Universidade de São Paulo

Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”

Programa de Pós-graduação em Fitotecnia
LPV 5731 - ANÁLISE DE IMAGENS DE SEMENTES E PLÂNTULAS

Fluorescência de clorofila
de sementes e plântulas
Fabiano França da Silva
Doutorando em Fitotecnia – Esalq/USP
Especialista em Ciência e Tecnologia de Sementes – UFPel
Eng. Agrônomo, M.e – UFLA

Maio de 2021.
Fotossíntese x Fluorescência de clorofila
 Fotossíntese: sintetizam compostos e mantém energia.

Amido
Tilacóides
 Ocorre nos cloroplastos.
Graum
Pigmentos Fotossintetizantes Estroma
Membrana
Clorofila a Principal externa
Clorofila b Acessórios Ribossomos
Carotenoides Lamelas
Cloroplasto 2/24
Fotossíntese x Fluorescência de clorofila

ATP Sintetase

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Fotossíntese x Fluorescência de clorofila

 Eficiência energética: azul-violeta e laranja-vermelho

PSI: Chl a λ=700 nm
PSII: Chl b λ = 680 nm

 Regra: Se > comprimento de onda < a energia absorvida

 Reflectância: verde

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 E a fluorescência de clorofila?
Fonte: Adaptado de Fernández-Calleja et al. (2020)

Obs: > eficiência em um processo implica em redução no rendimento dos outros dois.
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E a fluorescência de clorofila?

FC: é um sinal físico originado da energia radiativa emitida por moléculas

de clorofila a retornando ao seu estado fundamental após terem sido
excitadas pelos fótons de luz.

 1900’s: LEDs ou laser, combinadas com banda óptica de filtros estreitos (400
– 800 nm), câmeras CCDs com diferentes filtros de fluorescência, detecção
sensível à fase (amplificador lock-in) e softwares de processamento de dados e
imagens.

 Relação FC x Fisiologia e estresse de plantas

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Equipamentos de FC: componentes

Fonte: Takayama et al. (2003)

 CCD’s
 Câmera RGB
 Filtros (excitação e emissão)
 LED’s ou laser
 Amplificador
Fonte: Lichtenthaler et al. (2005)
 Sistema computadorizado
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Equipamentos de FC

Closed FluorCam FC 800-C

UV/azul (440 nm), verde (520 nm)

Vermelho (680 nm) e Infravermelho
(740 nm)
Fonte: PSI (Photon Systems Instruments) spol. s r.o. (2016)
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Equipamentos de FC

CropReporter

UV/azul (405 nm), azul (460 nm), verde

(520 nm), Vermelho (660 nm) e
Infravermelho (730 nm) 9/24
Fonte: Phenovation (2021)
 Equipamentos de FC

Field Scanalyzer

Vermelho (633 ± 19 nm) + Infravermelho (800 ± 17 

nm). Fonte: Virlet et al. (2016)
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Equipamentos de FC

Imaging PAM, MAXI Version

Azul (450 nm), Vermelho (650 nm) e

Infravermelho (780 nm)

Fonte: Bay Instruments, LLC (2021)

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Equipamentos de FC

VideometerLab 4

Comprimentos de onda: 365 nm – 970 nm

FC:

Fonte: Bay Instruments, LLC (2021)

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Equipamentos de FC

Microscópio de fluorescência

UV (358 nm), azul (418 nm), verde (503 nm),

amarelo (532 nm), laranja ( 457 nm) e
vermelho (580 nm). Fonte: Google (2021)
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Quais parâmetros são estimados?
Sementes
Parâmetro: Fluorescência da clorofila a
Objetivos: Maturidade e Chl retida
Resultados: Índices de reflectância
Mapa de cores (falsas cores)
Índices elevados de Chl a = sementes imaturas
e/ou com alta retenção de clorofila
Plântulas e Plantas
Parâmetros: RQPSII
Objetivos: Detectar estresse biótico e abiótico
Resultados: Índices de reflectância
Mapa de cores (falsas cores)
Variáveis: F0, Fm, F0’, Fm’, Fv, ФPSII (Fv/Fm),
qP
Índices de 0,75 – 0,85 = planta sem estresse
Índices < 0,75 = dano no aparato fotossintético
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Aplicações da FC em sementes e plântulas

Síntese de clorofila durante a germinação de semente de pimenta.

Fonte: Joost van der Burg et al. (2009) / Phenovation (2021)

DOI: 10.13140/2.1.2218.0806

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Aplicações da FC em sementes e plântulas

Relação entre o sinal de fluorescência da clorofila

de quatro subamostras de sementes de Brassica
oleracea e a germinação .

Fonte: Jalink et al. (1998)

DOI: 10.1590/S0103-90161998000500016

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Aplicações da FC em sementes e plântulas

Imagens de fluorescência de clorofila de sementes

cultivadas in vitro sob luz alta (LH), luz moderada
(LM), luz baixa (LL) e escuro (C).

Fonte: Zhang et al. (2016)

DOI: 10.1007/s11120-015-0206-x

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 Aplicações da FC em sementes e plântulas

Imagens de sementes de tipo selvagem e mutantes nyc1 / nol de

Arabidopsis thaliana usando microscópios de transmissão (A e
D) e fluorescência nas sementes (B e E) e nas plântulas 1 dia
após semeadura (C e F). Excitação das amostras à 408 nm (luz
azul).

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Aplicações da FC em sementes e plântulas

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Imagens de fluorescência de clorofila de sementes esverdeadas

de soja e de plúmula de milho.
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Aplicações da FC em sementes e plântulas

Danos em folhas de soja decorrente de NP de óxido de cromo III (NP

Cr2O3) avaliados pelo PSII (Fv/Fm) adaptado ao escuro por 30 min.
Vermelho (danos leves) ao azul escuro (danos severos).

Fonte: Jinxing Li et al. (2018).

DOI: 10.1007%2Fs11356-018-2132-x
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Aplicações da FC em sementes e plântulas

Imagens da reflectância do Fv / Fm em espigas de trigo em função

dos níveis de infecção por Fusarium sp. (a) Scanner
hiperespectral; (b) Imagens de trigo obtidas em 550 nm, 685 nm e
765 nm, da esquerda para direita.

Fonte: Bauriegel e Herppich (2014).

DOI: 10.3390/agriculture4010032
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Aplicações da FC em sementes e plântulas

Imagem de fluorescência de clorofila de

brócolis ao longo do amarelecimento. (a-c)
imagens RGB; (d-f) imagens
correspondentes ao Fv/Fm e (g-i) extinção
não fotoquímica (NPQ).

Fonte: Feng Luo et al. (2019).

DOI: 10.1038/s41438-019-0155-1

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Aplicações da FC em sementes e plântulas

Imagens espectral baseado na [ ] do ácido chiquímico (A) e na fluorescência

de clorofila de Fv / Fm (B) para o dossel de milho selvagem (WT) e
transgênico (TG) em função do tempo da resposta à aplicação de glifosato.
Do azul ao vermelho = > concentração de ácido chiquímico e eficiência do
RQPSII.

Fonte: Feng Luo et al. (2019).

DOI: 10.1038/s41438-019-0155-1
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 DEPARTAMENTO DE PRODUÇÃO VEGETAL - LPV

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Fabiano França
Doutorando em Fitotecnia – Esalq/USP
Especialista em Ciência e Tecnologia de Sementes - Ufpel
Eng. Agrônomo, M.Sc. - Ufla

fabiano.francads@usp.br
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