Mestrado em Engenharia Biomdica: Especializao em EBTO IMUNOLOGIA E BIOCOMPATIBILIDADE 1 ANO (2 Semestre)

UNIVERSIDADE CATLICA PORTUGESA Faculdade de Engenharia

Biocompatibility of implants: lymphocyte/macrophage interactions

James M. Anderson & Amy K. McNally

ANO LECTIVO 2011/2012 Bruno Heleno, Kevin Sales e Snia Vaz

Contedos
Resposta inflamatria e cicatrizao de feridas com biomateriais; Interaces de clulas inflamatrias em biocompatibilidade; Concluses

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Resposta inflamatria e cicatrizao de feridas com biomateriais

BIOCOMPATIBILIDADE

Mecanismos Homeostticos
(durante a cirurgia)

Consequncias Patolgicas
(aps a cirurgia)

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Leso cirrgica de tecidos e rgos; (1) Adsoro de protenas; (2) Inflamao Aguda e (3) Crnica; (4) Formao Tecido de Granulao; (5) Reaco ao corpo estranho; (6) Fibrose e encapsulao fibrtica.

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1 Fase

Activao dos mecanismos de defesa primria para limitar/ neutralizar o corpo estranho;

2 Fase

Cicatrizao da ferida; Reparao e reconstituio do tecido lesado no local do implante (tecido fibroblstico);

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4x1x4x1
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4x2x3x1
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1. Adsoro proteica
Logo aps a implantao; Formao de uma matriz provisria;
(contm quimoquinas, citoquinas e outros agentes bioactivos )

Mediada por famlias de integrinas 1 e 2 ; 1 permite a ligao de mltiplos ligandos de protena (fibronectina, colagnio, vitronectina e laminina)
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Adsoro da vitronectina
(papel crtico para o desenvolvimento)

Reaco ao corpo estranho

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2. Inflamao Aguda
Marcada pela presena de leuccitos polimorfonucleares (PMNs); PMNs migram rapidamente para o local da leso (implante) em resposta a estmulos quimiotcticos; Mediada pela degranulao dos mastcitos;

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PMNs + moncitos/macrfagos Diminui a formao de FBGC

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3. Inflamao Crnica

Caracterizada pela presena de macrfagos derivados de moncitos (clula mais importante), linfcitos e clulas plasmticas; Ocorre a neovascularizao e o desenvolvimento do tecido conjuntivo;

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4. Tecido de Granulao
(continuao da resposta inflamatria crnica)

Desenvolve-se apenas quando existe perda de tecido ou danificao da arquitectura do tecido; Dentro de si clulas endoteliais vasculares proliferam a partir de vasos sanguneos prexistentes; Ocorre a neovascularizao (angiognese); Fibroblastos sintetizam colagnio e proteoglicanos (constituintes da matriz extracelular)
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5. Reaco ao corpo estranho

Constituda por: FBGC (clulas gigantes do corpo estranho) em torno do ou no biomaterial + presena de macrfagos + componentes tecido de granulao; Sua composio depende da superfcie do biomaterial; Pode persistir durante o tempo de vida do biomaterial;
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 FBGCs medeiam biomaterial*;

degradao

do

IN VITRO, descobriu-se que: FBGCs so induzidas a partir de macrfagos derivados de moncitos humanos por linfoquinas; A induo por parte das linfoquinas depende as propriedades da superfcie do material;
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Formao de FBGC

BIOCOMPATIBILIDADE

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6. Fibrose e encapsulao fibrtica

BIOMATERIAL BIOCOMPATVEL?

ENCAPSULAO REGENERAO FIBRTICA

(SUSBSTITUIO DO TECIDO LESADO POR CLULAS DO MESMO TIPO) (SUSBSTITUIO DO TECIDO LESADO POR TECIDO FIBROSO)
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Resumindo

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Biomaterial - induo da activao dos macrfagos

Inflamao crnica (presena de corpo estranho no fagocitvel) Formao FBGCs

Qual o biomaterial que induz a activao de macrfagos com este fentipo

Degradao do biomaterial

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Biomaterial - induo da activao dos macrfagos

Distino das vias de activao de macrfagos Via alternativa Activao pelas linfoquinas da Th2 IL-4 Respostas humorais e alrgicas Via clssica Activao pelas linfoquinas da Th1 IFN- Imunidade celular citoquinas prinflamatrias

citoquinas antiinflamatrias

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Biomaterial - induo da activao dos macrfagos

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Biomaterial - induo da activao dos macrfagos

Il-4 de macrfagos activados pela via alternativa so potentes indutores da formao de FBGC in vitro, podendo-se concluir que desempenham um papel importante na formao de FBGC in vivo Il-4 tambm produzido pelas NK e pelos linfcitos NKT Os eosinfilos, basfilos e mastcitos so tambm potenciais fontes destas citoquinas

Origens precisas das citoquinas indutoras da formao de FBGC no local do implante permanecem obscuras!

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Biomaterial - induo da activao dos macrfagos

Estudo in vitro mais recente : CaractersQcas inovadoras da induo de FBGC pela Il-4 Forte expresso de um marcador da acQvao alternaQva, a galecQna3, o ligante desta e a molcula CD98 co-estimuladora dos linfcitos Resultados no foram publicados Estas descobertas podero ser teis para uma melhor compreenso e caracterizao do fentipo dos macrfagos que interagem com os biomateriais implantados Poder ser vantajoso para desvendar o significado fisiolgico da formao dos FBGC nos locais de implantes

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Interaces de clulas inflamatrias em biocompatibilidade

Macrfagos como principais determinantes de resultados biocompatveis

As interaces das clulas inflamatrias tm um impacto significativo na biocompatibilidade, comprometendo as funcionalidades dos dispositivos mdicos. Da os macrfagos e os FBGC serem alvos de investigao. Macrfagos e FBGC

Efeitos crticos no tecido no biomaterial implantado

Biodegradao oxidativa dos poliuretanos de polister (isolamentos de pacemakers e excertos vasculares de polister Dacron)
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Macrfagos como principais determinantes de resultados biocompatveis

Macrfagos aderentes e FBGC Hiperplasia em excertos vasculares: Turbulncia do uxo sanguneo e trombose Resposta inamatria ao stent leva proliferao de Enfraquecimento de prteses: Promovem a acumulao e proliferao celular prtese entre osso e

Produo de mltiplas citoquinas e quimioquinas

Micromovimento da prtese que leva ao seu enfraquecimento

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Macrfagos como principais determinantes de resultados biocompatveis

Soluo Frmacos anti-inflamatrios A longo prazo compromete as defesas do organismo

1. Adeso de macrfagos ao material 2. Sinalizao de adeso 3. Anoikis 4. Quimioquinas e citoquinas

Atenuao da resposta crtica dos moncitos/macrfagos ou FBGC pode levar diminuio da reaco e aumentar eficcia dos dispositivos mdicos

Principais mecanismos agudos e crnicos de resposta celular

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Papis emergentes dos linfcitos na biocompatibilidade

Macrfagos Linfcitos Fase crtica Os biomateriais aparentemente no so imunognicos. Assim sendo tm sido clinicamente observadas as respostas dos linfcitos a materiais sintticos. ESTUDO: Pacientes com um LVAD implantado LVAD recuperado apresentava linfcitos T activados aderentes aos macrfagos nas superfcies

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Papis emergentes dos linfcitos na biocompatibilidade

ESTUDO: Pacientes em hemodilise Resultados: diminuio no nmero de linfcitos NK em circulao aps a exposio aos polmeros dos materiais biomdicos, ou seja, aps dilise Problemas: pacientes adquirem uma maior susceptibilidade para infeces virais

CONCLUSO: Estes dois estudos demonstraram que tanto a activao como apoptose de linfcitos so devidos s interaces dos linfcitos com os biomateriais e levam a consequncias clnicas adversas e reduo de biocompatibilidade.

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Interaces macrfago/linfcito
REVISES
A progresso dos eventos inflamatrio e da reaco ao corpo estranho caracterizada pelo aparecimento dos macrfagos e linfcitos, no local do implante. As trajectrias destas clulas so mediadas pelas citoquinas/quimioquinas. As quimioquinas tambm esto envolvidas: Diferenciao e proliferao de linfcitos Activao de macrfagos Os linfcitos e os macrfagos so capazes de se activarem um ao outro por mecanismo directos e indirectos. Dependendo da citoquina/quimioquina que activa os macrfagos estes produzem uma infinidade de protenas.
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Interaces macrfago/linfcito
As clulas NK e os linfcitos NK podem ser activados por citoquinas, para produzir, por exemplo, IFN- e so tambm fontes de IL-4 Funes destas clulas so afectadas pela exposio a membranas de dilise

Ratos com deficincias de linfcitos T tm reaco normal de corpo estranho ao implante! Mas no entanto estas clulas , que produzem IL4, so relevantes para a formao de FBGC !

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Interaces macrfago/linfcito
1. Promove adeso dos macrfagos e a sua fuso formando FBGC 2. Interaces linfcito/macrfago promove a proliferao dos linfcitos 3. Interaces linfcitos/macrfagos so influenciadas pelas propriedades qumicas do biomaterial 4. Interaces linfcitos/macrfagos promove a produo de citoquinas dependente do biomaterial 5. Interaces linfcitos/macrfagos promove a produo do INF- 6. Ratos deficientes em Th1/Th2 demonstram uma reaco normal ao corpo estranho

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Modelao de linfcitos na adeso dos macrfagos e formao de FBGC

Os linfcitos encontram-se precocemente e de um modo relativamente transitrio nos locais de implantao. Ser que os linfcitos influenciam a posteriormente a resposta ao corpo estranho? EXPERINCIA: sistema in vitro de moncito/macrfagos/FBGC humanos sistema de cocultura de linfcitos/macrfagos

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Modelao de linfcitos na adeso dos macrfagos e formao de FBGC

RESULTADOS Moncitos na ausncia de linfcitos 10% fuso Linfcitos num ptimo rcio durante adeso inicial de moncitos: Taxa de adeso e subsequente fuso de macrfagos aumenta significativamente (50-60%) Adio dos linfcitos mais tarde (3 ou 7 dias) Diferenas diminuem Constatou-se que 90% dos linfcitos aderentes associam-se aos macrfagos e no s superfcies do material Concluso: interaco entre os linfcitos e os moncitos nas fases iniciais de adeso e cultura so crticas para o aumento da adeso de moncitos/macrfagos e subsequentemente para a fuso dos macrfagos
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Influncia das caractersticas qumicas da superfcie do biomaterial nas interaces Linfcito/macrfago

Efeitos de diferentes superfcies na adeso dos moncitos, fuso de macrfagos e na proliferao dos linfcitos

Usaram-se materiais baseados em PET para expor as clulas a diferentes condies qumicas: Hidrofbicas Hidroflicas/neutras Hidroflicas/aninicas Hidroflicas/catinicas

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Influncia das caractersticas qumicas da superfcie do biomaterial nas interaces Linfcito/macrfago

Hidroflicas/neutras Hidroflicas/aninicas Hidroflicas/catinicas

Interveno na adeso inicial No h fuso de macrfagos nem formao FBGC Incapacidade suportar proliferao de linfcitos posteriormente

Diminuio da adeso (entre dia 3 e 7) Aumento da proliferao de linfcitos Aumento da fuso de macrfagos

Diminuio da adeso (entre dia 3 e 7) No houve aumento da proliferao de linfcitos No houve aumento da fuso de macrfagos

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Influncia das citoquinas/quimioquinas nas interaces linfcitos/macrfagos

REVISO: Citoquinas/quimioquinas participam na diferenciao e proliferao de linfcitos bem como na activao de macrfagos Dependente do estmulo (citoquina/quimioquina) os macrfagos produzem diferentes citoquinas INVESTIGAO: Arrays de citoquinas de protenas e ELISA Investigar a produo de quimioquinas/citoquinas Coculturas de linfcitos/macrfagos Identificou-se a produo de mediadores solveis que atingem os linfcitos e os macrfagos

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Influncia das citoquinas/quimioquinas nas interaces linfcitos/macrfagos

Detectaram-se citoquinas, nos locais de implantao, capazes de suprimir o comportamento dos linfcitos e dos macrfagos IL-10 que uma citoquina anti-inflamtoria que induz anergia nas clulas T CD4+ TNF-: Induz a diminuio da resposta das clulas T Induz apoptose Estudos revelam que a apoptose dos macrfagos dependentemente do biomaterial ocorre por mecanismos mediados pelo TNF- e a IL-4 bloqueia estes mecanimos Importncia das citoquinas na modulao nos locais de implante ainda no clara!

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Resposta secundria
Especificidade e memrias so caractersticas da resposta imune adaptativa, mediada por linfcitos.
Implante subcutneo do biomaterial (PET, PEU) em ratos Aps 2 semanas, reimplantao com novas amostras do mesmo biomaterial, durante mais 14 dias. Resultado: aumento quantitativo de cls. fagocitrias e linf. T, aps a re-implantao. No foram detectados linf. B.

Explante ao fim de 14 dias.

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Concluso
O conhecimento da resposta do hospedeiro a implantes para determinao da biocompatibilidade dos mesmos. Os linfcitos e, consequentemente, o sistema imune adquirido desempenham um papel muito mais significante do previamente pensado. A compreenso dos mecanismos de imunotoxicidade podem permitir a introduo de novos critrios no design de dispositivos mdicos, prteses e biomateriais.
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Bibliografia

ANDERSON, James M., MCNALLY, Amy K., Biocompatibility of implants: lymphocyte/macrophage interactions, Semin. Immunopathol., 2011, 33: 221-233.

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