FACULDADE DE MACAPÁ

CURSO DE FARMÁCIA

Análises Laboratoriais em Bioquímica e Hematologia:

Controle de Qualidade e Fotometria

Prof. MSc. Rivelton R. P. Almeida

rivelton.almeida@kroton.com.br
 Definição
• Conjunto de
atividades
planejadas e Os laboratórios clínicos
sistemáticas que devem ter a missão de
servirão para
garantir que o seu diagnóstico produzir
produto ou serviço resultados de exames
atenda aos que sejam de real
requisitos da utilidade para se fazer
qualidade. corretamente o
prognóstico,
acompanhar a terapia,
evolução e prevenção de
enfermidades.
Qualidade da fase pré-analítica

Pedido médico de exame Pré-analítico

Preparo do paciente Erro: ~60-70%
Obtenção da amostra

Analítico
Procedimento de análise Erro: ~20-30%

Pós-análise Pós-analítico
Resultado Erro: ~10%
 Qualidade da fase pré-analítica
• O objetivo desta fase é garantir que as amostras e
materiais tenham a representatividade desejada e
mantenham a integridade de sua composição e
funcionalidade.
• Não existem meios físicos para garantir a qualidade
pré-analítica, por isso, deve-se:

Padronização dos
Investir em treinamento Registro das atividades
procedimentos
Qualidade da fase pré-analítica
Mecanismo de estudo de causa
e solução de erros

Critérios de rejeição da amostra

Pedido médico

Transporte da amostra
Preparo do paciente

Identificação da amostra

Coleta e obtenção da amostra

Manual da Qualidade

oIntrodução oInsumos e equipamentos

oDescrição do Laboratório oListagem completa de Pop’s
Clínico oSegurança de dados e
oPolítica da Qualidade formatação do laudo
oTreinamento do pessoal oValidação e Controle da
oGarantia da Qualidade Qualidade
oControle da documentação oTratamento de reclamações
oRegistros e arquivamento oAuditorias
oAcomodações
Variações no resultado

• As medidas bioquímicas variam por duas razões. Estas são classificadas

como variações analíticas e variações biológicas.

• A variação analítica é uma função da performance analítica;

• A variação biológica está relacionada a mudanças reais que ocorrem nos

líquidos corporais dos pacientes ao longo do tempo.
 Performance analítica do laboratório
• Diversos termos podem descrever os resultados bioquímicos. Dentre
eles:
• precisão e exatidão
• sensibilidade e especificidade
• garantia de qualidade
• intervalos de referência.
 Precisão e exatidão
• A precisão é a reprodutibilidade de um método analítico. A exatidão define quão próximo o valor
medido está do valor real. mostra a dispersão de resultados que podem ser obtidos por um
indivíduo com pouca técnica, em comparação aos resultados de alguém com boa precisão, em
que os resultados estão agrupados.
• Mesmo quando os resultados estão todos próximos, eles podem não estar no centro do alvo.
Nesse caso, não há exatidão, como se a mira estivesse desalinhada.
• O objetivo de todo método bioquímico é prover precisão e exatidão. A automação das análises
melhorou a precisão na maioria dos casos.
 Sensibilidade analítica e especificidade
• A especificidade de um teste mede a frequência na qual um resultado negativo se dá em
pessoas sem uma doença. A sensibilidade é uma medida da incidência de resultados
positivos em pacientes que sabidamente têm uma doença. O uso dos termos
“especificidade” e “sensibilidade” nesse contexto não deve ser confundido com o uso
dos mesmos termos quando se descreve a performance analítica.

• Um teste diagnóstico ideal possui 100% de sensibilidade, com resultados positivos em

todos os indivíduos doentes e 100% de especificidade, com resultados negativos em
todas aqueles sem a doença.
 Garantia de qualidade
• A equipe do laboratório monitora a performance dos testes utilizando amostras
de controle para assegurar que o método produz resultados satisfatórios com as
amostras dos pacientes. As amostras de controle de qualidade internas são
analisadas regularmente. Os valores esperados são conhecidos, e os resultados
obtidos são comparados com valores anteriores para monitorar a performance.
Em programas externos de garantia de qualidade, amostras idênticas são
distribuídas aos laboratórios; os resultados são então comparados.
 Intervalos de referência
• A variação analítica geralmente é menor que a variação biológica. Os resultados de testes
bioquímicos são geralmente comparados a intervalos de referência escolhidos
arbitrariamente, de modo a incluir 95% dos valores encontrados em voluntários saudáveis.
Isso significa que, por definição, 5% de qualquer população terá um resultado fora do
intervalo de referência. Na prática, não há limites rígidos que separam a população doente da
população saudável; no entanto, quanto mais longe um resultado estiver dos limites do
intervalo de referência, maior a probabilidade de ele indicar uma patologia. Em algumas
situações é útil definir “limites de ação”, a partir dos quais deve-se realizar intervenções
apropriadas em resposta a resultados bioquímicos. Um exemplo é o colesterol plasmático.
Fatores biológicos que afetam a interpretação
dos resultados
• Discriminação entre resultados normais e anormais é afetada por vários fatores fisiológicos que
devem ser levados em conta ao se interpretar qualquer resultado. Dentre eles estão:

• Sexo. Intervalos de referência para algumas substâncias como creatinina no soro são diferentes para
homens e mulheres.

• Idade. Podem haver diferentes intervalos de referência para neonatos, crianças, adultos e idosos.

• Dieta. A amostra pode ser inapropriada se for retirada com o paciente em jejum ou após uma
refeição.

• Horário. Podem haver variações durante o dia e a noite.

• Estresse e ansiedade. Podem afetar a substância analisada.

• Postura do paciente. A redistribuição dos líquidos pode afetar os resultados.

• Efeitos do exercício. Exercícios intensos podem levar tecidos a liberarem enzimas.

• Histórico clínico. Infecção e/ou lesão tecidual podem afetar valores bioquímicos independentemente dos

processos patológicos que estão sendo investigados.

• Gravidez. Pode alterar alguns intervalos de referência.

• Ciclo menstrual. Medidas hormonais variam ao longo do ciclo menstrual.

• Histórico farmacológico. Fármacos podem ter efeitos específicos sobre a concentração plasmática de algumas

substâncias.
Controle Interno
• Controlar o desempenho de materiais, equipamentos e métodos analíticos e registrar
as ações executadas.
• Função:identificar aumento da variabilidade ou introdução de desvios ou tendências na
calibração.
• A estimativa da variabilidade , também denominada imprecisão, é feita através do
desvio padrão.
• POP
• Processamento diário em pelo menos dois níveis.
• Acompanhamento dos resultados e análise de gráficos
• Aplicar formas alternativas de controle para reações sem controle comercial.
• Validação e liberação do aparelho para rotina.
O que se deve fazer no Controle de Qualidade

• Calcular as médias e os desvios padrão das medições;

• Definir os requisitos da qualidade para cada analito;
• Manter a estabilidade de reagentes, equipamentos e
operador;
• Utilizar ferramentas estatísticas;
• Rejeitar as corridas fora de controle, identificar o erro
e eliminar sua causa.
Controle Externo
• O laboratório deve participar de ensaios de
proficiência para todos os exames realizados na
rotina.
• Fazer o acompanhamento do resultados e do
desempenho.
• Documentar a investigação das causas e ações
tomadas para os resultados rejeitados.
• Controle alternativo: Controle interlaboratorial.
POPs
Instruir os funcionários da existência do Pop e sua
localização.
Ter Pop do Pop, Pop de seções, reações, técnicas de
exames, manuseio de aparelhos, limpeza, digitaçao,
coleta, recepção e demais atividades
desempenhadas.
Nele deve constar: nome, numeração, número total
de páginas, versão, data da realização, revisão, etc.
Não pode haver diferença entre a forma escrita e a
executada.
Planilhas
• Ter planilhas padronizadas para documentar
atividades respectivas a todas as fases analíticas:
• Controle de temperatura (banho-maria, ambiente,
geladeiras, estufas, caixas térmicas)
• Controle de funcionamento de aparelhos
• Manutenções dos equipamentos
• Controle da água reagente
Água
• Ter evidência de que se faz periodicamente os
controles da água reagente.
• Que esta água é produzida no momento do
uso.
• Que esta água é usada para enxágue de
vidraria,preparo de soluções,de corantes, para
abastecer equipamentos.
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
CLÍNICA
1. CONCEITO

•A bioquímica é voltada principalmente para o estudo da

estrutura e função de componentes celulares como
proteínas, carboidratos, lipídios, ácidos nucléicos e
outras biomoléculas;
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
2. FOTOMETRIA

• Métodos utilizados em bioquímica clínica são baseados na

medida quantitativa da absorção da luz pelas soluções;
• A concentração na solução da substância absorvente é
proporcional à quantidade de luz absorvida;

• Essas medidas são efetuadas por instrumentos

fotocolorimétricos ou espectrofotômetros;
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
2. FOTOMETRIA

•O olho humano só consegue visualizar radiações

eletromagnéticas com comprimento de onda entre 380 e 750nm;

• Radiações com comprimento de onda abaixo de 380nm são

chamadas de ultravioleta (UV);

• Comprimentos de onda acima de 750 nm são chamadas de

infravermelho;
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
2. FOTOMETRIA

• As soluções são coloridas ao olho humano quando a mesma

absorve toda luz incidente, com excessão do intervalo de
comprimento de onda observado pela visão;

• Segundo a natureza da solução examinada, obtêm-se os

espectros de absorção da luz de tal modo que a imagem
espectral pode servir na identificação de uma determinada
substância;
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
1. FOTOMETRIA
2.1 Transmitância

• Raio de luz monocromática de intensidade inicial (Io) incide

sobre uma solução colorida, a intensidade da luz emergente (I1)
é menor que a luz incidente;

• %T= T x 100
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
1. FOTOMETRIA
2.2 Absorvância

• Mede-se a intensidade de luz absorvida por uma solução corada

pela redução da medida da intensidade de luz transmitida;

• A= 2- log %T
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
1. FOTOMETRIA
2.2 Lei de Beer-Lambert

• Concentração do padrão = Concentração do teste

----------------------------------- -------------------------------
Absorvância do padrão Absorvância do teste

Concentração do teste = Conc. Do padrão x Absorv. do teste

------------------------------------------------
Absorv. do padrão
 INTRODUÇÃO AO ESTUDO DA BIOQUÍMICA
1. FOTOMETRIA