Paulo Henrique Barcellos Frana Orientador: Prof. Dr. Joo Xavier de Arajo-Jnior Co-orientador: Prof. Dr. Thiago Mendona de Aquino Universidade Federal de Alagoas Instituto de Qumica e Biotecnologia Programa de Ps-Graduao em Qumica e Biotecnologia
Introduo Consideraes gerais sobre o grupo guanidina
Base forte (pka 13,6) => encontra-se protonado em pH fisiolgico Estabilizao por deslocalizao da carga
Introduo Consideraes gerais sobre o grupo guanidina
Possibilidade de diferentes tipos de interaes em macromolculas Interao eletrosttica (protonao) Ligaes de hidrognio Interao p-ction Empilhamento p Interao ction-ction
Introduo Consideraes gerais sobre o grupo guanidina
Interao eletrosttica
Introduo Consideraes gerais sobre o grupo guanidina
Ponte salina
Introduo Consideraes gerais sobre o grupo guanidina
Interao p-ction
Introduo Consideraes gerais sobre o grupo guanidina
Empilhamento p
Introduo Consideraes gerais sobre o grupo guanidina
Interao ction-ction
Introduo Mtodos de obteno de guanidinas
Eletrfilos contendo dois ou mais tomos de nitrognio Procedimento de Rathke 1884
SCH 2 CH 3 HN NH 2 HCl NH 3 NH 2 HN NH 2 HCl C 2 H 5 SH Rathke, B. Chem. Ber., v. 17, p. 297, 1884 Introduo Introduo Mtodos de obteno de guanidinas: tioureias
Grande variedade a partir de isotiocianatos
Converso direta guanidina
Converso do tomo de enxofre em um grupo abandonador
S R 1 HN NHR 2 H 2 N R 2 R 1 N C S Introduo Mtodos de obteno de guanidinas: tioureias
Formao de intermedirio carbodiimida
Grupos protetores aumentam a reatividade Cunha, S.; Rodrigues, M. T. Tetrahedron Letters, v. 47, p. 6955-6956, 2006 S XHN NHX X= Boc, Cbz Introduo Obteno a partir de isotioureias
S-alquilao: formao de um grupo abandonador Rendimentos elevados Facilidade de preparao Variedade de aminas
Liberao de metanotiol
Introduo Consideraes gerais sobre leishmaniose
Causada por mais de 20 espcies de Leishmania
Diferentes manifestaes clnicas
Doena negligenciada
Cutnea Mucocutnea Visceral Introduo Consideraes gerais sobre leishmaniose
Nona maior causa de doena infecciosa no mundo
20.000 mortes por LV anualmente
1.000.000 de casos de LC entre 2008-2013
310.000.000 indivduos em reas de risco
Introduo Consideraes gerais sobre leishmania
Medicamentos utilizados
Antimoniato de meglumina Estibogliconato de sdio Anfotericina B Pentamidina Introduo Consideraes gerais sobre leishmania
Medicamentos utilizados
Miltefosina Paromomicina Introduo Consideraes gerais sobre leishmania
Problemas dos medicamentos: elevada toxicidade e resistncia
Antimoniais pentavalentes: flebotoxicidade, cardiotoxicidade em at 9% dos pacientes Anfotericina B: toxicidade aguda, nefrotoxicidade Pentamidina: hipoglicemia, pancreatite aguda, nefrotoxicidade Miltefosina: longo tempo de meia-vida, teratognico Paromomicina: resistncia in vitro
Introduo Guanidinas com atividade leishmanicida CI 50 (mM) amastigotas = 5,2 CI 50 (mM) amastigotas = 9 CI 50 (mM) amastigotas = 2,39 CI 90 (mM) amastigotas = 11,27 CI 50 (mM) amastigotas = 3 CI 50 (mM) promastigotas = 29 Introduo Guanidinas com atividade leishmanicida CI 50 (mM) amastigotas = 2,59 CI 50 (mM) promastigotas = 6,02 CI 50 (mM) amastigotas = 0,65 CI 50 (mM) promastigotas = 1,75 CI 50 (mM) amastigotas = 3,7 Objetivos Sntese de derivados aminoguanidnicos com potencial atividade leishmanicida
Sntese de derivados 2-arilidenoaminoguanidinas
Sntese de derivados 2-benzilidenoaminoguanidinas N- substitudas
Realizar um estudo qualitativo da relao estrutura-atividade
Planejamento Variao de duas regies
Substituio do anel aromtico e a substituio da fenila por alguns heterociclos. Substituio da amina w guanidina Planejamento Sntese de guanidinas monossubstitudas
18 anlogos iniciais Anis diversamente substitudos Heterociclos Planejamento Sntese das benzilidenoaminoguanidinas N-substitudas Compostos ativos da primeira srie
Avaliar efeitos estricos sobre a atividade NR1R2 = Metodologia Manuteno da linhagem de macrfagos e infeco
Manuteno em 10% SFB, 2% urina, 2mM de piruvato e 2 mM de L-glutamina
Semeadas em meio DMEM com 10% SFB (3x10 5 clulas/poo)
Infeco com formas promastigotas (10 parasitas: 1 macrfago)
Incubao a 37 C e 5% CO2
Lavagem dos macrfagos com DMEM Metodologia Manuteno da linhagem de macrfagos e infeco
Cultura dos macrfagos em DMEM com aminocidos e piruvato
Manuteno a 37 C e atmosfera mida contendo 5% CO2
Lavagem com DMEM
Acrscimo de meio de Schneider, 10% SFB, 2% de urina e aminocidos e incubao a 27 C
Manuteno das promastigotas em meio de Schneider
Metodologia Avaliao da atividade leishmanicida
Manuteno em meio de Schneider com 10% SFB, 2% urina e 2 mM de L-glutamina
Promastigotas de L. brazilliensis semeadas (1x10 5
clulas/poo)
Adio em concentraes crescentes dos derivados (0,1 100 mM)
Contagem de promastigotas aps 48 horas Resultados e Discusso Comparao dos rendimentos
Substncia Rend (%) MO Rend (%) Refluxo a Substncia Rend (%) MO Rend (%) Refluxo a 1 83 89 10 92 91 2 94 95 11 96 92 3 94 93 12 80 89 4 98 92 13 94 83 5 88 98 14 90 71 6 94 98 15 85 92 7 92 81 16 85 90 8 93 89 17 90 71 9 91 71 18 85 91
a Tempos reacionais maiores que 19 horas, conforme Epifnio (2011) Resultados e Discusso ***p < 0,01 em relao ao grupo DMSO 0,1% Substncia CI 50 (mM) EM (mM)
Resultados e Discusso Sntese dos produtos finais Resultados e Discusso Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas: proposta inicial Maior reatividade
Intermedirios comuns Equilbrio tautomrico em isotiossemicarbazonas Resultados e Discusso Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas: proposta inicial Formao de vrios produtos colaterais
Dificuldade de purificao Resultados e Discusso Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas Resultados e Discusso Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas Resultados e Discusso Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas
Substncia Rendimento (%) a
Substncia (%) Rendimento (%) b
Substncia (%) Rendimento (%) c
8a 35 10a d 13a 53 8b 48 10b 44 13b 34 8c 20 10c 30 13c 34 8d 48 10d 11 13d 51 8e 67 10e 48 13e d
a Tempo reacional menor 15 horas; b Tempo reacional menor que 20 horas; c Tempo reacional maior que 24 horas; d No foi possvel calcular rendimento, pois o produto apresentava impurezas aps cromatografia, incluindo produto de partida at 48 horas de reao. Resultados e Discusso Rasmussen et al (1988) sintetizaram 99 guanidinas N,N,N- trissubstitudas
Rendimentos variveis (10 98%)
A introduo de substituintes aromticos em R 3 prolonga os tempos reacionais
Resultados e Discusso Sntese das 2-benzilideno aminoguanidinas N-substitudas: micro-ondas
Todos os espectros esto em conformidade com Epifnio (2011)
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: tiossemicarbazonas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: tiossemicarbazonas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: tiossemicarbazonas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: isotiossemicarbazonas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: Elucidao estrutural: 2- benzilidenoaminoguanidinas N-substitudas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: 2-benzilidenoaminoguanidinas N- substitudas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: 2-benzilidenoaminoguanidinas N- substitudas
Resultados e Discusso Elucidao estrutural: 2-benzilidenoaminoguanidinas N- substitudas
Concluses e Perspectivas De acordo com os resultados obtidos conclui-se que a metodologia utilizada para a sntese das arilidenoaminoguanidinas em micro-ondas permitiu a diminuio considervel dos tempos reacionais para a obteno dessas substncias, mantendo ao mesmo tempo, os rendimentos elevados do mtodo em refluxo
Os 18 prottipos arilidenoaminoguanidnicos apresentaram elevada potncia contra promastigotas de L. braziliensis. No obstante a necessidade de utilizar menores concentraes para determinar a CI 50 de vrios dos prottipos sintetizados, a reside a possibilidade de se obter substncias to potentes quanto a anfotericina B.
As novas modificaes que resultaram na preparao das 2.benzilidenoaminoguanidinas N-substitudas visam avaliar o efeito da introduo de um segundo anel aromtico sobre a atividade, j que muitas das substncias descritas na literatura apresentam aneis benznicos ou equivalentes heterocclcicos. Portanto, espera-se avaliar o efeito dessa nova srie de anlogos sobre espcies de leishmania e estabelecer a relao estrutura-atividade desses compostos. Agradecimentos Prof. Dr. Joo Xavier de Arajo-Jnior Prof. Dr. Thiago Mendona de Aquino Prof. Antnio Euzbio Goulart Santana Profa. Dra. Elita Scio Fontes Profa. Dra. Isis Martins Figueiredo Profa. Dra. Magna Suzana Alexandre Moreira Mariana da Silva Santos