas espécies mais adaptadas
ao novo hospedeiro.
A presença de diversas espécies no campo,
todas transmitidas pelo mesmo inseto vetor, torna
comum a ocorrência de infecções mistas, com dois
ou mais vírus presentes simultaneamente na mesma
planta, aumentando a probabilidade da ocorrência
de eventos de recombinação e pseudo-recombina-
ção, o que pode levar ao surgimento de espécies me-
lhor adaptadas ao hospedeiro (Andrade et al., 2006;
Inoue-Nagata et al., 2006; Ribeiro et al., 2007). Evi-
dências de recombinação e pseudo-recombinação
já foram encontradas em associação ao complexo
de begomovírus infectando o tomateiro no Brasil.
Galvão et al. (2003)2003 e Ribeiro et al. (2007) su-
geriram que os isolados MG-Bt1 e BA-Se1 do ToC-
MoV possuem origem recombinante. A formação de
pseudo-recombinantes viáveis entre clones infec-
ciosos do TGMV (DNA-A) e ToYSV (DNA-B), e entre
o ToYSV (DNA-A) e o Tomato crinkle leaf yellow virus
(ToCrLYV), já foi demonstrada (Andrade et al., 2006).
Um exemplo do grau de promiscuidade entre
os begomovírus que infectam o tomateiro no Brasil,
com infecções mistas que facilitam a ocorrência de
16 RAPP - Volume 24, 2016
eventos de recombinação e pseudo-recombinação,
é aquele envolvendo o Tomato rugose mosaic virus
(ToRMV) e o ToSRV. A identidade das sequências
de nucleotídeos do DNA-A dos dois vírus é de 86%,
porém para o DNA-B é de 98%, indicando que na
verdade esses dois vírus constituem pseudo-recom-
binantes naturais, no qual dois DNA-A distintos com-
partilham o mesmo DNA-B. Todas as combinações
possíveis entre o DNA-A e o DNA-B de isolados dos
dois vírus apresentam o mesmo grau de infectividade
e induzem os mesmos sintomas em tomateiro (Silva
et al., 2014). Além disso, o DNA-A do ToRMV inclui
um fragmento recombinante doado pelo ToSRV, com
cerca de 1400 nt, incluindo a maior parte do gene
Rep (Ribeiro et al., 2007; Silva et al., 2014). Assim, a
origem do ToRMV envolve eventos de recombinação
e pseudo-recombinação com o ToSRV. É interessan-
te ressaltar que o ToSRV é muito mais comumente
encontrado no campo do que o ToRMV. Entretanto,
em infecções mistas envolvendo componentes ge-
nômicos dos dois vírus, os componentes do ToRMV
são replicados preferencialmente em relação aos do
ToSRV (Silva et al., 2014). Os autores propõem que
a prevalência do ToSRV no campo pode ser devida à
transmissão preferencial pelo inseto vetor, somado à
ocorrência de infecções simples apenas pelo ToSRV.
3.6. Características da transmissão de bego-
movírus por B. tabaci
O gênero Begomovirus contém o maior nú-
mero de vírus transmitidos por B. tabaci (Navas-
-Castillo et al., 2011a; Gilbertson et al., 2015) e o
vírus-modelo para estudos de transmissão é o TYL-
CV. Vários estudos demonstram que a eficiência de
transmissão de begomovírus varia de acordo com as
diferentes espécies crípticas de B. tabaci, e mesmo
entre populações da mesma espécie. As diferenças
na habilidade de transmissão podem ser atribuídas
a hábitos alimentares, aos hospedeiros preferencial-
mente colonizados, à constituição de endossimbion-
tes secundários na mosca branca, e principalmente
à constituição genética (Ghanim, 2014; revisado por
Rosen et al., 2015).
Ghanim et al. (1998) verificaram que um iso-
lado de TYLCV proveniente de Israel foi transmitido
de forma transovariana de fêmeas virulíferas para
sua progênie, bem como entre copulações entre fê-
meas e machos (Ghanim e Czosnek, 2000). Bosco et
al. (2004) detectaram o DNA do Tomato yellow leaf
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
curl Sardinia virus (TYLCSV) em ovos, ninfas e rara-
mente em adultos da primeira geração da progênie,
indicando transmissão do DNA de forma transova-
riana, porém este DNA não foi infectivo, sendo por-
tanto sem relevância epidemiológica.
A relação vírus-vetor é do tipo persistente
circulativa. O início da transmissão ocorre após um
período de latência, que corresponde ao tempo ne-
cessário para que as partículas virais atravessem to-
das as barreiras do inseto e alcancem as glândulas
salivares (Ghanim, 2014). O período de latência para
o TYLCV foi inicialmente definido como sendo de 21
horas (Cohen e Nitzany, 1966; citados por Ghanim,
2014) e mais recentemente de 8 horas (Ghanim et
al., 2001). O estilete de B. tabaci penetra a epiderme
da planta e move intracelularmente pelo parênqui-
ma até alcançar o floema, local onde os begomoví-
rus são adquiridos e transmitidos. O período mínimo
de acesso à aquisição (PAA) do TYLCV (isolados do
Oriente Médio) varia de 15 a 60 minutos e o período
mínimo de inoculação (PAI) de 15 a 30 minutos. No
inseto, os vírus se movem pelo canal alimentar até
alcançar o intestino médio (“midgut”), atravessam
as células epiteliais do intestino para cair na hemo-
linfa e serem levados às glândulas salivares, de onde
serão liberados no interior da planta pela salivação
do inseto durante o processo de alimentação (Gha-
nim, 2014).
A presença do endossimbionte secundário
de B. tabaci, Hamiltonella defensa, é essencial para
a transmissão do TYLCV pela mosca-branca. Este en-
dossimbionte produz uma proteína de 63kDa, ho-
móloga à proteína GroEL de E. coli, com a provável
função de proteger as partículas virais da proteólise
incitada pelo sistema imune do inseto (Morin et al.,
1999; Morin et al., 2000). Bemisia tabaci pode trans-
mitir o TYLCV por várias semanas e muitas vezes du-
rante todo o seu período de vida, porém a eficiência
de transmissão reduz com a idade do inseto (Ru-
binstein e Czosnek, 1997). Insetos da espécie MED
passam mais tempo se alimentando e salivando em
comparação com a espécie MEAM1 (Liu et al., 2012;
Liu et al., 2013), e consequentemente adquirem e
transmitem o TYLCV com maior eficiência (Ning et
al., 2015). Além disso, a alimentação em plantas in-
fectadas pelo TYLCV tem um efeito negativo sobre
MEAM1 e positivo sobre MED. Estas diferenças de
comportamento das duas espécies podem explicar
a substituição de MEAM1 por MED como a espécie
RAPP - Volume 24, 2016
dominante na China (Liu et al., 2013), e sugerem que
a espécie MED pode se tornar prevalente também
no Brasil.
No caso de begomovírus brasileiros, os pri-
meiros estudos apontaram que os vírus podem ser
adquiridos pelos insetos durante períodos muito
curtos (~10 min) de alimentação, e que a taxa de
transmissão aumenta com o aumento do tempo de
alimentação na fonte de vírus, até 24 horas, e com o
período de inoculação na planta sadia (Costa, 1998).
Trabalhos realizados com o ToSRV confirmaram que
a aquisição do vírus pode ocorrer com um minuto de
alimentação na planta (dados não publicados), po-
rém a eficiência de transmissão aumenta à medida
que o inseto tem maior período de acesso à aquisi-
ção do vírus (Freitas, 2012). O período de retenção
do ToSRV na mosca-branca pode chegar a 25 dias
(Freitas et al., 2012). Com relação ao ToYVSV, verifi-
cou-se que o período mínimo de acesso de aquisição
é de 30 minutos e o período de acesso de inoculação
é de 10 minutos (Firmino et al., 2009). Estudos rea-
lizados com o ToRMV constataram que os períodos
mínimos de acesso de aquisição e inoculação do ví-
rus foram de 15 minutos e de 30 minutos, respec-
tivamente. O período de latência foi superior a 16
horas. A capacidade do inseto em transmitir o vírus
aumentou com o aumento do período de aquisição
(Santos et al., 2003).
A população predominante do vetor e a capa-
cidade de transmissão de cada espécie de begomo-
vírus pode influenciar de forma decisiva a prevalên-
cia de espécies virais no campo e, por conseguinte,
impactar a incidência, a severidade e a distribuição
das viroses, e a resistência das plantas. Acredita-se
que B. tabaci NW era a única espécie presente no
Brasil até a década de 1990, quando os begomoví-
rus ocorriam em feijoeiro, malváceas e euforbiáceas.
Após a introdução de B. tabaci MEAM1, verificou-se
a rápida emergência de begomovírus em tomateiro,
o amarelão em meloeiro e o amarelão em tomatei-
ro, além do mosaico dourado do feijoeiro. O caráter
polífago de B. tabaci MEAM1 certamente contribuiu
para a transferência dos begomovírus nativos no
país, presentes em espécies silvestres e daninhas,
para plantas cultivadas. Isso também influenciou de
forma decisiva a elevação da taxa de infecção mista
de vírus na mesma planta, desencadeando a ocor-
rência de processos de recombinação e pseudo-re-
combinação entre os vírus, descritos anteriormente.
17
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
Um exemplo do efeito da relevância desta inter-
-relação entre vírus-vetor é o relato da maior taxa
de transmissão de um isolado de ToSRV quando em
infecção mista com o TGVV (Macedo et al., 2015).
Isso sugere que a prevalência atual de ToSRV em to-
mateiro é relacionada com a ampla dispersão de B.
tabaci MEAM1 e eficiente transmissão de ToSRV por
esse vetor. Um outro estudo foi realizado com Eu-
phorbia yellow mosaic virus (EuYMV) em Euphorbia
heterophylla. A espécie nativa B. tabaci NW2 é uma
excelente vetora do EuYMV comparada a MEAM1,
sugerindo que NW2 pode ter um papel crucial na
dispersão desse vírus no Brasil (Marchi, 2014). Con-
forme mencionado anteriormente, a recente intro-
dução de B. tabaci MED pode ocasionar mudanças
significativas na ocorrência de viroses no Brasil, seja
em culturas onde as viroses associadas a moscas-
-brancas já são importantes ou em culturas em que
essas viroses não são relatadas ou ocorrem em baixa
incidência.
4. Crinivírus em tomateiro e pimentão
Tomato chlorosis virus (ToCV) e Tomato in-
fectious chlorosis virus (TICV) são as duas únicas es-
pécies do gênero Crinivirus (família Closteroviridae)
associadas com doenças de importância econômica,
principalmente na cultura do tomateiro, em diferen-
tes países. O TICV já foi relatado em 12 países, loca-
lizados principalmente na América do Norte, Europa
e Ásia, mas até o presente não foi encontrado no
Brasil (Navas-Castillo et al., 2011). O ToCV já foi rela-
tado em 23 países, entre os quais o Brasil (Barbosa et
al., 2008).
O ToCV foi identificado pela primeira vez in-
fectando tomateiros na Florida, EUA, causando a
doença denominada “yellow dwarf disorder”, ini-
cialmente atribuída a fatores nutricionais (Simone
et al., 1996; Wisler et al., 1998). A partir de então
esta espécie de crinivírus foi encontrada infectando
tomateiro e pimentão em mais de 20 países (Navas-
-Castillo et al., 2011b). No Brasil, o ToCV foi primei-
ramente constatado em tomateiros no município de
Sumaré, São Paulo (Barbosa et al., 2008), causando a
doença denominada “amarelão”. Um relato de infec-
ção dessa solanácea por um closterovírus, não com-
pletamente caracterizado, na região de Campinas,
SP, em 1998, cuja descrição dos sintomas é seme-
lhante à descrita para o ToCV, foi feito por Pavan et
al. (1999). Mais tarde o ToCV foi encontrado nos es-
18 RAPP - Volume 24, 2016
tados de MG, RJ, ES, GO e BA (Barbosa et al., 2011).
É possível que o ToCV ocorra em outras regiões do
país, visto infectar espécies de solanáceas que ocor-
rem em todo território nacional e ser transmitido
por um vetor cosmopolita.
No Brasil, além do tomateiro e do pimentão,
o ToCV já foi encontrado infectando naturalmente
outras espécies cultivadas de solanáceas como a ba-
tateira (Freitas et al., 2012), a berinjela e o jiloeiro
(Fonseca et al., 2015). A incidência do ToCV, tanto
no Brasil como em outros países, principalmente em
tomateiro e pimenteira é bastante variável, poden-
do em alguns casos chegar a 100% (Barbosa et al.,
2008; Dovas et al., 2002; Fortes et al., 2012; Macedo
et al., 2014; Navas-Castillo et al., 2000; Orfanidou et
al., 2014; Velasco, 2008). O efeito do ToCV na produ-
ção ainda não foi avaliado de maneira quantitativa
para a maioria das solanáceas cultivadas, com exce-
ção do pimentão (Fortes et al., 2012) e do tomatei-
ro (Mansilla, 2015). Para o pimentão, em avaliações
experimentais em casa de vegetação, encontraram-
-se reduções na produção da ordem de 45-75%, em
função da variedade. Em ensaios de avaliação de
resistência/tolerância de diferentes genótipos de to-
mateiro ao amarelão causado pelo ToCV, a redução
do peso dos frutos colhidos das plantas infectadas
quando jovens variou de 21 a 52 %, dependendo do
genótipo.
Os sintomas induzidos pelo ToCV em toma-
teiros aparecem normalmente após três a quatro
semanas da inoculação e caracterizam-se principal-
mente por áreas cloróticas internervais nas folhas
baixeiras (Figura 1E). Esse sintoma pode vir acompa-
nhado por bronzeamentos ou manchas avermelha-
das, enrolamento das margens das folhas para cima
e engrossamento do limbo foliar que se torna que-
bradiço. Não há sintomas em flores e frutos (Wisler
et al., 1998). Os mesmos sintomas já foram observa-
dos em plantas de pimentão e batateira. Apesar de
não ocorrerem sintomas óbvios nas frutas, a produ-
ção é frequentemente afetada pela redução do ta-
manho e do número de frutos.
O ToCV apresenta partículas alongadas e
flexuosas, com comprimentos que variam de 800 -
850 nm (Liu et al., 2000). O genoma é composto por
duas moléculas de RNA de fita simples, senso posi-
tivo. Os RNA1 e RNA2 do isolado brasileiro possuem
8594 e 8242 nt, respectivamente (Albuquerque et
al., 2013), e apresentam as características típicas de
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
outros isolados do ToCV cujos genomas completos
estão depositados em bancos de dados públicos:
o RNA1 apresenta quatro genes, dos quais os dois
maiores codificam proteínas associadas à replicação,
e o RNA2 possui nove genes que codificam proteínas
associadas com a proteção do genoma, movimento,
transmissão pelo vetor e outras funções ainda não
identificadas (Albuquerque et al., 2013, Winterman-
tel e Wisler, 2006). Ambos componentes genômicos
codificam proteínas com atividade de supressão do
silenciamento de RNA (Canizares et al., 2008).
Análises filogenéticas realizadas com base
nas sequências de nucleotídeos dos genes que codi-
ficam a proteína HSP70h (homóloga da “heat shock
protein”) e do genoma completo de isolados do ToCV
indicaram alto nível de conservação dos isolados bra-
sileiros, com identidades de sequência superiores a
99% (Albuquerque et al., 2013; Barbosa et al., 2013).
Em ambos os trabalhos, as maiores identidades nas
sequências de nucleotídeos ocorreram entre isola-
dos de ToCV de países do Mediterrâneo, sugerindo
que os isolados brasileiros devem ter origem a par-
tir de uma única introdução. Wintermantel e Wisler
(2006) também constataram um alto grau de iden-
tidade genética quando compararam as sequências
de nucleotídeos do gene que codifica a proteína cap-
sidial de isolados do ToCV dos EUA (incluindo Porto
Rico) com as sequências correspondentes de isola-
dos de outros países. Tendo em conta que o ToCV
não é transmitido verticalmente e a relação com o
vetor é semi-persistente, o mais provável é que a in-
trodução desse vírus no Brasil tenha acontecido por
meio de material vegetativo infectado (Barbosa et
al., 2013).
Dados recentes apontam que a gama de hos-
pedeiros do ToCV envolve 52 espécies de plantas
pertencentes a 18 famílias (Kil et al., 2015) e este
quadro não parece definitivo, pois mais recentemen-
te foram incluídas as espécies Raphanus sativus, R.
raphanistrum e Eruca sativa (Boiteux et al., 2015).
O ToCV é um vírus limitado ao floema e trans-
mitido de forma semi-persistente por várias espécies
de mosca-branca: B. tabaci NW1, MEAM1 e MED,
Trialeurodes abutilonea e T. vaporariorum (Navas-
-Castillo et al., 2011b; Wintermantel e Wisler, 2006).
B. tabaci MEAM1 e T. abutilonea são os vetores mais
eficientes do vírus. Este persiste por até cinco dias
em T. abutilonea, três dias em B. tabaci MEAM1, e
apenas um dia em B. tabaci NW1 e T. vaporariorum
RAPP - Volume 24, 2016
(Wintermantel e Wisler, 2006). A aquisição e a trans-
missão do vírus pelos vetores ocorrem após curtos
períodos de alimentação, embora a transmissão seja
mais eficiente após algumas horas. No Brasil não há
relato da presença de T. abutilonea, porém sabe-
-se que T. vaporariorum também transmite o ToCV
(Freitas et al., 2012). O ToCV não é transmitido por
extrato vegetal (Dovas et al., 2002). Também não há
evidência de transmissão por sementes. Ressalte-se
que o TICV é transmitido de maneira semi-persisten-
te somente por T. vaporariorum (Navas-Castillo et
al., 2011).
A detecção do ToCV em plantas sintomáticas,
bem como a sua diferenciação do TICV, pode ser fei-
ta por RT-PCR (Dovas et al., 2002; Wintermantel e
Hladky, 2010) e hibridização com sonda de ácido nu-
cléico (Fortes et al., 2012; García-Cano et al., 2010).
Adicionalmente, o ToCV e o TICV podem ser diferen-
ciados e identificados por meio da transmissão pelo
vetor, visto que o TICV é transmitido somente por T.
vaporariorum (Navas-Castillo et al., 2011).
O manejo do amarelão em tomateiro, bem
como em outras solanáceas cultivadas, baseia-se
principalmente no manejo do vetor, por meio de pul-
verizações com inseticidas e práticas culturais. Em-
bora os inseticidas possam reduzir a população do
vetor, eles não são eficientes no controle da doença,
pois geralmente não impedem que insetos virulífe-
ros inoculem o vírus antes de serem mortos. Elimina-
ção de plantações velhas de solanáceas e de hospe-
deiros alternativos do vírus, para redução de fontes
de inóculo, deve ser implementada antes do início
da nova plantação (Tzanetakis et al., 2013). Não há
variedades ou híbridos de tomateiros comerciais
resistentes ao ToCV. O mesmo é verdadeiro para as
outras espécies de solanáceas cultivadas. Solanum
peruvianum é fonte de resistência ao ToCV que pode
ser usada em programas de melhoramento para de-
senvolvimento de híbridos de tomateiro resistentes
a esse crinivírus (García-Cano et al., 2010).
5. Carlavírus em soja e feijoeiro
Na safra de 2000/01, os produtores de soja
do estado de Goiás observaram plantas com sin-
tomas de nanismo, queima do broto e necrose da
haste (Figura 1D), denominando a nova doença de
“necrose da haste”. Acreditava-se que a doença se-
ria de origem fúngica, porém estudos com enxertia
comprovaram que a doença tem etiologia viral e a
19
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
caracterização molecular, sorológica, com ensaios de
transmissão e microscopia eletrônica revelaram que
o vírus causador pertence à espécie Cowpea mild
mottle virus (CPMMV), um carlavírus (Almeida et al.,
2005). Nos anos seguintes, ocorrências severas fo-
ram relatadas nos estados do MT, BA, MA, PR e MG,
limitando a produção de soja (Almeida et al., 2005;
Zanardo et al., 2014b).
O CPMMV foi descrito pela primeira vez in-
fectando caupi (Vigna unguiculata) em Gana, onde
foram observados sintomas como mosqueado, man-
chas cloróticas e deformação foliar (Brunt e Kenten,
1973; Menzel et al., 2010; Naidu et al., 1998; Tavas-
soli et al., 2008). Desde então sua ocorrência tem
sido relatada em diversos hospedeiros da família Fa-
baceae em diferentes regiões geográficas (Menzel et
al., 2010; Naidu et al., 1998; Tavassoli et al., 2008).
O primeiro relato de CPMMV no Brasil ocorreu em
1979, causando uma virose do feijoeiro denominada
mosaico angular (Costa et al., 1983). O vírus causa-
dor do mosaico angular, na época denominado Bean
angular mosaic virus (BAMV), foi observado também
no Paraná infectando outras fabáceas, incluindo a
soja (Costa et al., 1983). Mais tarde, estudos soroló-
gicos realizados por Gaspar e Costa (1993) compro-
varam que o BAMV era idêntico ao CPMMV descrito
em Gana (Brunt e Kenten, 1973).
O CPMMV pertence ao gênero Carlavirus, fa-
mília Betaflexiviridae, que inclui vírus de partículas
flexuosas com dimensões de aproximadamente 610-
700 nm de comprimento e 12-15 nm de diâmetro
(Adams et al., 2012). Seu genoma é composto de
RNA fita simples, sentido positivo, com comprimen-
to entre 6500 e 8600 nt. Sequências completas de
nove isolados de CPMMV estão disponíveis em ban-
cos de dados públicos.
A transmissão natural de CPMMV ocorre de
forma não-persistente pelo vetor B. tabaci MEAM1
(Marubayashi et al., 2010). O CPMMV, juntamen-
te com o Melon yellowing-associated virus (MYaV),
são os únicos carlavírus transmitidos por mosca-
branca, sendo os demais comumente transmitidos
por afídeos (Nagata et al., 2003). Também há relatos
da ocorrência de transmissão de alguns isolados do
CPMMV via extrato vegetal e semente (Horn et al.,
1991; Thouvenel et al., 1982).
Hospedeiros naturais do CPMMV pertencem
à família Fabaceae, e a gama de hospedeiros expe-
rimentais inclui plantas das famílias Chenopodiace-
20 RAPP - Volume 24, 2016
ae e Solanaceae (Marubayashi et al., 2010; Zanardo
et al., 2014a). Os sintomas variam de acordo com o
hospedeiro e a época do ano. Em caupi, o CPMMV
causa manchas cloróticas nas folhas primárias e dis-
torção foliar (Brunt e Kenten, 1973). Em feijoeiro, o
CPMMV causa clorose das nervuras, clorose inter-
nerval, faixa verde das nervuras e mosaico em for-
ma de manchas angulares amarelas limitadas pelas
nervuras (mosaico angular) (Costa et al., 1983). Em
plantas de soja, causa clorose e mosaico nas folhas,
necrose apical, distorção e nanismo (Figura 1D). Os
sintomas em soja tornam-se mais aparentes na épo-
ca de surgimento das vagens: queima do broto e ne-
crose das hastes, que pode levar à morte das plantas
(Almeida et al., 2005; Zanardo et al., 2014a).
As caracterizações biológica, molecular e
de diversidade genética do CPMMV mostraram que
os seis isolados brasileiros cujos genomas comple-
tos foram sequenciados constituem uma estirpe do
CPMMV, denominada CPMMV-BR, enquanto o isola-
do relatado em Gana corresponderia a uma estirpe
distinta (Zanardo et al., 2014b)2014b. Dentre os seis
isolados brasileiros, cinco são altamente relaciona-
dos, e um isolado (BR:GO:01:1) possui um relaciona-
mento um pouco mais distante devido a um evento
de recombinação englobando as ORFs 2 a 6 (Zanardo
et al., 2014b)2014b.
A emergência da necrose da haste em soja
preocupou os sojicultores inicialmente, porém o uso
de cultivares com tolerância à doença (Arias et al.,
2015) amenizou o problema. Não há informações
na literatura sobre danos causados pelo CPMMV em
outras culturas no Brasil.
6. Carlavírus em meloeiro
A doença conhecida como “amarelão do me-
loeiro” foi observada em plantios comerciais do mu-
nicípio de Baraúnas, RN, em 1997. O sintoma princi-
pal é a clorose generalizada nas folhas mais velhas
(Figura 1F), de coloração amarelo intensa. O sintoma
de amarelecimento foliar aparece inicialmente nas
folhas velhas e depois atinge as folhas mais novas
(Nagata et al., 2003). Nas folhas medianas, sintomas
de mosaico são normalmente observados. Nas plan-
tas doentes não se observa alteração no tamanho e
peso dos frutos, porém há diminuição do conteúdo
de sólidos solúveis (grau Brix), o que restringe a ex-
portação dos frutos. A causa da doença ficou por
muitos anos desconhecida, com a hipótese de algu-
 Alice Kazuko Inoue-Nagata, et al. (8-29)
ma desordem nutricional sendo a mais favorecida.
Testes de transmissão por enxertia demonstraram o
caráter patogênico da doença (Nagata et al., 2003).
Verificou-se também que o vírus é transmitido por
mosca-branca (Santos, 2004; Nagata et al., 2003).
Mais tarde, verificou-se em tecido de meloeiro do-
ente a presença de inclusões citoplasmáticas seme-
lhantes àqueles produzidos por carlavírus. Foi detec-
tada, em seguida, a presença de um vírus de RNA
com organização genômica semelhante a um carla-
vírus e a sequência parcial do seu genoma demons-
trou ser um vírus desconhecido, nomeado como Me-
lon yellowing-associated virus (MYaV) (Nagata et al.,
2005, Nagata et al., 2003). Esse vírus é distinto de
outros carlavírus, que são em geral transmitidos por
afídeos (exceção também do CPMMV).
O MYaV apresenta partículas alongadas e fle-
xuosas, com comprimentos que variam de 600 - 700
nm (Nagata et al., 2003). O genoma é formado por
uma molécula de RNA de fita simples. Apenas parte
da sequência genômica foi determinada, incluindo
os 1612 nt da extremidade 3’ (Nagata et al., 2005).
Esta região contém duas ORFs em sobreposição, a
que codifica a proteína capsidial e a possível prote-
ína que se liga a ácidos nucleicos, seguida da região
3’ não-traduzida (3’UTR) e uma cauda poliadenilada.
Essa organização genômica é típica dos carlavírus. A
proteína capdisial apresenta a maior identidade com
a sequência do carlavírus Garlic latent virus, um car-
lavírus relatado somente no Brasil.
O MYaV é um vírus restrito ao floema, que se
encontra em baixa concentração na planta infectada
e não é transmissível via extrato vegetal. Testes soro-
lógicos demonstraram a associação entre plantas de
meloeiro com sintomas e a presença do MYaV (Ávila
et al., 2008, Lima et al., 2009). Esforços para o de-
senvolvimento de cultivares resistentes estão sendo
realizados, porém ainda não há oferta de meloeiros
com resistência ao vírus. Atualmente, a doença é
controlada com o uso de um túnel de TNT (tecido-
-não-tecido) sobre as plantas desde a fase inicial de
desenvolvimento até a floração, após o qual a trans-
missão do vírus ocorre e afeta o meloeiro no final de
cultivo. A doença é particularmente importante no
Nordeste em cultivos de meloeiro, tanto para expor-
tação como para o consumo interno dos frutos.
7. Considerações finais
A mosca-branca representa um dos proble-
RAPP - Volume 24, 2016
mas mais preocupantes da agricultura mundial. No
Brasil, contrastando com a ocorrência de viroses as-
sociadas a B. tabaci anteriormente restrita a fabá-
ceas e malváceas, a lista atual de culturas afetadas
pelo inseto é extensa. Acredita-se que dois fatores
estejam particularmente envolvidos com a explosão
da mosca-branca no Brasil, notadamente a partir
da década de 1990: a expansão da cultura da soja
e a introdução de B. tabaci MEAM1. Levando-se em
conta também o aumento da área irrigada na região
do cerrado, o sistema agrícola brasileiro propicia a
constante e abundante presença de alimento para B.
tabaci. A característica de alta polifagia de B. tabaci
MEAM1, em comparação a B. tabaci NW, também
foi essencial para dispersão e estabelecimento deste
inseto por todo território brasileiro. A presença de
grande diversidade de vírus eficientemente transmi-
tidos por este inseto em plantas nativas e invasoras
desencadeou a emergência de diversas doenças de
importância econômica. Hoje, viroses importantes
são relatadas em fabáceas, solanáceas e cucurbi-
táceas, causando prejuízos altíssimos para a cadeia
produtiva. É possível que os danos causados pelos ví-
rus associados a B. tabaci aumentem, face os relatos
recentes de ocorrência de begomovírus em culturas
como soja, algodoeiro e maracujazeiro; ou com a in-
trodução de novas espécies, como os begomovírus
em cucurbitáceas e brássicas, crinivírus em cucurbi-
táceas e torradovírus em tomateiro. Fica claro que a
introdução de B. tabaci MEAM1 no Brasil, seguido da
sua rápida dispersão em todas as áreas agrícolas, foi
decisiva para os problemas atuais. Entretanto, ainda
não se sabe o que acontecerá com a dispersão de
B. tabaci MED, recentemente encontrada no Brasil.
Necessita-se de mais grupos atuando na pesquisa
com esses vírus e insetos. Há também necessidade
de viabilizar a realização de um conjunto de práti-
cas visando o manejo integrado de pragas em nível
regional, considerando toda a paisagem agrícola e
natural.
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29
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

MANCHA DE MICOSFERELA: O
GRANDE OBSTÁCULO PARA O CULTIVO
DE EUCALYPTUS GLOBULUS NO BRASIL
Martha Maria Passador1 e Edson Luiz Furtado2

RESUMO
O Eucalyptus globulus  é uma espécie que apresenta boa capacidade de
produção e adapta-se bem em diversos tipos de solos, e em regiões de clima
temperado. O avanço das áreas reflorestadas, o plantio de espécies mais sus-
cetíveis a determinadas pragas e patógenos e a utilização repetitiva de uma
mesma área para plantio, criaram condições favoráveis à ocorrência de muitos
problemas fitossanitários. Algumas doenças foram constatadas concomitantes
ao crescimento do cultivo de eucalipto no Brasil, como a doença causada por
espécies de Myscosphaerella e Teratosphaeria. No Brasil, surtos epidêmicos de
manchas foliares, devido á esses agentes causais eram pouco comuns, porém
a partir do ano de 2007 essa doença proporcionou grandes perdas em plan-
tios dessa espécie no Sul do Brasil. Nos anos seguintes, já foi possível constatar
a mancha de micosferela em plantios comerciais localizados no estado de São
Paulo.

SUMMARY
Eucalyptus globulus is a species that has good production capacity and
can easily adapt in different types of soils and temperate regions. The advance
of reforested areas, the planting of species more susceptible to certain pests
and pathogens and the repetitive use of the same area for planting created
favorable conditions to the occurrence of many plant health problems. Some
diseases were found concomitant with the growth of eucalyptus plantations in
Brazil, among them, the disease caused by species of Myscosphaerella and Ter-
atosphaeria. In Brazil, outbreaks of leaf spots, due to these causative agents
were unusual, but from 2007 this disease brought great losses in crops of this
species in southern Brazil. In the following years, it has been possible to verify
Mycosphaerella leaf disease in commercial plantations in São Paulo state.

Introdução pertencem aos gêneros Mycosphaerella e Teratos-

Muitos patógenos, principalmente fungos,
ocorrem em várias espécies de eucalipto, desde a
fase de viveiro até os plantios adultos. Dentre as do-
enças fúngicas, destaca-se a mancha de micosferela,
causada por um complexo de espécies de fungos que
phaeria. Os fungos T. nubilosa e T. cryptica são con-
siderados os mais importantes em nível mundial e
são responsáveis pela doença foliar mais significati-
va para espécies de eucalipto, especialmente para o
Eucalyptus globulus (Labill) (Carnegie e Ades, 2002;

1
Centro de Fitossanidade- Quarentenário IAC, CEP-13020-902, Campinas-SP. 2Departamento Ciências Florestais, Faculdade de
Ciências Agronômicas – UNESP, CEP-18.610-307, Botucatu-SP.

30 RAPP - Volume 24, 2016

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
Hunter et al., 2009).
Outras espécies de Mycosphaerella e Tera-
tosphaeria demonstram patogenicidade aparen-
temente fraca ou podem atuar como saprófitas no
tecido necrótico, seguidas pela infecção de outras
espécies patogênicas, insetos ou senescência natu-
ral da folha. Devido a alguns rearranjos taxonômi-
cos, principalmente relacionados a análises filogené-
ticas, algumas espécies que pertenciam ao gênero
Mycosphaerella, foram transferidas para o gênero
Teratosphaeria (Crous, 2009).
Os sintomas associados a essa doença são
variáveis, e diferem entre si, dependendo da espécie
do hospedeiro e do patógeno. Nas folhas os sinto-
mas são caracterizados por manchas necróticas lo-
calizadas, que reduzem a capacidade fotossintética
das folhas ocasionando desfolha precoce em plantas
juvenis.
Em muitos casos, as manchas crescem e coa-
lescem formando lesões muito grandes que podem
ocupar toda a superfície da área foliar resultando na
degradação da folha. As manchas podem ser arre-
dondadas ou irregulares, de coloração variando de
amarelo-pardo a marrom-escuro, onde se formam
pontuações escuras, que correspondem aos corpos
de frutificação do patógeno (pseudotécios). Devido
a fatores relacionados à estrutura e constituição ce-
lular do parênquima, a intensidade dos sintomas é
maior em folhas jovens quando comparadas ás fo-
lhas adultas (Smith et al., 2007).
Os danos causados por esses patógenos tam-
bém incluem cancros e morte prematura dos ramos,
e em alguns casos, atrofia e morte da árvore do topo
para a base. As alterações no metabolismo das ár-
vores resultam em redução do crescimento, além
disso, essa doença pode contribuir para infecções
provocadas por patógenos secundários e promover
consideráveis prejuízos econômicos.
Quando há condições de umidade favoráveis,
os esporos (ascósporos) do fungo são liberados dos
pseudotécios e infectam o hospedeiro por meio da
abertura dos estômatos. Em condições de campo os
ascósporos são dispersos pelo vento, água de chuva
e insetos. Em condições de viveiro a doença também
é disseminada por água de irrigação, circulação de
pessoas, ferramentas, maquinário entre outras ma-
neiras que permitam que os esporos alcancem os
hospedeiros suscetíveis.
Para identificação de muitos fitopatógenos,
RAPP - Volume 24, 2016
um fator importante é a especificidade, porém, mui-
tas espécies podem também infectar outros hospe-
deiros. Portanto, a taxonomia de Mycosphaerella
spp. e Teratosphaeria spp. é baseada em uma série
de dados e características, incluindo sintomas no
hospedeiro, padrões de germinação dos esporos,
morfologia do fungo em meio de cultivo, e filogenia.
A metodologia mais efetiva de controle para essa do-
ença pode estar relacionada com o desenvolvimento
de variedades resistentes, ou a substituição de plan-
tas suscetíveis por espécies mais resistentes.
As fontes de inóculo podem ser provenien-
tes de qualquer país com o qual o Brasil realize im-
portações de materiais. É provável que esses fungos
tenham sido introduzidos no país por meio de ascós-
poros dispersos pelo vento ou por insetos, ou tam-
bém pelo movimento de sementes e mudas entre
Brasil, Uruguai e Argentina, devido à detecção de al-
gumas espécies que também foram constatadas nos
referidos países.
O hospedeiro: Eucalyptus globulus
A qualidade da madeira e o seu rápido de-
senvolvimento fazem com que o eucalipto seja a ár-
vore mais plantada, impulsionando o crescimento de
cultivos comerciais em muitas regiões onde foi intro-
duzido (Alfenas et al., 2009; Medrado et al., 2005).
Atualmente, espécies de eucalipto são cultivadas
para os mais diversos fins, tais como papel, celulose,
lenha, carvão, serraria, óleos para indústrias farma-
cêuticas, mel, ornamentação e quebra-vento, dentre
outros. No Brasil, os plantios de eucalipto ocupam
5,56 milhões de hectares da área de árvores planta-
das no País, localizados principalmente nos Estados
de Minas Gerais (25,2%), São Paulo (17,6%) e Mato
Grosso do Sul (14,5%) (IBÁ, 2015).
O E. globulus foi a primeira espécie de eu-
calipto introduzida no Brasil, no início do século XX
(Braga, 1971; Vitti e Brito, 2003). Originária do su-
deste da Austrália, incluindo a Ilha da Tasmânia, o sul
de Vitória e as ilhas de Bass Strait (Lavrabre, 2001;
Vitti e Brito, 2003; Barrela, 2011). Apresenta boa ca-
pacidade de produção podendo chegar a até dois ci-
clos de produção vegetativa após a primeira explora-
ção integral (Vitti e Brito, 2003). É capaz de suportar
invernos chuvosos e temperaturas mais baixas, e por
este motivo foi introduzida no Rio Grande do Sul de-
vido às condições de clima favoráveis (Xavier et al.,
2007).
31
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
Apresenta heterofilia muito aparente. As fo-
lhas juvenis são sésseis, ovaladas e recobertas por
uma camada cerosa de cor azulada, surgindo opos-
tas em caules de secção quadrangular. As folhas das
árvores adultas são estreitas, alongadas, falciformes
com uma camada cerosa verde acinzentada (particu-
larmente na face abaxial), surgindo alternadamente
ao longo de caules arredondados.
Devido à sua rápida taxa de crescimento, da
polpa de madeira maciça e da excelente qualidade
para produção de papel e celulose, é uma das es-
pécies de maior demanda no mercado internacional
(Yang e Fife, 2000). Apresenta madeira clara de co-
loração amarelo-pálido, compacta, rija, muito forte
e de grande durabilidade (30 a 50 anos), muito utili-
zada em construção naval, pilares de pontes e quais-
quer obras hidráulicas, marcenaria, lenha e carvão
(Correa, 1931).
Existem quatro subespécies de E. globulus:
E. globulus subesp. bicostata, E. globulus subesp.
maideni, E. globulus subesp. globulus, E .globulus
subesp. pseudoglobulus (Boland et al., 1991, citado
por Vitti e Brito, 2003). Seus principais sinônimos po-
pulares no Brasil são: árvore-de-febre, gomeiro-azul,
eucalipto-limão (Lorenzi e Matos, 2002).
O avanço das áreas reflorestadas para regi-
ões mais quentes e úmidas, o plantio de espécies
mais suscetíveis e a utilização repetitiva de uma
mesma área para plantio criaram condições favorá-
veis à ocorrência de doenças (Furtado et al., 2008).
Algumas doenças foram constatadas concomitantes
ao crescimento do cultivo de eucalipto no Brasil,
como as manchas causadas por espécies de Myscos-
phaerella e Teratosphaeria, responsáveis por gran-
des perdas econômicas em plantios de E. globulus.
A mancha de Micosferela
A doença e seus agentes causais: Mycosphaerella
spp. e Teratoaphaeria spp.
Dentre as doenças foliares mais significati-
vas para o eucalipto, está a mancha de Micosferela
(Mycosphaerella leaf disease - MLD) também cha-
mada de mancha de Teratosferia (Teratosphaeria
leaf disease- TLD), causada por um complexo de es-
pécies de Mycosphaerella e Teratosphaeria (Crous et
al., 2009; Hunter et al., 2011). Os fungos T. nubilosa
e T. cryptica são considerados os mais importantes
em nível mundial (Carnegie e Ades, 2002; Hunter et
32 RAPP - Volume 24, 2016
al., 2009), e segundo Park e Keane (1982b) e Hun-
ter et al. (2009), são as primeiras espécies a infec-
tar tecidos jovens e suculentos, adquirindo nutrien-
tes por meio de uma relação hemibiotrófica com o
hospedeiro. Essas duas espécies de Teratosphaeria
são relevantes para as espécies de eucalipto E. glo-
bulus (Labill) e E. nitens (Deane and Maid.) Maid.,
das quais muitos plantios concentram-se em regiões
temperadas (Hunter et al., 2004).
Os gêneros de fungos Mycosphaerella e Te-
ratosphaeria (Capnodiales, Dothideomycetes, As-
comycota), se caracterizam pela formação dos
ascos no interior de lóculos e estroma unilocular
peritecióide, denominado pseudotécio (Alexo-
poulos et al., 1996, Putzke e Putzke, 1998). Os
pseudotécios são produzidos em um aglomerado
de hifas entrelaçadas junto ao substrato próprio
bem desenvolvido composto por hifas de colora-
ção marrom a marrom acinzentada (Alexopoulos
et al., 1996), características da ordem Capnodia-
les (Crous, 1998). Atualmente são conhecidas
mais de 150 espécies de fungos dentro dos gê-
neros Mycosphaerella e Teratosphaeria, e vários
gêneros anamorfos (alguns ainda não identifica-
dos) associados ao eucalipto, causando manchas
foliares e cancros na haste. (Jackson et al., 2004;
Crous et al., 2007b; Hunter et al., 2011). Segundo
Crous (1998) e Crous et al. (2006), outras espécies de
Mycosphaerella e Teratosphaeria demonstram pato-
genicidade aparente fraca ou podem atuar como sa-
prófitas no tecido necrótico, seguidas pela infecção
de outras espécies patogênicas, insetos ou senes-
cência natural da folha.
Além de E. globulus, existem relatos na Aus-
trália de T. cryptica associada com E. marginata e E.
patens (Carnegie e Keane, 1998). Espécies de agen-
tes causais de mancha de micosferela também fo-
ram isoladas de E. dunnii, E. benthamii, E. grandis,
E. moluccana, E.nitens, E. saligna, E. urophylla, E.
tereticornis, E. platyphylla, E. deanei, E. grandis,
E. aglomerata, E. camaldulensis, E. botryoides, E.
quadrangulata, E. smithii, E. viminalis, E. maide-
nii, E. grandiflora, Corymbia henryii, C. variegata e
seus híbridos (Ganapathi, 1979; Carnegie e Keane,
1994,1998; Crous, 1998; Crous et al., 2000; Carne-
gie e Ades, 2002; Maxwell et al., 2003; Alfenas et al.,
2009; Hunter et al., 2004; Crous et al., 2007a, 2007b;
Smith et al., 2007; Crous et al., 2009; Perez et al.,
2009a; Perez et al. 2009b, 2009c; Teodoro et al.,
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

2012; Passador et al.,, 2013; Garrett, 2015;Cândido

et al., 2014; Perez et al., 2014; Soria et al., 2014).

Sintomas nos hospedeiros e ciclo vital do patógeno
Os sintomas podem variar de acordo com a
espécie do hospedeiro e do patógeno, bem como o
estádio foliar. Primeiramente, são observadas man-
chas necróticas localizadas que reduzem a capaci-
dade fotossintética das folhas, ocasionando desfo-
lha precoce em plantas juvenis (Ganapathi, 1979),
segundo Carnegie (2007), o fungo T. nubilosa pode
causar 95% de desfolha das árvores.
Quando não há metodologias eficientes para
o controle, a desfolha pode se repetir ao longo do
ciclo da cultura ocasionando perdas de produtivida-
de, bem como perdas econômicas (Wingfield et al., Figura 1. Sintomas de MLD em diferentes estádios folia-
res de E. gobulus. Juvenil («). Transição - juvenil para adul-
2013). No verão, que corresponde ao período de ta (T). Adulta (*). Foto: Martha Maria Passador.
maior conversão de energia solar em crescimento,
a desfolha diminui a eficiência dessa conversão. No
inverno além da redução de temperatura e pluvio-
sidade que afeta naturalmente o desenvolvimento
vegetal, a desfolha leva a planta a redirecionar ener-
gia destinada ao crescimento secundário para a re-
composição de sua área foliar, o que prejudica o de-
senvolvimento da planta (Freitas e Berti Filho, 1994;
Garrett, 2015).
As manchas ocasionadas podem ser arre-
dondadas ou irregulares com coloração amarelo-
-pardo a marrom-escuro, e para algumas espécies,
com bordas de cor marrom escuro (Park e Keane,
1982b; Crous, 1998) (Figura 1). Frequentemente, as
lesões crescem e coalescem formando lesões mui-
to grandes que podem ocupar toda a superfície da
área foliar e devido a isso, pode ocorrer a degra-
dação e queda da folha. Os patógenos podem ser
encontrados de maneira unitária ou associados na
mesma folha, bem como na mesma mancha, com
possível contato de micélios de diferentes espécies
de Mycosphaerella e Teratosphaeria levando à anas-
tomose e à troca de material genético (Hunter et al.,
Figura 2. Árvores de E. globulus em plantio comercial. Ár-
2009). Dependendo da espécie do fungo e hospedei- vores com desfolha causada pela mancha de micosferela
ro, é possível observar os pseudotécios do patógeno (esq.); árvore tolerante (dir.). Foto: Martha Maria Passa-
na região das manchas, na face abaxial ou em ambas dor.
as faces da folha. Também é possível a formação de
cancros nas hastes, como por exemplo, T. cryptica (Figura 2). As árvores frequentemente têm o seu
em E. delegatensis. metabolismo alterado e isto ocasiona redução do
As plantas altamente suscetíveis podem ter o crescimento. O estresse resultante da doença faz
seu rendimento comprometido pela doença, o que com que a árvore esteja pré-disposta a outros pató-
pode levar à morte da árvore (Smith et al., 2007) genos e insetos, bem como a fatores abióticos des-

RAPP - Volume 24, 2016 33

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

favoráveis (Carnegie e Keane, 1994; Hunter et al.,
2004).
Os ascósporos consistem na primeira fonte
de inóculo, para a maioria das espécies de Mycos-
phaerella e Teratosphaeria (Crous, 2007b; Park e
Keane, 1987). Para ocorrência da doença e necessá-
rio que haja condições favoráveis, umidade a partir
de 90% e temperaturas entre 15ºC e 25ºC (Alfenas,
2009; Crous, 2009). Quando há condições de umida-
de favoráveis os ascósporos são liberados dos pseu-
dotécios, dispersos pelo vento e infectam o hospe-
deiro por meio da abertura dos estômatos (Figura 3)
(Park, 1988; Alfenas, 2009).
Após a infecção, os primeiros sintomas da
doença podem aparecer em um período de três a
quatro semanas em materiais genéticos mais susce-
tíveis, e seis semanas em materiais mais tolerantes
(Park et al., 2000). Os pseudotécios formam-se após
oito semanas (Park e Keane, 1987), individualmente
abaixo dos estômatos no tecido necrótico, que por
sua vez, fornecem lugar para a formação dos pseu-
dotécios, e assim a distribuição dos estômatos pode
refletir a quantidade dos pseudotécios. Em Mycos-
phaerella são submersos, pequenos, simples, globo-
sos e pretos com paredes espessas, alguns podem
estar proeminentes, e possuem ostíolos centrais fre-
quentemente revestidos por perífises (Crous, 2009).
Os pseudotécios de Teratosphaeria não se encon-
tram totalmente imersos no tecido do hospedeiro,
sendo parcialmente superficiais, e possuem partes
de hamatécios (Crous, 1998; Crous, 2009).
Nos pseudotécios se formarão as ascas,
com oito ascósporos bicelulares ou tricelulares
dependo da espécie (Park et al., 2000), que após
24 horas germinam formando tubos germinativos
que se desenvolvem a partir das duas extremi-
dades dos esporos. Os ascósporos são altamente
adaptados para sobreviverem à desidratação na
superfície das folhas, por um período de até oito
semanas, com baixa perda da infectividade. Estes
esporos em geral podem apresentar forma elip-
soidal, fusiforme ou com extremidades arredon-
dadas, e possuem um ou mais septos. Em Mycos-
phaerella são hialinos, lisos, possuem um septo, e
não apresentam apêndices e camadas, e formam-
-se em ascas bitunicadas e fasciculadas (Crous,
2009). Os ascósporos de Teratosphaeria diferem
de Mycosphaerella por possuírem ascósporos com

Figura 3. Ciclo vital de Teratosphaeria nubilosa. Fotos: Martha M. Passador.

34 RAPP - Volume 24, 2016

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
camadas que geralmente se tornam marrons quan-
do ainda estão nos seus ascos (Crous, 2009).
Muitos estudos sobre esses patógenos apre-
sentam algumas dificuldades relacionadas à espo-
rulação para realização de inoculações artificiais,
sendo de grande importância a formação do estado
anamorfo. Os estádios conidiais de anamorfos de es-
pécies de Mycosphaerella e Teratosphaeria são va-
riados, algumas espécies produzem conídios em pic-
nídios, outras em acérvulos, outras em conidióforos
(Alexopoulos et al., 1997).
Algumas espécies infectam primeiramente
por conídios, porém certos estados anamorfos ainda
são desconhecidos, incluindo o estado anamorfo de
T. nubilosa (Jackson et al., 2008, Alfenas et al., 2009).
Embora este fungo tenha sido relacionado à Uwe-
braunia juvenis, essa relação foi considerada duvi-
dosa devido à rara ocorrência de conídios desse em
meio de cultura (Crous et al., 2006).
Distribuição mundial da doença
A introdução de espécies de eucalipto em
muitos países do Hemisfério Sul no século XX con-
tribuiu consideravelmente para a distribuição geo-
gráfica de T. nubilosa (Hunter et al., 2009). A pri-
meira constatação desse fungo, fora da Austrália,
foi no ano de 1950 na África do Sul. Porém, Lund-
quist e Purnell (1987) acreditam que o fungo já po-
deria estar presente no país desde 1930. Posterior-
mente, foi relatado em outros países e, em 1982,
já se encontrava amplamente distribuído na Nova
Figura 4. Distribuição mundial dos agentes causais de mancha de micosferela em eucalipto.
RAPP - Volume 24, 2016
Zelândia (Mohamed et al., 2003). Segundo Lindquist
e Purnell (1987), surtos epidêmicos em plantações
de E. nitens, promoveram um comprometimento de
até 32% de área foliar por manchas causadas por es-
ses patógenos, causando desfolha de 35 a 50% em
plantas de até três anos de idade, e tendo como con-
sequência uma redução de até 17% no incremento
de madeira.
A ocorrência de mancha de micosferela, cau-
sada pelo complexo Mycospharella e Teratosphae-
ria, principalmente por T. nubilosa em plantios de
eucalipto, apresentam distribuição mundial (Fi-
gura 4). Além da Austrália (Park e Keane, 1982a;
Carnegie e Keane, 1994, Maxwell et al., 2003) e
Nova Zelândia (Hunter, 2004), há relatos na Áfri-
ca do Sul (Lundquist & Purnell, 1987), Etiópia
(Gezahgne et al., 2006), Zimbabwe (Jimu et al.,
2015) e China (Hunter et al., 2009). Os agentes
causais também foram relatados em alguns pa-
íses da América do Sul, como Uruguai (Perez et
al., 2009a, 2009b; Soria et al., 2014), Argentina
(Crouset al., 2006; Ramos e Perez, 2014), Chile
(Ahumada et al., 2003) e Brasil (Perez et al., 2009c,
Passador et al., 2012; Teodoro et al., 2012; Passador
et al., 2013; Cândido, 2014).
A primeira constatação de T. nubilosa no Qu-
ênia, Tanzânia e Zâmbia foi em 1995 como Mycos-
phaerella juvenis (Crous, 1998), e na Etiópia em 2000
(Hunter et al., 2009). É provável que esse fungo te-
nha chegado à Europa por volta do ano 2001, pos-
teriormente constatado em E. globulus na Espanha
35
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)

(Crous et al, 2004) e em Portugal (Silva et al., 2008;
Hunter et al., 2009; Silva et al., 2009).
No Brasil, surtos epidêmicos de manchas fo-
liares, devido a esses agentes causais eram pouco
comuns. Até o ano de 2004, foram relatadas apenas
quatro espécies, sem muita importância epidemio-
lógica, sendo elas M. heimii, M. parkii, M. suttoniae e
T. suberosa, em E. globulus e E. nitens (Alfenas et al.,
2009) e também M. scytalidii em E. globulus (Crous
et al., 2006). A preocupação com relação à doença
teve seu início em 2007, com a primeira constata-
ção de T. nubilosa (Figura 5) no Rio Grande do Sul, o
que resultou em muitos danos em plantações de E.
globulus (Perez et al., 2009a). Estudos realizados em
plantios nesta região constataram que 50 a 90% das
árvores de E. globulus apresentavam sintomas cla-
ros desta doença, bem como a morte de 2,5 a 18,4%
das árvores em plantios de 16 meses, também foi as-
sociada á referida doença (Ramiro et al., 2007). Nos
anos seguintes, já foi possível constatar esse patóge-
no em plantios comerciais localizados no estado de
São Paulo (Passador et al., 2012).
Existem relatos no Brasil em E. dunnii, E.
globulus, E. benthamii, E. grandis, E. moluccana,
E.nitens, E. saligna, E. urophylla e seus híbridos, ocor-
rendo em áreas de temperaturas entre 15 e 25 ºC e
presença de água nas folhas (Alfenas et al., 2009; Pe-
rez et al, 2009c; Cândido et al., 2014). Além de T. nu-
bilosa, outras espécies também foram constatadas
no país: T. pseudafricana, T. ohnowa, T. pseudoeu-
calypti, T. flexuosa, T. perpendicularis, Mycosphae-
rella heimii,, M. marksii, M. lateralis, M. gregaria, M.
communis, M. crystallina, M. scytalidii, Dissoconium
dekkeri (=M. lateralis) (Perez et al, 2009c; Passador
et al, 2012; Teodoro et al., 2012; Passador et al.,
2013; Cândido et al., 2014).
A detecção de espécies de agentes causais de
mancha de micosferela no Brasil sugere que foram
introduzidas por meio de mudas e sementes, e as-
sim também promoveu a introdução em diferentes
locais no país. Também é possível que a introdução
e disseminação tenham ocorrido por meio da dis-
persão natural de ascósporos pelo vento, sendo esse
um grande fator responsável pela distribuição des-
ses fungos (Park e Keane, 1982b; Park, 1988; Hunter
et al., 2009).

Figura 5. A-D: Folhas de Eucalyptus globulus com manchas causadas por T. nubilosa. A: manchas em folha jovem. B:
face abaxial de folha jovem. C: manchas em folha adulta. D: face abaxial de folha adulta. E: pseudotécio contendo ascas
e ascósporos. F: ascósporos germinados em meio de extrato de malte (MEA). F: cultura de T. nubilosa em meio MEA.
Barras: 5 mm (B, D) e 20 µm (E, F). Fonte: Passador et al., 2012.

36 RAPP - Volume 24, 2016

 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
É provável também que a introdução dos
patógenos tenha ocorrido pelo movimento de se-
mentes e mudas entre Brasil, Uruguai e Argentina.
Algumas das espécies Mycosphaerella e Teratospha-
eria isoladas no Brasil, também foram constatadas
no Uruguai como M. lateralis, M. marksii, T. nubilosa
e T. ohnowa, T. nubilosa (Pérez et al., 2009a, 2009b).
Além do Uruguai, as fontes de inóculo podem ser
provenientes de qualquer país com o qual o Brasil
realize importações de materiais.
Os agentes causais e suas distâncias taxonômicas
Algumas espécies podem ser diferenciadas
umas das outras por meio dos padrões de germina-
ção dos ascósporos (Ganapathi, 1979; Park e Keane,
1982a; Crous, 1998), e quando cultivadas em meio
de cultura podem apresentar micélio cotonoso ou
não, e colorações distintas (Crous, 1998; Maxwell,
2003). Por exemplo: germinação bipolar em linha
reta e com tubo germinativo sem ramificações como
o fungo T. nubilosa; em apenas em um dos pólos do
esporo como em M. gregaria; ou germinação bipo-
lar com ramificações perpendiculares como em M.
lateralis.
Na maioria das espécies, não ocorre forma-
ção do pseudotécio em meio de cultura, mesmo
que sejam axênicas, e são encontradas somente nas
manchas em folhas (Park e Keane, 1982a; 1982b).
Em meio de cultura (extrato de malte – MEA), o cres-
cimento micelial e a coloração podem variar entre
tons de cinza, marrom e verde escuro, porém com
velocidades de crescimento semelhantes, crescen-
do cerca de dois centímetros em quatro semanas
(Crous, 1998, Maxwell, 2003).
A taxonomia relacionada à Mycosphaerella
e Teratosphaeria e a identificação de espécies que
pertencem a estes gêneros torna-se difícil algumas
vezes, principalmente em função dos hospedeiros,
o que já foi considerado como fator primário para
identificação. Atualmente, características morfoló-
gicas, conexões com teleomorfos, bem como os pa-
drões de germinação dos ascósporos, têm sido ca-
racterísticas taxonômicas úteis para a classificação
desses patógenos (Crous, 1998, Hunter et al., 2011).
Devido a alguns rearranjos taxonômicos,
principalmente relacionados a análises filogenéticas
(Crous 2001, Crous, 2006, 2007b; Perez 2009c), al-
gumas espécies que pertenciam ao gênero Mycos-
phaerella, foram transferidas para o gênero Teratos-
RAPP - Volume 24, 2016
phaeria, como: T. molleriana, T. nubilosa, T.cryptica,
T. ohnowa, T. parva, T. africana. Porém, muitas con-
tinuam em Mycosphaerella, como: M. crystalina, M.
lateralis, M. marksii, M. gregaria, M. parkii. Apesar
das mudanças nos nomes das espécies dos agentes
causais, o nome comum para a doença não foi al-
terado (Crous, et al., 2007a, 2007b; Hunter et al.,
2009). Recentemente os termos mancha de Micos-
ferela (Mycosphaerella leaf disease - MLD) e man-
cha de Teratosphaeria (Teratosphaeria leaf disease
- MLD) foram propostos para as doenças causadas
por Mycosphaerella spp. e Teratosphaeria spp, res-
pectivamente (Hunter et al., 2011).
Metodologias para controle
Técnicas de melhoramento genético são bas-
tante importantes para o controle de mancha de
micosferela, principalmente em plantios de E. glo-
bulus, nos quais acarreta grandes prejuízos. A forma
mais efetiva de controle para essa doença pode estar
relacionada com o desenvolvimento de variedades
resistentes, ou a substituição de plantas suscetíveis
por espécies consideradas mais resistentes, como foi
aplicado em alguns locais como África do Sul (Lund-
quist e Purnell, 1987) e noroeste da Austrália (Mo-
hammed et al., 2003). Esta estratégia também foi
utilizada em plantações jovens com E. delegatensis
e E. regnans, na Nova Zelândia, que foram toma-
das pela doença, o que conduziu ao uso de espécies
como o E. nitens (Crous, 2009).
Em viveiros, o controle com produtos quími-
cos torna-se mais fácil, porém, não é a melhor solu-
ção quando se trata de condições de campo. Fatores
como a penetração exclusivamente por aberturas es-
tomáticas podem ser levados em consideração para
o desenvolvimento de plantas por meio de melhora-
mento genético. Por exemplo, o atraso na abertura
dos estômatos pode contribuir para resistência, pois
os ascósporos germinados na superfície do hospe-
deiro durante o período noturno não encontrariam
os estômatos abertos e dessecariam, evitando a en-
trada do patógeno e, consequentemente, a infecção
do hospedeiro.
A utilização de híbridos entre espécies resis-
tentes e suscetíveis também é uma alternativa viá-
vel, por exemplo, híbridos de E. globulus (suscetível
a T. nubilosa) e E. grandis (resistente a T. nubilosa)
(Carnegie e Ades, 2002; Carnegie e Keane., 1998;
Milgate et al. 2005). Híbridos interespecíficos que
37
 Martha Maria Passador e Edson Luiz Furtado (30-41)
apresentem transição mais rápida de folhas jovens
para adultas também podem ser utilizados como for-
ma de controle (Hamilton et al., 2010).
A busca de material genético resistente, tam-
bém pode envolver estudos relacionados aos meca-
nismos de defesa estruturais pré-formados do hos-
pedeiro, como pilosidade, espessamento da cutícula,
número e distribuição dos estômatos, lignificação
das paredes celulares, número e espaçamento das
células do parênquima, xilema e fibras esclerenqui-
máticas presentes nas nervuras das folhas. Segundo
Silva et al. (2005), tecidos parenquimáticos também
podem exibir resistência aos patógenos, através da
organização e características das células. Smith et al.
(2007) verificaram que E. nitens, uma espécie consi-
derada resistente aos agentes causais de mancha de
micosferela, possui uma maior proporção de parên-
quima paliçádico e uma menor quantidade de espa-
ços intercelulares em suas folhas.
Outro fator que pode contribuir fortemente
é o gerenciamento de ações quarentenárias, pois é o
primeiro passo para o controle de doenças. Tais me-
didas devem ser aplicadas e atualizadas para reduzir
o risco da dispersão de fungos fitopatogênicos (Auer
e Santos, 2009), assim como para T. nubilosa, que
está cada vez mais presente em novos ambientes
(Hunter et al., 2009; Garret, 2015). Portanto, é im-
portante que as espécies de Mycosphaerella e Tera-
tosphaeria, relatadas no Brasil e em países vizinhos
sejam incorporadas em normas quarentenárias e lis-
tas de discussão para controlar o avanço da doença
no Brasil.
De maneira geral, para o desenvolvimento
de metodologias de controle torna-se necessário o
conhecimento dos patógenos, seu habitat e exigên-
cias fisiológicas para sua sobrevivência, não somente
para espécies de Mycosphaerella e Teratosphaeria,
como também para agentes causais de muitas doen-
ças. Desta maneira, poderão ser desenvolvidas solu-
ções eficazes e menos agressivas ao meio ambiente.
Dentre as medidas adotadas atualmente por
empresas localizadas na região Sul do país, assim
como no Uruguai, a seleção de plantas resistentes,
principalmente aquelas remanescentes dos campos
atacados e sem sintomas é uma metodologia viável.
A partir destas plantas é possível obter clones e fa-
zer cruzamentos para futuros testes de progênies, e
inoculações em ambientes controlados para a sele-
ção de materiais ainda mais resistentes dentro de E.
38 RAPP - Volume 24, 2016
globulus.
A hibridação interespecífica é outro caminho
que está sendo seguido visando à incorporação do
caráter da qualidade da madeira presente em E. glo-
bulus em outras espécies como: E. grandis; E. uro-
phylla e E. saligna. Estes materiais mais resistentes
selecionados apresentam atualmente grande valor
pra obtenção de híbridos.
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41
 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)

MANEJO DO MÍLDIO DA CEBOLA:

AVANÇOS E BARREIRAS DA PESQUISA
CIENTÍFICA
Edivânio R. Araújo1 e Daniel P. Alves1

RESUMO
A cebola é uma hortaliça de grande importância econômica e social no
Brasil e no mundo. Contudo, estudos mais recentes sobre agentes etiológicos
que causam danos à cultura são relativamente escassos. Entre esses agentes, o
causador do míldio, Peronospora destructor, é um dos mais destrutivos, uma vez
que não existem cultivares resistentes disponíveis no Brasil, o que leva ao uso
intensivo de defensivos. Pretende-se, nesta revisão, abordar a ocorrência global
do patógeno, bem como relatar os principais grupos de pesquisa que trabalham
com o patossistema. Questões relacionadas ao manejo da doença serão trata-
das, destacando-se os sistemas de alerta já documentados ou ainda em fase de
validação. Os principais avanços e obstáculos na busca de resistência também
serão discutidos, abordando tópicos sobre: descoberta de genes de resistência;
dificuldade de introgressão de genes de resistência em materiais comerciais; e
utilização de marcadores moleculares citoplasmáticos e nucleares, que auxilia-
rão no desenvolvimento de híbridos. Espera-se, a partir dessas abordagens, es-
clarecer aspectos biológicos, epidemiológicos e de manejo do míldio da cebola,
contribuindo para o debate e avanço das fronteiras do conhecimento sobre esse
patossistema.

SUMMARY
Onion is a vegetable of great economic and social importance in Brazil
and worldwide. However, there are few recent studies on etiological agents that
cause crop damages. Among these agents, the causal agent of onion downy mil-
dew, Peronospora destructor, is one of the most destructive, since there are no
resistant cultivars available in Brazil, leading to the intensive use of fungicides.
In this review, we intend to address the overall occurrence of the pathogen as
well as report the main research groups working with the pathosystem. Issues
related to disease management will be addressed, especially the forecasting sys-
tems already documented or still in the validation step. The main progress and
obstacles in resistance search will also be discussed, addressing topics: finding
resistance genes; difficulty of the resistance gene introgression into commercial
materials; and use of cytoplasmic and nuclear molecular markers that will assist
in the development of hybrids. We hope, from these approaches, to clarify to-
pics about biological, epidemiological and management of onion downy mildew,
contributing to the debate and advance the knowledge frontiers about this pa-
thosystem.

1
Epagri/Estação Experimental de Ituporanga, Estrada Geral Lageado Águas Negras, 453, Ituporanga – SC, 88400-000

42 RAPP - Volume 24, 2016

 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)
Introdução
A cebola (Allium cepa L.) é a terceira hortaliça
em importância econômica no âmbito nacional. Em
2015, a área estimada de plantio foi de aproximada-
mente 58 mil hectares, enquanto a produção brasi-
leira esteve próxima a 1,6 milhões de toneladas. A
produção estimada da cultura se distribui da seguin-
te maneira: região Nordeste (18,3%), Sudeste (22%),
Sul (53,1%) e Centro-Oeste (6,6%). Não há registros
significativos de produção de cebola na região Norte
do país (IBGE, 2015). Apesar da relevância da cultu-
ra, estudos que abordam aspectos fitopatológicos
ainda são relativamente escassos quando compara-
dos com os já existentes para outras hortaliças, ci-
tando o tomate e a batata.
As doenças que acometem a cebola têm inci-
dência e/ou severidade dependente de diversos fa-
tores, tais como tolerância/resistência dos cultivares
utilizados, sistema de produção (mudas em canteiros
ou semeadura direta); época de semeadura; popula-
ção de plantas; condições climáticas locais; presen-
ça ou ausência de outras plantas da mesma família;
práticas de manejo do solo e equilíbrio nutricional;
diversidade da população do fitopatógeno; entre ou-
tros. Dessa forma, é possível observar diferenças de
relevância das doenças entre regiões. Nota-se que,
enquanto em regiões com clima tropical, a mancha
púrpura (Alternaria porri) é uma doença muito preo-
cupante (Reis & Henz, 2009); na região Sul, o míldio
está entre os principais fatores bióticos limitantes da
produção (Wordell Filho & Boff, 2006).
A seguir, serão abordados tópicos relaciona-
dos ao histórico, epidemiologia, manejo e resistên-
cia genética ao míldio da cebola, relatando os prin-
cipais avanços e barreiras nas tentativas de redução
de prejuízos causados pela doença.
Etiologia e histórico do míldio da cebola
O primeiro relato documentado de míldio em
cebola ocorreu em 1841, na Inglaterra. Berkeley, ao
descrever as características morfológicas do patóge-
no que causava a doença, o classificou em um primei-
ro momento como Botrytis destructor. A ausência
de visualização ou descrição ilustrativa de oósporos
(esporos sexuais) causaram controvérsias na aloca-
ção do patógeno dentro do gênero Peronospora nos
anos seguintes. Em 1847, Unger propõe o nome P.
schleideni, aceito entre taxonomistas da área por
vários anos. Algumas outras propostas de classifi-
RAPP - Volume 24, 2016
cação foram apresentadas até o início do século XX,
citando B. parasitica, P. schleideniana e P. alliorum
(Yarwood, 1943). Porém, o nome P. destructor, pro-
posto após revisão realizada por Berkeley, em 1860,
é o utilizado atualmente nos trabalhos e manuscritos
produzidos. Assim sendo, o agente causal do míldio
da cebola, Peronospora destructor (Berkeley) Caspa-
ry ex Berkeley pertence à família Peronosporaceae,
ordem Peronosporales, classe Oomicetos e subdivi-
são Mastigomicotina.
O míldio da cebola tem ocorrência global,
sendo relatado nos principais países produtores
da hortaliça. Estimativas de perdas mais atuais não
estão relatadas, mas segundo Develash & Sugha
(1997), em condições favoráveis, a doença pode cau-
sar uma redução na produtividade de até 75%.
Os sintomas da doença podem ser observa-
dos em qualquer estádio de desenvolvimento da
cultura, tanto em folhas como em hastes florais. Ini-
cialmente observam-se manchas ovaladas de tonali-
dade verde-claro no sentido longitudinal das folhas
(Figura 1A). Um mofo violeta-acinzentado, corres-
pondente às estruturas do patógeno, pode ser ob-
servado em condições de alta umidade (Figura 1B),
nas primeiras horas da manhã (Wordell Filho & Boff,
2006). É comum, após a infecção por P. destructor e
a formação de eventuais lesões necróticas, que estas
sejam colonizadas por fungos saprófitas, em especial
por espécies de Stemphylium, o que pode causar al-
guma incerteza quanto à diagnose. Por se tratar de
um organismo biotrófico, dificilmente o patógeno
causará a morte da planta, sendo o subdesenvol-
vimento (Figura 1C), com consequente redução de
produtividade, os principais danos causados pelo
oomiceto.
A vasta distribuição do patógeno (Figura 2)
pode ser explicada pela ampla faixa térmica na qual
P. destructor consegue sobreviver e reproduzir. Por
se tratar de um parasita obrigatório, restos culturais
e plantas invasoras podem ser fontes de inóculo,
como demonstrado parcialmente no ciclo de vida
esquematizado do patógeno (Figura 3), contudo,
ainda não existem estudos aprofundados que com-
provem a importância epidemiológica dessas fon-
tes, em especial, das plantas invasoras. Apesar da
adaptabilidade térmica, P. destructor possui tempe-
raturas ótimas de desenvolvimento e esporulação.
Segundo Hildebrand & Sutton (1982), a esporulação
do patógeno ocorrerá apenas em temperaturas in-
43
 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)

Figura 1. Sintomatologia do míldio em folhas da cebola, causado por Peronospora destructor. A – manchas ovaladas
de tonalidade verde-claro em sentido longitudinal da folha; B – sinais do patógeno sobre a folha, dando um aspecto de
mofo acinzentado; C – plantas sob infecção da doença, apresentando subdesenvolvimento. A seta e o círculo indicam
sintoma da doença e sinais do patógeno, respectivamente.

feriores a 24°C, associado a umidade relativa do ar
≥ 95%. Bashi & Aylor (1983) relataram que a tempe-
ratura de 10°C foi a ideal para esporulação do pató-
geno, sendo a esporulação reduzida em função do
aumento da temperatura e de horas de exposição à
luz solar. Por sua vez, Bulovienė & Survilienė (2006)
constataram que uma alternância na temperatura
(15°C por oito dias, seguido de cinco dias a 22°C),
sob elevada umidade, favoreceram a esporulação de
P. destructor. O que se tem como consenso é que a
doença é favorecida por condições de alta umidade
associada a temperaturas amenas. Isso explica, em
parte, a razão de o míldio da cebola não ser uma
doença tão preocupante na região central do Brasil,
que é caracterizada por umidade relativa mais baixa
e temperatura mais elevada quando comparada às
regiões Sudeste e Sul.
Principais grupos e linhas de pesquisa sobre míldio
da cebola no mundo
Embora a doença tenha sido relatada em
mais de 40 países (Farr & Rossman, 2016), o número
de grupos de pesquisa que trabalham com o patos-
sistema é bem mais reduzido. Países como a Índia
(Thakur & Mathur, 2002) e o Brasil (Wordell Filho &
Boff, 2006) classificam a doença como de alta rele-
vância em virtude do seu potencial destrutivo e do
valor comercial da cultura. Em países onde a área de
cultivo da cebola não é tão extensa ou o monocul-
tivo não é tão evidente, a doença pode não causar
perdas elevadas, mesmo sendo endêmica. Além dis-
so, as diferentes épocas de cultivo adotadas nos di-
versos países também influenciam no surgimento de
epidemias. Nota-se que os grupos atuais de pesquisa
(publicações de fácil acesso entre 2005-2016) estão
localizados na Europa, Ásia e América do Sul (Figura
2). Centros de pesquisa com relevância em estudos
sobre cebola, como a “Washington State University”,
nos Estados Unidos, e o “Agriculture and Agri-Food
Canada”, no Canadá, vem se dedicando nos últimos
anos a estudos com bacterioses pós-colheita (com-
plexo de gêneros e espécies) e queima das pontas da
cebola (Botrytis squamosa), respectivamente. Sendo
assim, não listam entre os centros de pesquisa que
têm publicado trabalhos sobre míldio da cebola re-
centemente.
Outros fatores que podem estar associados a
uma limitada produção científica sobre o míldio da

44 RAPP - Volume 24, 2016

 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)

Figura 2. Países com relatos registrados de ocorrência do míldio da cebola (Peronospora destructor) e centros de pes-
quisa com artigos técnico-científicos sobre o patossistema, publicados em periódicos especializados no período de
2005-2016. Países com registro de ocorrência de míldio – América: Argentina, Bolívia, Brasil, Canadá, Costa Rica, Cuba,
El Salvador, Estados Unidos, Guatemala, México, Panamá, Uruguai e Venezuela. África: África do Sul, Ilhas Maurício,
Líbia, Quênia, Tanzânia e Zimbábue. Europa: Alemanha, Áustria, Bulgária, Ilhas Canárias, Escócia, Espanha, Finlândia,
Inglaterra, Irlanda, Itália, Grécia, Holanda, Lituânia, Polônia, Portugal, República Checa e Rússia. Ásia: China, Coréia,
Índia, Japão, Paquistão, Tailândia e Taiwan. Oceania: Austrália e Nova Zelândia (Farr e Rossman, 2016; Yarwood, 1943;
Moreno e Hernández, 1992; Develash e Sugha, 1997).

cebola são: i) o patógeno é um organismo biotrófi-
co, o que faz necessária a manutenção do inóculo
in planta; ii) a eficiência das moléculas de controle,
em especial o metalaxyl, que até o presente tem
controlado de forma satisfatória a doença; iii) e a
dificuldade de obtenção de cultivares com elevado
nível de resistência. Na figura 2 é apresentado um
mapeamento com a ocorrência relatada do míldio
da cebola no mundo, além dos principais grupos que
realizam pesquisas sobre a doença, com respectivas
áreas de estudo. O mapeamento foi realizado com
base nas produções técnico-científicas publicadas
em periódicos especializados no período de 2005-
2016.
Manejo e racionalização no uso de defensivos quí-
micos
O manejo do míldio da cebola baseia-se, prin-
cipalmente, no controle químico. Como mencionado
anteriormente, a utilização de moléculas com ação
sistêmica, em especial o metalaxyl, tem sido a for-
ma mais eficiente de controlar a doença até o pre-
sente momento (Develash & Sugha, 1997; Wordell
Filho et al., 2007). Moléculas alternativas, tais como
fosfito de potássio, acibenzolar-s-metil e extrato de
alga mostraram baixa eficiência de controle (Wordell
Filho et al., 2007). Sendo assim, o metalaxyl, asso-
ciado a algumas moléculas de efeito protetor, tais
como clorotalonil e mancozeb, vem sendo utilizadas
no Brasil há pelo menos 20 anos. É intrigante notar,
que apesar do monocultivo da cebola nas princi-
pais regiões produtoras do sul do país e da aplica-
ção frequente da mesma molécula, ainda não foram
constatadas populações insensíveis do patógeno aos
produtos aplicados, em especial o metalaxyl. Uma hi-
pótese para a explicação desse fato seria a perda de
“fitness” ou competitividade já relatada para outros
oomicetos. Essa alteração na competitividade pode

RAPP - Volume 24, 2016 45

 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)

Figura 3. Esquema simplificado do ciclo de vida de Peronospora destructor, agente causal do míldio da cebola. Adaptado
de Bayer CropScience (http://wwwbayercropscience.com.mx).

ser distinta conforme o patossistema. Em estudo re-
alizado com Plasmopara viticola, causador do míldio
da videira, no município de Holambra, Brasil, Gisi
& Sierotzki (2008) relatam que isolados resistentes
à azoxistrobina tendem a desaparecer quando não
submetidos à aplicação do produto. Essa prevalência
de isolados sensíveis à azoxistrobina na ausência do
fungicida indica uma perda de competitividade da-
queles que já adquiriram resistência. Por outro lado,
isolados de espécies de Phytophthora resistentes
à mefenoxam já foram caracterizados como sendo
igualmente ou até mais agressivos que isolados sen-
síveis (Café-Filho & Ristaino, 2008; Chapara et al.,
2011). Ainda não existem dados publicados nessa
linha de pesquisa para o míldio da cebola.
Outras estratégias vêm sendo desenvolvidas
no intuito de racionalizar o uso dos defensivos quí-
micos utilizados no controle do míldio. A redução
ou o uso de forma mais racional de agrotóxicos vai
ao encontro de demandas da sociedade e políticas
públicas, que exigem ambiente e alimentos menos
contaminados pelo homem.
No final da década de 1950, na Holanda, fo-
ram realizados os primeiros trabalhos que visavam
estabelecer um sistema de previsão para o míldio da
cebola (Figura 4), baseados em parâmetros climá-
ticos (Palti, 1989). Contudo, o primeiro sistema de
previsão a ser nomeado foi desenvolvido por Jesper-
son & Sutton (1987) e foi chamado de “DOWNCAST”
(acrônimo de “downy mildew forecaster”). O siste-
ma foi desenvolvido no Canadá e baseia-se em tem-
peratura, umidade relativa do ar e precipitação para
prever esporulação e infecção do patógeno. Os au-
tores testaram fungicidas com ação sistêmica e pro-

46 RAPP - Volume 24, 2016

 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)
tetora dentro do sistema. Concluiu-se que, apesar
do “DOWNCAST” ter uma boa precisão na previsão
da doença, a aplicação prática do sistema ainda não
poderia ser efetuada pela dificuldade de previsão do
primeiro ciclo de infecção, o qual seria decisivo para
uma maior ou menor intensidade da doença. Apro-
ximadamente 10 anos mais tarde, Visser (1998) re-
latou um aprimoramento do modelo “DOWNCAST”,
utilizando mais parâmetros, como a quantificação do
molhamento foliar. Mesmo com esse avanço, o autor
recomenda mais esforços para que o sistema funcio-
ne plenamente e possa ser aplicado na prática.
Entre o primeiro modelo nomeado e seu apri-
moramento, Battilani et al., (1996), na Itália, propôs
um modelo também baseado em parâmetros climá-
ticos (temperatura, umidade relativa e molhamento
foliar), o qual foi nomeado como ONIMIL (acrônimo
de “onion downy mildew”). Segundo os autores, o
modelo, que utiliza regras empíricas e matemáticas,
seria capaz de determinar, diariamente, a probabili-
dade de ocorrência do primeiro ciclo infeccioso, que
seria o momento mais adequado para o início das
pulverizações com fungicidas. Nesse caso também
foi sugerido maiores ajustes para que ocorra aplica-
ção prática a nível de campo.
Os modelos supracitados são melhor clas-
sificados como “sistemas de aviso” ou “sistemas
de alerta”. O termo “sistema de previsão” induz a
pensar que as medidas de controle serão tomadas
antes mesmo do processo de infecção e/ou esporu-
lação do patógeno. No entanto, para tais modelos,
os dados climáticos utilizados correspondem a um
Figura 4. Histórico em ordem cronológica dos sistemas de aviso/previsão para o míldio da cebola (Peronospora destruc-
tor), com respectivos avanços e aprimoramentos.
RAPP - Volume 24, 2016
período já passado, ou seja, é possível que o proces-
so infeccioso tenha iniciado. Esse fato é ressaltado
pelos autores do modelo “ZWIPERO”, os quais afir-
mam que este se trata de um verdadeiro sistema de
previsão. Friedrich et al., (2003), ao desenvolverem
o “ZWIPERO” (acrônimo de “Zwiebel–Peronospora
forecast”), modelo alemão baseado em variáveis cli-
máticas (temperatura, umidade, molhamento foliar
e precipitação), afirmavam que o modelo matemáti-
co “ZWIPERO”, por considerar dados previstos, e não
apenas dados já coletados, possuia a capacidade de
predizer os riscos de esporulação e infecção de P.
destructor, e consequentemente, realizar o manejo
com fungicidas protetores, e não apenas com sistê-
micos, como ocorrido nos modelos anteriores.
Outro sistema, elaborado no Reino Unido,
e que considera temperatura e umidade relativa
para previsão do míldio da cebola, foi desenvolvi-
do por Gilles et al., (2004). Já dispondo dos dados
anteriores, os autores compararam o sistema que
elaboraram, denominado “MILIONCAST” (acrônimo
de “mildew on onion forecast”), com aqueles rela-
tados na literatura. Segundo os autores, sob condi-
ção controlada, esporângios foram produzidos mais
rapidamente entre 8 a 12° C, após cinco horas de
alta umidade, durante períodos escuros. O modelo
“MILIONCAST” teve predições de esporulação mais
precisas que os sistemas “DOWNCAST” e “ONIMIL”
nos diferentes ensaios avaliados.
Nota-se que apesar do desenvolvimento de
modelos matemáticos e/ou empíricos cada vez mais
precisos com relação à previsão dos processos de
47
 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)
esporulação e infecção de P. destructor, poucos são
os dados sobre a aplicação prática desses modelos.
O objetivo primordial dos sistemas de aviso ou sis-
temas de previsão é racionalizar a aplicação de de-
fensivos químicos, preferencialmente por meio de
um racionamento do produto. Contudo, regiões com
condições ambientais altamente favoráveis à ocor-
rência da doença, associado a alta concentração de
inóculo podem dificultar esse racionamento. Logo,
um sistema de previsão de doença deve ser validado
para determinada região, antes da adoção do mes-
mo naquele local. Mais recentemente, Araújo et al.,
(2015) avaliaram a campo, na região Sul do Brasil,
um sistema de aviso do míldio da cebola, baseado
em uma modificação da tabela de Wallin, proposta
para requeima da batata, a qual considera diferentes
combinações de temperatura e umidade relativa do
ar. Nesse ensaio inicial foi possível reduzir considera-
velmente o número de aplicações de metalaxyl-m/
clorotalonil, sem afetar significativamente a produ-
tividade. Repetições do ensaio serão realizadas para
validação do sistema. A correlação entre a quantida-
de de esporângios de P. destructor no ar e a seve-
ridade do míldio, realizada por Marcuzzo & Duffeck
(2015) na região Sul do Brasil, poderá ser mais uma
ferramenta e/ou indicador a compor o sistema de
aviso em desenvolvimento.
É importante salientar que os sistemas de avi-
so ou previsão não são imutáveis. Ao contrário dis-
so, eles precisam sempre sofrer atualizações, tanto
no que diz respeito ao uso de produtos com elevada
eficiência de controle, como a fatores relacionados
a histórico da área e da cultura nas regiões onde se
pretende adotá-los. Nos tópicos seguintes serão tra-
tados aspectos relacionados a uma das principais,
se não a principal forma de manejo de doenças de
plantas: resistência genética.
Genes de resistência e a dificuldade de introgressão
A interação entre plantas e patógenos é com-
plexa e envolve constantes mudanças, em âmbito
genético, para que os organismos envolvidos consi-
gam atingir o objetivo frente ao processo de infec-
ção. A essas constantes mudanças adaptativas que
ocorrem decorrentes da interação planta-patógeno
dá-se o nome de coevolução. Enquanto os patóge-
nos buscam superar as barreiras de defesa das plan-
tas e iniciar a colonização nos tecidos, as plantas por
sua vez apresentam um complexo sistema de defesa
48 RAPP - Volume 24, 2016
para impedir a invasão dos patógenos e o processo
de doença (Dalio et al., 2014). Essa é a mesma ação
observada quando uma planta de cebola é submeti-
da ao ataque de P. destructor. Entender esta intera-
ção é indispensável para que se tenha um eficiente
sistema de manejo.
Atualmente, o número de cultivares de cebo-
la com genes de resistência ao míldio disponível no
mercado é limitado, logo a pressão de seleção sobre
populações de P. destructor é baixa. Essa é uma das
possíveis explicações para a inexistência de classifi-
cação subespecífica, em nível de raça, para o pató-
geno. Outra possível razão para esse fato seria uma
reduzida diversidade genética inerente à espécie.
Contudo, estudos mais aprofundados nessas áreas
ainda precisam ser realizados.
A resistência de plantas a patógenos é consi-
derada o método de controle mais eficaz e economi-
camente viável para o controle de doenças de plan-
tas, uma vez que a tecnologia já está disponível na
semente, não onerando o custo de produção. Adi-
cionalmente, o uso de resistência genética é o mé-
todo de controle que menos agride ao ecossistema,
pois dispensa ou reduz significativamente a necessi-
dade de utilização de defensivos químicos.
No Brasil, se faz necessário um grande núme-
ro de pesquisas com o patossistema, principalmente
para grupos alocados no sul do país. A região sul do
Brasil concentra mais de 50% da produção nacional,
sendo o míldio um dos principais fatores bióticos res-
ponsável pela queda de produção. Além das perdas
diretas, existe também um elevado custo despendi-
do para controle da doença, uma vez que não é raro
encontrar produtores que utilizam o controle quími-
co uma a duas vezes por semana. A doença também
causa considerável dano durante a fase de produção
de sementes, com relatos de perdas entre 30 a 70%
no Brasil (Verona et al., 1996).
Os primeiros registros de busca por resistên-
cia ao míldio da cebola datam do início da década
de 1950 (Figura 5), com trabalhos que visavam iden-
tificar e estudar a herança da resistência. Em 1952,
Warid & Tims (citados por Cramer & Havey, 1999)
propuseram que a resistência ao míldio encontrada
no cultivar “Calread” era determinada por dois locus
denominados s1 e s2. A resistência ao patógeno foi
determinada como sendo recessiva, expressando-se
em maior magnitude quando ambos os genes esti-
vessem em homozigose, s1s1s2s2. No entanto, segun-
 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)
Figura 5. Esquema resumindo e ordenando de forma cronológica dos principais trabalhos envolvendo identificação e
estudo do gene de resistência ao míldio da cebola.
do Scholten et al., (2007), essa resistência era res-
trita às hastes florais, não havendo resistência nas
folhas. Wordell Filho & Boff (2006) citam uma fonte
de resistência ao míldio em germoplasma brasileiro,
o cultivar “Conquista”, que teria apresentado boa to-
lerância ao míldio no escapo floral durante a produ-
ção de semente.
Em 1990, van der Meer & de Vries relataram
uma resistência completa ao míldio encontrada em
Allium roylei, e mostraram que essa espécie poderia
ser cruzada com A. cepa gerando híbridos parcial-
mente férteis. Allium roylei é uma espécie silvestre
originada do subcontinente Indiano. A espécie tam-
bém pode ser fonte de resistência à queima das pon-
tas, causada por Botrytis squamosa, e à antracnose
causada por Colletotrichum gloeosporioides (Galvan
et al., 1997; Scholten et al., 2007; Kohli & Gohil,
2009).
Kofoet et al., (1990) realizaram o retrocruza-
mento do híbrido interespecífico (A. roylei x A. cepa)
com cebola (A. cepa) e obtiveram uma proporção
de plantas resistentes e suscetíveis que suportou a
hipótese de que a resistência originária de A. roylei
era devida a um gene dominante, denominado Pd.
Segundo Thakur & Mathur (2002), quando plantas
de cebola portadoras de gene de resistência são con-
frontadas com P. destructor ocorre uma típica reação
RAPP - Volume 24, 2016
de hipersensibilidade, devido ao acumulo de subs-
tâncias de defesa, como fitoalexinas.
Posteriormente, de Vries et al., (1992b), anali-
sando a geração filial da autofecundação de um híbri-
do interespecífico de A. roylei x A. cepa observaram
uma taxa de segregação diferente da esperada (3 re-
sistente: 1 suscetível), sugerindo a existência de um
segundo gene, Pd2, envolvido na resistência. Segun-
do os autores esse segundo gene estaria fracamente
ligado ao locus Pd (r=0,32). Contudo, trabalhos pos-
teriores com marcadores moleculares demonstra-
ram que a resistência ao míldio derivada de A. roylei
era realmente devido a um único gene (Scholten et
al., 2007). Shiguo & Kik (2008) relatam que são co-
muns os casos de distorção na segregação em popu-
lações originárias de cruzamentos interespecíficos.
Scholten et al. (2007) consideram também que a
porcentagem do genoma de A. roylei nos indivíduos
F2 poderia causar a distorção nas segregações espe-
radas. Van Heusden et al., (2000b) mostraram que
em populações F2, a média de alelos provenientes
de A. roylei eram de 56%, contudo, entre indivíduos
isolados essa porcentagem poderia variar de 32% a
85%. Todas essas situações contribuíram para a con-
fusão inicial quanto ao número de genes envolvidos
na resistência ao míldio. Entretanto, essa questão se
elucidou por completo com o trabalho de Scholten
49
 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)
et al., (2007), o qual demonstrou a presença de um
gene recessivo letal proximamente ligado ao gene de
resistência introgredido de A. roylei. A presença des-
se gene letal é o principal fator daquela distorção na
segregação, observada nas populações F2.
A partir da década de 1990, diversos traba-
lhos com marcadores moleculares foram conduzidos
no intuito de mapear o gene de resistência. De Vries
et al., (1992a) encontraram marcadores RAPD (Ran-
dom Amplified Polymorphism DNA) a 2,6 cM do gene
de resistência. Posteriormente foram desenvolvidos
marcadores SCAR (Sequence Characterized Amplified
Region) para amplificar uma região de 20 pb proxi-
mamente ligada ao locus Pd. No entanto, à medida
que prosseguiam os retrocruzamentos, esses mar-
cadores começavam a perder o poder de identificar
plantas com o gene de resistência (Brewster, 2008;
van Heusden et al., 2000b; Kik et al., 1997). Tentan-
do aumentar a eficiência da seleção de indivíduos
resistentes por meio de marcadores moleculares,
Scholten et al., (2007) desenvolveram quatro mar-
cadores AFLP (Amplified Fragment Length Polymor-
phism) para selecionar a introgressão proveniente
de A. roylei.
Recentemente, Kim et al., (2015) desenvolve-
ram um marcador para o gene de A. roylei que con-
fere resistência ao míldio da cebola. Esses autores
buscavam por marcadores capazes de discriminar
plantas resistentes e suscetíveis em retrocruzamen-
tos com cebola, facilitando o desenvolvimento de
linhas resistentes ao míldio. Baseado em PCR (Poly-
merase Chain Reaction), eles obtiveram o DMR1
(Tabela 1), um marcador codominante, confiável e
de fácil utilização, que ancora o gene de resistência.
Com esse marcador os autores conseguiram identifi-
car exatamente as plantas com o gene de resistência
proveniente de A. roylei (Figura 6). Os autores afir-
mam ainda que esse marcador é útil para diferen-
tes germoplasmas de cebola, tendo sido testado em
mais de 120 acessos oriundos de diversos países, e
sendo eficaz na discriminação de plantas resistentes
e suscetíveis em todos os casos.
A construção de mapas moleculares satura-
Tabela 1. Sequência do primer DMR1 ligado ao gene de resistência ao míldio.
Marcador Nome do Primer
DMR1-F1
DMR1
DMR1-R1
Fonte: Retirado de Kim et al., (2015).
50 RAPP - Volume 24, 2016
Figura 6. Produtos da amplificação de uma reação de PCR
utilizando o marcador DMR1, ligado ao gene de resis-
tência (Pd) ao míldio da cebola. Sendo 1: linha de duplo
haploide; 2: linha avançada de melhoramento; 3: cultivar
Santero F1, resistente ao míldio; 4: acesso de Allium roy-
lei. Fonte: Retirado de Kim et al., 2015.
dos por marcadores de diversas naturezas possibili-
tou localizar o gene de resistência ao míldio. O locus
Pd estaria localizado na extremidade do cromosso-
mo 2 em A. roylei (Brewster, 2008). O posterior ma-
peamento de híbridos interespecíficos de A. roylei
x A. cepa mostrou que este gene está localizado na
parte distal do cromossomo 3 em cebola (Scholten
et al., 2007; Van Heusden et al., 2000ab).
Sabe-se que o processo de melhoramento é
demorado, sendo necessário muitos anos até a ob-
tenção de um cultivar comercial. O melhoramento
de cebola ainda apresenta uma peculiaridade pois
são necessários dois anos para completar o ciclo
reprodutivo na cultura. No caso do melhoramento
visando resistência ao míldio, o processo foi ainda
mais moroso que o normal, sendo necessários cerca
de 20 anos desde a identificação da resistência em
A. roylei até o lançamento de um cultivar comercial
com resistência (Scholten et al., 2007). Diversos fato-
res contribuíram para esse extenso período de tem-
po, dentre esses fatores pode-se destacar a existên-
cia de um gene recessivo letal próximo ao locus Pd.
Gene letal e a resistência ao míldio da cebola
Desde a descoberta do gene de resistência ao
míldio em A. roylei e a obtenção de cultivares híbri-
dos com o gene, muitos anos se passaram, haja visto
que essas primeiras descobertas foram anteriores à
década de 1990.
Sequência do primer (5’-3’)
TGAGGCTCAAGTTGACATGC
TTCGTAGCAGCATCAAGGTG
 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)

Tabela 2. Possíveis genótipos e cruzamentos envolvendo o sistema de macho esterilidade genético citoplasmático S
(CMS-S).
Macho-estéril Macho-fértil* Genótipo da progênie F1 Plantas férteis na progênie F1 (%)
Linha A
Smsms NMsMs 100% SMsms 100
Smsms NMsms 50% SMsms e 50% Smsms 50
Smsms Nmsms (Linha B)** 100% Smsms 0
Smsms SMsMs 100% SMsms 100
Smsms SMsms 50% SMsms e 50% Smsms 50
*Linhas macho férteis são utilizadas para a polinização das linhas A. Todos os genótipos das linhas macho férteis podem
ser uma linha C. **As plantas que são da linha B, mantenedoras da macho esterilidade, devem obrigatoriamente ter
esse genótipo, para que 100% da progênie seja macho estéril.

Anos após a descoberta do gene de resistên-
cia, Scholten et al. (2007) demonstraram a existência
de uma região no genoma de A. roylei que quando
em homozigose é letal em A. cepa, sendo esta região
proximamente ligada ao locus Pd. No entanto, foi
obtido um indivíduo contendo um evento de cros-
sing over entre o gene de resistência ao míldio e o
gene recessivo letal. Logo, a planta possuía o gene
de resistência, mas não tinha o gene letal comple-
to (Scholten et al., 2007). Dessa forma, tornou-se
possível a obtenção de indivíduos homozigotos
para o gene de resistência ao míldio, permitin-
do que 100% da progênie dessas plantas fossem
resistentes, independendo do genoma do outro
genitor, questão essa fundamental no desenvol-
vimento de híbridos F1. A obtenção dessas linhas
homozigotas possibilitou o recente lançamento, na
Europa, de cultivares de cebola resistentes ao míldio
(Kim et al., 2015).
Desenvolvimento de híbridos assistido por marca-
dores moleculares
Híbridos são obtidos após o cruzamento de
duas ou mais progênies endogâmicas. A produção
de sementes híbridas pode ocorrer por meio de cru-
zamentos manuais para muitas culturas hortícolas,
entretanto, essa estratégia para a cultura da cebola é
economicamente inviável. Dessa forma, a produção
de híbridos comerciais de cebola somente se tornou
possível após a descoberta do sistema de macho es-
terilidade na cultura (Jones & Emsweller, 1936; Jones
& Emsweller, 1933). A macho esterilidade na cebola
é do tipo genética-citoplasmática (CMS), ou seja, en-
volve interação entre genes do núcleo (Ms) e fatores
citoplasmáticos (S) (Jones & Clark, 1943). Para que
a macho-esterilidade ocorra, portanto, é necessário
que a planta apresente citoplasma estéril (‘S’) e gene
nuclear em homozigose recessiva, ou seja, genótipo
‘Smsms’ (Tabela 2).
Para a produção de híbridos de cebola são
necessários: i) genitores femininos macho estéreis,
denominados linhas A; ii) genitores masculinos man-
tenedores de macho esterilidade, denominados li-
nhas B e iii) linhas C (linhas endogâmicas), genitoras
masculinas doadoras de pólen (Tabela 2). As linhas
B são essenciais para a manutenção do programa e
seu genoma precisa ser específico de tal forma que
após fertilizar a linha A a geração filial seja toda ma-
cho estéril.
Em geral programas de melhoramento que
visam a obtenção de cultivares de cebola de polini-
zação livre demoram de 10 a 12 anos. Um programa
de melhoramento de híbridos não pode ser planeja-
do para menos de 15 a 18 anos, pois demanda um
tempo considerável até a identificação das linhas A
e B, além das etapas posteriores de testes de com-
binações híbridas e o lançamento do cultivar. A se-
leção de linhas A e B assistida por marcadores pode
acelerar esse processo, que normalmente duraria de
quatro a oito anos (Havey, 2013), possibilitando a se-
leção das linhas no segundo ano.
Diversos marcadores têm sido disponibiliza-
dos para a seleção assistida de linhas A e B. Enquanto
os marcadores de citoplasma disponíveis são bastan-
te confiáveis, os marcadores ligados ao locus Ms/ms
não têm se mostrado totalmente seguros, podendo
haver erro na identificação (Kim, 2014; Yang et al.,
2013; Bang et al., 2011). Todavia, recentemente Huo
et al., (2015) desenvolveram um marcador, denomi-
nado AcSKP1, que está em completo desequilíbrio
de ligação com o locus Ms apresentando alta acu-
rácia na predição genótipos portadores de alelo res-

RAPP - Volume 24, 2016 51

 Edivânio R. Araújo e Daniel P. Alves (42-54)
taurador da macho-fertilidade.
Considerações finais
Apesar de ser uma cultura milenar e de gran-
de importância econômica e social, os avanços no
âmbito molecular de estudos com cebola têm sido
bastante recentes e em pequeno número quando
comparado com outras culturas tradicionais. Mc-
Callum (2007) atribui esse cenário a algumas pecu-
liaridades da cultura, tais como: ciclo de vida bienal;
ser alógama com alta depressão em cruzamentos
consanguíneos; comunidade cientifica que estuda a
cultura relativamente pequena; e ao grande tama-
nho do genoma.
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54 RAPP - Volume 24, 2016

 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)

FUNGOS “DARK SEPTATE” E SUA RELAÇÃO

COM AS PLANTAS E FITOPATÓGENOS
Peter Soares Medeiros1, Carlos Vergara Torres Júnior1,
Claudia Maria Xavier Faria2, Kerly Martínez Andrade2,
Jerri Édson Zilli3, Carlos Antonio Inácio2.

RESUMO
Os fungos “dark septate” (DSE - dark septate endophytes) são microrga-
nismos endofíticos de ampla distribuição englobando dezenas de ordens e pou-
co investigados nos trópicos. Possuem potencial de aplicabilidade na agricultura,
seja como promotores de crescimento vegetal ou no biocontrole. Estudos têm
demonstrado que os DSE podem contribuir para o crescimento vegetal através
da acumulação de nutrientes como o nitrogênio (N) e o fósforo (P), incrementar
a biomassa vegetal, a capacidade fotossintética das plantas e, promover o per-
filhamento de plantas de arroz. Adicionalmente, os DSE também têm sido estu-
dados visando o biocontrole de fitopatógenos. No caso de fungos, os DSE pare-
cem atuar de forma direta, colonizando abundantemente a superfície das raízes,
ocupando o sítio de infecção e por competição impedindo o crescimento do pa-
tógeno e, ainda produzindo sideróforos capazes de complexar íons de ferro (Fe),
restringindo sua disponibilidade ao patógeno. De forma indireta os DSE induzem
a resistência sistêmica na planta auxiliando-a na manutenção do equilíbrio entre
as formas reativas de oxigênio e os antioxidantes e/ou produzindo metabólitos
secundários que possuem ação antifúngica. O presente capítulo visa apresentar
as pesquisas que vêm sendo conduzidas com este grupo de microrganismos que
possui potencial de aplicabilidade na agricultura com ênfase em fitopatologia.

Introdução táceos (EC) e não clavicipitáceos (ENC) (Rodriguez et

Plantas são hospedeiros potenciais de bacté- al., 2009; Andrades-Linares & Franken, 2013). Os ECs
rias e fungos que colonizam sua superfície associa- pertencem à família Clavicipitaceae (Hypocreales,
dos epifiticamente ou no interior dos seus tecidos Ascomycota) (Kirk et al., 2008; Hibbet et al., 2007;
como endofíticos, podendo desenvolver relações Sung et al., 2007), conhecidos como simbiontes mu-
mutualísticas (Andrades-Linares & Franken, 2013). tualísticos que crescem nos espaços intercelulares
Acredita-se que a relação entre plantas e microrga- da parte aérea e raiz de um grupo restrito de vege-
nismos endofíticos tenha surgido à cerca de 400 mi- tais em ambientes tanto de clima frio quanto quen-
lhões de anos, através de membros da divisão Glo- te e são transmitidos via sementes (Clay & Schardl,
meromycota, que formam associações micorrízicas 2002; Schardl et al., 2004; Kuldau & Bacon, 2008).
com a maioria das plantas (Mohanta & Bae, 2015). Distintamente, os ENC são filogeneticamente diver-
Os fungos endofíticos (FE) têm sido agrupa- sos e a maioria deles pertence ao filo Ascomycota;
dos em dois grandes grupos: os endofíticos clavicipi- muitos deles são capazes de crescer em meio de cul-
1
Departamento de Solos, Instituto de Agronomia. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR 465, Km 07, Seropédica, RJ, CEP
23890-000. Rio de Janeiro. 2Departamento de Entomologia e Fitopatologia, DENF/ Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro,
Rodovia BR-465, Km 7, CEP 23.897-000, Seropédica, Rio de Janeiro. 3Embrapa Agrobiologia. Rodovia BR-465, Km 7, CEP 23891-
000, Seropédica, Rio de Janeiro.

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 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
tura, devido sua versatilidade metabólica (Andrades-
-Linares & Franken, 2013). Os ENC se subdividem em
diferentes grupos funcionais de acordo com a faixa
de hospedeiros associados, a sua biodiversidade, o
seu padrão de colonização e os tecidos que coloni-
zam na planta (Rodriguez et al., 2009). Um destes
grupos dos ENC é representado principalmente pe-
los fungos dark septate (DSE, do inglês dark septate
endophytes), distribuídos em diferentes grupos de
Ascomycota (Jumpponen & Trappe, 1998; Weiss et
al., 2004) e membros da ordem Sebacinales (Agari-
comycetes, Basidiomycota), que apenas colonizam
o sistema radicular (Andrades-Linares & Franken,
2013). Nota: Cabe lembrar que, o termo “dark sep-
tate endophytes” foi eventualmente introduzido por
Stoyke & Currah (1991).
Os DSE começaram a ser estudados no início
do século passado, quando Melin (1922) observou
um fungo de pigmentação escura associado às raízes
de plantas terrestres enquanto estudava e isolava
fungos ectomicorrízicos, o qual denominou Myce-
lium radicis-atrovirens (MRA), pois colonizava as
raízes de coníferas inter e intracelularmente, distin-
guindo-se das ectomicorrizas que apenas colonizam
os espaços entre as células (Melin, 1922, 1923; Ri-
chard & Fortin, 1973). Este fungo foi encontrado co-
existindo com fungos micorrízicos e declarado como
“pseudomicorrízico” por Melin (1922). Em curto
espaço de tempo foram relatadas 135 espécies de
angiospermas associadas com fungos de pigmento
negro nos tecidos das raízes (Peyronel, 1924).
Ao longo do século passado, o estudo com es-
tes fungos foi reduzido e apenas mais recentemen-
te foi mostrada a capacidade dos DSE colonizarem
as raízes de uma ampla variedade de hospedeiros,
biomas e ecossistemas (Jumpponen & Trappe, 1998;
Kovacs & Szigetvari, 2002; Knapp et al., 2015; Man-
dyam & Jumpponen, 2005; Kageyama et al., 2008;
Pereira et al., 2011).
De forma geral, os DSE podem ser definidos
como ascomicetos conidiais (anamórficos) ou esté-
reis (mycelia sterilia) caracterizados pela formação
de micélio de hifas septadas (apocíticas) e microes-
clerócios (microescleródios) melanizados (Figura 1,
2). Estes fungos, geralmente vivem de forma sapro-
fítica e habitam frequentemente solos oligotróficos
em todas as regiões climáticas (Kovács & Szigetvári,
2002; Mandyam & Jumponnen, 2005; Rodriguez et
al., 2009; Khidir et al. 2010; Porras-Alfaro & Bay-
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man, 2011; Sharma & Jha, 2012). Muitas espécies
são capazes de colonizar inter e intracelularmente
a epiderme e córtex radicular de plantas saudáveis,
especialmente em raízes finas, sem causar efeitos
negativos ou desorganização dos tecidos vegetais
(Jumpponen & Trappe, 1998; Barrow & Aaltonen,
2001; Yu et al., 2001; Addy et al., 2005; Mandyam &
Jumponnen, 2008; Peterson et al., 2008; Vohník et
al., 2015).
O objetivo deste trabalho é reunir as princi-
pais pesquisas com “dark-septate”, citando suas ca-
racterísticas morfo-fisiológicas, demonstrando sua
relação com os hospedeiros e os possíveis mecanis-
mos de promoção de crescimento vegetal e biocon-
trole de fitopatógenos.
Ecologia
Embora haja um crescente interesse sobre
os DSE, o conhecimento a respeito da diversidade,
ecologia e funções destes fungos continua limitado
quando comparado a outros, exemplo os micorrí-
zicos. Sua abundância em diferentes habitats e sua
ocorrência em diferentes plantas hospedeiras é ain-
da em grande parte desconhecida. Além de ampla-
mente distribuídos na natureza colonizando raízes
de plantas, também são isolados frequentemente
a partir de ambientes com forte estresse abiótico e
sua presença em vários nichos ecológicos sugere não
só a presença ubíqua e falta de especificidade em
relação aos hospedeiros, como também um papel de
importância em ecossistemas naturais (Jumpponen
& Trappe, 1998).
Figura 1. Microescleródios no interior da raiz de arroz sil-
vestre (Oryza glumaepatula S.). (M) – Microescleródios
(Barra = 0,5 mm). Adaptado de Perreira et al., (2011).
Com autorização da revista Pesquisa Agropecuária Brasi-
leira e dos autores.
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)
A B
Figura 2. Fungo DSE cultivado em meio BDA (A). Detalhe da placa mostrando a coloração escura da colônia (B). Detalhes
das hifas escuras e septadas (C) (Barra = 20 mm).
A associação fungo DSE/raiz tem sido repor-
tada como uma interação benéfica, evidenciando
uma alta taxa de colonização, o que possivelmente
favorece uma melhor resistência a doenças, indi-
cando um papel ecológico importante (Jumpponen,
2001; Linares et al., 2011; Ribeiro et al., 2011).
Fungos DSE já foram observados em mais de
600 espécies vegetais representando cerca de 320
gêneros e ultrapassando 100 famílias. Estas famílias
incluem plantas com estratégias de vida bem dife-
rentes denotando pouca ou nenhuma especificida-
de em relação ao hospedeiro. Relatos mostram que
fungos DSE colonizam raízes de plantas em pratica-
mente todos os ecossistemas naturais e apresentam
a capacidade de colonizar simultaneamente plantas
com diferentes preferências micorrízicas, tais como:
arbusculares, ericóides, orquídóides, ectomicorrízi-
cas, e não micorrízicas (Jumpponen & Trappe, 1998).
Além disso, são encontrados em habitats árticos,
antárticos, subalpinos, alpinos, temperados e tropi-
cais (Read & Haselwandter, 1981; Jumpponen & Tra-
ppe, 1998; Grünig et al., 2008). No Brasil, estudos
mostraram que a colonização de raízes pelos DSE
em plantas de arroz silvestre Oryza glumaepatula
Steud., é significativa e independente da condição
de desenvolvimento da planta em áreas alagadas ou
não, porém a tendência é a ocorrência de uma maior
colonização em plantas mais velhas (Pereira et al.,
2011; Ribeiro et al., 2011).
A sobrevivência dos fungos DSE em ambien-
tes inóspitos como ártico e alpino, por exemplo, tem
sido relacionada à presença de melanina nas célu-
las da parede, uma das principais características de
identificação desse grupo de fungos. A produção de
melanina pelo DSE provavelmente torna-os mais re-
sistentes a condições extremas, principalmente devi-
RAPP - Volume 24, 2016
C
do à sua função como um tampão redox extracelular
que pode neutralizar oxidantes formando complexos
com radicais de oxigênio gerados por tais ambientes
(Redman et al., 2002; Diene et al., 2014). Estudos de-
monstram que a melanina pode estar envolvida no
aumento da tolerância aos metais pesados presen-
tes no solo. Por exemplo, a espécie DSE Exophiala
pisciphila McGinnis & Ajello (anamorfo de Capronia
Sacc., Chaeothyriales, Chaetothyriomycetidae) (Kirk
et al., 2008; Index Fungorum, 2016) aumentou a sín-
tese de melanina na presença de Cádmio - Cd (II) em
condições de laboratório (Zhan et al., 2011). Por ou-
tro lado, as espécies Veronaeopsis simplex (Papen-
dorf) Arzanlou & Crous (Venturiaceae, Pleosporales,
Pleosporomycetidae) e Pseudosigmoidea ibarakien-
sis O. Diene & K. Narisawa (Pezizomycotina, Pezi-
zales, Pezizomycetidae) diminuíram o acúmulo de
césio (Cs) em plantas de tomate possivelmente em
resposta a um maior acúmulo de melanina em suas
hifas (Diene et al., 2014). Neste caso, a melanina
funcionaria como uma barreira impedindo a entra-
da dos elementos tóxicos nas células vegetais, pro-
porcionando um melhor desenvolvimento à planta
hospedeira e favorecendo a sobrevivência do fungo
(Redman et al., 2002; Zhan et al., 2011; Diene et al.,
2014).
Phialocephala fortinii C.J.K. Wang & H.E. Wil-
cox (Vibrisseaceae, Helotiales, Leotiomycetidae) é
um dos DSE mais conhecidos e parece dominar a mi-
cobiota endofítica em raízes de coníferas, membros
da família Ericaceae, florestas e ecossistemas alpinos
(Wang & Wincox, 1985; Stoyke et al., 1992; O’ Dell
et al., 1993). Ecologicamente e filogeneticamente
próxima a esta espécie, temos Acephala aplanata
Grünig & T.N. Sieber (Vibrisseaceae, Helotiales, Leo-
tiomycetidae), que é outra espécie de DSE presente
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 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
em raízes de coníferas. Este grupo de fungos dema-
tiáceos é designado de P. fortinii – A. aplanata spe-
cies complex (PAC) (Grünig et al., 2005; 2008). Além
de sua presença no solo associado a raízes saudáveis
de espécies hospedeiras que pertencem a diferentes
famílias de plantas, membros do PAC também foram
encontrados em raízes deterioradas, caules, cascas
de troncos de árvores e madeiras velhas (O’ Dell et
al., 1993; Menkis et al., 2004; Hou & Guo, 2008; Grü-
nig et al., 2008).
De modo geral, o habitat preferido dos fun-
gos DSE na planta é o córtex de raízes finas e a peri-
derme de raízes lignificadas (Grünig et al., 2008). Os
mecanismos que regulam os processos de infecção
pelos fungos DSE ainda não foram elucidados. Entre-
tanto, níveis de atividade de enzimas pécticas como
poligalacturonase e pectinesterase facilitam a pene-
tração nas paredes das células da planta hospedeira
e são consideradas como o fator primário no pro-
cesso de infecção (Haselwandter, 1983; Mandyam &
Jumpponen, 2005).
O padrão de colonização de raízes por DSE
tem se mostrado diferente dependendo do hospe-
deiro, do DSE e do sistema/ambiente de cultivo. O
padrão mais comumente observado é representado
pela colonização das raízes das plantas por Phialo-
cephala fortinii (Currah & Van Dyk, 1986), que tem
início com a formação de uma rede de hifas soltas
sobre a superfície da raiz e, estas hifas penetram iso-
ladamente as raízes colonizando paralelamente ao
seu eixo principal, ou entre as células da epiderme e
do córtex (O’Dell et al., 1993; Peterson et al., 2008).
A colonização também pode ser intracelular sem
causar nenhuma distorção às raízes formando aglo-
merados de células de paredes espessas dentro das
células corticais denominados como “massa espessa
pseudoparenquimatosa”, escleródios, microescleró-
dios ou corpos escleróticos (Wang & Wilcox, 1985;
Jumpponen & Trappe, 1998; Peterson et al., 2008).
Além disso, alguns DSE formam uma rede tipo Har-
tig e/ou tecido labiríntico, e às vezes, a colonização
da camada cortical da raiz resulta na formação de
células arredondadas dentro das células corticais se-
melhante a clamidósporos (O’Dell et al., 1993). Em
estudo conduzido por Diene et al. (2010) foi verifi-
cado através de técnicas de microscopia de luz com
seções finas da raiz e coloração das hifas, que um
isolado do fungo Helminthosporium velutinum Link
(1809), cresce abundantemente sobre a superfície
58 RAPP - Volume 24, 2016
da raiz formando um manto fúngico, o qual também
penetra entre as células da epiderme (Figura 3). Da
mesma forma, Su et al. (2013) observaram que a
colonização de Oryza sativa por Harpophora oryzae
Z.L. Yan, Chu L. Zhang & F.C. Lin se inicia na superfície
das raízes pelo fungo, o qual invade o seu interior
e é aumentada com a maturidade das raízes. Neste
caso a maior colonização é observada em raízes mais
velhas e menor nas raízes mais jovens e meristemas
(coifa), sugerindo que a colonização fúngica tem um
aumento gradual de acordo com a maturidade radi-
cular (Figura 2A, Figura 4A-F).
Por outro lado, alguns DSE têm sido documen-
tados como formadores de estruturas intra-radicula-
res que lembram aquelas formadas em micorrizas e
que poderiam ser a interface de transferência de nu-
trientes dos fungos às plantas. Por exemplo, Acepha-
la macrosclerotiorum Münzenb. & Bubner (2009),
foi observada formando estruturas ectomicorrízicas
em pinheiro (Pinus sp.) e abeto (Picea sp.) (Lukešová
et al., 2015), Heteroconium chaetospira Munzenb. &
Bubne (Vibrisseaceae) forma um laço de hifa intrace-
lular solta em Rhododendron obtusum (Lindl.) Plan-
ch., morfologicamente lembrando micorriza ericóide
(Usuki & Narisawa, 2005). Contudo, o papel destas
hifas intra-radiculares permanece ainda em nível de
hipótese e a maioria dos DSE aparentemente não
formam estruturas especializadas no interior das raí-
zes ou ainda não foram definidos uma categorização
dos padrões de colonização.
Figura 3. Interações entre raízes de sorgo-sacarino e Hel-
minthosporium velutinum. Hifa do fungo pode ser vista na
superfície da raiz (setas), e entre as células da epiderme
(EP). Adaptado de Diene et al. 2010 com permissão dos
autores e da revista Microbes Environment.
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Figura 4. Padrão de colonização de Harpophora oryzae em raízes de arroz. (a)- Em secções transversais da raiz, hifas
marcadas com eGFP (Proteína Fluorescente Verde Melhorada) estendo-se gradualmente da epiderme para o cortex
sem penetrar os feixes vasculares (Barra = 200 mm); (c)- Incremento gradual de colonização fúngica associada com a
maturação da raiz; (d)- Colonização fúngica mostrando uma forte colonização na zona de diferenciação; (e)- Leve colo-
nização na zona de elongação, e não colonização na zona meristemática (Barras = 500 mm); (b, f)- Representações es-
quemáticas da colonização da raiz por H. oryzae. (b)- Padrão de colonização como visto em seção transversal; (f)- Seção
longitudinal mostrando a associação da colonização fúngica com a maturação da raiz (obs. Azul e verde indicam células
vivas e mortas respectivamente; Linhas e pontos vermelhos: hifas; pontos negros: clamidósporos; manchas púrpuras:
microescleródios). Adaptado de Su et al. (2013). Com autorização dos autores e da revista PLoS ONE.

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 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
O mais provável é que a transmissão dos DSE
ocorra horizontalmente, visto sua presença no solo e
nas raízes das plantas, mas nas condições laborato-
riais os meios de transmissão parecem ser fragmen-
tação micelial e dispersão de conídios (Jumpponen
& Trappe, 1998). Embora as conexões entre ana-
morfo e teleomorfo não tenham sido identificadas,
a possibilidade de reprodução sexual não deve ser
descartada. As estruturas assexuadas de reprodução
e a morfologia das raízes colonizadas por DSE foram
descritas como semelhantes aos das ectomicorrizas
e endomicorrizas (Wang & Wilcox, 1985).
Característica de dse in vitro
Pesquisas com fungos DSE mostram que a es-
porulação de muitas estirpes é extremamente difícil,
como ocorre para muitos isolados de ascomicetos de
uma forma geral (Knapp et al., 2015). Não existem
ainda descrições morfológicas de sua fase sexuada, e
até mesmo a conidiogênese é incomum para muitas
espécies. A fase assexuada de estirpes conhecidas
somente foi alcançada através da indução do proces-
so conidiogênico em condições específicas de labo-
ratório, utilizando-se diferentes meios de cultura e
em diferentes condições ambientes como tempera-
tura, umidade e luz (Wang & Wilcox, 1985; Jumppo-
nen & Trappe, 1998; Grünig et al., 2008).
A indução da esporulação de isolados DSE
teve um grande avanço com estudos de Wang & Wil-
cox (1985) ao utilizar o meio de cultura Ágar Melin
Norkrans Modificado (MMN). Segundo os autores
a esporulação pode ocorrer em longos períodos de
incubação podendo levar de seis meses a um ano.
Su et al. (2013) estudando duas linhagens de Har-
pophora oryzae Z.L. Yuan, Chu L. Zhang & F.C. Lin
(2010), R5-6-1 e RC-3-1, isoladas de raízes de arroz
selvagem, obtiveram resultados positivos ao cultivar
em meio Ágar Completo (CM) a 25oC no escuro. Die-
ne et al., (2010) conseguiram induzir a esporulação
do isolado Helminthosporium velutinum, após um
período de incubação de um mês a temperatura de
23 °C utilizando o meio Aveia Ágar.
Estudos realizados no Brasil demonstram que
estirpes de DSE isoladas a partir de arroz silvestre
crescem com extrema facilidade em temperaturas
de 28 a 30 °C e umidade de 45% quando inocula-
das em meios de cultura como: Batata Dextrose
Ágar, Ágar Malte, Extrato de Arroz moído, Extrato de
Aveia, Extrato de Mandioca (Ribeiro et al., 2011; Me-
60 RAPP - Volume 24, 2016
deiros, 2015). Entretanto, o cultivo dos DSE desde o
isolamento até a identificação taxonômica de dife-
rentes isolados ainda são muito incipientes, sobre-
tudo no Brasil. E, resultados negativos na tentativa
de indução à esporulação são comuns, dificultando
desta forma uma melhor caracterização morfológica
e elucidação dos diferentes táxons (Medeiros, 2015;
Knapp et al., 2015).
Taxonomia
Em termos taxonômicos os DSE constituem
um grupo polifilético (Yuan et al., 2011) classifica-
do dentro dos fungos endofíticos, e avanços recen-
tes, sobretudo com base em técnicas moleculares,
têm permitido um melhor entendimento da sua
taxonomia. Atualmente os fungos endofíticos são
agrupados pelas distintas histórias evolutivas, taxo-
nomia, plantas hospedeiras e funções ecológicas.
Os endofíticos clavicipitáceos (EC), que colonizam
algumas gramíneas, e os endofíticos não clavicipi-
táceos (ENC), que podem ser isolados de tecidos
assintomáticos de briófitas, pteridófitas, gimnos-
permas e angiospermas (Rodriguez et al., 2009). Os
EC, denominados classe 1, são representados pelos
integrantes da família Clavicipitaceae (Hypocreales;
Ascomycota) que inclui representantes de vida li-
vre e simbiontes associados à insetos e fungos (por
exemplo, Cordyceps spp.) ou gramíneas, juncos e ci-
peráceas (por exemplo, Balansia spp., Epichloë spp.
e Claviceps spp.) (Bacon & White, 2000). Esta família
é derivada de Hipocreales, com fungos patógenos de
plantas, saprofíticos e endofíticos, sendo que alguns
produzem compostos bioativos.
Os ENC têm sido tratados como um único
grupo funcional, mas há evidências que estes fun-
gos podem ser classificados em pelo menos três gru-
pos – classe 2, classe 3 e classe 4 – devido às suas
diferenças na biologia, nas interações ecológicas e
em critérios simbióticos, tais como: tipo de tecido
vegetal colonizado e a abundância na colonização
(Rodriguez et al., 2009). Os ENC classe 2 são compre-
endidos por uma diversidade de espécies incluídas
em Ascomycota (Pezizomycotina) na sua maioria e,
com alguns representantes de Basidiomycota (Aga-
ricomycotina e Pucciniomycotina). Da mesma forma,
a maioria dos endófitos da Classe 3 é Ascomycota,
mas também Basidiomycota, sendo representados
por Pezizomycotina. Contudo, são relatados endó-
fitos em Saccaromycotina (Higgins et al., 2007). Os
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endofíticos Classe 3 ocorrem em todos os principais
clados não liquenizados, sendo comuns em Pezi-
zomycetes, Leotiomycetes e Eurotiomycetes e mais
abundantes em Sordariomycetes e Dothideomycetes
(Arnold et al., 2007; Higgins et al., 2007; Arnold et
al., 2009). Os ENC classe 4 (DSE) distinguem-se como
um grupo funcional pela presença de septos mela-
nizados e por sua restrição à colonização nas raízes
das plantas. A diversidade de espécies de DSE e suas
plantas hospedeiras permanecem não definidas até
que seja realizado um estudo abrangente desta inte-
ração em todas as partes do mundo.
De forma geral, os DSE distribuem-se em deze-
nas de famílias e centenas de gêneros de Ascomyco-
ta dentro das ordens Capnodiales, Chaetothyriales,
Eurotiales, Helotiales, Hypocreales, Microascales,
Pleosporales, Sordariales e Xylariales (Jumpponen
& Trappe, 1998; Addy et al., 2005; Newsham, 2011;
Knapp et al., 2012, 2015; Andrade-Linares & Franken,
2013). Entretanto, o estudo filogenético taxonômico
de DSE ainda é muito limitado, sobretudo pelas difi-
culdades de muitos isolados esporularem em meio
de cultivo, o que restringe o uso de muitas chaves ta-
xonômicas (Medeiros, 2015). Estudos recentes têm
revelado que a ordem Pleosporales abrange muitos
dos DSE (Zhang et al., 2009), sendo considerada a
ordem mais representativa deste grupo de fungos
para regiões semiáridas (Porras–Alfaro et al., 2008).
Cabe mencionar que baseado em análise multilocos
e dados morfológicos, três novos gêneros represen-
tantes dos DSE provenientes de região semiárida fo-
ram recentemente propostos na ordem Pleosporales
denominados: Aquilomyces pertencendo a família
Morosphaeriaceae, Flavomyces representando um
grupo incertae sedis de Massarinaceae e Darksidea
com seis novas espécies da família Lentitheciaceae
(Knapp et al., 2015).
A análise molecular baseada na amplificação
e sequenciamento de regiões alvos específicas no
DNA é uma ferramenta útil para diferenciar grupos
estreitamente relacionados e espécies morfologica-
mente semelhantes. Entretanto, dados fornecidos a
partir de marcadores moleculares como ITS muitas
vezes não são suficientes para discriminar espécies,
gêneros ou mesmo famílias, ou seja, a resolução é
geralmente muito pobre, resultando em árvores filo-
genéticas com estruturas politômicas (Bensch et al.,
2012). Muitas pesquisas buscando solucionar a ta-
xonomia de vários táxons têm mostrado que a partir
RAPP - Volume 24, 2016
de uma abordagem multilocos com regiões alvo ITS,
β-tubulina, TEF1, actina, calmodulina, entre outras,
proporcionaram uma melhor resolução e distinção
entre táxons relacionados (Schubert et al., 2007;
Crous et al., 2007; Bensch et al., 2012; Maharachchi-
kumbura et al., 2014).
O principal critério atual para classificar um
fungo como DSE é ele ser endófito de raízes de plan-
tas, septado e melanizado (Figura 2). Entretanto,
fungos endofíticos de outras classes com pigmento
escuro têm sido erroneamente identificados como
DSE. Como exemplo, a Curvularia protuberata R.R.
Nelson & Hodges (1965), endofítico Classe 2 que
simbioticamente confere tolerância à temperatura
para a planta Dicanthelium lanuginosum (Ell.) Gould,
é um fungo com pigmento escuro, assexual e septa-
do que coloniza raízes de planta. Entretanto, não é
um verdadeiro DSE, pois é capaz de colonizar todas
as partes da planta (raízes, coroa, caule, folhas e cas-
ca da semente). Para evitar classificações errôneas
é necessário analisar todas as partes das plantas e,
usar corante específico para avaliação dos septos
(Ormsby et al., 2007).
Promoção do crescimento de plantas
DSE são abundantes no ambiente e hábeis
para viverem em nichos e habitats variados, o que
tem atraído atenção pela possibilidade de serem
explorados como promotores de crescimento de
plantas (Newshan, 2011; Mandyam & Jumpponen,
2005). O fato de não serem biotróficos obrigatórios
é uma característica que chama atenção, pois faci-
litaria o desenvolvimento de bioprocessos para a
produção de inoculantes, o que tem sido uma gran-
de limitação, para a maioria dos fungos micorrízicos
(Jumpponen & Trappe, 1998; Pereira et al., 2011).
Entretanto, generalizações são complicadas, pois es-
tes fungos são muito diversos e, se conhece muito
pouco sobre a filogenia, a fisiologia e o comporta-
mento dos mesmos quando inoculados em plantas
domesticadas de uso comercial (Mayerhofer et al.,
2013; Mandyam & Jumpponen, 2015; Knapp et al.,
2015).
Ao longo dos últimos anos, diversas pesqui-
sas têm demostrado que os efeitos da inoculação
dos DSE no crescimento de plantas variam desde
negativas, neutras à positivas e os mecanismos que
levam a esta variabilidade parecem ser contexto-
-dependentes, a exemplo do que ocorre com as sim-
61
 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
biontes micorrizas arbusculares e ecto-micorrízicas
(Mandyam & Jumpponen, 2005; Grünig et al., 2008;
Alberton et al., 2010; Newsham, 2011; Mayerhofer
et al., 2013; Torres-Júnior et al., 2014). Neste con-
texto, uma meta-análise realizada por Newsham
(2011) sobre a resposta de plantas à colonização
por fungos dark septate, baseado em dados publi-
cados oriundos de 18 artigos científicos nos últimos
40 anos, revelou que esses fungos em sua maioria
promoveram o crescimento da parte aérea e raízes
vegetais, podendo os ganhos de biomassa chega-
rem a 100%, quando comparado à testemunha não
inoculada. Além disso, o estudo mostrou que os DSE
contribuem de forma significativa para o aumento
do conteúdo de fósforo e nitrogênio nos tecidos ve-
getais, indicando melhoria na eficiência do uso des-
tes nutrientes. Portanto, em uma outra meta-análise
(Mayerhofer et al., 2013) a qual incluiu o estudo de
fungos endofíticos (não clavicipitáceos), entre eles
os dark septate, baseada em 34 artigos científicos
foi mostrado que os efeitos da inoculação de fungos
vão de negativos a neutros quanto ao acúmulo de
biomassa e nitrogênio da planta, sendo as respos-
tas variáveis de acordo com os vegetais e as espécies
dos fungos. Disso, deduz-se que existem diferentes
respostas quando da inoculação por dark septate e
que as mesmas precisam ser melhor estudadas.
No Brasil, estudos recentes mostraram ocor-
rência de fungos dark septate em raízes saudáveis
de Oryza glumaepatula em ambiente natural, sen-
do que os isolados obtidos demonstraram capaci-
dade para colonizar também raízes de Oryza sativa
L. sem causar sintomas de doenças e contribuindo
para desenvolvimento do sistema radicular (Pereira
et al., 2011; Ribeiro et al., 2011; Ribeiro, 2011). De
forma semelhante, na China foi identificada uma es-
pécie de DSE (Harpophora oryzae) em raízes saudá-
veis de Oryza granulata Nees & Arn. Ex. Hook. F, que
também se mostrou capaz de aumentar a biomassa
de O. sativa sem desencadear sintomas de doenças
(Yuan et al., 2010).
A forma como os DSE estabelecem associa-
ção com seu hospedeiro ainda não foi compreendida
com profundidade, mas estudos indicam que a pro-
moção do crescimento pode se dar tanto de forma
direta pela facilitação de absorção de nutrientes -
em Brassica campestris L., foi constatado uma asso-
ciação mutualística com Heteroconium chaetospira
(Grove) M.B. Ellis 1976 [=Cladophialophora chaetos-
62 RAPP - Volume 24, 2016
pira (Grove) Crous & Arzanlou (2007)], na qual o fun-
go facilita a absorção de N para a planta e a mesma
fornece carbono ao fungo, incrementando significa-
tivamente a biomassa da planta (Usuki & Narisawa,
2007), quanto indireta, tais como: a mitigação de
estresses ambientais como seca, salinidade, defici-
ência nutricional, alta concentração de metais pesa-
dos, redução de compostos tóxicos às plantas, como
os super-peróxidos, competição direta com patóge-
nos e pela produção de reguladores de crescimen-
to e/ou substâncias análogas (Schulz & Boyle, 2005;
Usuki & Narisawa, 2007; Newsham, 2011; Mandyam
& Jumpponen, 2015; Wei et al., 2016).
As melhores respostas de promoção de cres-
cimento de plantas por DSE foram inicialmente ob-
servadas quando eram utilizadas fontes orgânicas
de N (Usuki & Narisawa, 2007; Upson et al., 2009;
Newsham, 2011; Mahmoud & Narisawa, 2013).
Contudo, devido à ocorrência generalizada dos DSE
nos mais diversos ambientes (Sharma & Jha, 2012;
Gardes & Dahlberg, 1996), é provável que ocorram
fungos DSE também capazes de auxiliar o vegetal na
absorção de nutrientes de fontes inorgânicas (Usuki
& Narisawa, 2007). Ao se avaliar a capacidade do
DSE Heteroconium chaetospira utilizar diferentes
aminoácidos e fontes inorgânicas de N observou-se
também, um aumento significativo na massa seca
do fungo nos meios modificados com fontes orgâni-
cas de N, comparativamente ao meio suplementado
com nitrato de amônio ou sem N (Usuki & Narisa-
wa, 2007). Os mesmos autores, ao inocularem este
fungo em plantas de repolho chinês suplementadas
com as mesmas fontes de N, observaram que a ino-
culação promoveu a utilização de todos os aminoáci-
dos e, também nitrato de sódio (NaNO3), com efeitos
significativos no crescimento da planta (Diene et al.,
2013; Mamoud & Narisawa, 2013). Além disso, em
plantas de arroz e tomate inoculadas com DSE, cul-
tivadas em condições controladas e suplementadas
com nitrato de amônio foram observados incremen-
tos significativos na matéria seca da planta, N-ami-
no, açúcares solúveis, número de perfilhos (plantas
de arroz) e alteração dos parâmetros cinéticos (KM e
Vmáx) da absorção de NO3- (Torres-Júnior, 2014). Os
autores deduziram que os acúmulos de açúcares so-
lúveis relatados podem estar relacionados com au-
mento do conteúdo de clorofila e eficiência quântica
do fotossistema II em plantas inoculadas com DSE,
indicando que estes fungos podem também melho-
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)

rar a eficiência da atividade fotossintética do seu
hospedeiro (Zhang et al., 2012).
Biocontrole
Fungos endofíticos são um grande grupo de
microrganismos pouco investigados que represen-
tam uma fonte potencial para exploração por sua
ampla variedade de aplicações na agricultura. Estu-
dos vêm demonstrando que a associação simbiótica
de DSE com as raízes das plantas hospedeiras vão
além da aquisição de nutrientes e estímulo ao acú-
mulo de biomassa, podendo atuar no biocontrole de
doenças (Diene et al., 2014).
Um exemplo recente de sucesso foi obtido
com uma estirpe de Veronaeopsis simplex, um mem-
bro DSE, a qual reduziu em 71% a doença da murcha
causada pelo patógeno Fusarium oxysporum Schl-
tdl. (1824) quando inoculado em mudas de repo-
lho, Brassica campestris L. (Khastini et al., 2012). Em
outro estudo com o mesmo hospedeiro vegetal em
condições de campo, um táxon DSE não identificado
denominado LtVB3 reduziu em mais de 80% os sin-
tomas da Murcha-de-verticílio amarelo causada por
Verticillium longisporum (C. Stark) Karapapa, Bainbr.
& Heale (1997), enquanto a espécie Heteroconium
chaetospira reduziu cerca de 50% esta infecção,
mostrando diferentes níveis de biocontrole de doen-
ças entre os DSE (Narisawa et al., 2004). Ainda, neste
estudo, entretanto, duas estirpes de Phialocephala
fortinii - um dos principais representantes do grupo
de fungos DSE - inoculadas na mesma planta hospe-
deira e nas mesmas condições de campo causaram
danos severos nas mudas, sugerindo haver um siner-
gismo entre P. fortinni e o patógeno ao parasitar as
raízes (Narisawa et al., 2004). Tais resultados mos-
tram claramente que embora os DSE desempenhem
papel benéfico no controle de outros fungos, porém
as interações que ocorrem entre eles carecem de in-
vestigações contundentes no sentido de evitar riscos
de patogenicidade. De fato, até onde se conhece re-
sultados negativos envolvendo interação entre espé-
cies de P. fortinni e raízes de plantas hospedeiras são
extremamente raros e considerados pouco expressi-
vos (Wang & Wilcox, 1985).
Testes de inoculação de DSE têm demonstra-
do que os mecanismos de controle biológico podem
atuar em vários alvos sobre um agente patogênico e
que respostas de defesa da planta envolvem, como
mencionado anteriormente, interações diretas e in-
diretas no interior ou superfície das raízes, podendo
estar associadas com modificações da parede celular
das células da epiderme e do córtex.
Um mecanismo primário direto de biocon-
trole contra possíveis fitopatógenos parece ser a
habilidade dos DSE formarem uma barreira criada
por uma densa rede de hifas na superfície das raízes
colonizadas por DSE que impediriam fisicamente a
entrada de outro patógeno (Narisawa et al., 2004).
Esta intensa colonização foi recentemente observa-
da em estudo realizado no Brasil (Figura 5) (Torres
Júnior, 2014).
Outro fator envolvido diretamente no contro-
le biológico de doenças de planta é a produção de
sideróforos por microrganismos presentes no solo,
os quais normalmente competem por nutrientes de
baixa disponibilidade. Devido ao seu baixo peso mo-
lecular, sideróforos são substâncias capazes de com-
plexar Fe3+ com grande especificidade e afinidade

A B C
Figura 5. Detalhes da interação do arroz (Oryza sativa) e fungo DSE. (A) Raízes de arroz do tratamento controle sem ino-
culação de DSE (Barra = 20 mm). (B) Raízes de plantas de arroz com a presença de abundante massa fúngica. (C) Raízes
de arroz colonizadas por DSE em experimento de inoculação (Barra = 100 mm).. Fotos: Torres Jr., C.V.

RAPP - Volume 24, 2016 63

 Peter Soares Medeiros, et al. (55-69)
tornando-o indisponível para potenciais microrga-
nismos patogênicos, limitando assim seu crescimen-
to. A espécie P. fortinii é capaz de biosintetizar como
principal agente quelante a ferricrocina, seguindo a
ferrirubina e ferricromo C em baixo pH e concentra-
ção de ferro (Barthold et al., 2001). Da mesma for-
ma, a estirpe Y34 Veronaeopsis simplex (Papendorf)
Arzanlou & Crous (2007) inibiu o crescimento do
patógeno F. oxysporum indisponibilizando ferro por
uma ação antagônica em meio de cultura (Khastini
et al., 2012). Os efeitos da produção de sideróforos
por DSE sobre agentes fitopatogênicos, entretanto,
ainda são desconhecidos em condições de cultivo
vegetal fora de laboratórios.
Mecanismos indiretos de interação da plan-
ta com o microrganismo surgem quando as plantas
são inoculadas com DSE. Um desses mecanismos
observados é o espessamento nos tecidos radicula-
res colonizados e uma coloração marrom escuro nas
células quando da presença do fungo, indicando que
as células vegetais recebem sinais, provavelmente os
quais a induzem à proteger-se através da produção
de substâncias antifúngicas (Narisawa et al., 2004).
A produção de metabólitos fenólicos desencadeada
na planta quando inoculada com DSE pode ser uma
resposta contra o patógeno e, neste caso, estes com-
postos antimicrobianos promoveriam uma resistên-
cia induzida, que inibiria o crescimento do patógeno
e protegeria indiretamente os tecidos epidermais e
corticais subjacentes às áreas invadidas, agindo
como uma barreira capaz de restringir a entrada
do patógeno (Schulz et al., 1999; Benhamou &
Garand, 2001).
Além disso, não somente o aumento da
concentração de metabólitos de defesa, mas ou-
tros padrões de resposta incluindo a produção de
antioxidantes e espécies reativas de oxigênio (ROS)
e a manutenção do equilíbrio destes compostos são
respostas expressas pelo vegetal quando na presen-
ça de DSE. De fato, a produção de ROS e, consequen-
temente, antioxidantes representam uma resposta
geral que ocorre no vegetal quando do ataque de
patógenos e, também, em situações de estresses
abióticos. ROS agem de forma crucial sobre a morte
programada de células, sinalização celular e defesas
da planta e, adicionalmente, acredita-se que possam
exercer papel importante nas interações simbióticas,
especialmente na sinalização (Su et al., 2013; Wang
et al., 2016). Por outro lado, o aumento da produ-
64 RAPP - Volume 24, 2016
ção de antioxidantes leva a redução de ROS evitando
danos às células íntegras (Zhao et al., 2015). Neste
sentido, acredita-se que a colonização por DSE au-
xilie o vegetal na regulação e equilíbrio dos sinais e
defesas contra os patógenos, possibilitando o desen-
volvimento de resistência sistêmica do vegetal.
Estudos avaliando a capacidade biocontro-
ladora do fungo DSE Harpophora oryzae contra o
patógeno Pyricularia oryzae Cavara (=Magnaporthe
oryzae B.C. Couch.) agente patológico da brusone,
considerada uma das mais severas doenças da cul-
tura do arroz, mostraram que a colonização por H.
oryzae foi capaz de controlar a infecção pelo pa-
tógeno (Figura 6). Este controle ocorreu seguido
do aumento dos níveis e da atividade enzimática
de antioxidantes como superóxido desmutase,
catalase, peroxidase, dehidroascorbato redutase,
glutationa redutase e glutationa, além de elevar
os níveis de ácido ascórbico. Tais antioxidantes
são uma importante linha de defesa da planta,
capazes de neutralizar radicais livres produzidos
durante o processo de infecção por um patóge-
no. Uma acumulação abundante de peróxido de
hidrogênio (H2O2) (Figura 6) observada nas célu-
las externas da epiderme e corticais parece ser
proporcional ao tempo de infecção e do volume de
hifas fúngica. O acumulo de H2O2 é um processo de
defesa da planta na tentativa de matar o patógeno
ou restringi-lo apenas nas células já infectadas (Su
et al., 2013).
Figura 6. Redução dos sintomas devastadores da brusone
nas folhas de arroz mediante a proteção sistêmica pro-
movida pela inoculação de Harpophora oryzae. Adptado
de Su et al. (2013) (esta figura não tem escala no trabalho
original). Com autorização dos autores e da revista PLoS
ONE.
 Peter Soares Medeiros, et. al (55-69)

Figura 7. Acúmulo de Peróxido de Hidrogênio (H2O2) por Harpophora. oryzae. Microscopia de luz e fluorescência de
raízes de arroz da testemunha e infectadas com H. oryzae em diferentes períodos após a inoculação. Os pontos marrons
indicam o acúmulo de H2O2 (Barras na extremidade direita = 100 µm e outras 30 µm). Adaptado de Su et al. (2013). Com
autorização dos autores e da revista PLoS ONE.

Considerações para futuras pesquisas
Como discutido anteriormente, as pesquisas
com fungos dark septate têm sido globalmente de-
senvolvidas, porém no Brasil ainda são restritas. Pelo
fato dos DSE, em sua grande maioria não serem bio-
tróficos obrigatórios, um caminho importante para a
produção de inoculante existe, pois possibilita o cul-
tivo em laboratório. A partir desta característica, es-
tudos têm mostrado que muitos destes fungos esta-
belecem uma associação benéfica ao vegetal, porém
a simbiose mutualista foi provada em poucos casos.
De forma geral, pode-se dizer que nos casos
onde os DSE mostraram benefícios, os mesmos con-
tribuíram para o crescimento vegetal através do acú-
mulo de nutrientes como o N e o P, incrementaram a
produção de biomassa vegetal e a capacidade fotos-
sintética das plantas e, aumentaram o perfilhamento
de plantas de arroz. Adicionalmente, os DSE também
têm sido estudados quanto à capacidade de atua-
rem como biocontrole de patógenos, especialmente
fungos. Neste caso, os DSE parecem estabelecer bio-
controle de forma direta por colonizarem abundan-
temente a superfície das raízes, ocupando o sítio de
infecção e impedindo o crescimento do patógeno e,
ainda produzindo sideróforos capazes de complexar
íons de Fe, diminuindo a disponibilidade ao patóge-
no. De forma indireta, os DSE induzem a resistência
sistêmica na planta especialmente por auxiliariam a
planta a manter o equilíbrio entre formas reativas de
oxigênio e antioxidantes e/ou produzir metabólitos
secundários, que possuem ação antifúngica.
Acima de tudo, é importante destacar que
muito pouco se conhece sobre os dark septate, seja
em relação a taxonomia e filogenia, seja sobre a for-
ma como os estes fungos colonizam o tecido vegetal,
como transferem nutrientes para a planta, ou como
estimulam o seu crescimento. O pouco conhecimen-
to que se possui decorre principalmente de pesqui-
sas com o gênero Phialocephala que parece ser mais
abundante em coníferas. Dentre as diversas ordens
que englobariam diferentes famílias contendo gê-
neros e espécies de fungos DSE, uma que chama a
atenção no Brasil é a Pleosporales que predominou
em estudos realizados com arroz silvestre realizado
na Amazônia (Ribeiro, 2011). Portanto, a partir do
tópico aqui abordado, verifica-se que existe um vas-
to campo de pesquisa e potencialmente significativo
a ser explorado na agricultura, particularmente den-
tro da fitopatologia, o que abrange desde a pesquisa
básica até testes com as culturas em condições de
campo.
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69
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)

NEMATOIDES QUARENTENÁRIOS PARA

O BRASIL - DIAGNOSE, CONTROLE E
PERSPECTIVAS
Paulo Sergio Torres Brioso1 e Ricardo Moreira de Souza2

RESUMO
Esta revisão aborda tópicos relacionados ao risco de introdução de ne-
matoides quarentenários no Brasil, apresentando informações de cada uma das
espécies de nematoides constantes na Lista de Pragas Quarentenárias Ausentes
do Brasil; relaciona aspectos relativos à diagnose e controle; e discorre sobre as
tendências futuras quanto ao risco de introdução dessas pragas.

SUMMARY
This review deals with topics related with the risk of introducing exotic
nematodes in the country; presents information on all species of nematodes on
the List of Quarantine Species Absent to Brazil; discuss aspects concerning diag-
nosis and control; and the trends regarding the risk of introducing these pests
into Brazil.

Introdução
A Norma Internacional de Medidas Fitos-
sanitárias nº 19: Diretriz sobre listas de pragas re-
gulamentadas descreve os procedimentos para se
preparar, manter e disponibilizar as Listas de Pragas
Regulamentadas pelas Organizações Nacionais de
Proteção Fitossanitária (ONPF). A ONPF brasileira
é representada pelo Departamento de Sanidade
Vegetal (DSV) – Ministério da Agricultura, Pecuária
e Abastecimento (MAPA), que é responsável pelos
procedimentos para estabelecer a lista de pragas
regulamentadas, bem como pela sua manutenção,
atualização, registro apropriado e pelo fornecimen-
to dessas listas às partes contratantes, se requisita-
das. Tais listas auxiliam na prevenção da introdução
e/ou disseminação de pragas e também facilitam o
comércio seguro, garantindo a transparência.
A Lista de Pragas Regulamentadas de um
país não é fixa ou permanente (disponível no site
https://www.ippc.int/index.php?id=draft_ispms
&no_cache=1&L=0). A atualização dessas listas
é necessária quando a categoria das pragas lista-
das é alterada, ou quando as informações para as
pragas listadas são modificadas, por mudança da
taxonomia, por exemplo, devendo ser feita a atua-
lização assim que a necessidade de modificação for
identificada através de levantamentos, notificações
de ocorrência e realização de Análises de Risco de
Pragas.
As diversas Instruções Normativas (IN) e Por-
tarias publicadas pelo MAPA e citadas nesse texto
podem ser visualizadas, na íntegra, no Sistema de
Consulta à Legislação do MAPA, no endereço eletrô-
nico http://www.agricultura.gov.br/legislacao.
A Lista de Pragas Quarentenárias Ausentes
(A1) e a Lista de Pragas Quarentenárias Presentes
(A2) do Brasil, revisadas e atualizadas, constam dos
Anexos I e II, respectivamente, da Instrução Norma-

1
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde, Laboratório Oficial de Diagnóstico Fitossa-
nitário, Caixa Postal 74585, 23897-970 - Seropédica, RJ, brioso@bighost.com.br; 2Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy
Ribeiro, CCTA/ Laboratório de Entomologia e Fitopatologia, 28015-620 - Campos dos Goytacazes, RJ, ricmsouza@censanet.com.br

70 RAPP - Volume 24, 2016

 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
tiva (IN) 41/2008 e retificação [publicada no Diário
Oficial da União (D.O.U.) nº 125, de 02/07/2008, Se-
ção  1,  p.8-10 e a retificação no D.O.U. nº131,
de 10/07/2008, Seção 1, p.4],da IN 59/2013 e retifica-
ção [publicada no D.O.U. nº 249, de 24/12/2013, Se-
ção 1, p.4-5, e no D.O.U. nº 252, de 30/12/2013, Se-
ção 1, p.81] e da IN 21/2015 (publicada no D.O.U. nº
126, de 06/07/2015, Seção 1, p.4).
Como já ocorreram alterações taxonômicas
após revisões publicadas sobre vírus, viróides e fi-
toplasmas quarentenários (Brioso & Pozzer, 2013;
2014), o mesmo poderá ocorrer em relação aos ne-
matoides quarentenários. Esta revisão, que trata dos
nematoides considerados como Pragas Quarentená-
rias Ausentes (A1) para o Brasil até o momento, será
mantida e atualizada pelos autores dessa revisão nos
endereços eletrônicos http://www.fito2009.com/fi-
top/fitoplablistanemat.htm e http://www.fito2009.
com/fitop/fitoplabnematquar.html.
A seguir, serão repassadas algumas informa-
ções básicas sobre cada uma dessas pragas. Des-
taca-se que as informações, principalmente quanto
à distribuição geográfica, são muito dinâmicas em
função de novos registros, retificação de relatos e
até de erradicação da praga na área geográfica em
consideração.
Divulgação e pesquisa de pragas quarentenárias
Em 1996 foi publicada a Portaria Interministe-
rial nº 290, assinada pelo MAPA, Ministério da Educa-
ção (MEC) e Ministério da Ciência e Tecnologia (MCT)
(D.O.U. nº 75, de  18/04/1996,  Seção  1,  p.6575). A
mesma considera que a divulgação da ocorrência de
qualquer praga, supostamente inexistente no ter-
ritório nacional, de forma precipitada e sem o em-
basamento científico adequado, poderá ocasionar
restrições às exportações brasileiras, com sérios
prejuízos à economia nacional. Em função disso, a
lei determina que a detecção ou a caracterização
de qualquer praga inexistente no território nacio-
nal deve imediatamente ser notificada ao MAPA,
antes de qualquer divulgação. Uma vez notificada a
ocorrência da nova praga, caberá ao MAPA efetuar
levantamento de sua distribuição geográfica no ter-
ritório nacional e de suas possibilidades de controle
e erradicação.
A IN 52/2007 (D.O.U. nº 223, de  21/11/
2007,  Seção  1,  p.31-34) reitera que a detecção
de qualquer Praga Quarentenária Ausente ou ou-
RAPP - Volume 24, 2016
tra praga exótica deverá ser notificada ao MAPA,
de acordo com a legislação vigente, bem como de
uma Praga Quarentenária Presente fora da área de
controle oficial. Em função da distribuição da pra-
ga no território nacional, a ONPF adotará as provi-
dências necessárias para notificação à Convenção
Internacional de Proteção dos Vegetais (CPIV), para
a alteração da Lista de Pragas Quarentenárias e a
autorização da divulgação da informação (Portaria
Interministerial 290/1996). As normas para noti-
ficação de ocorrência de pragas exóticas no país
estão estabelecidas na IN 02/2002. Havendo inte-
resse em realizar pesquisa com praga quarentená-
ria, é necessária a autorização prévia do MAPA. Se
a pesquisa for com Pragas Quarentenárias Ausen-
tes, o pedido de autorização deverá ser protocola-
do contendo o plano de trabalho, a justificativa da
necessidade de realização da pesquisa e o termo de
responsabilidade da instituição à qual pertence o
pesquisador; se a pesquisa for com Praga Quaren-
tenária Presente, a solicitação deverá ser realizada
conforme legislação específica relacionada à essa
praga.
No caso específico de nematoides, diversos
sites nacionais e internacionais trazem informações
dos mesmos, seja como fitoparasita ou como vetor
de vírus e doenças correlacionadas, por exemplo
nos endereços eletrônicos: http://www.apsnet.org/
edcenter/intropp/PathogenGroups/Pages/IntroNe-
matodes.aspx, http://nematologia.com.br/about-
-sbn/revisoes-rapp/.
Nematoides fitoparasitas como vetores de vírus
Revisão sobre nematoides vetores de espé-
cies virais dos gêneros Cheravirus, Nepovirus, To-
bravirus (http://www.fito2009.com/fitop/fitoplab-
virtaxon.html) foram publicados por Costa (1999),
Brown et al. (2004) e Almeida & Drecaemer (2005).
Essas revisões, disponíveis no endereço eletrônico
http://nematologia.com.br/about-sbn/revisoes-
-rapp/, abordam aspectos relevantes inerentes
aos nematoides dos gêneros Longidorus, Paralon-
gidorus (Subfamília Longidorinae, Família Longido-
ridae), Xiphinema (Subfamília Xiphinematinae, Fa-
mília Longidoridae); Trichodorus, Paratrichodorus
(Subfamília Trichodorinae, Família Trichodoridae)
e suas espécies correlatas. Nesses gêneros temos
como espécies vetoras de vírus e quarentenárias
para o Brasil Xiphinema diversicaudatum e X. rivesi.
71
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Sintomas
A ação dos nematoides quarentenários nas
diversas hospedeiras, dependendo da espécie de ne-
matoide e de sua hospedeira, pode ou não gerar sin-
tomas como amarelecimento, murcha, lesões necró-
ticas, podridão, tombamento, senescência precoce,
deformações foliares, galhas, nanismo, redução da
lâmina foliar, inflorescências deformadas, sementes
manchadas, queda da produção e do número de flo-
res, bem como do peso de tubérculos, vagens, grãos
e sementes. E, em certos casos, pode levar a planta
à morte.
Sintomas específicos e associados aos nema-
toides quarentenários podem ser visualizados con-
sultando-se as referências citadas no texto e associa-
da à espécie de nematoide quarentenário.
Deteccão de nematoides quarentenários para o
brasil
Na detecção de nematoides, podem ser uti-
lizadas análises baseadas nas características morfo-
lógicas e morfométricas, sorológicas, físico-químicas
e moleculares, por meio de Testes Biológicos – ob-
servação direta de sintomas, iscas biológicas; Testes
Físico-químicos - teste de trituração, peneiramento e
flutuação; eletroforese em gel (agarose ou poliacrila-
mida) para isoenzima, microscopia ótica, microsco-
pia eletrônica de varredura; Testes Sorológicos - ELI-
SA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), Western
Blot; Testes Moleculares - Polymerase Chain Reaction
(PCR) com primers específicos ou degenerados, AFLP
(Amplified Fragment Length Polymorphism)-PCR,
LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification)
PCR, Multiplex PCR, PCR-RFLP (Polymerase Chain Re-
action - Restriction Fragment Length Polymorphism),
RAPD (Random Amplification of Polymorphic DNA)-
-PCR, Real Time PCR, SCAR (Sequence Characterized
Amplified Region)-PCR, sequenciamento de nucleo-
tídeos (Charchar, 1997; Perry et al., 2009; Oliveira et
al., 2011; Subbotin et al., 2013; Brioso &Dias, 2015).
No entanto, em termos de rotina de labora-
tório para a detecção e diagnose de nematoides, em
especial os quarentenários para o Brasil, se utiliza
principalmente a observação de sintomas associa-
dos às características morfológicas e morfométricas
do nematoide via microscopia (ótica e/ou eletrôni-
ca) e/ou associado aos testes moleculares (PCR com
primers específicos, LAMP PCR, multiplex PCR, PCR-
-RAPD, PCR-RFLP, Real Time PCR, SCAR-PCR, Sequen-
72 RAPP - Volume 24, 2016
ciamento de nucleotídeos) devido à rapidez, sensibi-
lidade e especificidade.
Atualmente, os países têm padronizado a ní-
vel internacional a metodologia de detecção e de
diagnose destes nematoides quarentenários, bem
como de outros fitopatógenos e pragas. O objetivo
é que todos os países adotem o mesmo protocolo de
detecção com o intuito de evitar resultados contradi-
tórios, em função da metodologia utilizada.
Essas adequações são referendadas e publi-
cadas no endereço eletrônico (https://www.ippc.
int/es/core-activities/standards-setting/ispms) sen-
do, posteriormente, divulgadas através das INs do
MAPA para aplicação nos ensaios de detecção e de
diagnose de pragas da Rede Nacional de Laborató-
rios Agropecuários do Sistema Unificado de Atenção
à Sanidade Agropecuária (SUASA/ MAPA) (http://
www.fito2009.com/fitop/labmapa.html).
No que se refere à nematoides, até 2016, fo-
ram editados os protocolos padrões para detecção
de Ditylenchus dipsaci e D. destructor (IPPC, 2015),
Bursaphelenchus xylophilus (IPPC, 2016a) e Xiphine-
ma americanum sensu lato (IPPC, 2016b), estando
em fase de edição pela IPPC o referente à Anguina
spp..
Taxonomia
A identificação taxonômica de nematoides se
dá por via morfológica e morfométrica, associada ou
não à informação molecular.
Chaves taxonômicas baseadas em caracteres
morfológicos e morfométricos, para os principais
gêneros e espécies existentes no Brasil, podem ser
encontradas em Charchar (1997), Cares & Huang
(2000), Cares & Huang (2001), Cares & Andrade
(2006), Cares & Tenente (2007) e Cares et al. (2008).
Nestas chaves, os nematoides estão inseridos dentro
do Reino Animalia, Subreino Metazoa, Filo Nemato-
da que se subdivide em Classes, Subclasses, Ordens,
Subordens, Superfamília, Família, Subfamília, Gêne-
ros e espécies, conforme exemplificado no endereço
eletrônico http://plpnemweb.ucdavis.edu/nema-
plex/Taxadata/Nemata.htm.
Quanto às categorias mais elevadas da clas-
sificação, que sofreram alterações nos últimos anos
a partir da análise da menor subunidade do compo-
nente 16S do DNA ribossomal (SSU 16SrDNA) passou
a inserir os nematoides dentro do Domínio Eukarya,
Superreino Opisthokonta, Reino Animalia, Subreino
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Metazoa, Ramo Bilateralia, Subramo Protostomia,
Superfilo Ecdysozoa,Filo Nematoda que se subdi-
vide em Classes, Subclasses, Ordens, Subordens,
Superfamília, Família, Subfamília, Gêneros e diver-
sas espécies, conforme exemplificado no endereço
eletrônico http://plpnemweb.ucdavis.edu/nema-
plex/Taxadata/Classes.htm#Molecular_Phylogeny_
Menu. Informações relativas às sequências genõ-
micas ou de genes mitocondriais de nematoides
quarentenários para o Brasil estão disponíveis no Q-
-bank Nematodes database (http://www.q-bank.eu/
Nematodes/) e NCBI - National Center for Biotech-
nology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
Nematoides quarentenários para o Brasil
Na Tabela 1 está indicada a posição taxonômi-
ca dos gêneros de nematoides quarentenários para o
Brasil, de acordo com o sistema de classificação que
adota dados morfológicos, morfométricos e molecu-
lares (http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Ta-
xadata/Classes.htm#Molecular_Phylogeny_Menu).
Os nematoides quarentenários para o Brasil
podem ser transmitidos por sementes ou grãos, ele-
mentos de propagação vegetativa (bulbos, estacas,
mudas, tubérculos, rizomas), plantas, solo, substra-
to, fardos e embalagens de madeira, inseto-vetor,
dependendo do gênero, conforme descrito nas infor-
mações de cada um dos nematoides quarentenários.
Segue, abaixo, informações das espécies de
nematoides quarentenários para o Brasil relaciona-
dos aos gêneros citados na Tabela 1.
Anguina agrostis (Steinbuch, 1799) Filipjev, 1936
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório tendo como
fase infectante o segundo estádio juvenil (J2). Infor-
mações gerais estão disponíveis nas publicações de
Krall (1991), Brzeski (1998), Cares et al. (2008) e nos
endereços eletrônicos https://www.ippc.int/static/
media/files/publication/en/2016/02/2013-0033A_
Draft_Annex_to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc,
http://nematode.unl.edu/aagrost.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Anguina associadas às informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
Anguina agrostis: Disponíveis nas publicações de
Krall (1991), Brzeski (1998), Cares et al. (2008) e no
endereço eletrônico https://www.ippc.int/static/
RAPP - Volume 24, 2016
media/files/publication/en/2016/02/2013-0033A_
Draft_Annex_to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc.
Distribuição geográfica: África do Sul, Alema-
nha, Austrália, Canadá, China, Eslováquia, Estônia,
Estados Unidos, Finlândia, Geórgia, Holanda, Norue-
ga, Nova Zelândia, Polônia, Quirguistão, Reino Uni-
do, República Tcheca, Rússia, Suécia, Ucrânia.
Hospedeiros: Agrostis canina, A. capillaris, A.
castellana, A. exarata, A. gigantea, A. polymorpha,
A. stolonifera, A. sylvatica, A. tenuis, Apera sp., Arc-
tagrostis latifolia, Bromus erecta, Buchloe dactyloi-
des, Calamagrostis canadensis, Dactylis sp., Eragros-
tis sp., Festuca sp., Hordeum sp., Koeleria glauca, K.
gracilis, K. macrantha, K. talievi, Leymus chinensis,
Lolium multiflorum, Lolium rigidum, Phalaris arundi-
nacea, Phleum sp., Poa sp. Puccinellia sp., Sporobo-
lus brockmanii, Trisetum sp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Subbotin et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Powers et al., 2001); Teste de Real Time PCR
(Ma et al., 2011; Li et al., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 27/2011, IN 59/2013, é
obrigatória a análise para A. agrostis em importação
de grãos ou sementes de Lolium multiflorum.
Anguina pacificae Vera & Maggenti, 1984
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômi-
ca: Trata-se de um ectoparasita migratório, sen-
do o J2 a fase infectante. Informações gerais estão
disponíveis nas publicações de Vera & Maggenti
(1984), Cares et al. (2008) e no endereço eletrôni-
co https://www.ippc.int/static/media/files/publi-
cation/en/2016/02/2013-0033A_Draft_Annex_to_
ISPM_27__Anguina_spp._4.doc e http://nematode.
unl.edu/anguipac.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Anguina associadas às informações morfológicas e
morfométricas que permitem a identificação de An-
guina pacificae: Disponíveis na publicação de Vera &
Maggenti (1984), Cares et al. (2008) e no endereço
eletrônico https://www.ippc.int/static/media/files/
publication/en/2016/02/2013-0033A_Draft_Annex_
to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc.
Distribuição geográfica: Estados Unidos, Ir-
landa.
73
 74
Tabela 1. Posição taxonômica dos gêneros de nematoides quarentenários para o Brasil, de acordo com o sistema de classificação que adota dados morfológicos, mor-
fométricos e moleculares a partir do Filo Nematoda*.
Filo Classe Sub classe Ordem Sub ordem Super familia Familia Sub familia Gênero
Chromadorea Chromadoria Tylenchina Aphelenchoidea Aphelenchoididae Bursaphelenchinae Bursaphelenchus
Tylenchina Sphaerularioidea Anguinidae Anguininae Anguina
Tylenchina Sphaerularioidea Anguinidae Anguininae Ditylenchus
Tylenchina Sphaerularioidea Anguinidae Anguininae Subanguina 
Tylenchina Criconematoidea Criconematidae Criconematinae Criconema
Tylenchoidea Belonolaimidae Belonolaiminae Belonolaimus
Rhabditida Tylenchoidea Heteroderidae Heteroderinae Globodera 
Nematoda
Tylenchoidea Heteroderidae Heteroderinae Heterodera
Tylenchoidea Heteroderidae Meloidogyninae Meloidogyne
Tylenchoidea Pratylenchidae Nacobbinae Nacobbus
Tylenchoidea Pratylenchidae Pratylenchinae Pratylenchus
Tylenchoidea Heteroderidae Punctoderinae Punctodera
Tylenchoidea Pratylenchidae Pratylenchinae Radopholus

RAPP - Volume 24, 2016

Tylenchoidea Hoplolaimidae Rotylenchulinae Rotylenchulus
Enoplea Dorylaimia Dorylaimida Dorylaimina  Dorylaimoidea  Longidoridae Xiphinematinae Xiphinema
*Adaptado de http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/Classes.htm#Molecular_Phylogeny_Menu
Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Hospedeiros: Agrostis canina, Paspalum va-
ginatum, Poa annua.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Subbotin et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Powers et al., 2001); Teste de Real Time PCR
(Ma et al., 2011; Li et al., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 04/2007,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para A. pacificae em importação de mudas
de Paspalum vaginatum.
Anguina tritici (Steinbuch, 1799) Chitwood, 1935
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômi-
ca: Trata-se de um ectoparasita migratório, sen-
do o J2 a fase infectante. Informações gerais estão
disponíveis nas publicações de Krall (1991), Brzeski
(1998), Cares et al. (2008) e no endereço eletrôni-
co https://www.ippc.int/static/media/files/publi-
cation/en/2016/02/2013-0033A_Draft_Annex_to_
ISPM_27__Anguina_spp._4.doc e http://nematode.
unl.edu/angutrit.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Anguina associadas às informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
Anguina tritici: Disponíveis nas publicações de Krall
(1991), Brzeski (1998), Cares et al. (2008) e no ende-
reço eletrônico https://www.ippc.int/static/media/
files/publication/en/2016/02/2013-0033A_Draft_
Annex_to_ISPM_27__Anguina_spp._4.doc.
Distribuição geográfica: Afeganistão, Ale-
manha, Arábia Saudita, Austrália, Áustria, Azerbai-
jão, Bulgária, China, Croácia, Chipre, Coréia, Egito,
Espanha, Estados Unidos, Etiópia, França, Grécia,
Holanda, Hungria, India, Inglaterra, Irã, Iraque, Irlan-
da, Israel, Itália, Iugoslávia, Nova Zelândia, Paquis-
tão, Polônia, Romênia, Rússia, Síria, Suécia, Suíça,
Taiwan, Turquia, Ucrânia. Embora haja um relato de
1959 desse nematoide no Brasil, considera-se que o
mesmo não ocorre no país (Tenente et al., 2007).
Hospedeiros: Avena sativa, Avena sp., Hor-
deum vulgare, Phalaris minor, Secale cereale Triti-
cum aestivum, T. dicoccum, T. durum, T. monococ-
cum, T. spelta, T. ventricosum, T. vulgare.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Subbotin et al., 2004); Teste de PCR-
RAPP - Volume 24, 2016
-RFLP (Powers et al., 2001); Teste de Real Time PCR
(Ma et al., 2011; Li et al., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 12/2000,
IN 04/2001, IN 42/2003, IN 6/2005, IN 44/2005, IN
52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para A. tritici em importação de grãos ou se-
mentes de Avena sativa, Triticum aestivum, Triticum
spp..
Belonolaimus longicaudatus Rau, 1958
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
na publicação de Rau (1958) e no endereço eletrôni-
co http://entnemdept.ufl.edu/creatures/nematode/
sting_nematode.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Belonolaimus associadas às informações morfoló-
gicas e morfométricas que permitem a identifica-
ção de Belonolaimus longicaudatus: Disponível na
publicação de Vera & Subbotin (2012).
Distribuição geográfica: Arábia Saudita, Cos-
ta Rica, Estados Unidos, México, Paquistão, Porto
Rico, Turquia.
Hospedeiros: Acer rubrum, Aeschynome-
ne americana, Alysicarpus ovalifolius, A. vaginalis,
Apium graveolens, Arachis hypogaea, Brassica olera-
cea var. capitata, Brassica rapa, Capsicum annuum,
Capsicum frutescens, Chrysanthemum morifolium,
Chrysanthemum spp.,Citrus spp., Cornus florida,
Cucumis melo, Cucurbita maxima, Cucurbita pepo,
Cynodon dactylon, Cyperus rotundus, Desmodium
tortuosum, Eremochloa ophiuroides, Festuca elatior,
Fragaria spp., Gerbera spp.,Glycine hispida, G. max,
Gossypium hirsutum, Ipomoea pes-caprae, Lactuca
sativa, Liquidambar styraciflua, Lolium multiflorum,
L. perenne, Magnolia virginiana, Mentha spicata,
Ocimum basilicum, Panicum ramosum, Paspalum
vaginatum, Pennisetum glaucum, P. purpureum,
Phaseolus vulgaris, Pinus cubensis, Pisum sativum,
Pittosporum tobira, Platanus occidentalis, Prunus
persica, Raphanus sativus, Ricinus communis, Sac-
charum sp., Sambucus canadensis, Secale cereale,
Solanum lycopersicum, S. melongena, S. tuberosum,
Sorghum bicolor, S. bicolor x S. sudanense, S. vulgare,
Stenotaphrum secundatum, Tagetes patula, Uniola
paniculata, Vaccinium corymbosum, Vaccinium spp.,
75
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Vicia villosa, Vigna unguiculata, Vitis sp., Zea mays,
Zoysia matrella.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Vera & Subbotin, 2012; Kutsuwa et
al., 2015; Kanan et al., 2015); Teste de Real Time PCR
(Kanan et al., 2015). Conforme o DOC SAC/CGAL nº
06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitossanitário -
Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo às IN 25/2001, IN 14/2002,
IN 06/2005, IN 04/2007, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, é obrigatória a análise para B. longicauda-
tus em importação de mudas de Chrysanthemum
spp., Cynodon dactylon, Fragaria ananassa, Gerbe-
ra jamesonii, Gerbera spp., Paspalum vaginatum,
Vaccinium corymbosum, Vaccinium spp.; plantas de
Gerbera jamesonii, Gerbera spp., Vaccinium corym-
bosum, Vaccinium spp.; sementes de Capsicum an-
nuum, Capsicum frutescens.
Bursaphelenchus mucronatus Mamya & Endo, 1979
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório transmitido
pelo inseto vetor Monochamus spp., sendo o J4 a fase
infectante. Informações gerais estão disponíveis na
publicação de Mamya & Endo (1979) e no endereço
eletrônico http://nematode.unl.edu/pest2.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Bursaphelenchus associadas ás informações mor-
fológicas e morfométricas que permitem a identi-
ficação de Bursaphelenchus mucronatus: Disponí-
vel nas publicações de Yinet al. (1988), Pereira et al.
(2013), Braasch & Schönfeld (2015) e IPPC (2016a).
Distribuição geográfica: Alemanha, Armênia,
Áustria, Azerbaijão, Belarus, Canadá, China, Coréia,
Cazaquistão, Eslovênia, Espanha, Estônia, Finlândia,
França, Geórgia, Grécia, Itália, Japão, Letônia, Lituâ-
nia, Moldova, Noruega, Polônia, Portugal, Rússia, Su-
écia, Suíça, Ucrânia, Taiwan, Tailândia, Turquia.
Hospedeiros: Larix olgen, L. sibirica, Picea
spp., Pinus densiflora, P. halepensis, P. nigra, P. pi-
naster, P. silvestris, P. thunbergiana, Quercus robur.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Matsunaga & Togashi, 2004; Pereira
et al., 2013; IPPC, 2016a); PCR-RFLP (Burgermeister
et al., 2005; Burgermeister et al., 2009; IPPC, 2016a);
Teste de Real Time PCR (Ye& Giblin-Davis, 2013; Fili-
piak & Hasiów-Jaroszewska, 2016; IPPC, 2016a). Con-
76 RAPP - Volume 24, 2016
forme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de
Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
às IN 05/2005, IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008,
IN 59/2013, é obrigatória a análise para B. mucro-
natus em importação de embalagens de madeira de
todas as espécies vegetais que produzem madeira.
Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer,
1934) Nickle, 1970
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório transmitido
pelo inseto vetor Monochamus spp., sendo o J4 a fase
infectante. Informações gerais estão disponíveis nas
publicações de Nickle (1970), Auer & Santos (2012),
IPPC (2016a) e no endereço eletrônico http://nema-
tode.unl.edu/bxyloph.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Bursaphelenchus associadas ás informações morfo-
lógicas e morfométricas que permitem a identifica-
ção de Bursaphelenchus xylophilus: Disponível nas
publicações de Yinet al. (1988), Pereira et al. (2013),
Braasch & Schönfeld (2015) e IPPC (2016a).
Distribuição geográfica: África do Sul, Cana-
dá, China, Coréia do Sul, Espanha, Estados Unidos,
Hong Kong, Japão, México, Portugal, Taiwan.
Hospedeiros: As espécies mais suscetíveis es-
tão no gênero Pinus, incluindo P. densiflora, P. echina-
ta, P. elliottii, P. estevesii, P. halepensis, P.koraiensis,
P. leiophylla, P. luchuensis, P. luchuensis, P. massonia-
na, P. mugo, P. muricata, P. nigra, P. pinaster, P. pínea,
P. radiata, P. resinosa, P. silvestres, P. strobus, P. syl-
vestris, P. thunbergiana, P. thunbergii. Também têm
sido relatadas espécies dos gêneros Abies, Chama-
ecyparis, Cedrus, Larix, Picea e Pseudotsuga como
hospedeiros.
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Matsunaga and Togashi, 2004;
Pereira et al., 2013; IPPC, 2016a); PCR-RFLP (Bur-
germeister et al., 2005; Burgermeister et al., 2009;
IPPC, 2016a); Teste de Real Time PCR (François et al.,
2007; IPPC, 2016a); LAMP-PCR (Kikuchi et al., 2009;
Aikawa et al., 2012; IPPC, 2016a). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 05/2005,
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é
obrigatória a análise para B. xylophilus em importa-
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
ção de embalagens de madeira de todas as espécies
vegetais que produzem madeira; de estacas e plan-
tas de Pinus spp..
Criconema mutabile (Taylor) Raski & Luc, 1985
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Raski (1952), Edward & Misra
(1964), Raski & Luc (1987) e no endereço eletrônico
http://keys.lucidcentral.org/keys/nematodes/html/
Criconema%20note.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Criconema associadas às informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
Criconema mutabile: Disponíveis nas publicações de
Yeates et al. (1997) e Hunt et al. (2005).
Distribuição Geográfica: África do Sul, Aus-
trália, Costa Rica, Estados Unidos, Peru. No Brasil,
segundo Sharma & Loof (1977) e Ferraz (1980), tal
espécie ocorre no país. No entanto, tal informação
merece posterior confirmação visando à confirma-
ção da presença desta espécie no país, uma vez que
em 1987 houve a publicação de Raski & Luc.
Hospedeiros: Acanthus sp., Acer sp., Aralia
sp., Arctium lappa, Arrhenatherum sp., Avena sati-
va, Axonopus sp., Baccharis sp., Bambusa sp., Beta
vulgaris, B. vulgaris cicla, Billbergia sp., Bougainvil-
lea sp., Camellia sp., Citrus sp., Cynodon dactylon,
Dahlia sp., Dichondra sp., Dioscorea sp., Echinochloa
sp., Fragaria chiloensis, Gossypium hirsutum, Hor-
deum vulgare, Ilex sp., Ipomoea batatas, Juglans hin-
dsii, Litchi chinensis, Ligustrum sp., Liquidambar sp.,
Malus sylvestris, Medicago sativa, Morus sp., Musa
sp., Nicotiana sp., Persea americana, Philodendron
sp., Pinus sp., Prunus domestica, P. dulcis, P. persica,
Pyracantha sp., Pyrus communis, Rhododendron sp.,
Rosa sp., Solanum lycopersicum, Sorghum bicolor,
Syringa sp., Tagetes sp., Trifolium repens, Typha sp.,
Vigna unguiculata var. sesquipedalis, Vitis vinifera,
Yucca sp., Zea mays, Zingiber sp., Zoysia sp. Também
inclui algumas espécies de Bromeliaceae, Cactaceae
e de Palmaceae.
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Cordero et al., 2012). Conforme
o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diag-
nóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo à IN
RAPP - Volume 24, 2016
63/2004, é obrigatória a análise para C. mutabile em
importação de alporques de Litchi chinensis.
Ditylenchus africanus Wendt, Swart, Vrain & Webs-
ter, 1995
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J3 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Wendt et al. (1995), IPPC (2015),
Steenkamp et al. (2016) e no endereço eletrônico
http://nematode.unl.edu/pest3.htm.
Chave para a identificação de espécies de Di-
tylenchus associadas ás informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
D. africanus: Disponíveis nas publicações de Wendt
et al. (1995) e IPPC (2015).
Distribuição geográfica: África do Sul, Mo-
çambique.
Hospedeiros: Arachis hypogaea, Chenopo-
dium album, Datura stramonium, Eleusine indica,
Glycine max, Gossypium hirsutum, Helianthus an-
nuus, Lupinus albus, Medicago sativa, Nicotiana ta-
bacum, Phaseolus vulgaris, Pisum sativum, Solanum
tuberosum, Sorghum bicolor, Tagetes minuta, Triti-
cum aestivum, Vigna unguiculata, Xanthium struma-
rium, Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de PCR-RFLP (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para D. africanus em importação de semen-
tes de Arachis hypogaea.
Ditylenchus angustus (Butler, 1913) Filipjev, 1936
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J3 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Wendt et al. (1995), Das & Bajaj
(2008), Oliveira et al. (2013) e IPPC (2015).
Chave para a identificação de espécies de Di-
tylenchus associadas ás informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
D. angustus: Disponíveis nas publicações de Wendt
et al. (1995), Das & Bajaj (2008) e IPPC (2015).
77
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Distribuição geográfica: Bangladesh, Filipi-
nas, India, Indonésia, Malásia, Myanmar, Tailândia,
Vietnã.
Hospedeiros: Echinochloa colona, Leersia he-
xandra, Medicago sativa, Oryza sativa, Sacciolepsis
interrupta.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Ibrahim et al., 1994; Wendt et al.,
1995; IPPC, 2015); Teste de PCR-RFLP (Ibrahim et
al., 1994; Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Teste de
RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme o DOC SAC/
CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitos-
sanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para D. angustus em importação de grãos e
sementes de Oryza sativa.
Ditylenchus destructor Thorne, 1945
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J3 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Wendt et al. (1995) e IPPC (2015).
Chave para a identificação de espécies de Di-
tylenchus associadas ás informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
D. destructor: Disponíveis nas publicações de Wendt
et al. (1995) e IPPC (2015).
Distribuição geográfica: Albânia, Alemanha,
Arábia Saudita, Áustria, Azerbaijão, Bélgica, Bulgária,
Canadá, China, Coréia, Eslováquia, Estados Unidos,
Estônia, França, Grécia, Holanda, Hungria, Irã, Japão,
Letônia, Luxemburgo, México, Moldova, Noruega,
Paquistão, Polônia, Quirguistão, Reino Unido, Re-
pública Tcheca, Romênia, Suécia, Suíça, Tajiquistão,
Turquia, Ucrânia, Uzbequistão.
Hospedeiros: Allium sativum, Arachis hypo-
gaea, Allium cepa, Apium graveolens, Babiana nana,
Begonia elatior, B. semperflorens, B. tuberhybrida,
Begonia x hiemalis, Bellis perennis, Beta vulgaris,
Calathea spp., Canna indica, Chenopodium album,
Chloris virgata, Chrysanthemum spp., Cimicifuga
racemosa, Colchicum giganteum, C. speciosum, Cro-
cus sp., Cyperus rotundus, Dahlia spp., Datura stra-
monium, Daucus carota, Eleusine indica, Gladiolus
hybridus, G. colvillei, Gladiolus spp., Glycine max,
Gossypium hirsutum, Helianthus annuus, Hyacinthus
spp., Hydrangea acuminata, H. altíssima, H. ano-
78 RAPP - Volume 24, 2016
mala, Humulus lupulus, Ipomoea batatas, Iris sp.,
Liatris spicata callilepis, Lilium spp., Linaria vulga-
ris, Lupinus albus, Medicago sativa, Mentha arven-
sis, Nicotiana tabacum, Panax ginseng, Pastinaca
sativa, Phaseolus vulgaris, Pinus ponderosa, Pisum
sativum, Plantago major, Raphanus sativus, Rumex
obtusifolius, Sisyrinchium angustifolium, Solanum
tuberosum, Solidago graminifolia, Sonchus arvensis,
S. asper, Sorghum bicolor, Stachys palustris, Syringa
vulgaris, Tagetes minuta, Taraxacum officinale, Tigri-
dia pavonia, Tigridia sp., Trifolium hybridum, T. pra-
tense, Tropaeolum polyphyllum, Tulipa australis, T.
fosterana, T. gesneriana,T. hageri, T. linifolia, T. pra-
estans, T. pulchella, T. saxatilis, T. tarda, T. violacea,
Tussilago farfara, Vicia sativa, Vigna unguiculata,
Xanthium spp., Zantedeschia spp., Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de PCR-RFLP (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015); Tes-
te de RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 04/2001,
IN 20/2003, IN 06/2005, IN 06/2006, IN 03/2007,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória
a análise para D. destructor em importação de bul-
bos de Allium sativum, Dahlia spp., Gladiolus spp.,
Hyacinthus spp., Lilium spp., Tigridia pavonia, Tuli-
pa fosterana, Tulipa gesneriana, Tulipa spp., Zan-
tedeschia aethiopica, Zantedeschia spp.; mudas de
Begonia elatior, B. semperflorens, B. tuberhybrida,
Begonia x hiemalis, Chrysanthemum spp., Dahlia
spp., Fragaria ananassa, Hydrangea acuminata, H.
altissima, H. anomala, estacas com raiz de Begonia
elatior, B. semperflorens, B. tuberhybrida, Begonia x
hiemalis, Chrysanthemum spp., Dahlia spp.; semen-
tes de Allium sativum, Arachis hypogaea, tubérculos
de Solanum tuberosum; plantas de Begonia elatior,
B. semperflorens, B. tuberhybrida, Begonia x hiema-
lis; rizoma de Calathea spp..
Ditylenchus dipsaci (Kühn, 1857) Filipjev, 1936
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J3 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Wendt et al. (1995) e IPPC (2015).
Chave para a identificação de espécies de Di-
tylenchus associadas ás informações morfológicas e
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
morfométricas que permitem a identificação de D.
dipsaci: Disponíveis nas publicações de Wendt et al.
(1995) e IPPC (2015).
Distribuição geográfica: Albânia, Alemanha,
Argélia, Argentina, Armênia, Austrália, Áustria, Azer-
baijão, Belarus, Bélgica, Bósnia-Herzegovina, Bolívia,
Bulgária, Canadá, Cazaquistão, Chile, China, Chipre,
Colômbia, Coréia, Croácia, Costa Rica, Dinamarca,
Equador, Eslováquia, Eslovênia, Espanha, Estados
Unidos, Estônia, Finlândia, França, Geórgia, Grécia,
Haiti, Holanda, Hungria, Irã, Iraque, Israel, Itália, Ja-
pão, Jordânia, Letônia, Lituânia, Macedônia, Malta,
Marrocos, México, Moldova, Noruega, Nova Zelân-
dia, Oman, Paquistão, Paraguai, Peru, Polônia, Por-
tugal, Quênia, Quirguistão, Reino Unido, República
Domenicana, República Tcheca, Rússia, Sérvia &
Montenegro, Síria, Suécia, Suíça, Tunísia, Turquia,
Ucrânia, Uruguai, Uzbequistão, Venezuela, Yemen.
No Brasil ocorre somente a raça do alho, que even-
tualmente parasita a cebola (Tenente et al., 2000).
Hospedeiros: o número de plantas hospe-
deiras ultrapassa a 450 espécies, incluindo Aethusa
cynapium, Agropyron repens, Agrostemma githa-
go, Allium spp., Alopecurus geniculatu, Alstroeme-
ria spp., Aster spp., Amaryllis sp., Ambrosia elatior,
Ammi majus, Amsinckia intermédia, Anagallis ar-
vensis, Anemone coronaria, A. hupehensis, Stearn
japonica, Angelica archangelica, Anthoxanthum
odoratum, Anthriscus sylvestris, Anthyllis vulneraria,
Apera spica-venti, Apium graveolens, Arabidopsis
thaliana, Arabis alpina, A. aubrietioides, Arenaria
serpyllifolia, Armoracia rusticana, Arnoseris minima,
Arrhenatherum elatius, Asparagus setaceus, Aspho-
deline lutea, Aster squamatus, Atriplex sp., Aubrieta
deltoidea, Aucuba japonica, Avena spp., Baccharis
subpingraea, Begonia spp., Beta vulgaris, Bouvar-
dia humboldtii, Brachypodium pinnatum, Brassica
campestris var. pekinensis, Brassica napus, B. nigra,
Brassica oleracea var. acephala, Brassica oleracea
var. botrytis, B. oleracea var. bullata, Brassica olera-
cea var. capitata, Brassica oleracea var. gemmifera,
Brassica oleracea var. gongylodes, Brassica oleracea
var. italica, Brassica rapa, Bromus inermis, Calathe-
alindbergii, Calceolaria spp.,Callistephus chinensis,
Camelina sativa, Campanula medium, C. persicifo-
lia, Cannabis sativa, Capsella bursa-pastoris, Cap-
sicum annuum, Cardamine pratensis, Cardaria dra-
ba, Carduus acanthoide, Carex sp., Carlina vulgaris,
Centaurea spp., Cerastium arvense, C. vulgatum,
RAPP - Volume 24, 2016
Ceratochloa sp.,Chaetochloa sp.,Cheiranthus cheiri,
C. mutabilis, Chelone glabra, Chenopodium album,
C. polyspermum, Chionodoxa luciliae, C. sardensis,
Chrysanthemum spp., Cicer arietinum, Cichorium in-
tybus, Cirsium spp., Colchicum spp., Coleus blumei,
Collomia coccinea, C. grandiflora, Consolida orien-
talis, Convallaria majalis, Convolvulus arvensis, Co-
ronopus squamatus, Crepis spp., Cucumis sativus,
Cyclamen persicum,Cynara cardunculus, Cynosurus
cristatus, Dactylis glomerata, Daucus carota, Del-
phinium trolliifolium, Dianthus spp.,Digitalis spp.,
Digitaria sanguinalis, Dipsacus spp., Disa uniflora,
Duchesnea indica, Echinochloa crus-galli, Endymion
hispanicus, E. non-scriptus, Equisetum arvense, Ere-
chtites praealta, Eremurus stenophyllus X E. olgae,
Erigeron annuus, E. canadensis, Erodium cicutarium,
Erysimum allionii, Eucharis sp., Fagopyrum escu-
lentum, Festuca spp., Ficus elastica, Fragaria spp.,
Fumaria officinalis, Galanthus hybridus, G. nivalis,
Galinsoga parviflora, Galium aparine, G. tricorne,
Galtonia candicans, Geranium dissectum, G. molle,
Gilia achilleifolia, G. minima, Gladiolus spp., Gerbera
spp., Glycine hispida, G. max, Gossypium sp., Gyp-
sophila spp., Helenium sp., Helianthus annuus, H.
tuberosus, Helichrysum orientale, Helleborus orien-
talis, Hepatica americana, Heuchera spp., Hibiscus
spp., Hieracium pilosella, Holcus lanatus, H. mollis,
Hordeum vulgare, Hyacinthus spp, Hydrangea ma-
crophylla, Hymenocallis calathin, Hyoscyamus niger,
Hypochaeris radicata, Ipomoea batatas, Ipomopsis
rubra, Iris sp., Isatis tinctoria, Juncus bufonius, Kick-
xia spuria, Knautia arvensis, Kniphofia sp., Koeleria
pyramidata, Lactuca canadensis, Lamium spp., La-
thyrus odoratus, L. sativus,Lavandula angustifolia,
Leontodon spp., Lepidium sativum, L. virginicum,
Leucojum sp., Liatris spicata, Lilium spp., Linaria ca-
nadensis, L. vulgaris, Linum usitatissimum, Lolium
multiflorum, L. perenne, Lupinus angustifolius, L.
luteus, Lotus corniculatus,Lycopsis arvensis, Lycoris
radiata, Lysimachia sp., Manihot esculenta, Medi-
cago spp., Melampyrum arvense, Melilotus Alba,
Mentha arvensis, Mercurialis annua, Mollugo ver-
ticillata, Monarda spp., Muscari botryoides, M. ne-
glectum, Myosotis spp., Myriophyllum verticillatum,
Narcissus spp., Nicotiana tabacum,Odontites verna,
Oenothera spp., Onobrychis viciifolia, Ornithogalum
spp., Oxalis sp., Paeonia officinalis, Panicum milia-
ceum, Papaver rhoeas, P. somniferum, Pastinaca
sativa, Penstemon barbatus, Penstemon spp., Pe-
79
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
troselinum crispum, Phacelia heterophylla, P. tana-
cetifolia, Phaseolus spp., Philodendron spp., Phleum
pratense, Phlox spp., Physalis pubescens, Pisum sa-
tivum, Plantago spp., Poa spp., Polianthes tuberosa,
Polygonum spp., Potamogeton mucronatus, Poten-
tilla anserina, Primula spp., Prunus sp., Puschkinia
scilloides, Ranunculus spp., Raphanus raphanistrum,
Raphanus sativus, Rheum rhaponticum, Rhododen-
dron simsii, Rosa sp., Rumex sp., Saccharum offici-
narum, Saponaria officinalis, Saxifraga cotyledon,
Schizanthus retusus, S. wisetonensis, Scilla bifolia, S.
siberica, Scleranthus annuus, Scorzonera tau-saghyz,
Secale cereale, Senecio vulgaris, Sherardia arvensis,
Silene noctiflora, S. schafta, Simethis planifolia, Si-
napis alba, Solanum spp., Sorghum spp., Spergula
arvensis, Spinacia oleracea, Sprekelia formosissima,
Stachys arvensis, S. palustris, Stellaria media, Stern-
bergia lutea, Tagetes patula, Taraxacum spp., Thlas-
pi arvense, Tigridia pavonia, Tragopogon porrifolius,
Trifolium spp., Tripleurospermum maritimum, Triti-
cum aestivum, Tuberaria guttata, Tulipa spp., Urti-
ca urens, Valerianella spp., Veronica spp., Vicia spp.,
Viola spp., Vitis vinifera, Yucca flaccida, Zantedes-
chia spp., Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015);
Teste de PCR-RFLP (Wendt et al., 1995; IPPC, 2015);
Teste de RAPD-PCR (Qiao et al., 2016). Conforme
oDOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diag-
nóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo às
Port. 129/1997, IN 04/2001, IN 62/2004, IN 6/2005,
IN 06/2006, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 74/2009
(Mercosul), IN 11/2010, IN 13/2010, IN 05/2011,
IN 27/2011, IN 05/2013, IN 59/2013, IN 23/2015, é
obrigatória a análise para D. dipsaci (no caso de to-
das as raças, exceto as do alho) em importação de
bulbos de Allium sativum, Gladiolus spp., Hyacin-
thus spp, Lilium spp., Narcissus spp., Ornithogalum
spp., Tulipa fosterana, T. gesneriana, Tulipa spp.,
Zantedeschia aethiopica, Zantedeschia spp.; mudas
de Alstroemeria spp., Begonia elatior, B. semperflo-
rens, B. tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Calceola-
ria integrifólia, Chrysanthemum spp., Coleus blumei,
Cyclamen persicum, Dianthus barbatus, Dianthus
caryophyllus, Dianthus chinensis, Dianthus purpu-
rea, Fragaria ananassa, Gerbera jamesonii, Gerbe-
ra spp., Gypsophila spp., Hibiscus spp., Hydrangea
80 RAPP - Volume 24, 2016
macrophylla, Philodendron spp., Rhododendron sim-
sii; estacas de Begonia elatior, B. semperflorens, B.
tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Chrysanthemum
spp., Coleus blumei, Fardos de Medicago sativa;
plantas de Alstroemeria spp., Begonia semperflo-
rens, Chrysanthemum spp., Coleus blumei, Cyclamen
persicum, Fragaria ananassa, Gerbera jamesonii,
Gerbera spp.; sementes de Allium cepa, Allium sa-
tivum, Aster spp., Begonia elatior, B. semperflorens,
B. tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Brassica cam-
pestris var. pekinensis, Brassica napus, Brassica ole-
racea var. acephala, Brassica oleracea var. botrytis,
Brassica oleracea var. capitata, Brassica oleracea var.
gemmifera, Brassica oleracea var. gongylodes, Bras-
sica oleracea var. italica, Calceolaria spp., Campanu-
la medium, Capsicum annuum, Cheiranthus cheiri,
Gypsophila spp., Helianthus annuus, Heuchera spp.,
Lolium multiflorum, Lotus corniculatus, Lysimachia
congestiflora, Medicago sativa, Monarda spp., Nico-
tiana tabacum, Ornithogalum spp., Penstemon spp.,
Phaseolus vulgaris, Pisum sativum, Primula spp., Ra-
phanus sativus, Sorghum spp., Trifolium alexandri-
num, Trifolium spp., Vicia spp., Zea mays; tubérculos
de Solanum tuberosum.
Globodera pallida (Stone, 1973) Behrens, 1975
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômi-
ca: Trata-se de um endoparasita sedentário, sen-
do o J2 a fase infectante. Informações gerais estão
disponíveis nas publicações de Stone et al. (1973),
Behrens (1975), Cotton et al. (2014)e, nos endere-
ços eletrônicos http://nematode.unl.edu/pest5.htm
e http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxada-
ta/G053S1.HTM.
Chave para a identificação de espécies de
Globodera associadas ás informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação cor-
reta de G. pallida: Disponíveis nas publicações de
Stone et al. (1973), Behrens (1975), Subbotin et al.
(2010) e Subbotin et al. (2011).
Distribuição geográfica: Alemanha, Argélia,
Argentina, Áustria, Bélgica, Bolívia, Bulgária, Bósnia-
-Herzegovina, Canadá, Chile, Colômbia, Costa Rica,
Croácia, Chipre, Dinamarca, Equador, Eslovênia, Es-
tados Unidos, Espanha, Finlândia, França, Grécia,
Holanda, Hungria, Índia, Irã, Itália, Luxemburgo,
Malta, Nova Zelândia, Noruega, Panamá, Paquistão,
Peru, Polônia, Portugal, Reino Unido, Romênia, Sué-
cia, Suíça, Tunísia, Turquia, Venezuela.
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Hospedeiros: Datura spp., Solanum acaule, S.
americanum, S. aviculare, S. cardiophyllum, S. dulca-
mara, S. ehrenbergii, S. gilo, S. indicum, S. lycopersi-
cum, S. marginatum, S. mauritianum, S. melongena,
S. multidissectum, S. muricatum, S. nigrum, S. oplo-
cense, S. quitoense, S. sarrachoides, S. scabrum, S.
spegazzinii, S. triflorum, S. tuberosum, S. vernei.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Skantaret al., 2007; Hockland et al.,
2012; Tirchet al., 2016); Teste de PCR-RFLP (Sirca et
al., 2010; Tirchet al., 2016); Teste de Multiplex Real
Time PCR (Nakhla et al., 2010). Conforme o DOC SAC/
CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitossa-
nitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal
que demanda o ensaio relativo às Port. 129/1997,
IN 20/2003, IN 27/2004, IN 06/2005, IN 52/2007, IN
41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a análise para G.
pallida em importação de mudas de Rosa spp.; plan-
tas de Fragaria spp., Rosa spp.; tubérculos de Sola-
num tuberosum.
Globodera rostochiensis (Wollenweber, 1923),
Skarbilovich, 1959
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis na publicação de Salinas-Castro et al. (2016) e,
nos endereços eletrônicos http://download.ceris.
purdue.edu/file/2334 e http://nematode.unl.edu/
pest6.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Globodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de G. rostochiensis: Disponíveis nas publicações de
Subbotin et al. (2010) e Subbotin et al. (2011).
Distribuição geográfica: África do Sul, Albâ-
nia, Alemanha, Argélia, Armênia, Áustria, Austrália,
Belarus, Bélgica, Bolívia, Bósnia-Herzegovina, Bul-
gária, Canadá, Chile, Colômbia, Croácia, Chipre, Di-
namarca, Equador, Eslováquia, Eslovênia, Espanha,
Estados Unidos, Estônia, Filipinas, Finlândia, França,
Grécia, Holanda, Hungria, India, Indonésia, Irã, Itá-
lia, Japão, Letônia, Líbano, Líbia, Liechtenstein, Li-
tuânia, Luxemburgo, Malta, México, Noruega, Nova
Zelândia, Oman, Panamá, Paquistão, Peru, Polônia,
Portugal, Quênia, Reino Unido, República Tcheca,
Romênia, Rússia, Serra Leoa, Sérvia, Sri Lanka, Sué-
cia, Suíça, Tajiquistão, Tunísia, Turquia, Ucrânia, Ve-
RAPP - Volume 24, 2016
nezuela.
Hospedeiros: Atropa belladonna, Chenopo-
dium spp., Cyphomandra betacea, Datura ferox, D.
stramonium, Hyoscyamus niger, Nicotiana acumi-
nata, Oxalis tuberosa, Physalis philadelphica, Phy-
sochlaina orientalis, Salpiglossis sinuata, Solanum
andigenum, S. anomalocalyx, S. antipoviczii, S. ar-
matum, S. ascasabii, S. asperum, S. polyacanthos, S.
polyadenium, S. pyriforme, S. racemigerum, S. tube-
rosum, Ullucus tuberosus.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Skantaret al., 2007; Hockland et al.,
2012; Tirchet al., 2016); Teste de PCR-RFLP (Tirchet
al., 2016); Teste de Multiplex Real Time PCR (Nakhla
et al., 2010). Conforme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Es-
copo da área de Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02
- 10.12.2015, e baseado no ato legal que demanda
o ensaio relativo às Port. 129/1997, IN 20/2003, IN
27/2004, IN 06/2005, IN 06/2006, IN 52/2007, IN
41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a análise para
G. rostochiensis em importação de bulbos de Lilium
spp.; mudas de Rosa spp.; plantas de Fragaria spp.,
Prunus cerasus, Rhododendron indicum, Rosa spp.,
Salvia spp.; tubérculos de Solanum tuberosum.
Heterodera avenae Wollenweber, 1924
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
na publicação de Handoo (2002) e nos endereços
eletrônicos http://nematode.unl.edu/hetaven.htm
e https://gd.eppo.int/taxon/HETDMA.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. avenae: Disponíveis nas publicações de Shar-
ma (1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereço
eletrônicohttp://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: África do Sul, Ale-
manha, Arábia Saudita, Argélia, Austrália, Bélgica,
Bulgária, Canadá, China, Dinamarca, Eslováquia, Es-
panha, Estados Unidos, Estônia, França, Grécia, Ho-
landa, Índia, Irã, Israel, Itália, Iugoslávia, Japão, Letô-
nia, Líbia, Malta, Marrocos, Nova Zelândia, Noruega,
Paquistão, Peru, Polônia, Portugal, Reino Unido, Re-
pública Tcheca, Rússia, Síria, Suécia, Suíça, Tunísia,
Turquia, Ucrânia.
Hospedeiros: Agropyron repens, Agrostis
81
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
spp., Alopecurus pratensis., Anisantha spp., Apera
spica-venti, Arrhenatherum elatius, Avena spp., Bra-
chypodium ponticum, B. sylvaticum, Bromus spp.,
Dactylis glomerata, Digitaria sanguinalis, Elymus
caninus, Festuca spp., Hordeum spp., Triticum aes-
tivum, Koeleria spp., Lolium spp., Phalaris spp., Ph-
leum pratense, Poa spp., Polypogon monspeliensis,
Secale cereale, Setaria viridis, Sorghum vulgare, Sti-
pa lagascae, Trisetum flavescens, Triticum spp., Vul-
pia ciliata, V. muralis,V. myuro, Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Yan et al., 2013); Teste de PCR-RFLP
(Subbotin et al., 1999). Conforme o DOC SAC/CGAL
nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitossanitário
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo às IN 06/2005, IN 44/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para H. avenae em importação de grãos de
Triticum aestivum, Triticum spp.; sementes de Triti-
cum spp.
Heterodera cajani Koshi, 1967  de H. ciceri: Disponíveis nas publicações de Sharma
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis na publicação de Rao et al. (2011) e nos endere-
ços eletrônicos http://download.ceris.purdue.edu/
file/2455 e https://gd.eppo.int/taxon/HETDCJ.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. cajani: Disponíveis nas publicações de Sharma
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereço ele-
trônicohttp://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: Egito, India, Myan-
mar, Paquistão.
Hospedeiros: Cajanus cajan, C. platycarpus,
Cicer arietinum, Crotalaria juncea, Cyamopsis tetra-
gonolobus, Dolichos spp., Glycine max, Lablab pur-
pureus, Phaseolus vulgaris, Phyllanthus maderaspa-
tensis, Pisum sativum, Sesamum indicum, Sesbania
spp., Vicia narbonensis, V. sativa, Vigna aconitifolia,
Vigna mungo, V. radiata, V. unguiculata.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Rao et al., 2011); Teste de Real Time
PCR (Katsuta et al., 2016). Conforme o DOC SAC/
CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitos-
82 RAPP - Volume 24, 2016
sanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para H. cajani em importação de sementes
de Phaseolus vulgaris, Pisum sativum com partículas
de solo.
Heterodera ciceri Volvas, Greco & Di Vito, 1985
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
na publicação de Vovlas et al. (1985) e nos endere-
ços eletrônicos https://www.google.com.br/url?sa=
t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&cad=rja&u
act=8&ved=0ahUKEwjx2v6O8uPNAhUIH5AKHWFQ
AN4QFgg2MAI&url=http%3A%2F%2Fdownload.ce-
ris.purdue.edu%2Ffile%2F2456&usg=AFQjCNEmzG_
4KnCtVcNT_bXtsaTNk1Xxhw e https://gd.eppo.int/
taxon/HETDCI e
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereço ele-
trônico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: Espanha, Itália, Jor-
dânia, Líbano, Síria, Turquia.
Hospedeiros: Cicer spp., Dianthus caryo-
phillus, Lathyrus sativus, Lens culinaris, Lupinus al-
bus, Medicago rigidula, M. sativa, Phaseolus vulga-
ris, Pisum sativum, Trifolium incarnatum, T. pratense,
Vicia faba, V. sativa, Vigna unguiculata.
Detecção: Teste de Trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Mandani et al., 2004). Conforme o DOC SAC/
CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitos-
sanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para H. ciceri em importação de mudas ou
plantas de Dianthus caryophyllus.
Heterodera goettingiana Liebscher, 1892
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
na publicação de Mulvey et al. (1979) e nos endere-
ços eletrônicos http://nematode.unl.edu/hgoettin.
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
htm e https://gd.eppo.int/taxon/HETDGO.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. goettingiana: Disponíveis nas publicações de
Sharma (1998), de Subbotin et al. (2010) e no en-
dereço eletrônico http://nematode.unl.edu/heteds.
htm.
Distribuição geográfica: Alemanha, Argélia,
Bélgica, Bulgária, China, Espanha, Estados Unidos,
França, Holanda, Israel, Itália, Japão, Jordânia, Mal-
ta, Polônia, Portugal, Reino Unido, Rússia, Turquia,
Ucrânia.
Hospedeiros: Asperula arvensis, Cicer arie-
tinum, Glycine hispida, G. max, Lathyrus spp., Lens
culinaris, Lupinus spp., Medicago sativa, Pisum spp.,
Vicia spp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Szalanski et al., 1997; Mandani et al., 2004).
Conforme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área
de Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015,
e baseado no ato legal que demanda o ensaio re-
lativo às IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, é obrigatória a análise para H. goettingiana
em importação de sementes de Glycine max e Pisum
sativum com partículas de solo.
Heterodera mediterranea Vovlas, Inserra, Stone,
19810
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
na publicação de Vovlas et al. (1981) e no endereço
eletrônico https://gd.eppo.int/taxon/HETDMD.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. mediterranea: Disponíveis nas publicações de
Sharma (1998), de Subbotin et al. (2010) e no en-
dereço eletrônico http://nematode.unl.edu/heteds.
htm.
Distribuição geográfica: Espanha, Itália.
Hospedeiros: Olea europaea, Pistacia lentis-
cus, P. vera.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
RAPP - Volume 24, 2016
-RFLP (Mandani et al., 2004). Conforme o DOC SAC/
CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitos-
sanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para H. mediterranea em importação de es-
tacas com raiz, mudas ou plantas de Olea europaea.
Heterodera oryzae Luc & Berdon-Brizuela, 1961
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis nas publicações de Luc & Brizuela (1961), Nobbs
et al. (1992), Rathore & Tiwari (2015) e nos endere-
ços eletrônicos https://gd.eppo.int/taxon/HETDOR e
http://nematode.unl.edu/pest13.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. oryzae: Disponíveis nas publicações de Sharma
(1998), Subbotin et al. (2010) e no endereço eletrô-
nico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: Bangladesh, Costa
do Marfim, Ghana, Índia, Irã, Libéria, Paquistão, Se-
negal.
Hospedeiros: Cyperus umbellatus, Musa acu-
minata, Oryza sativa, Pennisetum purpureum, Zea
mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR-RFLP
(Subbotin et al., 2000). Conforme o DOC SAC/CGAL
nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitossanitário
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo às IN 06/2005, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a análise para
H. oryzae em importação de sementes com partícu-
las de solo de Oryza sativa.
Heterodera oryzicola Rao & Jayaprakash, 1978
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis nas publicações de Rao  &  Jayaprakash (1978),
Nobbs et al. (1992) e no endereço eletrônico https://
gd.eppo.int/taxon/HETDOC.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. oryzicola: Disponíveis nas publicações de Shar-
83
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
ma (1998), Subbotin et al. (2010) e no endereço ele-
trônico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: Índia.
Gama de Hospedeiros: Brachiaria decum-
bens, Cynodon dactylon, Musa paradisiaca, Oryza
sativa.
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Subbotin et al., 2001). Conforme
o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diag-
nóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo às
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é
obrigatória a análise para H. oryzicola em importa-
ção de sementes de Oryza sativa com partículas de
solo.
Heterodera sacchari Luc & Merni, 1963
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Audebert et al. (2000) nos ende-
reços eletrônicos https://gd.eppo.int/taxon/HETDSA
e http://nematode.unl.edu/pest14.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. sacchari: Disponíveis nas publicações de Shar-
ma (1998), Subbotin et al. (2010) e no endereço ele-
trônico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: Benin, Burkina Faso,
Chade, Congo, Costa do Marfim, Gâmbia, Ghana, In-
dia, Jamaica, Libéria, Nigéria, Paquistão, Tailândia,
Senegal.
Hospedeiros: Oryza sativa e Saccharum offi-
cinarum são os hospedeiros principais, outros hos-
pedeiros incluem Axonopus compressus, Brachiaria
brizantha, Cynodon dactylon, Echinochloa colona,
Eleusine indica, Paspalum conjugatum, Saccharum
sp., Urochloa brizantha.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Maafi et al., 2007). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para H. sacchari em importação de mudas de
Cynodon dactylon, Oryza sativa, Paspalum conjuga-
84 RAPP - Volume 24, 2016
tum, Saccharum officinarum.
Heterodera schachtii Schmidt, 1871
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Fosu-Nyarko et al. (2016) nos en-
dereços eletrônicos http://nematode.unl.edu/hets-
chach.htm e https://gd.eppo.int/taxon/HETDSC.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. schachtii: Disponíveis nas publicações de Shar-
ma (1998), Subbotin et al. (2010) e no endereço ele-
trônico http://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: África do Sul, Albâ-
nia, Alemanha, Argélia, Austrália, Áustria, Azerbai-
jão, Bélgica, Bulgária, Canadá, Cazaquistão, Cabo
Verde, Chile, China, Croácia, Dinamarca, Eslováquia,
Espanha, Estados Unidos, Estônia, Finlândia, França,
Gâmbia, Grécia, Holanda, Hungria, Irã, Iraque, Israel,
Itália, Iuguslávia, Jordânia, Letônia, Líbia, Marrocos,
México, Moldova, Paquistão, Peru, Polônia, Portugal,
Quirquistão, Reino Unido, República Tcheca, Romê-
nia, Rússia, Senegal, Sérvia, Síria, Suíça, Tunísia, Tur-
quia, Ucrânia, Uruguai, Nova Zelândia.
Hospedeiros: Agrostemma githago, Alliaria
petiolata, Allium sativum, Alyssum argenteum, A.
borzaeanum, A. maritimum, A. spinosum, Amaran-
thus spp., Ammophila arenaria, Ananas comosus,
Anchusa officinalis, Anethum graveolens, Apium
graveolen, Arabidopsis thaliana, Arabis alpina, A.
arenosa, A. bellidifolia, A. caucasica, A. hirsuta, A.
muralis, A. perfoliata, A. turrita, A. verna, Arachis
hypogea, Armoracia rusticana, Atriplex confertifolia,
A. hastata, A. hortensis, A. littoralis, A. patula, A. ro-
sea, Aubrieta columnae, Aurinia saxatilis, Barbarea
longirostris, B. verna, B. vulgaris, Berteroa incana,
Beta spp., Beta vulgaris var. conditiva, Biscutella au-
riculata, B. laevigata, Brassica acephala,B. cernua,
B.juncea, B. napus, B. nigra, B. oleracea, B. oleracea
var. botrytis, B. oleracea var. capitata, B. oleracea var.
gemmifera, B. oleracea var. gongyloides, B. oleracea
var. acephala, B. oleracea var. italica, B. oleracea var.
sabauda, B. rapa, B. sinapis, Bunias orientalis, Calepi-
na corvini, Camelina sativa, Capsella bursa-pastoris,
Cardamine impatiens, C. pratensis, Cardaria draba,
Chaenorrhinum minus, Cheiranthus spp., Chenopo-
dium spp., Chorispora tenella, Cicer arietinum, Ci-
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
chorium intybus, Cochlearia glastifolia, C. officinalis,
Consolida orientalis, Crambe abyssinica, Descurainia
sophia, Dianthus spp., Diplotaxis erucoides, D. tenui-
folia, Erodium cicutarium, Erysimum spp., Euphor-
bia peplus, Galeopsis spp., Galium aparine, Glycine
hispida, Gypsophila acutifolia, G. elegans, Hablitzia
tamnoides, Halimione portulacoides, Helianthus
annuus, H. tuberosus, Holosteum umbellatum, Hor-
deum vulgare, Iberis spp., Isatis tinctoria, Lactuca
sativa, Lamium spp., Lathyrus spp., Lens culinaris,
Lepidium sativum, Linaria vulgaris, Lobularia marí-
tima, Lopezia coronata, Lunaria annua, L. redeviva,
Lupinus mutabilis, Lupinus nanus, Lycopsis arvensis,
Malcolmia marítima, Matricaria sp., Medicago lu-
pulina, M. sativa, Mentha arvensis, Moricandia son-
chifolia, Myagrum perfoliatum, Myosotis sylvatica,
Myosurus minimus, Nasturtium microphyllum, N.
officinale, Neslia paniculata, Papaver rhoeas, Pasti-
naca sativa, Peltaria alliacea, Petroselinum crispum,
Phaseolus spp., Phleum pratense, Phytolacca acino-
sa, Pisum sativum, Plantago lanceolata, Polygonum
spp., Portulaca grandiflora, P. oleracea, Raphanus
spp., Rapistrum perenne, R. rugosum, Reseda lútea,
R. odorata, Rheum rhabarbarum, R. rhaponticum,
Rhynchosinapis erucastrum, Rorippa amphibia, R.
islandica, Rumex spp., Saccharum officinarum, Sa-
ponaria ocymoide, S. officinalis, Senecio vernalis,
S. vulgaris, Sesbania exaltata, S. macrocarpa,Silene
spp., Sinapis spp., Sisymbrium spp., Solanum lyco-
persicum, S. nigrum, S. peruvianum, S. pimpinellifo-
lium, S. sarrachoides, S. tuberosum, Sonchus asper,
S. oleraceus, Spinacia glabra, S. oleracea, Stellaria
media, Taraxacum officinale, Teesdalia nudicaulis,
Tetragonia tetragonioides, Thlaspi arvense, Trifolium
spp., Tropaeolum majus, T. peregrinum, U. dioica, U.
uren, Vaccaria pyramidata, Veronica officina, Vicia
benghalensis, V. faba, V. hirsuta, Vigna angularis, V.
unguiculata, Viola tricolor, Vitis sp. Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mandani et al., 2004); Teste de PCR-
-RFLP (Szalanski et al., 1997; Mandani et al., 2004).
Conforme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área
de Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
às IN 20/2007, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
é obrigatória a análise para H. schachtiiem importa-
ção de sementes de Beta vulgaris var. conditiva.
RAPP - Volume 24, 2016
Heterodera trifolii Goffart, 1932
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Wouts & Sturhan (1978), Inserra
et al. (1993) e nos endereços eletrônicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/G060S8.
HTM e https://gd.eppo.int/taxon/HETDTR.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. trifolii: Disponíveis nas publicações de Sharma
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereço ele-
trônicohttp://nematode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: Austrália, Canadá,
Costa do Marfim, Cuba, Espanha, Estados Unidos,
França, Havaí, India, Israel, Itália, Nova Zelândia, Por-
to Rico, República Dominicana, Guiana.
Hospedeiros: Ataca 86 espécies em nove fa-
mílias botânicas, incluindo Agrostemma githago,
Beta corolliflora, B. lomatogona, B. macrocarpa, B.
marítima, B. pátula, B. vulgaris, B. vulgaris x procum-
bens, B. juncea, B. napus, B. oleracea var. sabauda, B.
oleracea var. gongyloides, B. oleracea var. capitata,
B. oleracea var. gemmifera, B. oleracea var. botrytis,
B. rapa, Cerastium arvense, C. perfoliatum, Chenopo-
dium glaucum, Cicer arietinum, C. songaricum, Cucu-
mis sativus, Cucurbita maxima, C. pepo, Desmodium
canum, D. uncinatum, Dianthus spp., Galeopsis spp.,
Glycine hispida, Gypsophila acutifolia, G. elegans,
Hebe X andersonii, Isatis tinctoria, Lamium molle,
Lathyrus spp., Lens spp., Lespedeza stipulacea, L.
striata, Lilium spp., Lotus corniculatus, Lupinus spp.,
Lychnis chalcedonica, L. coronária, L. floscuculi, Me-
dicago sativa, M. truncatula, Melandrium rubrum,
Melilotus alba, M. officinalis, Phaseolus vulgaris,
Pisum sativum, Polygonum persicaria, Raphanus sa-
tivus, Rheum rhabarbarum, R. rhaponticum, Rumex
spp., Saponaria spp., Scleranthus annuus, Sesbania
grandiflora, S. macrocarpa, Silene spp., Sinapis alba,
Sinningia speciosa, Solanum lycopersicum, S. peru-
vianum, S. pimpinellifolium, S. tuberosum, Spergula
arvensis, Spinacia oleracea, Stellaria media, Trifo-
lium spp., Vaccaria pyramidata, Veronica persica,
Vicia spp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Amiri et al., 2002); Teste de PCR-
-RFLP (Szalanski et al., 1997; Amiri et al., 2002). Con-
85
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
forme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de
Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
às IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
é obrigatória a análise para H. trifolii em importação
de bulbos de Lilium spp.; mudas com raiz ou plantas
de Dianthus spp.
Heterodera zeae Koshy, Swarup, and Sethi, 1970  veis nas publicações de Golden et al. (1980), Perry
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Koshyet al. (1970)e, nos ende-
reços eletrônicos http://nematode.unl.edu/pest15.
htm, http://plpnemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Ta-
xadata/G060S57.HTM e https://gd.eppo.int/taxon/
HETDZE.
Chave para a identificação de espécies de
Heterodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de H. zeae: Disponíveis nas publicações de Sharma
(1998), de Subbotin et al. (2010) e no endereço ele-
trônicohttp://nematode.unl.edu/hzeae.htm.
Distribuição geográfica: Afeganistão, Egito,
Estados Unidos, Grécia, India, Paquistão, Portugal,
Tailândia.
Gama de Hospedeiros: Agropyron smithii,
Alopecurus pratensis, Avena sativa, Bambusa sp.,
Bouteloua curtipendula, Brachiaria platyphylla, Ca-
lamagrostis epigeios, Capsicum annuum, Citrus sp.,
Coix lachryma-jobi, Corchorus capsularis, Echino-
chloa spp., Festuca elatior, F. rubra, Hordeum vulga-
re, Leptochloa dubia, Lolium perenne, Muhlenbergia
montana, Oryza sativa, Panicum capillare, Pennise-
tum setaceum, Phalaris arundinacea, Phleum pra-
tense, Phragmites australis, Poa spp., Prunus dulcis,
Pyrus communis, Raphanus sativus, Saccharum spp.,
Setaria indica, S. italica, Sorghum bicolor, Solanum
lycopersicon, Stipa viridula, Tripsacum dactyloides,
Triticum aestivum, Zea mays, Zea mexicana.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR-RFLP
(Szalanski et al., 1997; Skantar et al., 2012). Con-
forme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de
Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
às IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013,
é obrigatória a análise para H. zeae em importação
de sementes com partículas de solo de Avena sativa,
86 RAPP - Volume 24, 2016
Oryza sativa, Triticum aestivum, Triticum spp., Zea
mays.
Meloidogyne chitwoodi Golden, O’Bannon, Santo
& Finley, 1980
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
et al. (2009) e nos endereços eletrônicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/G076S8.
htm e http://www.inspection.gc.ca/plants/plant-
-pests-invasive-species/nematodes-other/columbia-
-root-knot-nematode/fact-sheet/eng/13273369998
15/1327337651479.
Chave para a identificação de espécies de
Meloidogyne associadas ás informações morfoló-
gicas e morfométricas que permitem a identifica-
ção de M. chitwoodi: Disponíveis nas publicações
de Perry et al. (2009), Humphreys-Pereira& Elling
(2014) e no endereço eletrônico http://nematode.
unl.edu/melchit.htm.
Distribuição geográfica: África do Sul, Ale-
manha, Argentina, Bélgica, Estados Unidos, França,
Holanda, Itália, México, Moçambique, Portugal, Tur-
quia.
Hospedeiros: Acer spp., Adiantum sp., Aegi-
lops squarrosa, Agropyron spp., Allium cepa, A. moly,
Apium graveolens, Arrhenatherum elatius, Astraga-
lus spp., Avena sativa, Beta vulgaris, Betula spp.,
Borago officinalis, Brassica campestris, B. napus, B.
oleracea var. botritys, B. oleracea var. italica, Bromus
spp., Canavalia ensiformis, Capsella bursa-pastoris,
Capsicum annuum, Cichorium endivia, Cichorium
intybus, Cirsium arvense, C. vulgare, Clematis sp.,
Coronilla varia, Cotoneaster dielsianus, Dactylis glo-
merata, Dahlia sp., Delphinium sp., Dicentra spp.,
Erica cinerea, Fagopyrum spp., Festuca spp., Fra-
garia ananassa, Galinsoga parviflora, Gladiolus sp.,
Helianthus annuus, Hordeum spp., Iris sp., Laburnum
anagyroides, Leymus cinereus, Lilium sp., Lonicera
spp., Lotus corniculatus, Lupinus albus, Medicago
spp., Melilotus officinalis, Mucuna deeringiana, Nar-
cissus sp., Oenothera speciosa, Panicum capillare,
Pascopyrum smithii, Paspalum vaginatum, Petroseli-
num crispum, Phaseolus vulgaris, Pisum sativum, Po-
tentilla fruticosa, Psathyrostachys spp., Pseudoroeg-
neria spp., Raphanus sativus, Scilla siberica, Secale
cereale, Senecio vulgaris, Sinapis alba, Solanum spp.,
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Sonchus asper, Sorghum bicolor, S. vulgare, Tagetes
spp., Thinopyrum bessarabicum, Triticum spp., Tuli-
pa spp., Valeriana officinalis, Vitis spp., Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Petersen &Vrain, 1996; Wishart et
al., 2002; Adam et al., 2007); Teste de Multiplex Real
Time PCR (Zijlstra & Van Hoof, 2006); Teste de SCAR-
-PCR (Adam et al., 2007). Conforme o DOC SAC/CGAL
nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitossanitário
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo às IN 18/2004, IN 06/2005,
IN 06/2006, IN 04/2007, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, é obrigatória a análise para M. chitwoodi
em importação de estacas com raiz de Vitis vinifera;
mudas de Dahlia spp., Paspalum vaginatum, Vitis vi-
nifera; tubérculos de Solanum tuberosum.
Meloidogyne fallax Karssen, 1996
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis nas publicações de Karssen (1996), de Perry et
al. (2009), nos endereços eletrônicos http://nema-
tode.unl.edu/pest39.htm e http://download.ceris.
purdue.edu/file/2284.
Chave para a identificação de espécies de
Meloidogyne (endoparasita sedentário) associadas
ás informações morfológicas e morfométricas que
permitem a identificação de M. fallax: Disponíveis
na publicação de Perry et al. (2009) e no endereço
eletrônico http://nematode.unl.edu/melfallax.htm
Distribuição geográfica: Alemanha, Austrália,
Bélgica, França, Holanda, Nova Zelândia, Reino Uni-
do, Suíça.
Hospedeiros: Acer palmatum, Aconitum na-
pellus, Adiantum sp., Allium moly, Apium graveolens,
Asparagus officinalis, Astilbe sp., Avena ludoviciana,
Beta vulgaris, Betula pendula, Borago officinalis,
Capsicum annuum, Caragana arborescens, Chiono-
doxa luciliae, Cichorium endivia, Cichorium intybus,
Clematis sp., Convallaria majalis, Cornus sanguinea,
Crocus sp., Dahlia sp., Daucus carota, Delphinium
sp., Dicentra spp., Fagopyrum sp., Foeniculum vulga-
re, Fragaria ananassa, Galanthus nivalis, Gladiolus
sp., Hemerocallis sp., Hordeum vulgare, Hyacinthus
sp., Iris sp., Laburnum anagyroides, Lilium sp., Lo-
lium multiflorum, Lonicera xylosteum, Medicago sa-
tiva, Muscari armeniacum, Narcissus sp., Oenothera
RAPP - Volume 24, 2016
erythrosepala, O. speciosa, Petroselinum crispum,
Phacelia tanacetifolia, Phaseolus vulgaris, Potentilla
fruticosa, Prunus avium, Raphanus sativus, Scilla si-
berica, Scorzonera hispanica, Secale cereale, Sinapis
alba, Solanum spp., Solanum tuberosum, Tagetes
spp., Triticum spp., Tulipa sp., Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Petersen &Vrain, 1996; Wishart et
al., 2002; Adam et al., 2007); Teste de Multiplex Real
Time PCR (Zijlstra & Van Hoof, 2006); Teste de SCAR-
-PCR (Adam et al., 2007). Conforme o DOC SAC/CGAL
nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitossanitário
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que de-
manda o ensaio relativo às IN 06/2005, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a análise para
M. fallax em importação de mudas ou plantas de Fra-
garia ananassa; de substrato e meio de crescimento
que acompanham plantas; de tubérculos de Sola-
num tuberosum.
Nacobbus aberrans (Thorne, 1935) Thorne & Allen,
1944
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Stone & Burrows (1985), Souza
(2001), Harveson (2014) e nos endereços eletrônicos
http://nematode.unl.edu/naberrans.htm e https://
gd.eppo.int/taxon/NACOBA.
Chave para a identificação de espécies de
Nacobbus associadas ás informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
N. aberrans: Disponíveis nas publicações de Man-
zanilla-Lópezet al. (2002), de Laxet al. (2006) e no
endereço eletrônico http://nematode.unl.edu/na-
cobbsp.htm.
Distribuição geográfica: Argentina, Bolívia,
Chile, Equador, Estados Unidos, México, Peru, Reino
Unido, Rússia.
Hospedeiros: Atriplex confertifolia, Beta vul-
garis, Brassica napus, B. nigra, B. oleracea acephala,
B. oleracea var. gemmifera, B. oleracea var. botrytis,
B. oleracea var. capitata, B. oleracea var. gongyloides,
B. rapa, Capsicum, Chenopodium album, Coryphan-
tha vivípara, Cucumis sativus, Cucurbita pepo, Dau-
cus carota, Gaillardia pulchella, Kochia scoparia,
Lactuca sativa, Matthiola sp., Opuntia fragilis, O.
macorrhiza, Pisum sativum, Raphanus sativus, Sal-
87
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
sola kali, Spinacia oleracea, Solanum esculentum,
S. melongena, S. peruvianum, S. pimpinellifolium, S.
sparsipilum, S. tuberosum, Stellaria media, Tragopo-
gon porrifolius, Tribulus terrestres.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Anthoine & Mugniéry, 2005; Atkin-
set al., 2005; Vovlaset al., 2007; Lax et al., 2014);
Teste de PCR-RFLP (Vovlaset al., 2007). Conforme o
DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnós-
tico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado
no ato legal que demanda o ensaio relativo às Port.
129/1997, IN 74/2003, IN 18/2004, IN 27/2004, IN
06/2005, IN 06/2006, IN 52/2007, IN 41/2008, IN
59/2013, é obrigatória a análise para N. aberrans em
importação de raiz de Beta vulgaris; sementes de
Cucurbita pepo; tubérculos de Solanum tuberosum.
Nacobbus dorsalis Thorne & Allen, 1944
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
véis na publicação de Thorne & Allen (1944) e nos
endereços eletrônicos http://plpnemweb.ucdavis.
edu/nemaplex/Taxamnus/G085mnu.htm e https://
gd.eppo.int/taxon/NACODO/documents.
Chave para a identificação de espécies de
Nacobbus (endoparasita sedentário) associadas
ás informações morfológicas e morfométricas que
permitem a identificação de N. dorsalis: Disponíveis
na publicação de Manzanilla-Lópezet al. (2002) e no
endereço eletrônico http://nematode.unl.edu/na-
cobbsp.htm.
Distribuição geográfica: Estados Unidos.
Hospedeiros: Amsinckia sp., Citrullus lanatus,
Erodium cicutarium, Hordeum vulgare, Olea europa-
ea, Prunus spp., Salsola kali, Salvia sp., Solanum tu-
berosum, Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Atkinset al., 2005). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 06/2006, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é
obrigatória a análise para N. dorsalis em importação
de mudas de Olea europaea; tubérculos de Solanum
tuberosum.
88 RAPP - Volume 24, 2016
Pratylenchus crenatus Loof, 1960
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Castillo & Vovlas (2007), Kuma-
ri (2015), Chałańska et al. (2016) e, nos endereços
eletrônicos http://plant-clinic.bpp.oregonstate.edu/
nematodes-pratylenchus e http://nematode.unl.
edu/pcrenat.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Pratylenchus associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de P. crenatus: Disponíveis nas publicações de Cas-
tillo & Vovlas (2007) e Kumari (2015).
Distribuição geográfica: Alemanha, Argenti-
na, Austrália, Bélgica, Canadá, Chile, Chipre, Eslovê-
nia, Estados Unidos, Estônia, Holanda, Itália, Japão,
Noruega, Polônia, República Tcheca, Suécia, Ucrânia.
Hospedeiros: Abies sp., Acer sp., Aira caryo-
phyllea, Alnus sp., Anthurium andreanum, Anthu-
rium scherzerianum, Anthurium spp., Asparagus
officinalis, Aster sp., Astilbe spp., Avena sativa, Be-
gonia elatior, Begonia semperflorens, Begonia tu-
berhybrida, Begonia x hiemalis, Begonia sp., Beta
vulgaris, Betula sp., Chrysanthemum coccineum, C.
leucanthemum, C. maximum, Cichorium endívia, C.
intybus, Cimicifuga sp., Convallaria majalis, Corylus
sp., Crataegus sp., Cucumis melo, Cynara scolymus,
Dahlia spp., Daucus carota, Fragaria chiloensis, Fra-
garia spp., Fuchsia spp., Helleborus niger, Hordeum
distichum, H. vulgare, Humulus lupulus, Hydrangea
spp., Iris sp., Jasminum sp., Laburnum anagyroi-
des, Lactuca sativa, Lilium spp., Lotus corniculatus,
Malus sylvestris, Miscanthus giganteus, Musa sp.,
Narcissus sp., Nolana sp., Olea europaea, Panicum
virga, Papaver somniferum, Pernettya sp., Petunia
spp., Phlox sp., Picea sp., Pinus spp., Pisum sativum,
Poa annua, Polypodiaceae sp., Populus sp., Prunus
armeniaca, P. avium, P. dulcis, P. persica, Pseudotsu-
ga menziesii, P. communis,Prunus spp., Pyrus com-
munis, Raphanus raphanistrum, Rhododendron sp.,
Rosa spp., Rubus sp., Scabiosa caucasica, Scorzonera
hispanica, Secale cereale, Sequoia sp., Solanum lyco-
persicum, S. tuberosum, Sorbus aucuparia, Spergula
arvensis, Stellaria media, Trifolium pratense, T. re-
pen, Vaccinium sp., Vicia sp., Vitis vinifera, Wisteria
sp., Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
quenciamento (Kumari, 2015); Teste de Multiplex
PCR (Mekete et al., 2011). Conforme o DOC SAC/
CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitos-
sanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para P. crenatus em importação de estacas
com raiz de Fragaria spp., Fuchsia spp., Hydrangea
spp., Olea europaea, Petunia spp., Pinus spp., Pru-
nus spp., Pyrus communis, Rhododendron spp., Rosa
spp.; mudas de Anthurium andreanum, Anthurium
scherzerianum, Anthurium spp., Aster spp., Astilbe
spp., Begonia elatior, Begonia semperflorens, Be-
gonia tuberhybrida, Begonia x hiemalis, Chrysanthe-
mum coccineum, Chrysanthemum leucanthemum,
Chrysanthemum maximum, Dahlia spp., Fragaria
spp., Fuchsia spp., Hydrangea spp., Olea europaea,
Petunia spp., Pinus spp., Prunus spp., Pyrus com-
munis, Rhododendron spp., Rosa spp.; plantas de
Anthurium andreanum, Anthurium scherzerianum,
Anthurium spp., Aster spp., Astilbe spp., Begonia
elatior, Begonia semperflorens, Begonia tuberhybri-
da, Begonia x hiemalis, Chrysanthemum coccineum,
Chrysanthemum leucanthemum, Chrysanthemum
maximum, Fragaria spp., Fuchsia spp., Hydrangea
spp., Olea europaea, Petunia spp., Pinus spp., Pru-
nus spp., Pyrus communis, Rhododendron spp., Rosa
spp.; rizomas de Anthurium andreanum, Anthurium
scherzerianum, Anthurium spp.; tubérculos de Sola-
num tuberosum.
Pratylenchus fallax Seinhorst 1968
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis na publicação de Castillo & Vovlas (2007) e nos
endereços eletrônicos http://nematode.unl.edu/
pest65.htm e http://nematode.unl.edu/pfallax.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Pratylenchus associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de P. fallax: Disponíveis nas publicações de Handoo
et al. (2001) e Castillo & Vovlas (2007).
Distribuição geográfica: Bélgica, Canadá, Rei-
no Unido, França, Holanda, Itália, Japão.
Hospedeiros: Avena sativa, Beta vulgaris,
Brassica napus var. oleifera, Chrysanthemum sp.,
Convallaria majalis, Hordeum vulgare, Malus do-
mestica, Medicago sativa, Poa pratensis, Rosa sp.,
RAPP - Volume 24, 2016
Trifolium sp.,Triticum aestivum, Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Handoo et al., 2001). Conforme
o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diag-
nóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015 e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo às
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é
obrigatória a análise para P. fallax em importação de
estacas com raiz, mudas ou plantas de Chrysanthe-
mum spp., Malus domestica, Rosa spp.
Pratylenchus goodeyi Sher & Allen, 1953
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Castillo & Vovlas (2007), Zhang et
al. (2015) e nos endereços eletrônicos http://www.
promusa.org/Pratylenchus+goodeyi e http://plpne-
mweb.ucdavis.edu/nemaplex/Taxadata/G105s11.
HTM.
Chave para a identificação de espécies de
Pratylenchus associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de P. goodeyi: Disponíveis nas publicações de Cas-
tillo & Vovlas (2007), Handoo et al. (2008) e Zhang
et al. (2015).
Distribuição geográfica: Austrália, Burundi,
Camarões, China, Egito, Etiópia, Espanha, Grécia,
Portugal, Quênia, Ruanda, Tanzânia, Uganda.
Hospedeiros: Ananas comosus, Ensete ven-
tricosum, Heliconia sp., Huechera sp., Musa acumi-
nata, Musa ornata, Musa x paradisíaca, Phaseolus
vulgaris, Strelitzia sp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Zhang et al., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória
a análise para P. goodeyi em importação de mudas
com raiz ou rizomas de Heliconia spp., Musa spp..
Pratylenchus scribneri Steiner, 1943
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Castillo  & Vovlas (2007), Yan et
89
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
al. (2016) e no endereço eletrônico http://nemato-
de.unl.edu/pscrib.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Pratylenchus associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de P. scribneri: Disponíveis nas publicações de Cas-
tillo & Vovlas (2007) e Yan et al. (2016).
Distribuição geográfica: África do Sul, Ale-
manha, Argentina, Bulgária, Canadá, Chile, Croácia,
Egito, Eslovênia, Estados Unidos, Holanda, Índia, Irã,
Israel, Itália, Japão, Jordânia, Oman, México, Suíça,
Turquia.
Hospedeiros: Allium cepa, Amaranthus sp.,
Amaryllis sp., Anthurium sp., Beta vulgaris, Brassi-
ca oleracea var. botrytis, Brassica oleracea var. ca-
pitata, Capsicum frutescens, Carpinus caroliniana,
Celtis laevigata, Chenopodium sp., Chrysanthemum
morifolium, Cymbidium sp., Cypripedium sp., Dahlia
sp., Daucus carota, Digitaria sanguinalis, Fragaria
chiloensis, F. ananassa, Glycine max, Hordeum vul-
gare, Malus spp., Medicago sativa, Mentha spicata,
Miscanthus giganteus, Musa sp., Nicotiana taba-
cum, Ocimum basilicum, Panicum virgatum, Phase-
olus limensis, P. lunatus, P. vulgaris, Prunus persica,
Raphanus sativus, Rosa sp., Saccharum officinarum,
Solanum lycopersicum, Sorghum bicolor, S. vulgare,
Tribulus terrestris, Trifolium pratense, Triticum aesti-
vum, Uniola sp., Vitis sp., Zea mays, Zoysia matrella.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Yan et al., 2016). Conforme a DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico
Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no
ato legal que demanda o ensaio relativo às Port.
129/1997, IN 06/2005, IN 06/2006, IN 52/2007, IN
41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a análise para P.
scribneri em importação de bulbos de Amaryllis spp.,
Dahlia spp.; estacas com raiz de Chrysanthemum
spp., Dahlia spp., Fragaria ananassa, Malus spp.,
Prunus persica, Rosa spp., Vitis vinifera; mudas ou
plantas de Anthurium andreanum, Anthurium scher-
zerianum, Anthurium spp., Chrysanthemum spp.,
Dahlia spp., Fragaria ananassa, Malus spp., Prunus
persica, Rosa spp., Vitis vinifera, rizomas de Anthu-
rium spp.; tubérculos de Solanum tuberosum.
Pratylenchus thornei Sher & Allen, 1953
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório, sendo o J2
90 RAPP - Volume 24, 2016
a fase infectante. Informações gerais estão dispo-
níveis nas publicações de Castillo  & Vovlas (2007),
Chałańskaet al. (2016) e no endereço eletrônico
https://grdc.com.au/Research-and-Development/
GRDC-Update-Papers/2016/02/how-long-does-it-
-take-to-reduce-Pratylenchus-thornei-populations-
-in-the-soil.
Chave para a identificação de espécies de
Pratylenchus associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de P. thornei: Disponíveis nas publicações de Cas-
tillo & Vovlas (2007) e Troccoli et al. (2008).
Distribuição geográfica: África do Sul, Ale-
manha, Arábia Saudita, Argélia, Argentina, Austrá-
lia, Bélgica, Bulgária, Canadá, Chile, Coréia, Croácia,
Chipre, Dinamarca, Egito, Eslováquia, Eslovênia, Es-
panha, Estados Unidos, Grécia, Holanda, India, In-
glaterra, Irã, Israel, Itàlia, Japão, Jordânia, Líbia, Mar-
rocos, México, Paquistão, Polônia, Portugal, Quênia,
Romênia, Síria, Sudão, Tajiquistão, Turquia, Tunísia,
Uruguai, Venezuela.
Hospedeiros: Aegilops spp., Agropyron spp.,
Agrostis sp., Allium cepa, A. sativum, Amaranthus
palmeri, A. retroflexus, Ammi visnaga, Anethum
graveolens, Apium graveolens, Araucaria sp., Ara-
chis hypogaea, Asparagus officinalis, Avena fatua,
A. sativa, Bassia scoparia, Beta vulgaris, Brassica
campestris, B. juncea, B. napus, B. oleracea, Bromus
spp., Camelina sativa, Capsicum frutescens, Cartha-
mus tinctorius, Carya illinoinensis, Casuarina sp., Ce-
drus deodara, Cedrus sp., Chenopodium album, Cicer
arietinum, Cichorium intybus, Citrus sinensis, Conyza
canadensis, Coriandrum sativum, Crotalaria juncea,
Cucumis melo,Cupressus sp., Cynara scolymus, Cy-
nodon dactylon, Dahlia sp., Daucus carota, Dichon-
dra sp., Digitaria sanguinalis, Dystaenia ibukiensis,
Elymus spp., Elytrigia spp., Eucalyptus sp., Euphor-
bia humistrata, Festuca sp., Ficus carica, Foenicu-
lum vulgare, Fragaria ananassa, Fragaria chiloensis,
Fraxinus sp., Gleditsia sp., Glycine max, Gossypium
hirsutum, Helianthus annuus, Helichrysum bracte-
atum, Hordeum murinum, H. vulgare, Hydrangea
sp., Hyoscyamus spp., H. niger, Hypericum sp., Iberis
sp., Iris sp., Juglans sp., Juncus sp., Lactuca sativa,
Lens culinaris, Ligustrum sp., Lilium sp., Linum sp.,
Lippia sp., Lotus purshianus, Lupinus sp., Magnolia
sp., Malus domestica, M. sylvestris, Malva rotundi-
folia, M. sylvestris, Matricaria chamomilla, Medica-
go spp., Mentha piperita, Mesembryanthemum sp.,
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
Musa ornata, Olea europaea, Oryza sativa, Panicum
virgatum, Pascopyrum smithii, Paspalum dilatatum,
Pennisetum clandestinum, Peperomia sp., Persea
americana, Phaseolus spp., Philodendron spp., Pinus
radiata, Pisum sativum, Plantago ovata, Platanus sp.,
Poa annua, P. secunda, Prunus armeniaca, P. avium,
P. cerasifera, P. cerasus, P. domestica, P. dulcis, P. per-
sica, Prunus spp., Pyrus communis, Pseudoroegneria
spicata, Quercus sp., Raphanus sativus, Rosa spp.,
Rubus sp., Rumex sp., Salix sp., Salsola tragus, Scin-
dapsus sp., Secale cereale, Solanum tuberosum, Sor-
ghum bicolor, S. halepense, S. drummondii, Spinacia
oleracea, Sequoiadendron giganteum, Setaria viri-
dis, Sinapis alba, Sisymbrium altissimum, Solanum
lycopersicum, S. tuberosum, Taraxacum officinale,
Thuja sp., Trachyspermum ammi, Trifolium repens,
T. resupinatum, T. subterraneum, Trigonella foenum-
-graecum, Tripsacum dactyloides, Triticosecale sp.,
Triticum aestivum, T. durum,T. turgidum, T. vulgare,
Typha sp., Ulmus sp., Vicia benghalensis, V. faba, V.
sativa, V. villosa, Vigna unguiculata, Vitis vinifera,
Vulpia myuros, Zea mays, Zingiber sp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mokriniet al., 2016); Teste de Real
Time PCR (Yan et al., 2012). Conforme o DOC SAC/
CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitos-
sanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 72/2004,
IN 06/2005, IN 27/2006, IN 03/2007, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 59/2013, IN 23/2015, é obrigatória
a análise para P. thornei em importação de estacas
com raiz de Rosa spp. Vitis vinifera; mudas ou plan-
tas de Helichrysum bracteatum, Hydrangea spp.,
Olea europaea, Philodendron spp., Prunus spp., Rosa
spp., Vitis vinifera, Fragaria ananassa; sementes de
Arachis hypogaea; tubérculos de Solanum tubero-
sum.
Punctodera chalcoensis Stone, Sosa Moss &
Mulvey, 1976  rubra, Hordeum vulgare, Lolium perenne, Poa an-
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
na publicação de Stone et al. (1976) e nos endereços
eletrônicos http://nematode.unl.edu/puncds.htm e
http://nematode.unl.edu/pest29.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Punctodera associadas ás informações morfológi-
RAPP - Volume 24, 2016
cas e morfométricas que permitem a identificação
de P. chalcoensis: Disponíveis nas publicações de
Stone et al. (1976), Mulvey & Golden (1983) e Sub-
botin et al. (2010).
Distribuição geográfica: México
Gama de Hospedeiros: Zea mays, Zea mexi-
cana.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013), Teste de PCR e Se-
quenciamento (Sabo et al., 2002; Gibson et al., 2011;
De Luca et al., 2013; Doboszet al., 2013). Conforme
o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diag-
nóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e base-
ado no ato legal que demanda o ensaio relativo às
IN 06/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, IN
23/2015, é obrigatória a análise para P. chalcoensis
em importação de sementes com partículas de solo
de Zea mays.
Punctodera punctata (Thorne, 1928) Mulvey & Sto-
ne, 1976 (syn. Heterodera punctata Thorne, 1928)
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita sedentário, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Sharma (1998), Mulvey & Stone
(1976) e nos endereços eletrônicos https://gd.eppo.
int/taxon/HETDPU e http://plpnemweb.ucdavis.
edu/nemaplex/Taxadata/G109s1.HTM.
Chave para a identificação de espécies de
Punctodera associadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de Punctodera punctata: Disponíveis nas publica-
ções de Sharma (1998), Sabo et al. (2002), Subbotin
et al. (2010) e no endereço eletrônico http://nema-
tode.unl.edu/heteds.htm.
Distribuição geográfica: Alemanha, Canadá,
Estados Unidos, Holanda, Hungria, Inglaterra, Méxi-
co, Polônia, Rússia.
Hospedeiros: Agrostis capillaris, A. stolonife-
ra, A. stolonifera var. palustris, Avena sativa, Festuca
nua, P. pratensis, Triticum sp., Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Sabo et al., 2002). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 06/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
91
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
análise para H. punctata em importação de semen-
tes com partículas de solo de Zea mays.
Radopholus citrophilus Huettel, Dickson and Ka-
plan, 1984 (anteriormente denominado como Ra-
dopholus similis raça citri)
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um endoparasita migratório, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Huettel et al. (1984), Huettel &
Yaegashi (1988) e no endereço eletrônico http://ne-
matode.unl.edu/rcitrop.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Radopholusassociadas ás informações morfológi-
cas e morfométricas que permitem a identificação
de R. citrophilus: Disponiveis nas publicações de Ca-
res & Andrade (2006), Huettel et al. (1984) e Huettel
& Yaegashi (1988).
Distribuição geográfica: Costa do Marfim,
Cuba, Estados Unidos, Porto Rico, República Domi-
nicana, Guiana.
Hospedeiros: Anthurium spp., Calathea spp.,
Citrofortunella microcarpa, Citrus limon, Citrus para-
disi, Citrus sinensis x Poncirus trifoliata, Daucus ca-
rota, Rotylenchulus parvus, Bougainvillea sp., Carica
papaya, Carissa sp., Crotalaria juncea, Cupressus
sp., Cynodon dactylon, Cyperus sp., Fortunella spp.,
Glycine max, Gossypium hirsutum, Hordeum vulga-
re, Lactuca sativa, Macadamia sp., Medicago sati-
va, Musa spp., Nicotiana tabacum, Olea europaea,
Pennisetum americanum,Persea americana, Phase-
olus vulgaris, Philodendron spp., Pittosporum sp.,
Poncirus trifoliata, Saccharum officinalis, Saccharum
officinarum, Solanum lycopersicum, S. tuberosum,
Sorghum bicolor, Strelitzia spp., Thymus sp., Vigna
unguiculata, Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR -RFLP
(Fallas et al., 1996; Elbadri et al., 2002); Teste de
SCAR-PCR (Kaplan et al., 1996). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 6/2005,
IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é obrigatória a
análise para R. citrophilus em importação de estacas
com raiz de Philodendron spp.; mudas ou plantas de
Anthurium andreanum, Anthurium scherzerianum,
Anthurium spp., Calathea spp., Musa spp., Philoden-
dron spp., Strelitzia spp.; rizomas de A. andreanum,
92 RAPP - Volume 24, 2016
A. scherzerianum, Anthurium spp., Musa spp., Stre-
litzia spp..
Rotylenchulus parvus Sher, 1961
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um semi-endoparasita sedentário, sen-
do o J2 a fase infectante. Informações gerais estão
disponíveis nas publicações de Robson et al. (1997),
Van Den Berg et al. (2016) e no endereço eletrônico
http://www.plantwise.org/KnowledgeBank/Data-
sheet.aspx?dsid=47891.
Chave para a identificação de espécies de
Rotylenchulus associadas ás informações morfoló-
gicas e morfométricas que permitem a identifica-
ção de R. parvus: Disponível na publicação de Rob-
son et al. (1997).
Distribuição Geográfica: África do Sul, Austrá-
lia, Chipre, Costa do Marfim, Egito, Estados Unidos,
Ilhas Virgens, Ilhas Maurício, Índia, Irã, Malawi, Mo-
çambique, Paquistão, Quênia, República Dominica-
na, Somália, Tanzânia, Uganda, Zâmbia, Zimbabwe.
Hospedeiros: Arachis hypogaea, Carica pa-
paya, Crotalaria juncea, Cynodon dactylon, Gos-
sypium hirsutum, Hordeum vulgare, Nicotiana
tabacum, Olea europaea, Pennisetum glaucum, Sac-
charum officinarum, Vigna unguiculata, Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Van Den Berg et al., 2016). Con-
forme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de
Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
às IN 6/2005, IN 03/2007, IN 52/2007, IN 41/2008,
IN 59/2013, é obrigatória a análise para R. parvus em
importação de estacas com raiz ou mudas de Olea
europaea; sementes de Arachis hypogaea.
Subanguina radicicola (Greeff, 1872) Para-
monov, 1968
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis nas publicações de Mitkowski (2007), Singh et
al. (2013) e nos endereços eletrônicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/Nemaplex/Taxadata/G124S1.
HTM e http://nematode.unl.edu/tylench/anguin/
subangui/subads.htm.
Chave para a identificação de espécies de Su-
banguina associadas ás informações morfológicas
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
e morfométricas que permitem a identificação de
S. radicicola: Disponíveis nas publicações de Brzeski
(1981), Siddiqi (2000) e Hons (2008).
Distribuição geográfica: Alemanha, Arábia
Saudita, Argentina, Bulgária, Canadá, China, Equa-
dor, Estados Unidos, Estônia, Holanda, Inglaterra,
India, Nova Zelândia, Noruega, Polônia, Romênia,
Sérvia, Ucrânia.
Hospedeiros: Poa annua, P. pratensis, P. tri-
vialis, Triticum spp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Mitkowski, 2007; Hons, 2008). Con-
forme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de
Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e
baseado no ato legal que demanda o ensaio relativo
às IN 6/2005, IN 52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, é
obrigatória a análise para S. radicicola em importa-
ção de mudas de grama.
Xiphinema diversicaudatum (Micoletzky, 1927)
Thorne, 1939
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Brown & Topham (1985), Perry &
Moens (2013) e no endereço eletrônico http://ent-
nemdept.ufl.edu/creatures/nematode/dagger_ne-
matode.htm.
Chave para a identificação de espécies de
Xiphinema associadas ás informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
X. diversicaudatum: Disponíveis nas publicações de
Coomans et al. (2001), Siddiqi (2000) e Hons (2008).
Distribuição geográfica: África do Sul, Ale-
manha, Áustria, Bélgica, Bulgária, Croácia, Dinamar-
ca, Eslováquia, Eslovênia, Espanha, Estados Unidos,
França, Holanda, India, Itália, Iuguslávia, Marrocos,
Moldávia, Nova Zelândia, Noruega, Polônia, Portu-
gal, Reino Unido, República Tcheca, Rússia, Suécia,
Suíça, Turquia, Ucrânia.
Hospedeiro: Abelmoschus esculentus, Apium
graveolens, Arabidopsis thaliana, Arachis hypogaea,
Chamaecyparis lawsoniana, Chrysanthemum spp.,
Citrus sp., Cucumis sativus, Dianthus caryophyllus,
Ficus sp., Rosa sp., Fragaria sp., Glycine hispida, Gly-
cine max, Impatiens balsamina, Juniperus commu-
nis, Lilium spp., Lolium perenne, Mercurialis perenni,
Persea americana, Petunia hybrida, Prunus armenia-
RAPP - Volume 24, 2016
ca, P. persica, Pyrus communis, Ribes nigrum, Rosa
canina, R. chinensis, R. multiflora, Rubus idaeus, Sac-
charum officinarum, Sambucus nigra, Solanum lyco-
persicum, Triticum spelta, Vitis sp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Wang et al., 2002; Mokrini et al.,
2014); Teste de Real Time PCR (Van Ghelder et al.,
2015). Conforme o DOC SAC/CGAL nº 06 – Esco-
po da área de Diagnóstico Fitossanitário - Rev. 02 -
10.12.2015, e baseado no ato legal que demanda o
ensaio relativo às IN 6/2005, IN 52/2007, IN 41/2008,
IN 59/2013, IN 8/2015, IN 23/2015, é obrigatória a
análise para X. diversicaudatum em importação de
bulbos de Lilium spp.; mudas de Chrysanthemum
spp., Fragaria ananassa, Pyrus communis, Rosa spp.,
Vitis vinifera; mudas de raiz nua de Vitis vinifera;
plantas de Chrysanthemum spp., Fragaria ananassa,
Pyrus communis, Rosa spp., Vitis vinifera.
Xiphinema italiae Meyl, 1953
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J2
a fase infectante. Informações gerais estão disponí-
veis nas publicações de Mitkowski (2007), Singh et
al. (2013) e nos endereços eletrônicos http://plp-
nemweb.ucdavis.edu/Nemaplex/Taxadata/G124S1.
HTM e http://nematode.unl.edu/pest34.htm.
Chave para a identificação de espécies de Xi-
phinema (ectoparasita migratório) associadas ás in-
formações morfológicas e morfométricas que per-
mitem a identificação de X. italiae: Disponíveis nas
publicações de Coomans et al. (2001) e Hons (2008).
Distribuição geográfica: África do Sul, Argé-
lia, Bulgária, Camarões, Chipre, Egito, Espanha, Fran-
ça, Grécia, Israel, Itália, Líbia, Nigéria, Portugal, Ro-
mênia, Tunísia, Turquia.
Hospedeiros: Cicer arietinum, Citrus auran-
tium, Cocos nucifera, Eucaliptus sp., Euphorbia sp.,
Ficus carica, Morus sp., Olea europaea, Opuntia fi-
cus-indica, Prunus spp., Vitis sp..
Detecção: Teste de trituração, peneiramento
e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e Se-
quenciamento (Kumari & Lisková, 2009); Real Time
PCR (Van Ghelder et al., 2015). Conforme o DOC
SAC/CGAL nº 06 – Escopo da área de Diagnóstico Fi-
tossanitário - Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato
legal que demanda o ensaio relativo às IN 6/2005, IN
52/2007, IN 41/2008, IN 59/2013, IN 8/2015, é obri-
93
 Paulo Sergio Torres Brioso e Ricardo Moreira de Souza (70-103)
gatória a análise para X. italiae em importação de
estacas com raiz, mudas ou plantas de Prunus spp.,
Vitis vinifera; mudas de raiz nua de V. vinifera.
Xiphinema rivesi Dalmasso, 1969
Aspectos Gerais e Identificação Taxonômica:
Trata-se de um ectoparasita migratório, sendo o J2 a
fase infectante. Informações gerais estão disponíveis
nas publicações de Ebsaryet al. (1984), Handooet al.
(2015), IPPC (2016b) e no endereço eletrônico ht-
tps://gd.eppo.int/taxon/XIPHRI.
Chave para a identificação de espécies de
Xiphinema associadas ás informações morfológicas
e morfométricas que permitem a identificação de
X.rivesi: Disponíveis nas publicações de Coomans
et al. (2001), Archidona-Yuste et al. (2016) e IPPC
(2016b).
Distribuição geográfica: Alemanha, Argenti-
na, Australia, Canadá, Chile, Egito, Eslovênia, Espa-
nha, Estados Unidos, França, Irã, Itália, Paquistão,
Portugal, Peru, Samoa, Tonga.
Hospedeiros: Acer negundo, Allium sativum,
Celtis spp., Citrus sp., Cucumis sativus, Eucalyptus
sp., Fragaria ananassa, Juglans regia, Juniperus sp.,
Malus spp., Mangifera indica, Medicago sativa, Po-
pulus sp., Prunus spp., Quercus spp., Rubus idaeus,
Rubus spp., Solanum tuberosum, Sorghum bicolor,
Vaccinium spp., Vitis vinifera, Zea mays.
Detecção: Teste de trituração, peneiramen-
to e flutuação (OEPP/EPPO, 2013); Teste de PCR e
Sequenciamento (Akinbadeet al., 2014; Archidona-
-Yuste et al., 2016). Conforme o DOC SAC/CGAL nº
06 – Escopo da área de Diagnóstico Fitossanitário
- Rev. 02 - 10.12.2015, e baseado no ato legal que
demanda o ensaio relativo às IN 6/2005, IN 52/2007,
IN 41/2008, IN 70/2009, IN 05/2011, IN 59/2013, IN
8/2015, IN 23/2015, é obrigatória a análise para X.
rivesi em importação de estacas com raiz de Vacci-
nium corymbosum, Vaccinium spp.; mudas de raiz
nua de Vitis vinifera; mudas ou plantas de Fragaria
ananassa, Vaccinium spp..
Perspectivas futuras
Segundo Brioso & Pozzer (2013), apesar de
contarmos com técnicas, ferramentas e processos
para identificação de pragas quarentenárias nas tro-
cas comerciais, estamos sempre lidando com a in-
certeza. Ela pode ser caracterizada pela metodologia
do processo, falha humana e o desconhecimento
94 RAPP - Volume 24, 2016
biológico das pragas. Esses três tipos de incertezas
continuarão a existir independentemente de desen-
volvimentos futuros e sempre devem ser considera-
dos quando se objetiva reduzir a incerteza o máximo
possível em cada um desses grupos para que haja
trocas comerciais seguras, a serem estabelecidas em
marcos regulatórios, mantendo-se dessa forma a sa-
nidade vegetal e, com isso, ganhando mercados para
a exportação, além de reduzir os custos econômicos
e sociais da produção nacional.
Inerente a todos os problemas e dificuldades
existentes, é responsabilidade de toda a sociedade
brasileira preservar a sanidade vegetal, seja através
da importação de material vegetal de forma legal,
com os devidos trâmites, que garantam que o pro-
duto esteja livre de pragas e fitopatógenos, do in-
centivo e desenvolvimento à pesquisa de técnicas
de diagnose mais rápidas, práticas e sensíveis das
pragas e fitopatógenos, das garantias legais para que
seja exercida a fiscalização de forma eficiente e du-
radoura no país.
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RAPP - Volume 24, 2016 103

 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)

RISCOS POTENCIAIS DE PATÓGENOS

FLORESTAIS EXÓTICOS PARA O SETOR
FLORESTAL BRASILEIRO
Celso Garcia Auer1 e Álvaro Figueredo dos Santos1

RESUMO
Listas de pragas exóticas são elaboradas visando proteger as culturas
agrícolas e florestais dos países e blocos continentais. Essas pragas são avalia-
das por sistemas de vigilância sanitária vegetal, a partir de análises de risco e
aquelas de maior impacto e potencial de entrada e de estabelecimento podem
ser classificadas como pragas quarentenárias. No caso dos patógenos florestais
existem fungos, bactérias, nematoides e vírus que podem representar riscos po-
tenciais. Além dos patógenos quarentenários colocados na lista A1 de pragas
quarentenárias para o Brasil, outros patógenos exóticos não quarentenários po-
dem também representar riscos aos cultivos florestais. Essa revisão aborda as
principais espécies florestais plantadas no Brasil: eucalipto, pínus, acácia-negra,
teca e álamo, seus patógenos presentes mais importantes, os patógenos con-
siderados quarentenários e patógenos exóticos não quarentenários. Ênfase foi
dada às possíveis formas de introdução de patógenos, a necessidade de cons-
tante atualização das listas de pragas quarentenárias e capacitação de técnicos
em relação ao tema patógenos quarentenários e exóticos.

SUMMARY
Lists of exotic pests are designed to protect agricultural and forest cul-
tures of countries and continental blocks. These pests are evaluated by plant
health surveillance systems, from risk analysis and those of greater impact and
potential entry and establishment may be classified as quarantine pests. In the
case of forest pathogens are fungi, bacteria, nematodes, and viruses that can
pose potential risks. In addition to the quarantine pathogens placed in the A1 list
of quarantine pests for Brazil, other non-quarantine exotic pathogens can also
pose risks to forest crops. This review addresses the main tree species plant-
ed in Brazil: eucalyptus, pine, black wattle, teak and poplar, its most important
pathogens present, pathogens considered quarantine and non-quarantine ex-
otic pathogens. Emphasis was given to possible ways of introducing pathogens,
the need for constant updating of the lists of quarantine pests and training of
technicians on topics of quarantine and exotic pathogens.

Introdução pido crescimento, tais como eucalipto (Eucalyptus

O Setor Florestal Brasileiro é constituído, em spp.) e pínus (Pinus spp.) que fornecem matéria-
sua maioria, por espécies florestais exóticas de rá- -prima para vários setores industriais (IBÁ, 2015). A

1
Laboratório de Patologia Florestal, Embrapa Florestas, Estrada da Ribeira, Km 111, 83411-000, Colombo, PR. celso.auer@embra-
pa.br, alvaro.santos@embrapa.br.

104 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)
madeira produzida se constitui em fonte de fibras
celulósicas destinada à produção de papel e chapas,
bem como produtos mais nobres destacando-se a
produção de laminados e madeira serrada, para os
mais diversos usos. Na geração de energia, a biomas-
sa pode ser utilizada in natura na forma de cavacos,
lenha, carvão e até como substrato para produção
de álcool de segunda geração. A madeira também
serve para outros usos como mobiliário, construção
civil e uso residencial. Em 2014, as áreas com flores-
tas plantadas representaram 7,74 milhões de hecta-
res, correspondendo a 0,9 % do território brasileiro
(IBÁ, 2015). Desse total, o eucalipto respondeu pela
maior área plantada com 5,56 milhões de hectares,
seguido pelo pínus com 1,59 milhão, acácia negra
e acácia mangium com 160 mil, teca com 87 mil, e
outras espécies florestais para a indústria fosforeira
como é o caso do álamo com 4 mil (IBÁ, 2015). Neste
ano, o setor florestal brasileiro gerou 610.000 em-
pregos diretos e indiretos, em várias regiões brasilei-
ras, com uma participação no produto interno bruto
(PIB) de 1,1 % (IBÁ, 2015).
A importância socioeconômica da área flo-
restal brasileira e o risco de entrada de patógenos
exóticos tem sido uma preocupação constante do
setor florestal. Os impactos potenciais podem ser es-
perados na redução da produtividade das florestas,
da qualidade da matéria-prima (madeira) produzida
e, em casos mais graves, o impedimento do uso de
determinadas espécies ou de materiais genéticos al-
tamente suscetíveis aos patógenos exóticos. Várias
introduções foram constatadas nos últimos 20 anos:
Teratosphaeria nubilosa e Teratosphaeria pseudoeu-
calypti em eucaliptos (Perez et al., 2009; Candido et
al., 2014) e Olivea neotectonae (Olivea tectonae) em
teca (Cabral et al., 2010; Bonaldo et al., 2011, Pieri
et al., 2011).
No Ministério de Agricultura, Pecuária e Abas-
tecimento (MAPA), o tema pragas quarentenárias (o
conceito de forma abrangente inclui doenças, inse-
tos e plantas daninhas) é tratado no Departamen-
to de Sanidade Vegetal (DSV). Nas listas elaboradas
pelo MAPA há uma diferenciação entre patógenos
quarentenários ainda não encontrados no território
brasileiro, chamados de pragas A1, e aqueles que
foram introduzidos, mas se encontram localizados,
chamados de pragas A2.
Neste trabalho, a sistemática adotada para
o tema será a abordagem de patógenos quarente-
RAPP - Volume 24, 2016
nários constantes nas listas A1 e A2 do MAPA, para
cada uma das espécies florestais – eucalipto, pínus,
acácia negra, teca e álamo - e a inclusão de pató-
genos exóticos, ainda não normatizados pelo MAPA,
mas que poderão representar riscos potenciais para
a área florestal. A análise dos patógenos quarente-
nários foi baseada na lista A1 publicada na Instrução
Normativa n. 41 de 2008 (BRASIL, 2008) e que foi
não alterada pela Instrução Normativa n. 59 de 2013
(BRASIL, 2013).
Eucalipto
Patógenos existentes no Brasil
O eucalipto é plantado em quase todo o terri-
tório nacional, especialmente nos estados de Minas
Gerais, São Paulo e Mato Grosso do Sul (IBÁ, 2015)
com a maioria dos plantios constituída por clones de
Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla denomi-
nado de urograndis (Alfenas et al. 2009). O eucalipto
possui vários patógenos registrados no Brasil (Tabela
1). Os principais patógenos são Puccinia psidii (fer-
rugem), Ceratocystis fimbriata e Ralstonia solana-
cearum (murcha vascular), Chrysoporthe cubensis e
Botryosphaeria spp. (cancros), Cylindrocladium spp.
Mycosphaerella/Teratosphaeria, Xanthomonas axo-
nopodis e Erwinia psidii (cancro e murcha) em plan-
tios comerciais.
Patógenos oficialmente listados como qua-
rentenários
A atual lista A1 de pragas quarentenárias
para o Brasil apresenta oito patógenos fúngicos, des-
tacando-se como patógenos radiculares Armillaria
luteobubalina (importante em eucaliptos na Austrá-
lia), Armillaria tabescens e Heterobasidion annosum
(polífagos) e para patógenos de tronco, somente foi
relacionado Chondrostereum purpureum (Tabela 2).
Patógenos exóticos não quarentenários
Os patógenos que podem ser destacados
como importantes para a cultura do eucalipto e que
ainda não foram normatizados como pragas quaren-
tenárias são patógenos foliares como Teratosphaeria
spp., e Quambalaria pitereka (Tabela 2). Esses fun-
gos causam desfolha, declínio e morte das árvores,
com impactos significativos na produtividade das
florestas de eucalipto na Austrália (Carnegie, 2007).
De acordo com este autor, Teratosphaeria eucalyp-
ti causou severa desfolha (> 95 %) em Eucalyptus
105
 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 1. Lista de patógenos registrados para a cultura do eucalipto no Brasil.

Patógeno Doença Danos ou Sintomas
Alternaria tenuissima Mancha foliar de Lesão foliar em mudas.
Alternaria
Aulographina eucalypti Mancha de Lesões necróticas sobre nervuras, pecíolo, galhos e
Aulographina ramos mais finos.
Botryosphaeria ribis (= Neofusicoccum ribis) Cancro de Lesões em casca, em várias partes do caule, com
Botryosphaeria dothidea (= Fusicoccum aesculi) Botryosphaeria quebra no ponto de infecção, exsudação de goma,
Botryosphaeria rhodina (= Lasiodiplodia theobromae) estrangulamento de árvores jovens.
Botrytis cinerea (= Botryotinia fuckeliana) Mofo cinzento; Queima e seca de ponteiros de mudas e árvores
Podridão de Botrytis jovens; morte de miniestacas.
Ceratocystis fimbriata Murcha de Declínio, cancro, escurecimento radial do lenho;
Ceratocystis murcha e morte de minicepas, miniestacas e árvores
jovens.
Cercospora eucalypti Mancha de Cercospora Manchas foliares que podem tomar todo o limbo.
Colletotrichum gloesporioides Antracnose Mancha foliar, desfolha e secamento descendente da
haste de mudas.
Cryptosporiopsis eucalypti Mancha de Manchas foliares com ou sem desfolha.
Cryptosporiopsis
Crysoporthe cubensis (= Cryphonectria cubensis) Cancro Lesões na casca de árvores jovens e adultas;
estrangulamento e morte de árvores.
Coniothyrium sp. Cancro de Lesões necróticas pequenas ou longas, deprimidas no
Coniothyrium caule, gomose, declínio e redução no crescimento da
árvore.
Cylindrocladium spp. Mancha foliar de Manchas e secamento de folhas e ramos em mudas
Cylindrocladium candelabrum (= Calonectria scoparia) Cylindrocladium; e árvores jovens; secamento da haste de mudas;
Cylindrocladium clavatum Canela preta; Tombamento de plântulas; Morte de estacas e
Cylindrocladium ovatum Tombamento de miniestacas.
Cylindrocladium parasiticum (= Calonectria ilicilola) mudas;
Cylindrocladium pteridis Morte de miniestacas
Cylindrocladium scoparium (= Calonectria morganii)
Cylindrocladium ilicicola (= Calonectria pyrochroa)
Cylindrocladium floridanum
Cylindrocladium quinqueseptatum (= Calonectria quinqueseptata)
Cytospora eucalypticola (= Valsa certosperma) Cancro de Cytospora Lesões na casca e cancro em tronco.
Erwinia psidii Cancro e murcha Seca de ramos e ponteiros, murcha.
Erythricium salmonicolor (= Corticium salmonicolor) Enfermidade rosada Lesões na casca e anelamento de hastes e galhos de
ou rubelose árvores jovens, formação de cancros, quebra do caule.
Inocutis jamaicensis Cancro e podridão de Lesão em tronco, trincamento da casca, cancro e
Inocutis apodrecimento de lenho e quebra de caule.
Hainesia lythri Mancha de Hainesia Lesão foliar em mudas; anelamento da haste e morte
apical de mudas.
Harknessia sp. Mancha de Harknessia Manchas foliares
Mycosphaerella/Teratosphaeria Mancha foliar de Manchas foliares de vários tipos, com ou sem desfolha.
Mycospharella parkii (= Stenella parkii) Mycosphaerella /
Mycosphaerella marksii Teratosphaeria
Teratosphaeria suberosa
Teratosphaeria suttonii (= Kirramyces epicoccoides)
Teratosphaeria molleriana (= Colletogloeopsis molleriana)
Teratosphaeria nubilosa
Oidium eucalypti; Erysiphe cichoracearum; Sphaerotheca pannosa Oídio Queima, seca e queda de folhas em mudas e árvores
jovens.
Pestalotiopsis spp. Mancha foliar e Lesões necróticas em folhas e hastes de estacas e
anelamento da haste miniestacas.
Phytophthora sp. Podridão de raiz Tombamento e morte de plântulas em viveiro.
Pilidiella eucalyptorum (= Coniella fragariae) Mancha foliar de Manchas foliares extensas com ou sem desfolha em
Pilidiella árvores.
Puccinia psidii Ferrugem Queima de folhas e brotações de mudas e árvores
jovens.
Quambalaria eucalypti (= Sporothrix eucalypti) Mancha foliar e Estrangulamento da haste de mudas; lesão foliar
anelamento da haste de mudas, minicepas, miniestacas e árvores jovens;
anelamento de hastes e ramos, lesões na casca e
cancros no caule de árvores jovens.
Ralstonia solanacearum biovar I Murcha bacteriana Necrose foliar, murcha e morte de minicepas; murcha
vascular e morte de árvores jovens.
Rhizoctonia solani (AG1-1B); espécies binucleadas de Rhizoctonia; Mela e mancha de Crescimento epifítico sobre folhas, miniestacas, mudas
Thanatephorus cucumeris Rhizoctonia e árvores jovens, causando secamento e morte.
Trimmatostroma excentricum Mancha de Manchas foliares pequenas.
Trimmatostroma
Xanthomonas axonopodis Mancha foliar Manchas foliares necróticas em mudas e árvores
bacteriana jovens.
Fonte: Ferreira (1989), Alfenas et al. (2009), Krugner & Auer (2005a).

106 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 2. Listagem de patógenos exóticos quarentenários ou não considerados importantes para a cultura do eucalipto.
Patógeno Doença Danos Status Referências
quarentenário*
Armillaria luteobubalina Podridão de Apodrecimento de raízes e morte PQ BRASIL (2008)
Armillaria tabescens raízes de árvores.
Chondrostereum purpureum Podridão do Infecção em árvores vivas, declínio PQ BRASIL (2008)
tronco e apodrecimento da madeira Farr & Rossman (2016)**
Hetereobasidion annosum (= Podridão de Apodrecimento de raízes e morte PQ BRASIL (2008)
Spiniger meineckellus) raízes de árvores. Farr & Rossman (2016)**
Teratosphaeria destructans (= Mancha foliar Manchas foliares e desfolha. - Andjic et al. (2011)
Kirramyces destructans)
Kirramyces eucalypti Mancha foliar Manchas foliares e desfolha. - Alfenas et al. (2009)
Pilidiella destruens Seca de Declínio de árvores. - Alfenas et al. (2009)
ponteiros
Quambalaria pitereka Mancha foliar Manchas foliares e deformação de - Roux et al. (2006)
órgãos.
*PQ – praga quarentenária, de acordo com lista A1 de pragas quarentenárias para o Brasil. **Base de dados utilizada
para busca de espécies de eucalipto hospedeiras aos patógenos florestais listados como quarentenários.

nitens provocando a morte de ponteiros e árvores
enquanto que Quambalaria pitereka levou a danos
significativos na copa (25 % de severidade) e queima
de ponteiros, principalmente em plantios jovens de
Corymbia spp.
Pinus
Patógenos existentes no Brasil
O pínus é plantado principalmente nos esta-
dos do Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul
(IBÁ, 2015) e as principais espécies plantadas são Pi-
nus taeda e Pinus elliottii var. elliottii (subtropicais) e
Pinus caribaea var. hondurensis (tropical) (Shimizu &
Sebben, 2008).
Os principais patógenos que ocorrem no pí-
nus são os fungos Armillaria sp. (podridão de raízes)
e Diplodia pinea (seca de ponteiros) (Tabela 3). Até o
momento, desconhece-se qual a espécie de Armilla-
ria que ataca o pínus no Brasil.
Patógenos oficialmente listados como qua-
rentenários
A lista A1 apresenta 10 fungos e 2 nematói-
des quarentenários que podem representar riscos
para a cultura de pínus (Tabela 4). Destacam-se os
patógenos radiculares dos gêneros Armillaria e He-
terobasidion, os nematóides vasculares do gênero
Bursaphelenchus, as ferrugens dos gêneros Cronar-
tium e Endocronartium, de cancro de Gibberella
circinata e de acículas e copa dos gêneros Mycos-
phaerella. Todos são patógenos importantes e com
grandes danos e prejuízos relatados em várias partes
do mundo.
Patógenos exóticos não quarentenários
O patógeno que pode ser destacado para
a cultura do pínus ainda não registrado no Brasil é
Phytophthora pinifolia, restrito ao Chile (Santos et
al., 2013). Os impactos desse oomiceto são rele-

Tabela 3. Lista de patógenos registrados para a cultura do pínus no Brasil.

Patógeno
Armillaria sp.
Cylindrocladium clavatum
Cylindrocladium pteridis
Diplodia pinea (= Sphaeropsis sapinea)
Dothistroma septospora (=
Mycosphaerella pini)
Fusarium sp.
Lophodermium sp.
Rhizoctonia solani (= Thanathephorus
cucumeris)
Fonte: Ferreira (1989), Krugner & Auer (2005b).
Doença Danos
Podridão de raízes Apodrecimento de raízes e morte de árvores.
Podridão de raízes Podridão de raízes de mudas e árvores, morte de plantas.
Queima de acículas Lesões em acículas com estrangulamento e morte;
desfolha em mudas e árvores jovens.
Seca de ponteiros Queima de brotos de mudas, seca de ponteiros de árvores
jovens, cancros em caule, manchamento da madeira.
Queima de acículas Lesões em acículas com estrangulamento e morte;
desfolha em mudas e árvores jovens.
Podridão de raízes Podridão de raízes de mudas.
Mancha de Lophodermium Lesões em acículas com estrangulamento e morte;
desfolha em mudas e árvores jovens.
Podridão de raízes Apodrecimento de raízes e da base de estacas e
miniestacas de mudas.

RAPP - Volume 24, 2016 107

 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 4. Listagem de patógenos exóticos considerados importantes para a cultura do pínus no exterior.
Patógeno Doença Danos Status quarentenário* Referências
Armillaria luteobubalina Podridão de raízes Apodrecimento de raízes e PQ BRASIL (2008)
Armillaria ostoyae morte de árvores.
Armillaria tabescens
Bursaphelenchus xylophilus Murcha vascular Colonização dos traqueídeos PQ BRASIL (2008)
Bursaphelenchus mucronatus da árvore; murcha da copa e
morte de árvores
Cronartium fusiforme Ferrugem Formação de galhas, PQ BRASIL (2008)
Cronartium quercuum deformação do tronco, morte
da planta.
Endocronartium harknessii Ferrugem Formação de galhas, PQ BRASIL (2008)
deformação do tronco, morte
da planta.
Gibberella circinata Cancro resinoso do Tombamento de mudas; PQ BRASIL (2008)
(= Fusarium circinatum) pínus Infecções sistêmicas em ramos
e tronco, cancro, declínio e
morte.
Hetereobasidion annosum Podridão de raízes Apodrecimento de raízes e PQ BRASIL (2008)
morte de árvores.
Mycosphaerella dearnessii Queima de acículas Lesões em acículas, desfolha e PQ BRASIL (2008)
(= Lecanosticta acicola) morte de árvores jovens.
Mycosphaerella gibsonii
(= Pseudocercospora
pini-densiflorae)
Phytophthora pinifolia Dano foliar do pínus Lesões em acículas e - Santos et al.
secamento, lesões necróticas (2013)
no caule e morte de plantas
*PQ – praga quarentenária, de acordo com lista A1 de pragas quarentenárias para o Brasil.

vantes atacando acículas e a copa das árvores e de
acordo com Ahumada et al. (2013) cerca de 54 mil
hectares foram atacados em surto ocorrido durante
2004 a 2006.
Acácia-negra
Patógenos existentes no Brasil
A acácia-negra é plantada no estado do Rio
Grande do Sul em mais de 100.000 hectares (ABRAF,
2013). A acácia negra possui algumas doenças regis-
tradas no Brasil (Tabela 5) e os principais patógenos
são Phytophthora nicotianae e Phytophthora boeh-
meriae, causando a gomose em plantios comerciais.
Patógenos oficialmente listados como qua-
rentenários
A lista A1 apresenta somente Armillaria lute-
obubalina que pode ser danoso para a acacicultura
(Tabela 6).
Patógenos exóticos não quarentenários
Para a acácia negra podem ser destacados
Uromycladium notabile e Uromycladium bisporum
(Tabela 6), que causam ferrugem e desfolha em plan-
tios comerciais no exterior.
Teca
Patógenos existentes no Brasil
A teca é plantada principalmente nos esta-
dos de Mato Grosso, Pará e Roraima (ABRAF, 2013) e
possui algumas doenças registradas no Brasil (Tabela
7). O principal patógeno é Olivea neotectonae (= Oli-
vea tectonae) causador da ferrugem em plantios co-
merciais, reduzindo a produtividade (Caldeira et al.,

Tabela 5. Lista de patógenos registrados para a cultura da acácia-negra no Brasil.

Patógeno
Ceratocystis fimbriata
Phytophthora boehmeriae
Phytophthora nicotianae
Uromycladium alpinum
Fonte: Santos et al. (2007).
Doença Danos
Murcha de Ceratocystis Declínio, cancro, escurecimento radial do lenho; murcha de
ponteiro em árvores jovens.
Gomose de tronco Lesões na casca, exsudação de goma, redução na produção de
casca
Gomose basal Lesões na casca, exsudação de goma, redução na produção de
casca
Ferrugem Amarelecimento e queda de folíolos.

108 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 6. Lista de patógenos exóticos considerados importantes para a cultura da acácia-negra no exterior.
Patógeno Doença Danos Status quarentenário* Referências
Armillaria Podridão de Apodrecimento de raízes e PQ BRASIL (2008)
luteobubalina raízes morte de árvores
Ceratocystis albifundus Murcha de Declínio, cancro, - Roux et al. (2005)
Ceratocystis escurecimento radial do
lenho; murcha de ponteiro em
árvores jovens
Uromycladium notabile Ferrugem Amarelecimento e - Santos et al. (2007)
queda de folíolos
Uromycladium Ferrugem Amarelecimento e - Santos et al. (2007)
bisporum queda de folíolos
*PQ – praga quarentenária, de acordo com lista A1 de pragas quarentenárias para o Brasil.

Tabela 7. Lista de patógenos registrados para a cultura da teca no Brasil.

Patógeno
Agrobacterium tumefaciens
Alternaria sp.
Ceratocystis fimbriata
Colletotrichum gloesporioides
Cylindrocladium parasiticum
Lasiodiplodia theobromae
Olivea tectonae
Meloidogyne javanica
Rhizoctonia solani
Fonte: Caldeira et al. (2014), Borges et al. (2015).
Doença Danos
Galha-da-coroa Deformação basal e presença de galhas.
Mancha de Alternaria Lesões necróticas em folhas.
Murcha de Ceratocystis Declínio, cancro, escurecimento radial do lenho; murcha de
ponteiro em árvores jovens.
Antracnose Manchas foliares e desfolha.
Mancha de Cylindrocladium Manchas foliares e desfolha.
Cancro no tronco Lesões no tronco, manchamento e podridão do cerne e
morte de árvores.
Ferrugem Desfolha prematura em mudas e árvores jovens e adultas.
Galhas das raízes Formação de galhas em raízes.
Queima de folhas Lesões foliares e crescimento epifítico.

2014). Destaca-se, também, a murcha de Ceratocys- (Tabela 9). Os principais patógenos são Melampso-
tis afetando a produtividade decorrente da morte de ra medusae (ferrugem) e Septoria musiva (manchas
árvores e a qualidade da madeira pela colonização e foliares e cancros) em plantios comerciais (May-de
manchamento interno. Mio & Amorim, 2005).

Patógenos oficialmente listados como qua-
rentenários
A lista A1 não apresenta patógenos quarente-
nários para Tectona grandis.
Patógenos exóticos não quarentenários
Os patógenos Phellinus noxius (podridão de
raiz), Phomopsis tectonae e Pseudoepicoccum tecto-
nae (manchas foliares) e Dothiorella sp e Nectria spp.
(cancros) podem ser destacados como importantes
(Tabela 8). Além destes, os patógenos Erythricium
salmonicolor (rubelose) e Ralstonia solanacearum
(murcha vascular) que causam doenças em eucalipto
no Brasil (Alfenas et al., 2009).
Álamo
Patógenos existentes no Brasil
A cultura do álamo está concentrada nos esta-
dos do Paraná e de Santa Catarina (ABRAF, 2013). O
álamo possui algumas doenças registradas no Brasil
Patógenos oficialmente listados como qua-
rentenários
Para o álamo, a lista A1 apresenta 10 fungos
e um vírus (Tabela 10). A lista relaciona os patógenos
radiculares Armillaria ostoyae e Heterobasidion an-
nosum, patógenos de tronco como Chondrostereum
purpureum, Neonectria ditíssima e Valsa nivea e os
patógenos foliares do gênero Drepanopeziza, Taphri-
na populina, Venturia populina e vírus do mosaico
do Populus.
Patógenos exóticos não quarentenários
A princípio, os patógenos que podem ser des-
tacados como importantes para a cultura do álamo
foram listadas como quarentenários (Tabela 10).
Doenças causadas por patógenos quarente-
nários
Com relação às doenças causadas pelos pa-

RAPP - Volume 24, 2016 109

 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)

Tabela 8. Lista de patógenos exóticos considerados importantes para a cultura da teca no exterior.
Patógeno Doença Danos Status Referências
quarentenário*
Erythricium salmonicolor Enfermidade Lesões na casca e anelamento - Caldeira et al. (2014)
(= Corticium salmonicolor) rosada ou rubelose de hastes e galhos de árvores
jovens, formação de cancros,
quebra do caule
Dothiorella sp. Cancro de Cancros em caule - Caldeira et al. (2014)
Dothiorella
Nectria spp. Cancro de Nectria Cancros em caule - Caldeira et al. (2014)
Phellinus noxius Podridão de raiz Apodrecimento de raízes e CROP (2016b)
caule
Phomopsis tectonae Mancha de Manchas foliares, desfolha e - Caldeira et al. (2014)
Phomopsis morte de plântulas
Pseudoepicoccum tectonae Mancha de Manchas foliares, desfolha. - Caldeira et al. (2014)
Pseudoepicoccum
Ralstonia solanacearum Murcha bacteriana Murcha vascular e morte de - Caldeira et al. (2014)
árvores jovens
*PQ – praga quarentenária, de acordo com lista A1 de pragas quarentenárias para o Brasil.

Tabela 9. Lista de patógenos registrados para a cultura do álamo no Brasil.

Patógeno Doença Danos
Melampsora medusae Ferrugem Desfolha prematura em mudas e árvores jovens e adultas.
Rosellinia bunodes Podridão de raízes Apodrecimento de raízes e morte de árvores.
Septoria musiva Mancha foliar e cancro de Septoria Lesões necróticas em folhas; Cancros em tronco.
Fonte: Santos et al. (2010), Santos et al. (2015), May-de-Mio & Amorim (2005).

Tabela 10. Lista de patógenos exóticos considerados importantes para a cultura do álamo no exterior.
Patógeno Doença Danos Status Referências
quarentenário*
Armillaria ostoyae Podridão de raízes Apodrecimento de raízes e PQ BRASIL (2008)
morte de árvores.
Chondrostereum purpureum Podridão do tronco Infecção em árvores vivas, PQ BRASIL (2008)
declínio e apodrecimento da
madeira
Drepanopeziza populi-albae Mancha foliar Lesões foliares, queima de PQ BRASIL (2008)
(= Marssonina castagnei) ponteiros, desfolha prematura
Drepanopeziza populorum da copa.
(= Marssonina populi)
Drepanopeziza punctiformis
(= Marssonina brunnea )
Hetereobasidion annosum Podridão de raízes Apodrecimento de raízes e PQ BRASIL (2008)
morte de árvores.
Neonectria ditissima Cancro Formação de cancros em PQ BRASIL (2008)
(= Neonectria galligena) ramos e troncos, secamento de
ponteiros.
Taphrina populina Galhas foliares Enrolamento do limbo foliar e PQ BRASIL (2008)
formação de galhas.
Valsa nivea Cancros Formação de cancros em PQ BRASIL (2008)
ramos e troncos, secamento de
ponteiros.
Venturia populina Mancha foliar Manchas foliares e queima de PQ BRASIL (2008)
ponteiros em árvores.
Poplar mosaic vírus - Popmv Mancha foliar Manchas foliares PQ BRASIL (2008)
*PQ – praga quarentenária, de acordo com lista A1 de pragas quarentenárias para o Brasil.

tógenos quarentenários, os impactos podem ser vasculares, patógenos de caule e patógenos de parte
agrupados em função do tipo de parasitismo nas aérea (Auer & Santos, 2012).
espécies florestais: patógenos de raízes, patógenos Os patógenos de raízes pertencem aos gêne-

110 RAPP - Volume 24, 2016

 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)
ros Armillaria (Armillaria tabescens, Armillaria os-
toyae e Armillaria luteobubalina) e Heterobasidion
(Heterobasidion annosum). O principal sítio de
ataque são as raízes e o colo da árvore, colonizan-
do a casca, o câmbio e o lenho. As plantas doentes
apresentam declínio e morte por falta de água e
nutrientes, em consequência da destruição das ra-
ízes. A incidência de árvores mortas varia em fun-
ção do potencial de inóculo presente no solo do
talhão e leva à redução do estande, e consequente
queda na produtividade de madeira por área.
Os patógenos vasculares pertencem aos gê-
neros Bursaphelenchus (Bursaphelenchus mucro-
natus e Bursaphelenchus xylophilus). O principal
sítio de ataque é o sistema vascular da planta, que
é colonizado pelo patógeno impedindo a passa-
gem de água e de nutrientes entre as raízes (água
e nutrientes) e a copa (fotossintetizados). Como
resultado, também ocorre o declínio das plantas e
sua morte em casos de intensa colonização dos va-
sos condutores. A paralisação no desenvolvimento
das plantas e sua morte concorrem para a redução
na produtividade de madeira por área.
Os patógenos de tronco pertencem aos gê-
neros fúngicos Giberella (Fusarium circinatum),
Cronartium (Cronartium fusiforme) e Endocronar-
tium (Endocronartium harknessii). Estes fungos
afetam a casca da árvore, podendo causar sua
morte, tendo como consequência principal a que-
bra do tronco e a redução da qualidade da madei-
ra de árvores doentes.
Os patógenos da parte aérea pertencem
aos gêneros fúngicos Drepanopeziza (Drepano-
peziza populi-albae, Drepanopeziza populorum
e Drepanopeziza punctiformis), Mycosphaerella
(Mycosphaerella dearnessii e Mycosphaerella
gibsonii), Neonectria (Neonectria galligena), Ta-
phrina (Taphrina populina) e Venturia (Venturia
populina), além do Poplar Mosaic Virus (vírus). Os
principais sítios de ataque são: as folhas e a copa
das árvores, impedindo a fotossíntese e o desen-
volvimento total da planta e, em casos mais seve-
ros, a queima e queda das folhas. Como resultado,
também há ocorrência do declínio das plantas e
sua morte em casos de intensa colonização. A pa-
ralisação no crescimento das plantas e sua morte
concorrem para a redução na produtividade de ma-
deira por área.
RAPP - Volume 24, 2016
Considerações finais
Os impactos da ação de patógenos exóticos
florestais, quarentenários ou não, são relatados nos
plantios nativos ou comerciais estabelecidos nos
países de origem das espécies florestais exóticas ou
em outros países onde tenham sido introduzidos. A
preocupação constante do setor florestal é a possi-
bilidade que ocorram com a mesma magnitude de
danos ou maior em plantios brasileiros. Os impactos
potenciais podem ser esperados na redução da pro-
dutividade das florestas, da qualidade da matéria-
-prima (madeira) produzida e, em casos mais graves,
o impedimento do uso de determinadas espécies ou
de materiais genéticos altamente produtivos, devido
a sua suscetibilidade aos patógenos exóticos. Outro
tipo de impacto negativo é o caso de patógenos exó-
ticos parasitarem espécies florestais nativas promo-
vendo a mortalidade e redução de florestas e biomas
(Garbelotto & Pautasso, 2012). Em qualquer um dos
tipos de impactos apontados, esperam-se impactos
sociais negativos tanto pela redução de postos de
empregos como pela falta de produtos madeireiros
ou não oriundos das florestas nativas.
Os patógenos florestais exóticos podem ter
sido introduzidos no Brasil, pela forma tradicional
mais conhecida, que é através de material genético
(sementes, mudas e estacas) durante as introduções
de espécies florestais, em diferentes períodos de ex-
pansão do setor florestal. Como exemplo, podemos
mencionar os fungos Diplodia pinea e Mycosphae-
rella pini, em Pinus (Ferreira, 1989; Krugner & Auer,
2005a e b), que provavelmente foram introduzidos
nas décadas de 1940 e 1960. Outra forma é a disse-
minação de propágulos de patógenos por meio de
eventos meteorológicos que podem levar esporos
de fungos e de bactérias a longas distâncias, como
foram os casos de ferrugens e manchas foliares em
culturas agrícolas (Brown & HovmØller, 2002).
Nos últimos 20 anos, com o forte intercâm-
bio comercial, especialmente de produtos agrícolas
e florestais entre os países e regiões, aumentam os
riscos (Wingfield et al. 2002; Cushman & Meente-
meyer, 2008; Andjic et al. 2011) e vias alternativas de
introdução podem estar ocorrendo. Uma dessas for-
mas seria a presença de esporos e estruturas vege-
tativas e de resistência em manufaturados de origem
florestal, como artesanatos em madeira, que passam
por vias que não passam pelo crivo da fiscalização de
portos e aeroportos. Outra possibilidade é a aquisi-
111
 Celso Garcia Auer e Álvaro Figueredo dos Santos (104-114)
ção de sementes e produtos naturais do exterior e
que são despachados pelo correio, sem fiscalização
sanitária. Também, pode ser comentada a presen-
ça de patógenos em material utilizados nas deco-
rações de festas (arranjos de plantas ornamentais)
em navios transatlânticos de turismo que percorrem
o mundo e que são descartados comumente nas
praias ou nos portos. O uso de embalagens e madei-
ra de suporte nos transportes aéreos, normalmente
de origem desconhecida, podem abrigar patógenos
e sua introdução é facilitada principalmente pela
dificuldade de constatação da presença durante os
trabalhos de fiscalização sanitária. No entanto, estas
formas de introdução não têm sido documentadas.
Um aspecto a ser salientado é a dificuldade
de levantamento bibliográfico de patógenos existen-
tes devido às constantes mudanças na classificação
taxonômica. Tal reordenamento do nome científico
dificulta, às vezes, pela falta de especialistas, a busca
de informações sobre patógenos considerados exó-
ticos.
A atual listagem A1 de pragas quarentenárias
para o Brasil (BRASIL, 2008) não especifica a qual
cultura um dado patógeno está associado. Desse
modo, um dado patógeno considerado quarentená-
rio poderá ser importante tanto para culturas agrí-
colas como culturas florestais ou somente para uma
dessas. Outro aspecto a ser levantado é a presença
de patógenos que não atacam as espécies florestais
plantadas no Brasil. Um exemplo é o caso de Brenne-
ria salicis (= Erwinia salicis). Segundo CROP (2016a),
esta bactéria está presente somente em salicáceas
do gênero Salix, o qual não é plantado comercial-
mente no Brasil e assim pode ser questionada sua
colocação na lista A1. Esta bactéria poderá causar ris-
cos ambientais se for patogênica às espécies nativas
de salicáceas como Salix humboldtiana. Dois exem-
plos de riscos ambientais em espécies florestais na-
tivas são a introdução de Phytophthora cinnamomi
na Austrália (Shearer at al. 2004) e o surgimento de
Phytophthora ramorum nos Estados Unidos e Grã-
-Bretanha (Grünwald et al., 2012), ambos afetando
a ecologia das florestas nativas e causando danos
irreversíveis nas populações de espécies suscetíveis.
A lista de patógenos quarentenários para flo-
restas poderia ser maior, caso houvesse um estudo
específico para patógenos em espécies florestais,
como foi apontado para cada um dos gêneros flores-
tais estudados. Uma das culturas de maior expressão
112 RAPP - Volume 24, 2016
nacional é o eucalipto presente em todo o território
nacional em profusão de espécies e clones (deriva-
dos ou não de híbridos artificialmente produzidos),
em variados biomas. Tal situação deve favorecer o
estabelecimento de ciclo de vida de diferentes tipos
de patógenos exóticos. Tais aspectos criam preocu-
pação quanto à possibilidade de patógenos exóticos
se desenvolverem muito melhor do que no país de
origem pela presença de ambientes favoráveis no
Brasil, de hospedeiros suscetíveis e a ausência de ini-
migos naturais (controle biológico natural), a exem-
plo do que ocorre com novos insetos introduzidos
(Alfenas et al., 2009).
A atualização da lista A1 pela inclusão de al-
guns patógenos exóticos como por exemplo Phyto-
phthora pinifolia (em pínus) e Teratosphaeria spp.
(em eucalipto), impactantes ao cultivo de seus
hospedeiros no exterior, seria plenamente justifica-
da pelo risco que podem representar à silvicultura
nacional. Uma maior discussão sobre estes e outros
patógenos poderia ser estabelecida com o envolvi-
mento das universidades, institutos de pesquisa e o
setor privado .
A identificação e diagnose das doenças de
patógenos de plantas requer treinamento específico
quanto às características dos patógenos, dos sinto-
mas e sinais produzidos nas plantas hospedeiras. A
diagnose rápida feita a olho nu ou com o auxílio de
uma lupa, não garante a sua qualidade, tornando-se
necessário o uso de ferramentas laboratoriais, além
dos métodos moleculares. No entanto, faltam proto-
colos específicos rotineiros e, ainda, é alta a relação
custo-benefício.
A capacitação dos futuros técnicos nos cur-
sos de graduação e pós-graduação sobre os patóge-
nos exóticos quarentenários deveria ser estimulada
(Auer & Santos, 2013), além dos cursos de capacita-
ção técnica em Sanidade Florestal para os profissio-
nais do sistema de defesa vegetal sobre taxonomia,
morfologia, hospedeiros, biologia e ecologia, meios
de dispersão, impactos, sintomas, métodos de de-
tecção e inspeção e medidas de controle.
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 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)

BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS: PASSADO,

PRESENTE E PERSPECTIVAS VISANDO UM
FUTURO SUSTENTÁVEL
Bruna Canabarro Pozzebon1 e Juliano dos Santos2

RESUMO
Bactérias endofíticas são conhecidas por colonizar os tecidos internos
das plantas sem desencadear sintomas de doenças. Estudos moleculares re-
centes sobre a diversidade de bactérias endofíticas revelaram que existe uma
grande riqueza de espécies, e que estas podem advir de sementes, da rizosfera,
do filoplano de material propagativo, e penetrar na planta via estômatos, feri-
mentos e microferimentos causados pela emergência das raízes laterais. Muitos
estudos têm demonstrado que esses micro-organismos podem ser uma alterna-
tiva aos métodos de controle de pragas e doenças praticados atualmente, pois
são capazes de prevenir ou reduzir efeitos deletérios causados por patógenos a
partir da multiplicação e ação de mecanismos de biocontrole, desempenhados
pela síntese de sideróforos, voláteis, substâncias antimicrobianas, competição
por espaço e nutrientes e resistência sistêmica. Bactérias endofíticas também
podem promover o crescimento de plantas, através da solubilização de nutrien-
tes, síntese de fitohormônios e fornecimento de vitaminas, bem como promo-
ver efeitos benéficos adicionais à planta, conduzindo para a resistência contra o
estresse abiótico, ataque de insetos e fitorremediação. Desta forma, explorar o
uso de bactérias endofíticas pode colaborar para a agricultura sustentável, por
reduzir os custos de produção com agrotóxicos e insumos químicos, além de
reduzir os riscos ao meio ambiente e à saúde humana.

Introdução do mecanismos de adaptação ao meio ambiente e

A teoria de que bactérias não patogênicas
habitam os tecidos internos de plantas iniciou com
Perrotti em 1926, porém somente a partir de 1940,
começaram a ser divulgadas pesquisas relatando
a presença de bactérias endofíticas em órgãos dis-
tintos da planta, como flores, frutos, folhas, caules,
raízes, e sementes (Hallmann et al., 1997; Sturz et
al., 2000; Thomas et al., 2007; Melnick et al,. 2008;
Barretti et al., 2009; Piccolo et al., 2010; Qin et al.,
2011).
Evolutivamente, as plantas têm desenvolvi-
muitos deles são possíveis devido às interações en-
tre os micro-organismos e a planta (Peixoto Neto et
al., 2004). As bactérias são habitantes comuns dos
tecidos internos e externos de plantas, e são consi-
deradas endofíticas quando colonizam internamen-
te os tecidos vegetais sem mostrar qualquer sinal
externo de infecção ou efeito negativo no hospe-
deiro (Holliday, 1989; Schulz e Boyle, 2006). Esses
micro-organismos se estabelecem nos espaços in-
ter- e intracelulares, dentre os quais destacam-se
o parênquima, epiderme, bainha do feixe vascular,

1
Departamento de Fitopatologia, Universidade Federal de Lavras. Av. Doutor Sylvio Menicucci, 1001 - Kennedy, Lavras - MG, 37200-
000. 2Departamento de Biologia, Universidade Federal do Maranhão. Av. dos Portugueses, 1966 - Bacanga, São Luis - MA, 65080-805.

RAPP - Volume 24, 2016 115

 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
xilema e floema (Elbeltagy et al., 2001; Yonezawa
et al., 2004; Franke-Whittle et al., 2005; Almeida et
al., 2009; Esposito-Polesi, 2010; Piccolo et al., 2010).
Além disso, podem mover-se do solo para as plan-
tas, principalmente através de fissuras que surgem
devido à emergência de raízes laterais, ou penetrar
no hospedeiro pelas folhas, flores e frutos através do
sistema vascular do hospedeiro, tirando proveito de
uma grande disponibilidade de nutrientes (Hardoim
et al., 2008; Compant et al., 2011).
Os micro-organismos endofíticos podem ser
classificados em obrigatórios, quando são estrita-
mente dependentes da planta hospedeira, ou facul-
tativos, quando possuem uma fase do ciclo de vida
dentro da planta hospedeira e outra fase do ciclo de
vida livre (Hardoim et al., 2008). As associações dos
endofíticos com seus hospedeiros geralmente são
simbióticas e/ou mutualísticas (Guo et al., 2008; Me-
lnick et al., 2008). Outro fator importante é a relação
da planta hospedeira com a comunidade endofítica,
que envolve um processo co-evolutivo que conduz
a mudanças nas relações em nível celular e molecu-
lar, contribuindo de diferentes formas na sanidade
e desenvolvimento da planta (Aravind et al., 2010).
Notadamente, esses micro-organismos apresentam
vantagem adicional em comparação a outros, pois
são protegidos contra flutuações bruscas de tempe-
ratura, dessecação, radiações solares e competição
microbiana, por habitarem o interior do hospedeiro
(Francis et al., 2010).
A maioria das pesquisas sobre bactérias asso-
ciadas a plantas se concentram principalmente em
trabalhos científicos que utilizam rizobactérias no
biocontrole de patógenos (Malfanova et al., 2011).
Entretanto, pesquisas sobre a diversidade, interação
e o papel das bactérias endofíticas, tem se tornado
objeto de estudo em todo o mundo, visando eluci-
dar os mecanismos de proteção e crescimento por
elas promovidos (Rosemblueth e Martínez-Romero,
2006; Ryan et al., 2008). Fundamentado nisso, vários
trabalhos têm sido desenvolvidos com essas duas te-
máticas, haja vista que a demanda pelo consumo dos
produtos orgânicos está em ascensão, principalmen-
te devido à busca por alimentos saudáveis e a pre-
ocupação com a saúde (Alves e Cunha, 2012), bem
como a preservação do meio ambiente e a constante
busca dos produtores rurais por menores custos de
produção no manejo da lavoura.
Como promotoras de crescimento de plantas,
116 RAPP - Volume 24, 2016
as bactérias endofíticas podem trazer benefícios por
fornecer vitaminas essenciais à planta, aumentar a
captação e solubilização de minerais, regular o ajus-
te osmótico e a abertura e fechamento dos estôma-
tos, além de modificar a morfologia radicular (Ryan
et al., 2008). No tocante ao biocontrole, esses mi-
cro-organismos são capazes de prevenir ou reduzir
efeitos deletérios causados por patógenos a partir
de múltiplos mecanismos de ação, desempenha-
dos pela síntese de sideróforos, compostos voláteis,
substâncias antimicrobianas, competição por espa-
ço e nutrientes, resistência sistêmica (Rosenblueth e
Martínez-Romero, 2006; Compant et al., 2010).
O uso de bactérias endofíticas na agricultu-
ra se apresenta como uma alternativa de manejo
ao controle de doenças e promoção de crescimen-
to de plantas, devido à relação custo/benefício que
apresentam para o produtor. Com a utilização de
produtos de base biológica, é possível reduzir o uso
excessivo de agrotóxicos e insumos químicos, o que
consequentemente colabora para a redução dos cus-
tos de produção. Contudo, esses micro-organismos
ainda precisam ser estudados minuciosamente, para
que se possa conhecer e elucidar os mecanismos
que estão envolvidos nos processos de controle bio-
lógico e/ou promoção de crescimento. Assim, a pre-
sente revisão aborda o uso de bactérias endofíticas
na agricultura, englobando o passado, presente e as
perspectivas do uso desses micro-organismos visan-
do um futuro sustentável para a produção agrícola, e
principalmente para o produtor.
Bactérias endofíticas – um breve histórico
O termo endofítico ou endófito (do grego en-
don = dentro e phyton = planta) foi atribuído por De
Bary, em meados de 1866, ao estudar a colonização
de tecidos internos de plantas por micro-organismos
(Baldani et al., 2002; Saikkonen et al., 2004). Entre-
tanto, existem autores que atribuem a Perotti, em
1926, a descrição dessa relação natural de bacté-
rias endofíticas e seus hospedeiros (Hallmann et al.,
1997). Os primeiros relatos consideraram as bac-
térias endofíticas como contaminantes resultantes
da desinfestação superficial incompleta dos tecidos
vegetais, ou como patógenos fracamente virulentos
(Hollis, 1951). Por mais de meio século, esses micro-
-organismos permaneceram ignorados e conside-
rados de pouca importância no meio cientifico, e
só então, depois de muitos anos, o papel biológico
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)

exercido por esses agentes microbiológicos come- ção da diversidade de bactérias endofíticas que po-
çou a ser estudado. dem levar à descoberta de novos agentes potenciais
Evolutivamente, os micro-organismos endofí- de biocontrole e/ou promotores de crescimento e
ticos foram mencionados pela primeira vez no início estudos de fitorremediação.
do século XIX, mas foi apenas no final dos anos 70 do
século XX que eles passaram a ter maior ênfase em
trabalhos científicos (Santos e Varavallo, 2011). Um
dos primeiros estudos com bactérias endofíticas foi
realizado por Colombo (1978), que sugeriu a ocor-
rência de um equilíbrio fisiológico entre bactérias
e algas, pois em seu estudo relatou a ocorrência de
bactérias endofíticas entre sifões e dentro dos fila-
mentos cenocíticos das algas. Entretanto, a partir dos
anos 80, os trabalhos com agentes endofíticos pas-
saram a ser mais frequentes, principalmente aque-
les relacionados com a ocorrência e diversidade de
bactérias endofíticas em plantas. Jacobs et al. (1985)
enumeraram, localizaram e caracterizaram bactérias
endofíticas nas raízes de beterraba açucareira (Beta
vulgaris altissima) utilizando técnicas imunológicas e
microscopia eletrônica de varredura. Nesse estudo,
os autores verificaram que a maior ocorrência das
bactérias endofíticas foi nas regiões centrais e peri-
féricas da raiz, ocorrendo principalmente as espécies
Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Coryne- Figura 1. Etapas do isolamento de bactérias endofíticas
de diferentes tecidos vegetais de arroz. (A) Isolamento de
bacterium sp, e Erwinia herbicola. Já nos anos 90, bactérias endofíticas de colmos de plantas sadias de ar-
surgiram estudos que demonstraram que esses mi- roz. (B) Isolamento de bactérias endofíticas de raízes de
cro-organismos possuem funções importantes para plantas sadias de arroz. (C) Maceração dos tecidos para
seus hospedeiros, como a proteção de plantas ao liberação das bactérias do interior para o exterior do teci-
do vegetal. (D) Plaqueamento da suspensão previamente
ataque de insetos, proteção contra a infestação de macerada. (E-F) Colônias de bactérias endofíticas após 24
doenças causadas por fitopatógenos e proteção do h em câmara de crescimento tipo BOD. Foto: Pozzebon,
ataque de mamíferos herbívoros por meio da produ- 2013.
ção de toxinas (Azevedo, 1998; Azevedo, 1999; Aze-
vedo et al., 2000; Peixoto Neto et al., 2002). Bactérias endofíticas e o controle biológico
Atualmente, a interação de bactérias endofí- À medida que a agricultura aumenta, cresce
ticas e seus hospedeiros tem sido objeto de estudo também o uso desordenado de produtos químicos
em todo mundo (Sun et al., 2008). Bactérias endofí- para assegurar a produtividade das culturas, porém
ticas têm sido isoladas de diferentes culturas, como, causando efeitos negativos para o meio ambiente
batata-doce (Ipomoea batatas) (Khan e Doty, 2009), e consequentemente aos alimentos e à microbiota
algodão (Populus deltoides) (Xin et al., 2009), videi- benéfica e natural das plantas. Nesse contexto, o
ra (Vitis vinifera) (West et al., 2010), soja (Glycine controle biológico por bactérias endofíticas tem sido
max) (Hung et al., 2007), tomateiro (Solanum lyco- amplamente estudado e surge como uma forma al-
persicum) (Marquez-Santacruz et al., 2010), batata ternativa de controle para uma agricultura mais sus-
(Solanum tuberosum) (Andreote et al., 2009; Manter tentável.
et al., 2010), arroz (Oryza sativa) (Rangjaroen et al., Resumidamente, os princípios de controle
2015) (Figura 1). Esses estudos tem sido importan- biológico se baseiam principalmente na relação an-
tes para a compreensão das interações ecológicas e tagônica entre micro-organismos, como a antibiose
para o desenvolvimento de aplicações biotecnológi- (Figura 2), competição, parasitismo, hipovirulência,
cas (Ryan et al., 2008), bem como para a identifica- predação e indução de defesas do hospedeiro (Fi-

RAPP - Volume 24, 2016 117

 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)

gura 3) (Bettiol e Ghini, 1995). Desta forma, poderia

se utilizar no controle de uma determinada doença,
um micro-organismo não patogênico que apresenta
necessidades nutricionais semelhantes as do pató-
geno, visando promover a competição por espaço e
nutrientes, que consequentemente reduziria a dis-
seminação da doença, ou ainda usufruir da capaci-
dade que determinados micro-organismos possuem
de produzir substâncias com ação antibiótica ou an- Figura 2. Antibiose desencadeada em teste in vitro contra
tifúngica (Santos e Varavallo, 2011). o fungo Bipolaris oryzae. Setas pretas indicam a presença
Com relação ao biocontrole de doenças, há da bactéria endofítica e a formação de halo de antibiose
inúmeros trabalhos tanto in vitro quanto in vivo re- no meio de cultura. Foto: Pozzebon, 2014.
portando o sucesso do uso de bactérias endofíticas
contra diversos patógenos, principalmente porque et al., 2009; Lin et al., 2013; Purnawati et al., 2014)
essas bactérias possuem capacidade de reduzir ou (Tabela 1).
prevenir os efeitos deletérios de patógenos (Barretti Silva et al. (2008), mostraram que o isolado

Tabela 1. Bactérias endofíticas com atividade fúngica, bactericida, nematicida e inseticida sobre diferentes patógenos
e pragas.
Endófito
Bacillus subtilis
B. amyloliquefaciens
B. vallismortis
B. thuringiensis
Brevibacillus choshinensis
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas sp.
Streptomyces spp.
Acinetobacter lwoffii
Pantoea agglomerans
Ochrobactrum sp.
Patógeno Atividade Referência
Macrophomina phaseolina Fungicida Singh et al. (2008)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
Lasiodiplodia crassispora Fungicida Yuan et al. (2012)
L. rubropurpurea Fungicida Yuan et al. (2012)
L. theobromae Fungicida Yuan et al. (2012)
Ralstonia solanacearum Bactericida Nawangsih et al. (2011)
Fusarium graminearum, Fungicida Zhao et al. (2010)
Alternaria alternata, Fungicida Zhao et al. (2010)
Rhizoctonia solani, Fungicida Zhao et al. (2010)
Cryphonectria parasitica, Fungicida Zhao et al. (2010)
Phytophthora capsici Fungicida Zhao et al. (2010)
Melnick et al. (2008)
Acromyrmex sp. Inseticida Pinto et al. (2003)
Nasutitermes ehrhardti Inseticida Castilhos-Fortes et al. (2002)
Meloidogyne javanica Nematicida Khan et al. (2010)
M. incognita Nematicida Mohammed et al. (2008)
Hemileia vastatrix Fungicida Silva et al. (2008)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
Pectobacterium atrosepticum Bactericida Ardanovet al. (2011)
R. solanacearum Bactericida Tanet al. (2006)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
Botrytis cinerea Fungicida Trotel-Aziz et al. (2008)
F. semitectum Fungicida Assumpção et al. (2009)

F. oxysporum Fungicida Assumpção et al. (2009)

Cercospora kikuchii Fungicida Assumpção et al. (2009)
Cedecea davisae Hemileia vastatrix Fungicida Silva et al. (2008)
Staphylococcus epidermidis Ralstonia solanacearum Bactericida Nawangsih et al. (2011)

118 RAPP - Volume 24, 2016

 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
endofítico 119G reduziu significativamente a severi-
dade da ferrugem do cafeeiro em níveis de controle
acima de 60% em mudas previamente tratadas com
essa bactéria. Da mesma forma, Nawangsih et al.
(2011), estudaram dois isolados de bactérias endo-
fíticas para o biocontrole da murcha bacteriana do
tomateiro, em que os isolados BC4 e BL10 reduziram
significativamente a intensidade da doença em 33%
e 43%, respectivamente. Assumpção et al. (2009),
avaliaram o potencial biotecnológico da comunidade
bacteriana endofítica de sementes de soja e detecta-
ram que 18% dos isolados controlaram o crescimen-
to de fungos fitopatogênicos, 100% produziram áci-
do indol acético (AIA), e 39% solubilizaram fosfato.
Kuss et al. (2006) avaliaram a fixação de nitrogênio e
produção de AIA in vitro por bactérias diazotróficas
endofíticas associadas a raízes de arroz (Oryza sati-
va) e obtiveram resultados promissores.
Além de atuarem no controle biológico de
doenças de plantas, as bactérias endofíticas tam-
bém são capazes de proteger as plantas contra o
ataque de insetos praga. Inseticidas microbiológicos,
especialmente à base de bactérias, tem sido desen-
volvidos desde a década de 70 como alternativa de
controle biológico, e atualmente, muitos produtos
estão disponíveis no mercado para controlar uma
ampla gama de pragas (Federici et al., 2010), sendo
considerados uma das mais importantes táticas de
controle, devido à crescente preocupação com a re-
dução do uso de produtos químicos e principalmen-
te, para o desenvolvimento de uma agricultura mais
sustentável e produtiva (Moreira e Siqueira, 2006).
O controle de pragas por bactérias endofíti-
Figura 3. Indução de resistência sistêmica (ISR) em plan-
tas de arroz com 21 dias após a inoculação de B. oryzae.
(A) Tratamento Controle (Água). (B) Tratamento com o
isolado endofítico 76. Foto: Pozzebon, 2014.
RAPP - Volume 24, 2016
cas pode ser feito através do uso direto de bacté-
rias que apresentam atividade entomopatogênica
natural, ou através do uso desses micro-organismos
como hospedeiros para expressarem genes oriundos
de outros micro-organismos do solo, ou mesmo ge-
nes sintéticos (Pleban et al., 1995). Um dos princi-
pais e mais estudados agentes de controle biológico
é a bactéria Bacillus thuringiensis, que é responsável
por 95% do mercado mundial de biopesticidas, prin-
cipalmente devido à produção de corpos de inclusão
cristalinos, que são ingeridos por lagartas e resultam
na morte das mesmas (Polli et al., 2012).
B. thuringiensis pode ser encontrado em
diferentes substratos, principalmente no solo, e se
caracteriza por produzir inclusões proteicas com
propriedades inseticidas, acaricidas e nematicidas
(Crickmore, 2005). Sua especificidade é em razão da
presença de genes cry que codificam as proteínas
tóxicas ou proteínas Cry (delta-endotoxinas) (Höfte
e Whiteley 1989; Crickmore et al. 1998; Pinto e Fiu-
za 2002), as quais apresentam atividade inseticida
em diferentes ordens de insetos, como Lepidopte-
ra, Coleoptera, Diptera, Hymenoptera, Hemiptera,
Isoptera, Orthopera, Siphonaptera e Thisanoptera
(Feitelson et al., 1992; Aranda et al., 1996; Cavados
et al., 2001; Castilhos-Fortes et al., 2002; De Maagd
et al., 2003; Pinto et al., 2003), além de apresentar
efeito nematicida (Khyami-Horani e Al-Banna 2006;
Mohammed et al., 2008; Khan et al., 2010).
Outro tipo de proteína produzida por B. thu-
ringiensis são as proteínas Cyt, que apresentam ativi-
dade tóxica moderada para dípteros e para algumas
espécies de coleópteros, ocorrendo tipicamente em
subespécies de B. thuringiensis com atividade mos-
quitocida (Federici et al., 2010). Trabalhos com o
uso dessa bactéria endofítica visando o controle de
insetos praga vem sendo desenvolvidos em todo o
mundo. Por exemplo, no estudo publicado por Via-
na et al. (2009), os autores constataram que dos 58
isolados de B. thuringiensis testados em lagartas de
Plutella xylostella, 12 causaram 100% de mortalida-
de num intervalo de tempo entre 24-48 h. Em outro
estudo, conduzido por Macedo et al. (2012), os au-
tores selecionaram e caracterizaram estirpes nativas
de B. thuringiensis, entre as quais observaram que
três isolados causaram mais de 75% de mortalidade
de Diatraea saccharalis (Lepidoptera: Crambidae).
Zhang et al. (2010), isolaram bactérias endo-
fíticas de raízes, caules, folhas e sementes de menta
119
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
do Turquistão (Achnatherum inebrians), em que o
isolado Streptomyces rochei aumentou 85% a taxa
de mortalidade do pulgão do algodoeiro (Aphis gos-
sypii). Rampelotti-Ferreira et al. (2010) avaliaram a
colonização de bactérias endofíticas em plântulas
e em larvas de Spodoptera frugiperda. Nesse estu-
do, o isolado Methylobacterium mesophilicum cepa
SR1.6/6 foi marcado com gfp (proteína verde fluores-
cente), que foi encontrado nas larvas que se alimen-
taram das plântulas inoculadas com essa bactéria,
por meio de análises de microscopia fluorescente.
Desta forma, pode-se afirmar que as bac-
térias endofíticas atuam como agentes de controle
biológico, e são capazes de proteger o hospedeiro
pela síntese de moléculas antimicrobianas, produ-
ção de sideróforos para captação de ferro, compe-
tição de nutrientes com patógenos e produzindo
outras moléculas que são capazes de induzir resis-
tência sistêmica induzida (ISR) na planta colonizada
(Compant et al., 2010). Além disso, podem agir atra-
vés da produção de toxinas que atuam no controle
de insetos, podendo se tornar uma ótima alternativa
para os produtores, no manejo de diversas culturas,
corroborando a redução do uso de agroquímicos e
consequentemente, redução da contaminação am-
biental, humana e animal por esses produtos.
Bactérias endofíticas e a promoção de crescimento
de plantas
Estudos sugerem que além de exercer me-
canismos de biocontrole, as bactérias endofíticas
também são capazes de promover o crescimento de
plantas (Figura 4) (Bandara et al., 2006; Ting et al.,
2008; Silva et al., 2012; Hidayati et al., 2014; Ran-
gjaroen et al., 2015), que em grande parte se dá
pela produção de fitohormônios como o ácido indol
acético (Piromyou et al., 2011; Arun et al., 2012.),
ácido abscísico, ácido giberélico, citocininas (Feng
et al., 2006), fixação de nitrogênio, solubilização de
fosfato, produção de íons de amônio (Nigris et al.,
2013), mineralização de fosfato orgânico (Jha e Ku-
mar, 2007), fornecimento de vitaminas essenciais,
aumento da captação e solubilização de minerais,
ajuste osmótico, regulação dos estômatos e modifi-
cação da morfologia radicular, indução da produção
de ácido acético e produção de sideróforos (Ryan et
al., 2008), o que torna esses agentes agronomica-
mente relevantes para fins de desenvolvimento de
biofertilizantes, sendo eles uma alternativa aos insu-
120 RAPP - Volume 24, 2016
Figura 4. Promoção de crescimento de plantas de arroz
com cinco dias de idade, em meio de cultura pobre. (A)
Tratamento controle (Água) apresentando redução no
crescimento de plântulas de arroz. (B) Tratamento com o
isolado endofítico 209, demonstrando o potencial da bac-
téria em promover o crescimento de plântulas de arroz.
Foto: Pozzebon, 2014.
mos químicos utilizados em grande escala em lavou-
ras agrícolas.
Micro-organismos capazes de solubilizar fos-
fato podem ser uma alternativa economicamente vi-
ável para o produtor, pois reduzem os custos com in-
sumos na lavoura. O principal mecanismo envolvido
na solubilização de fósforo é a produção e liberação
de ácidos pelas bactérias, como o ácido láctico, ita-
cônico, isovalérico, isobutírico e acético (Vazquez et
al., 2000; Dias et al., 2009). Gêneros como Bacillus,
Pseudomonas, Enterobacter, Erwinia e Ochrobac-
trum, podem solubilizar complexos de fosfato pela
secreção de ácidos orgânicos. Uma vez na forma
solúvel, esses fosfatos podem ser absorvidos pela
bactéria ou pela planta (Costa, 2012) e atuar na
promoção do crescimento vegetal (Babalola, 2010).
Bacillus pumilus e Acinetobacter calcoaceticus são
bactérias endofíticas capazes de solubilizar fosfato
e promover o crescimento de plantas (Kang et al.,
2009; Pérez-García et al., 2011). Estudos in vitro com
plantas de ervilha (Pisum sativum L.), realizados por
Tariq et al. (2014) demonstraram o potencial de bac-
térias endofíticas em promover o crescimento de
plantas, onde seis isolados foram capazes de produ-
zir ácido indol acético, dois foram capazes de fixar
nitrogênio e nove solubilizaram fósforo inorgânico.
Gêneros Acinetobacter, Azospirillum, Azo-
tobacter, Pseudomonas e Bacillus, produzem fito-
hormônios como o ácido indol acético, ácido indol
butírico, giberelinas, citocininas, octadecanóides, e
compostos que mimetizam a ação dos jasmonatos
(Forchetti et al., 2007; Kang et al., 2009; Pérez-García
et al., 2011). Ji et al. (2014) estudaram a promoção
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
de crescimento vegetal induzido por bactérias en-
dofíticas e observaram que alguns de seus isolados
foram capazes de produzir auxina, sideróforos e so-
lubilizar fosfato. Além disso, esses autores demons-
traram que bactérias endofíticas diazotróficas autóc-
tones de arroz, proporcionaram maior crescimento
das plantas e acréscimo no peso seco, bem como
promoveram efeitos antagônicos contra fungos pa-
togênicos. Quecine et al. (2012) também verificaram
acumulação de biomassa em plantas de cana-de-
-açúcar tratadas com a endofítica Pantoea agglome-
rans, tanto da parte aérea quanto da raiz.
Bactérias promotoras de crescimento vege-
tal, como as dos gêneros Pseudomonas, Bacillus, Ar-
throbacter, Enterobacter e Agrobacterium (Yuan et
al., 2010), produzem compostos indólicos, como áci-
do indol acético, que quando sintetizado e secretado
pela bactéria, age como hormônio de crescimento
vegetal e induz o aumento das raízes e folhas das
plantas (Babalola, 2010; Hayat et al., 2010). Burkhol-
deria vietnamiensis foi uma das primeiras espécies
desse gênero, relatada como fixadora de nitrogênio.
Entretanto, outras espécies, como Burkholderia bal-
dani e Burkholderia unamae também são capazes
de desempenhar a função de promotoras de cres-
cimento de plantas através da fixação de nitrogênio
(Govindarajan et al., 2006). Gluconacetobacter, Ace-
tobacter, Azoarcus, Herbaspirillum e Methylobac-
terium são conhecidas como bactérias endofíticas
capazes de fixar biologicamente o nitrogênio em
plantas (Donato et al., 2005; Balachandar et al.,
2006).
Bactérias endofíticas e a fitorremediação
Compostos orgânicos, liberados no ambiente
por diversas atividades humanas, podem causar sé-
rios danos ao meio ambiente devido a sua toxicida-
de, natureza hidrofóbica e persistência por um longo
período de tempo. A presença de compostos orgâ-
nicos, tais como hidrocarbonetos poliaromáticos,
fenóis, clorofenóis, benzeno, herbicidas e pesticidas,
inibem o crescimento e as atividades metabólicas
de micro-organismos no solo, mesmo em pequenas
concentrações (Kukla et al., 2014).
Métodos físicos e químicos tradicionais para
a recuperação do solo e água contaminados por
poluentes orgânicos são geralmente caros e destru-
tivos ao ambiente. Neste sentido, existem muitos
agentes biológicos que remediam tais contamina-
RAPP - Volume 24, 2016
ções (Esposito-Polesi, 2011), sendo que o uso de
plantas para a recuperação de ambientes poluídos,
processo chamado de fitorremediação, pode ser um
modo eficiente e de baixo custo, além de não causar
danos adicionais ao ambiente (Gerhardt et al., 2009;
Marques et al., 2011; Phillips et al., 2012).
Embora as plantas disponíveis para a fitorre-
mediação tenham se adaptado a locais poluídos, a
presença de poluentes orgânicos no solo geralmen-
te reduzem o desenvolvimento normal da planta e,
eventualmente, a eficácia da fitorremediação. A in-
teração das plantas com bactérias endofíticas pode
superar essas limitações quando estas bactérias fo-
rem capazes de degradar os poluentes, promover o
crescimento da planta, ou ambos (Peng et al., 2013;
Glick, 2010; Khan et al., 2013). Assim, uma das for-
mas estudadas para as plantas superarem as condi-
ções adversas do solo são as associações simbióticas
com micro-organismos, sendo um método menos
oneroso e ecologicamente correto (Newman e Rey-
nolds, 2005; Postma et al., 2007; Zhang et al., 2011).
Sob o ponto de vista da fitorremediação, nos últimos
anos, tem havido grande interesse em comunidades
endofíticas, principalmente na interação de micro-
-organismos da parte aérea com as raízes e com o
solo (Mengoni et al., 2009; Li et al., 2011).
Genes que codificam enzimas envolvidas na
degradação de hidrocarbonetos têm sido descritos
em uma ampla gama de bactérias endofíticas per-
tencentes aos gêneros Arthrobacter, Bacillus, Ente-
robacter, Pantoea e Pseudomonas. Além disso, tem
sido observado que plantas que crescem em solos
contaminados por petróleo podem recrutar bacté-
rias endofíticas que possuem genes capazes de de-
gradar hidrocarbonetos (Andria et al., 2009; Khan et
al., 2013).
A importância do sinergismo planta-endófito
na remoção dos poluentes orgânicos do solo e da
água ainda é subestimada. Como muitas bactérias
endofíticas tem se mostrado eficazes na degradação
de poluentes, em atividades de promoção de cres-
cimento ou em ambos, um melhor conhecimento
dos mecanismos que regulam estas atividades deve
ser explorado a fim de melhorar a fitorremediação
de poluentes orgânicos presentes no solo e na água
(Afzal et al., 2014).
Por outro lado, o papel das bactérias endofí-
ticas para melhorar a fitorremediação de metais pe-
sados em solos contaminados tem sido revisado em
121
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
vários artigos. A contaminação de metais pesados
em solos é um dos maiores problemas ambientais
devido à ação antropogênica, sendo que excessivas
concentrações de cobre (Cu) possuem significante
risco a saúde pública e ao ecossistema (Rajkumar et
al., 2009a; Ma et al., 2011a; Sessitsch et al., 2013).
As associações entre plantas e micro-orga-
nismos metal tolerantes aumentam a absorção de
metais e o crescimento das plantas, além do uso si-
nérgico de plantas e micro-organismos ser favorável
para a descontaminação de solos metálicos (Jing et
al., 2007; Glick, 2010; Ma, 2011b). Estes micro-orga-
nismos contribuem para a redução da fitotoxicidade
através de mecanismos de biossorção e bioacumu-
lação, haja vista que as células bacterianas apresen-
tam elevada superfície de contato e desta forma, são
capazes de absorver maior quantidade de metais pe-
sados do que os componentes inorgânicos do solo
(Ma et al., 2011b).
Estudos realizados por Zaidi et al. (2006),
Madhayian et al. (2007) e Kumar et al. (2009), re-
portaram que mecanismos de biossorção e/ou bio-
acumulação bacterianos, associados aos fatores re-
lacionados à promoção de crescimento de plantas
(incluindo a atividade de ACC deaminase e fitohor-
mônios) foram responsáveis por um melhor cresci-
mento das plantas em solos contaminados por me-
tais, comprovando essa teoria. Dessa forma, o uso
de micro-organismos associados às espécies vege-
tais, ajudam a promover a utilização mais eficiente
das plantas nas práticas de fitorremediação, através
do aproveitamento da sua flora bacteriana natural
(Mengoni et al., 2009).
Diversos estudos revelam que as plantas hi-
peracumuladoras de metais são colonizadas simul-
taneamente por um elevado número de diferentes
bactérias endofíticas, dentre as quais pode-se citar
as do gênero Methylobacterium, que são tolerantes
aos metais Níquel (Ni), Cádmio (Cd), Cobalto (Co),
Zinco (Zn) e Cromo (Cr) (Idris et al., 2006; Mengo-
ni et al., 2009), e as dos gêneros Bacillus, Acineto-
bacter e Pantoea tolerantes a Cu (Sun et al., 2010;
Zhang et al., 2011). Além disso, gêneros como Ba-
cillus, Brevibacillus, Burkholderia, Curtobacterium,
Herbaspirillum, Klebsiella, Leifsonia, Methylobacte-
rium, Microbacterium, Micrococcus, Paenibacillus,
Pseudomonas, Serratia e Staphylococcus também
apresentaram genes responsáveis pela resistência a
metais pesados (Rajkumar et al., 2009a; 2009b).
122 RAPP - Volume 24, 2016
Bactérias endofíticas, portanto, tem se cons-
tituído em uma fonte mais confiável de biocenose
natural do que rizobactérias na degradação de me-
tais pesados, devido à sua íntima associação com as
plantas. A exploração das interações bactéria-plan-
ta-metal pode resultar na promoção do estabeleci-
mento, crescimento e desenvolvimento da planta
e além disso, desempenham um papel significativo
nas aplicações sustentáveis de baixo custo ​​de fitor-
remediação de metais em solos contaminados. No
entanto, uma compreensão dos mecanismos que
permitem que bactérias endofíticas interajam com
as plantas hospedeiras em solos contaminados com
metais pesados são essenciais para otimizar as apli-
cações biotecnológicas das eficientes relações plan-
ta-bactéria (Ma et al., 2016).
Bactérias endofíticas – perspectivas para o futuro
Evidencia-se que o uso de bactérias endofíti-
cas na agricultura e em outras atividades econômi-
cas pode ser melhorado pela compreensão desses
micro-organismos com seus hospedeiros. É fato que
as possibilidades de aplicações de agentes endofíti-
cos tem crescido cada vez mais, pois estudos com
essa temática tem se intensificado nos últimos anos.
Inicialmente o grande interesse com relação ao po-
tencial de bactérias endofíticas no controle biológico
e/ou promoção de crescimento de plantas alavancou
os estudos, pois desde o princípio vislumbrava-se al-
ternativas ecologicamente corretas, principalmente
com potencial para a redução da demanda contínua
de insumos químicos e agrotóxicos necessários atu-
almente para manter a produtividade das lavouras,
reduzindo assim, os custos de produção para o pro-
dutor rural.
Este aumento na gama de possibilidades de
utilização das bactérias endofíticas se deve muito ao
desenvolvimento de técnicas modernas de estudo,
principalmente as técnicas de detecção e identifica-
ção de micro-organismos independentes de cultivo,
com base no conteúdo genético contido no DNA
ou RNA dos mesmos. Como muitos procariotos de
amostras ambientais são recalcitrantes, ou seja, não
podem ser isolados ou cultivados em condições de
laboratório, os métodos moleculares independen-
tes de cultivo têm sido amplamente utilizados para
caracterizar comunidades microbianas in situ. Para
a identificação de bactérias, geralmente se tem utili-
zado a sequência do gene que codifica a porção 16S
 Bruna Canabarro Pozzebon e Juliano dos Santos (115-129)
do rRNA; porém para estudos de caracterização de
comunidades microbianas com capacidades fisioló-
gicas especializadas, se tem utilizado a comparação
de sequências de uma série de genes que codificam
proteínas específicas (Ikeda, 2010; Reinhold-Hurek,
2011).
Além do controle biológico e promoção de
crescimento de plantas, outras possibilidades de
utilização das bactérias endofíticas tem ganhado im-
portância nos últimos anos. Muitas delas possuem
metabolismo capaz de degradar as mais variadas
substâncias, sendo que seu uso na remediação de
ambientes contaminados merece uma atenção es-
pecial, devido à importância para a recuperação de
solos degradados, como foi enfatizado anteriormen-
te nesta revisão. Em um planeta saturado onde sus-
tentabilidade é a palavra-chave para um desenvol-
vimento que não comprometa os recursos naturais,
principalmente água e solo, as bactérias endofíticas
surgem, portanto, como interessante alternativa.
No campo da biotecnologia, podemos sa-
lientar que as bactérias, juntamente com os fungos,
têm sido bastante utilizadas como produtoras de
diferentes substâncias de interesse econômico, tais
como enzimas, antibióticos, vitaminas, aminoácidos
e esteroides (Santos e Varavallo, 2011), que podem
ser explorados na agricultura, na medicina e na in-
dústria (Tejesvi et al., 2007). Um exemplo disto é o
trabalho desenvolvido por Carrim et al. (2006), que
selecionaram enzimas de interesse biotecnológico a
partir de bactérias endofíticas isoladas de Jacaran-
da decurrens Cham. Dez espécies de bactérias foram
isoladas e identificadas; todas apresentaram ativida-
de enzimática, com maior predominância de ativida-
de proteolítica e amilolítica, seguidas das atividades
lipolítica e esterásica. Essas enzimas, produzidas por
diversos microrganismos, apresentam potencial de
aplicabilidade em diversos campos, como no pro-
cessamento de alimentos, na fabricação de deter-
gentes, tecidos, produtos farmacêuticos, na terapia
médica e na biologia molecular (Carrim et al., 2006).
Portanto, esta é apenas a ponta do grande
“iceberg”, que representa os estudos a respeito das
bactérias endofíticas. Evidências sugerem que bacté-
rias endofíticas tem um elevado potencial na produ-
ção de uma vasta gama de metabólitos, muitos deles
ainda não descritos. No entanto, a concentração e as
circunstâncias em que estes metabólitos são produ-
zidos ainda não são bem compreendidas, mas a revo-
RAPP - Volume 24, 2016
lução genômica juntamente com o desenvolvimento
constante de técnicas analíticas certamente vai ace-
lerar a descoberta destes metabólitos e possibilitar
a detecção destes em circunstâncias específicas sob
condições naturais (Brader et al., 2014). Além disso,
estudos sobre os mecanismos pelos quais as bacté-
rias endofíticas se estabelecem em tecidos vegetais
em número elevado, e como eles contornam as res-
postas de defesa do hospedeiro também estão pro-
gredindo. Combinações de estudos sobre a comuni-
dade bacteriana, análises mutacionais de bactérias
e de plantas hospedeiras, análises comparativas do
genoma e metagenoma facilitarão a evolução neste
fascinante campo de pesquisa.
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129
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)

EFEITO DAS MUDANÇAS CLIMÁTICAS NO

SISTEMA DE DEFESA DAS PLANTAS
Mathias Ferrari Rockenbach1; Mateus Brusco de Freitas1
e Marciel João Stadnik1

RESUMO
As mudanças climáticas previstas para este século, relacionadas direta-
mente com o aquecimento atmosférico global, consistem em um dos maiores
desafios na história da agricultura. Nesse contexto, incrementos nos níveis de
gases de efeito estufa tais como o dióxido de carbono (CO2) e ozônio (O3), são
capazes de provocar aumentos significativos na temperatura global e na radia-
ção solar, que podem afetar os sistemas de defesa das plantas tornando-as mais
suscetíveis ao ataque por patógenos. Neste capítulo, abordam-se os principais
sistemas de defesa das plantas e como eles são afetados pela exposição a níveis
elevados de CO2, O3 e radiação ultravioleta, assim como por altas temperaturas.
Por fim, discute-se também o efeito direto que as mudanças climáticas podem
ter sobre os patógenos e as perspectivas futuras dentro dos cenários ambientais
previstos para as próximas décadas.

Introdução condições ambientais. Um advento inesperado na

Durante a sua evolução, as plantas vêm se
adaptando gradativamente a novos ambientes e
foram desenvolvendo sistemas de defesa contra di-
ferentes tipos de estresses bióticos e abióticos. Isso
tem permitido a sua sobrevivência aos constantes
desafios impostos por patógenos das mais variadas
naturezas, bem como a oscilações dos fatores am-
bientais ao longo dos últimos 450 - 500 milhões de
anos (Raven & Edwards, 2001; Bennici, 2008; Rubins-
tein et al., 2010). Neste cenário, as plantas terrestres
tiveram que desenvolver diversas adaptações mor-
fológicas/estruturais, assim como mecanismos fisio-
lógicos, que as têm possibilitado enfrentar constan-
temente a espécies patogênicas (Thaler et al., 2012).
Em conjunto, estas estratégias conformam sistemas
de defesa bem especializados capazes de atuar fren-
te ao ataque por patógenos.
Os sistemas de defesa das plantas podem,
contudo, ser afetados por alterações drásticas nas
1
Laboratório de Fitopatologia, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal de Santa Catarina, Rodovia Admar Gonzaga 1346,
CEP 88034-001, Itacorubi, Florianópolis, Brasil.
evolução das espécies é aquele relacionado à inter-
ferência do homem no meio ambiente. Neste con-
texto, o clima vem sofrendo mudanças significativas
desde os tempos pré-industriais, devido principal-
mente às atividades antrópicas que geram aumen-
tos dos chamados gases de efeito estufa (dióxido de
carbono – CO2 – e ozônio – O3). Estas mudanças vêm
contribuindo diretamente para o aumento da tem-
peratura global, causando diversos impactos climáti-
cos sobre os oceanos e continentes. De fato, as pre-
dições para o futuro não são alentadoras na medida
em que todos os modelos preveem para os próximos
cem anos, aumentos nos níveis dos gases de efeito
estufa e da temperatura global (Araujo et al., 2005;
Pachauri & Reisinger, 2007). Assim, caso não sejam
tomadas as medidas necessárias, estas mudanças
poderão trazer futuramente consequências drásti-
cas para a produção agrícola mundial (Howden et al.,
2007).

130 RAPP - Volume 24, 2016

 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)

Este capítulo descreve os principais siste-
mas de defesa das plantas e como os incrementos
na concentração ambiental dos principais gases de
efeito estufa, CO2 e O3, podem afetar as respostas
dos hospedeiros ao ataque por patógenos. Também
serão expostos os principais resultados associados
às interferências que a temperatura e radiação UV
podem exercer sobre tais sistemas de defesa.
Sistema de defesa das plantas
A ativação dos sistemas de defesa nas plan-
tas em resposta ao ataque patogênico é determina-
da pela especificidade da interação patógeno-hos-
pedeiro. De forma geral, existem classificados dois
tipos de sistema de defesa em plantas. O primeiro,
denominado sistema de defesa basal ou inato, é
ativado pela interação entre proteínas receptoras
(PRRs) expressadas pelo hospedeiro, e padrões mo-
leculares associados aos patógenos ou micróbios
(PAMPs ou MAMPs, respectivamente) (Jones & Dan-
gl, 2006). As interações PAMPs/MAMPs – PRRs in-
duzem uma série de reações a nível molecular nas
células do hospedeiro que levam rapidamente a um
estado de resistência basal, conhecida como “imuni-
dade disparada por PAMPs” (PTI – PAMPS-triggered
immunity) (Ingle et al., 2006). O segundo sistema de
defesa é definido como sistema de defesa “gene a
gene” ou mediado por genes de resistência (R), e é
ativado pelo reconhecimento específico entre efeto-
res de avirulência liberados pelos patógenos e pro-
teínas do hospedeiro conhecidas como proteínas R
(codificadas pelos genes R). As respostas mediadas
pelas interações entre efetores de avirulência e as
proteínas R induzem no hospedeiro um estado de
resistência conhecido como “imunidade disparada
por efetores” (ETI – Effector-triggered immunity) (In-
gle et al.,2006; Jones & Dangl, 2006) (Figura 1).
Vários mecanismos e componentes molecu-
lares envolvidos no disparo da PTI e ETI têm sido es-
clarecidos nos últimos anos. Os receptores proteicos
de reconhecimento de PAMPs/MAMPs são classifi-
cados como proteínas transmembrana do tipo qui-
nase (RLKs- receptors-like kinases). Estas proteínas
estão constituídas por um domínio extracelular de
reconhecimento aos PAMPs/MAMPs, um domínio
transmembrana, e um domínio quinase intracelular
(Greef et al., 2012). Um exemplo bem estudado des-
te tipo de receptores é o receptor de flagelina (flg22)
FLS2 (Flagellin sensing2) (Ali & Reddy, 2008). FLS2 é
capaz de interagir com várias proteínas quinases da

Figura 1. Sistemas de defesa disparados pelo ataque de patógenos em plantas. A interação PAMPs/MAMPs-proteínas
RLKs promove a expressão de genes e proteínas relacionadas à patogenicidade (PRs), induzindo um estado de resis-
tência basal denominada imunidade disparada por PAMPs (PTI) (1). Efetores liberados pelos patógenos durante a PTI
podem atuar sobre alvos específicos do hospedeiro, induzindo um estado de suscetibilidade disparada por efetores
(ETS) (2). O reconhecimento específico dos efetores patogênicos por parte das proteínas R, expressas no hospedeiro,
é capaz de reverter a ETS e induzir resistência sistêmica denominada imunidade disparada por efetores (ETI) (3). A ETI
está geralmente associada à reação de hipersensibilidade (RH), morte celular programada (MCP) e resistência sistêmica
adquirida (SAR).

RAPP - Volume 24, 2016 131

 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
família SERK (Somatic embriogenesis receptor kina-
se) tais como SERK1, SERK2, SERK5, BKK e SERK3/
BAK1 (BR1-associated kinase 1) (Ali & Reddy, 2008).
O complexo FLS2-BAK1 é capaz de fosforilar várias
proteínas quinases, tais como BIK1, BIR1 e KAPP, in-
duzindo uma cascata de fosforilações intracelulares
que promovem a expressão de genes e proteínas
associados à PTI (Lu et al., 2010; Roux et al., 2011).
Outros exemplos são os receptores EFR (EF-Tu re-
ceptor), PEPR1 (Pep1 receptor 1), CERK1 (Chitin eli-
citor receptor kinase 1, proteína receptora da família
LysM), e Xa21 (Wan et al., 2008; Lee et al., 2009; Pos-
tel et al., 2010; Roux et al., 2011). Entretanto, vários
componentes moleculares das vias de sinalização
aparentam atuar em vias comuns a diferentes
receptores de reconhecimento de PAMPs/MAMPs
(Greef et al., 2012). Estas interações entre diferentes
vias de sinalizações determinam, em última instân-
cia, a especificidade das respostas a patógenos bio-
tróficos ou necrotóficos (Roux et al., 2011).
Os eventos iniciais da PTI estão associados a
várias respostas celulares e moleculares no hospe-
deiro. Estas respostas incluem variações na permea-
bilidade iônica da membrana plasmática, a produção
de espécies reativas de oxigênio (EROs), a produção
de óxido nítrico (ON), a síntese de etileno (ET), áci-
do salicílico (AS) e/ou ácido jasmônico (AJ), e a ex-
pressão de genes e proteínas R (Ingle et al., 2006).
Incrementos na permeabilidade da membrana plas-
mática e dos níveis intracelulares do íon Ca2+ têm
sido associados à ativação das vias de sinalizações
mediadas pelas MAPKs (Mitogen-activated protein
kinases), à produção de EROs dependentes de Ca2+
e às reorganizações do citoesqueleto durante o
disparo da Morte Celular Programada (MCP), (Ku-
rusuet al., 2005, 2011; Higaki et al., 2011). A pro-
dução apoplástica de EROs (superóxido e peróxido
de hidrogênio) produzido pelas NADPH-oxidases da
membrana plasmática (NOX1) e peroxidases do tipo
III da parede celular (PRX33 e PRX34), assim como
o EROs produzido por outras organelas (mitocôn-
drias, cloroplastos e peroxissomos) são essenciais
para o disparo da reação de hipersensibilidade (RH)
e da resistência sistêmica adquirida (SAR) (Nanda et
al., 2010; Torres, 2010; O´Brien et al., 2012). PAMPs
constituídos por lipopolissacarídeos (LPS) são capa-
zes de induzir a produção e acúmulo de ON, o qual
também têm sido associado ao disparo da RH e ex-
pressão de genes R (Zeidler et al., 2004; Ingle et al.,
132 RAPP - Volume 24, 2016
2006). O AS, um composto fenólico, atua na expres-
são de várias proteínas relacionadas à patogenici-
dade (proteínas PR), tais como enzimas detoxifican-
tes e antioxidantes como a glutationa-S-transferase
(GST) e a glicosil-transferases (GTs) (Nawrath & Me-
traux, 1999; Edwards et al., 2000; Wang et al., 2002).
A RH e o estabelecimento de estados de resistência
a nível sistêmico também envolvem acúmulos de AS,
tanto a nível local quanto a nível distal ao sítio de
infecção (Heath, 2000). O AS também possui funções
regulatórias relacionadas com a indução ou inibição
da síntese de outros compostos, como por exemplo,
promovendo a síntese de ET e inibindo a síntese do
AJ (Vlot et al., 2009).
Várias das sinalizações moleculares associa-
das à PTI parecem ser comuns à ETI, o que demons-
tra a existência de uma regulação mutua entre o
sistema de defesa inato e o mediado por genes R.
Mesmo assim, a ETI é disparada posteriormente à
PTI devido a um reconhecimento específico entre as
proteínas R e efetores patogênicos específicos, sen-
do estes liberados pelos patógenos durante a colo-
nização do hospedeiro (Howden & Huitema, 2012).
Existem identificados e classificados vários tipos de
efetores patogênicos, sendo um dos mais conheci-
dos o sistema de secreção do tipo III (TTSS). Os efe-
tores patogênicos são capazes de atuar sobre alvos
(proteínas) específicos do hospedeiro de forma dire-
ta ou indireta, interferindo em vias de sinalizações
(p. ex. MAPKs) e induzindo modificações sobre esses
alvos que promovem um estado de suscetibilidade
disparada por efetores (ETS) (Figura 1). No caso em
que certos efetores sejam especificamente reco-
nhecidos por proteínas R, estas induzem a nível no
hospedeiro um estado de imunidade disparado por
efetores (ETI) (Howden & Huitema, 2012).
Os principais fatores moleculares envolvidos
no disparo da ETI, tais como os genes e as proteínas
R, vêm sendo amplamente estudados nas plantas. Os
genes R são classificados segundo as características
estruturais das proteínas R para os quais codificam
(Richter & Ronald, 2000; Lehman, 2002). Em geral,
as proteínas R atuam a nível citoplasmático e são
constituídas basicamente por um domínio N-termi-
nal NBS (Nucleotide binding site) de união a trifos-
fato de adenosina (ATP) ou trifosfato de guanosina
(GTP) e, um domínio C-terminal LRR (Leucine rich re-
peats) rico em leucinas. Sua classificação é baseada
pela homologia estrutural do domínio NBS com pro-
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
teínas do sistema imune de vertebrado, tais como
proteínas do tipo Toll e Interleucina-1. Desta forma,
o domínio NBS pode ser classificado como do tipo
TIR (pelo domínio tipo Toll e IL-1), ou CC (Coiled coil
ou “espiral enrolada”) (Tameling & Takken, 2008) (Fi-
gura 1). O domínio N-terminal das proteínas R possui
funções de reconhecimento de efetores patogênicos
ou proteínas do hospedeiro sujeitas ao ataque por
tais efetores. Em outros casos este domínio possui
motivos de união ao DNA, atuando como regulado-
res da transcrição gênica.
Durante a ETI é frequente observar o estabe-
lecimento de um estado de resistência a nível sistê-
mico no hospedeiro conhecido como SAR. Este tipo
de resistência opera mais tardiamente em relação à
PTI, podendo estar associada à RH e MCP (Coll et al.,
2011; Higaki et al., 2011). Estas respostas envolvem a
morte celular no sítio de infecção poucas horas após
o contato com o patógeno (durante a PTI), poden-
do ocorrer desde uma única célula a extensas áreas
necróticas que limitam a colonização dos patógenos
(Holub et al., 1994; Lam et al., 2001). Este fato faz
com que este tipo de defesa seja efetivo principal-
mente contra patógenos biotróficos ou hemibiotró-
ficos, mas não tanto para os necrotróficos (Belkhadir
et al., 2004; Glazebrook, 2005; Jones & Dangl, 2006).
A resistência sistêmica também pode ser induzida
por indutores químicos ou até mesmo por espécies
simbiontes, sendo conhecida nestes casos como re-
sistência sistêmica induzida (ISR).
Em consequência da ativação das complexas
vias de sinalização dos sistemas de defesa das plan-
tas, são disparados vários mecanismos que, quando
eficientes, conferem à planta resistência completa
a determinados patógenos. Apesar de estarem inti-
mamente relacionados, os mecanismos de defesa de
plantas podem ser classificados para fins didáticos
como estruturais ou bioquímicos (Agrios, 2005). Os
mecanismos de defesa estruturais podem ser obser-
vados a nível histológico ou celular e envolvem es-
truturas que podem estar presentes nas plantas até
mesmo antes do ataque por patógenos (p. ex. pêlos,
tricomas, espinhos e cutícula), ou serem induzidas
por ocasião do ataque (p. ex. papilas, caloses, tilo-
ses, halos, lignificações, camadas de cortiça e cama-
das de abscisão) (Agrios, 2005; Taiz & Sieger, 2009).
Por outro lado, os mecanismos de defesa bioquími-
cos envolvem proteínas e moléculas do metabolis-
mo primário e secundário com atividades biológicas
RAPP - Volume 24, 2016
específicas ou até mesmo tóxicas aos patógenos
(Bowles, 1990). Enzimas quitinases e glucanases, são
proteínas PR expressas especificamente pelas plan-
tas após o ataque por patógenos. As quitinases são
enzimas hidrolíticas capazes de degradar ligações gli-
cosídicas da molécula de quitina, o principal compo-
nente da parede celular fúngica. As glucanases são
enzimas hidrolíticas de polímeros de glicose unidos
por ligações alfa ou beta (e. ex. celulose), as quais
são degradadas pelas enzimas alfa e beta-glucana-
ses, respectivamente. Os produtos hidrolisados por
ambas as enzimas podem atuar como elicitores da
PTI e RH (Agrios, 2005). Alguns compostos relacio-
nados à resistência podem ser sintetizados constitu-
tivamente pelas plantas (p. ex. compostos fenólicos,
alcaloides, lectinas e inibidores protéicos) ou ainda
terem sua produção elevada após o ataque por pató-
genos (p. ex. ET, AS e AJ) (Collinge et al., 1993; Knud-
sen et al., 1993; Pichersky et al., 2002; Chehab et al.,
2008; Taiz & Sieger, 2009).
Efeito do CO2 na defesa das plantas
A elevação na concentração atmosférica de
CO2 pode induzir alterações metabólicas nas plantas
capazes de interferir nas respostas ao ataque por pa-
tógenos (Ainsworth et al., 2002; Chakraborty & Dat-
ta, 2003; Kobayashi et al., 2006, Yáñez-López et al.,
2012). Em geral, os incrementos na concentração de
CO2 aumentam a resistência de vários hospedeiros
vegetais a diversos patógenos, reduzindo a incidên-
cia ou severidade de certas doenças (Hibberd et al.,
1996; Chakraborty et al., 2000; Jwa & Walling, 2001;
Karnosky et al., 2002; Chakraborty & Datta, 2003;
Runion, 2003; Pangga et al., 2004; McElrone et al.,
2005; Kobayashi et al., 2006; Strengborn & Reich,
2006; McElrone et al., 2010; Runion et al., 2010; Shin
& Yun, 2010; Ghini et al., 2014; Li et al., 2015) (Tabela
1).
Por exemplo, plantas de bordo vermelho
(Acer rubrum) expostas a uma concentração de 200
ppm maior que as concentrações atmosféricas atu-
ais de CO2 (340-350 ppm), apresentaram menor inci-
dência e severidade de mancha foliar causadas por
Phyllosticta minima. Nessas condições, a incidência e
severidade da mancha foliar foram reduzidas aproxi-
madamente em 15% e 27%, respectivamente. Além
disso, ocorreu uma redução na condutância estoma-
tal na ordem de 21% a 36%. Desta forma, a redução
da doença poderia estar associada com a redução
133
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
na condutância estomatal e alterações na compo-
sição química das folhas provocadas pelo aumento
na concentração ambiental de CO2. É destacável que
essas plantas também tiveram um aumento de 15%
nos compostos fenólicos totais, 14% nos níveis de ta-
ninos e 20% da proporção C:N (carbono:nitrogênio)
(McElrone et al., 2005). Curiosamente, a redução da
abertura e condutância estomatal também foram
observadas em plantas de tomate (Solanum lycoper-
sicum) cultivadas em ambiente com 800 ppm de CO2.
Nessas condições, essas plantas mostraram-se mais
resistentes à infecção por Pseudomonas syringae pv.
tomato (Li et al., 2015). Plantas de Solidago rigida
expostas a concentrações de aproximadamente 900
ppm de CO2 tiveram reduções de até 57% na incidên-
cia de manchas foliares provocadas por espécies de
Cercospora e Septoria (Strengborn & Reich, 2006).
Plantas de pinheiro (Pinus taeda) e carvalho (Quercus
robur) expostas a 700 ppm de CO2, inoculadas com
Fusarium circinatum e Cronartium quercum, apre-
sentaram reduções na incidência de cancro e ferru-
gem, respectivamente (Runion et al., 2010). Plantas
de eucalipto cultivadas em concentrações elevadas
de CO2 (508 a 700 ppm) e inoculadas com Puccinia
psidii, apresentaram reduções no número de pústu-
las de ferrugem por folha, uredósporos por pústula
e área abaixo da curva de progresso da doença (AA-
CPD) (Ghini et al., 2014). Além disso, o crescimento
destas plantas foi 23% maior em comparação ao das
plantas em concentrações de CO2 atuais.
Incrementos nas concentrações de CO2 tam-
bém podem afetar a fisiologia, germinação dos es-
poros ou a esporulação dos patógenos, reduzindo a
incidência de doença em determinados hospedei-
ros. Por exemplo, em plantas de cevada submetidas
a 350 e 700 ppm de CO2 não foram observadas dife-
renças na germinação de conídios de Blumeria gra-
minis. Contudo, o número de conídios que progrediu
a formar colônias foi menor a 700 ppm do que 350
ppm de CO2 (Hibberd et al., 1996). A exposição de
plantas de Stylosanthes scabra a 700 ppm de CO2 re-
duziu a severidade de antracnose causada por Colle-
totrichum gloeosporioides. Tal redução parece estar
associada à inibição da germinação conidial, assim
como o aumento do período de incubação e redu-
ção da agressividade do patógeno (Chakraborty et
al., 2000). Em outro trabalho, o período de latência
(tempo de esporulação) dos patógenos fúngicos Cro-
134 RAPP - Volume 24, 2016
nartium quercum e Fusarium circinatum aumentou
em mudas de carvalho expostas a 700 ppm de CO2
(Runion et al., 2010).
Vários trabalhos vêm fornecendo evidências
de variações bioquímicas que podem ocorrer em
plantas expostas a concentrações de CO2 superiores
às ambientais (McElrone et al., 2005; Plessl et al.,
2005; Matros et al., 2006; Li et al., 2008). Em folhas
e raízes de plantas de fumo expostas a 1000 ppm de
CO2 foram observados acúmulos de fenilpropanói-
des e incrementos na atividade da enzima fenilala-
nina amônia-liase (FAL) (Matros et al., 2006). No en-
tanto, não foram detectadas diferenças nos níveis de
AS e proteínas PR nessas mesmas condições. Estas
plantas apresentaram maior resistência ao virus Y da
batata, que foi relacionado com o incremento nos
níveis de fenilpropanóides induzido por essas con-
dições ambientais (Matros et al., 2006). Por outro
lado, plantas de cevada cultivadas em 700 ppm de
CO2 mostraram incrementos na proporção C:N e nos
teores de amido, assim como maior resistência ao
patógeno Drechslera teres (Sacc.) Shoemaker (Pless-
let al., 2005).
Experimentos realizados em OTC (Open-top
chamber) e FACE (Free-air CO2 enrichment) combi-
nando concentrações de CO2 e O3 têm permitido es-
tudar os efeitos simultâneos destes dois principais
gases de efeito estufa. Por exemplo, plantas de trigo
crescidas a 550 ppm de CO2 e 80 ppb de O3 sinteti-
zaram mais flavonas e compostos fenólicos totais na
sua maturação. Por outro lado, durante estágios fe-
nológicos iniciais essas plantas apresentaram níveis
menores de flavonas em relação às plantas cultiva-
das sob concentração ambiental de CO2 e O3 (Li et
al., 2008). Em outro experimento, observou-se que
plantas de soja submetidas a 550 ppm de CO2 e 66
ppb de O3 apresentaram reduções entre 33% e 66%
na severidade de doença provocada por míldio. Con-
tudo, essas plantas tiveram um aumento na severi-
dade de septoriose (Septoria glycines) quando foram
sometidas às mesmas concentrações de CO2 e O3
(Eastburn et al., 2010). Plantas de batata (Solanum
tuberosum) expostas a 700 ppm de CO2 e duas vezes
a concentração ambiental de O3 exibiram maior re-
sistência à requeima (Phytophtora infestans). Nessas
plantas as atividades de enzimas β-1,3 glucanases e
o conteúdo de açúcares solúveis foram significativa-
mente maiores (Plessl et al., 2007) (Tabela 1).
 Tabela 1. Resumo dos efeitos metabólicos em diferentes patossistemas e hospedeiros vegetais em resposta ao aumento da temperatura ambiental, dos principais gases
de efeito estufa (CO2 e O3) e da radiação ultravioleta.
Estresse Patossistema ou Hospedeiro
Acer rubrum / Hphyllosticta minima
Solidago rigida / Cercospora sp.
Nicotiana tabacum / Vírus Y da batata (PVY)
Hordeum vulgare / Drechslera teres
↑ CO2
Solanum tuberosum / Phytophtora infestans
Eucalyptus sp. / Puccinia psidii
Solanum lycopersicum / Pseudomonas syringae pv. tomato
Solanum lycopersicum / Botrytis cinerea
Triticum aestivum / Puccinia recondita
Triticum aestivum / Erysiphae graminis
Triticum aestivum / Septoria nodarum
Triticum aestivum/ Bipolaris sorokiniana
↑ O3 Picea abies / Rhizosphaera kalkhoffi
Nicotiana tabacum
RAPP - Volume 24, 2016
Petroselinum crispum
Lens culinaris
Hordeum vulgare / Blumeria graminis
Hordeum vulgare / Bipolaris sorokiniana
Arabidopsis thaliana / Pseudomonas syringae
↑ Temperatura
Solanum lycopersicum / Cladosporium fulvum
Nicotiana tabacum / TMV
Brassica oleracea
↑ Radiação UV Arabidopsis thaliana / Hyaloperonospora parasitica
Arabidopsis thaliana / Botrytis cinerea
135
Efeitos no hospedeiro Referência
Redução da abertura dos estômatos, aumentos nos níveis de compostos MacElrone et al., 2005.
fenólicos, taninos e fitoalexinas. Aumento da resistência.
Redução nos níveis de nitrogênio nos tecidos. Aumento da resistência. Strengborn & Reich, 2006.
Aumento nos níveis de fenilpropanóides. Aumento da resistência. Matros et al., 2005.
Aumento dos teores de amido e diminuição dos níveis de proteínas. Plessl et al., 2005.
Aumento da resistência.
Aumento na atividade de β -1,3-glucanase e dos níveis foliares de Plessel et al., 2007.
açúcares solúveis. Aumento da resistência.
Redução no número de pústulas por folha, esporos por pústula e Ghini et al., 2014.
AACPD. Aumento da resistência.
Redução da abertura e condutância estomatal. Aumento da resistência. Li et al., 2015.
Inibição da expressão de genes PR e de genes relacionados com a Tzortzakis et a., 2011.
transdução de sinais. Aumento da resistência.
Aumento de injúrias provocadas por O3. Aumento da resistência. von Tiedeman & Firsching, 2000.
Senescência foliar prematura, diminuição dos níveis de clorofila e
von Tiedeman et al., 1991.
carotenoides. Aumento da suscetibilidade.
Indução da expressão de enzimas envolvidas na síntese da lignina. Galliano et al., 1993.
Indução da expressão de enzimas β -1,3-glucanses e quitinase. Ernst et al., 1992.
Indução da expressão de enzimas envolvidas na síntese de composto Pasqualini et al., 2003.
fenólicos. Deposição de calose.
Indução da expressão de genes R. Eckey-Kaltenbach et al., 1997.
Aumento nos níveis de compostos fenólicos. Eckey-Kaltenbach et al., 1994.
Indução da expressão de enzimas lipoxigenase. Maccarone et al., 1997.
Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
Aumento da resistência. Mikkelsen et al., 2015.
Aumento da suscetibilidade. Mikkelsen et al., 2015.
Redução da resistência mediada por genes R Wang et al., 2009.
Aumento da resistência em plantas mutantes no gene SNC1 Zhu et al., 2010.
Inibição da expressão de genes associados à reação de de Jong et al., 2002.
hipersensibilidade.
Inibição da expressão de genes R e do acúmulo de ácido salicílico. Zhu et al., 2010
Indução da expressão de genes PR e síntese de fitoalexinas, Mewis et al., 2012.
flavonóides e terpenóides.
Aumento da resistência. Kunz et al., 2008.
Aumento da resistência. Demkura & Ballaré, 2012.
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
Efeito do O3
Plantas podem responder de modo dife-
rente ao ataque por patógenos quando são expos-
tas a concentrações elevadas de O3 de forma isola-
da, ou em conjunto com CO2. Vários trabalhos têm
demonstrado que a exposição a níveis de O3 superio-
res aos atuais (oscilantes entre 20 – 60 ppb) pode afe-
tar a fisiologia e os mecanismos de defesa ativados
pelas plantas em resposta ao ataque por patógenos
(Rosemann et al., 1991; Ernst et al., 1992; Eckey-Kal-
tenbach et al., 1994; Ernst et al., 1996; Sanderman,
1996; Eckey-Kaltenbach et al., 1997; Pell et al., 1997;
Sharma et al., 1997; Sanderman, 1998; Zinser et al.,
1998; Tiedemann & Firsching, 2000; Mikkelsen et al.,
2015).
Por exemplo, plantas de trigo (Triticum aesti-
vum L cv. Turbo) expostas a concentrações entre 61-
62 ppb de O3 durante uma hora diária por 4 meses
e logo inoculadas com Puccinia recondita f.sp. tritici,
apresentaram uma forte inibição da ferrugem foliar
provocada por esse patógeno (Tiedemann & Firs-
ching, 2000). Essas plantas apresentaram, contudo,
lesões necróticas de maneira antecipada (entre 2 a
4 semanas) em relação a plantas expostas a O3, mas
não inoculadas. A formação de biomassa, número
de grãos por plantas e a produção de grãos também
foram reduzidos nas plantas tratadas com O3 e inocu-
ladas com P. recondita (Von Tiedemann & Firsching,
2000). Por outro lado, o cultivo de plantas de ceva-
da (Hordeum vulgare) em concentrações elevadas
de O3 (60-90 ppb) reduziu em 50% a infecção pelo
oídio (Blumeria graminis) porém, incrementou em
130% os sintomas da mancha marrom causados por
Bipolaris sorokiniana (Mikkelsenen et al., 2015). Em
frutos de tomate (S. lycopersicum) expostos durante
6 dias a 50 ppb de O3 e posteriormente inoculados
com Botrytis cinerea, houve redução no desenvolvi-
mento de lesões provocadas por esse patógeno. Os
mesmos frutos apresentaram inibição da expressão
de genes PR codificantes para defensinas, enzimas
quitinases e β-glucanases, associados à resistência
(Tzortzakis et al., 2011).
Várias moléculas de fitoalexinas têm sido de-
tectada em hospedeiros vegetais após a exposição a
elevadas concentrações ambientais de O3. Por exem-
plo, plantas de pinheiro (Pinus sylvestris L.) submeti-
das a 200 ppb de O3 durante 4 horas apresentaram
uma maior síntese de estilbenos (pinosilvina- PS e
pinosilvina 3-metil éter – PSM) e concomitante,
136 RAPP - Volume 24, 2016
maior atividade da enzima estilbeno-sintase (Rose-
mann et al.,1991). Neste caso, enzimas que catali-
zam mesmos substratos que a estilbeno-sintase, tais
como a FAL (envolvida na biossíntese de compostos
fenólicos) e chalcona-sintase (CHS - envolvida na bio-
síntesse de flavonoides), apresentaram incrementos
de até duas vezes em suas atividades enzimáticas
(Rosemann et al.,1991). Plantas de fumo sensíveis a
O3 (Nicotina tabacum L. cv. Bel W3) expostas a 150
ppb desse gás durante 5 horas, apresentaram um
pico nos níveis de compostos fenólicos às 10 horas
após o tratamento, bem como maior expressão dos
genes codificantes para as enzimas FAL-a e FAL-b,
associado a maior atividadede FAL (Pasqualini et al.,
2003). Estas plantas desencadearam uma explosão
oxidativa com uma acumulação máxima de peróxido
de hidrogênio (H2O2) às 12 horas e desenvolveram
injúrias visíveis semelhantes àquelas desenvolvidas
durante a RH, entre 48 e 72 horas após o tratamento
com 150 ppb de O3 (Pasqualini et al., 2003).
Em plantas de salsa (Petroselinum crispum
L.) expostas a uma concentração de 200 ppb de O3
durante 10 horas, foram encontrados maiores níveis
de glucosídeos flavona e furanocumarinas após 12
e 24 horas após a exposição ao O3, respectivamente
(Eckey-Kaltenbach et al., 1994). O acúmulo máximo
dos transcritos codificantes para as enzimas FAL, CH,
e XMT (S-adenosil-metionina:xantotoxol-O-metil-
transferase – envolvida na biossíntese de furanocu-
marinas) ocorreu 3 horas após a exposição a O3, en-
quanto que os picos na atividade enzimática destas
enzimas foram detectados após 12 horas de exposi-
ção ao gás. Em casos como este, onde são induzidas
duas vias independentes relacionadas à defesa, o O3
tem sido denominado como um “indutor cruzado”
(Eckey-Kaltenbach et al., 1994). Em plantas de es-
pruce-da-Noruega (Picea abies L.) tratadas com 600
ppb durante 8 horas, foram detectados incrementos
de até 3 vezes nos níveis de transcritos codificantes
para a enzima cinamil-álcool desidrogenase (CAD -
envolvida na biossíntese da lignina), em relação a
plantas expostas a concentrações ambientais de O3
(Galliano et al., 1993). Neste caso, os níveis máximos
de transcritos e atividade enzimática para a enzima
CAD foram atingidos aos 17 dias após o tratamento
com O3 (Galliano et al., 1993).
Outra resposta típica observada em plantas
expostas a elevadas concentrações de O3 é a o au-
mento da síntese de proteínas PR. Plantas de fumo
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
sensíveis (Nicotiana tabacum cv. Bel W3) e tolerantes
(Nicotiana tabacum cv. Bel B) ao O3, têm sido utiliza-
das como biomonitores para o estudo das respostas
associadas ao estresse com O3 (Schraudner et al.,
1992; Sandermann, 1996). Por exemplo, em plantas
de fumo cv. Bel W3 e cv. Bel B expostas 150 ppb de
O3 durante 5 horas, foram detectados incrementos
nos níveis dos transcritos codificantes para as enzi-
mas quitinase e β-1,3–glucanase (Schraudner et al.,
1992). Neste caso, plantas da cv. Bel W3 apresenta-
ram incrementos entre 40 e 75 vezes na atividade
β-1,3–glucanase e de 4 vezes na atividade quitinase,
entre as 5 e 10 horas após a exposição com O3. Estas
plantas também desenvolveram injúrias necróticas
com deposição de caloses em células adjacentes às
áreas necróticas (Schraudner et al., 1992). Resulta-
dos semelhantes foram obtidos em outro trabalho,
onde plantas de fumo cv. Bel W3 e cv. Bel B expostas
a 150 ppb de O3 durante dois dias exibiram maio-
res níveis de transcritos codificantes para as enzimas
β-1,3–glucanase, quitinase básica, quitinase ácida, e
PR-1b (Ernst et al., 1992). Por outro lado, em folhas
de fumo cv. Bel W3 expostas a 150 ppb durante 5
horas foi detectado um pico nos níveis de transcritos
codificantes para PR-1a (proteína marcadora da RH)
24 horas após a exposição ao O3 (Pasqualini et al.,
2003). Além disso, observaram-se também maiores
níveis de compostos fenólicos, peróxido de hidrogê-
nio e de deposição de caloses após 24 horas do tra-
tamento com O3. Estas respostas consideradas em
conjunto, indicam que os mecanismos envolvidos
durante a RH disparada pelo estresse a O3, são se-
melhantes àqueles disparados durante a RH e MCP
induzidos pelo ataque por patógenos (Pasqualini et
al., 2003). Plantas jovens de espruce-da-Noruega (Pi-
cea abies L.) expostas a 150 ppb durante 7 horas por
dia, até 8 dias, apresentaram maior expressão endo-
-quitinase e β-1,3–glucanase a partir do segundo
dia (Karenlampi et al.,1994). Ambas estas proteínas
são sintetizadas geralmente em resposta ao ataque
por patógenos fúngicos, sendo que neste caso o O3
estaria atuando de maneira análoga a os elicitore
fúngicos patogênicos. Plantas de salsa (P. crispum L.)
expostas primeiro a 200 ppb de O3durante 10 horas
e depois por 8 horas ao ar livre, exibiram maior ex-
pressão dos genes codificantes das proteínas PR1-3
e PR1-4 (Eckey-Katlenbach et al., 1997).
Em geral, a indução da expressão de proteí-
nas PR ocorre junto à produção de outras moléculas
RAPP - Volume 24, 2016
envolvidas em várias vias de sinalizações relaciona-
das com o disparo de estados de resistência a nível
sistêmico, como por exemplo, AS, AJ e ET (Yalpani
et al., 1994; Sharma et al., 1996; Pell et al., 1997).
Tem sido proposto que ET e AS poderiam atuar como
mensageiros secundários ou terciários na ativação
das respostas do tipo SAR induzidas por O3 (San-
derman et al., 1998). Por exemplo, tecido foliar de
plantas de fumo (Nicotiana tabacum L. cv. Xanthi-nc)
expostas a 200 ppb de O3 durante 6 horas, por 4 dias,
mostraram indução da expressão das proteínas PR1-
-a e PR1-b ao quinto dias após o tratamento com O3
(Yalpani et al., 1994). A indução da expressão dessas
proteínas foi acompanhada pelo aumento nos níveis
de AS, a partir do primeiro dia após o tratamento
com O3, o que parece ser a causa do disparo de res-
postas tipo RH e SAR em plantas submetidas a con-
centrações elevadas de O3 (Yalpani et al., 1994). Em
plantas de Arabidopsis thaliana expostas a 300 ppb
de O3 durante 6 horas, foram detectados incremen-
tos nos níveis de transcritos codificantes para PR-1
às 12 horas após a exposição com O3. Estes incre-
mentos foram acompanhados por maiores níveis de
AS os quais atingiram um pico às 6 horas após a ex-
posição a elevadas concentrações de O3 (Sharma et
al.,1996). Aparentemente, a indução de AS poderia
ser induzida pela produção de EROs e proteínas PR
e, a expressão conjunta destas vias seria necessária
para o disparo da RH e SAR, induzidas pelo estresse
a O3. Plantas de lentilha (Lens culinaris) tratadas com
um fluxo de 5 ml/min de O3, tiveram uma maior ex-
pressão dos genes e atividade das enzimas LOX1 e
LOX2 3 horas após o tratamento com O3 (Maccarro-
ne et al.,1997).
A ativação de sistemas antioxidantes em
plantas induzidos após o tratamento com O3, tem
sido demonstrado através da detecção de EROs
produzidas pela exposição de plantas ao O3 (San-
derman, 1996; Pell et al., 1997; Sharma et al., 1997;
Langerbartels et al., 2002; Mahalingam et al., 2006).
O O3 é capaz de induzir a produção de EROs, uma vez
que ingressa nas plantas via estômatos e se translo-
ca através do apoplasto, reagindo e produzindo pe-
róxido de hidrogênio, íon superóxido, óxido nítrico,
etc. (Langebartels et al., 2002; Sharma et al., 1997).
Esses EROs estão associados às vias metabólicas que
induzem RH e SAR, o que demonstra a capacidade
do O3 em atuar como um interlocutor entre vias me-
tabólicas disparadas tanto em resposta ao estresse
137
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
por O3 como pelo ataque por patógenos. Por exem-
plo, plantas de Arabidopsis thaliana expostas a 300
ppb de O3 durante 6 horas, por 14 dias, mostraram
incrementos nos níveis de transcritos codificantes
para as enzimas FAL, SOD (superóxido dismutase),
POX (Peroxidase) e GST (Glutationa-S-transferase),
após 6 horas de exposição diária de O3 (Sharma et
al.,1994). Por outro lado, tem-se observado que o O3
também é capaz de induzir reações de defesa que
são normalmente induzidas por outros estresses
sem ser o ataque por patógenos, como por exemplo,
estresses relacionados à superexposição à radiação
UV (Langebartels et al., 2002; Yalpani et al., 1994).
Efeito da temperatura
A temperatura é um dos principais fatores
ambientais que regula o desenvolvimento e o cresci-
mento das plantas. O aumento na temperatura glo-
bal no decorrer das próximas décadas poderá afetar
diretamente a duração dos invernos, a distribuição
geográfica dos hospedeiros e patógenos e, as taxas
de crescimento e reprodução dos mesmos. Desta
forma, as variações na temperatura em escala global
também podem afetar a dispersão de doenças infec-
ciosas e a sobrevivência dos patógenos entre as es-
tações (Yáñez-López et al., 2012). Além disso, a tem-
peratura é capaz de afetar o desenvolvimento dos
patógenos devido a alterações na acumulação de
fitoalexinas, e/ou pigmentos protetores nos tecidos
hospedeiros (Newman et al., 2003; Newman, 2004;
Memmot et al., 2007; Ladanyi & Horvath, 2010).
Plantas submetidas a temperaturas elevadas
têm demonstrado geralmente maior suscetibilidade
ao ataque por patógenos e pré-disposição ao desen-
volvimento de doenças. O aumento da temperatura
pode afetar tanto as respostas de defesa associadas
à PTI, quanto à ETI. Neste sentido, vários genes re-
lacionados com a defesa contra patógenos são re-
primidos em certos hospedeiros expostos a altas
temperaturas (Xiao et al., 2003, 2005; de Jong et al.,
2002). Por exemplo, a RH disparada pelo gene RPW8
em Arabidopsis, que confere resistência ao oídio, é
reprimido em plantas submetidas a temperaturas
acima de 30°C (Xiao et al., 2003). A resistência e RH
disparada pelos genes Cf4 e Cf9 em tomate (codifi-
cantes para duas proteínas do tipo RLKs), frente ao
fungo patogênico Cladosporium fulvum, também
podem ser suprimidas em plantas expostas a tempe-
raturas superiores a 33°C (de Jong et al., 2002). No
138 RAPP - Volume 24, 2016
entanto, é interessante destacar que respostas autoi-
munes mediadas pelos genes R em plantas híbridas
de Arabidopsis podem ser atenuadas mediante um
incremento moderado na temperatura (Bomblies et
al., 2007), indicando que até mesmo alterações me-
nores na temperatura global podem afetar os siste-
mas de defesa das plantas.
Em plantas de Arabidopsis e fumo (Nicotiana
benthamiana), a resistência basal e a resistência me-
diada pelos genes R frente a Pseudomonas syringae
são inibidas pelo aumento da temperatura (Wang
et al., 2009). Além disso, foi constatado que em am-
bos os hospedeiros as respostas de defesa sensíveis
à temperatura não dependem do AS nem AJ, nem
tampouco dos fatores EDS1 e PAD4. Isto tem levado
a pensar que certas respostas de defesa devem estar
mediadas por outros componentes sinalizadores, ou
mesmo, por uma combinação de múltiplos fatores
ainda desconhecidos (Wang et al., 2009). Trabalhos
com Arabidopsis permitiram isolar um mutante re-
sistente a doenças em condições de elevadas tempe-
raturas (Zhu et al., 2010). Este mutante possui uma
mutação no gene snc1, o qual é codificante para
uma proteína R portadora de um domínio NBS-LRR,
com funções de reconhecimento a elicitores pato-
gênicos. Temperaturas elevadas parecem modular a
conformação destes receptores a ponto de torná-los
funcionalmente ativos na conferência de resistência
a doença nessas condições de estresse (Zhu et al.,
2010). Mutações similares no gene N em plantas
de fumo também foram capazes de conferir resis-
tência à doença sob temperaturas elevadas (Zhu et
al., 2010). Em plantas de tabaco foi constatado que
ocorre inibição da expressão dos genes R e do acú-
mulo de AS sob elevadas temperaturas. Contudo, a
aplicação exógena de AS é capaz de reverter essa ini-
bição da expressão dos genes R, mas não de impedir
a ocorrência de RH (Malamy et al., 1992) (Tabela 1).
O efeito de incrementos na temperatura am-
biental nas respostas de defesa de plantas contra pa-
tógenos pode variar de acordo com o genótipo do
hospedeiro, ou conforme os modos de colonização
do patógeno. Assim, por exemplo, plantas de A. tha-
liana ecotipo Col-0 possuem resistência a P. syringae
via ETI, sob condições de temperatura alta (30ºC)
(Menna et al., 2015). Por outro lado, os ecotipos
CIBC-5, Tsu-1 e Wei-0, resistentes a P. syringae em
temperaturas de até 24°C, têm sua resistência via
ETI suprimida, tornando-se suscetíveis ao patógeno
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
a 30°C (Menna et al., 2015). Em plantas de cevada
(H. vulgare), o incremento da temperatura ambiente
em 5°C é suficiente para reduzir a infecção por oídio
(B. graminis) em aproximadamente 75% (Mikkelsen
et al., 2015). Porém, esta elevação na temperatura
favorece a infecção por B. sorokiniana resultando
em um aumento de cerca de 150% nos sintomas da
mancha marrom (Mikkelsen et al., 2015).
Efeito da radiação ultravioleta
Além da radiação fotossinteticamente ati-
va (PAR, Photosynthetically Active Radiation, 400
-700 nm), as plantas estão expostas à radiação ul-
travioleta (UV). Esta radiação é composta pelas fai-
xas UV-C (abaixo de 280 nm), UV-B (280 – 320 nm)
e UV-A (320 – 390 nm). Vários trabalhos mostram
que o aumento na incidência de radiação UV devido
a níveis reduzidos de O3 estratosférico, afeta o perfil
metabólico de plantas, especialmente os metabóli-
tos secundários (Gunasekera et al., 1997; Kunz et al.,
2008; Mewis et al., 2012; Nawkar et al., 2013; Balla-
ré, 2014; Bornman et al., 2015).
Por exemplo, a pré-exposição de plantas de
Arabidopsis thaliana a radiação UV (254 nm, 0,2 kj/
m2) reduz o número de conidióforos de Hyalopero-
nospora parasytica por folha em cerca de 80% (Kunz
et al., 2008). Estes efeitos persistem por até 7 dias
após a exposição à radiação UV. Aparentemente, o
disparo de respostas de defesa após a exposição à
radiação UV é relacionado com os danos causados
por ela ao DNA vegetal. Além disso, trabalhos recen-
tes mostram que mitocôndrias e cloroplastos podem
produzir EROs em resposta à radiação UV que por
sua vez, podem, eventualmente, iniciar uma casca-
ta de eventos que culminará na MCP (Nawkar et al.,
2013).
Além de poder disparar a MCP, a exposição
à radiação UV altera profundamente o metabolismo
vegetal. Assim, por exemplo, a irradiação de plantas
de brócolis (Brassica oleracea) com radiação UV-B
(0,6 kj/m²) aumenta a expressão de genes relacio-
nados com a defesa vegetal incluindo a síntese de
fitoalexinas, flavonóides, terpenóides e proteínas PR
(PR-1, PR-2 e PR-4). A exposição de plantas de Ara-
bidopsis thaliana a 5,5 kj/m² de radiação UV-B reduz
em cerca de 50% a severidade de Botrytis cinerea
(Demkura & Ballaré, 2012). Além disso, a ativação
de respostas de defesa e, consequentemente, o con-
trole do patógeno, parece estar associado ao locus
RAPP - Volume 24, 2016
de resistência a UV (uvr8, UV Resistance locus 8) o
receptor primário da radiação UV-B em plantas. Este
receptor controla a expressão de vários genes rela-
cionados com a aclimatação e proteção de plantas
contra a radiação UV-B (Demkura & Ballaré, 2012).
As plantas estão adaptadas e, possivelmen-
te, utilizam os níveis atuais de radiação UV-B para
o estabelecimento de certos graus de resistência a
patógenos. Desta forma, quando a quantidade de ra-
diação UV-B incidente é reduzida, a suscetibilidade
vegetal ao ataque de patógenos pode ser aumenta-
da. Neste sentido, a redução na incidência de radia-
ção UV-B em cerca de 80% aumenta a severidade de
Exobasidium vexans em plantas de chá (Camellia si-
nensis) (Gunasekera et al., 1997).
Perspectivas futuras
O incremento na concentração dos principais
gases de efeito estufa, da temperatura ambiental,
bem como da radiação ultravioleta é um problema
potencial que poderá afetar diretamente os siste-
mas de defesa das plantas nas próximas décadas.
Mesmo considerando os cenários com menor po-
tencial de riscos preditos pelos modelos para os
próximos cinquenta e cem anos, as concentrações
que se atingiriam seriam suficientes para afetar os
sistemas de defesa em várias espécies de importân-
cia econômica (Pachauri & Reisinger, 2007). Como
demonstram os trabalhos citados nesta revisão, vá-
rios hospedeiros respondem mediante os mesmos
mecanismos fisiológicos que ocorrem durante as
respostas ao ataque por patógenos, o que sugere que
os receptores envolvidos no reconhecimento aos
incrementos de CO2 e O3 são os mesmos envolvidos
no reconhecimento dos patógenos, ou existe uma
grande sobreposição das rotas fisiológicas entre
ambas as respostas.
A aplicação de engenharia genética com fins
de produzir plantas mutantes poderia ser uma fer-
ramenta no futuro para o desenvolvimento de cul-
tivares resistentes aos incrementos na temperatura
e nível dos gases de efeito estufa. A resistência a
doenças observada em plantas modelos tais como
Arabidopsis e fumo, poderia ser aproveitada para o
desenvolvimento de cultivares resistentes (Zhu et
al., 2010). De qualquer maneira, os trabalhos reali-
zados em laboratório são parciais e o êxito a campo
ainda deverá de ser constatado, mesmo porque os
cenários ambientais propostos para o futuro deri-
139
 Mathias Ferrari Rockenbach, et al. 130-144)
vam apenas de modelos matemáticos e critérios a
priori mais ou menos rigorosos. Não é possível afir-
mar que as plantas responderão em nível de campo
da mesma forma que o fazem no laboratório, já que
não se consideram outros fatores e suas inúmeras
interações, que podem ser alterados pelas mudan-
ças climáticas e possíveis adaptações evolutivas por
parte dos patógenos e hospedeiros. Portanto, mais
estudos são extremamente necessários para enten-
der melhor e tentar predizer quais serão os efeitos
das mudanças climáticas no sistema de defesa das
plantas.
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 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

RESISTÊNCIA DE MONILINIA SPP.

AOS FUNGICIDAS DOS GRUPOS DOS
INIBIDORES DA DESMETILAÇÃO (IDM),
DOS INIBIDORES DA QUINONA EXTERNA
(IQE) E DOS METILO BENZIMIDAZOL
CARBAMATOS (MBC)
Paulo dos Santos Faria Lichtemberg1, Isabela Vescove Primiano2,
Juliana Muehlmann Fischer3, Chirley Glienke3, Lilian Amorim2
e Louise Larissa May De Mio1*

RESUMO
Esta revisão aborda o desenvolvimento de resistência de espécies de
Monilinia causadoras de podridão parda em frutíferas de caroço a fungicidas em
todo o mundo, discutindo o modo de ação, mecanismos da resistência, métodos
para detecção e fatores que afetam a seleção para resistência aos fungicidas dos
grupos dos inibidores da desmetilação (IDM), dos inibidores da quinona externa
(IQe) e dos Metilo benzimidazol carbamatos (MBC). Além disso, foi discutida
a adaptabilidade dos isolados com resistência ou mudança de sensibilidade e
sua relação com as estratégias antirresistência, especialmente nas condições de
cultivo em áreas subtropicais brasileiras. No Brasil, foram realizados monitora-
mentos da sensibilidade das populações de isolados de Monilinia fructicola, co-
letados entre os anos 2002 e 2014, aos três grupos relacionados. Os isolados da
coleção são representantes de toda região produtora do Brasil.

1. Introdução ferramenta no controle dos fungos fitopatogênicos

A podridão parda, causada por espécies de
Monilinia, tem seu controle baseado na aplicação de
fungicidas desde a floração até a colheita. Dentre os
fungicidas que vem sendo utilizados para o controle
desta doença, os fungicidas sistêmicos, os IDMs, os
IQes e os MBCs podem ter sua eficiência reduzida
pela alteração na sensibilidade ou até perda de efici-
ência devido à ocorrência de resistência.
Características como o amplo espectro de
ação, diversidade química e a possibilidade do uso
protetor, curativo e erradicante fazem dos fungicidas
inibidores da biossíntese do esterol – IBE (do inglês
sterol biosynthesis inhibitors – SBI) uma importante
em diversas culturas (Linhares & Ghini, 2001; Brent
& Hollomon, 2007; Oliver & Hewitt, 2014). Entre
as cinco classes de fungicidas IBEs, destacam-se os
inibidores da desmetilação – IDM (do inglês deme-
thylation inhibitors - DMI), com ampla utilização no
controle dos principais ascomicetos e basidiomice-
tos causadores de doenças em plantas (Reis et al.,
2010; Oliver & Hewitt, 2014). Tais características fa-
zem dos IDMs líderes de venda de fungicidas com
29,2% de participação no mercado mundial (Oliver
& Hewitt, 2014).
Na cultura do pessegueiro, dentre os fungi-
cidas IBEs os azóis (triazóis e imidazóis) desempe-

1
Universidade Federal do Paraná, Depto de Fitotecnia e Fitossanitarismo. Curitiba, Brasil; 2 Universidade Estadual de São Paulo,
Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Piracicaba, Brasil; 3 Universidade Federal do Paraná, Depto de Genética. Curitiba,
Brasil. * Autor para correspondência: maydemio@ufpr.br

RAPP - Volume 24, 2016 145

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
nham um papel importante no controle da podridão
parda (Monilinia spp.), ferrugem (Tranzschelia dis-
color), furo-de-bala (Wilsonomyces carpophilus) e
sarna (Cladosporium carpophilum) (Bleicher, 1997;
Ma et al., 2001; May De Mio et al., 2004; Adaska-
veg et al., 2015). Os fungicidas azóis representam o
grupo quimicamente mais diverso entre os fungici-
das IDM, tendo seu modo de ação dado pela inibi-
ção da remoção do grupo C14-metilo do eburicol, o
qual impede o processo de formação do ergosterol
em fungos filamentosos. A ausência ou diminuição
de ergosterol e o acúmulo de esteróis tóxicos levam
ao rompimento da membrana e extravasamento do
conteúdo celular, causando a morte do organismo
(Joseph‐Horne & Hollomon, 1997; Sanglard et al.,
1998b; Oliver & Hewitt, 2014). Casos de resistência
a este grupo são mais raros; entretanto, reduções de
sensibilidade em isolados de diversas regiões produ-
toras, já foram relatados.
Os inibidores da quinona externa –IQe (do
inglês quinone outside inhibitors - QoI) têm gran-
de importância no manejo integrado de doenças de
plantas por serem derivados de produtos naturais,
apresentar amplo espectro de ação, alta fungitoxici-
dade inerente, longo período residual, além de baixa
toxicidade ambiental (Sauter et al., 1999; Sierotzki,
2015). Esse grupo de fungicidas, logo após seu lan-
çamento, foi amplamente empregado no controle
de doenças de cucurbitáceas no Japão (Ishii et al.,
2001) e de macieiras na Europa (Zheng et al., 2000).
No entanto foram relatados casos de resistência dois
anos após sua introdução (Zheng et al., 2000; Ghini
& Kimati, 2000; Ishii et al., 2001; Sierotzki, 2015).
Desde então, há relatos de resistência de campo em
mais de 42 patógenos em diversas culturas e países,
como em Pyricularia grisea, Botrytis cinerea e Cer-
cospora sojina nos Estados Unidos (Kim et al., 2003;
FRAC, 2012a; Amiri et al., 2014; Zeng et al., 2015),
Venturia inaequalis na Suíça (Farber et al., 2002) e
Plasmopara viticola na França e na Itália (Genet et
al., 2006).
Além das características atrativas destes pro-
dutos, mencionadas anteriormente, outro fator que
contribuiu para a grande adesão dos produtores ao
uso de IQes é a disponibilidade dos produtos no mer-
cado. Esse fungicida está amplamente distribuído em
revendas e agropecuárias, representando, em 2012,
28% do mercado de fungicidas (Sierotzki, 2015). No
Brasil, os produtores de pêssego vêm utilizando os
146 RAPP - Volume 24, 2016
ingredientes ativos azoxistrobina e piraclostrobina
(pertencentes à classe dos IQe) para o controle da
ferrugem (Tranzschelia discolor) e na prevenção da
podridão parda (Monilinia fructicola). Apesar de di-
versos ingredientes ativos estarem registrados para
o controle da podridão parda do pessegueiro, os
únicos fungicidas sistêmicos registrados no Ministé-
rio da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA)
para o seu controle pertencem ao grupo dos triazóis
(AGROFIT, 2016). No entanto, o ingrediente ativo
azoxistrobina está na lista de agrotóxicos permitidos
na Produção Integrada de Pêssego (INMETRO, 2003).
Com o aumento do uso da azoxistrobina pe-
los produtores de pêssego e da maior pressão de
seleção que eles representam sobre a população
patogênica, isolados resistentes poderão vir a ser se-
lecionados com maior frequência. No Estado de São
Paulo, inclusive, já foi observada uma mudança nos
valores de CE50 (concentração efetiva capaz de inibir
50 % do crescimento ou germinação da população
patogênica) de M. fructicola à azoxistrobina, aumen-
tando de 0,05 μg.ml-1 em 2002 para 0,44 μg.ml-1 em
2008 (May De Mio et al., 2011).
Além dos IDMs e dos IQes, espécies de Moni-
linia foram por muito tempo controladas pelos fun-
gicidas metilo benzimidazol carbamatos – MBCs (em
inglês como Methyl Benzimidazole Carbamates). Os
MBCs são fungicidas orgânicos, sistêmicos e de alta
seletividade em que o mecanismo de ação baseia-se
no comprometimento da integridade das tubulinas.
Neste grupo, estão incluídos os fungicidas tiofana-
tos (tiofanato e tiofanato-metílico) e benzimidazóis
(benomil, carbendazim, fuberidazol e tiabendazol)
(FRAC, 2016). Os tiofanatos têm como base a tiureia,
derivado do ácido tialofânico, e ao contrário dos
benzimidazóis, não apresentam um anel heterocícli-
co (Picinini, 1994; Chauhan & Bhattacharya, 2012).
Uma vez que são convertidos em carbendazim, os
tiofanatos são classificados por muitos autores como
benzimidazóis (Picinini, 1994; Young, 2015). Além da
aplicação na agricultura, como ferramenta de con-
trole de diversos fitopatógenos das mais variadas
culturas, alguns derivados do grupo dos benzimida-
zóis têm sido utilizados como antiparasitários huma-
nos e veterinários e também em terapia anticâncer
(Navarrete-Vázquez et al., 2001; Andrzejewska et al.,
2002).
A característica de fungitoxicidade dos tiofa-
natos é correlacionada com a produção de Metilo
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
Benzimidazol Carbamato (Fuchs et al., 1972; Chau-
han & Bhattacharya, 2012). Os produtos de conver-
são de tiofanatos em solução aquosa são semelhan-
tes aos benzimidazóis, em que o tiofanato-metílico
é convertido em metilo benzimidazol carbamato e
o tiofanato no análogo etil benzimidazol carbamato
(EBC) (Chauhan & Bhattacharya, 2012). O benomil é
rapidamente convertido em MBC por hidrólise, en-
quanto o tiofanato-metílico necessita de uma série
de reações intermediárias. Logo, esta transformação
mais lenta, faz com que possuam ação antifúngica
menor que o benomil (Picinini, 1994).
A popularidade destes grupos de fungicidas e
seu uso contínuo no controle da podridão parda em
rosáceas (Penrose & Senn, 1995; May De Mio et al.,
2004; Schnabel & Dai, 2004; Silva et al., 2011; Chen
et al., 2012) resultou na seleção de isolados resisten-
tes de M. fructicola nas principais áreas produtoras
de pêssego do mundo (Schnabel et al., 2004; May
De Mio et al., 2011; Villani & Cox, 2011; Chen et al.,
2012). O desenvolvimento de resistência aos fungi-
cidas é um dos maiores problemas no controle de
doenças de plantas, causando perdas econômicas
aos produtores e colocando-os em difícil situação
(Dekker, 1987). O conhecimento sobre os fatores
genéticos e a dinâmica da evolução de populações
resistentes, representam um importante passo para
prolongar a eficácia dos fungicidas.
Nesta revisão serão abordados estudos his-
tóricos e recentes sobre os mecanismos e evolução
da resistência aos IDMs, IQes e MBCs em espécies
de Monilinia, bem como estratégias antirresistência
para o manejo da podridão parda.
2. Modo de ação e alvo dos fungicidas IDMs, IQes
e MBCs
2.1 Fungicidas IDMs: Apesar de todos IBEs
utilizados na agricultura terem como modo de ação
a inibição da rota sintética de esteróis em fungos,
Figura 1. Esquema da sequência normal da desmetilação do C14 do lanosterol mediada pelo citocromo P450. Adaptado
de Köller (1988).
RAPP - Volume 24, 2016
cada classe de fungicidas distingue-se quanto aos sí-
tios específicos de ação (Linhares & Ghini, 2001; Oli-
ver & Hewitt, 2014). Particularmente, os inibidores
da desmetilação listados no grupo G, classe IBE 1 do
Comitê de Ação à Resistência de Fungicidas (FRAC),
tem como sítio específico de ação a enzima C14α
desmetilase (enzima Cyp51) do citocromo P450, que
catalisa processos oxidativos necessários na forma-
ção do ergosterol (Lupetti et al., 2002; Shapiro et al.,
2011; Oliver & Hewitt, 2014; FRAC, 2016). A redução
do ergosterol e acúmulo de seus precursores foram
observados em M. fructigena tratada com IBEs (Kato
et al., 1974, 1975). Em M. fructicola, C14α desmeti-
lase é codificada pelo gene Cyp51 (Schnabel & Dai,
2004; Luo & Schnabel, 2008a) e desencadeia três
oxidações sucessivas a partir da remoção do grupo
metila (CH3) da molécula C14 do lanosterol (Köller,
1988; Sanglard et al., 1998b; Linhares & Ghini, 2001;
Reis et al., 2010) (Figura 1). Os fungicidas azóis ini-
bidores da C14α desmetilase, agem através de um
átomo livre de nitrogênio localizado no anel hete-
rocíclico N-2 (imidazol) ou N-3 (triazol) que se liga
ao átomo de ferro-hêmico da enzima do citocromo
P450 inibindo o acesso aos substratos necessários
para sua função (Sanglard et al., 1998a; Linhares &
Ghini, 2001; Mansfield et al., 2010; Shapiro et al.,
2011; Kelly & Kelly, 2013; Oliver & Hewitt, 2014). A
partir desta inibição, ocorre um acúmulo de esteróis
tóxicos do grupo 14α-metilo (lanosterol e 14α-metil-
3-6-diol), produzidos pela Δ-5,6-desaturase, interfe-
rindo com as funções do ergosterol como compo-
nente predominante da membrana celular (Gadher
et al., 1983; Lupetti et al., 2002) (Figura 2). Sendo
assim, o estresse causado na membrana da célula
resulta no aumento de sua permeabilidade, causan-
do o extravasamento de conteúdos intracelulares e,
consequentemente, limitando o crescimento fúngi-
co (Gadher et al., 1983; Buchenauer, 1987; Lupetti et
al., 2002; Reis et al., 2010).
147
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Figura 2. Mecanismo de ação de compostos antifúngicos afetando a rota Biosintética do ergosterol. Enzimas alvo à di-
reita das setas com genes codificadores entre parênteses. Compostos antifúngicos à esquerda das setas. Setas indicam
passos para a biossíntese do ergosterol. Adaptado de Lupetti et al., 2002.

2.2. Fungicidas IQes: A classe dos inibido-
res da quinona externa (IQe) engloba os seguintes
grupos químicos: estrobilurinas, famoxadona, fena-
midona e pyribencarb (Leadbeater, 2012). O modo
de ação desses produtos é a interferência na produ-
ção de energia (ATP) em um passo do metabolismo
primário comum às células fúngicas. Por interferir
no metabolismo primário, essa classe de fungici-
das apresenta amplo espectro de ação sobre dife-
rentes filos do reino Fungi, como Basidiomycota e
Ascomycota (Sierotzki, 2015). Dentro do grupo das
estrobilurinas há diferentes princípios ativos pro-
duzidos por diferentes fabricantes: azoxistrobina,
piraclostrobina, trifloxistrobina e cresoxim-metílico.
Essas moléculas atuam em um processo específico
da respiração fúngica, pois ligam-se ao sítio da qui-
nona oxidase externa do citocromo b (complexo III)
e inibem o transporte de elétrons na mitocôndria,
impedindo a formação de ATP (Fernández-Ortuño et
al., 2010; Leadbeater, 2012).
2.3. Fungicidas MBCs: Os benzimidazóis co-
meçaram a ser utilizados entre as décadas de 1960
e 1970, no tratamento foliar, de sementes e no con-
trole pós-colheita, em aplicações na forma de pul-
verização e em tratamentos por imersão (Brent &
Hollomon, 2007). Nesta época, características como
a ocorrência de pouca fitotoxicidade, amplo espec-
tro de ação, eficiência em baixas concentrações, fa-
cilidade de absorção e translocação pelas plantas e
ação pós-infecção, tornaram sua utilização bastante
comum, apresentando vantagens em relação aos
outros produtos utilizados, como os derivados cúpri-
cos, captan e ditiocarbamatos. Em 1979, a mistura
Benomil-Dicloran era o tratamento padrão para o
controle da podridão-parda e da podridão causada
por Rhizopus em pessegueiros no Brasil (Feliciano &
Assis, 1979). Em 1992, o benomil foi retirado do mer-
cado no Brasil, sendo assim, os produtores passaram
a utilizar o tiofanato-metílico como MBC alternativo
para o controle da podridão parda em frutos de ca-
roço (May De Mio et al., 2011).
Poucos anos após o início da utilização de
MBCs, em populações de diversos fungos foram
descritos isolados resistentes a estes fungicidas. Em
1969, relata-se resistência em Sphaerotheca fuligi-
nea, (Schroeder & Provvidenti, 1969). Posteriormen-
te, a resistência de M. fructicola a estes fungicidas é
relatada em diversos países. Em 1975, observou-se
resistência na Austrália, em Victoria (Whan, 1976) e
em 1976 em New South Wales após o uso extensivo

148 RAPP - Volume 24, 2016

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
de benomil por um período superior a quatro anos
(Koffman & Penrose, 1976). A partir de 1976, ocor-
rem relatos nos Estados Unidos, em Michigan (Jones
& Ehret, 1976), na Carolina do Sul, na Califórnia
(Ogawa et al., 1980; Sonoda et al., 1983; Michailides
et al., 1987; Ma et al., 2003) e Nova Iorque (Szkolnik
& Gilpatrick, 1977). Lim et al. (2006), observaram re-
sistência na Coréia. No sul do Brasil, em 1985, Fortes
& Ferreira (1985), relatam isolados obtidos em diver-
sos pomares resistentes ao benomil. May De Mio et
al. (2011) e Fischer (2015) observaram diferentes pa-
drões de resistência a tiofanato-metílico em isolados
de M. fructicola, em frutos provenientes de pomares
da região Sul e estado de São Paulo, coletados no pe-
ríodo de 2000 a 2010. Em outras espécies do gêne-
ro, como em M. laxa, há também relato de resistên-
cia em países europeus, como na Grécia e também
nos Estados Unidos, na Califórnia (Ma et al., 2005;
Thomidis et al., 2009; Malandrakis et al., 2012).
No geral a resistência é transmitida geneti-
camente e resulta de uma ou mais mutações, que
podem provocar alteração no sítio alvo bioquímico,
fazendo com que a ligação ao fungicida não acon-
teça (FRAC, 2012b). Devido à ação específica, existe
maior propensão à resistência para estes compostos
químicos, ao contrário do que ocorre em fungicidas
que atuam em vários pontos do metabolismo. Além
deste aspecto, outros fatores estão associados à re-
sistência, como o uso intensivo destes produtos e a
existência de estirpes resistentes na população ori-
ginal (Delp, 1980). Em fungicidas sítio-específicos,
como benzimidazóis e tiofanatos, uma única muta-
ção pode levar a incapacidade do fungicida em se
ligar ao ponto de ação nos fungos (McGrath, 2004).
Mutações no gene da beta-tubulina, que resultam
em sequências alteradas de aminoácidos nos sítios
de ligação ao MBC, vêm sendo associadas à resistên-
cia aos MBCs em diversos microrganismos, dentre
eles, fungos do gênero Monilinia (Ma et al., 2003;
Ma et al., 2005; Zhu et al., 2010; Malandrakis et al.,
2012; Chen et al., 2014).
Os fungicidas MBCs atuam como inibidores
específicos ligando-se às moléculas de tubulina, in-
terrompendo a divisão da célula (FRAC, 2012b). As
tubulinas são proteínas globulares que compõem os
microtúbulos, um heterodímero, que é constituído
principalmente por duas cadeias polipeptídicas de
estruturas semelhantes, a alfa (α) e a beta-tubulina
(β). Os microtúbulos são filamentos que compõem
RAPP - Volume 24, 2016
o citoesqueleto, uma espécie de arcabouço intrace-
lular responsável pela manutenção da forma e orga-
nização celular, das células eucarióticas. Os micro-
túbulos estão diretamente envolvidos na formação
do fuso mitótico e consequentemente na segrega-
ção de cromossomos durante a divisão celular em
eucariontes. Além das tubulinas α e β, atualmente
são conhecidas também outras famílias, como γ, δ,
ε, ζ e η, com funções associadas ao centríolo e pro-
vavelmente a outros aspectos basais (McKean et al.,
2001).
Para a formação dos microtúbulos ocorre a li-
gação entre GTP (guanosina trifosfato) e os dímeros
de tubulina, estabilizando assim a forma polimérica.
Os microtúbulos estão em constante reorganização,
crescendo em uma extremidade devido à polimeri-
zação dos dímeros de tubulina e diminuindo na ou-
tra extremidade em decorrência da despolimeriza-
ção (Junqueira & Carneiro, 1997). O carbendazim é
capaz de inibir a polimerização das tubulinas, afetan-
do também a ligação de GTP (guanosina trifosfato)
(Winder et al., 2001).
3. Mecanismos de resistência aos fungicidas IDMs,
IQes e MBCs
3.1. Fungicidas IDMs: A resistência de fungos
fitopatogênicos aos fungicidas azóis é de natureza
quantitativa, apresentando uma distribuição unimo-
dal da sensibilidade que eventualmente muda devi-
do ao aumento da frequência de fenótipos/genóti-
pos resistentes na população (Dekker, 1987; Köller
& Scheinpflug, 1987; Linhares & Ghini, 2001; Brent
& Hollomon, 2007; Reis et al., 2010). Sua natureza
é poligênica, resultante de uma interação positiva
de vários genes, contribuindo para diferentes níveis
de resistência (Sanglard et al., 1998b; Lupetti et al.,
2002). Tipicamente, o aumento da dose do fungicida
ou sua substituição por produtos de maior ativida-
de intrínseca são muitas vezes suficientes para obter
novamente o controle em situações de sensibilidade
reduzida (Brannen & Schnabel, 2006; Holb & Schna-
bel, 2007; Chen et al., 2012; Oliver & Hewitt, 2014).
Em M. fructicola, o mecanismo mais conheci-
do de resistência aos triazóis é a superexpressão do
gene MfCyp51 que codifica a enzima C14α desme-
tilase, alvo deste fungicida. Estudos demonstraram
que a presença de uma inserção de 65-pb (elemento
Mona) na região montante deste mesmo gene, pro-
move o aumento do número de cópias da enzima
149
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
alvo para triazóis (Luo et al., 2008; Luo & Schnabel,
2008a). O elemento Mona foi encontrado em vários
isolados de M. fructicola em importantes regiões
produtoras de pêssegos nos Estados Unidos, sendo
importante monitorá-lo na genotipagem de isolados
resistentes para estas populações (Burnett et al.,
2010; Villani & Cox, 2011; Chen et al., 2013b). Villani
& Cox (2011) acreditam que o elemento Mona con-
tribua apenas com uma parte da resistência quanti-
tativa em resposta ao uso de triazóis. Os mesmos au-
tores demonstraram que nem sempre a presença de
Mona é associada à baixa sensibilidade observada in
vitro. No Brasil, o elemento Mona não está relacio-
nado aos fenótipos resistentes de M. fructicola ao
fungicida tebuconazol (Morales et al., 2013). Apesar
disso, estudos mais recentes detectaram o aumento
da expressão do MfCyp51 em populações do Brasil,
após indução subletal de tebuconazol em micélio
de M. fructicola (Lichtemberg et al., 2016b). Porém
as alterações do gene (inserções) que regulam esta
expressão, assim como mutações ainda estão sendo
estudadas.
A alteração do alvo de ação ou superexpres-
são genética por mutação é um poderoso mecanis-
mo de resistência aos fungicidas (Oliver & Hewitt,
2014), mas nem sempre resultam em corresponden-
te troca de aminoácidos ligados aos fenótipos resis-
tentes (Parker et al., 2006; Cox et al., 2007). Kelly &
Kelly (2013) em revisão sobre o citocromo P450, re-
latam que as mutações do gene Cyp em diferentes
organismos, podem estar relacionadas à perda da
afinidade e expressão deste gene, promovidas por
uma ou mais modificações genéticas. Na China, iso-
lados de M. fructicola com fenótipos resistentes ao
fungicida IDM SYP-Z048 (derivado do oxazol) foram
relacionados aos genótipos contendo a mutação
Y136F da MfCyp51, causando a substituição do ami-
noácido tirosina pela fenilalanina (Chen et al., 2012).
No mesmo estudo, outras duas substituições foram
observadas pela presença de serina nas posições
161 e 490 de isolados de fenótipo resistente e sensí-
vel respectivamente.
As proteínas do ABC (do inglês ATP-binding
cassete transporter) e maiores facilitadores (do in-
glês major facilitator - MF) representam as duas clas-
ses mais importantes de transportadores de drogas
envolvidos na resistência de fungos aos azóis. Ape-
sar de essas classes utilizarem a energia do ATP para
sua ativação, o MF age pelo efluxo de substâncias
150 RAPP - Volume 24, 2016
através das membranas, enquanto as proteínas ABC
incluem ambos os mecanismos de bombeamento,
influxo e efluxo (Theodoulou, 2000; de Waard et al.,
2006; Shapiro et al., 2011). A resistência a algumas
drogas podem ser associada com a regulação ascen-
dente de genes codificando o efluxo de substâncias
da célula (Lupetti et al., 2002). Este mecanismo foi
estudado nas leveduras Candida albicans, C. glabra-
ta, e Saccharomyces cerevisiae, e fungos Aspergillus
nidulants, Magnaphorte grisea, e Mycosphaerella
graminicola, servindo de referência para estudos em
M. fructicola (Theodoulou, 2000; Lupetti et al., 2002;
Schnabel et al., 2003; de Waard et al., 2006; Shapiro
et al., 2011).
Com a clonagem do gene MfABC1 (4380-pb)
em M. fructicola, (Schnabel et al., 2003) demons-
traram que fenótipos com sensibilidade reduzida
aos triazóis miclobutanil e propiconazol apresentam
maiores números de cópias deste gene do que isola-
dos sensíveis, ambos tratados com doses crescentes
dos fungicidas. Além disso, esse estudo revelou que
o transporte de drogas em M. fructicola é mediado
pela proteína ABC do gene MfABC1, a partir da identi-
ficação de sequências de aminoácidos e sua similari-
dade com sequências codificadas por gene similares
em outros patógenos (Schnabel et al., 2003). Sendo
assim, além do gene MfCyp51, o gene MfABC1 pas-
sou a ser considerado como um dos mecanismos de
resistência para M. fructicola (Schnabel et al., 2003;
Luo & Schnabel, 2008a). Em alguns isolados brasilei-
ros resistentes, o gene MfABC1 apresentou aumen-
to do número de cópias, após a indução de 0,5 e 1
µg/ml de tebuconazol, porém com uma frequência
inferior à expressão obtida pelo gene MfCyp51, de-
monstrando ter menor importância na resistência de
M. fructicola ao fungicida triazol (Lichtemberg et al.,
2016b).
Em isolados com resistência múltipla a tria-
zóis e benzimidazóis, o sequenciamento do gene
MfCyp51 e o estudo da expressão do gene MfABC1
não evidenciaram nenhuma relação ao fenótipo en-
contrado, sugerindo a existência de outros meca-
nismos afetando a sensibilidade de isolados de M.
fructicola aos fungicidas triazóis (Chen et al., 2013a).
Para isolados chineses de M. fructicola, Chen et al.
(2012) investigaram as mutações pontuais nos genes
Erg2 e Erg24, codificando as enzimas Δ8à Δ7 este-
rol isomerase e C14 esterol redutase (EBI classe II), e
Erg27, codificando enzima 3-keto redutase (EBI clas-
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
se III), como possíveis mecanismos alternativos para
os triazóis, porém nenhuma alteração foi observada.
O certo é que diferentes eventos moleculares acon-
tecem em diferentes partes do mundo moldando o
tipo de mecanismo presente. Dessa forma, novos es-
tudos deverão surgir para esclarecer os mecanismos
determinantes na resistência de espécies de Monili-
nia aos triazóis. Enquanto isso métodos convencio-
nais se mantêm indispensáveis no monitoramento
da resistência.
3.2. Fungicidas IQes: O principal mecanismo
relacionado com resistência de fungos a fungicidas
de sítio-específico, como as estrobilurinas, é a alte-
ração (mutação) no sítio de ação. A maior parte dos
relatos de isolados resistentes a estrobilurinas indica
que a mutação é monogênica (Sierotzki et al., 2000;
Gisi et al., 2002; Bolton et al., 2013). As mutações em
um único ponto no gene do citocromo b (cyt b) são
os mecanismos mais associados com a resistência
às estrobilurinas. A mutação que resulta em maior
fator de resistência (completa ou qualitativa), asso-
ciada à total falta de controle da doença no campo,
corresponde à mudança de glicina para alanina no
códon 143 (G143A). Essa mutação não produz efei-
to negativo na atividade enzimática e, consequen-
temente, na adaptabilidade dos isolados (Gisi et al.,
2002; Leadbeater, 2012). Outras substituições, como
a fenilalanina para leucina no códon 129 (F129L) e
de glicina para arginina no códon 137 (G137R), são
relatadas no cyt b, mas expressam moderada (par-
cial) resistência, de tal forma que os patógenos com
este tipo de mutação são controlados com as do-
ses recomendadas de estrobilurina (Sierotzki et al.,
2007; Fernández-Ortuño et al., 2008).
Além das mutações há outros mecanismos
associados à redução na sensibilidade dos patóge-
nos às estrobilurinas (resistência quantitativa), os
quais podem não conferir a condição de resistência
prática (Köller et al., 2004), como a via alternativa de
respiração (via AOX) e o efluxo do fungicida, entre
outros (Dowling, 2015). Esses mecanismos necessi-
tam de mais estudos, principalmente em patógenos
que possuem o íntron tipo I, imediatamente após o
códon 143 no cyt b. Nesses patógenos, a substitui-
ção do nucleotídeo no códon 143 impede que ocorra
o splicing para a formação do RNA mensageiro (Si-
erotzki, 2015). Como consequência, ocorre deficiên-
cia no processo de síntese de proteína, a qual é letal
ao fungo e a resistência não se desenvolve (Fernán-
RAPP - Volume 24, 2016
dez-Ortuño et al., 2008). No Brasil. isolados de M.
fructicola apresentaram o íntron do tipo I após o có-
don 143 (Primiano, 2015). Essa característica parece
ser frequente na espécie M. fructicola, pois também
foi descrita em isolados dos Estados Unidos, China,
Austrália e Nova Zelândia (Luo et al., 2010; Miess-
ner & Stammler, 2010; Hily et al., 2011). Outros
fungos também apresentaram esse mesmo íntron,
como diferentes espécies de Puccinia (Grasso et al.,
2006a), Phakopsora pachyrhizi (Grasso et al., 2006b)
e Phyllosticta spp. (Stammler et al., 2013; Hincapie
et al., 2014). Há raros casos em que a estrutura ín-
tron-exon do cyt b do patógeno é polimórfica, ou
seja a população pode conter indivíduos que podem
ou não apresentar esse íntron, como por exemplo
em Botrytis cinerea (Banno et al., 2009). Os isolados
com a introdução íntron perdem a capacidade de
desenvolver resistência à azoxistrobina baseada na
mutação do G143A (Yin et al., 2012).
3.2. Fungicidas MBCs: No grupo dos fungi-
cidas MBCs as mutações que ocorrem no gene da
beta-tubulina levam a alterações nas sequências de
aminoácidos modificando os sítios de ligação das
proteínas. Essas mutações reduzem ou impedem a
ligação dos fungicidas benzimidazóis e tiofanatos a
beta-tubulina.
Mutações nos códons 50, 167, 198, 200 e
240 do gene da beta-tubulina já foram relatadas em
diversos fitopatógenos como Sclerotinia sclerotio-
rum (Lehner et al., 2015), Botrytis cinerea (Malan-
drakis et al., 2011), Neurospora crassa (Orbach et
al., 1986), Cladobotryum dendroides (McKay et al.,
1998), Penicillium digitatum (Schmidt et al., 2006),
P. expansum (Baraldi et al., 2003), Venturia inaequa-
lis, V. pirina (Koenraadt et al., 1992; Quello et al.,
2010), Tapesia acuformis, T. yallundae (Albertini et
al., 1999). Em Monilinia, mutações no gene beta-
-tubulina estão correlacionadas à resistência aos
MBCs. Substituições de nucleotídeos nos códons 6
e 198 foram associadas com diferentes padrões de
resistência em M. fructicola (Ma et al., 2003). No có-
don 6, a substituição de uma de citosina por timi-
na (CAT → TAT) codifica o aminoácido tirosina (TAT)
no lugar de histidina (CAT), conferindo o fenótipo
de baixa resistência (Low resistance - LR). No códon
198, a troca de adenina por citosina (GAA → GCA)
resulta em alanina (GCA) ao invés de ácido glutâmi-
co (GAA), caracterizando o padrão de alta resistência
(High resistance – HR). A partir destas observações,
151
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
foi desenvolvida uma PCR específica para diferenciar
os dois padrões de resistência. Fenótipos sensíveis
apresentam os nucleotídeos CAT e GAA nos códons 6
e 198, respectivamente. Em LR, observa-se no códon
6 a sequência TAT enquanto que em HR, no códon
198 existe a sequência GCA. Na população brasileira
foram identificados indivíduos com padrões de resis-
tência e mutações já descritas nos códon nos códons
6 e 198, com maior frequência de isolados com baixa
resistência (2,5% em HR e 35,9% LR) (May De Mio et
al., 2011).
A mutação E198A no gene da beta-tubulina
em M. fructicola foi descrita em isolados da Carolina
do Sul nos Estados Unidos (Zhu et al., 2010). A mes-
ma mutação foi igualmente observada em isolados
da China (Chen et al., 2014) e da Europa (Weger et
al., 2011). Ma et al. (2005) em estudo com isolados
da Califórnia, relataram que uma mutação no códon
240, em M. laxa, leva a substituição de uma leucina
por fenilalanina, conferindo baixa resistência a be-
nomil. Em M. laxa de pomares das regiões central e
norte da Grécia, mutação no códon 198, foi relacio-
nada a alta resistência (Malandrakis et al., 2011).
4. Métodos de detecção de isolados resistentes ou
com baixa sensibilidade aos fungicidas
O monitoramento da resistência é funda-
mental para o acompanhamento da eficiência dos
fungicidas, revelando mudanças na sensibilidade de
patógenos antes que a falha de controle no campo
apareça (Brent & Hollomon, 2007; Yuan et al., 2013).
Uma vez detectada a mudança de sensibilidade em
populações de patógeno, novas recomendações e
estratégias para o uso de fungicidas devem ser su-
geridas. A sensibilidade inicial de uma população de
patógenos, anterior ao uso de um determinado fun-
gicida, é chamada de linha-base (do inglês baseline),
sendo esta importante para o estabelecimento de
um programa de monitoramento da resistência ao
longo do tempo (Russell, 2004).
4.1. Métodos convencionais
A redução na sensibilidade a um fungicida
pode ser monitorada in vitro antes mesmo de ocorrer
falha no controle da doença (Ghini & Kimati, 2000).
Para esse monitoramento, os níveis de resistência
podem ser quantificados por curvas de dose-res-
posta com diferentes concentrações do fungicida ou
por uma concentração discriminatória (também co-
152 RAPP - Volume 24, 2016
nhecida por concentração mínima inibitória – CMI)
que inibe 100 % do desenvolvimento dos isolados
sensíveis, discriminando-os dos isolados resistentes
que apresentam crescimento (Angelini et al., 2015).
Com as curvas de dose-resposta, é possível estimar
a concentração efetiva capaz de inibir 50 % (CE50) do
diâmetro micelial ou da germinação dos esporos do
fungo e, com os valores de CE50 de diferentes isola-
dos e de diferentes anos, comparar se está ocorren-
do uma mudança na sensibilidade do patógeno ao
fungicida, como observado em isolados de M. fructi-
cola (Russell, 2004; May De Mio et al., 2011). Tanto
o CE50 como o CMI podem ser obtidos por avaliações
de diâmetro micelial ou de germinação de esporos.
A definição de qual variável (crescimento micelial ou
germinação) utilizar depende do modo de ação do
fungicida (Olaya, 2011).
4.1.1. IDMs: Métodos convencionais são
amplamente utilizados no monitoramento da sen-
sibilidade de espécies de Monilinia para diversos
fungicidas do grupo IDM nos Estados Unidos (Wil-
cox & Burr, 1994; Penrose & Senn, 1995; Zehr et al.,
1999; Schnabel et al., 2004), Brasil (May De Mio et
al., 2011; Lichtemberg et al., 2016a), China (Chen et
al., 2012; Yuan et al., 2013) e Nova Zelândia (Elmer
et al., 1992). Em M. fructicola a CE50 do crescimento
micelial é utilizada para monitorar níveis de resis-
tência a diversos fungicidas pertencentes aos IDMs
(Braithwaite et al., 1995; Zehr et al., 1999; Schnabel
et al., 2004; Yoshimura et al., 2004; May De Mio et
al., 2011; Lichtemberg et al., 2016a).
O método da dose discriminatória é muito
utilizado pela sua praticidade, reduz significante-
mente a quantidade de unidades experimentais, tor-
nando as avaliações mais rápidas em comparação ao
método anterior (para um mesmo número de isola-
dos testados). Este método inclui o uso de uma única
dose que pode declarar se um isolado é resistente ou
sensível a um determinado produto (Russell, 2004).
O método consiste na transferência de discos de mi-
célio para duas placas, uma contendo o fungicida na
dose discriminatória e a outra sem fungicida (contro-
le). Após o período de incubação, deve-se calcular o
valor de crescimento relativo (CR), dado pela razão
entre o diâmetro da colônia na dose discriminatória
e o diâmetro da colônia na ausência do fungicida,
multiplicando este valor por 100. Com o valor do CR
é possível determinar o fenótipo dos isolados testa-
dos. Porém, pequenas modificações deste método
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
são comumente observadas em diferentes estudos
com M. fructicola. Russell (2004) recomenda que CR
maiores de 50% sirvam para determinar fenótipos
resistentes, sendo esta referência utilizada por Cox
et al. (2007), Amiri et al. (2009), Zhu et al. (2012) e
Lichtemberg et al. (2016a). Cox et al. (2009) e Villani
& Cox (2011) determinaram que valores de CR res-
pectivamente maiores a 75% e 30% seriam utilizados
para determinar fenótipos resistentes, enquanto va-
lores respectivamente abaixo de 25% e 10% deter-
minariam fenótipos sensíveis. Os mesmos autores
ainda classificaram isolados com CR entre os inter-
valos de fenótipos resistentes e sensíveis como re-
sistência alterada ou intermediaria. Existem diferen-
tes razões pelas quais os limites de classificação dos
fenótipos variam. Chen et al. (2013a) justificam que
a utilização de CR>30% para fenótipos resistentes
foi determinado para compensar a instabilidade da
sensibilidade causada pelo armazenamento e trans-
ferências sucessivas dos isolados. De acordo com Li-
chtemberg et al. (2016a) o uso do método da dose
discriminatórias auxilia no processo de seleção fenó-
tipos resistentes, mas devido à natureza qualitativa
de resistência dos IDMs este método pode ocasio-
nar pequenos erros de classificação. Outros fatores
que devem ser considerados na utilização da dose
discriminatória são: a atividade intrínseca de cada
produto (Holb & Schnabel, 2007; Yuan et al., 2013)
e a especificidade da dose discriminatória para a po-
pulação na qual está sendo estudada.
Métodos alternativos foram propostos para
avaliação da sensibilidade de isolados de M. fructi-
cola (Förster et al., 2004; Amiri et al., 2008; Cox et
al., 2009). Entre estes, destacam-se os métodos do
‘tubo de batom’ (lipbalm tube), ‘cotonete’ (swab) e
‘tubo’ (tube), que foram desenvolvidos por Amiri et
al. (2008) para aplicação em campo, evitando assim
a excessiva demanda de tempo e material dos méto-
dos convencionais. Destes métodos citados, apenas
o método do ‘tubo de batom’ mostrou resultados
similares aos tradicionais no estudo da resistência
de M. fructicola para propiconazol, sendo posterior-
mente validado em campo (Amiri et al., 2009). O
teste da resazurina utiliza um corante azul indicador
de óxido-redução em ensaios de viabilidade celular.
Este método foi utilizado por (Cox et al., 2009) re-
sultando em alto e significante valor de correlação
com o método da dose discriminatória para o triazol
fenbuconazol. O método do diluição em gradiente
RAPP - Volume 24, 2016
espiral (do inglês spiral grade dilution, descrito 4.1.2
IQes) foi utilizado por Janisiewicz et al. (2013) para
avaliar a sensibilidade de isolados de M. fructicola ao
fungicida fenbuconazol, comprovando a efetividade
deste processo estabelecido há mais de uma década.
4.1.2. IQes: Para os IQes, a etapa de germi-
nação dos esporos (Figura 3) é o estágio de desen-
volvimento do fungo com maior sensibilidade, pois é
a fase altamente dependente de energia (produzida
na respiração) para o desenvolvimento do patóge-
no (Oliver & Hewitt, 2014; Sierotzki, 2015). Apesar
disso, há diversos trabalhos que utilizam o cresci-
mento micelial como variável de avaliação dos IQes,
como para Botrytis cinerea (Banno et al., 2009; Kim
& Xiao, 2011; Fernández-Ortuño et al., 2014), Colle-
totrichum siamense, Sclerotinia sclerotiorum (Liang
et al., 2015) e M. fructicola (Schnabel et al., 2003).
Os experimentos de dose-resposta por ava-
liação de diâmetro micelial ou germinação dos es-
poros são geralmente realizados em diferentes pla-
cas de Petri contendo diferentes concentrações de
fungicidas difusos no meio de cultura. Há variações
das técnicas, como a diluição em gradiente espiral
(Figura 4A), na qual M. fructicola foi um dos patóge-
nos utilizados para validar o método com diferentes
fungicidas: diclorana, fludioxonil, fenehexamida e
tebuconazol (Förster et al., 2004). Para esse méto-
do, diferentes concentrações de fungicidas são dis-
tribuídas em espiral numa mesma placa formando
um gradiente de concentrações, no qual no centro
há as maiores concentrações e nos bordos as meno-
res (Figura 4B). Esporos do patógeno são incubados
em tiras de celofane ou em meio de cultura e, quan-
do apresentarem crescimento micelial uniforme, es-
sas tiras são transferidas para as placas com e sem
fungicida, de forma que o fungo esteja em contato
com todas as diferentes concentrações. Comparan-
do com o crescimento do fungo a partir da tira no
meio sem fungicida, com esta técnica é possível de-
terminar a concentração efetiva capaz de inibir 50 %
do diâmetro micelial (Figura 4C) de uma forma mais
rápida, econômica e precisa (Förster et al., 2004;
Amiri et al., 2014). Outro método para quantificar
a sensibilidade dos fungos aos fungicidas de forma
rápida é o da microtitulação com presença ou ausên-
cia do indicador de respiração resazurina (já descri-
to no item anterior), no qual a avaliação é realizada
em espectrofotômetro (Cox et al., 2009; Vega et al.,
2012). Em todos os métodos, o meio de cultura, a
153
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Figura 3. Avaliação da porcentagem de germinação de isolados Monilinia fructicola com alta (A e B) e baixa (C e D)
sensibilidade à azoxistrobina. Placas de poliestireno contendo meio de cultura sem (A e C) e com (B e D) 0,8 μg.mL-1 de
azoxistrobina e 100 μg.mL-1 de ácido salicilhidroxâmico (SHAM).

densidade de esporos, o período de incubação e o
dia de avaliação devem ser otimizados para obter o
resultado mais coerente. Uma vez padronizado, esse
protocolo deverá ser mantido (Förster et al., 2004;
Cox et al., 2009).
Como os IQes atuam em um processo espe-
cífico da respiração, para os experimentos in vitro
recomenda-se adicionar o ácido salicilhidroxâmico
(SHAM), a fim de suprimir o uso da via alternativa
de respiração (via AOX). A importância da via AOX
in vivo é desconhecida, mas há a hipótese de que
os compostos antioxidantes das plantas liberados
durante o processo de infecção silenciam os genes
responsáveis por essa via (Ma & Michailides, 2005;
Fernández-Ortuño et al., 2008). Para trabalhos rea-
lizados com M. fructicola, recomenda-se dissolver
o SHAM em metanol e ajustar a concentração para
100 µg. mL-1 de meio de cultura. Nesta concentra-
ção, ele não interfere diretamente na germinação
de esporos ou crescimento micelial de M. fructicola
(Schnabel et al., 2003).
Além dos experimentos in vitro, a confirma-
ção da resistência prática, ou seja, quando ocorre a
falha no controle da doença em condições de campo
(Ghini & Kimati, 2000), pode ser realizada em plan-
tas ou em frutos tratados com a concentração reco-
mendada para o produtor (Figura 5). Por exemplo,
frutos com ferimento e tratados com azoxistrobina
inoculados com isolados resistentes de M. fructicola
a esse fungicida apresentaram sintomas de podri-
dão parda, enquanto que aqueles inoculados com
isolados sensíveis não apresentaram frutos doentes
(Amiri et al., 2010; Chen et al., 2014).
4.1.3. MBCs: A avaliação da sensibilidade a
MBCs é tradicionalmente realizada por meio da ava-
liação de crescimento micelial em placas de Petri

154 RAPP - Volume 24, 2016

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Figura 4. Técnica da diluição em gradiente espiral: equipamento – spiral plater, em inglês (A), placa com meio de cultu-
ra e corante para observar a distribuição do produto em espiral (B) e placa com meio de cultura com fungicida e com
quatro tiras de meio de cultura contendo o patógeno. Para cada isolado, foram depositadas tiras opostas na placa (C).
Foto de J. S. Baggio.

brasileira ao tiofanato-metílico. Isolados com EC50 <1

μg/mL, de 1 a 30 μg/mL e ≥ 30 μg/mL, foram consi-
derados S, LR e HR respectivamente.

4.2. Métodos moleculares

A liar os riscos associados ao uso de um determinado
B zimas de restrição para detectar sua presença (Luo
Figura 5. Resistência prática de isolados Monilinia fructi-
cola com alta (A) e baixa (B) sensibilidade à azoxistrobi-
na. Frutos foram inoculados com suspensão de esporos
e sem ferimento. Frutos do lado esquerdo foram imersos
somente em água e frutos do lado direito foram imersos
na concentração recomendada no Programa de Produção
Integrado de Pêssego (10 g do ingrediente ativo por 100
L de água).
com meio de cultura acrescido do ingrediente ativo
a ser testado. Ma et al. (2003) utilizaram doses de 1 e
500 μg/mL de benomil, para diferenciar isolados de
Monilinia pouco resistentes, do termo inglês – Low
Resistant (LR) e altamente resistentes, do termo em
inglês High Resistant (HR). May De Mio et al. (2011)
utilizaram doses de 1μg/mL para diferenciar isolados
sensíveis e resistentes de M. fructicola na população
4.2.1 IDMs: Quando relação entre fenótipo e
genótipo é conhecida, os métodos moleculares po-
dem trazer resultados rápidos e precisos para ava-
fungicida. Porém, a utilização desta tecnologia de-
pende da identificação prévia dos mecanismos que
conferem resistência ao patógeno estudado (Russell,
2004).
Nos Estados Unidos, a inserção genética
Mona, presente em isolados de M. fructicola com
fenótipos resistentes a triazóis, permitiu o desenvol-
vimento de um método de PCR e de digestão por en-
et al., 2008). Para o método de PCR, a amplificação
da região montante do gene MfCyp51, utilizando os
primers INS65-F e INS65-R descritos por Luo et al.
(2008), devem gerar bandas de 376-pb em isolados
contendo Mona (triazol-resistente) ou 311-pb em
isolados sem o Mona (sensíveis). Devido à curta dis-
tância entre o tamanho das bandas (65-pb) geradas
em isolados resistentes e sensíveis, sua diferencia-
ção em gel de agarose pode ser comprometida. Para
melhor visualização, pode-se utilizar a enzima de
restrição BsrBI, que resulta em dois fragmentos que
permitem melhor distinção entre isolados.
A mutação Y136F do gene MfCyp51 em M.
fructicola conferindo genótipos resistentes em iso-
lados chineses, corresponde a um polimorfismo de
nucleotídeo único (do inglês single nucleotide poly-

RAPP - Volume 24, 2016 155

 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
morphism – SNP) que permite o desenvolvimento de
técnicas de PCR de alelo-específico (do inglês allele-
-specific AS-PCR) para sua rápida diagnose. Entre as
aplicações da AS-PCR destaca-se a diferenciação de
um segundo nucleotídeo (em inglês mismatch) que
aumenta a especificidade entre primer e genótipo de
interesse (Latorra et al., 2003). Avenot et al. (2008)
utilizaram esta técnica para desenvolver uma meto-
dologia simples de identificação da mutação H277Y
do gene AaSdhB em isolados de Alternaria alterna-
ta resistentes aos fungicidas inibidores da succinato
desidrogenase (SDHI). Na ausência de técnicas rápi-
das para identificar mutações pontuais, o sequencia-
mento destas regiões contendo a mutação pode ser
realizado e comparado a sequencias cadastradas em
bancos de dados.
Adicionalmente, o PCR de tempo real permite
quantificar a expressão gênica a partir do isolamento
de mRNA e síntese de cDNA para isolados onde os
promotores dessa superexpressão não foram des-
cobertos. Para quantificar a expressão gênica, deve-
-se aplicar o método da curva padrão, assim como
utilizado por Ma et al. (2006) em Blumeriella jaapii,
ou o método do Ct comparativo, estabelecido por
Schmittgen & Livak (2008) e aplicado em M. fructi-
cola por Luo & Schnabel (2008a) e Lichtemberg et al.
(2016b). O método da superexpressão gênica pode
ser comparado entre amostras com e sem indução
de doses subletais de fungicidas, ou comparando
fenótipos sensíveis contra resistentes, assim como
sugerido por Livak & Schmittgen (2001).
4.2.2. IQes: Com o avanço das técnicas mo-
leculares, a identificação e/ou quantificação da mu-
tação responsável pela resistência é cada vez mais
comum (Karaoglanidis et al., 2011; Michalecka et al.,
2011; Finger et al., 2014). Para identificar a mutação
no cyt b envolvida na resistência aos IQes, há dife-
rentes métodos moleculares, como PCR, PCR quan-
titativo, sequenciamento e digestão por enzimas de
restrição (Leroux et al., 2010; Karaoglanidis et al.,
2011; Hincapie et al., 2014; Sierotzki, 2015). O par
de primers utilizado pode não amplificar todos os có-
dons alvos de estudo, por exemplo para amplificar a
região do cytb de M. fructicola que contém o códon
129 utiliza-se o par de primers cola0-fwd (5´- AGAG-
CACCTAGAACATTAGTT- 3´) com o primer cola1-rev
(5´- AACCAAAGCTTGAACCCGCT – 3´), enquanto que
o primer cola2-fwd (5´ - CGCGACAGGCTGGGTCACT-
GA - 3´) é utilizado em par com colaexon4-rev (5´-
156 RAPP - Volume 24, 2016
AACTCAACAATATCACCTCCAATTCAT – 3´) para am-
plificar os códons 137 e 143 e o íntron de 1166-pb
(Hily et al., 2011; Primiano, 2015). A identificação da
mutação G143A em um determinado isolado é, de
modo geral, altamente correlacionada com o fenó-
tipo resistente, no qual a resistência é considerada
qualitativa (Sierotzki, 2015). Para o caso de M. fructi-
cola, outras mutações nos códons 129 e 137 não fo-
ram observadas nos isolados resistentes (número de
acesso KM610207) (Primiano, 2015). Essas análises
moleculares complementam os resultados obtidos
por métodos convencionais.
A digestão enzimática, no qual a enzima de
restrição reconhece o ponto de mutação relaciona-
do com a resistência, é recomendada como um novo
método, mais rápido e específico para monitorar a
resistência aos IQes (Leroux et al., 2010; Patel et al.,
2011). Entretanto, deve-se sempre comparar os re-
sultados com outros métodos, pois os isolados po-
dem apresentar heteroplasmia (por exemplo Colle-
totrichum gloeosporioides) ou polimorfismo do cyt
b (por exemplo Botrytis cinerea) e tanto os produtos
digeridos quanto os não digeridos aparecerão no gel
de agarose (Ishii, 2015). Nesse caso, é possível sepa-
rar os isolados baseando-se no número de pares de
base observado em gel de agarose, mas há necessi-
dade de conhecimento prévio para a interpretação
dos resultados. Isolados que apresentam o íntron
(no caso de Botrytis cinerea são 1205-pb) possuem
banda de 1765-pb e isolados que não possuem o ín-
tron podem não ter a mutação no códon 143 (apre-
sentam banda de 560-pb) ou apresentar a mutação
(a digestão enzimática resulta em duas bandas: uma
de 318-pb e outra de 242-pb (Leroux et al., 2010).
Apesar dessa tendência e de diferentes téc-
nicas moleculares, para alguns fitopatógenos, como
para M. fructicola, não é possível o uso dessa téc-
nica, pois até o momento não há conhecimento de
diferenças moleculares entre os isolados resistentes
e sensíveis (Luo et al., 2001; Hily et al., 2011; Primi-
ano, 2015). Uma redução na sensibilidade de forma
quantitativa e com uma mudança gradual é relacio-
nada com resistência poligênica, devido a “minor
genes” e esses são difíceis de serem detectados (An-
gelini et al., 2015). Assim, métodos convencionais
de avaliação, apesar de trabalhosos e demorados
quando comparados com os moleculares, são mais
recomendados para monitorar a sensibilidade des-
ses patógenos ao fungicida.
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
4.2.3. MBCs: Diversas metodologias conven-
cionais vêm sendo substituídas por metodologias
moleculares para estudos de resistência em espécies
de Monilinia. Estas estão cada vez mais eficientes,
sensíveis, simplificadas e acessíveis, podendo ser
inseridas na rotina laboratorial, otimizando tempo
e recursos para diagnósticos e monitoramentos na
área da fitopatologia. Uma vez que para MBCs subs-
tituições de nucleotídeos estão associadas à resis-
tência, as metodologias baseiam-se principalmente
na observação dos polimorfismos que diferenciam
os fenótipos de sensibilidade e resistência.
A PCR convencional tem sido eficaz para a
identificação de resistência a MBC em espécies de
Monilinia em diversos trabalhos. Baseia-se na utili-
zação de pares de primers específicos que permitem
a amplificação das regiões de mutações no gene da
beta-tubulina que conferem resistência aos isolados,
destacando-se as regiões do códon 6 e códon 198.
Ma et al. (2003) desenvolveu PCR específica para
diferenciar fenótipos de baixa resistência (low resis-
tance-LR) e de alta resistência (high resistance-HR).
May De Mio et al. (2011) utilizaram protocolo pro-
posto por Ma et al. (2003) associado ao crescimento
micelial para identificação do padrão de resistência
em isolados do Brasil.
Variações das técnicas de PCR, como PCR em
tempo real, utilizando-se sondas TaqMan e SYBRGre-
en vêm sendo utilizadas para a detecção de resistên-
cia aos MBC. Fan et al. (2014) desenvolveram reação
multiplex da PCR em tempo real utilizando sondas
MGB TaqMan marcadas com fluoróforos HEX e FAM
para identificação simultânea das mutações E198A
e H6Y. Luo et al. (2007) utilizaram SYBRGreen para
identificar isolados com mutação E198A, em popula-
ções de M. fructicola obtidas de frutos mumificados
de pêssegos, ameixas e nectarinas obtidos em dife-
rentes pomares na Califórnia. Segundo os autores,
a utilização desta metodologia de PCR é eficaz em
substituir os métodos convencionais para quantifica-
ção da resistência a benzimidazóis nas populações
do patógeno.
O sequenciamento do gene da beta-tubulina
tem sido uma ferramenta citada em diversos estu-
dos envolvendo resistência aos MBCs em espécies
de Monilinia. A obtenção das sequências de nucleo-
tídeos do gene da beta-tubulina, em associação com
experimentos in vitro, como crescimento micelial
em placa de Petri com doses conhecidas de fungicida
RAPP - Volume 24, 2016
têm possibilitado correlacionar as mutações existen-
tes nos padrões de resistência em espécies de Moni-
linia (Ma et al., 2003; Malandrakis et al., 2012; Chen
et al., 2013a; Chen et al., 2014). Com esta técnica é
possível também verificar quais os aminoácidos se-
rão codificados por cada códon, observando-se as-
sim as diferenças existentes entre isolados sensíveis
e resistentes. Em M. fructicola, isolados sensíveis
possuem as sequências CAT e GAA nos códons 6 e
códon 198, respectivamente. Substituições nestes
códons são responsáveis por fenótipos diferentes,
chamados de LR e HR. Em LR, observa-se no códon
6 a sequência TAT enquanto que em HR, no códon
198 existe a sequência GCA. Estas substituições re-
sultam em aminoácidos diferentes daqueles obser-
vados nos isolados sensíveis (Ma et al., 2003). Em M.
laxa, a análise da sequência do gene beta-tubulina
mostrou que a substituição de um par de base está
relacionada a baixa resistência. A substituição resul-
ta em uma mudança no códon 240 de CTC (leucina)
em isolados sensíveis, para TTC (fenilalanina) em iso-
lados com baixa resistência (Ma et al., 2005).
Outra técnica, a PCR-RFLP (do inglês Restric-
tion Fragment Length Polymorphism) também foi
utilizada na identificação de resistência. (Malan-
drakis et al., 2012) baseado no polimorfismo entre
genótipos, verificou que o sítio de reconhecimento
da endonuclease Eco31I (BsaI) inclui o códon 198,
e utilizou assim esta técnica para a identificação da
mutação E198A em M. laxa obtidas em pomares
das regiões norte e central da Grécia. O produto
da amplificação do gene da beta-tubulina por PCR
convencional de tamanho de 356-pb foi submetido
a digestão utilizando-se a enzima Eco31I (BsaI). Em
isolados sensíveis, a digestão gerou dois fragmen-
tos, de 243- e 113-pb. Já nos resistentes não houve
reconhecimento do sítio da enzima, e o fragmento
não foi separado. Os autores destacam que com esta
metodologia em algumas horas é possível verificar
a existência da resistência, enquanto que pelas me-
todologias de fungitoxicidade tradicionais são ne-
cessários dias para obtenção do resultado. Ma et al.
(2005) utilizaram a mesma metodologia, entretanto
estabeleceram protocolo com a enzima BSmAI. Esta
endonuclease foi capaz de reconhecer a sequência
GTCTCC no produto de PCR dos isolados sensíveis,
mas não reconhece a sequência GTTTCC no produto
de PCR dos isolados LR. A digestão do produto de
PCR em 2 fragmentos, com tamanho de 111- e 265-
157
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
pb, identificou desta forma isolados sensíveis, sem
mutação no códon 240, relacionada a isolados LR em
M. laxa.
5. Fatores afetando a seleção de isolados resisten-
tes
5.1. Intensidade de pressão de fungicida
A pressão de seleção exercida pelo fungicida
é um dos principais fatores para a elaboração de es-
tratégias antirresistência, compreendendo fatores
genéticos, biológicos e operacionais. É diretamente
proporcional às doses e frequência de aplicações, ao
grau de cobertura obtido e à persistência na cultura
ou no solo (Ghini & Kimati, 2000).
Os IDMs são considerados de médio ris-
co para o desenvolvimento de resistência, a qual
é quantitativa (Georgopoulos, 1985; FRAC, 2016).
Mesmo quando isolados mutantes foram induzidos
em laboratório não foi observada a resistência qua-
litativa (Köller & Scheinpflug, 1987). A população
do patógeno apresenta variações na sensibilidade,
as quais são inerentes à espécie em questão. A re-
sistência quantitativa é difícil de ser confirmada em
campo e mesmo em laboratório, devido à mudança
gradual que pode ocorrer na sensibilidade de isola-
dos a um determinado fungicida. Assim, para detec-
tar a mudança do comportamento da população é
necessário monitorar um grande número de isola-
dos em anos consecutivos de uma dada região. No
caso de M. fructicola, nos Estados Unidos, isolados
com sensibilidade reduzida ao propiconazol foram
observados após três anos de uso do fungicida, mas
a dificuldade no controle foi relatada apenas 5 anos
mais tarde (Zehr et al., 1999; Schnabel et al., 2004;
Brannen & Schnabel, 2006; Villani & Cox, 2011). No
estado da Califórnia, Estados Unidos, mesmo após
cinco anos de uso de tebuconazol, a distribuição da
sensibilidade de isolados de M. fructicola não foi al-
terada (Yoshimura et al., 2004). No Brasil, observou-
-se ampla distribuição da sensibilidade de isolados
de M. fructicola para o tebuconazol, e esta foi direta-
mente proporcional ao número de aplicações deste
fungicida (May De Mio et al., 2011).
Estas diferenças observadas entre os triazóis
(tebuconazol e propiconazol) podem ser explicadas
pelas variações na afinidade entre o ingrediente ati-
vo e o sítio de ação no patógeno. Esta afinidade de-
termina a intensidade da atividade fungitóxica entre
os fungicida e seus alvo de ação (Gadher et al., 1983).
158 RAPP - Volume 24, 2016
Outros estudos sobre o controle de M. fructicola in-
dicam maior atividade fungitóxica do ingrediente
ativo tebuconazol em comparação com outros tria-
zóis incluindo o propiconazol (Schnabel & Dai, 2004;
Holb & Schnabel, 2007). Portanto, essa afinidade
pode ser determinante para perda da sensibilidade
de patógenos aos fungicidas. Enquanto a resistência
aos triazóis se tornou comum em algumas localida-
des, em outras áreas diferentes populações de Mo-
nilinia se mantiveram predominantemente sensíveis
(Yoshimura et al., 2004; Stevic & Vuksa, 2006; Mar-
tini et al., 2012). Outras características como a adap-
tabilidade da população do patógenos em diferentes
ambientes, devem ser consideradas.
O risco de seleção de populações resistentes
está relacionado com características do fungicida,
como, por exemplo, modo de ação específico e alta
persistência da atividade, e características do pató-
geno, como alta variabilidade genética, esporulação
abundante, tempo de geração curto e alta adapta-
bilidade dos isolados resistentes (Leadbeater, 2012).
Além desses fatores, características da situação de
produção e do manejo das doenças, como pulveriza-
ções do mesmo ingrediente ativo ou grupo químico
de forma frequente para o controle de patógenos
também aumentam esse risco. A elevada frequência
do uso de IQes pode proporcionar uma mudança na
distribuição da sensibilidade do fungo ao fungicida,
selecionando os resistentes, e pode gerar menor di-
versidade genética na população (Grünwald et al.,
2006). Em populações de Plasmopara viticola expos-
tas a frequente aplicação de metade da dose de azo-
xistrobina foi observada uma redução na diversidade
genética (Matasci et al., 2008).
Experimentos para verificar a influência de
intensas pulverizações de um mesmo fungicida na
população patogênica devem ser realizados em mais
de uma safra e em diversas localidades para abran-
ger a ocorrência dos processos evolutivos, como a
mutação nos códons associados à resistência. Um
exemplo disso são isolados de Venturia inaequalis
resistentes à trifloxistrobina e ao cresoxim-metílico,
no qual foi observado que a resistência qualitativa
(governada por mutações no códon 143) foi precedi-
da pela quantitativa (Köller et al., 2004).
Os produtores, além dos setores públicos e
privados, devem seguir estratégias antirresistência
(ver item 6 para mais detalhes) para evitar que a ele-
vada frequência e a ampla área tratada com os IQes
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
proporcione uma alta e contínua pressão de seleção
na população do fitopatógeno, levando à seleção
de isolados resistentes (Sierotzki, 2015). O monito-
ramento de M. fructicola em relação ao fungicida
azoxistrobina deve ser contínuo e estratégias antir-
resistência devem ser intensificadas, pois a redução
na sensibilidade vem sido observada e os isolados
com sensibilidade reduzida apresentaram a mesma
adaptabilidade e habilidade competitiva que isola-
dos altamente sensíveis (May De Mio et al., 2011;
Primiano, 2015).
5.2 Adaptabilidade de isolados resistentes
O risco de aumento de uma população de
fungos resistentes a fungicidas é frequentemente as-
sociado a sua capacidade de adaptação na ausência
da pressão de seleção (Shaw, 1989; Reis et al., 2010).
A persistência de populações resistentes no campo
e sua implicação no controle de doença, estão rela-
cionadas à preservação e estabilidade da resistên-
cia, à adaptabilidade in vitro e in vivo e à habilidade
competitiva dos isolados na ausência do fungicida.
O conhecimento destas características é essencial
para estabelecer estratégias antirresistência, pois,
o mecanismo de resistência do fungo pode ou não
ocasionar um custo adaptativo para o patógeno. A
adaptabilidade, referida como fitness em inglês, de
um isolado resistente é sempre comparativa à de
isolados selvagens e consiste na capacidade do pa-
tógeno se desenvolver, reproduzir e sobreviver no
ambiente, na ausência do fungicida (Ghini & Kimati,
2000). Caso os isolados resistentes possuam uma
menor adaptabilidade que os sensíveis, a estabilida-
de da resistência e sua seleção em uma população
serão reduzidas, facilitando o manejo da doença com
estratégias antirresistência (Cox et al., 2007; Lead-
beater, 2012). Por outro lado, se isolados resistentes
apresentarem alta adaptabilidade em relação aos
sensíveis, o uso do fungicida é ameaçado e diferen-
tes estratégias antirresistência devem ser adotadas.
5.2.1. IDMs: A caracterização da adaptabilida-
de de isolados resistentes de M. fructicola aos tria-
zóis é importante para determinar o comportamen-
to dessa população frente a estratégias de manejo.
A seleção de isolados de M. fructicola resistentes a
triazóis em pomares de fruta de caroço é favorecida
pela sua exposição prolongada a fungicidas perten-
centes a esse grupo. Porém, o comportamento de
isolados com redução de sensibilidade ou resistentes
RAPP - Volume 24, 2016
ainda não é bem conhecido na ausência da pressão
de seleção. Já foi demonstrado que isolados de M.
fructicola com dupla-resistência (IDM-propiconazol
e SDHI-boscalida) não tiveram custo adaptativo nem
redução de sensibilidade ao IDM mesmo após cinco
transferências sucessivas na ausência dos fungicidas
(Chen et al., 2013b). Por outro lado estudos com
comparação de variáveis de crescimento vegetativo
e reprodutivo entre isolados de M. fructicola sensí-
veis e resistentes a triazóis evidenciaram vantagens
adaptativas pelo primeiro grupo (Nuninger-Ney et
al., 1989; Elmer et al., 1992; Cox et al., 2007).
Além da desvantagem demonstrada por iso-
lados IDM-resistentes, quanto sua capacidade de
crescimento micelial e esporulação, populações
mistas inoculadas em pêssegos após cinco gera-
ções, evidenciaram também baixa competitividade
dos isolados resistentes (Nuninger-Ney et al., 1989;
Lichtemberg, 2015). Como consequência, a popu-
lação mantida na ausência da pressão de fungicida
tende a retomar a sensibilidade original, favorecen-
do o uso de estratégias antirresistência (Cox et al.,
2007). No Brasil, também se observou que isolados
de M. fructicola com baixa sensibilidade a tebuco-
nazol apresentaram desvantagens frente a isolados
sensíveis quanto a sua capacidade de esporulação,
tamanho de lesão e período de incubação (Lichtem-
berg, 2015). Fato relevante é que esses dados foram
obtidos em condições controladas em laboratório,
assim estudos em campo devem ser realizados para
comprovar ou confirmar a relevância prática destes
estudos.
5.2.2. IQes: Isolados de M. fructicola com
sensibilidade reduzida à azoxistrobina apresentaram
resistência estável durante dez ciclos consecutivos,
na ausência do fungicida (Primiano, 2015), assim
como isolados resistentes de Magnaporthe grisea e
de Didymella bryoniae à azoxistrobina também apre-
sentaram resistência estável durante quatro ciclos
consecutivos da doença, na ausência do fungicida
(Avila-Adame & Köller, 2003; Finger et al., 2013).
Quando a resistência às estrobilurinas é go-
vernada por mutações no cyt b, principalmente a
G143A, não é esperada uma desvantagem adaptativa
nos isolados resistentes (Sierotzki, 2015). Na maioria
dos casos, o rearranjo no genoma mitocondrial de
fungos resistentes às estrobilurinas, por causa da
mutação, não afeta outros processos metabólicos
(Gisi et al., 2002). O comportamento da estabilida-
159
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
de da resistência à azoxistrobina em isolados sem a
mutação no cyt b foi pouco explorado na literatura e
o mecanismo responsável pela resistência a essa es-
trobilurina pode ou não ser influenciado pelas con-
secutivas transferências.
A adaptabilidade de isolados resistentes em
relação a sensíveis pode ser avaliada por meio de
métodos aplicados in vitro ou in vivo em cada isola-
do separadamente. Um conjunto de diferentes vari-
áveis pode ser utilizado para medir a adaptabilidade,
como, por exemplo, a taxa do crescimento micelial,
a esporulação, a germinação, a sensibilidade osmó-
tica, o período de latência, a incidência da doença e
o diâmetro da lesão (Baraldi et al., 2003; Luo & Sch-
nabel, 2008b; Karaoglanidis et al., 2011). Os estudos
in vivo são importantes, pois há casos em que os
isolados resistentes e sensíveis apresentam a mes-
ma adaptabilidade in vitro, mas exibem diferenças
in vivo, como isolados resistentes de Penicillium ex-
pansum a tiabendazol que apresentaram maior se-
veridade de infecção nos frutos do que os sensíveis,
apesar de possuírem o mesmo crescimento in vitro
(Baraldi et al., 2003). Essa diferença entre os estudos
in vivo e in vitro não foi observada nos isolados de M.
fructicola (Primiano, 2015) e de Alternaria alternata
(Karaoglanidis et al., 2011), no qual os isolados com
baixa sensibilidade à azoxistrobina apresentaram a
mesma adaptabilidade que os sensíveis
Outra forma de avaliar a adaptabilidade de
isolados com níveis diferentes de sensibilidade a
um determinado fungicida é confrontá-los por uma
ou mais gerações na ausência da pressão de sele-
ção. Nesse caso, mede-se a habilidade competitiva
dos isolados. Experimentalmente, promove-se uma
competição entre isolados resistentes e sensíveis,
misturando-os em proporções conhecidas e avalian-
do o comportamento resultante ao longo do tempo
(Pringle & Taylor, 2002; Ma & Uddin, 2009; Karao-
glanidis et al., 2011). Os testes de habilidade compe-
titiva entre isolados resistentes e sensíveis fornecem
outras informações sobre adaptabilidade, pois os
fungos fitopatogênicos podem apresentar estabili-
dade da resistência na ausência do fungicida quando
estudados isoladamente, por exemplo apresentam
maior taxa de crescimento ou maior reprodução,
mas não serem competitivos quando misturados
com isolados sensíveis, como visto em isolados de
Botrytis cinerea resistentes à piraclostrobina (Kim
& Xiao, 2011; Zhan & McDonald, 2013). Em muitos
160 RAPP - Volume 24, 2016
casos, os isolados resistentes a um determinado fun-
gicida são incapazes de competir com isolados sen-
síveis se houver redução ou ausência da pressão de
seleção (Oliver & Hewitt, 2014). A menor habilida-
de competitiva do fungo resistente, na ausência do
fungicida, já foi verificada em misturas de isolados
resistentes com sensíveis de Erysiphe graminis f. sp.
tritici a triadimefon (Almughrabi & Gray, 1995) e em
diferentes misturas entre um isolado resistente e um
isolado sensível de M. fructicola à dicarboximida, su-
gerindo uma desvantagem associada com a resistên-
cia (Almughrabi & Gray, 1995; Taeheon et al., 2001).
Os estudos de habilidade competitiva entre
isolados resistentes e sensíveis ao longo do tempo,
em diferentes gerações do patógeno, devem ser re-
alizados em condições com a maior homogeneidade
possível, por exemplo, ambiente com temperatura e
umidade controladas, idade do inóculo semelhante
e uso do mesmo cultivar. A mudança do cultivar en-
tre uma geração e outra pode influenciar o resultado
da competição entre os isolados (Zhan & McDonald,
2013). Ao utilizar o mesmo cultivar, o estado fisio-
lógico da planta ou do fruto também pode influen-
ciar no resultado, assim, uma alternativa para testes
em pós-colheita é a substituição de frutos in natura
por frutos processados, por exemplo pêssego enla-
tado (Lim et al., 2001; Cox et al., 2007; Pariaud et
al., 2009). Do ponto de vista prático, o uso de fru-
tos processados é vantajoso, pois permite que expe-
rimentos sejam conduzidos em qualquer época do
ano, uma vez que a maioria das culturas frutíferas
tem sua safra limitada a apenas alguns meses.
Apesar dos experimentos de habilidade com-
petitiva fornecerem informações que auxiliarão em
estratégias antirresistência, os métodos de avalia-
ção são limitados a um curto período de tempo e,
de modo geral, obtidos em ambiente controlado.
A competição em condições de campo, apesar de
relevante, é pouco utilizada. Há poucos estudos de
análise espaço-temporal e de persistência na safra e
na entressafra dos isolados resistentes e há necessi-
dade de se desenvolverem avaliações mais precisas
(Elmer et al., 1998; Zhan & McDonald, 2013).
5.2.3. MBCs: A resistência aos MBCs é con-
siderada do tipo qualitativa, uma vez que está asso-
ciada a um único gene. Neste caso, a adaptabilidade
de isolados resistentes tem sido semelhante a de
isolados sensíveis, Características como crescimento
micelial, esporulação, sensibilidade a altas tempera-
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
turas e severidade são variáveis avaliadas para quan-
tificar ou estudar a adaptabilidade em fungos.
Em M. fructicola, Ma et al. (2003) verificaram
que isolados LR e HR apresentaram diferentes fenó-
tipos de acordo com a temperatura de incubação em
meio de cultura com benomil. Em meio de cultura
com 500 μg do i.a./mL, isolados HR (Ec50 > 50 μg/
mL) não cresceram quando incubados a 31°C, mas
crescem a 10, 15 e 24°C. Isolados LR (Ec50= 0,61 a
0.96 μg /mL para benomil e Ec50= 2.34 a 6.42 μg /
mL para tiofanato metílico) não apresentaram cres-
cimento quanto incubados a 10 e 15°C em meio de
cultura acrescido de 1 μg do i.a./mL. Entretanto, es-
ses mesmos isolados cresceram a 24 e 31°C. Os au-
tores concluíram que isolados LR não apresentaram
resistência em baixas temperaturas (em torno de
15°C). Desta forma, como a temperatura na região
do Vale Central na Califórnia é de 6 a 15°C durante
a floração, o uso de MBCs poderia ser eficaz para o
controle de M. fructicola.
Egüen et al. (2015) observaram isolados de
M. fructicola com diferentes fenótipos de resistência
múltipla aos fungicidas tiofanato-metílico, iprodione
e ciproconazol. De acordo com resultados de testes
de competitividade, observou-se que indivíduos com
alguma resistência foram tão competitivos quanto
aqueles sensíveis aos três fungicidas. No geral, iso-
lados com resistência ao tiofanato-metílico eram
mais competitivos. O isolado resistente ao iprodione
e sensível aos demais e isolado triplamente sensível
foram os menos competitivos.
5.3. Resistência cruzada e múltipla
Um patógeno pode ser resistente a mais de
uma molécula do mesmo ou de diferentes grupos
químicos. O primeiro caso é denominado resistência
cruzada e o segundo, de resistência múltipla (Ghini
& Kimati, 2000).
5.3.1. IDMs: A resistência cruzada é comu-
mente observada nos fungicidas IDMs (Buchenauer,
1987; Köller & Scheinpflug, 1987; FRAC, 2016), es-
tendendo-se para todos componentes deste grupo
químico (Gisi et al., 2005). Devido à emergente resis-
tência de M. fructicola aos IDMs e sua popularidade
entre os produtores de frutas de caroço, é de grande
importância o conhecimento do grau de resistência
cruzada de uma população para o estabelecimen-
to de estratégias antirresistência (Penrose & Senn,
1995; Schnabel et al., 2004; Silva et al., 2011). No
RAPP - Volume 24, 2016
início da década de oitenta e mais recentemente,
Gilpatrick (1981) e Villani & Cox (2011) mostraram
similar frequência entre a sensibilidade de M. fruc-
ticola para fenbuconazol e propiconazol, indicando
possível correlação entre os fungicidas estudados.
No estado da Carolina do Sul (Estados Unidos), Sch-
nabel & Dai (2004) demonstraram que isolados de
M. fructicola com sensibilidade reduzida para miclo-
butanil, apresentaram significante correlação com a
sensibilidade para os fungicidas tebuconazol, pro-
piconazol e fenbuconazol. Na China, também ficou
demonstrada significante resistência cruzada entre o
fungicida IDM SYP-Z048 e propiconazol testados em
populações de M. fructicola (Chen et al., 2012). Na
Nova Zelândia, a resistência cruzada entre diversos
fungicidas IDMs foi observada em ensaios in vitro
para isolados de M. fructicola (Nuninger-Ney et al.,
1989; Braithwaite et al., 1995).
Quando a resistência cruzada foi estudada
entre duas diferentes classes de fungicidas inibido-
res da biossíntese do esterol (IBEs), observou-se que
todos isolados resistentes para IDM foram sensíveis
para morfolinas (Nuninger-Ney et al., 1989), corro-
borando as informações descritas pelo (FRAC, 2016)
para fungicidas deste mesmo modo de ação. Estudos
avaliando a sensibilidade de M. fructicola a diversos
grupos químicos, incluindo fungicidas com diferen-
tes modos de ação foram realizados em todo mundo
(Penrose & Senn, 1995; Yoshimura et al., 2004; Ste-
vic & Vuksa, 2006; May De Mio et al., 2011; Martini
et al., 2012). Porém, apenas recentemente foram
realizados estudos de resistência múltipla, incluindo
fungicidas de diferentes modos de ação utilizados
no controle da podridão parda em frutas de caroço
(Chen et al., 2012; Chen et al., 2013b; Chen et al.,
2013a).
Enquanto na China nenhuma resistência múl-
tipla foi encontrada entre IDMs e os fungicidas pro-
cimidona, azoxystrobina, carbendazim e pirimetanil,
para isolados de M. fructicola (Chen et al., 2012),
nos Estados Unidos novos fenótipos de M. fructicola
apresentando resistência múltipla foram observados
em testes conduzidos com IDMs, metil benzimida-
zol carbamato (MBC) e inibidores do succinato de-
sidrogenase (SDHI) (Chen et al., 2013b; Chen et al.,
2013a). No estudo da dupla resistência entre IDM
e MBC, Chen et al. (2013a) observaram que o ele-
mento Mona estava presente em todos isolados co-
letados na Carolina do Sul, mas ausente em isolados
161
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
coletados em outros estados americanos, com a hi-
pótese de que um segundo mecanismo esteja tam-
bém relacionado a este novo fenótipo. Segundo Oli-
ver & Hewitt (2014) os casos de resistência múltipla
são principalmente ligados a alterações no bombea-
mento de efluxo, capazes de restringir a absorção de
fungicidas de diferentes modos de ação.
No Brasil, ainda não foram realizados estudos
avaliando o grau de resistência cruzada dentro do
grupo dos IDMs ou mesmo a possibilidade da exis-
tência de fenótipos com resistência múltipla. Reco-
menda-se que futuros estudos em populações de M
fructicola do Brasil, além dos IDMs, sejam estudados
outros fungicidas e também outras moléculas com
potencial de futuro registro pelo Ministério da Agri-
cultura.
5.3.2 IQes: Como todas as moléculas do gru-
po dos IQes atuam no mesmo ponto da respiração
a resistência cruzada a mais de uma molécula deste
grupo pode ocorrer. Por exemplo, isolados de Cer-
cospora kikuchii resistentes à azoxistrobina também
mostraram resistência a piraclostrobina e a trifloxis-
trobina (Price et al., 2015). Pyricularia grisea (Olivei-
ra et al., 2015) e Alternaria alternata (Vega & Dewd-
ney, 2014) resistentes à azoxistrobina também foram
resistentes a piraclostrobina.
Apesar da mistura e da rotação de grupos
químicos de fungicidas serem estratégias antirresis-
tência, o número de pulverizações deve ser limita-
do, pois isolados com resistência múltipla podem ser
selecionados, dificultando cada vez mais o uso de
fungicidas dentro do manejo (Fernández-Ortuño et
al., 2015). Isolados de B. cinerea apresentaram resis-
tência múltipla a boscalida e a piraclostrobina (Kim &
Xiao, 2011) ou ao tiofanato-metílico e a piraclostro-
bina ou a mais de dois fungicidas (Fernández-Ortu-
ño et al., 2014). Estudos envolvendo esse patógeno
foram ampliados e detectou-se resistência múltipla
em um mesmo isolado a sete grupos químicos dife-
rentes: anilopirimidina, dicarboximida, benzimida-
zol, fenilpirrol, estrobilurina, hidroxianilida e inibidor
da succinato – desidrogenase (Fernández-Ortuño et
al., 2015).
5.3.3 MBCs: A partir do momento que ocorre
a resistência genética para qualquer um dos produ-
tos MBCs o uso dos demais também fica comprome-
tido, devido a resistência cruzada, o que já foi ob-
servado para espécies de Monilinia (Jones & Ehret,
1976; Ma et al., 2005; Malandrakis et al., 2012). O
162 RAPP - Volume 24, 2016
uso concomitante de MBCs e outros fungicidas, bem
como a alta frequência de aplicações para o controle
de podridão parda ou mesmo de outras doenças po-
dem contribuir para a ocorrência de resistência múl-
tipla. Alguns microrganismos têm apresentado esta
característica, sendo um desafio para o manejo de
variadas doenças. Em testes realizados com M. laxa,
não foi observada resistência múltipla entre MBCs
e outros fungicidas (Malandrakis et al., 2012). Em
M. fructicola, Egüen et al. (2015) encontraram em
isolados coletados de 2006 a 2010, com diferentes
fenótipos de resistência a tiofanato-metílico, ipro-
dione e ciproconazol, incluindo múltipla resistência
aos três fungicidas. Chen et al. (2013a) observaram
a existência de isolados de M. fructicola resistentes
a MBC e DMI em pomares comerciais de pêssego na
costa leste dos Estados Unidos.
6. Recomendação de Manejo e estratégia antirre-
sistência para Monilinia fructicola em frutíferas
Primeiramente a manutenção de boa fertili-
dade do solo, a poda de limpeza de inverno, a re-
moção de frutos mumificados do solo e das árvores
figuram entre as práticas culturais mais importantes
na redução do inóculo de M. fructicola dentro dos
pomares de frutas de caroço entre os diversos ciclos
de cultivo (Harvey et al., 1972; Ogawa et al., 1995).
Porém, é necessário garantir que as partes removi-
das da planta sejam devidamente destruídas, quei-
madas ou enterradas (Harvey et al., 1972; May De
Mio et al., 2004), evitando-se assim, o desenvolvi-
mento da fase perfeita do patógeno (formação de
apotécios) em frutos caídos no solo (Zehr, 1982) ou
ainda, a reativação das múmias nas árvores como
fontes de inóculo primário para infecções florais.
Entretanto, estes procedimentos, isoladamente, não
são suficientes para controlar a doença; por isso, re-
comenda-se, além das práticas culturais, a realização
de tratamento de inverno de natureza erradicante
com produtos à base de enxofre ou cobre, os quais
têm ação multisítio (Fortes & Martins, 1998). Duran-
te o ciclo vegetativo da cultura são recomendadas
pulverizações no período da floração e no período
da pré-colheita dos frutos, alternando ingredien-
tes ativos de diferentes grupos químicos e utilizan-
do produtos multisítio no manejo, conforme reco-
mendações do Ministério da Agricultura, Pecuária e
Abastecimento e/ou legislações específicas como as
do estado do Paraná. O número de pulverizações em
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)
cada fase dependerá do inóculo do ano anterior e do
clima; variando também entre as diferentes regiões
produtoras do Brasil.
Práticas de manejo de fungicida devem con-
siderar a pressão de seleção dos fungicidas sobre
a população dos patógenos (Elmer & Gaunt, 1986;
Köller & Scheinpflug, 1987; May De Mio et al., 2004).
O intenso uso de alguns fungicidas direcionados ao
controle da podridão parda, e também ao controle
das demais doenças no pessegueiro, nos diferentes
estados do Brasil, associado à rápida reprodução e
quantidade de propágulos que M. fructicola produz,
eleva o risco para redução da sensibilidade ou mes-
mo resistência deste patógeno aos fungicidas. Por-
tanto, o manejo desta doença deve considerar es-
tratégias antirresistência para que a frequência dos
isolados resistentes não aumente no campo.
O Comitê de Ações contra Resistência a Fun-
gicidas (FRAC - Fungicide Resistance Action Com-
mittee) é composto por diferentes empresas priva-
das de fungicidas e tem como objetivo fornecer as
diretrizes para o manejo da resistência a fungicidas
(http://www.frac.info/working-group/qol-fungici-
des/general-use-recommendations). Fungicidas dos
grupos IQes e MBCs são considerados de alto risco,
enquanto as IDMs são considerados de risco médio
para a seleção de resistência. No entanto, para todos
eles já houve relato de resistência cruzada entre as
suas moléculas para diferentes patógenos.
No geral algumas diretrizes devem ser segui-
das para evitar a seleção de isolados resistentes: uti-
lizar misturas de fungicidas (por exemplo, misturar
produtos de ação sistêmica com produtos residuais);
utilizar fungicidas mais específicos no início da epi-
demia (com o objetivo de reduzir a população do
patógeno) e fungicidas multisítio no final do ciclo da
cultura; utilizar a dose, a época e o intervalo de apli-
cação recomendados no rótulo; utilizar diferentes
métodos de controle de doenças (por exemplo, re-
sistência genética, controle cultural, biológico, entre
outros) quando disponíveis e apropriados; evitar uso
como erradicante e aumentar a diversidade de in-
gredientes ativos, como a rotação de fungicidas com
mecanismo de ação distintos (Bartlett et al., 2002).
O uso de fungicidas específicos em mistura ou
em alternância com outros fungicidas sistêmicos de
diferentes modos de ação é indicado como estraté-
gia antirresistência (Leadbeater, 2012). A alternância
de diferentes ingredientes ativos pode ser mais efe-
RAPP - Volume 24, 2016
tiva que a mistura quando houver um custo adapta-
tivo do isolado resistente a uma das moléculas, pois
a população desses isolados será mais facilmente
reduzida (Köller & Scheinpflug, 1987; Mikaberidze &
McDonald, 2015). No entanto, o uso preferencial de
misturas contendo IDMs é sugerido por Price et al.
(2015) no controle de M. fructicola, corroborando
observações realizadas por Holb & Schnabel (2008)
que relatam problemas relacionados ao uso alterna-
do de fungicida no controle da podridão parda em
locais onde isolados resistentes de M. fructicola exis-
tiam. Misturas de propiconazol com os fungicidas
benomil, captan, clorotalonil, ciprodinil e vinclozolin
resultaram em baixo sinergismo entre os produtos
testados em dois isolados de M. fructicola (Emery
et al., 2002). O uso preventivo de misturas conten-
do propiconazol e fungicida de enxofre resultou em
grande efeito sinergético, aliando excelente controle
e custo reduzido, sendo uma opção para o uso em
áreas mais difíceis de controlar a podridão parda
com IDM (Holb & Schnabel, 2008).
Para garantir a melhor controle de doenças
ainda deve ser considerado que ambos ingredientes
na mistura utilizem doses que promovam eficiência
similar (Oliver & Hewitt, 2014). Ainda assim, muita
contradição é encontrada quanto as vantagens de
utilizar misturas ou aplicações alternadas de fungici-
das. Ambas estratégias devem atrasar mas não evi-
tar o desenvolvimento da resistência (Brent & Hollo-
mon, 2007). Apesar das distintas opiniões, diversos
autores concordam que o uso de misturas comer-
cializadas pela indústria química, garante que pro-
dutores de fruta de caroço estejam implementando
estratégias que evitem o aumento da população re-
sistente (Staub & Sozzi, 1984; Köller & Scheinpflug,
1987; Brent & Hollomon, 2007).
Ao contrário dos Estados Unidos, produtos
registrados para o controle de M. fructicola na cul-
tura do pessegueiro no Brasil não incluem formula-
ções mistas (Tabela 1) podendo este fato resultar em
maiores dificuldades na implementação de estraté-
gias antirresistência. Entretanto, Lichtemberg et al.
(2016a) relataram o aumento da sensibilidade de
isolados de M. fructicola ao fungicida tebuconazol
nas principais áreas produtoras de pêssego do Brasil
comparando populações mais antigas com as atuais.
Os mesmos autores sugerem que estes resultados
estão relacionadas às modificações que ocorreram
nos programas de controle da podridão parda que
163
 Paulo dos Santos Faria Lichtemberg, et al. (145-173)

Tabela 1. Lista de fungicidas inibidores da biossíntese do ergosterol (IBE) registrados para o controle de Monilinia fruc-
ticola na cultura do pessegueiroa.
Nome do Grupo Grupo Químico Nome Comum Agrofitb SEAB-PRc California USAd
piperazina Triforina Sonet    
Ciproconazol     Inspire Super (l)e
Difenoconazol Score   Score (l), Quadris Top (l)e
Fenbuconazol     Indar (l)
Fungicidas
inibidores da Fluquinconazol Palisade Palisade (nl)  
desmetilação Flutriafol     Rhyme (rp)
(IDM) triazol
(SBI: Classe I) Metconazol     Quash (l)
Miclobutanil     Rally
Propiconazol     Bumper (l), Tilt (l), Quilt Xcel (l)e
Tebuconazol Constant , Elite, Constant (nl), Elite (nl), Orius (l), Tebuzol (l), Elite (nl), Luna
Folicur, Triade Folicur (l), Triade (nl) Experience (rp)e
(SBI: Classe III) Hidroxianilidas Fenehexamida     Elevate (l)
a
Classificação do Comitê de Ação à Resistência de Fungicidas (FRAC, 2016). Liberado (l), registro pendente (rp), não
liberado (nl). bFungicidas registrados no Sistema de Agrotóxicos Fitossanitários (Agrofit) do Ministério da Agricultura do
Brasil (AGROFIT, 2016). cFungicidas registrados na Secretaria da Agricultura e do Abastecimento do Paraná (SEAB, 2016).
d
Fungicidas registrados no estado da California, US (Adaskaveg et al., 2015). eFungicidas formulados em misturas: Ins-
pire Super (+AP), Luna Experience (+SDHI), Quadris-Top e Quilt Xcel (+IQes). Informação acessada em Março de 2016.

resultaram na diminuição do uso de triazóis.
No caso dos MBCs, vários estudos indicam
que isolados resistentes persistem nos pomares,
mesmo após a interrupção da utilização destes fun-
gicidas por vários anos. Em pomares comerciais de
pêssegos no estado da Carolina do Sul, Zehr et al.
(1991) observaram isolados resistentes que persis-
tiram por pelo menos dois anos após a desconti-
nuidade da utilização de benomil. Período maior é
relatado por Malandrakis et al. (2012) que encontra-
ram isolados de M. laxa altamente resistentes aos
MBCs em pomares que permaneceram por oito anos
sem utilização de fungicidas. No Brasil, May De Mio
et al. (2011) constataram aumento na porcentagem
de isolados sensíveis ao tiofanato-metílico de 2000
a 2005, considerando isolados de diferentes regiões
produtoras. Apesar de em muitos países a utilização
de MBCs para controle da podridão parda já ser bem
reduzida, na China, segundo Chen et al. (2014) a re-
sistência a MBC é emergente e deve ser considerada
na elaboração das estratégias de controle.
Diante dos estudos apresentados para os
principais grupos de fungicidas de ação sistêmica
para controle de podridão parda, se pode concluir
que o monitoramento nos pomares das diferentes
regiões produtoras do Brasil é muito importante. O
acompanhamento da sensibilidade e adaptabilidade
das populações de patógenos ao longo do tempo,
também é primordial para garantir que as alterações
no manejo de grupos e/ou ingredientes ativos pos-
sam ser realizadas em tempo, preservando o produ-
to de forma eficiente no mercado como alternativa
segura para o produtor.
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RAPP - Volume 24, 2016 173

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)

SCLEROTINIA SCLEROTIORUM:
MOLECULAR ASPECTS IN PLANT-
PATHOGENIC INTERACTIONS
Wei Wei1 and Steven J. Clough2

SUMMARY
This year, 2016, marks the 130th anniversary of Anton de Bary’s detai-
led reports summarizing his observations and thoughts on the plant pathogenic
fungus Sclerotinia sclerotiorum. As the most famous pioneer of plant pathology
across the globe, de Bary made many intelligent observations that still hold true
today, such as the secretion of enzymes and oxalic acid. As scientists advanced
the story of S. sclerotiorum pathology through the following decades, they con-
firmed the identity of numerous plant cell-wall-degrading enzymes and oxalic
acid, and they clearly demonstrated the importance of these virulence factors
in establishing disease, plus they added more details. This review summarizes
some of these findings that have occurred in the last 130 years on the molecular
aspects of S. sclerotiorum-host interactions.

1. Introduction macerate plant host tissue. Thus started the studies

Anton de Bary, the father of plant pathology,
was an amazingly observant individual. His extraor-
dinary curiosity and attention to detail led to many
discoveries and understandings of multiple plant pa-
thogen life cycles and behaviors. He studied many
plant pathogens and wrote extensively on several,
such as Sclerotinia sclerotiorum, much of which he
summarized in a series of weekly submissions to
a journal he co-edited with L. Just, the Botanische
Zeitung, in 1886 (de Bary, 1886; available for free
download at http://www.biodiversitylibrary.org/
item/ 105850# page/36/mode/1up) and in his com-
prehensive treatise summarizing his many observa-
tions of plant pathogens (de Bary, 1887). Although
he was light years away from the molecular revolu-
tion that would blossom nearly 100 years after his
death, de Bary successfully identified the two main
molecular factors affecting the ability of S. sclero-
tiorum to be a successful pathogen: the release of
oxalic acid (OA) and ferments (enzymes) that could
on the molecular interactions of S. sclerotiorum and
its hosts--over 130 years ago. Questions asked then,
are still being asked today. Why do the fungal hyphae
release OA, and what is in the fungal ‘ferment’ that
could dissolve plant host cell walls? And similarly,
how is the plant responding to this aggressive, unin-
vited visitor and these toxic substances to which it i
exposed? What other molecules are involved? How,
and what, are the genes used by the pathogen and
host to create and control these molecular interac-
tions?
Anton de Bary was far ahead of his contem-
poraries, and it would be several decades after his
death in 1888 before scientists would make any fur-
ther substantial progress on the questions he expo-
sed. One of these reports of progress was a very nice
microscopic study by Boyle in 1921 (Boyle) where he
noted that the growing hyphae of S. libertiana (a sy-
nonym of S. sclerotiorum) were coated with a thick
mucilaginous/gelatinous sheath which he described

1
University of Illinois Department of Crop Sciences, 238 National Soybean Research Center, 1101 West Peabody Drive, Urbana, IL
61801, USA. 2USDA-ARS, National Soybean Research Center, 1101 West Peabody Drive, Urbana, IL 61801, USA.

174 RAPP - Volume 24, 2016

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)

as a substance released by the fungus that aided in
the attachment of the mycelia to the host surface.
He also observed, in disagreement with de Bary, that
the fungal hyphae appeared to mechanically force
their way past the plant cuticle. He further obser-
ved that once “the cuticle is broken the walls of the
host cells near the point of penetration show signs
of being chemically altered”. Interestingly, Boyle also
noted that the cells adjacent to an infected cell could
be negatively affected by the invading fungus as well,
presumably by fungal- or plant-released enzymes or
toxins:
“Death of the cells extends some dis-
tance beyond the limits of the invading hypha,
due either to enzymes secreted by the fungus
or to the products of disorganized cells. The le-
thal substance or substances appear to diffuse
more rapidly along the palisade cells of the me-
sophyll than into the spongy parenchyma, as
the chloroplasts of the palisade cells for some
distance on either side of the point of infection
are swollen or disorganized, while those of the
spongy parenchyma immediately underneath
are still unaffected. This is evidently due to the
fact that the palisade cells are in closer contact
and hence allow a more rapid diffusion of the
lethal substance or substances than the cells of
the spongy parenchyma, which are in contact
at comparatively few points.”
Although both de Bary and Boyle stated that
their studies suggested the release of plant-cell-wall
degrading ‘ferments’ or enzymes, the actual identi-
fication of these molecular weapons would not start
until the late 1950’s and 1960’s. In the meantime,
plant pathologists successfully confirmed de Bary’s
assumption that S. sclerotiorum produced the toxin
OA. In de Bary’s work, the fact that the liquid sur-
rounding hyphae, or droplets released by sclerotia,
was acidic and would precipitate with calcium, it
was assumed that this liquid had to be OA (de Bary,
1886). In 1952, when Overell (Overell, 1952) found
that spent culture filtrates of S. sclerotiorum could
macerate carrot slices, he wanted to determine the
cause. He noticed that the maceration ability was pH
dependent and the macerating factor(s) was stable
after autoclaving. Through the use of paper chroma-
tography and similar calcium precipitation assays, he
identified OA as being present, at concentrations in
the 10’s of mM in cultures that had grown up to 35
days. Overell also found that similar maceration sho-
wed up when carrot slices were soaked in pure OA in
a pH-dependent manner, with the best maceration
activities occurring at pH levels between 2.6 – 4.0 for
his studies. Therefore, he hypothesized that OA was
the cause of the deterioration, and that the different
ion forms of oxalate (Figure 1) were affecting the ma-
ceration, as OA would be mostly fully deprotonated
as the pH levels rose past 4, and it would be mostly
in the mono-basic ion form at pH 2.6 to 4.0 (oxalic
acid pKa1 ≈ 1.2, and pKa2 ≈ 4.2).
Interestingly, the levels of OA found by Ove-
rell were fairly similar to the levels found in cultures
of the close relative of S. sclerotiorum, Sclerotinia
rolfsii, by Higgins 25 years earlier (Higgins, 1927). Hi-
ggins identified large amounts of OA released from
S. rolfsii, reporting 0.3 – 3x more grams of OA as gra-
ms of mycelial dry when growing S. rolfsii in various
liquid media for 31 days, and estimated the oxalate
concentrations at 5-70 mM. Higgins, like Overell, also
used precipitation with known amounts of calcium
as a means to calculate the approximate amount

Figure 1. The molecular form of oxalic acid at different pH levels. The pH of the apoplast of plant cells is estimated to be
about 5.6, so during initial S. sclerotiorum infection, most of the oxalic acid entering the plant tissue into the apoplost
would be fully depronated. After continued fungal growth and acid release, the acidity could build up to levels that
would overpower any buffering capacity of the apolplastic fluids, and the pH would lower. The pH of S. sclerotiorum
infected tissue is often measured to be somewhere between 2 and 4, meaning that the oxalic acid would be mostly in
the mono-basic (mono-protonated) form.

RAPP - Volume 24, 2016 175

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
of OA in solution, as oxalate at pH levels above 1.2
readily binds calcium ions and precipitates from so-
lution (i.e., adding known amounts of calcium and
weighing the dried precipitate to estimate oxalate
molarity).
2. Investigations on S. sclerotiorum plant cell-wall-
-degrading enzymes (PCWDEs) calcium. In addition, OA lowers the pH (estimated as
As mentioned previously, since at least the
1800’s, scientists have known that some cell-free ex-
tracts, termed ‘ferments’ and later ‘enzymes’, could
stimulate chemical reactions to occur, but the link
between enzymatic activities and actual protein mo-
lecules was not made until the 1920’s and 1930’s,
with the 1946 Noble Prize in Chemistry awarded to
scientists who helped make this connection. There-
fore, in the 1950’s enzymology was a popular resear-
ch focus for scientists, and many biologists, including
plant pathologists, were looking for enzymes. By
the 1960’s, the plant pathologists studying S. sclero-
tiorum had clearly identified the release of peptidio-
lytic enzymes in cultures and in planta.
In 1957, Echandi and Walker (Echandi and
Walker, 1957) were the first to report the identifi-
cation of such PCWDEs from S. sclerotiorum. These
scientists identified both pectin methylesterase and
polygalacturonase activities from S. sclerotiorum
grown on wheat bran. These enzymatic activities
were destroyed by heating at 55°C for 10 minutes.
The activity of these pectolytic enzymes was highest
at pH levels between 3 and 5, and the most optimal
at pH 4. Enzyme activities were reduced to 44% and
20% at pH 6 and pH 7, respectively. This work was
supported in planta, by analyzing S. sclerotiorum in-
fected tissues (Hancock, 1966). Hancock documen-
ted pectin methylesterase and polygalacturonase
activities in infected stem tissue, together with an
increase in stem acidity, with the pH dropping from
about 6.2 to 4.5 during his infection studies.
A very interesting study came out in 1965
by Bateman and Beer (Bateman and Beer, 1965).
Working on S. rolfsii, they noted the benefits of a pa-
thogen releasing both pectolytic enzymes and OA,
as they found that the effects of the enzyme func-
tion and acid were synergistically enhanced in the
presence of each other. They estimated that S. rolf-
sii culture filtrates contained up to 30 mM OA (80
mg/30 ml) after 6 days growth on carboxymethyl
cellulose (which they found to be a much better in-
176 RAPP - Volume 24, 2016
ducer of OA than glucose). Researchers found that
the activity of purified polygalacturonase was non-
functioning if the substrate was calcium pectate, the
form that is commonly found in plant cell walls, but
if OA was added to the assay, the pectate was degra-
ded, presumably due to the removal of calcium from
the calcium pectate by OA’s proven ability to chelate
2.8 in their cultures), and they found that the optimal
pH for the polygalacturonase activity was between 3
and 4, a pH optimum similar to what Echandi and
Walker (1957) noted (see the previous paragraph).
They also noted that pH values below 4 could kill
plant tissue, without the presence of PCWDEs, and
that fluids from diseased lesions was near 4.0. They
therefore concluded that OA was most likely having
its negative effect on plant hosts due to both 1. bin-
ding and removal of calcium out of calcium pectate
to allow the polygalacturonases to function at maxi-
mal efficiency; and 2. to the general toxic effects of a
lowered pH.
The search for extracellular enzymes that
could factor into molecular plant-pathogen interac-
tions, and their detailed characterizations, continued
to be popular in the 1960’s and for decades beyond.
Evidence for cellulose degrading enzymes was found
using paper, cotton or carboxymethyl cellulose as
growth substrates in the media (Hancock, 1967).
Marciano et al. (1983) detailed the roles of three
types of PCWDEs, polygalacturonase, cellulose, and
xylanase in virulence, together with the enhanced
effect of OA and its low pH. A survey of the ability
of extracellular fluids of a S. sclerotiorum culture to
degrade cell-wall polysaccharides was conducted by
Riou et al. (1992) in which enzymatic activity was de-
tected for the degradation of cellulolytic, hemicellu-
lolytic, and pectinolytic polysaccharides. Gel analysis
confirmed the presence of at least one pectinase,
beta-xylosidase, and cellobiosidase. Subsequent stu-
dies focused on characterizing the most effective
class of plant-cell-macerating enzyme released by S.
sclerotiorum: the endo-polygalacturonases (Fraissi-
net-Tachet, et al., 1995; Cotton, et al., 2002; Cotton
et al., 2003). The work of Favaron et al. (2004) su-
ggested that there are at least two different endo-
-polygalacturonases in S. sclerotiorum, each with a
different pH optimum for activity, with endo-PGa
being more active at lower pH values (from 3.6-5.0),
and endo-PGb more active at pH 4.5-5.0. In addition
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
to the endo-polygalacturonases, researchers also
conducted further detailed characterization of exo-
-polygalacturonases (Li et al., 2004). Other enzymes
found to be released by S. sclerotiorum include at le-
ast two endo-beta-1,4-glucanases (Waksman, 1991;
Chahed et al., 2014), at least two beta-glucosidases
(Issam et al., 2003) and at least one beta-galactosi-
dase (Waksman, 1989; Riou, et al., 1992a). The se-
arch for cutinases had been elusive, and there were
conflicting reports from microscopic studies as to
whether or not the cuticle was being enzymatically
degraded. Although the microscopy work of Boyle
(1921) did not show any evidence for cuticle degra-
dation, de Bary reported that he had seen evidence
of cuticle degradation, and in 2012, a cutinase was
finally identified (Bashi et al., 2012). PCWDEs have
complex roles and regulation, and Hegedus and Rim-
mer (2005) wrote an excellent mini-review propo-
sing how activation and repression of PCWDEs, as
well as sclerotia development, might be controlled
by a tri-phasic model for infection involving glucose,
cAMP, and pH levels that change during infection.
3. Mechanisms of OA and plant-Sclerotinia interac-
tion
This present review focuses on the effects of
S. sclerotiorum-released molecules, such as OA and
secreted enzymes (and their related genes), on the
plant host. Other reviews on S. sclerotiorum are also
available to the reader. Two excellent reviews were
published in 1979 as part of an APS Symposium of
Sclerotinia. Purdy (1979) described the various, so-
mewhat confusing, nomenclatures used to name
S. sclerotiorum, and gave a superb summary of ‘big
picture’ aspects of this disease such as histology, di-
sease development and host range; Lumsden (1979)
summarized details on the physiological and histo-
logical changes that occur during S. sclerotiorum pa-
thogenesis. Lumsden put an emphasis on the role
of OA chelating important cations and producing a
gradient of lowering pH values, in conjunction with
the plant PCWDEs, and how these factors would
make the cells at the infection front more permea-
ble, and how that would lead to greater leakage of
nutrients for the fungus, thus weakening the host.
Another very good, comprehensive review (Dutton
and Evans, 1996) on the role of large quantities of
OA in plant diseases caused by numerous fungi, not
only explained how OA could enhance the efficiency
RAPP - Volume 24, 2016
of PCWDEs, but also emphasized the importance of
the ability of OA to strongly chelate biologically im-
portant cations such as calcium, iron, manganese,
magnesium, nickel, aluminum, and copper, affecting
their solubility and thus availability; also of impor-
tance is the effect of OA on destabilizing cytoplas-
mic and chloroplastic membranes, which would aid
in tissue maceration. For additional perspectives on
the molecular interactions between plants and S.
sclerotiorum, readers should also refer to the very
recent mini review by Mbengue et al. (2016).
3.1. Phenotypes of various OA-deficient mu-
tants
Looking at the pathogen side of this host-
-pathogen relationship, the reader can find several
very good papers on the effects of S. sclerotiorum-
produced OA on the fungus itself. As discussed be-
low, S. sclerotiorum produces and metabolizes OA,
which affects various aspects of fungal vegetative
growth, sclerotia development and pathogenesis.
To investigate the critical role of OA throughout the
life cycle of S. sclerotiorum, mutagenesis was used.
Mutants induced by ultraviolet light (UV) were scre-
ened for reduced OA production and these mutants
were found to be non-pathogenic on common bean
(Godoy et al., 1990). These mutants also did not pro-
duce sclerotia, and had low expression of pectinases
and cellulases, showing that sclerotia formation and
some PCWDEs, all required OA. In addition, the OA
deficient mutants provided some clues to the bio-
synthetic pathway for OA production, as the addition
of succinate to culture media led to the production
of some OA, showing the pathway could include suc-
cinate (i.e., the mutation might have occurred in an
enzyme of the biosynthetic pathway upstream of
succinate production).
An enzyme known to be involved in the syn-
thesis of OA is oxaloacetate acetylhydrolase (OAH,
EC 3.7.1.1), which is the enzyme of S. sclerotiorum
that converts oxaloacetate to OA and carbon dioxi-
de. OAH was knocked out by targeted gene replace-
ment via homologous recombination, leading to a
genetically defined mutant that accumulated no OA,
even under highly inductive conditions (Liang et al.,
2015). The radial growth rates of vegetative hyphae
of these mutants were observed to be almost equal
to wild type (WT) on potato dextrose medium bu-
ffered to pH 3.6, whereas growth was severely re-
177
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
duced when the medium was buffered pH 6.9. On
all media tested, the oah mutant, similar to the UV-
induced OA-minus mutants of Godoy et al. (1990),
could not form sclerotia, but mycelia were noted
to form some loose and unmelanized aggregates
as if some sort of futile effort was being made to
produce sclerotia. Moreover, the oah mutant was
also defective in compound appressorium forma-
tion on artificial surfaces. Complementation using
the WT OAH gene on a plasmid was able to fully
restore the radial growth rate and partially resto-
re sclerotia development at a low frequency, but
failed to regain the compound appressorium phe-
notype. The authors suggested that this failure
could possibly have resulted from inconsistences
in the regulation of expression of the transgene
OAH expressed from the plasmid, versus the WT
native expression, or perhaps it was due to the
non-reversing of an unknown epigenetic pro-
cess that occurred in the oah mutants that did
not allow for complementation. In another study
where oah mutants were generated either throu-
gh targeted gene replacement or T-DNA insertion,
involving a different strain (WMA1), again almost
no OA production was detected (Xu et al., 2015).
Interestingly, for these OA-mutants, the authors
observed some phenotypic behavior that differed
from those described by Godoy or Liang that were
generated using Sclerotiorum strain 1980. One diffe-
rence was observed when the authors ran high-per-
formance liquid chromatography and found that the
OA-minus mutants accumulated fumaric acid at high
levels compared to the WT. The production of fuma-
ric acid was not tested in the other reports on OA-
-mutants; however, one could assume that, if they
did produce fumaric acid, it would be at low levels
since the pH of the media for these mutants did not
go below pH 6 after 2 days growth, whereas the mu-
tants of Xu et al. reduced the pH of the media to just
above, or just below, pH 4 by 48 hours. Additionally,
the two mutants in the Xu et al. study were able to
produce sclerotia, (with some noted differences in
color and texture), whereas the Godoy and Liang
mutants could not. A third major difference betwe-
en this study on the WMA1-derived mutants and the
1980-derived mutants was that the WMA1-derived
mutants were quite effective in inducing necrosis
on multiple hosts, whereas the OA-minus mutants
of 1980 could not, or did so very poorly, and only
178 RAPP - Volume 24, 2016
if the plants were wounded first. It is not clear why
these differences occurred, and how much of the-
se differences are strain specific, but it does suggest
that there could be some unknown complexity in OA
metabolism and perhaps in OA-regulated genes, and
that the various OA-minus mutants affect these fac-
tors in different manners.
Another enzyme involved in OA metabolism
in S. sclerotiorum was also recently characterized--
the OA degrading enzyme oxalate decarboxylase
(ODC) (Liang et al., 2015). Deletion of one of the
two putative ODC genes led to hyper-accumulation
of OA and less efficient differentiation of compound
appressoria, implying that fine control of OA levels
regulates appressorium formation. No differences
in vegetative growth or sclerotia development were
reported for this odc mutant, probably because the
expression of the gene for this enzyme was detec-
ted only at mid to late stages of compound appres-
sorium formation. Although the physiological func-
tion of ODC in S. sclerotiorum still requires further
investigation, it is highly possible that this enzyme
is responsible for OA regulation at multiple develo-
pmental stages.
The various OA mutants allowed for more
detailed studies of the role of OA in disease deve-
lopment. Since the deletion of the oah gene caused
defective compound appressorium formation, which
makes it difficult for the pathogen to penetrate the
cuticle layer, Liang et al. (2015) performed wound
inoculations on a variety of hosts (including toma-
toes, soybeans and arabidopsis) to evaluate the role
of OA in pathogenesis. The results showed that the
oah mutant produced very limited leisions that were
“brown, green” in color and restricted by a “thin,
dark” border, while the WT produced “light brown,
spreading” lesions. Moreover, GFP labeling, along
with 3,3’-Diaminobenzidine (DAB) and aniline blue
staining, was conducted to characterize the interac-
tion occurring in these different types of lesions. It
was observed that compared to WT hyphae, the GFP
fluorescence of mutant hyphae faded at 5 dpi and
the mutants elicited much more H2O2 accumulation
and callose deposition, indicative of stronger host
defense responses. These phenotypes indicated that
OA was a determinant virulence factor dampening
host defenses, and the critical role it played in patho-
genesis was further confirmed by the observation
that immersing the leaf petiole in OA (pH 5.8) par-
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
tially restored the virulence. However, in the study
of Xu et al. (2015), the oah mutant they generated
caused disease in a host-dependent manner, with
the virulence almost the same as the WT on faba
bean, yet only weakly pathogenic on soybean. They
concluded that these differential disease develop-
ments were related to differences in the buffering
capacity within the host plants. When inoculation of
oah mutants was conducted on green beans infiltrat-
ed with citriate-phosphate buffer at pH 4.2 , or with
non-buffered potassium oxalate (10 mM, pH 4.2),
virulence was recovered under the former treatment
but not the latter. The authors also identified a posi-
tive correlation between lesion size and decreased
pH in the infected tissues, and a negative correla-
tion between lesion size and host leaf tissue buffer-
ing capacity. Based on these evidences, the authors
proposed that the major contribution of OA was due
to its strong acidity rather than the oxalate. Howev-
er, considering the chemical similarty between cit-
ric acid (used as a buffer and for lowering the pH in
controls) and OA: both are small organic acids that
strongly bind divalent cations at physiological pHs;
citric acid pKa1 ≈ 3.1, pKa2 ≈ 4.8 and pKa3 ≈ 6.4, other
functions of OA besides its acidity, such as the chela-
tion of cations, cannot be dismissed. Also, the fact
that the OA mutants produced excess fumaric acid
clouds the interpretations.
3.2. Molecular and physiological studies on
the functions of OA secreted into hosts
Although the fungal-released proteins, in the
form of enzymes, effectors and necrosis-inducing
proteins/peptides, have a real influence on disease
development, many view that the most beneficial
virulence factor of S. sclerotiorum to be OA, and the-
refore numerous studies have focused on the role of
OA in the physiology of molecular plant-pathogen in-
teractions. For example, it was shown that OA incre-
ased stomatal opening in Arabidopsis, presumably
benefitting the pathogen by facilitating the entran-
ce of OA into the host apoplast (Stotz and Guimara,
2004). As introduced above, the acidity of OA and
its chelation properties can produce visual effects on
the plant host, but what is it doing at the molecular
level? A study in 1988 (Favaron et al., 1988) detailed
a defense activation in soybean in response to puri-
fied polygalacturonase and OA. Within 20 minutes of
treatment, measurable amounts of the phytoalexin
RAPP - Volume 24, 2016
glyceollin were induced by two of the four polyga-
lacturonases tested, as well as by millimolar levels
of OA, with 5 mM being the most effective; 10 mM
OA actually gave a 20% reduction in the induction le-
vels as compared to 5 mM. In an actual infection, OA
concentration ranges from very low to high (80 mM
to be the highest reported), thus a dynamic picture
of how OA molecules impact the host cells across a
given region of tissue, seems probable.
An essential role proposed for OA is to mo-
dulate the rapid host reactive oxidative burst (ROS),
one of the earliest and most universal hallmarks of
plant defense (Cessna et al., 2000). Inoculation of an
OA-deficient strain on tobacco leaves led to conside-
rable ROS as measured by oxidation of nitroblue te-
trazolium, while there was no obvious ROS increase
caused by the WT strain. The result suggested that
OA has a role in suppressing ROS in the plant host.
Further experiments were performed to explore
the mechanism of this inhibition, revealing that the
acidity and chelation of cations, two highly popular
hypothetical roles for OA in S. sclerotiorum pathoge-
nesis, did not appear to be largely accountable for
inhibition of ROS. Several additional observations in-
dicated a potential target site of OA was downstream
of the defense-associated Ca2+ influx, but upstream
of the oxidase complex that produces H2O2 and ROS.
However, the exact molecular targets of inhibition
remains unclear. Another study proposed a potential
explanation for this inhibition using a plant-based
redox sensing GFP system (Williams et al., 2011). It
was determined that S. sclerotiorum, by secreting
OA, creates a transient reducing environment rapi-
dly in plant cells after infection, which compromises
the host ROS burst and other host basal defense
responses such as callose deposition. By contrast,
an OA-deficient mutant produced hypersensitive-
-like lesions characterized by restricted growth and
cell death. Consistent with the first study, this redox
alteration of the host cells was also shown to be in-
dependent of acidity. The underlying mechanism of
manipulation of host redox status was proposed by
the authors as involving key redox molecules such as
thioredoxins, leading to the inability to form normal
conformational changes of many redox-sensitive sig-
naling components in the activation of plant defen-
ses.
The defining characteristic of a necrotro-
phic fungus like S. sclerotiorum is to kill plant cells
179
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
and then obtain nutrients from the dead host for its
own use. In this sense, plant programmed cell death
(PCD), which is a strategy that plants use to achieve
complete resistance to some biotrophic pathogens,
may be beneficial to the pathogenesis of S. sclerotio-
rum. OA was suggested to induce apoptotic-like PCD
in hosts, thus facilitating the disease development
(Kim, et al. 2008). DNA fragmentation, which is a fea-
ture of apoptotic-like cells in mammals, was possibly
observed in DNA extracted from tobacco leaf discs
36h after treatment with S. sclerotiorum WT culture
filtrate, and from infiltration with different formula-
tions of oxalate, while it was not obvious in water
and other acids such as citric acid, HCl and succinic
acid. The previous study involving soybean suspen-
sion cells showed that OA inhibited ROS (Cessna
et al. 2000); however, in contrast, for this study on
tobacco discs, oxalate induced ROS generation and
triggered PCD. The tobacco disc assay showed that
OA could elicit PCD and ROS production only in a re-
latively higher pH (5 to 6) milieu, while at lower pH
values (3 to 4), neither DNA laddering nor ROS pro-
duction was significantly detected. The mechanisms
of PCD were further explored (Kabbage et al., 2013)
and was found that plant cell death in response to
S. sclerotiorum may be triggered by either apotosis
or autophagy, and the OA affects this outcome. OA
by itself seems to induce apoptosic PCD (Kim et al.,
2008), but in an OA minus mutant, PCD seemed to
result from autophagy, and the presence of OA su-
ppressed this autophagic cell death (Kabbage et al.,
2013). Autophagy is being associated with plant host
responses to other necrotrophic fungi as well (Lai et
al., 2011).
A comparative transcriptomic study of soybe-
an leaves infiltrated with 5 mM OA versus HCl-aci-
dified water revealed that one of most significantly
up-regulated genes at 2 hours post infiltration inde-
pendent of acidity, was ferritin, which forms comple-
xes to safely store toxic iron ions within cells (Calla,
et al., 2014a). The fact that ferritin was so strongly
induced could have indicated an increase in free iron,
presumably released from iron-binding components
in cells by OA, a strong chelator of iron. The authors
proposed that the loss of iron from enzymes contai-
ning cytochrome co-factors, such as the cytochro-
me P450s involved in secondary metabolism, would
greatly weaken the ability of the host to produce an
active defense. They also suggested that the loss of
180 RAPP - Volume 24, 2016
iron from the electron transfer components of the
mitochondria and chloroplasts, could lead to high
accumulation of ROS, such as when light stimulates
chloroplast photosystem centers under low electron
flux (Zhu, et al. 2105; Zhu, et al., 2015). In spite of
all the circumstantial evidence, precise mechanisms
connecting OA and the observed inductions of ROS
and PCD is still lacking.
If OA can both suppress the oxidative burst
and elicit PCD through stimulating the generation
of ROS, the question becomes ‘How does OA work
to coordinate these two functions which seem to
contradict each other?’ One possibility suggested
by Kim et al. (2008) was that the induction of PCD
was time and dose dependent, supported by the ob-
servation that no significant difference of cell viabil-
ity of tobacco leaf disks was detected between the
treatment of 20 mM potassium oxalate and water
until 48 h post-treatment, with the time point be-
ing delayed at a lower concentration of potassium
oxalate of 10 mM. With retrospect to the Cessna et
al. study (2000) on the effect of OA on the oxidative
burst, 4 mM was found to be the median inhibitory
concentration, and the inhibition was detected with-
in 10h of treatment, a time much earlier than 48h.
Thus, it is tempting to speculate that in the early in-
fection stage, when OA is at a lower concentration,
OA is more responsible for reducing host oxidant
production, but in the later infection stage and at a
higher concentration, it is more responsible for in-
ducing PCD. Another possibility is related to the pH
dependency exhibited by OA manipulating ROS pro-
duction. It was suggested that the extracellular pH
pertubations had a fast and strong effect on vacuolar
pH while the cytoplasmic pH remained relatively un-
disturbed (Horn et al., 1992). Moreover, histological
investigation of S. sclerotiorum infection process re-
vealed that OA could be metabolized or transferred
to host vacuoles in early infection stage (Heller and
Witt-Geiges, 2013). Combining this information, it is
not unreasonable to postulate that dual functionali-
ty of OA could be executed associated with different
cellular compartmentalization of OA during different
stages of infection, in addition to varying concen-
trations in and near the infection zone. In the early
infection stage, OA would presumably exist mainly
in the apoplast or host vacuoles where the pH de-
creases rapidly, and the oxidative burst is inhibited.
When the concentration of OA increases, OA gra-
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
dually accumulates in the cytoplasm where the pH
is higher than apoplast and the vacuole, but within
the optimal range for PCD induction. This speculati-
ve model would also explain, to some degree, why
the PCD was elicited at a relatively later time during
infection.
3.3. A proposed “hemibiotrophic” lifestyle
for S. sclerotiorum
The secretion of OA from S. sclerotiorum ini-
tially suppresses host immune response and later
enhances cell death, which suggests that for a his-
torically defined necrotrophic fungus, its strategy
of infection may be much more intricate than just
brutally imposing toxins and PCWDEs. Recently it
has been proposed that S. sclerotiorum is actually a
polyphagous plant pathogen that transitions from
biotrophy to necrotrophy during pathogenesis
(Kabbage et al., 2015). It was observed that the
primary hyphae of S. sclerotiorum killed tobacco
cells during the initial 12 hours of infection, but
soon thereafter the pathogen employed clever
strategies to avoid host recognition and host resis-
tance during this early infection period, similar to
the behavior of biotrophic rust pathogens. Follo-
wing this stealth period, after about 12 hours post
infection, S. sclerotiorum entered a necrotrophic
phase by triggering rapid cell death (and possibly
PCD) of plant cells, while at the same time, the
leading invasive hyphae still maintained a biotro-
phic state. By contrast, microscopy of the infection
of a model necrotrophic fungus, Botrytis cinerea,
revealed that the hyphae were always associated
with dead cells. Moreover, the OA-deficient mu-
tant was not able to suppress host defense ef-
fectively and instead induced host cell death rap-
idly, thus also leading to the restriction of hyphal
growth only in the dead cell area. It was concluded
by the author that the initial biotrophic-like stage
was critical to establishment of S. sclerotiorum pa-
thogenesis (Kabbage et al., 2015).
3.4. Evaluation of S. sclerotiorum-resistant
transgenic lines
Another approach to study the effects of
OA is to look at transgenic plants that degrade OA,
such as the use of the addition of oxalate oxidase
(OxO), an enzyme that catalyzes the degradation
of OA. For example, an OxO soybean transgenic
RAPP - Volume 24, 2016
line carrying the wheat germin transgene (gf-2.8)
coding for OxO, conferred resistance to S. sclero-
tiorum (Donaldson et al., 2001). When attached
flowers were inoculated, an OxO line was able to
reduce OA levels and greatly inhibit ingress of the
fungus, and the disease symptoms largely remai-
ned at the flowers; whereas in the non-transgenic
parent (WT), the disease progressed rapidly, spre-
ading to the main stem and beyond (Davidson et
al., 2016). The authors concluded that the barriers
to fungal invasion in the OxO transgenic tissue
appeared to be living green tissues, (i.e. the pe-
duncle, petiole, stem and leaf tissue) where OA
was required to condition the tissue for coloni-
zation. They also measured OA levels during the
infection period, and found that fully infected WT
flowers contained about 3 mM OA. Davidson et al.
(2016) also used infected, detached flowers, fully
covered with visible mycelia, to inoculate leaves in
a manner that mimics how soybean plants might
be infected in the field (i.e. ascospores infect flo-
wers, and an infected flower that has landed onto
a leaf leads to infection of that leaf). Interestingly,
when detached flowers were inoculated (such as
those to be used in the leaf inoculation studies), both
OxO and the WT were equally fully infected with vi-
sible mycelia covering the flowers within 3 days, and
yet when the inoculation was on a flower that was
attached, it took about 6 days for this stage to be
reached for the WT. This heavy mycelial growth was
almost never seen for the attached flowers of the
OxO inoculated plants, showing that, although the
attached living flower was able to be infected, this
tissue was more resistant than when this same floral
tissue was detached and presumably dying. It was
also shown that the reduced levels of OA in the OxO
infected detached flowers was not effective in pre-
venting the fungus from taking over the flower, whe-
reas the reduced OA levels in the attached OxO flo-
wers was effective, showing that the plants do have
the ability to defend against this pathogen in healthy
living tissue if the OA levels are reduced. Inoculated
detached leaves behaved similarly to inoculated at-
tached flowers in that the OxO transgenics showed
strong resistance, whereas the WT did not. Howe-
ver, that resistance did not become apparent until
the second day post inoculation as hyphae emana-
ting from infected flowers spread in large networks
above and below the leaf cuticle and infiltrated the
181
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
cortical tissue of both hosts. Following the initial 24
hours, the OA levels remained fairly constant, remai-
ning at the day 1 level for the OxO transgenic, and
the lesion did not spread much beyond 1-3 cm du-
ring the 6 day study. However, in the leaves of the
non-transformed parent, the OA levels increased
and the leaves were completely overtaken with fun-
gal growth by 4-6 days post inoculation. The authors
concluded that their results showed that fungal host
interaction is a two-phase process. Phase I occurred
on both hosts but Phase II proceeded only on the
WT parent, indicating that host colonization requires
high levels of OA in order to proceed, and converse-
ly, Phase I may require a lower level of OA or possibly
OA may not be involved and that factors other than
OA have a role during primary lesion formation.
4. Secretory proteins from S. sclerotiorum
As discussed above, S. sclerotiorum has been
shown to release large amounts (up to tens of mM) of
toxic OA, as well as numerous PCWDEs, to aid in the
colonization of its host. Although this seems like an
abundance of weapons, apparently it is only a frac-
tion of the possible arsenal released from this patho-
gen. In addition to the handful of well-characterized
PCWDEs, it has been reported that S. sclerotiorum
releases many other proteins that can influence di-
sease progression. Several potential effectors were
identified to facilitate necrotrophic colonization by
causing host necrosis or plant cell death (PCD). Zup-
pini et al. (2005) discovered that an endo-polygalac-
turonase (endo-PG) could modulate host cytosolic
Ca2+ signaling, in aequorin expressing soybean cells
leading to PCD characterized by chromatin conden-
sation, apoptotic nuclei and activation of the cyto-
chrome c/caspase 9 pathway. However, this study
did not provide evidence to show that the effects of
endo-PG on host cells were independent of cell-wall
-degrading abilities. Subsequently, a protein (IPG-1)
containing a C2 domain (a Ca2+-regulatory domain) in
canola was proposed to be a potential target in host
cells for sspg1d, one of the endo-PGs of S. sclerotio-
rum, since these two factors were observed to inte-
ract with each other both in vivo and in vitro during
early infection (Wang et al., 2009). Moreover, this
protein presented a dynamic subcellular localiza-
tion from the plasma membrane to the cytosol, both
before and after Ca2+ ionophore treatment. Althou-
gh the mechanism of function of endo-PG to be an
182 RAPP - Volume 24, 2016
effector is unclear, the authors postulated that the
interaction between the endo-PG and IPG-1 could
interfere with the successful binding of IPG-1 and
Ca2+, thus promoting PCD. Two recent studies repor-
ted a secretory protein with a putative Ca2+-binding
EF-hand motif, Ss-caf1, and a cysteine-rich small se-
cretory protein, SsSSVP1, to be possible effectors of
S. sclerotiorum (Xiao et al., 2014; Lyu et al., 2016).
Both of these proteins were closely associated with
virulence, and their transient expression in tobacco
leaves led to cell death. The Ss-caf1 gene was iden-
tified by T-DNA mutagenesis isolate Sunf-M, and the
resulting mutant called Sunf-MT6. The mutation cau-
sed Sunf-MT6 to loose the ability to form compound
appressoria, and the ability to induce lesions without
first wounding. Sunf-MT6 produced fewer but larger
sclerotia, and produced more OA than Sunf-M. Com-
plementation studies supported that loss of Ss-caf1
was responsible for the changes in phenotype.
Some of the secretory proteins may play im-
portant roles in modulating host defense responses
during different phases of infection or transition of
lifestyles for S. sclerotiorum, similar to OA as discus-
sed above. Zhu et al. (2013) found that SSITL, an
integrin-like protein, could be a potential effector
protein that suppressed host resistance during initial
biotrophy-like stages of infection. The expression of
this gene was characterized as being highly induced
at 3 days when S. sclerotiorum was grown on PDA
medium, and at 1.5 to 3.0 hours post inoculation
(hpi) on Arabidopsis, suggesting that it could be in-
volved both in sclerotial development and pathoge-
nesis. Immunogold labeling suggested its secretion
into both fungal cell walls and host extracellular
matrix, while immunofluorescence showed its re-
lease through the hyphal tips, supporting its role
as an effector for early infection. SSITL silenced
transformants of S. sclerotiorum by RNAi tech-
nology exhibited a range of abnormal vegetative
growth and significant reduction of virulence on
Brassica napus. More interesting, further investi-
gation of the mechanism showed that this poten-
tial effector could delay the induced expressions
of PDR1.2 and PR1, constituents of jasmonic acid
(JA) and salicylic acid (SA) signaling pathways, res-
pectively. Since the interference with host defen-
se responses is critical for establishment of infec-
tion (Kabbage et al., 2015), it is probable that S.
sclerotiorum possesses other effectors. This emer-
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
ging topic is worthy of further investigation.
Bioinformatic approaches can facilitate
identification of putative effector candidates. A
broad analysis of the S. sclerotiorum genome se-
quence data suggested over 600 secreted pro-
teins, based on the N-terminal leader peptides
predicted by SignalP and elimination of genes co-
ding for carbohydrate-active enzymes and pepti-
dases (Amselem et al., 2011). Using the same da-
taset, another study initially identified more than
700 proteins in the predicted secretome, but then
narrowed the candidate list down to 486 proteins,
based on their expressions in planta, by referring
to the published EST and microarray data (Guyon
et al., 2014). Moreover, looking for proteins that
possessed conserved fungal effector domains,
exhibited signatures of positive selection, had re-
cent gene duplications, and were S. sclerotiorum
specific yet showed analogies to known protein
fold in predicted 3D structure, reduced this candi-
date list to just 78 effector candidates. The authors
highlighted a predicted subtilisin inhibitor and three
S. sclerotiorum-specific toxin-analogous proteins for
further functional investigation. Considering the re-
lease of all these proteins with numerous functions,
in addition to the release of the multi-functional OA,
the host plant faces numerous challenges!
5. High-throughput gene expression studies on
Sclerotinia-host interactions
In attempts to obtain a more comprehensive
view on Sclerotinia-host interactions, several studies
on high-throughput transcriptome expression were
conducted as these analyses shed light on possible
molecular and biological processes involved in both
pathogenesis and plant defense. As early as 2007,
two studies were published using an Arabidopsis
thaliana microarray platform consisting of 26,000
Arabidopsis genes to characterize the transcriptomes
of Brassica napus L. in response to S. sclerotiorum
(Zhao et al., 2007; Yang et al., 2007). Although the
genome sequence was not fully covered with these
early microarrays, both studies identified more than
1,000 differentially expressed genes after infection.
These results suggested the majority of genes signifi-
cantly up- or down-regulated were involved in plant
signal transduction, pathogenesis-related proteins,
ROS metabolism and cell wall integrity. With the
development of microarray slide libraries for many
RAPP - Volume 24, 2016
plants, the study of S. sclerotiorum-plant interactions
was extended to other hosts. In 2009 a soybean-S.
sclerotiorum study, profiled the transcriptomes of
stem tissues from a partially resistant and a suscep-
tible soybean genotype at 8 and 14 hpi using soybe-
an cDNA microarrays (Calla et al., 2009). The results
from this soybean study showed much overlap with
the results from the B. napus study, suggesting a re-
latively conserved behavior of plants in response to
S. sclerotiorum. Among the 1,270 genes that were
significantly differentially expressed between time
points, 30 genes were related to cell wall modifica-
tion and 42 genes were related to direct defense pro-
cesses including several apoptosis-related, putative
R genes with LRR domains and pathogenesis-related
genes. Notably, about 120 genes were identified as
early signal transduction pathway components, with
a significant number of them participating in G-pro-
tein mediated signaling, inositol signaling and the wi-
dely reported ethylene (ET) signaling pathways. Ho-
wever, it was pointed out that the inositol signaling
genes were reduced in abundance between 8 and 14
hpi leading to suggestion that inositol signaling may
be activated during the earliest stages of infection.
Thirty-two genes coding for enzymes on the phenyl-
propanoid pathway showed significant up/down-
-regulation across the time points, suggesting this
to be a major pathway for secondary metabolism in
defense to S. sclerotiorum in soybean. An interesting
pattern was found for genes involved in isoflavonoid
and anthocyanin biosynthesis, as two of the three
sub-pathways of the phenylpropanoid pathway were
induced, while all the differentially expressed genes
in lignin biosynthesis showed reduced expression le-
vels. The authors proposed that reducing the lignin
biosynthesis could divert substrates to the other two
sub-pathways, thus contributing to defense. In addi-
tion to the responses similarly displayed in both ge-
notypes, 105 genes were significantly differentially
expressed between genotypes. The genes in this list
suggested that partial resistance during early infec-
tion could be associated with cell wall reinforcement
such as papilla formation and secondary metabolite
including anthocyanins and anthocyanidins.
The OxO transgenic soybean material descri-
bed above (Donaldson et al. 2001; Davidson et al.
2016) was used in two high-throughput gene ex-
pression studies to investigate the physiological ba-
sis of soybean defense to S. sclerotiorum. The first
183
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
study (Calla et al., 2014b) used soybean leaves of
this transgenic genotype (OxO) and its susceptible
non-transgenic parent genotype (AC) sampled at 12,
24 and 36 hpi using fully colonized detached flowers
as inoculum. Although OA secretion was reduced
in the transgenic line, the comparative transcrip-
tomic data showed that many of the same sets of
genes had changed similarly in the same direction
across genotypes, such as genes related to the cell
wall, ethylene and jasmonic acid signaling pathways,
phenylpropanoid pathway components, and WRKY
transcription factors indicating that a basal defense
was activated similarly in both genotypes, but was
somewhat more robust in the resistant OxO transge-
nic. This quantitative nature of difference between
compatible and incompatible interactions was also
documented for plant responses to Pseudomonas
syringae (Tao et al., 2003; Zou et al., 2005). Des-
pite large similarities, the OxO genotype showed a
higher level of up-regulation for many genes from
12 hpi to 24 hpi compared to AC genotype, but then
dampened off at 36 hpi. The genes that exhibited hi-
gher induction in OxO included several PR proteins,
secondary metabolism-related genes and matrix
metalloproteinases. Among genes with significantly
reduced expression over time, the number of genes
in the AC genotype was about five times as many as
that in OxO. Evidence supporting this pattern came
from photosynthesis-related genes, with 75% genes
more reduced in AC than in OxO. Eight of the ten
genes showing the highest difference in the direc-
tion of expression change across the two genotypes
were associated with photosynthesis or the redox
state of the cell; this suggested that OA had the ca-
pacity to modulate the plant cell redox environment
(perhaps involving chloroplasts) for successful disea-
se establishment, as also proposed by Williams et al.
,(2011). This study also investigated the differential
expressions of critical enzymes in the lignin biosyn-
thesis pathway and found gene expression was in-
duced for lignin-related enzymes, a result conflicting
with the stem-inoculation study (Calla et al., 2009).
The opposing results could be due to different tis-
sues (stem versus leaf) or different time points, but
this requires further investigation.
Another study using AC and OxO soybean
germplasm characterized the role of pure OA (no
fungus) in the S. sclerotiorum-soybean interaction
(Calla et al., 2014a). Soybean leaves from the two
184 RAPP - Volume 24, 2016
genotypes were infiltrated with 5 mM OA at pH 2.4,
water at pH 2.4 (pH adjusted with HCl, an acid that
does not have any chelating properties), and water
at pH 5.5; the transcriptome was characterized at 2
hpi. In agreement with other studies on the impor-
tance of the low pH property of OA for successful
S. sclerotiorum infection (Xu et al., 2015; Favaron et
al., 2004), most genes (>1000) showed statistically
significant expression changes in response to OA
at pH 2.4 versus water at pH 5.5. Many genes indu-
ced by OA at pH 2.4 were closely related to basal
defense and overlap with those identified in the S.
sclerotiorum-infection study described above (Calla
et al. 2014b). For example, the phenylpropanoid pa-
thway, cytochrome P450 and glutathione S-transfe-
rases, peroxidases and PR proteins were all induced.
When looking into the effects of OA independent of
low pH (by comparing expression changes in leaves
in response to OA at pH 2.4 versus water at pH 2.4)
there were 78 genes considered significant, suppor-
ting that OA is affecting the host through its chemical
nature, not just low pH. Notably, eight of the genes
that changed independent of pH coded for ferritin
or ferritin subunits. The induction of ferritins was
confirmed by an additional non-replicated RNA-Seq
experiment conducted to verify the microarray data.
As RNA-Seq advanced the coverage of transcripto-
me, other iron-related genes were also identified as
being induced by OA, such as a cytochrome b561
and ferric reductases/oxidases. Based on the obser-
vations of both datasets, and as mentioned above,
the authors proposed that OA released by S. sclero-
tiorum might be chelating iron out of ferritin, as well
as out of other iron-containing cellular components
in the host, weakening defense, and enhancing
cell death. Interestingly, the author noted that no
ferritin genes were significantly induced by infection
of the pathogen (Calla et al., 2009; Calla et al., 2014),
suggesting that the OA is releasing iron; however,
when the fungus is present, the fungus is taking up
the iron before it accumulates to the threshold levels
needed to trigger ferritin gene expression. These ex-
pression studies again show the complexities of the
S. sclerotiorum – host interactions.
A higher-resolution and more comprehen-
sive transcriptomic analysis using RNA-Seq was
conducted a transcriptome analysis to compare
a resistant (R) and a susceptible (S) line of Bras-
sica napus (Wu et al., 2016). They identified more
 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)

than 9,000 genes showing significant differences
between the two genotypes, consisting of about
6,000 genes up-regulated and 3,000 genes down-
-regulated in the R line compared to the S line.
Gene ontology enrichment analysis indicated the
potentially important roles of genes responding
to chitin, cadmium ion and hydrogen peroxide in
the defense response. In the R line, genes involved
in glycolysis were significantly up-regulated while
genes involved in starch biosynthesis were down-
-regulated, suggesting B. napus switched from the
anabolic to the catabolic state to provide energy
or substrates for defense. Taking advantage of the
high coverage of RNA-Seq, this study also systema-
tically and thoroughly characterized the regulation
of a variety of biological pathways by searching
the B. napus genome for homologs of genes iden-
tified for these pathways in Arabidopsis. Through

Figure 2. Postulated dynamic molecular events occurring in early and late host-S. sclerotiorum interaction stages. Most
pathways shown here were also mentioned in the text, with some literature to support their assumption. Red: fungal
molecules; blue: host molecules or components; brown arrows: fungal activities or negative impacts on host cells; blue
arrows: host defense response that should benefit host defenses; dashed arrow: unknown pathways could be invol-
ved. PCWDE: plant cell-wall-degrading-enzymes; OA: oxalic acid; PG: polygalacturonase; DAMPs: damage-associated
molecular pattern; MAMP: microbe-associated molecular pattern; PRR: pattern recognition receptors; ETC: electron
transport chain; ROS: reactive oxygen species; PCD: programmed cell death. PCWDEs (A) PCWDEs are enhanced by OA
in several ways. Endo-PGs, as one example, generates DAMPs by degrading cell walls and also interferes with IPG-1 and
calcium signaling, contributing to PCD. In early events, under low OA conditions, the host initiates defense responses
including MAMPs triggered defense signaling pathways (D), transcriptions of host defense-related genes and calcium
influx (F) into cytoplast that induces host oxidative burst and possible autophagy. However even at low concentrations
of OA, many of the diverse defense responses become more and more suppressed by OA (B) leading to reduced calcium
signaling, inhibited callose deposition, modulated redox that suppresses the oxidative burst, and the chelation of va-
rious cations that are needed by numerous host enzymes for healthy metabolism. In later events, as OA concentrations
continue to increase, not only is the host defense further weakened, but also host PCD is elicited by accumulated high
concentrations of OA (G) perhaps stimulating ROS by chelating iron out of the ETC. Other secretory proteins (C) function
by either suppressing host defense in early events or inducing cell death in later events.

RAPP - Volume 24, 2016 185

 Wei Wei and Steven J. Clough (174-189)
this method, the networks of many genes were
depicted and a more detailed comparison betwe-
en two genotypes was presented, involving RLK-
-mediated pathogen recognition, MAPK signaling
cascades, WRKY transcription regulation, glucana-
ses and chitinases, hormone signaling pathways
and glucosinolate synthesis. The authors noted
a pattern where the R line induced a more dra-
matic basal defense response, in agreement with
the conclusions of the soybean microarray study
(Calla et al., 2014b). Interestingly, in addition to
the large induction of JA and ET that were widely
reported for plant defense to S. sclerotiorum, the
SA, auxin, abscisic acid (ABA) and gibberellic acid
(GA) pathways exhibited noticeable inhibition in
both genotypes. However, the cross-talk between
different hormone-related pathways may be more
complex. Stotz (2007) and Zhu et al., (2013) eva-
luated the expression of PR1 (an SA-responsive
gene) in Arabidopsis after inoculation and both
studies noted a negligible induction. Moreover,
the Arabidopsis npr1 mutant (defective in SA sig-
naling) was found to be hypersusceptible. Several
auxin-related genes were identified as significan-
tly induced in response to OA infiltration or S.
sclerotiorum infection (Calla et al., 2014a; Calla et
al., 2014b). Thus there is a possibility that the plant
defense to S. sclerotiorum may also involve the SA
and auxin pathways, but the detailed mechanisms
await further investigation.
6. Conclusions
From de Bary’s keen observation of the se-
cretion of PCWDEs and OA, studies on S. sclero-
tiorum continued to focus mainly on these traits
for more than 100 years. This review presents the
story of how scientists have succeeded to delve
deeper towards understanding these two factors,
with additional new revelations and details. The
review also shows how pathologists working on
S. sclerotiorum-host interaction kept up with the
revolutions in science and utilized the new tech-
nologies as they emerged, including new metho-
ds from basic physiology, biochemistry, molecu-
lar biology and bioinformatics. Through these
diligent efforts, a variety of PCWDEs have been
identified, multiple functions of OA have been
explored, a potential life phase transition for the
pathogen has been proposed, and other disease-
186 RAPP - Volume 24, 2016
-contributing factors have been characterized. On
the host side, extensive defense responses at the
gene level have been investigated to enhance our
understanding of quantitative plant resistance to
S. sclerotiorum and to provide options for better so-
lutions in disease control. However, this review has
also shown that many aspects of the S. sclerotiorum-
host molecular interactions still remain unresolved
and debated. Therefore, the research continues at a
rapid pace to further understand these dynamic and
complex host-pathogen systems. Figure 2 diagra-
ms a proposed summary of some of the events that
might be occurring during S. sclerotiorum infection,
much of which was discussed in this review and is at
least partially supported by the literature.
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