A LABORATORY STUDY OF PRODUCING DOCOSAHEXAENOIC ACID FROM BIODIESEL-WASTE GLYCEROL BY MICROALGAL FERMENTATION

PROCESS BIOCHEMISTRY ,2007 Zhanyou Chi , Denver Pyle, Zhiyou Wen , Craig Frear, Shulin Chen

Um estudo laboratorial da produo de cido docosahexaenico (DHA) a partir do glicerol, resduo do biodiesel, por fermentao microalgal.

Seropdica, 2013

Introduo
Biodiesel como combustvel alternativo tem atrado cada vez

mais interesse em todo o mundo nos ltimos anos;

Durante o processo de produo de biodiesel, triglicerdeos

so misturados com lcool metlico e catalisadores alcalinos para a produo de steres de cidos graxos livres, com o glicerol como um principal subproduto;
Em geral, a produo de 100 kg de biodiesel produz

aproximadamente 10 kg de glicerol, impuro e de baixo valor econmico;

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Introduo
Converso de glicerol em produtos de valor agregado fornece

uma alternativa para a eliminao do mesmo e para os seus problemas de excedentes;

Atravs de processos termo-qumicos, o glicerol pode ser

convertido em propilenoglicol e acetol;

E so utilizados como fonte de carbono em processos de

fermentao para a produo de vrios produtos tais como 1,3 propanodiol, lpidos e pigmento;
A fermentao anaerbia de glicerol por E. coli tambm gera uma

mistura de produtos, tais como etanol, succinato, acetato, lactato e hidrognio.

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Introduo
O DHA um importante cidos graxos poliinsaturados (-3

PUFA) com capacidades teraputicas contra doenas cardiovasculares, tipos de cncer, esquizofrenia e Alzheimer, alm de ser nutriente essencial durante o desenvolvimento humano;
O -3 PUFA pode ser extrado a partir de biomassa microalgal e

so utilizados em alimentos, na indstria farmacutica e como um aditivo para raes para peixes na aquicultura;
A microalga Schizochytrium limacinum vem sido relatada como

uma excelente produtora DHA, sendo capaz de produzir um elevado nvel de DHA quando crescidas em glicose ou glicerol.
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Objetivo
Investigar o potencial da utilizao desta microalga para

produzir DHA a partir do glicerol bruto obtido da indstria biodiesel.

Materiais e Mtodos
1. Cepa de algas, condies do meio e da cultura
A microalga de estudo foi Schizochytrium limacinum SR21 (ATCC MYA

Fig1: Schizochytrium sp. Fonte : Google imagens, 2013

1381); As clulas foram mantidas em meio contendo 5g/L de glicose, 1,0g/L de extrato de levedura e 1,0g/L de peptona em gua do mar artificial; O pH foi ajustado e o meio foi autoclavado; As clulas foram cultivadas em erlenmeyer de 250ml, contendo cada um 50 mL de meio+inoculo e incubadas a 20C num agitador orbital ajustado para 170 RPM; A glicose foi substituda glicerol puro ou glicerol bruto; Todos os outros componentes foram as mesmas que as usadas na subcultura; Para cada condio experimental, foram usadas trs repeties, o desvio padro foi calculado.
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Materiais e Mtodos
2. Pr-tratamento do glicerol bruto
Glicerol em bruto foi obtido a partir de tanto o biodiesel de refinaria

Virgnia (West Point , VA, EUA) e Seattle biodiesel (Seattle, WA, EUA) ; Ambas as refinarias usaram transesterificao por um catalisador alcalino para produzir o biodiesel a partir de leo de soja; O glicerol em bruto foi diretamente misturado com gua do mar artificial que mostrou-se prejudicial para o crescimento celular (dados no apresentados); O protocolo de pr-tratamento foi como se segue: (1) a glicerina foi misturado com gua destilada na proporo de 1:4 (v / v ) para reduzir a viscosidade do fluido ; (2) o pH do fluido foi ajustado para cerca de 6,5 com cido clordrico; (3) slido precipitado foi separado da soluo glicerol bruto por centrifugao a 5000 rpm ; (4) aps separao, foi adicionado nutrientes (incluindo glicerol) at um nvel desejado .
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Materiais e Mtodos
3. Anlises
Concentrao de Glicose: mtodo cido 3,5-dinitrosaliclico; Concentrao de Glicerol e Metanol: HPLC; Microalgas

foram colhidas e secas quantificao de cidos graxos em CG.

em

liofilizador,

para

Materiais e Mtodos
4. Planejamento experimental e anlise de dados
1 . Planejamento Plackett Burman: Foi usado para analisar os fatores que tm efeitos significativos sobre a produo de DHA a partir de glicerol bruto; Tabela 1: Variveis selecionadas no planejamento Plackett-Burman

Fonte: Adaptado de CHI et.al., 2007.

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Materiais e Mtodos
4. Planejamento experimental e anlise de dados
Tabela 2: O planejamento Plackett-Burman das variveis (Peso seco de clulas e produo de DHA como respostas)

Fonte: Adaptado de CHI et.al., 2007.

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Materiais e Mtodos
3. Planejamento experimental e anlise de dados
2 . Planejamento composto central Os fatores significativos foram identificados no projeto Plackett - Burman , um planejamento composto central foi utilizado para otimizar seus nveis. A matriz de planejamento era um fator total 24 combinado com seis pontos centrais, e oito pontos axiais onde uma varivel foi fixado em um nvel extremo, enquanto outras variveis foram fixado em seu nvel de ponto central; Com base nos resultados experimentais obtidos na Tabela 3, as respostas (peso seco de clulas e produo de DHA) foram correlacionados como funes das variveis por uma equao polinomial de segunda ordem; O software Design- Expert (Stat -Ease Inc. Minneapolis , MN ) foi utilizado para essa correlao atravs regresso no-liner . O F- teste foi utilizado para avaliar a significncia dos modelos.
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Materiais e Mtodos
3. Planejamento e anlise de dados
Tabela 3: Nveis codificados e os valores reais das variveis independentes no planejamento composto central

Fonte: Adaptado de CHI et.al., 2007.

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Materiais e Mtodos
3. Planejamento e anlise de dados
Tabela 4: O planejamento composto central das variveis significativas (em nveis codificados)

Fonte: Adaptado de CHI et.al., 2007.

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Resultados e discusso
1. Caractersticas do crescimento celular, consumo de
nutrientes e perfil de cidos graxos

Fig.1: Tempo de crescimento celular (A) e consumo do substrato (B) Fonte: Adaptado de CHI et.al., 2007

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Resultados e discusso
1.

Caractersticas do crescimento celular, consumo de nutrientes e perfil de cidos graxos

Tabela 5: Crescimento celular, consumo do substrato e produo de DHA em S. limacinum usando glicose, glicerol puro e bruto

Fonte: Adaptado de CHI et.al., 2007

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Resultados e discusso
1. Caractersticas

do crescimento celular, nutrientes e perfil de cidos graxos

consumo

de

No perfil de cidos graxos totais, o melhor resultado foi para o

glicerol bruto que apresentou 505,69 mg/g de peso seco de clulas;

Efeito do concentrao de metanol mostrou que para 75g/L de

glicerol para que haja viabilidade celular no crescimento das microalgas seria cerca de 15g/L de concentrao de metanol;

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Resultados e discusso
Tabela 7: Efeito da concentrao do glicerol bruto

Fonte: Adaptado de CHI et.al., 2007

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Resultados e discusso
Tabela 8: Comparao do experimental e do previsto em relao as condies timas da cultura

Fonte: CHI et.al., 2007

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Resultados e discusso

Fig.2: Resposta da superfcie em 3D (A) do peso seco das clulas e (B) Rendimento de DHA em funo do acetato de amnio e temperatura. Fonte: CHI et.al., 2007

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Concluso
O trabalho aqui apresentado mostraram a possibilidade de

utilizar menos glicerol em bruto da indstria de biodiesel para produzir DHA usando cultura de microalgas;
O teor de glicerol em bruto ideal para a produo de DHA

de microalgas foi de cerca de 100 g/L;

Utilizao da estatstica com base nos planejamentos

experimentais, verificou-se que temperatura e acetato de amnio foram fatores que influenciaram significativamente a produo de DHA das microalgas a partir de glicerol em bruto.
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Concluso
O nvel ideal desses dois fatores para a produo de DHA

foram determinada com a temperatura de 19,2 C e 1,0 g/L de acetato de amnio;

Em as condies timas da cultura, o contedo de DHA na

biomassa microalgal foi mais do que 20%, com um rendimento de DHA de 4,91 g/L;
A aplicao bem sucedida deste processo poder ter um

impacto significativo na indstria do biodiesel como ajuda para resolver o problema da eliminao do glicerol, enquanto produz simultaneamente um nutracutico valioso.
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Referncias
A LABORATORY STUDY OF PRODUCING

DOCOSAHEXAENOIC ACID FROM BIODIESEL-WASTE GLYCEROL BY MICROALGAL FERMENTATION PROCESS BIOCHEMISTRY ,2007 Zhanyou Chi , Denver Pyle, Zhiyou Wen , Craig Frear, Shulin Chen 1542 Z. Chi et al. / Process Biochemistry 42 (2007) 1537 1545

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