Biologia molecular: noes bsicas

Histrico da Biologia Molecular

Descoberta da nucleina - F. Miescher, 1871 O DNA como responsvel pela informao gentica - F. Griffith, 1928 Avery, MacLeod e McCarty, 1944 Hiptese um gene-uma enzima - Beadle e Tatum, 1941 Elucidao da estrutura do DNA - Watson e Crick, 1953 Elucidao do Cdigo Gentico Vrios, 1966 Primeiro experimento de clonagem de DNA - 1973 Descoberta da tcnica de sequenciamento - Sanger, 1976 Descoberta da tcnica de PCR - Mullis, 1980 Lanamento do projeto genoma humano DOE e NIH, 1990 Primeiro alimento transgnico comercializado - 1994 Primeiro genoma sequenciado (H. influenzae) 1995 Primeiro cromossomo humano sequenciado (Chr 22) - 1999 Publicao do rascunho do genoma humano - Venter and Collins, 2001

A era genmica na Biologia Molecular

... the sequencing of the human genome represents, not an ending, but the beginning of a new approach to biology. (Editorial da revista Science em 16/02/2001)

Primeiro genoma X. fastidiosa sequenciado no Brasil 2000 (X. fastidiosa)

A evoluo do conhecimento biolgico

Biologia molecular e o poder de interferir no processo evolutivo...

A arquitetura celular e seus componentes

DNA

LIPDEOS

METABLITOS (CARBOHIDRATOS)

RNA

PROTENAS

As novas reas de estudo: os omas

DNA

mRNA
Interactome PROTENA

INTERM. DO METABOLISMO

O experimento que demonstrou ser o DNA a molcula responsvel pela informao gentica
Avery, MacLeod e McCarty, 1944 Pneumococos SeR

O dogma central da Biologia Molecular

Estrutura do DNA Replicao e Reparo

Estrutura do RNA Transcrio e Processamento

Traduo de Protenas

Controle do fluxo da informao: regulao da expresso gnica

Estrutura do DNA e RNA: componentes principais

Monmeros de ribonucleotdeos (RNA) ou desoxirribonucleotdeos (DNA): aucar pentose fosfato base nitrogenada

Cadeia polinucleotdica do DNA e RNA

5P
Ligaes covalentes entre os nucleotdeos no DNA e RNA: ligaes fosfodister Polaridade 5P 3OH

OH

Maior instabilidade da cadeia de RNA devido OH na posio 2

OH

OH

3OH
Fita simples Dupla fita

A estrutura da dupla hlice do DNA

Watson e Crick, 1953

Ligaes de H entre as cadeias: A=T e C=G 3 5

5 3

Propriedades da dupla fita de DNA

duas cadeias anti-paralelas hlices com giro p/ direita, ~10 nt /volta interior hidrofbico (bases nitrogenadas) exterior hidroflico (aucar), negativo ligaes covalentes (entre o aucar e o P) e interaes fracas (ligaes de H e inter. hidrofbicas entre as bases) o dimetro de 20 A (10-10 m) Comprimento varivel (medido em pb, kb, Mb, etc)

Estimativas de tamanho de genomas

94 cm

4 mm 1.4 mm

Empacotamento do DNA nas clulas

eucariotos

E. coli

Estrutura da cromatina em eucariotos

Empacotamento de nucleossomes octmero de histonas: 2X H2A H3 H2B H4

Estrutura de Protenas

O cdigo gentico
AA AA Sequncia de bases (4)

Sequncia de aminocidos (20)

2. base

43 = 64 trincas:
61 cdons de aminocidos 3 cdons de parada

1. base

3. base

Replicao do DNA
Caractersticas da replicao: Semi-conservativa Bi-direcional

Replicao do DNA: mecanismos

DNA polimerases: adio de dNTPs extremidade 3OH - requer uma cadeia pr-formada (primer) - requer molde - sntese ocorre na direo 5 3

C:\.mov

Os componentes da maquinaria de replicao

DNA Ligase

Mutaes e Reparo
- reparo direto da leso - reparo de erros de pareamento (MMR) - reparo por exciso de bases - reparo por exciso de nucleotdeos - reparo por recombinao

MMR

Expresso gnica

DNA

RNA

protein Procariotos x Eucariotos

membrana nuclear: cromatina: transcrio: presena de operons: RNA polimerase:

ausente ausente policistrnica presente 5 subunidades ( 1 s tipo) afinidade por DNA: alta fatores de transcrio: ausente transduo de sinal: ausente processamento do RNA: ausente nveis de controle: transcricional

presente presente monocistrnica ausente multimrica (Pol I, Pol II, Pol III) baixa vrios fatores vrios mecanismos presente vrios

Expresso gnica em eucariotos e em procariotos

Eventos ps-transcricionais

em bactrias

Estrutura do genoma em procariotos e eucariotos

Presena de ntrons no genoma eucaritico

em eucariotos

Transcrio do RNA
RNA Polimerases RNA polimerase bacteriana requer molde no requer iniciador reconhecem uma sequncia promotora no incio do gene

A maquinaria de transcrio em eucariotos

RNA polimerase II + - Fatores de transcrio basais - Ativadores e inibidores da transcrio

Vrios ativadores/inibidores da transcrio influenciam a transcrio em eucariotos

Etapas do processamento ps-trancricional do mRNA eucaritico

Adio do CAP no 5 Adio da cauda poli A no 3 Retirada dos introns (cis-aplicing)

estrutura do mRNA eucaritico

5CAP
regio codificadora

(A)n
3UTR

5UTR

O pr-mRNA eucarioto sofre 3 etapas de processamento:

adio de CAP

retirada dos introns A transcrio e o processamento do mRNA eucarioto so eventos quase simultneos adio de poli A

Retirada dos introns (splicing)

pre-mRNA

Spliceossomo: snRNA protenas

Traduo
Fatores envolvidos . tRNAs . ribosomo . mRNA . fatores proteicos . aminocidos Etapas da Traduo . Ativao dos aminocidos . Iniciao . Elongao . Terminao Modificaes ps-traduacionais Endereamento das protenas

Ribosoma de bactrias: 30S: 1500 nt rRNA (16S) 20 protenas 50S: 2900 nt rRNA (23S) 120 nt rRNA (5S) 30-40 protenas

AA tRNA

Ativao dos aminocidos

Amino acil tRNA sintetases: ligao dos aminocidos extremidade 3 do tRNA de aordo com o anti-cdon

brao do anti-codon

AAs

Traduo nos polirribossomos:

formao das ligaes peptdicas de acordo com a sequencia dos cdons do mRNA: enzima responsvel?

Nveis de Controle da expresso gnica

Transcricional - modificaes na cromatina - papel de ativadores e inibidores de transcrio Post-transcricional - Processamento do mRNA - Transporte ncleo/citoplasma do mRNA - Estabilidade/degradao do mRNA - Traduo - Modificao na protena

Controle da trancrio em eucariotos: expresso de genes do operon lac

Estruturas de ativadores/repressores procariticos

Vrios elementos no promotor dos genes eucariotos controlam a transcrio em atravs da ligao de vrios fatores proteicos

A acetilao de histonas por ativadores transcricionais causa desempacotamento da cromatina

Cascata de sinalizao e ativao de ativadores da transcrio

Nuclear Run On (ou transcrio em ncleos isolados) pode indicar se ocorre mudana na taxa de transcrio

Controle ps-transcricional: mudanas na meia-vida dos mRNAs

Controle ps-transcricional: alterao da meia-vida do mRNA do receptor de transferrina e da traduo do mRNA de ferritina

Fe

estabilizao do mRNA

Fe
bloqueio da traduo

O papel dos pequenos RNAs no controle da degrao dos mRNAs: o mecanismo de RNAi

siRNA

Splicing alternativo e gerao de diversidade no conjunto de protenas

Microarranjo de DNA: identificao de genes com expresso alterada em tipos celulares diferentes

Preparao de lminas com todos os genes

Chip de DNA: ligao de sequncias correspondentes ao genoma de um organismo

Presentes e futuras aplicaes ...

Medicine

Energy

Environment

Agriculture

Identification

Bioanthropology

SANTUZA TEIXEIRA Departamento de Bioqumica e Imunologia UFMG

santuzat@icb.ufmg.br