3.

Clculos
Os resultados obtidos e dispostos nas tabelas do relatrio foram feitos da seguinte forma:

3.1. [S] na reao:

C1 V1=C2 V2 Por exemplo, para S1: C1 V1 =C2 V2   0,02 . 5 =C2 . 15  C2 =6,6710-3 mol L-1

3.2. Velocidade:
Foi calculado no Excel. A partir da planilha em anexo, para S1 quando [E] = 40 mg%, a frmula usada foi: B15=(SOMA(B5:B12))/(SOMA(A5:A12)) Para essa frmula foi considerada apenas a faixa linear de [P] formado, ou seja, a faixa onde a taxa de formao de produto foi aproximadamente constante. Esta faixa foi destacada na planilha com a cor amarela. Em termos gerais a frmula utilizada foi: v= [P] t

3.3. 1/[S] e 1/v:

Bastou inverter os valores de velocidade e de [S]. Por exemplo, para S1 quando [E] = 20 mg%: 1 1 = =150 L mol-1 [S] 0,00667 1 1 = =3,87 min L mol-1 v 0,259

3.4. Atividade total e especfica:

Inicialmente, foi definido como 1 U a quantidade de enzima que catalisa a formao de 1 mol de produto por minuto. A atividade total (U) foi calculada pela seguinte frmula: AT = v . Vreao Onde AT a atividade total, v a velocidade da reao enzimtica e Vreao o volume total da reao (sempre 15 mL). Para a atividade especfica (U mg-1) usou-se a seguinte frmula: Aespec = AT menzima

Onde Aespec a atividade especfica, AT a atividade total e menzima a massa de enzima usada na reao (para [E] = 20 mg%, menzima = 0,40 mg e para [E] = 40 mg%, menzima = 0,80 mg%) Na planilha em anexo, por exemplo, para [E] = 20 mg% e S1 usou-se as seguintes frmulas: (Atividade total) F19 = F15*15 (Atividade especfica) F20 = F19/0,4 Para [E] = 40 mg% e S1 usou-se as seguintes frmulas: (Atividade total) B19 = B15*15 (Atividade especfica) B20 = B19/0,8

3.5. KM e vMAX graficamente.

Foram determinados via equao da reta dos grficos de Lineweaver-Burk. Para [E] = 40 mg%: 1 vMAX = b(coef.linear da eq.da reta) = 0,2022  vMAX = 4,95 mol L-1 min-1 KM =0,0154 4,95 KM =0,0762 mol L-1

KM =m(coef.angular da eq.da reta) =0,0154 vMAX

Para [E] = 20 mg%: 1 = b(coef.linear da eq.da reta) = 0,0473  vMAX = 21,14 mol L-1 min-1 KM =0,0252 21,14 KM =0,533 mol L-1

vMAX KM =m(coef.angular da eq.da reta) =0,0252 vMAX

4. Discusso
O comportamento da enzima sob diferentes concentraes dela mesma e de substrato foi determinando nas condies timas dela, ou seja, nas condies de temperatura e pH onde ela teve sua maior estabilidade. Cada grfico pde ser analisado a seguir. 1. Grficos Velocidade X [S]: esses grficos mostraram de que forma a velocidade variou em funo das concentraes de substrato. Observou-se que em um determinado momento (o que foi visto de forma mais acentuada quando [E] = 20 mg%) a velocidade da enzima estava tendendo a ser constante. Isso indicou que naquela concentrao de substrato, entre 0,025 e 0,030 mol L-1, a enzima apresentou-se saturada por ele. Alm disso, ao dobrar a concentrao de enzima, pde-se observar um aumento significativo na velocidade mxima da enzima, que no foi detectada por ter ultrapassado o limite de deteco do aparelho. 2. Grficos 1/Vel X 1/[S]: esses grficos de Lineweaver-Burk tiveram como importncia o clculo de KM e vMAX. O grfico foi obtido invertendo-se as velocidades e as concentraes de substrato. 3. Grfico [P] X Tempo, quando [E] = 20 mg%: foram obtidas quatro curvas. Foi possvel pensar que a quantidade de substrato convertido foi diretamente proporcional ao tempo de ao da enzima, porm at certo limite. Isto foi devido a fatores como a diminuio da concentrao do substrato, e conseqentemente a formao de produtos que muitas vezes inibem a enzima e inativao da mesma. Alm disso, o grfico que apresentou as maiores concentraes de produtos formadas foi o de maior concentrao de substrato, o que foi lgico, uma vez que no meio havia mais substrato que nos outros para ser convertido a produto. 4. Grfico [P] X Tempo, quando [E] = 40 mg%: a anlise foi semelhante quando [E] = 20 mg %.

5. Concluso:
Quando [E] = 40 mg% foi obtido vmax = 4,95 mol L-1 min-1 e Km = 0,0762 mol L-1 e quando [E] = 20 mg% vmax =21,14 mol L-1 min-1 e Km = 0,533 mol L-1 . Foram obtidas atividades totais para cada concentrao de substrato. Para [E] = 40 mg%, a atividade em S1 = 5,96 U e em S3 = 13,31 U. Para [E] = 20 mg%, S = 3,88 U, S2 = 7,76 U, S3 = 10,7 U e S4 = 13,3 U.