CADERNO PEDAGGICO BIOLOGIA CELULAR

LONDRINA 2008

DENISE RENZI MARLENE MARQUES SOBREIRA SELMA MIRANDA ROSA LIMA

ESTRATGIAS DIDTICO-PEDAGGICAS PARA O ENSINO DA CLULA

Caderno pedaggico apresentado SEED (Secretaria Estadual de Educao), como material didtico resultante do PDE (Programa de Desenvolvimento Educacional), atravs da IES (Instituto de Ensino Superior) UEL (Universidade Estadual de Londrina), sob orientao da professora Lucia Giuliano Caetano.

LONDRINA 2008
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SUMRIO

INTRODUO --------------------------------------------------------------------------------------PREPARO DE LMINAS PERMANENTES----------------------------------------------------

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CARACTERIZAO DE CLULA VEGETAL------------------------------------------------ 15 OSMOSE EM CLULAS VEGETAIS DE Tradescantia sp----------------------------------- 19 MOVIMENTO CELULAR-------------------------------------------------------------------------- 23 DIVISO CELULAR EM RAZ DE CEBOLA (Allium cepa)---------------------------------- 31 BIBLIOGRAFIA--------------------------------------------------------------------------------------- 36

INTRODUO
A clula a unidade fundamental dos seres vivos, desempenha inmeras funes necessrias para a manuteno da vida. Existe uma grande diversidade entre os seres vivos e todos so constitudos por clulas, estas variam em tamanho, aparncia e funo. Sendo pea fundamental da vida se alimentam, crescem, se reproduzem, convertem energia de uma forma para outra, morrem. Muitos estudos, trabalho e dedicao foram necessrios pelos cientistas para aperfeioar o desenvolvimento das tcnicas histolgicas a fim de obterem maiores informaes sobre a compreenso morfofisiolgica da clula. Buscar conhecer melhor essa unidade da vida o que nos proporcionar esse material didtico-pedaggico, pois estar interligado com o conhecimento e prticas de tcnicas, levando os alunos a se aproximarem de um universo invisvel e inacessvel, podendo despertar a motivao e o interesse dos mesmos.

PREPARO DE LMINAS PERMANENTES

Denise Renzi Marlene Marques Sobreira Selma Miranda Rosa Lima

PREPARO DE LMINAS PERMANENTES

A.INTRODUO As lminas permanentes tm por objetivo a utilizao do material por longos perodos de tempo, no qual sero preservadas suas estruturas celulares. Para que se possa realizar o estudo histolgico de rgos, de tecidos, de clulas e conservar as caractersticas morfo-fisiolgicas da clula viva, faz-se necessrio a confeco de lminas permanentes. Essas tm por objetivo a utilizao do material por longos perodos de tempo, no qual sero preservadas suas estruturas celulares. Sero observadas ao microscpio ptico com clareza e nitidez, para isso, torna-se necessrio um conjunto de etapas pelas quais os materiais de estudo precisam passar.

1 - OBTENO DO MATERIAL a) Faa uso de luvas para pegar o animal (camundongo). b) Com algodo embebido em ter etlico anestesia-se o mesmo (Fig. 1). c) Prenda-o em uma placa de cortia sempre deixando o algodo bem prximo de suas narinas (fig. 2). d) Cuidadosamente com o auxilio de uma tesoura e uma pina retire-se a pele do abdmen sem danificar o peritnio, que tambm ser removido posteriormente (fig. 3). e) Retiram-se os rgos desejados para o estudo (nesse caso foi utilizado o fgado, fig. 4). f) Se houver necessidade de lavagem prvia utilizar soro fisiolgico. g) Introduza os rgos no fixador de Bouin de 12 a 24 horas e aps 5 min os mesmos sero cortados ao meio para melhor absoro do produto.

Fig. 1 Animal sendo Anestesiado com ter etlico

Fig.2 - Tcnica fixando o animal na placa de cortia

Fig.3 Animal aberto com os rgos expostos e alfinete segurando o peritnio Fig.4 Retirada do fgado com uma tesoura

2. FIXAO 2.1- PREPARO E FUNO DO FIXADOR DE BOUIN O fixador deve ser preparado no momento do uso, pois pode sofrer mudanas de estado fsico devido a evaporao. O fixador de Bouin tem a seguinte frmula (Junqueira e Junqueira, 1983). Mistura-se em uma proveta graduada de 100 ml: 75 ml de soluo saturada de cido pcrico; 25 ml de formol; 7

5 ml de cido actico fazendo uso de uma pipeta.

Tem como funo manter a integridade do tecido preservando suas estruturas celulares, provoca o enrijecimento das clulas, permite que o material resista melhor as etapas seguintes e ainda pode aumentar a afinidade do material pelos corantes citolgicos. O tecido (fgado) imediatamente a sua retirada foi colocado num Becker contendo Bouin, passado 5 minutos o rgo foi cortado em pedaos prximos a 2cm3, em seguida o tecido permaneceu no fixador por 24horas.

Fig. 5. Tcnico retirando a pea do fixador.

3. DESIDRATAO Passadas as 24hs no fixador de Bouin, o material dever ser desidratado para posterior incluso, passando pelas seguintes etapas: lcool 70% -------------------------------------------------------- 4 banhos de 30 min. lcool 95%--------------------------------------------------------- 4 banhos de 30 min. lcool absoluto---------------------------------------------------- 4 banhos de 30 min.

4. DIAFANIZAO Depois do banho em lcool absoluto a pea passar para: Xilol----------------------------------------------------------------- 4 banhos de 30 min. O ltimo banho ocorrer dentro da estufa 70C, em recipiente aberto. O xilol tem como funo retirar o lcool do material para que a parafina penetre na pea. Em seguida damos banhos de Parafina------------------------ 4 banhos de 30 min.(todos dentro da estufa a 70C) Fig.6. 8

Fig. 6 Mostra a pea passando pelos banhos de xilol e em seguida de parafina

5. INCLUSO Em um molde de ferro (bloco) colocado parafina em estado lquido. Em seguida coloca-se o material nos blocos contendo parafina lquida, que depois de solidificados sero fixados em blocos de madeira (taqueamento), aparando-se suas arestas, para realizar a microtomia (figuras 7 a 10).

Fig. 7 Molde de ferro contendo parafina, solidificada com o tecido no seu interior (seta)

Fig. 8 A parafina retirada do bloco de ferro e moldada

Fig. 9 Bloco moldado para ser taqueado

Fig. 10 Bloco sobre o taco de madeira

6. MICROTOMIA Aps o taqueamento, leve o material para o micrtomo(Fig.11), que o equipamento prprio para executar cortes muito finos (cerca de 5-7 micrmetros), atravs de uma navalha de ao, Fig. 12. Os cortes em seguida so colocados em um banho-maria (equipamento contendo gua e gelatina sem sabor) para que os cortes sejam distendidos e fiquem aderidos na lmina (fig.13). Os cortes so pescados com uma lmina e levados ao microscpio para verificar se h formao de bolhas, sujeiras, etc (fig. 14). Coloque essas lminas na estufa por 24 horas, no mnimo.

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Fig. 11 Micrtomo com o taco

Fig. 12 Navalha de ao, indicada pela seta.

Fig. 13 Banho-maria, contendo gua com gelatina, onde os cortes so pescados com a lmina.

Fig. 14 Observao dos cortes pescados.

7. COLORAO O material corado para evidenciar os diferentes componentes celulares, a hematoxilina cora de azul ou violeta o ncleo e outras estruturas cidas e a eosina cora o citoplasma em cor-de-rosa. Antes da colorao o material dever passar pelas seguintes etapas: Desparafinizao: Aps 24 horas na estufa as lminas sero colocadas em um suporte (cesta) e mergulhadas em xilol por 10 min, novamente em outro recipiente contendo xilol por mais 5 min. (fig. 15). Hidratao: Neste momento as lminas sero mergulhadas, em: lcool absoluto--------------------------------------------------------------------- 5 min. lcool absoluto -------------------------------------------------------------------- 5 min. lcool 95% -------------------------------------------------------------------------5 min. lcool 70% ------------------------------------------------------------------------- 5 min. 11

gua destilada-----------------------------------------------------------------------5 min. Aps a hidratao, para retirada do excesso de gua, introduza a cesta na hematoxilina por 1 minuto(fig. 16), depois leve para gua corrente por 10 minutos, escorra bem e coloque na eosina por 30 segundos, leve novamente para gua corrente e em seguida passe pelos seguintes banhos: lcool 70% ----------------------------------------------------------------- banho rpido. lcool 95% ----------------------------------------------------------------- banho rpido. lcool absoluto ----------------------------------------------------------------------5 min. lcool absoluto --------------------------------------------------------------------- 5 min. lcool + xilol------------------------------------------------------------------------5 min. Xilol diafanizao------------------------------------------------------------------- 5 min. Xilol montagem -------------------------------------------------------------------- 5 min.

Fig. 15 As lminas esto colocadas dentro da cesta (seta) e mergulhadas em banhos de xilol.

Fig. 16 Mergulhando as lminas no corante Hematoxilina

8. MONTAGEM Depois da colorao o material dever ser protegido. Coloca-se uma gota de blsamo na lamnula e em seguida a lmina sobre ela, guarde na estufa, a 25C, onde ficar por aproximadamente 30 dias at a secagem do blsamo. 9. RESULTADOS As fotos abaixo caracterizam uma clula animal.

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Clulas do fgado podem ser mono e binucleadas aumento 400X

Clula de fgado binucleada: C= citoplasma, N= ncleo e Nu= nuclolo- aumento de 1000X

Clulas epiteliais ciliadas da traquia - aumento de 1000X

Clulas do tecido cartilaginoso da traquia- aumento 1000X

Clulas adiposas da traquia- aumento 1000X

Clulas de tecido muscular com ncleos perifricos aumento 1000 X

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10.ATIVIDADES a) Qual a funo da anlise de um material na forma de lminas permanentes? b) Quais as etapas para confeco de uma lmina permanente? c) Quais as caractersticas principais de uma clula animal? d) Quais as possveis localizaes e quantidades de ncleo na clula animal? e) Quais as formas uma clula animal pode apresentar?

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CARACTERIZAO DE CLULA VEGETAL

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CARACTERIZAO DE CLULA VEGETAL

A. INTRODUO Em uma clula vegetal, alm da membrana plasmtica, encontra-se a parede celular, essa constituda basicamente por celulose, espessa, resistente, d sustentao e proteo mecnica clula. O vacolo uma estrutura que pode ocupar at 95% do volume de uma clula madura, revestido por uma membrana lipoprotica, tem a funo de armazenar gua e outras substncias, participa do controle das trocas de gua entre a clula e o meio extracelular e so os responsveis pela presso osmtica da clula. Uma outra caracterstica da clula vegetal a presena de plasto, sendo que os cloroplastos, tem um papel fisiolgico mais expressivo. Neles esto localizados pigmentos, enzimas e coenzimas responsveis pela formao dos compostos orgnicos, a fotossntese. Os cloroplastos, em algumas clulas, evidenciam o movimento do hialoplasma, a ciclose. B. MATERIAIS lmina lamnula gua folhas de Tradescantia sp microscpio conta gotas pipeta folhas de Elodea sp

C. PROCEDIMENTO DE AULA PRTICA 1. Observao da epiderme inferior da Tradescantia a) Com cuidado retire a epiderme inferior da folha de Tradescantia sp. b) Coloque a epiderme de tradescantia sp sobre uma lmina de vidro, com algumas gotas de gua e cubra com uma lamnula. 16

2. Observao da folha de Elodea sp a) Retire uma folha de Elodea sp e coloque-a sobre uma lmina b) Coloque uma gota de gua c) Cubra com lamnula D. OBJETIVOS Observar: Parede celulsica Vacolo Cloroplasto

E. RESULTADOS 2. Observao da folha da Elodea sp

Clula da epiderme da Elodea observada com aumento de 400X A - parede celular e B - cloroplastos :

Folha de Elodea em aumento 1000X A - Cloroplastos

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1. Epiderme inferior da Tradescantia sp

Epiderme inferior de Tradescantia A- parede celulsica

Epiderme inferior de Tradescantia A Vacolo contendo antocianina

Epiderme de Tradescantia evidenciando um estmato Detalhe das clulas guardas mostrando em: onde os cloroplastos esto presentes somente nas A -cloroplastos e em B ostolo (abertura) - aumento clulas guardas - aumento de 400x de 1000X

F-ATIVIDADES a) Entre uma clula vegetal e uma clula animal h muita semelhana, mas tambm apresentam caractersticas que lhes so peculiares. Cite trs estruturas presentes em uma clula vegetal, que no tm em uma clula animal: b) A parede celular um envoltrio extracelular, presente em todos os vegetais. D as suas caractersticas e funes: c) Sendo o vacolo e os cloroplastos estruturas celulares muito importantes, quais suas funes?

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OSMOSE EM CLULAS VEGETAIS DE Tradescantia sp

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OSMOSE EM CLULAS VEGETAIS DE Tradescantia sp

A. INTRODUO A membrana plasmtica considerada semipermevel, pois permite a passagem do solvente e impede ou dificulta a passagem de certos solutos (material dissolvido), sendo este processo denominado de permeabilidade seletiva. A passagem do solvente ou do soluto pode ocorrer tanto no sentido de fora para dentro, como de dentro para fora da clula. O processo de passagem de molculas de gua atravs da membrana no sentido da soluo menos concentrada para mais concentrada denominado osmose. um processo fsico importante na sobrevivncia das clulas, ajuda a controlar o gradiente de concentrao de sais em todas as clulas vivas. A osmose um processo passivo de transporte de gua da membrana celular, ou seja, processo realizado sem gasto de energia pela clula. Quando uma clula colocada num meio hipertnico, mais concentrado em soluto em relao ao seu citoplasma, esta perde gua e como conseqncia h uma diminuio do volume celular, no caso de uma clula vegetal o volume celular no alterado, devido a presena da parede celulsica, o vacolo que sofrer alterao de volume perdendo gua, estado de plasmlise. Porm, quando colocada em meio hipotnico, menos concentrado em soluto, a clula aumenta de volume, no caso da clula vegetal, o vacolo que tem seu volume aumentado, deplasmlise. B. MATERIAIS lmina lamnula gua soluo salina de NaCl a 3% folhas de Tradescantia sp microscpio pipeta conta gotas 20

C. PROCEDIMENTO DE AULA PRTICA a. Com cuidado retire a epiderme inferior da folha de Tradescantia sp. b. Coloque a epiderme de Tradescantia sp sobre uma lmina de vidro, com algumas gotas de gua e cubra-a com a uma lamnula. c. Leve ao microscpio e anote suas observaes. d. Aps anotar as observaes, retire a lamnula com cuidado e coloque algumas gotas de soluo salina sobre a mesma epiderme j observada, leve novamente ao microscpio para observar. e. Aps fazer as observaes, retire a lamnula e em seguida a soluo salina com o auxilio de um papel de filtro, coloque gua novamente e observe. D. RESULTADOS 1. Epiderme com gua

Detalhe da parede celular (A) aumento de 1000X

A Vacolo - aumento 200X

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2. Epiderme com soluo salina Plasmlise

Plasmlise (vacolo reduzido A) aumento de 100X

Plasmlise (vacolo reduzido) aumento de 200X

3. Epiderme com gua novamente - Deplasmlise

Deplasmlise vacolo (A) voltando ao volume original) aumento de 200X

Deplasmlise -aumento de 200X A= vacolo

E-ATIVIDADES a) Ao colocar uma soluo salina em um recipiente contendo uma folha de alface, depois de algum tempo, verifica-se que esta murchou, certamente ocorreu plasmlise. O que significa dizer que as clulas esto plasmolisadas? b) Qual organela, na clula vegetal, responsvel pelo controle osmtico? c) Cite um exemplo e explique como usar o processo da osmose para a conservao de alimentos: d) Diferencie meio hipertnico de hipotnico:

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MOVIMENTO CELULAR
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MOVIMENTO CELULAR
1- OBSERVAO DE MOVIMENTO INTRACELULAR EM CLULA VEGETAL CICLOSE A. INTRODUO H um constante movimento do citoplasma em clulas vegetais vivas observadas ao microscpio, denominado ciclose. A ciclose aumenta a troca de materiais entre organelas e entre clulas, graas a ela, as clulas vegetais so capazes de aproveitar melhor a quantidade de luz que recebem, espalhando os seus cloroplastos uniformemente no citoplasma, quando h pouca luz, agrupando-os, quando h excesso de luz. B. MATERIAIS -lmina - lamnula -gua - folhas de Elodea sp - microscpio -conta gotas

C. PROCEDIMENTO DE AULA PRTICA a) Retirar uma folha de Elodea sp colocar na lmina de vidro, pingar com o conta gotas algumas gotas de gua, cobrir com a lamnula e levar ao microscpio. Observar no aumento de 20X, 40X e 100X. D. OBJETIVO Observe o movimento do hialoplasma em clula vegetal- ciclose. E. RESULTADOS:

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Epiderme de Elodea sp aumento de 200X

Ciclose aumento de 400X

Ciclose aumento de 400X

Ciclose aumento de 400X

Ciclose aumento de 400X

Ciclose aumento de 400X

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Ciclose aumento de 400X

Ciclose aumento de 400X

Ciclose aumento de 400X

Ciclose aumento de 1000X

Ciclose aumento de 1000X

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Ciclose aumento de 1000X

Ciclose aumento de 1000X

Ciclose aumento de 1000X

Ciclose aumento de 1000 X

Ciclose aumento de 1000X

Vaso condutor de seiva aumento 1000X

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Vaso condutor de seiva aumento 1000X

Vaso condutor de seiva aumento 100oX

2. OBSERVAO DE MOVIMENTO INTRACELULAR DA CLULA ANIMAL A. INTRODUO As clulas animais assim como as vegetais tambm possuem movimento, temos como exemplo os melanforos que so clulas animais que possuem um grande nmero de prolongamentos citoplasmticos, e apresentam no seu interior o pigmento melanina. A mudana na colorao de muitos peixes est relacionada migrao de pigmentos dos prolongamentos citoplasmticos celulares da periferia em direo ao ncleo. Essas mudanas de cor so desencadeadas por fatores ambientais (temperatura, pH e salinidade da gua, perodo do dia, luminosidade etc.), fisiolgicos (doenas, estresse e estado nutricional) e comportamentais (perodo reprodutivo e posio hierrquica). B. MATERIAIS -lmina - lamnula - gua -peixe de escamas -microscpio -conta gotas

C. PROCEDIMENTO DE AULA PRTICA

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a) Retirar a escama de um peixe e coloca-la na lmina de vidro, pingar com o conta gotas algumas gotas de gua, cobrir com a lamnula e levar ao microscpio. D OBJETIVO Observar os melanforos quanto a sua forma e a presena do pigmento melanina. E. RESULTADOS: A seqncia de imagens mostra o deslocamento dos grnulos de melanina da periferia da clula em direo a regio central. A forma dessa clula estrelada, isto observado quando os pigmentos encontram-se distribudos por toda a clula.

Melanforo com seus prolongamentos- aumento de 100X

Melanforo evidenciando o incio do deslocamento dos pigmentos para a regio central - aumento de 200X

Melanforo aumento de 200X

Melanforo aumento de 200X

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Melanforo ( pigmento migrou totalmente) aumento de 200X

Melanforo aumento de 400X

Melanforo aumento de 400X

Melanforo aumento de 400X

E. ATIVIDADES a) Qual movimento que a clula vegetal realiza para distribuir nutrientes e organelas? b) Descreva com suas palavras o que mais chamou sua ateno na prtica apresentada. c) O que pode interferir na migrao dos pigmentos nos melanforos?

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DIVISO CELULAR EM RAIZ DE CEBOLA (Allium cepa)

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DIVISO CELULAR EM RAZ DE CEBOLA (Allium cepa)

A. INTRODUO A diviso celular de grande importncia para o crescimento celular e reparao de tecidos, como cclica chamada de ciclo celular e est dividida em: Intrfase e Mitose. A maior parte da vida da clula representada pela intrfase, perodo representado entre uma diviso celular e outra. A clula em intrfase encontra-se em sua maior atividade metablica, nela so evidentes a membrana o citoplasma e o ncleo. As clulas diferenciadas apresentam um ndice mittico muito baixo ou nulo enquanto que as clulas meristemticas (indiferenciadas) apresentam um alto ndice mittico. A Mitose uma fase contnua, mas para efeitos de estudos est dividida em quatro fases, so elas: Prfase, metfase, anfase e telfase. Na prfase inicia-se o processo de espiralizao dos cromossomos, formao das fibras do fuso, o desaparecimento do nuclolo e o rompimento da membrana nuclear. Na metfase os cromossomos no seu grau mximo de espiralizao se encontram na regio equatorial da clula. A anfase os cromossomos-irmos migram para os plos da clula puxados pelas fibras do fuso. Na telfase os cromossomos atingem os plos da clula, ocorre o reaparecimento do ncleo e da carioteca, e os cromossomos comeam o processo de desespiralizao, formando assim duas clulas. Nesta atividade sero observadas clulas vegetais em diferentes estgios de divises celulares conhecidas como Mitose. B. MATERIAL UTILIZADO -razes de cebola em lcool 70% -lmina -lamnula -vidro de relgio - pina -lamparina -microscpio -papel de filtro -estilete de agulha 32

-gilete - corante orcena actica 2% - acido actico 50% - Becker

C. PROCEDIMENTO DE AULA PRTICA 1. TCNICA DE OBTENO DAS RAZES DE CEBOLA Para obter-se as razes meristemticas de cebola, coloca-se um cebola sobre um Becker com gua, apenas com o caule em contato com a gua, para que as razes cresam .Aps 3 a 4 dias as razes tero crescido de 1 a 2 centmetros, e estaro prontas para serem cortadas, e colocadas no fixador etanol: cido actico na proporo 3:1 por 12- 24 horas, o fixador utilizado para matar as clulas sem alterar sua estrutura celular. Depois desse tempo ser transferido para a soluo de lcool 70% e armazenado em geladeira, para sua conservao e posterior utilizao. 2. PREPARO DA LMINA a) Retire com o uso da pina trs razes de cebola do frasco com lcool 70% . b) Coloque-as no vidro de relgio com acido actico 50%, por 5 min, para hidrolisar a camada de pectina existente nas paredes celulsicas das clulas vegetais. c) Retire as razes do cido actico 50% e coloque sobre a lmina de vidro com algumas gotas de orcena actica, aquea a lmina na lamparina sem deixar ferver por alguns minutos. d) Cubra com a lamnula, envolva em papel de filtro dobrado e aperte com o polegar contra a lamnula para que as razes fiquem bem esmagadas, para melhor observao ao microscpio ptico das clulas. e) Levar ao microscpio e observar nas objetivas de 4X, 10X, 40X e 100X. E anotar todas as observaes.

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E - OBJETIVO Caracterizar todas as fases do ciclo celular F. RESULTADOS

Clulas diferenciadas

A (adultas)

Clulas meristemticas em: intrfase A, prfase- B e anfase - C

Clulas meristemticas em: interfase - A metfase B e telfase - C

Clula meristemticas em: interfase - A e anfase - B

Clulas meristemticas em: interfase - A e anfase - B

Clula meristemticas em: interfase - A, metfase - B

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F. ATIVIDADES 1- Analise as fotos, obtidas ao M.O., do tecido da extremidade da raiz da cebola, e responda as questes abaixo:

1 = ______________

2=_______________

3= ________________

4=________________

5= _________________

a) D o nome das fases da mitose apresentadas acima de acordo com seu nmero: b) Organize as fases da mitose representadas acima na seqncia correta: c) Descreva os principais eventos de cada fase.

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BIBLIOGRAFIA - GOWDAK, Demetrio. Mattos, Neide Simes de. Biologia vol. I. Ed. FTD, 1990. - FAVARETTO, Jos Arnaldo. MERCADANTE, Clarinda. Biologia vol. nico. Ed. Moderna, 1999. - JUNQUEIRA, Luiz Carlos Uchoa. CARNEIRO, Jos. Biologia celular e Molecular. Ed. Guanabara Koogan S.A. 7a Edio. 2005 - ALBERTS, Bruce et al. Fundamentos da Biologia Celular. 2a Edio. Ed. Artmed. 2006. - JORDO, Berenice Quinzani et al. Prticas de Biologia Celular. Ed. UEL. 1998. - AMABIS, Jos Mariano. MARTHO, Gilberto Rodrigues. Biologia vol.2. Ed. Moderna, 2004. - AMABIS, Jos Mariano. MARTHO, Gilberto Rodrigues. Biologia vol.2. Ed. Moderna, 2004. - LOPES, Snia. ROSSO, Sergio. Biologia vol. nico. Ed. Saraiva, 2005. - JNIOR, Csar da Silva. SASSON, Sezar. Biologia vol. 1. Ed. Saraiva 2005. - JNIOR, Csar da Silva. SASSON, Sezar. Biologia vol. 2. Ed. Saraiva 2005.

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