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Procedimento Operacional Padro

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GAMA GT LIQUIFORM

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INDICAO MDICA DO EXAME A determinao de -Glutamil Transferase (GGT) em amostras de sangue til no diagnstico de doenas hepticas. PRINCPIO A -Glutamil Transferase catalisa a transferncia do grupamento Glutamil da L- Glutamil-p-nitroanilide para a glicilglicina, formando- Glutamilglicilglicina e p-nitroanilina segundo a reao seguinte: GGT L--Glutamil-p-nitroanilide + Glicilglicina Glutamilglicilglicina + p-nitroanilina. A quantidade de p-nitroanilina liberada, que tem elevada absorbncia em 405 nm, diretamente proporcional atividade da GGT na amostra. AMOSTRA Preparo do paciente Recomenda-se jejum mnimo de 8 horas. Tipos de amostra Usar soro ou plasma (EDTA). Armazenamento e estabilidade da amostra A atividade enzimtica estvel por 7 dias entre 2 8 C e 2 meses a 20 C negativos. Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. PRODUTO UTILIZADO Gama GT Liquiform, Catlogo 105-2/30 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 ANVISA - 10009010004

Reagente 1- Armazenar entre 2 - 8 C. Reagente 2- Armazenar entre 2 - 8 C. Padro - Armazenar entre 2 8 C. Contm p-nitroanilina 500 mol/L e azida sdica 0,095%. No contm gama glutamil transferase. Preparo do Reagente de Trabalho: O conjunto de um frasco de Reagente 1 e de um frasco de Reagente 2 permite preparar o Reagente de Trabalho. Opcionalmente pode-se preparar menor volume do Reagente de Trabalho utilizando a proporo de 4 (quatro) volumes do Reagente 1 e (um) volume do Reagente 2. Indicar o modo de preparao a ser utilizado no laboratrio e o modo de identificao do reagente de trabalho. Estvel 5 dias entre 15 e 25 C e 21 dias entre 2 8 C; Contm tampo 100 mmol/L, pH 8,0, L--Glutamil-p-nitroanilide 4,5 mmol/L, glicilglicina 150 mmol/L, azida sdica 15 mmol/L. Precaues e cuidados especiais 1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais. 3. Os reagentes contm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.

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EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Fotmetro com cubeta termostatizada a 37 C capaz de medir com exatido a absorbncia em 405 nm ou filtro azul (400 a 420 nm). 2. Pipetas para medir amostras e reagentes. 3. Cronmetro. Procedimento automatizado Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual ou pop para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. PROCEDIMENTO Procedimento manual Mtodo Cintico Contnuo Condies de reao: Comprimento de onda: 405 ; cubeta termostatizada a 37 0,2 C; com 10 mm de espessura de soluo, banda de passagem de 2 nm e luz espria 0,1%. Como na maioria das vezes no possvel trabalhar sob essas condies, as boas prticas de laboratrio recomendam realizar a calibrao do ensaio utilizando calibrador de enzimas indicado pelo fabricante do reagente. A Labtest indica a linha Calibra para calibrao do sistema Gama GT Liquiform. 1. Transferir 1,0 mL do Reagente de Trabalho para um tubo 12x75. 2. Adicionar 0,05 mL de amostra ao tubo e misturar. 3. Transferir para a cubeta termostatizada a 37 C e esperar 1 minuto. 4. Fazer a leitura inicial disparando simultaneamente o cronmetro. Repetir as leituras aps 1, 2 e 3 minutos. 5. Calcular a mdia das diferenas de absorbncia por minuto (A/minuto) e utilizar para calcular o resultado. Mtodo Cintico de Tempo Fixo Ver item "Calibrao". Este mtodo requer a utilizao de soluo aquosa de cido actico a 5% (V/V). 1. Tomar 2 tubos de ensaio e proceder como a seguir: Reagente de Trabalho Amostra cido actico 5% 4. Misturar e adicionar: Amostra 0,025 mL ----Branco 0,5 mL ----1,0 mL Teste 0,5 mL 0,025 mL 1,0 mL

2. Incubar a 37 C durante 2 minutos. Sem remover os tubos do banho, adicionar: 3. Misturar e manter a 37 C por EXATANENTE 10 minutos (cronometrados).

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5. Misturar e determinar a absorbncia do teste em 405 nm ou filtro azul (400 a 420 nm) acertando o zero com o branco. A cor estvel 60 minutos. Calibrao Medir a absorbncia do Padro em triplicata. Para que o fator possa ser considerado adequado, a diferena entre as absorbncias no deve ser maior que 2%. Branco Padro gua destilada 0,5 mL 0,5 mL Padro ---0,05 mL cido Actico 5% 1,0 mL 1,0 mL Homogeneizar e determinar as absorbncias das replicatas do Padro em 405 nm (400 - 420 nm) acertando o zero com o branco. A cor estvel 60 minutos. Procedimento automatizado Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos < 0,1 mg/l (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. 3. Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. CLCULOS Ver Linearidade. A Teste ou Calibrador = (A2 - A1)/2 Atividade do Calibrador Fator = A Calibrador Gama GT (U/L) = A Teste x Fator Quando so atendidas as condies timas de reao citadas anteriormente pode-se optar pela no utilizao do calibrador de enzimas e aplicar o fator 2550. Este fator foi obtido em condies experimentais do sistema de medio utilizando uma cadeia contnua de comparaes (rastreabilidade) com o mtodo de referncia da IFCC2. Alternativamente, pode-se, ainda, realizar a medio utilizando o mtodo cintico de tempo fixo. Mtodo Cintico de Tempo Fixo Absorbncia do Teste Gama GT (U/L) = 125 (Valor do padro em U/L) x Absorbncia do Padro

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Intervalo de Referncia Faixa etria Mulheres 0 6 meses 15 132 U/L 6 12 meses 1 39 U/L 1 12 anos 4 22 U/L 12 18 anos 4 24 U/L Adultos 5 27 U/L

Homens 12 122 U/L 1 39 U/L 3 22 U/L 2 42 U/L 7 45 U/L

Temperatura A tabela abaixo permite interconverter atividades enzimticas quando se usa temperaturas de trabalho de 25, 30 ou 37 C. Fatores de correo de temperatura 25 C 30 C 37 C 25 C ---1,37 1,79 30 C 0,73 ---1,30 37 C 0,56 0,77 ---Exemplo: a atividade enzimtica obtida em 37 C deve ser multiplicada por 0,77 para se obter a atividade em 30 C ou por 0,56 para se obter a atividade em 25 C. A atividade enzimtica medida em 25 ou 30 C deve ser dividida por 0,56 ou 0,77 para se obter a atividade em 37 C. Como estes fatores podem variar com diferentes mtodos, sugere-se que sejam utilizados apenas como referncia para comparao de resultados. LIMITAES DO PROCEDIMENTO Linearidade O resultado da medio linear at 700 U/L. Para valores maiores diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L, repetir a determinao e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio. Interferncias 1- Heparina produz resultados falsamente diminudos. 2- Anticoagulantes contendo citrato, fluoreto ou oxalato inibem a atividade da GGT. 3- Valores de Bilirrubina at 38 mg/dL, Hemoglobina at 180 mg/dL e Triglicrides at 1000 mg/dL no produzem interferncias significativas. 4- A GGT est elevada em pacientes que fazem uso prolongado de drogas que induzem o sistema microssomal heptico como o fenobarbital e fenitona, entre outras. 5- O alcoolismo crnico produz aumento da atividade da Gama GT no soro. 6- Para uma reviso das fontes fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia sugere-se consultar Clin Chem 1975;21:1D-432D. SIGNIFICADO CLNICO A GGT tem aplicao principal no estudo das doenas hepatobiliares e est distribuda em quase todo o tecido humano. O rim contm a mais elevada concentrao, seguido pelo pncreas e fgado. A GGT um sensvel indicador de doenas inflamatrias e leso heptica e est significativamente elevada nas doenas obstrutivas das vias biliares. A GGT tem maior especificidade que a fosfatase alcalina (ALP) e a transaminase oxalactica para avaliar doena heptica. Ela no est elevada na doena ssea e durante a gravidez como a fosfatase alcalina, nem nas doenas do msculo esqueltico como a transaminase oxalactica. A GGT auxilia diferenciar colestases mecnica e viral das induzidas por drogas. Nas duas primeiras, a GGT e ALP esto igualmente elevadas. Nas colestases induzidas por drogas a GGT est muito mais elevada. Valores elevados de GGT em pacientes anictricos com cncer so um seguro indicador de metstases hepticas. Est demonstrado que no alcoolismo crnico os nveis sricos da GGT diminuem com a retirada do lcool e se elevam com a exposio ao mesmo. Com base nesta observao a determinao da GGT est sendo usada nos centros de tratamentos de alcolatras para documentar o sucesso da terapia e identificar os pacientes que retornam ao alcoolismo aps a alta. Temperatura

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REFERNCIAS 1. Szasz, G. Clin Chem 1969;15:124-36. 2. IFCC Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentration of -Glutamyltransferase. Clin Chem Lab Med 2002; 40:734-38. 3. Kaplan LA, Pesce AJ: Methods in Clinical Chemistry, St. Louis: The C.V. Mosby Co., 1987; 1122. 4. Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular, Base de Datos de Variacin Biolgica. Disponvel em:<http://www.seqc.es/article/articleview/330/1/170> (acesso em 04/2006). 5. Basques JC. Especificaes da Qualidade Analtica. Labtest Diagnstica 2005. 6. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-501. 7. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference Intervals, 5.ed. Washington: AACC Press, 2005. p.98-99. 8. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia: Saunders Company 1994;980-86. 9. Labtest: Dados de arquivo. 10. Gama Glutamil Transferase: Instrues de Uso, Labtest Diagnstica. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias Destino Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___