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Image-Pro® Plus –

Mensuraçoes comuns

Jas
Aspectos gerais da medição
histológica

• Hardware (Mouse(+ Precisão), notebook (Praticidade)...)


•Qualidade de medição
•Qualidade de Imagem (formato, precisão...)
• Parâmetros passíveis de análise (área, comprimento,
número de células, espessura epitelial, ...)
•Vários softwares disponíveis
Image-Pro® Plus

•Calibragem (4x, 10x, 40x)


•Medição de área
•Medição de comprimento
•Contagem celular manual
•Exportação dos dados para Excel
Princípios gerais de operação do
software

•Comparação: todas as medidas são feitas com


base em uma calibragem inicial, a qual existe para
que o número de pixels que selecionarmos tenha
uma correspondência morfométrica (milímetros,
micrômetros, ...)

•Calibragem é feita usando-se fotografia de régua


milimetrada (mostrada a seguir)
Princípios gerais de operação do
software
* Essa será nossa
imagem padrão
para calibragem,
utilizada em
diferentes
aumentos
conforme
1 mm a necessidade!

• Corresponde a
uma fotografia de
régua milimetrada
Calibragem no Image-Pro Plus
•Uma calibragem necessária para cada aumento (4x, 10x, 40x)
•Para cada aumento, uma imagem de régua a ser aberta (mesma imagem,
diferentes aumentos)

1 mm 0,9 mm 0,2 mm

4x 10x 40x
Calibragem no Image-Pro Plus
1º passo: abrir programa
Calibragem no Image-Pro Plus
2º passo: abrir imagem da régua no aumento selecionado (no exemplo, 4x)
File -> Open -> Selecionar imagem na pasta correspondente
Calibragem no Image-Pro Plus
3º passo: ir para “Measure -> Calibration -> Spatial”
Calibragem no Image-Pro Plus
4º passo: selecionar a opção “New”
Calibragem no Image-Pro Plus
5º passo: Nomear e alterar unidade para micrômetros
Calibragem no Image-Pro Plus
6º passo: Clicar em “Image” para selecionar o trecho da imagem a ser medido
Calibragem no Image-Pro Plus
7º passo: Selecionar o trecho a ser medido e inserir a medida correspondente EM
MICRÔMETROS
* Para maior precisão, ampliar imagem da régua
Calibragem no Image-Pro Plus

• Para aumentos de 10x e 40x, o processo é o mesmo, só


atentando para alterar valor de micrômetros na hora de
salvar a calibragem!

• Uma vez feitas as calibragens, é possível iniciar as


medidas.
Medidas no Image-Pro Plus

Medidas Abordadas:

Comprimento
Área
Contagem celular
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
• Abrir a imagem a ser medida (File -> Open ou ctrl + O)
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
* No ícone “Spatial Calibration”, selecionar aumento em que foto foi tirada (após
calibrado o programa)
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
* Clicar em “Manual Measurements” e selecionar “Create click and drag feature”
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)
*Clicar na imagem e arrastar até atingir ponto desejado
Medidas no Image-Pro Plus
1) Comprimento (de vilosidade, espessura epitelial, ...)

• Processo se repete para as próximas medições,


sendo que as novas medidas aparecerão abaixo da
primeira (L1) na aba “Features”

• Para exportar dados, clicar na aba “Input/Output” (a


ser abordado posteriormente)
Medidas no Image-Pro Plus
2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)
• Mesmos procedimentos iniciais, modificando-se a opção selecionada da aba
“Features” (Create polygon feature)
Medidas no Image-Pro Plus

2) Área (de glomérulo, ilhota, ...)

• Há dois modos de se medir área através da


ferramenta selecionada:

a) Seleção com um único clique contínuo (arrastando-


se o mouse sem soltá-lo)
b) Seleção clicando-se várias vezes em torno da
imagem

• Em ambas, após o fim da seleção, clica-se com o


botão direito do mouse para concluir a área a ser
medida
Medidas no Image-Pro Plus

3) Contagem celular

• Na maior parte das vezes, usa-se uma “Grid Mask”


para realizar as medições, que é conjunto de linhas,
pontos ou formas aplicado sobre a imagem original

• Diferentes Grid Masks podem ser utilizadas, a


critério da preferência do pesquisador

• Objetivo do uso de Grid Masks: definir, de forma


aleatória, áreas cujos núcleos serão contados
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
• Para aplicar: Process -> Grid Mask
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
• Exemplo de Grid Mask para contagem de núcleos: distribuição de
retângulos em 4x4
• Após abrir janela de Grid Mask, selecionar “CircConc.grd” e definir
tamanho adequado em “Spacing” na aba Grid
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
• Clicar em Apply e não fechar a janela (caso contrário, grid
desaparecerá)
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
• Outros exemplos:
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
• Outros exemplos:
Medidas no Image-Pro Plus
3) Contagem celular
• Para não “se perder” na contagem: usar a “Create polygon feature”
(mesma da medição de área) e clicar sobre cada núcleo contado
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
• Manual measurements -> aba “Input/Output” -> Selecionar
“Data to ouput: Features” e “Output data to: File...” e clicar em
“Export now”
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
• Após selecionar a pasta de destino e salvar, o arquivo
aparecerá da seguinte maneira:
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados

• Como se vê, os dados estão desalinhados, e


somente um deles nos interessa, a área

• Logo, copiaremos somente o valor da área e


colaremos em uma tabela do Excel

• O processo se repete para cada medição feita

• DETALHE IMPORTANTE: os pontos dos números


precisam ser trocados para vírgulas!
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
Medidas no Image-Pro Plus
Exportando os dados
Muito Obrigado pela atenção!

Dúvidas:
felipewlanger@gmail.com

Santa Maria, 13 de dezembro de 2012