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CIDO RICO MONOREAGENTE

K139 INSTRUES DE USO

FINALIDADE Mtodo para a determinao do cido rico. Teste enzimtico colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO DE AO Metodologia: Enzimtico colorimtrico (UOD-PAP). A determinao enzimtica do cido rico feita de acordo com as seguintes reaes: cido rico + 2 H2O 2 H2O2 + DHBS + 4-Aminoantipirina
Uricase Peroxidase

Alantona + CO2 + H2O2 Cromgeno cereja + 4 H2O

A intensidade da cor cereja formada diretamente proporcional concentrao de cido rico na amostra. REAGENTES Nmero 1 - Reagente Enzimtico - Conservar entre 2 e 8C. No congelar. Contm: Tampo 100 mmol/L (pH 7,5), 4-Aminoantipirina 2 mmol/L, Azida Sdica 7,69 mmol/L, Peroxidase > 18.000 U/L, Uricase > 3.000 U/L. Nmero 2 - Padro - Conservar entre 2 e 8C. Contm: cido rico 6,0 mg/dL. APRESENTAO
Apresentao 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Reagente N 1 100 mL 2 x 100 mL 4 x 100 mL 5 x 20 mL 2 x 40 mL 3 x 40 mL 4 x 40 mL 5 x 40 mL 6 x 40 mL 2 x 60 mL 3 x 60 mL 4 x 60 mL 8 x 60 mL Reagente N 2 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL

CUIDADOS ESPECIAIS 1- Somente para uso diagnstico in vitro. 2- Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos. 3- A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes. 4- Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados. 5- O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. 6- Manusear com cuidado o Reagente N 1, que contm Azida Sdica, irritante para pele e mucosas. 7- O desenvolvimento de colorao discretamente rsea no Reagente de Trabalho no interfere em sua qualidade, desde que seja usado o branco correspondente e dosagens constantes do padro. 8- Recomendamos aplicar as normas locais, estaduais e federais de proteo ambiental para que o descarte dos reagentes e do material biolgico seja feito de acordo com a legislao vigente. 9- Para obteno de informaes relacionadas biossegurana ou em caso de acidentes com o produto, consultar as FISPQ (Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos) disponibilizadas no site www.bioclin.com.br ou atravs de solicitao pelo SAC (Servio de Assessoria ao Cliente) da Quibasa. AMOSTRAS Soro obtido livre de hemlise, plasma (colhido com heparina ou EDTA) e urina. O analito estvel no plasma, soro ou urina por 3 dias entre 2 e 8C, e 7 dias a 10C negativos. DESCRIO DO PROCESSO TCNICA A Bioclin recomenda, para uso do kit, utilizar como soro controle os kits Biocontrol N e P Bioclin. Marcar 3 tubos de ensaio: B (Branco), A (Amostra), P (Padro), e proceder como a seguir:
Branco Amostra Reagente N 2 Reagente N 1 ----1,0 mL Padro --25 mL 1,0 mL Amostra 25 mL --1,0 mL

CLCULOS cido rico (mg/dL) = Absorbncia da Amostra x 6,0 Absorbncia do Padro Como a reao segue a Lei de Lambert-Beer, o Fator de calibrao pode ser usado. Fator de calibrao = Concentrao do Padro (6,0 mg/dL) Absorbncia do Padro mg/dL = Absorbncia da Amostra x Fator de Calibrao Urina cido rico (mg/24 h) = mg/dL x Volume Urinrio (mL) 100 Os resultados sero expressos em mg/dL. LIMITAES DO PROCESSO Utilizar amostras de plasma contendo apenas EDTA ou heparina. Outros anticoagulantes interferem na reao, sendo o fluoreto inibidor da uricase. Para soro lipmico ou com valores de bilirrubina elevados (> 10 mg/dL), misturar 2,0 mL de NaCl 0,85% e 0,05 mL de soro. Medir absorbncia em 505 nm, acertando o zero com gua destilada. Diminuir a absorbncia assim obtida da absorbncia da amostra, e calcular a concentrao em mg/dL. O uso de medicamentos altamente redutores, como o cido ascrbico (Vitamina C), interfere na reao, pois estes competem com o consumo de H2O2, fornecendo valores falsamente diminudos. Por esta razo, deve-se suspender o seu uso pelo menos 12 horas antes da coleta da amostra. CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE O Laboratrio Clnico deve possuir um programa interno de controle da qualidade, onde procedimentos, normas, limites e tolerncia para variaes sejam claramente estabelecidos. importante ressaltar que todos os sistemas de medio apresentam uma variabilidade analtica caracterstica, que deve ser monitorada pelos prprios laboratrios. Para tanto, recomendvel a utilizao de controles, que permitem avaliar a preciso e a exatido das dosagens. RASTREABILIDADE O padro do kit rastrevel ao material de referncia SRM 913A do NIST (National Institute of Standards and Technology). VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia, em mg/dL, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao de cido rico em populaes sadias do sexo masculino e feminino.
Adultos Soro Crianas Urina Masculino Feminino Masculino Feminino 2,5 a 7,0 mg/dL 1,5 a 6,0 mg/dL 1,5 a 6,0 mg/dL 0,5 a 5,0 mg/dL

EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Espectrofotmetro ou colormetro, banho-maria 37C, relgio ou cronmetro, pipetas, tubos de ensaio, Biocontrol N e Bicontrol P Bioclin. Encontram-se no mercado especializado de artigos para Laboratrios de Anlises Clnicas. CONDIES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE A temperatura de armazenamento e transporte dever ser de 2 a 8C. O transporte, em temperaruras entre 15 e 30oC, no dever exceder 72 (setenta e duas) horas. No congelar. Manter ao abrigo da luz e evitar umidade.

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria 37C por 5 minutos. Ler a absorbncia da Amostra e do Padro em 505 nm (490 - 540 nm), acertando o zero com o Branco. A cor estvel por 30 minutos. Urina de 24 horas - Preparo da amostra: Anotar o volume (V) de urina de 24 horas em mL, homogeneizar, separar uma alquota de 10 mL e acertar o pH entre 7 e 9 com NaOH 5%. Se a amostra estiver turva, aquecer em banho-maria por 10 minutos a 56C, para dissoluo dos cristais. Diluir a urina 1:10 (100 mL de urina + 900 mL de gua destilada ou deionizada). Multiplicar o resultado obtido por 10. Proceder a dosagem como descrito para o soro.

250 a 750 mg/24 horas

Para converter os valores de mg/dL em mmol/L ( SI ), multiplicar por 0,05948. Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida. DESEMPENHO DO PRODUTO CONTROLE DE QUALIDADE Exatido COMPARAO DE MTODOS E ESPECIFICIDADE METODOLGICA O Kit foi comparado com outro mtodo para dosagem de cido rico comercialmente disponvel. Foram realizadas 07 anlises e os resultados foram avaliados. A equao linear obtida foi Y = 1,003X - 0,011 e o coeficiente de correlao 0,999. Com estes resultados pode-se concluir que o Kit apresenta boa especificidade metodolgica. Preciso REPETIBILIDADE A repetibilidade refere-se a 20 determinaes sucessivas de cido rico, ultilizando-se 3 amostras com concentraes diferentes, encontrando-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 2,98 0,13 4,25 Amostra 2 6,17 0,14 2,26 Amostra 3 10,14 0,47 4,63

A caracterstica bioqumica e condio bsica para o diagnstico da gota a hiperuricemia. Do ponto de vista epidemiolgico, nveis de cido rico superiores a 7 mg/dL podem indicar elevado risco de artrite gotosa ou nefrolitase. A concentrao de cido rico plasmtico est elevada em vrias outras condies clnicas, como insuficincia renal, insuficincia cardaca congestiva, toxemia de gravidez (eclmpsia), leucemias e linfomas, cetoacidose, sndrome de Down. freqente a observao de hiperuricemia associada a fatores como obesidade, hipertrigliceridemia, hipertenso arterial, diabetes mellitus. Nveis reduzidos de cido rico so observados na sndrome de Fanconi, doena de Wilson e em pacientes tratados com alopurinol, corticides, ACTH e fenilbutazona. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - TRIVEDI, R. C.; REBAR, L.; BERKA, E.; STRONG, L., Clin. Chem., 1978, 24, 1908. 2 - TONKS, D. B., Quality Control in Clinical Laboratories, 1983. 3 - TRINDER, P., Ann. Clin. Biochem., 1969, 6, 24. 4 - TIETZ Textbook of Clinical Chemistry, 2nd ed., 1994. 5 - QUIBASA: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento. GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Bioclin so testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes assegurada at a data de validade mencionada na embalagem de apresentao, desde que armazenados e transportados nas condies adequadas. DADOS DO FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: ( 31 ) 3439.5454 - Fax: ( 31 ) 3439.5455 E-mail: bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indstria Brasileira ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Servio de Assessoria ao Cliente Tel.: 0800 0315454 E-mail: sac@bioclin.com.br Nmero de registro do cido rico Monoreagente na ANVISA: 10269360228 Reviso: Outubro/12

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REPRODUTIBILIDADE A reprodutibilidade refere-se 20 determinaes de cido rico, em 3 dias diferentes, com 3 amostras de concentraes diferentes encontrando-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Concentrao Mdia (mg/dL) Desvio padro (mg/dL) Coeficiente de Variao (%) 3,06 0,14 4,43 Amostra 2 6,53 0,32 4,93 Amostra 3 10,21 0,05 0,52

Sensibilidade A sensibilidade foi calculada a partir de 20 determinaes de uma amostra isenta da presena de cido rico. A mdia de 0,0430 mg/dL com desvio padro de 0,0254 mg/dL. A sensibilidade, que indica o limite de deteco do mtodo, corresponde mdia mais 3 vezes o desvio padro, sendo igual a 0,119 mg/dL. Linearidade A reao linear at 20,0 mg/dL. Para amostras com valores acima de 20 mg/dL ou densidade ptica acima de 0,8, recomenda-se diluir a amostra com gua destilada ou deionizada, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. SIGNIFICADO DIAGNSTICO O cido rico o produto final do metabolismo dos cidos nuclicos e purinas. Sua concentrao nos lquidos orgnicos depende do balano entre a produo e a eliminao atravs dos rins, sendo gerados cerca de 400 mg dirios.

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CIDO RICO MONORREACTIVO

K139 INSTRUCCIONES DE USO
FINALIDAD Mtodo para la determinacin del acido rico. Test enzimtico colorimtrico, solamente para uso diagnstico in vitro. PRINCIPIO DE ACCIN Metodologa: enzimtico colorimtrico (UOD-PAP). La determinacin enzimtica del acido rico es hecha de acuerdo con las siguientes reacciones: cido rico + 2 H2O 2 H2O2 + DHBS + 4-Aminoantipirina
Uricasa Peroxidasa

Alantona + CO2 + H2O2 Cromgeno cereja + 4 H2O

La intensidad del color cereza formada es directamente proporcional a la concentracin del cido rico en la muestra. REACTIVOS Nmero 1 - Reactivo enzimtico - Almacenar entre 2 y 8C. No congelar. Contiene: Tampn de 100 mmol/L (pH 7,5), 4-Aminoantipirina 2 mmol/L, Azida Sdica 7,69 mmol/L, Peroxidasa > 18.000 U/L Uricasa > 3000 U/L. Nmero 2 - Standard - Almacenar entre 2 y 8C. Contiene: cido rico 6,0 mg/dL. PRESENTACIN
Presentaciones 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Reactivo N 1 100 mL 2 x 100 mL 4 x 100 mL 5 x 20 mL 2 x 40 mL 3 x 40 mL 4 x 40 mL 5 x 40 mL 6 x 40 mL 2 x 60 mL 3 x 60 mL 4 x 60 mL 8 x 60 mL Reactivo N 2 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL

CUIDADOS ESPECIALES 1- Solamente para uso diagnstico in vitro. 2- Seguir con rigor la metodologa propuesta para obtencin de resultado exactos. 3- El agua utilizada en la limpieza del material debe ser reciente y exenta de agentes contaminantes. 4- Columnas deionizadoras saturadas liberan agua alcalina, iones diversos y agentes oxidantes y reductores que pueden alterar de forma significativa los resultados. 5- El nvel del agua en bao mara debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. 6- Manejar con cuidado el Reactivo N 1, que contiene Azida Sdica, irritante para la piel y las mucosas. 7- El desenvolvimiento de la coloracin discretamente roscea en el reactivo de trabajo no interfiere en su cualidad, desde que sea usado el blanco correspondiente y dosificaciones constantes del patrn. 8- Se recomienda la aplicacin de las leyes locales, estatales y federales de proteccin ambiental para que el desecho de reactivos y materiales biolgicos se haga de acuerdo a la legislacin vigente. 9- Para obtener informacin relacionada con la seguridad biolgica o en caso de accidentes con el producto, consultar la FISPQ (Ficha de Informaciones de la Seguridad de Productos Qumicos) disponibles en el site www.bioclin.com.br o solicitando a travs del SAC (Servicio de Asesora al Cliente) de Quibasa. MUESTRAS Suero obtenido libre de hemlisis, plasma (cogido con heparina o EDTA) y orina. El analisis es estable en el plasma, suero o orina por 3 das entre 2 y 8C, y 7 das a 10C negativos. DESCRIPCIN DEL PROCESO TCNICA La Bioclin recomienda, para uso del kit, utilizar como suero control los kits Biocontrol N y P Bioclin. Marcar 3 tubos de ensayo: B (Blanco), M (Muestra), P (Patrn), y proceder como a sigue:
Blanco Muestra Reactivo N 2 Reactivo N 1 ----1,0 mL Patrn --25 mL 1,0 mL Muestra 25 mL --1,0 mL

CLCULOS cido rico (mg/dL) = Absorbancia de la Muestra x 6,0 Absorbancia del Patrn Como la reaccin sigue la Ley de Lambert-Beer, el Factor de calibracin puede ser usado. Factor de calibracin = Concentracin del Patrn (6,0 mg/dL) Absorbancia del Patrn mg/dL = Absorbancia de la Muestra x Factor de Calibracin. Orina cido rico (mg/24 h) = mg/dL x Volumen Orinario (mL) 100 Los resultados sern expresados en mg/dL. LIMITACIONES DEL PROCESO Utilizar muestras de plasma conteniendo apenas EDTA o heparina. Otros anticoagulantes interfieren en la reaccin, siendo el fluoreto inhibidor de la uricasi. Para suero lipmico o con valores de bilirrubina elevados (> 10 mg/dL), mezclar 2,0 mL de NaCl 0,85% y 0,05 mL de suero. Medir absorbancia en 505 nm, acertando el cero con agua destilada. Disminuir la absorbancia as obtenida de la absorbancia de la muestra y calcular la concentracin en mg/dL. El uso de medicamentos altamente reductores, como el cido ascrbico (Vitamina C), interfiere en la reaccin, pues stos compiten con el consumo de H2O2, proporcionando valores falsamente disminudos. Por esta razn, se debe suspender su uso por lo menos 12 horas antes de la colecta de la muestra. CONTROL INTERNO DE CALIDAD El Laboratorio Clnico debe poseer un programa interno de control de calidad, donde procedimientos, normas, lmites y tolerancia para variaciones sean claramente establecidos. Es importante resaltar que todos los sistemas de medicin presentan una variabilidad analtica caracterstica, que debe ser vigilada por los propios laboratorios. Por lo tanto, es recomendable la utilizacin de controles, que permiten la evaluacin, la precisin y la exactitud de las dosificaciones. TRAZABILIDAD El patrn del kit es trazable al material de referencia SRM 913A del NIST (National Institute of Standards and Technology). VALORES DE REFERENCIA Los valores de referencia en mg/dL, para el presente mtodo, fueron obtenidos por la determinacin de cido rico en poblaciones sanas de sexo masculino y femenino.
Adultos Suero Nios Orina Masculino Femenino Masculino Femenino 2,5 a 7,0 mg/dL 1,5 a 6,0 mg/dL 1,5 a 6,0 mg/dL 0,5 a 5,0 mg/dL

EQUIPAMIENTOS E INSUMOS OPERACIONALES Espectrofotmetro o colormetro, bao mara 37C, reloj o cronmetro, pipetas, tubos de ensayo, Biocontrol N y Biocontrol P Bioclin. Se encuentran en el mercado especializado de artculos para Laboratorios de Anlisis Clnicos. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE La temperatura de almacenamiento y transporte deber ser de 2 a 8C. El transporte, a temperaturas entre 15 y 30C , no deber exceder 72 ( setenta y dos) horas. No congelar. Mantener al abrigo de la luz y evitar humedad.

Homogenizar bien y colocar en bao Maria 37C por 5 minutos. Leer la absorbancia de la muestra y del Patrn en 505 nm (490 - 540 nm), acertando el cero con el Blanco. El color es estable por 30 minutos. Orina de 24 horas Preparo de la muestra: Anotar el volumen (V) de orina de 24 horas en mL, homogenizar, separar una alcuota de 10 mL y acertar el pH entre 7 y 9 con NaOH 5%. Si La muestra estuviera turbia calentar en bao Maria por 10 minutos a 56C, para disolucin de los cristales. Diluir la orina 1:10 (100 mL de orina + 900 mL de agua destilada o deionizada). Multiplicar el resultado obtenido por 10. Proceder a la dosificacin como lo descrito para el suero.

250 a 750 mg/24 horas

Para convertir los valores de mg/dL en mmol/L (SI), multiplicar por 0,05948. Estos valores deben ser usados como orientacin, debiendo cada laboratorio determinar su rango de valores de referencia de acuerdo con la poblacin atendida. DESEMPEO DEL PRODUCTO CONTROL DE CALIDAD Exactitud COMPARACIN DE MTODOS Y ESPECIFICIDAD METODOLGICA El Kit fue comparado con otro mtodo para dosificacin de cido rico comercialmente disponible. Fueron realizadas 07 anlisis y los resultados fueron evaluados. La ecuacin linear obtenida fue Y = 1,003X - 0,011 y el coeficiente de correlacin 0,999. Con estos resultados, se puede concluir que el kit presenta buena especificidad metodolgica. Precisin REPETIBILIDAD La repetibilidad se refiere a 20 determinaciones sucesivas de cido rico, utilizndose 3 muestras con concentraciones diferentes, encontrndose los siguientes resultados:
Muestra 1 Concentracin Promedio (mg/dL) Desvo padrn (mg/dL) Coeficiente de Variacin (%) 2,98 0,13 4,25 Muestra 2 6,17 0,14 2,26 Muestra 3 10,14 0,47 4,63

La caracterstica bioqumica y condicin bsica para el diagnstico de la gota es la hiperuricemia. Del punto de vista epidemiolgico, niveles de cido rico superiores a 7 mg/dL pueden indicar elevado riesgo de artritis gotosa o nefrolitasis. La concentracin de cido rico plasmtico est elevada en varias otras condiciones clnicas, como insuficiencia renal, insuficiencia cardiaca congestiva, toxemia de gravidez (eclmpsia), leucemias y linfomas, cetoacidosis, sndrome de Down. Es frecuente la observacin de hiperuricemia asociada a factores como obesidad, hipertrigliceridemia, hipertensin arterial, diabetes mellitus. Niveles reducidos de cido rico son observados en el sndrome de Fanconi, enfermedad de Wilson y en pacientes tratados con alopurinol, corticides, ACTH y fenilbutazona. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 1 - TRIVEDI, R. C.; REBAR, L.; BERKA, E.; STRONG, L., Clin. Chem., 1978,24, 1908. 2 - TONKS, D. B., Quality Control in Clinical Laboratories, 1983. 3 - TRINDER, P., Ann. Clin. Biochem., 1969, 6, 24. 4 - TIETZ Textbook of Clinical Chemistry, 2nd ed., 1994. 5 - QUIBASA: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento. GARANTA DE CALIDAD Antes de ser liberado para el consumo, todos los reactivos Bioclin son probados por el Departamento de Control de Calidad. La calidad de los reactivos es asegurada hasta la fecha de valides mencionada en el embalaje de presentacin, desde que son almacenados y transportados en las condiciones adecuadas. DATOS DEL FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Tel.: +55 ( 31 ) 3439.5454 - Fax: +55 ( 31 ) 3439.5455 E-mail: bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Industria Brasilea ATENDIMIENTO AL CONSUMIDOR Servicio de Asesora al Cliente Tel.: 0800 0315454 E-mail: sac@bioclin.com.br Nmero de registro del cido rico Monorreactivo en la ANVISA: 10269360228 Revisin: Octubre/12

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REPRODUCTIBILIDAD La reproductibilidad se refiere a 20 determinaciones de cido rico, en 3 das diferentes, con 3 muestras de concentraciones diferentes, encontrndose los siguientes resultados:
Muestra 1 Concentracin Promedio (mg/dL) Desvo padrn (mg/dL) Coeficiente de Variacin (%) 3,06 0,14 4,43 Muestra 2 6,53 0,32 4,93 Muestra 3 10,21 0,05 0,52

Sensibilidad La sensibilidad fue calculada a partir de 20 determinaciones de una muestra exenta de la presencia de cido rico. El promedio de 0,0430 mg/dL con desvo patrn de 0,0254 mg/dL. La sensibilidad, que indica el lmite de deteccin del mtodo, corresponde al promedio ms 3 veces el desvo patrn, siendo igual a 0,119 mg/dL. Linearidad La reaccin es linear hasta 20,0 mg/dL. Para muestras con valores por encima de 20 mg/dL o densidad ptica encima de 0,8 se recomienda diluir la muestra con agua destilada o deionizada, repetir la dosificacin y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilucin. SIGNIFICADO DIAGNSTICO El cido rico es el producto final del metabolismo de los cidos nuclicos y purinas. Su concentracin en los lquidos orgnicos depende del balance entre la produccin y la eliminacin a travs de los riones, siendo generados cerca de 400 mg dirios.

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URIC ACID MONOREAGENT

K139 USAGE INSTRUCTIONS

FUNCTION Method for determination of uric acid. Enzymatic colorimetric test, only for in vitro diagnostic use. PRINCIPLE OF ACTION Methodology: Enzymatic colorimetric (UOD-PAP). The enzymatic determination of uric acid is made according to the following reactions: Uric Acid + 2 H2O 2 H2O2 + DHBS + 4-Aminoantipirin
Uricase

Allantoin + CO2 + H2O2 Cherry Chromogen + 4 H2O

Peroxidase

The intensity of the cherry color formed is directly proportional to the concentration of uric acid in the sample. REAGENTS Number 1 - Enzyme Reagent - Store between 2 and 8C. Do not freeze. Contains: Buffer 100 mmol/L (pH 7,5), 4-Aminoantipyrine 2 mmol/L, Sodium Azide 7,69 mmol/L, Peroxidase > 18.000 U/L, Uricase > 3000 U/L. Number 2 - Standard - Store between 2 and 8C. Contains: Uric Acid 6,0 mg/dL. PRESENTATION
Apresentation 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Reagent N 1 100 mL 2 x 100 mL 4 x 100 mL 5 x 20 mL 2 x 40 mL 3 x 40 mL 4 x 40 mL 5 x 40 mL 6 x 40 mL 2 x 60 mL 3 x 60 mL 4 x 60 mL 8 x 60 mL Reagent N 2 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL

SPECIAL CARE 1- For in vitro diagnostic only. 2- Strictly follow the methodology proposed to obtain exact results. 3- Water used in material cleaning must to be recent and free of contaminants. 4- Saturated deionizer columns release alkaline water, many ions, oxidizing agents and reducers that may alter the results significantly. 5- Water level in water bath should be above the level of reagents in test tubes. 6- Handle with care Reagent N 1, containing Sodium Azide, irritating to skin and mucous membranes. 7- Slightly pink color development in the Working Reagent does not damage their quality, as long as the corresponding white and standard dosages are used. 8- We recommend applying the local, state and federal rules for environmental protection, so that disposal of reagents and biological material can be made in accordance with current legislation. 9- To obtain information related to biosafety or in case of accidents with the product, consult the MSDS (Material Safety Data Sheet) available on the website www.bioclin.com.br or upon request by the SAC (Advisory Service Customer) of Quibasa. SAMPLES Serum obtained free of hemolysis, plasma (collected with heparin EDTA) and urine. The compound is stable in plasma, serum or urine for three days if kept between 2 and 8C, and 7 days if kept at -10C. PROCESS DESCRIPTION TECHNIQUE Bioclin recommends, as control serum, Biocontrol N and P Bioclin Kits. Mark three test tubes: B (Blank), A (Sample), P (Standard), and proceed as follows:
Blank Sample Reagent N 2 Reagent N 1 ----1,0 mL Standard --25 mL 1,0 mL Sample 25 mL --1,0 mL

CALCULATIONS Uric Acid (mg/dL) = Sample Absorbance x 6,0 Standard Absorbance

As the reaction follows the Beer-Lambert Law, the calibration factor can be used. Calibration Factor = Standard Concentration (6,0 mg/dL) Standard Absorbance mg/dL = Sample Absorbance x Calibration Factor Urine Uric Acid (mg/24h) = mg/dL x Urinary Volume (mL) 100 Results are expressed in mg/dL. PROCEDURE LIMITATIONS Plasma samples containing EDTA or heparin only. Other anticoagulants interfere with the reaction, with fluoride uricase inhibitor. For serum lipids or bilirubin levels (> 10 mg/dL), mix 2,0 mL of 0,85% NaCl and 0,05 mL of serum. Measure absorbance at 505 nm, hitting the zero with distilled water. Decrease the absorbance thus obtained in the absorbance of the sample, and calculate the concentration in mg/dL. The use of highly reducing drugs, such as ascorbic acid (Vitamin C), interferes with the reaction, because they compete with the consumption of H2O2 by providing falsely decreased values. For this reason, you should discontinue its use at least 12 hours before collection of sample. INTERNAL QUALITY CONTROL The Clinical Laboratory must have an internal quality control, where all procedures, rules, limits and tolerance to variations be clearly established. It is important to mention that all measurement systems present a analytical variety, and it must be monitor by the laboratory. Therefore, it is recommendable the use of controls, allowing the precision and accuracy of the dosages. TRACEABILITY The kits standard is traceable to the reference material NIST (National Institute of Standards and Technology) SRM 913A. REFERENCE VALUES The reference values in mg/dL, for this method were obtained through the determination of uric acid in healthy populations of male and female.
Adults Serum Children Urine Male Female Male Female 2,5 to 7,0 mg/dL 1,5 to 6,0 mg/dL 1,5 to 6,0 mg/dL 0,5 to 5,0 mg/dL

EQUIPMENTS AND OPERATIONAL INPUTS Spectrophotometer or colorimeter, water-bath at 37C, watch or stopwatch, pipettes, test tubes, Biocontrol N and Biocontrol P Bioclin. They can be found at markets specialized on Laboratories of Clinical Analysis. TRANSPORTATION AND STORAGE CONDITIONS The storage temperature should be between 2 to 8C. The transport at temperatures between 15 and 30C should not exceed 72 (seventy two) hours. Do not freeze. Protect from light and avoid moisture.

Homogenize well and put in a water-bath at 37C for 5 minutes. Read the absorbance of sample and standard at 505 nm (490 - 540 nm), hitting the zero with the White. The color is stable for 30 minutes. 24 - Hour urine - Preparation of sample: Take note of the volume (V) of 24-hour urine in mL, homogenize, separate a rate of 10 mL and adjust the pH between 7 and 9 with 5% NaOH. If the sample is cloudy, warm it in water bath for 10 minutes at 56C, dissolving the crystals. Dilute urine 1:10 (100 mL of urine + 900 mL of distilled water). Multiply the result by 10. Proceed with dosage as described for serum.

250 to 750 mg/24 hours

To convert the values from mg/dL to mmol/L (IS), multiply by 0,05948. These values should be used as guidelines, each laboratory should establish its range of reference values, according to the population served. PRODUCT PERFORMANCE QUALITY CONTROL Accuracy COMPARISON OF METHODS AND METHODOLOGY SPECIFICITY The kit was compared with other method for determination of uric acid dosage commercially available. 07 tests were performed and the results were evaluated. The Liner equation was obtained Y = 1,003X - 0,011 and correlation coefficient 0,999. With these results we can conclude that the kit has good methodological specificity. Precision REPEATABILITY Repeatability refers to 20 consecutive measurements with 3 samples obtaining the following results:
Sample 1 Average Concentration (mg/dL) Standard Deviation (mg/dL) Coefficient of Variation (%) 2,98 0,13 4,25 Sample 2 6,17 0,14 2,26 Sample 3 10,14 0,47 4,63

The concentration of plasma uric acid is elevated in several other clinical conditions such as renal failure, congestive heart failure, toxemia of pregnancy (eclampsia), leukemias and lymphomas, ketoacidosis, Downs syndrome. Often the observation of hyperuricemia associated with factors such as obesity, hypertriglyceridemia, hypertension and mellitus diabetes. Reduced levels of uric acid are observed in Fanconi syndrome, Wilsons disease and in patients treated with allopurinol, corticosteroids, ACTH and phenylbutazone. BIBLIOGRAPHIC REFERENCES 1 - TRIVEDI, R. C.; REBAR, L.; BERKA, E.; STRONG, L., Clin. Chem., 1978, 24, 1908. 2 - TONKS, D. B., Quality Control in Clinical Laboratories, 1983. 3 - TRINDER, P., Ann. Clin. Biochem., 1969, 6, 24. 4 - TIETZ Textbook of Clinical Chemistry, 2nd ed., 1994. 5 - QUIBASA: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento. QUALITY ASSURANCE Before being released for consumption, all Bioclin reagents are tested by the Department of Quality Control. The quality of reagents is assured until expiration date stated on the presentation packaging, when stored and transported under appropriate conditions. MANUFACTURERS DATA QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 - Santa Branca CEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - Brasil Phone.: +55 (31) 3439.5454 - Fax: +55 (31) 3439.5455 E-mail: bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 - Made in Brazil CUSTOMER SERVICE Customer Advisory Service Phone.: 0800 0315454. E-mail: sac@bioclin.com.br ANVISA registration for Uric Acid Monoreagent kit: 10269360228 Review: October/12

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REPRODUCIBILITY Reproducibility refers to 20 consecutive measurements during 3 days with 3 samples, obtaining the following results:
Sample 1 Average Concentration (mg/dL) Standard Deviation (mg/dL) Coefficient of Variation (%) 3,06 0,14 4,43 Sample 2 6,53 0,32 4,93 Sample 3 10,21 0,05 0,52

Sensitivity Sensitivity was calculated from 20 determinations of a sample with no presence of uric acid. The average 0,0430 mg/dL with a standard deviation of 0,0254 mg/dL. The sensitivity, which indicates the method detection limit, corresponds the average plus 3 times the standard deviation and is equal to 0,119 mg/dL. Linearity The reaction is linear up to 20,0 mg/dL. For samples with values above 20 mg/dL or optical density above 0,8, it is recommended to dilute it with distilled water, repeat the dosage and multiply the result by the dilution factor. DIAGNOSTIC SIGNIFICANCE Uric acid is the end product of metabolism of nucleic acids and purines. Its concentration in body fluids depends on the balance between production and delimination through the kidneys, and generated about 400 mg daily. The biochemical characteristics and the basic condition for the diagnosis of gout is hyperuricemia. From the epidemiological point of view, uric acid levels above 7 mg/dL may indicate high risk of gouty arthritis or nephrolithiasis.