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Introduo

Os leos essenciais so substncias lipossolveis, porm volteis, que integram o metabolismo secundrio das plantas. Em geral, esses leos so produzidos por estruturas secretoras especializadas, tais como plos glandulares, canais oleferos, clulas parenquimticas diferenciadas ou em bolses, que podem estar por todas as partes da planta ou no. Assim sendo, eles so encontrados na parte area, como na menta; nas flores, como o caso da rosa e do jasmim, e dentre mais formas, como folhas, frutos, sementes etc. Apesar de denominados leos essenciais, estes no so leos sob o aspecto fsico-qumico. Uma vez que no apresentam viscosidade, so relativamente volteis e, na maioria das vezes, possuem odor agradvel. Ou seja, os leos essenciais s so chamados de leos porque so hidrofbicos e lipoflicos. So quimicamente, em sua maioria, formados por misturas complexas de substncias terpnicas. Os constituintes principais dessas misturas so os monoterpenos. Sua frmula qumica geral (C5H8)n, tradicionalmente eram considerados como derivados do 2-metil-butadieno, aps estudos de biossntese, concluiu-se que os terpenos no derivam do isopreno, mas sim do cido mevalnico. O mentol o monoterpeno presente em maior concentrao no leo essencial de menta. Elemento pertencente famlia dos lcoois que geralmente se apresenta sob a forma de cristais. Ele o responsvel pela sensao de refrescncia de diversas balas, chicletes, pastilhas e bebidas com o sabor de menta afinal, o mentol tem o poder de enganar os receptores da boca sensveis ao frio. No entanto o leo essencial de menta possui cerca de mais de 150 monoterpenos, no entanto estes esto em menor concentrao que o mentol. Diante disso, de toda a essa riqueza, que os leos essenciais so utilizados pelos mais diversos ramos da indstria, como da cosmtica, alimentcia, farmacutica, mdica, de perfumaria e vrias outras. Objetivo
Aprender a operar um cromatografo e atravs de padres internos

conseguir registrar picos bem resolvidos da amostra, com isso, conseguir diferenciar os resultados dos grficos de padronizao interna e externa e entender qual o mais eficiente, conforme, as necessidades do laboratrio.

Equipamentos/Materiais/Reagentes utilizados Equipamentos:

Cromatografo HP-7890 com FID


coluna:

HP-5(polidimetisiloxano fenil).30mx0,25mmx0,25m

com

5%

de

Balana analtica

Materiais: Basto de vidro Becher de 50ml Pipeta graduada de 2,0ml


Micropipeta de 200l

Balo volumtrico de 25,00 ml 5 bales volumtricos de 10,00ml Reagentes: Gs de arraste: He 1,0ml/min Metol Metanol 2-metil-1-butanol Essncia de menta

Procedimento:

Para preparar as solues-padro da curva de calibrao, foi preparada uma soluo me (M1), que foi feita diluindo-se 150mg de mentol em 10,00mL de metanol. Depois foi feita uma segunda soluo (M2) transferindo-se 2,00mL da soluo M1 para um balo volumtrico de 25,00mL e completando seu volume com metanol. Depois, preparou-se as solues-padro colocando-se diferentes alquotas da soluo M2, segundo a tabela abaixo, e 10,00L de padro interno (2metil 1-butanol) em bales volumtricos de 10,00mL. Todos tiveram seu volume completado com metanol.

Padro A B C D

Alquota da soluo M2 (mL) 1,00 2,00 5,00 7,00

Na preparao da amostra, foram medidos, pesando-se ao dcimo de miligrama, 200L de uma amostra de essncia de menta em um balo volumtrico de 10,00mL, que teve seu volume aferido com metanol. Depois, transferiu-se 1,00mL dessa soluo para outro balo volumtrico de 10,00mL, no qual adicionou-se 10,00L do padro-interno e completou-se o volume com metanol. Cada padro foi injetado no equipamento atravs de injeo automtica e, logo depois, foram lidas as reas do analito e do padro interno para a montagem da curva de calibrao pelo mtodo de padronizao externa e interna, seguida da anlise da amostra de concentrao desconhecida.

Resultados e Discusso

Mediante os cromatogramas obtidos durante as injees dos padres e da amostra, obtm-se os seguintes dados: Padr Mentol o (g/mL) rea (P.I.) PAD1 PAD2 PAD3 120 240 600 212,5 253,7 258,1 rea (Mentol) 50,8 102,9 155,2 Mentol/P.I. 0,2390588 24 0,4055971 62 0,6013173 19 1,2681800 69

PAD4 840 259,9 329,6 Tabela 1: Dados da Padronizao Interna

Quando plotamos tais dados na forma grfica, obtemos o seguinte:

Grfico 1 : Padronizao Interna do Mentol Percebe-se que, dentre os pontos, o referente ao Padro 3, PAD3, esteve desalinhado dos demais, talvez por um algum erro durante a preparao. Portanto, eliminando-se este ponto, obtemos o seguinte grfico:

Grfico 2 : Padronizao Interna do Mentol excetuando-se o 3 ponto Percebe-se a significativa mudana causada pela retirada do terceiro ponto. O grfico se torna 100% linear, o que mostra uma boa injeo e integrao dos picos. Caso procedssemos pela metodologia de padronizao externa, os dados e o grfico seriam como os apresentados a seguir:

Padr rea Conc. o (Mentol) Mentol PAD1 50,8 120 PAD2 102,9 240 PAD3 155,2 600 PAD4 329,6 840 Tabela 2: Dados para Padronizao Externa

Grfico 3 : Padronizao Externa do Mentol Novamente, percebe-se a falta de alinhamento do terceiro ponto, confirmando a hiptese de ter ocorrido algum erro em sua preparao. Portanto, ao retirar-se tal ponto obtemos o seguinte grfico:

Grfico 4 : Padronizao Externa do Mentol excetuando-se o 3 ponto

Ao compararmos os grficos 2 e 4 (Padronizao Interna e Externa sem o ponto referente ao Padro 3), percebemos a maior linearidade da curva referente padronizao interna. Isto ocorre, porque se trabalha com um padro interno de concentrao conhecida e fixa desde o incio da preparao dos padres. Visto que o grfico plotado levando em considerao a razo das reas obtidas entre o Padro Interno (2-metil-1-butanol) e o mentol, as perdas sofridas pelo ltimo so compensadas pelas perdas sofridas pelo primeiro, gerando, ento, um grfico com menos interferncias e erros oriundos de perdas durante a preparao. Isto no ocorre na Padronizao Externa, tornando-a mais susceptvel a erros provocados por perdas de analito durante a preparao dos padres. Quanto amostra, temos os seguintes dados: rea (P.I.) Amost ra 285,8 rea (Mentol) 77,6 Mentol/P.I. 0,271519

Mediante estes dados, podemos encontrar a concentrao de mentol na amostra. Como foi discutido anteriormente, a Padronizao interna produz uma curva melhor e mais confivel, logo, a concentrao da amostra ser calculada levando em considerao a equao da reta do Grfico 2: y = 0,0014 x + 0,0648 Onde: y Sx/SP.I. x Concentrao de Mentol em g/mL Assim temos: 0,271519 = 0,0014x + 0,0648 x = 147,6564286 g/mL Como os 200L amostra foram diludos de maneira a formar 10,00mL de soluo, obtemos uma concentrao de 20L de amostra/mL. Contudo, uma alquota de 1,00mL desta soluo foi levada a 10,00mL, gerando uma nova concentrao de 2L de amostra/mL. Esta soluo foi injetada no cromatgrafo a gs gerando o valor de concentrao de mentol acima calculado. Desta forma, obtivemos uma diluio final de 100 vezes, logo a amostra original possui cerca de 14.765g/mL de mentol, ou seja, 14,76mg de mentol/mL de essncia de menta. Tarefas

As questes referentes as letras a) e b) foram respondidas acima. c) Acontece que a resposta do equipamento no a mesma o tempo todo, ou seja, ela varia e com isso, faz com que a rea do Padro Interno tambm varie. Durante o preparo dos padres, as perdas tambm no so exatamente as mesmas o tempo todo, os volumes aferidos tambm podem sofrer algumas variaes. Durante a corrida, pode haver um pequeno espalhamento. Todas essas circunstncias provocam certa diferena, por mais que se faa tudo da forma mais correta possvel. A concentrao no considerada porque ela constante: Sx/SPI = Kx/KPI . Cx/CPI Como C=m/V, temos: Sx/SPI = Kx/KPI . mx/Vx / mPI/VPI Sx/SPI = Kx/KPI . mx / mPI Como a mPI uma constante e o volume final de PI o mesmo da amostra (10mL), pode desconsiderar os volumes. Visto que a relao Kx/KPI constante e a massa de PI tambm constante, pode junt-las em um nico termo constante, fazendo com que a relao de reas fique somente em funo da massa do analito e no se considere a concentrao do PI. Assim: Sx/SPI = Kx/KPI . mx / mPI Sx/SPI = [Kx/(KPI . mPI)] . mx Y = a . Concluso

Foi possvel observar por cromatografia gasosa a rea de pico dos padres internos e da amostra. Para realizao do trabalho utilizou-se padres de mentol e obtivemos valores de coeficiente de correlao muito interessantes (R* =1 para padronizao interna e R*= 0,999 para padronizao externa, desconsiderando-se o 3 ponto) mesmo tendo problemas com o padro 3 problemas que creditamos a forma de preparo -, o que indica bom funcionamento do cromatgrafo e do detector. Bibliografia
http://oleosessenciais.org/category/termos_definicoes/oleos_essenciai

s/ (acessado em 14 Jan 2012)


http://sec.sbq.org.br/cd29ra/resumos/T0370-1.pdf (acessado em 14

Jan 2012)

http://pt.wikipedia.org/wiki/Terpeno (acessado em 14 Jan 2012)