UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

FACULDADE DE FARMCIA
DEPARTAMENTO DE PRODUTOS FARMACUTICOS

TESTE DE TOXICIDADE
EXCESSIVA
A N L I S E S FA R M A C O P E I C A S
P FA 0 2 9

2016/1
Pedro Henrique Reis
pedro.reisbh@gmail.com

Belo Horizonte 2016

INTRODUO

um teste de segurana biolgica descrito em

farmacopeias, que realizado para detectar reao
biolgica inesperada para insumos farmacuticos
ativos e medicamentos.

um ensaio sugerido para produtos biolgicos e/ou

produtos obtidos por processos biotecnolgicos, como
antibiticos e formas farmacuticas contendo
antibiticos - geralmente obtidos por processos
fermentativos.
INTRODUO

NO avalia a toxicidade da substncia (frmaco)

testada.

Sua segurana j foi estabelecida durante o

desenvolvimento, por estudos pr-clnicos e clnicos
iniciais de eficcia e segurana de um frmaco, em que
so definidas as doses DE-50 e DL-50, tendo-se,
portanto, conhecimento da dose letal do frmaco.

DE-50: dose necessria para produzir efeito teraputico em 50% dos

indivduos avaliados (EFICCIA)

DL-50: dose necessria para produzir efeito letal em 50% dos indivduos
avaliados (SEGURANA)
INTRODUO

Entretanto, ao se obter um frmaco ou ao se produzir

um medicamento por meio de um processo
biotecnolgico, pode-se ter a formao de algum
produto que possa causar uma reao biolgica
inesperada teste de toxicidade excessiva

A toxicidade de uma dose maior que a teraputica e

menor que a DL-50 aferida.

Esta dose administrada considerada em excesso

com relao quela teraputica dada ao homem,
tendo como base o seu peso corporal.
INTRODUO

O resultado negativo no significa ausncia de

toxicidade e sim que o medicamento cumpre o teste
para avaliao de toxicidade excessiva.

No se pode afirmar que o produto testado atxico

caso no haja morte entre os animais testados, pois
no se faz uma autpsia do animal. O produto pode
ser txico para um determinado rgo, mas no
provocar a morte por uma toxicidade excessiva.
INTRODUO

H uma tendncia de se retirar o teste de toxicidade

excessiva das monografias farmacopeicas.

Questes ticas
Processos produtivos por via sinttica ou biotecnolgica
Boas Prticas Farmacuticas
Desenvolvimento das anlises farmacuticas

Exemplo: excludo das monografias de sulfato de

neomicina e sulfato de estreptomicina (Farmacopeia
Brasileira 5 edio).
PROCEDIMENTO
Reagente biolgico: camundongos.
Quantidade: normalmente 5.
Importante: peso controlado (entre 17-25 g).

Amostra: soluo do medicamento avaliado.

Temperatura: Ambiente (21 3 C).

Vias de administrao: intravenosa, intraperitoneal,

subcutnea ou oral.

Volume: normalmente 0,5 mL

Observao: 24 a 48 horas
PROCEDIMENTO
PROCEDIMENTO
AVALIAO

Aps aplicao, os animais so observados por at 48

horas (ou tempo determinado na monografia
especfica, se diferente).

Avalia-se a sobrevivncia ou no dos animais.

Avalia-se o comportamento individual e a presena de

sintomas anormais no intervalo de tempo
estabelecido.
FARMACOPEIA BRASILEIRA 5 EDIO
-DESCRIO-

O teste de toxicidade possibilita detectar reatividade

biolgica inesperada e no aceitvel de frmacos e
medicamentos. Esse teste in vivo sugerido para a
avaliao da segurana de produtos biolgicos e
derivados de biotecnologia.
FARMACOPEIA BRASILEIRA 5 EDIO
-RESULTADOS-

O produto cumpre o teste se:

Todos os animais sobrevivem e no mais que um
apresente sintomas anormais no intervalo de tempo
estabelecido.

Sintomas anormais: qualquer manifestao do animal

que esteja diferente do comportamento exibido pelo
grupo.

Exemplos: agitao, ingesto de comida e/ou gua

significativamente reduzida, convulses, tremores,
relutncia em se movimentar, entre outros.
FARMACOPEIA BRASILEIRA 5 EDIO
-RETESTE-

Se 1 ou 2 animais morrerem ou mais de um apresentar

sintomas anormais ou toxicidade inesperada, o teste
pode ser repetido com 5 ou mais reagentes biolgicos.

Reavaliao:

O produto cumpre o teste se o nmero de animais

mortos no exceder 10 % do total de animais
testados e nenhum animal do segundo grupo
apresentar anormalidade de sintomas.
 FARMACOPEIA BRASILEIRA 5 EDIO
-RETESTE-

Exemplo:

TESTE RETESTE MORTES

CASO TOTAIS
RB MORTES RB MORTES

1 5 1 5 0 1 em 10

2 5 2 15 0 2 em 20

3 5 3 - - Reprovado

Nos casos 1 e 2, o nmero de mortes no supera 10% do

total de animais testados, logo, os produtos foram
aprovados.
Teste Brasileira Americana Mexicana Europeia Internacion
al
Ttulo Toxicidade Safety Test <88> MGA 0795 2.6.9 3.7 Undue
5.5.2.3 Prueba de Abnormal toxicity
seguridad toxicity
general para
antibioticos
RB/N 5 camun. 5 camun. 5 camun. 5 camun. 5 camun.
17 g 22 g 17 g 23 g 18 g 25 g 17 g 24 g 18 g 22 g
Via IV, IP, SC, VO IV IV, IP, SC, VO IV IV
(Tabela)
Volume Esp. Mon. 0,5 mL ou Esp. Tabela em 0,5 mL 0,5 mL
Mon. Mt. gerais
Dose Esp. Mon. Esp. Mon. Tabela em Esp. Mon. Esp. Mon.
Mt. gerais
Perodo 48 horas ou outro 48 horas 48 horas 24 horas ou 48 horas
de obs. indicado na outro
monografia indicado na
monografia
Apv. Se todos os Se todos os Se todos os Se todos os Se todos os
animais animais animais animais animais
sobreviverem e sobreviverem e sobreviverem sobrevi- sobreviverem
no + que 1 no + que 1 verem
apresentar apresente
sintomas anormais sintomas anormais
Reteste se 1 ou 2 camund. se 1 ou + camund. se 1 ou + se um se 1 ou 2
morrerem ou + de morrerem ou + de animais animal animais
1 apres. sintomas 1 apres. Sintomas morrerem morrer morrerem
anormais anormais
Retest Brasileira Americana Mexicana Europeia Internacion
e al
RB/N 5 ou + camun. 10 ou + camun. 10 camun. 5 camun. 5 ou 15 camun.
19 g 21 g 19 g 21 g 19,5 g 20,5 g 17 g 24 g 19,5 g 20,5 g
Via IV, IP, SC, VO IV IV, IP, SC, VO IV IV
(Tabela)
Volume Esp. Mon. 0,5 mL ou Esp. Tabela em Mt. 0,5 mL 0,5 mL
Mon. gerais
Dose Esp. Mon. Esp. Mon. Tabela em Mt. Esp. Mon. Esp. Mon.
gerais
Obs. 48 horas ou outro 48 horas 48 horas 24 horas ou 48 horas
indicado na outro indicado
monografia na
monografia
Apv. Cumpre o teste se o Cumpre o teste Cumpre o teste Cumpre o Cumpre o teste
n de camundongos se nenhum se o n de teste se se nenhum
mortos no exceder camundongo do camundongos nenhum animal do 2
10% do total de 2 grupo mortos no animal do 2 grupo morrer
animais e nenhum morrer. Nenhum exceder 10% grupo morrer
animal do 2 grupo animal, do total de
apresentar tambm, pode animais
sintomas apresentar
indicativos de sintomas
toxicidade anormal anormais
EXEMPLOS

Sulfato de Gentamicina

Presente na Farmacopeia Francesa.

Dose teraputica: 280 mg

Produto: 80 mg/2mL
Via: intraperitoneal.
Volume: 0,5 mL por camundongo.
Procedimento: injetar por via IP 0,5 mL de soluo estril
de sulfato de gentamicina dissolvida em cloreto de sdio
0,9%, na concentrao de 2 mg/mL.
Dose teste: 1 mg por camundongo.
EXEMPLOS

Sulfato de Gentamicina

Quantidade necessria: 2,5 mL preparar 10 mL (balo

volumtrico com maior segurana/preciso + possibilidade
de reteste).

1 mg ----- 0,5 mL
x ------ 10,0 mL

x = 20 mg de sulfato de gentamicina

[ ] da soluo teste a ser injetada: 2 mg/mL

EXEMPLOS

Sulfato de Gentamicina

Preparo da soluo teste a ser injetada:

Produto disponvel: 80 mg de sulfato de gentamicina em 2 mL

80 mg ----- 2 mL de produto
20 ------ x mL de produto

x = 0,5 mL de produto

Procedimento: pipetar 0,5 mL de produto para bv 10,0 mL e

completar o volume com soluo estril de NaCl 0,9%. Injetar
0,5 mL desta soluo nos reagentes biolgicos, via IP.
EXEMPLOS

Sulfato de Gentamicina

Clculos:
Peso corporal mdio do
ser humano
280 mg (1 DT) ---- 70000 g (70 kg)
x ------ 20 g
Peso corporal mdio do
x = 0,08 mg camundongo

0,08 mg --- 1 DT
1 mg ---- x
x = 12,5 DT

Quantidade injetada equivalente a 12,5x a dose teraputica!

EXEMPLOS

Sulfato de Gentamicina

Sabendo-se que a DL-50 = 75 mg/Kg

0,08 mg(1 DT) ------ 20g

x ------ 1000 g
x = 4 mg/ kg

4,0 mg/Kg x 12,5 = 50,0 mg/Kg

4,0 mg/Kg < 50,0 mg/Kg < 75

mg/Kg
(DTerap.) (D adm) (D letal)
EXEMPLOS

Estreptomicina

Presente na Farmacopeia Mexicana.

Dose teraputica: 1 g
Produto: 1 g/mL
Via: intravenosa
Volume: 0,5 mL por camundongo
Procedimento: injetar por via IV 0,5 mL de soluo estril
de estreptomicina dissolvida em cloreto de sdio 0,9%, na
concentrao de 2 mg/mL.
Dose teste: 1 mg por camundongo.
EXEMPLOS

Estreptomicina

Quantidade necessria: 2,5 mL preparar 10 mL (balo

volumtrico com maior segurana/preciso + possibilidade
de reteste).

1 mg ----- 0,5 mL
x ------ 10,0 mL

x = 20 mg de estreptomicina

[ ] da soluo teste a ser injetada: 2 mg/mL

EXEMPLOS

Estreptomicina

Preparo da soluo teste a ser injetada:

Produto disponvel: 1000 mg de estreptomicina em 1 mL

1000 mg ----- 1 mL de produto

20 ------ x mL de produto

x = 0,02 mL de produto

Volume muito pequeno impossvel de se medir

precisamente.
FAZ-SE TOMADA DE AMOSTRA!
EXEMPLOS

Estreptomicina

Tomada de amostra
10x o volume de 0,02 mL = 0,2 mL (ainda pequeno)
100x o volume de 0,02 mL = 2 mL (possvel de medirmos!)

2 mL um volume de amostra mais fcil de medirmos com

preciso e, portanto, mais representativo.

1 mL ---- 1000 mg
2 mL ---- 2000 mg
EXEMPLOS

Estreptomicina

Preparo da soluo teste a ser injetada aps tomada

de amostra:

- Pipetar 2 mL do produto e diluir com soluo estril de NaCl

0,9% , em balo volumtrico de 100,0 mL ([ ] = 20 mg/mL)

- Pipetar 1 mL desta soluo para balo volumtrico de 10,0

mL e completar o volume com soluo estril de NaCl 0,9%,
obtendo a [ ] desejada de 2 mg/mL.

Procedimento: injetar 0,5 mL desta soluo nos reagentes

biolgicos, via IP.
EXEMPLOS

Estreptomicina

Clculos:
Peso corporal mdio do
ser humano
1000 mg (1 DT) ---- 70.000 g (70 kg)
x ------ 20 g
Peso corporal mdio do
x = 0,286 mg camundongo

0,286 mg --- 1 DT
1 mg ---- x
x = 3,5 DT

Quantidade injetada equivalente a 3,5x a dose teraputica!

OBRIGADO!