INSTITUTO POLITCNICO DE TOMAR Escola Superior de Tecnologia de Tomar E.S.T.T.

Departamento de Engenharia Qumica e do Ambiente

Introduo
A Engenharia Enzimtica surgiu na dcada de 60, como sendo uma rea de
investigao, com a imobilizao de enzimas para utilizao em processos qumicos; A partir da, o seu emprego em diversas reas, com aplicao de processos

enzimticos, comeou a crescer, sendo algumas reas, as seguintes:

Biossensores; Terapia Enzimtica; Sntese qumico-enzimtica de compostos bioativos; Obteno de novos biopolmeros; Processos em indstrias tradicionais como os curtumes, o papel, o txtil, etc.

Introduo
Por intermdio da biocatlise combinatorial possvel obter uma imensa
biblioteca de compostos qumicos; A seleo de novas enzimas, as tecnologias de DNA recombinante e a engenharia de protenas do enorme contributo para a crescente

competitividade das tecnologias enzimticas;

Alm de permitirem, a modificao de propriedades cinticas e de estabilidade, o desenvolvimento de novas solues ao nvel da tecnologia de reatores enzimticos e das tcnicas de imobilizao e o desenho do meio reacional; A utilizao de enzimas contribuem para a integrao da Qumica Verde.

Introduo
A Engenharia Enzimtica aplicada em vrias vertentes, atravs da utilizao de enzimas, de entre as quais, que passo a enumerar: Anlises (aplicao em processo de biotransformao); Biossensores (aplicao em processo de biotransformao); Cerveja;

Laticnios (aplic. na produo de alimentos e bebidas);

Indstria Alimentar Modificao de Protenas; Panificao; Sucos; Vinho. Indstria de Cosmticos.

Introduo
Indstria de Curtumes; Indstria de Papel e Celulose; Indstria Txtil (aplicao como aditivo do processo);

Medicina;
leos e Gorduras; Produo de lcool; Produo de Detergentes (aplicao como produto final).

Introduo
Principais indstrias consumidoras de enzimas:
Indstria Consumo (%)

Cerveja Couro
Detergentes Laticnios Panificao Processamento de Amido Suco de Frutas e Vinho Txtil e Papel Outras

2 - 4 1 - 2
40 - 45 12 - 15 1 - 2 20 - 25 3 - 5 4 - 6 6 - 10

Anlises e Medicina

Caractersticas necessrias das enzimas: Alta atividade e estabilidade em pH fisiolgico com reteno da atividade

e estabilidade em soro animal;

Baixa afinidade imunolgica, com afinidade dirigida ao problema em questo; Provenientes de organismos no patognicos que contenham pouca ou nenhuma toxina.

Anlises e Medicina

Caractersticas necessrias das enzimas (continuao):

Alta afinidade pelo substrato (KM baixo);

Inexistncia de necessidade de cofatores exgenos; Efetiva irreversibilidade da reao enzimtica sob condies fisiolgicas; Pouca inibio pelos produtos constituintes normais, encontrados em fluidos corporais.

Anlises e Medicina
Algumas aplicaes de enzimas em diagnsticos: Substrato medido Etanol; lcoois; Aldedos. Colesterol Triglicerdeos Glicose Glicose

Enzima

Fonte

lcool desidrogenase Colesterol oxidase Esterase Glicose 6-fosfato desidrogenase Glicose oxidase

Levedura Fngica Fgado suno Levedura Fngica

Anlises e Medicina
Algumas aplicaes de enzimas em diagnsticos (continuao):

Enzima Glicerol desidrogenase Hexoquinase Nitrato redutase Ureato oxidase Urease

Fonte Bacteriana Levedura Fngica Bacteriana Feijo-deporco

Substrato medido Glicerol ATP; Glicose. Nitrato Ureatos Uria

Anlises e Medicina
Algumas aplicaes de enzimas em Medicina:

Enzima Amilase

Fonte Pncreas de Bovino ou Sovino

Aplicao Auxiliar Digestivo

Lisozima Pancreatina Uroquinase

Clara do Ovo Pncreas de Bovino ou Sovino Urina Humana Cultura de Clulas

Infees Insuficincia Pancretica Agente Fibrinoltico

Biossensores
Exemplo da aplicao de enzimas em biossensores, neste caso, para medio dos nveis de acar no sangue:

A glicose oxidase (GOx) catalisa

formao de D-gluconolactona;

oxidao

da

-D-glucose com

Contm um grupo prosttico, a flavina adenina dinucletido (FAD), que confere protena a capacidade para catalisar reaes de oxidao-reduo;

Descrio da reao, que se d em dois passos: No 1, a coenzima oxidada sofre uma reduo a FADH2 ,que acompanhada pela oxidao da -D-glucose a D-gluconolactona; No 2, a flavina reoxida-se por ao do oxignio, que por sua vez, se converte em perxido de hidrognio.

Biossensores
Exemplo da aplicao de enzimas em biossensores, neste caso, para medio dos nveis de acar no sangue (continuao): A atividade da glucose oxidase, extrada do Aspergillus niger foi primeiramente mencionada por Muller, em 1922;

A partir da, esta enzima tem sido extrada e purificada por esse fungo;
Em virtude da sua elevada especificidade, a glicose oxidase utilizada como elemento biocataltico para se medir os nveis de acar no sangue, seja atravs de testes colorimtricos ou sensoriais.

Indstria Alimentar
Aplicao de enzimas na indstria alimentar, nomeadamente, na panificao: Utilizam-se as enzimas amilase e proteases que se encontram contidas nas clulas dos gros de cereais de farinha; necessria uma adio porque as quantidades nem sempre so ideais; Os grnulos amidos contm 15-30 % de amilose e 70 85 % de amilopectina; As amilases so enzimas que so catalisadoras da hidrlise da amilopectina, da amilose e do glicognio em maltose e dextrinas;

Encontram-se na saliva sob a forma de alfa-amilase denominada de ptialina e

no pncreas de amilase pancretica.

Indstria Alimentar
Aplicao de enzimas na indstria alimentar, nomeadamente, na panificao (continuao) : A amilopectina uma macromolcula, menos hidrossolvel que a amilose, constituda de aproximadamente 1400 resduos de -glicose ligadas por pontes glicosdicas -1,4 , ocorrendo tambm ligaes -1,6 , que do a ela uma estrutura ramificada; A amilopectina constitui aproximadamente 80% dos polissacridos existentes

no gro de amido;
A amilose uma macromolcula constituda de 250 a 300 resduos de Dglicopiranose, ligadas por pontes glicosdicas -1,4, que conferem molcula uma estrutura helicoidal.

Indstria Alimentar
Aplicao de enzimas na indstria alimentar, nomeadamente, na panificao (continuao) : A enzima glicosdicas -amilase (-1,4-glicano hidrolase) rompe as ligaes

-1,4 da amilose originando uma mistura de maltose,

amilopectina e glicose; Rompe tambm as ligaes -1,4 da amilopectina originando uma mistura de polissacrideos denominados de dextrinas; A enzima -amilase ( -1,4-glicano maltohidralase) rompe as ligaes -1,4 dos polissacardeos resultantes da hidrlise da amilopectina originando maltose pura; As proteases so enzimas que quebram ligaes peptdicas entre os aminocidos das protenas.

Indstria de Curtumes
Nesta indstria, utilizam-se enzimas na hidrlise seletiva dos constituintes no-colagenosos da pele, tais como:

-queratina;
elastina; albumina; globulina; e glicoprotenas;

Durante o processamento da pele e couro so inseridas algumas enzimas, tais como: proteases, na fase de remolho;

lipases, na fase do desengraxe;

proteases, na fase de depilao; tripsina, na fase da purga.

Indstria de Papel e Celulose

Nesta indstria, utilizam-se vrias enzimas nas vrias etapas do processo: No descascamento utilizam-se enzimas pectinolticas, as poligalacturonases; No branqueamento so utilizadas xilanases sobre a polpa KRAFT; Na reduo do teor de resinas utilizam-se as lipases; Na reciclagem de papel so utilizadas as celulases e hemicelulases, para processamento de fibras secundrias , atuando sobre a superfcie das fibras.

Indstria Txtil
Nesta indstria, utilizam-se enzimas vrias enzimas durante o processo: Na fase de limpeza, utilizam-se as enzimas pectinolticas, pectinases,

provenientes de Penicillium;
Na fase de desengomagem, utilizam-se enzimas que hidrolisam o amido, nomeadamente, as -amilases bacterianas termotolerantes porque tambm no causam estragos no tecido; Na fase de branqueamento, utiliza-se a catalase para decompor o perxido de hidrognio em gua e oxignio.

Indstria Txtil
Nesta indstria, utilizam-se enzimas vrias enzimas durante o processo (cont.):
Na fase de tingimento do algodo so utilizadas celulases, para conferir uma aparncia mais regular e lisa, e remover os filamentos da fibra que se projetam para fora da superfcie do fio; Na fase de tingimento da l, o tratamento efetuado com proteases para realizar o franzimento;

Na fase de acabamento das calas so utilizadas celulases, para reduzir a

quantidade de pedra necessria, dissolver a tinta azul e causar um dano menor roupa e mquina;

As celulases usadas so produzidas por Trichoderma sp. e Humicola sp. .

Produo de Detergentes
A aplicao de enzimas mais conhecida nesta indstria; Os detergentes industriais que as contm so: os de lavagem de roupa; os de lavagem de loia. As enzimas nos detergentes atuam em condies extremas do meio reacional, desde a presena de tensioativos, alcalinizantes, perfumes, pigmentos at

elevados pHs ou elevadas temperaturas;

Na realizao de testes de performance da lavagem, atravs da quantificao de tinta deixada aps lavagem e o enfranquecimento da cor -nos indicada a contribuio da enzima introduzida; Atravs da hidrlise da protena so removidas as manchas de tinta.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes

As proteases so usadas em detergentes, pois removem sangue, suor, extratos

vegetais, manchas de ovo, etc;

As proteases alcalinas possuem um pH timo alcalino e atuam em temperatura elevada;

O micro-organismo que as produz o Bacillus sp. Por fermentao submersa; Como exemplos temos: a savinase e a alcalase; Tm uma atuao sinergtica: a hidrlise limitada e por isso, as manchas so mais acessveis e as protenas agem como se fossem cola.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) As lipases, na lavagem de roupas em temperaturas baixas, atuam para

remoes difceis de leos e gorduras;

Inicialmente produzidas por Humicola lanuginosa; Atravs da Engenharia Gentica introduzido um gene em Aspergillus oryzae; Com a formao da lipolase, conseguiu-se remover manchas de baton, frituras, molhos, azeites, etc;

As lipases so estveis em pH alcalino.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) Com a formao das lipolase ultra, melhorou-se o desempenho a baixas temperaturas; A lipolase uma enzima com 269 aminocidos; Foi criada a partir da modificao de um aminocido prximo do centro ativo; Permitiu a alterao da fora inica, na zona de contacto com o lpido.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) As amilases removem os resduos de alimentos que contm amido, atuando como cola; So produzidas por Bacillus licheniformis e B. amyloliquefaciens;

Hidrolisam o amido, transformando-o em oligmeros de cadeia curta;

So resistentes a pH alcalino e temperaturas elevadas.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) As celulases intensificam a cor, amaciam e removem partculas sujas; So produzidas por Bacillus sp. Ou Humicola sp. ; Tm um pH timo de 7, mas resistem a pHs mais elevados; Modificam as fibrilas celulsicas de algodo; Degradam o tecido das roupas de algodo por remoo das fibrilas de celulose.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) Quando se iniciou a utilizao do detergente em p, a ele era adicionada a enzima; Devido formao de poeira causavam-se reaes alrgicas; Para aperfeioar a tcnica e resolver este problema, revestiu-se a enzima com

substncia inerte constituindo o T-granulado.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) As vantagens com a introduo desta tcnica foram as seguintes: Grande resistncia ao impacto e abraso; A utilizao do grnulo com tamanho similar s partculas de detergente evita a sua segregao durante o transporte; As partculas dissolvem-se mais rapidamente no lquido.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) Com a utilizao de detergente lquido, introduziram-se algumas desvantagens e desvantagens, tais como: Mais difcil preservao da estabilidade da enzima devido alta atividade da gua, pH alcalino e compostos inicos desnaturantes;

Estas condies so favorveis autodigesto das proteases, excepto a pH 7-8.

Produo de Detergentes
Tipos de enzimas utilizadas nos detergentes (continuao) No detergente para mquinas de lavar loia esto contidas enzimas para remoo de amido e manchas de protenas; Atravs da hidrlise da protena so removidas as manchas de tinta.

Exemplos de aplicaes de enzimas nas diversas reas:

Enzima

Fonte

Aplicao Indstria Txtil; lcool; Xaropes; Produo de Glicose; Processos Fermentativos.

Amilase

Bacillus subtilis; Aspergillus niger.

Amiloglucosidase
Celulases Protease Bacteriana

Aspergillus niger; Aspergillus oryzae.

Diversos fungos Bacillus subtilis

Produo de Glicose
Hidrlise da Celulose; Produo de lcool. Detergentes; Indstria de Filmes Fotogrficos.

Exemplos de aplicaes de enzimas nas diversas reas (continuao):

Enzima

Fonte Aspergillus niger; Aspergillus oryzae Mucor miehei Diversos fungos

Aplicao Indstria de Carnes; Cervejaria; Panificao. Indstria de Queijos Indstria de Sucos de Frutas; Vinhos; Polpas. Produo de Frutose

Protease Fngica Coalho Bacteriano Pectinases

Imulinase

kluyveromyces marxinus

Obteno industrial de enzimas:

Enzima

Fonte Sementes; Sucos; Polpas; Razes. Mucosas; Pncreas; Fgado; Sangue. Bactrias; Fungos; Leveduras.

Aplicao

Vegetais

Triturao de Tecidos

Animais

Triturao de Tecidos

Micro-organismos

Cultura Submersa ou Semi-Slida