PR-REITORIA DE GRADUAO CURSO DE CINCIAS BIOLGICAS

RELATRIO 4
Separao de organelas e macromolculas das clulas por centrifugao

PAULO HENRIQUE GONALVES RABELLO

Taguatinga DF Abril, 2012

Introduo A Tradescantia purprea uma planta que tem origem no Mxico, possui uma colorao roxa devido a um derivado do sal flavlico a antocianina. (Patro, 2010) As antocianinas so pigmentos solveis em gua, pertencentes famlia dos flavonides. Em plantas, podem ser encontradas em flores, frutos, folhas, caules e sementes, tendo como funes: a atrao de polinizadores, a disperso de sementes, a proteo contra danos provocados pela luz UV e contra o ataque de patgenos (Winkel-Shirley, 2001). Estas tem a caracterstica de ter a colorao rosa em meio cido e verde em meio alcalino. Ross & Kasum relataram que as antocianinas apresentam grande importncia na dieta humana, podendo ser consideradas como agentes teraputicos, por possurem capacidade protetora contra o estresse oxidativo, doenas do corao, certos tipos de cnceres e outras doenas relacionadas, e tambm, pela sua capacidade de inativar radicais livres. A Tradescantia purprea tambm possui os cloroplastos, organela que contm a clorofila, estrutura que produz a energia para a planta. Segundo Pelczar, 1996, o cloroplasto um corpo em forma de pepino, circundado por uma dupla membrana e no seu interior h um DNA, circular como os de procariontes, ribossomos 70 S, como os ribossomos procarionte, e enzimas necessrias para utilizao de dixido de carbono do ar. A clorofila um pigmento fotossintetizante, que possui um intensa cor verde que se deve a suas fortes absores das regies azuis e vermelhas do espectro eletromagntico, e por causa destas absores a luz que ela reflete e transmite parece verde. Ela capaz de canalizar a energia da luz solar em energia qumica atravs do processo de fotossntese. Neste processo a energia absorvida pela clorofila transforma dixido de carbono e gua em carboidratos e oxignio. Um dos mtodos usado para a separao da antocianina da clorofila a centrifugao. A centrifugao consiste em separar uma parte solida de uma parte liquida atravez da fora de centrifugao, que leva particulas mesmo que pequenas para o fundo do recipiente crinado assim um sobrenadande, parte liquida, e um pellet, parte solida acumalada no fundo.

Desta forma, o objetivo deste experimento foi separar a antocianina da clorofila por centrifugao.

Materiais e mtodos Para separar a clorofila da antocianina foi necessrio, primeiramente esmagar algumas folhas da Tradescantia purprea com gua acidulada, com um pistilo em um gral. A parte liquida desta macerao foi passada para um eppendorf, esta troca de recipiente pode ser feita por uma pipeta Pasteur. O liquido deve ir para uma centrifuga por 15 (quinze) segundos, o pellet, formado pelos resduos maiores e pelas fibras da planta, foi descartado e o sobrenadante, que contm a antocianina e o cloroplasto, foi transferido para um novo eppendorf. Este novo eppendorf foi levado centrifuga, sendo centrifugado por 5 minutos. Deste centrifugado, o sobrenadante, contm a antocianina que esta rosa, pois o meio acido, foi posto em outro eppendorf e o pellet, contm os cloroplastos, foi ressuspenso em gua acidulada e se acrescenta uma gota de detergente para romper a parede de fosfolipdio do cloroplasto. Os dois eppendorfs so centrifugados novamente, mas se observa que no h um pellet apenas um sobrenadante rosa, composto por antocianina e gua acidulada, e um sobrenadante verde, composto por clorofila e gua acidulada.

Resultados Primeiramente foi coletado parte do macerado das folhas de Tradescantia purprea e posto em um eppendorf, este centrifugado por 15 segundos para retirar os maiores resduos, foi coletado o sobrenadante e recentrifugado o resultado desta centrifugao pode ser visto na figura 1. Aps separar o sobrenadante e o pellet do eppendorf da figura um, o pellet ressuspendido em gua acidulada e com uma gota de detergente neutro e ambos, pellet ressuspenso e sobrenadante com antocianina, so centrifugados novamente, o resultado observado nas figuras 2 e 3.

Figura 1: Eppendorf com sobrenadante rosa, pois contm a antocianina e o pellet verde, pois contm os cloroplastos. (Autor: Thais Alves, 2012)

Fugara 2: Eppendorf apenas com sobrenadante com gua acidulada e clorofila. (Autor: Thais Alves, 2012)

Figura 3: Eppendorf com antocianina, na parte inferior o pH esta alcalino por isso a antocianina esta verde, na parte superior o pH esta cido e por isso a antocianina esta rosa. (Autor: Thais Alves, 2012)

Discusso Com o termino do experimento fica claro que a separao entre a clorofila e antocianina foi feita, mas tambm se percebe que com a centrifuga que foi usada no pode precipitar e separar a clorofila da gua acidulada e nem a antocianina da gua acidulada. Isso acontece, pois a clorofila e a antocianina so muito pequenas e para separar estes compostos a fora da centrifuga teria que ser muito maior. A importncia da utilizao da gua acidulada fica clara no ltimo momento do experimento, pois visvel a mudana da cor da antocianina, se a gua estivesse alcalina no seria possvel distinguir a clorofila verde da antocianina verde em meio alcalino.

Bibliografia WINKEL-SHIRLEY, B. Flavonoid biosynthesis, a colourful model for genetics, biochemistry, cell biology, and biotechnology. Plant Physiology, Minneapolis, n.126, p.485493, 2001.

ROSS, J.A.; KASUM, C.M. Dietary flavonoids: bioavailability, metabolic effects, and safety. Annual Review of Nutrition, Palo Alto, n.22, p.19-34, 2002.

PELCZAR, M. J. Microbiologia Conceitos e Aplicaes, So Paulo: Pearson Education do Brasil, 524, 1996.