OBJETIVOS

Discutir as propriedades gerais de todas as imunoglobulinas Descrever a estrutura bsica das imunoglobulinas Relacionar a estrutura de imunoglobulina com a funo Definir as regies hipervariveis e framework Definir as classes e subclasses, tipos e subtipos das imunoglobulinas Descrever as estruturas e propriedades das classes de imunoglobulinas

Figura 1 Separao eletrofortica de protenas sricas

MUNOLOGIA CAPTULO QUATRO IMUNOGLOBULINAS ESTRUTURA E FUNO

Dr. Gene Mayer
Traduo: PhD. Myres Hopkins

I. DEFINIO Imunoglobulinas (Ig)

Molculas de glicoprotena que so produzidas pelos plasmcitos em resposta a um imungeno e que funcionam como anticorpos. As imunoglobulinas derivam seu nome da descoberta de que elas migram com as protenas globulares quando soro contendo anticorpos colocado em um campo eltrico (Figura 1).

II. FUNES GERAIS DAS IMUNOGLOBULINAS A. Ligao a antgeno

Imunoglobulinas se ligam especificamente a um ou a alguns antgenos proximamente relacionados. Cada imunoglobulina na verdade liga-se a um determinante antignico especfico. Ligao a antgeno pelos anticorpos a funo primria dos anticorpos e pode resultar em proteo do hospedeiro. A valncia do anticorpo referese ao nmero de determinantes antignicos que uma molcula individual de anticorpo pode se ligar. A valncia de todos os anticorpos pelo menos duas e em alguns casos mais.

B. Funes Efetoras
Freqentemente a ligao de um anticorpo a um antgeno no tem efeito biolgico direto. Ao invs disso, os efeitos biolgicos significantes so uma conseqncia de funes efetoras secundrias de anticorpos. As imunoglobulinas mediam uma variedade dessas funes efetoras. Usualmente a habilidade de carrear uma funo efetora particular requer que o anticorpo se ligue a seu antgeno. Nem todas as imunoglobulinas iro mediar todas as funes efetoras. Tais funes efetoras incluem: 1. Fixao ao complemento Isso resulta na lise de clulas e liberao de molculas biologicamente ativas (ver captulo dois) 2. Ligao a vrios tipos celulares Clulas fagocitrias, linfcitos, plaquetas, clulas master, e basfilos tm receptores que se ligam a imunoglobulinas. Essa ligao pode ativar as clulas que passam a realizar algumas funes. Algumas imunoglobulinas tambm se ligam a receptores em trofoblastos placentrios, o que resulta na transferncia da imunoglobulina atravs da placenta. Como resultado, os anticorpos maternos transferidos provem imunidade ao feto e ao recm-nascido.

III. ESTRUTURA BSICA DAS IMUNOGLOBULINAS PALAVRAS-CHAVE Imunoglobulina Valncia Cadeia pesada Cadeia leve Regio varivel Regio constante Regio de dobradia Domnio Regio hipervarivel Regio framework Grupos & subgrupos Fab & Fc, F(ab')2 Tipo & subtipo Classe & subclasse Opsonina Cadeia J Componente secretor
A estrutura bsica das imunoglobulinas ilustrada na Figura 2. Embora diferentes imunoglobulinas possam diferir estruturalmente elas so todas construidas a partir das mesmas unidades bsicas.

A. Cadeias leves e Pesadas

Todas as imunoglobulinas tm uma estrutura de quatro cadeias como unidade bsica. Elas so compostas de duas cadeias leves idnticas (23kD) e duas cadeias pesadas idnticas (50-70kD).

B. Pontes dissulfeto
1. Pontes dissulfeto intercadeia As cadeias pesada e leve e as duas cadeias pesadas so mantidas juntas por pontes dissulfeto intercadeia e por interaes no covalentes. O nmero de pontes dissulfeto varia entre as diferentes molculas de imunoglobulinas. 2. Pontes dissulfeto intracadeia Dentro de cada uma das cadeias polipeptdicas h tambm pontes dissulfeto intracadeia.

C. Regies Variveis (V) e Constantes (C)

Depois que as sequncias de aminocidos de muitas cadeias pesadas e leves diferentes foram comparadas, ficou claro que ambas as cadeias pesadas e leves poderiam ser divididas em duas regies baseando-se na variabilidade da seqncia de aminocidos. Elas so:

Figura 2A A estrutura bsica das imunoglobulinas

1. Cadeia leve - VL (110 aminocidos) e CL (110 aminocidos) 2. Cadeia Pesada - VH (110 aminocidos) e CH (330-440 aminocidos)

D. Regio da dobradia
Esta a regio com a qual os braos da molcula de anticorpo formam um Y. chamada de regio da dobradia porque h uma flexibilidade na molcula nesse ponto.

Figure 2B
Clique na imagem esquerda para um tutorial com animao da estrutura do anticorpo Requer Plug-In Chime.
Obtenha Chime aqui. Desenvolvido por Eric Martz. Empreendimento apoiado pela Diviso de Educao Universitria da Fundao Nacional de Cincias.

E. Domnios
Imagens tridimensionais da molcula de imunoglobulina mostram que ela no reta como mostrado na Figura 2A. Ao contrrio, ela dobrada em regies globulares, cada uma das quais contm uma ponte dissulfeto intracadeia (figura 2B-D). Essas regies so chamadas domnios. 1. Domnios de Cadeia Leve - VL e CL 2. Domnios de Cadeia Pesada - VH, CH1 - CH3 (ou CH4)

F. Oligosacardeos
Carboidratos so acoplados ao domnio CH2 na maioria das imunoglobulinas. Entretanto, em alguns casos carboidratos podem tambm serem acoplados em outros locais.

Figura 2C Modelo em fita do

primeiro anticorpo intacto a ser cristalizado (IgG2A).Harris,
L. J., Larson, S. B., Hasel, K. W., Day, J., Greenwood, A., McPherson, A. Nature 1992, 360, 369-372. 2000, Antibody Resource Page

IV. ESTRUTURA DA REGIO VARIVEL A. Regies hipervariveis (HVR) ou regies determinadoras de complementaridade (CDR)
Comparaes entre as seqncias de aminocidos das regies variveis das imunoglobulinas mostram que a maioria das variaes reside em trs regies chamadas de regies hipervariveis ou regies determinadoras de complementaridade, como ilustrado na Figura 3. Anticorpos com especificidades diferentes (i.e. diferentes stios de combinao) tm diferentes regies determinadoras de complementariedade, enquanto que anticorpos de exatamente mesma especificidade tm regies determinadoras de complementariedade idnticas (i.e. CDR o stio de combinao do anticorpo). Regies determinadoras de complementariedade so encontradas em ambas as cadeias H e L.

Figura 2D
Anticorpo em rotao Jose
Saldanha, Humanization by Design 2000, Antibody Resource Page

B. Regies framework
As regies entre as regies determinadoras de complementariedade na regio varivel so chamadas regies framework (Figura 3). Com base nas similaridades e diferenas nas regies framework as regies variveis da cadeia pesada e leve da imunoglobulina podem ser divididas em grupos e subgrupos. Estes representam os produtos de diferentes genes de regio varivel.

V. FRAGMENTOS DE IMUNOGLOBULINA: RELAES ESTRUTURA/FUNO

Fragmentos de imunoglobulinas produzidos por digesto proteoltica tm-se mostrado teis na elucidao das relaes de estrutura e

Figura 3 Estrutura das

regies varivel e framework

funo em imunoglobulinas.

A. Fab
Digesto com papana quebra a molcula de imunoglobulina na regio da dobradia antes da ponte dissulfeto intercadeia Figura 4. Isso resulta na formao de dois fragmentos idnticos que contm a cadeia leve e os domnios VH e CH1 da cadeia pesada. Clique na imagem esquerda para ver a estrutura molecular de um fragmento Fab ligado a um peptdeo de hemaglutinina da influenza.Requer Plug-In Chime.
Obtenha Chime aqui.

Ligao a antgeno Esses fragmentos foram chamados de fragmentos Fab porque eles continham o stio de ligao a antgenos do anticorpo. Cada fragmento Fab monovalente enquanto que a molcula original era divalente. O stio de combinao do anticorpo criado tanto por VH e VL. Um anticorpo capaz de se ligar a um determinante antignico particular porque ele tem uma combinao particular de VH e VL. Combinaes diferentes de VH e VLresultam em anticorpos capazes de se ligar a determinantes antignicos diferentes.

B. Fc
Clique na imagem esquerda para ver detalhes da interao de um anticorpo monoclonal de camundongo interagindo com lisozima de clara de ovo de galinha. Requer Plug-In Chime.
Obtenha Chime aqui.

Digesto com papana tambm produz um fragmento que contm o restante das duas cadeias pesadas, cada uma contendo um domnio CH2 e CH3. Esse fragmento foi chamado Fc porque facilmente cristalizado.

Figura 4 Fragmentos deImunoglobulina: Relaes

estrutura/funo

Funes efetoras As funes efetoras das imunoglobulinas so mediadas por esta parte da molcula. Diferentes funes so mediadas por diferentes domnios nesse fragmento (Figura 5). Normalmente a habilidade de um anticorpo exercer uma funo efetora requer a ligao prvia a um antgeno; entretanto, h excees a essa regra.

C. F(ab')2
Tratamento de imunoglobulinas com pepsina resulta na clivagem da cadeia pesada depois das pontes dissulfeto H-H intercadeia, resultando em um fagmento que contm ambos os stios de ligao a antgenos (Figure 6). Esse fragmento foi chamado F(ab') 2 porque divalente. A regio Fc da molcula digerida a pequenos peptdeos pela pepsina. O F(ab')2 liga-se a antgeno mas no media as funes efetoras dos anticorpos.

Figura 5 Fragmentos deImunoglobulina: Relaes

estrutura/funo

VI. CLASSES DE IMUNOGLOBULINAS HUMANAS, SUBCLASSES, TIPOS E SUBTIPOS A. Classes de imunoglobulinas Figura 6 Fragmentos As imunoglobulinas podem ser divididas em cinco classes diferentes, com base nas diferenas em seqncias de aminocidos na regio de Imunoglobulina: Relaes constante das cadeias pesadas. Todas a imunoglobulinas de uma
estrutura/funo mesma classe tem regies constantes de cadeia pesada muito similares. Essas diferenas podem ser detectadas por estudos de

seqncias ou mais comumente por meios sorolgicos (i.e. pelo uso de anticorpos dirigidos a essas diferenas). 1. IgG Cadeias pesadas gama 2. IgM - Cadeias pesadas mu 3. IgA - Cadeias pesadas alfa 4. IgD - Cadeias pesadas delta 5. IgE - Cadeias pesadas psilon

B. Subclasses de imunoglobulinas
As classes de imunoglobulinas podem ser divididas em subclasses baseadas em pequenas diferenas nas seqncias de aminocidos na regio constante das cadeias pesadas. Todas as imunoglobulinas de uma subclasse tm seqncias de aminocidos de regio constante de cadeia pesada muito similares. Novamente essas diferenas so mais comumente detectadas por meios sorolgicos. 1. Subclasses de IgG a) IgG1 Cadeias pesadas gama 1 b) IgG2 - Cadeias pesadas gama 2 c) IgG3 - Cadeias pesadas gama 3 d) IgG4 - Cadeias pesadas gama 4 2. Subclasses de IgA a) IgA1 - Cadeias pesadas alfa 1 b) IgA2 - Cadeias pesadas alfa 2

C. Tipos de imunoglobulinas
Imunoglogulinas podem ser tambm classificadas pelo tipo de cadeia leve que possuem. Tipos de cadeia leve so baseados na diferena de sequncia de aminocidos na regio constante da cadeia leve. Essas diferenas so detectadas por meios sorolgicos. 1. Cadeias leves kappa 2. Cadeias leves lambda

D. Subtipos de imunoglobulina
As cadeias leves podem ser tambm divididas em subtipos baseados nas diferenas de sequncia de aminocidos da regio constante de cadeia leve.

1. Subtipos de lambda a) Lambda 1 b) Lambda 2 c) Lambda 3 d) Lambda 4

E. Nomenclatura
Imunoglobulinas so nomeadas com base na classe, ou na cubclasse de cadeia pesada e tipo ou subtipo de cadeia leve. A menos que seja precisamente declarado voc deve assumir que todas as subclasses, tipos e subtipos esto presentes. IgG significa que todas as subclasses e tipos esto presentes.

F. Heterogeneidade
Imunoglobulinas consideradas como uma populao de molculas so normalmente muito heterogneas porque elas so compostas de diferentes classes e subclasses cada uma com diferentes tipos e subtipos de cadeias leves. Alm disso, diferentes molculas de imunoglobulinas podem ter diferentes propriedades de ligao a antgenos devido s diferentes regies VH e VL.

VII. ESTRUTURA E ALGUMAS PROPRIEDADES DE CLASSES E SUBCLASSES DE IG A. IgG Figura 7 Estrutura daIgG
1. Estrutura As estruturas de subclasses de IgG esto apresentadas na Figura 7. Todas IgG's so monmeros (imunoglobulina 7S). As subclasses diferem no nmero de pontes dissulfeto e comprimento da regio da dobradia. 2. Propriedades A mais verstil imunoglobulina porque capaz de realizar todas as funes das molculas de imunoglobulinas. a) IgG a principal Ig no soro - 75% das Ig do soro so IgG b) IgG a principal Ig em espaos extra vasculares c) Transferncia placentria - IgG a nica classe de Ig que atravessa a placenta. A transferncia mediada pelo receptor da regio Fc do IgG nas clulas placentrias. Nem todas as subclasses atravessam com a mesma eficincia; IgG2 no atravessa bem. d) Fixao do complemento Nem todas as subclasses fixam com a

mesma eficincia; IgG4 no fixa complemento. e) Ligao a clulas Macrfagos, moncitos, PMN's e alguns linfcitos tm receptores para a regio Fc da IgG. Nem todas as subclasses se ligam com a mesma eficincia; IgG2 e IgG4 no se ligam a receptores de Fc. Uma consequncia da ligao a receptores de Fc em PMN's, moncitos e macrfagos que a clula pode ento internalizar o antgeno melhor. O anticorpo preparou o antgeno para ser comido pelas clulas fagocitrias. O termo opsonina usado para descrever substncias que aumentam a fagocitose. IgG uma boa opsonina. Ligao de IgG a receptores de Fc em outros tipos de clulas resulta na ativao de outras funes.

B. IgM
1. Estrutura A estrutura da IgM est apresentada na Figura 8. IgM normalmente existe como um pentmero (imunoglobulina 19S) mas ela pode tambm existir como um monmero. Na forma pentamrica todas as cadeias pesadas so idnticas e todas as cadeias leves so idnticas. Assim, a valncia teoricamente 10. IgM tem um domnio extra na cadeia mu (CH4) e ela tem outra protena covalentemente ligada via uma ponde S-S chamada cadeia J. Esta cadeia funciona em polimerizao da molcula a um pentmero. 2. Propiedades

8 Estrutura da IgM
pentamrica do soro

Figura a) IgM a terceira Ig mais comum no soro.

b) IgM a primeira Ig a ser feita pelo feto e a primeira Ig a ser feita por uma clula B virgem quando estimulada pelo antgeno. c) Como consequncia da sua estrutura pentamrica, IgM uma boa Ig fixadora do complemento. Assim, anticorpos IgM so muito eficientes em levar lise de microrganismos.

Figura 9 Estrutura da IgM de superfcie celular

d) Como consequncia da sua estrutura, IgM tambm uma boa Ig aglutinadora. Assim, anticorpos IgM so muito boas em agregar microrganismos para eliminao eventual para fora do corpo. e) IgM liga-se a algumas clulas via receptores de Fc.

10 Receptor de antgeno de IgM de superfcie existe como um monmero e no tem cadeia J mas
clula B (BcR) tem 20 aminocidos extras na regio C-terminal para se ancorar na membrana (Figura 9). IgM de superfcie celular funcionam como um receptor para antgeno ou clulas B. IgM de superfcie associada no covalentemente com duas protenas adicionais na membrana da clula B chamadas Ig-alfa e Ig-beta como indicado na Figura 10. Essas protenas adicionais agem como molculas de transduo de sinal uma vez que a cauda citoplasmtica da molcula de Ig por si mesma muito curta para transduzir um sinal. O contato entre a superfcie da imunoglobulina e um antgeno necessrio antes de um sinal ser transduzido pelas cadeias Ig-alfa e Ig-beta. No caso dos antgenos T-independentes, contato entre o antgeno e a superfcie da imunoglobulina suficiente para ativar as clulas B a se

Figura f) Ig de superfcie de clula B

diferenciarem em plasmcitos secretores de anticorpos. Entretanto, para antgenos T-dependentes, um segundo sinal fornecido pelas clulas T auxiliares necessrio para ativar as clulas B.

C. IgA
1. Estrutura A IgA do soro um monmero mas a IgA encontrada em secrees um dmero como apresentado na Figura 11. Quando IgA sai do dmero, uma cadeia J se associa a ela. Quando IgA encontrada em secrees tambm tem outra protena associada a ela chamada de pea secretora T; sIgA s vezes referida como imunoglobulina 11S. Ao contrrio do resto da IgA que feito no plasmcito, a pea secretora feita nas clulas epiteliais e adicionada IgA medida que esta passa atravs das secrees Estrutura de IgA (Figura 12). A pea secretora ajuda a IgA a ser transportada atravs da mucosa e tambm a protege da degradao nas secrees. 2. Propriedades a) IgA a 2 Ig mais comum no soro. b) IgA a principal classe de Ig em secrees lgrimas, saliva, colostro, muco. Uma vez que encontrada em secrees IgA secretora importante na imunidade local (de mucosa). c) Normalmente IgA no fixa complemento, a menos que esteja agregada. d) IgA pode se ligar a algumas clulas - PMN's e alguns linfcitos.
a

Figura 11

Figura 12 Origem da IgA

solvel

D. IgD
1. Estrutura A estrutura da IgD est apresentada na Figura 13. IgD existe somente como um monmero. 2. Propriedades a) IgD encontrada em baixos nveis no soro; seu papel no soro duvidoso. b) IgD primariamente encontrada em superfcies de clula B onde funciona como um receptor para antgeno. IgD na superfcie de clulas B tem aminocidos extras na regio C-terminal para ancoramento membrana. Ela tambm se associa com as cadeias beta de Ig-alfa e Ig-beta. c) IgD liga complemento.

Figura 13 Estrutura da IgD

E. IgE
1. Estrutura A estrutura do IgE est apresentada na Figura 14. IgE existe como um monmero e tem um domnio extra na regio constante. 2. Propriedades a) IgE a Ig srica menos comum uma vez que se liga fortemente com receptores de Fc em basfilos e mastcitos mesmo antes da interao com o antgeno. b) Envolvida em reaes alrgicas Como consequncia da sua ligao a basfilos e mastcitos, IgE envolvida em reaes alrgicas. Ligao do alergeno IGe nas clulas resulta na liberao de vrios mediadores farmacolgicos que resulta em sintomas alrgicos. c) IgE tambm participa em doenas parasitrias por helmintos. Uma vez que os nveis sorolgicos de IgE aumentam em doenas parasitrias, a quantificao dos nveis de IgE auxilia no diagnstico de infeces parasitrias. Eosinfilos tm receptores de Fc para IgE e a ligao de eosinfilos a helmintos cobertos por IgE resulta na morte do parasita. d) IgE no fixa complemento.

14

Figura
Estrutura da IgE

IMPLICAES CLNICAS DAS CLASSES DE IMUNOGLOBULINAS HUMANAS

Adaptado de:F.T. Fischbach in "A Manual of Laboratory Diagnostic Tests," 2nd Ed., J.B. Lippincott Co., Philadelphia, PA, 1984.

IgG
1. Aumenta em:
a) Infeces granulomatosas crnicas b) Infeces de todos os tipos c) Hiperimunizao d) Doenas hepticas Anticorpo em e) Desnutrio (severa) Antibody Resource f) Disproteinemia g) Doenas associadas com hipersensibilidade granulomas, desordens dermatolgicas, e mieloma de IgG. h) Artrite reumatide

Figura 15
rotao
2000 Page Antibody Concepts

2. Diminui em:
a) Agamaglobulinemia b) Aplasia linfide c) Deficincia seletiva IgG, IgA

d) Mieloma de IgA e) Proteinemia de Bence Jones f) Leucemia linfoblstica crnica

IgM
1. Aumenta (em adultos) em:
a) Macroglobulinemia de Waldenstrm b) Tripanosomase c) Actinomicose d) Doena de Carrin (bartonelose) e) Malria f) Mononucleose infecciosa g) Lpus eritematoso h) Artrite reumatide I) Disgamaglobulinemia (certos casos) Nota: No recm nascido, um nvel de IgM superior a 20 ng./dl uma indicao de estimulao do sistema imune in utero e estimulao pelo vrus da rubola, citomegalovrus, sfilis, ou toxoplasmose.

2. Diminui em:
a) Agamaglobulinemia b) Desordens linfoproliferativas (certos casos) c) Aplasia linfide d) Mieloma de IgG e IgA e) Disgamaglobulinemia f) Leucemia linfoblstica crnica

IgA
1. Aumenta em:
a) Sndrome de Wiskott-Aldrich b) Cirrose heptica (na maioria dos casos) c) Certos estgios de desordens autoimunes do colgeno e outras, tais como artrite reumatide e lpus eritematoso d) Infeces crnicas no baseadas em deficincias imunolgicas e) Mieloma de IgA

2. Diminui em:
a) Ataxia telangiectasia hereditria b) Estados de deficincia imunolgica (ex. disgamaglobulinemia, agamaglobulinemia congnita e adquirida, e hipogamaglobulinemia) c) Sndromes de mal absoro d) Aplasia linfide e) Mieloma de IgG f) Leucemia linfoblstica aguda

g) Leucemia linfoblstica crnica

IgD
1. Aumenta em:
a) Infeces crnicas b) Mielomas de IgD

IgE
1. Aumenta em:
a) Doenas de pele atpicas tais como eczema b) Febre do feno c) Asthma d) Choque anafiltico e) Mieloma de IgE

2. Diminui em:
a) Agamaglobulinemia congnita b) Hipogamaglobulinemia por defeito no metabolismo ou na sntese de imunoglobulinas