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RTIGO COMPLETO Outubro Dezembro 2007 Nmero 4

Volume 1

Efeitos da sulpirida sobre a densidade de receptores dopaminrgicos D2-smile em corpo estriado de ratos jovens e velhos
Effects of sulpiride on D2-like dopaminergic receptor density in corpus striatum of young and old rats

Silvnia Maria Mendes Vasconcelos1*, Natlia Martins Lima2, Gabriel Teixeira Montezuma Sales2, Manoel Cludio Azevedo Patrocnio3, Glcio Rebouas de Oliveira3, Francisca Cla Floreno Sousa1, Glauce Socorro Barros Viana1
1.

Professora Doutora em Farmacologia, Universidade Federal do Cear (UFC), Fortaleza, CE, Brasil Acadmicos de Medicina, bolsistas de Iniciao Cientfica, UFC, Fortaleza, Brasil Mdico, UFC, Fortaleza, CE, Brasil

RESUMO Introduo: Sulpirida uma droga neurolptica atpica utilizada como antipsictica. O objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da sulpirida, aps diferentes dias de tratamento, nos receptores dopaminrgicos D2smile (RD2) em corpo estriado (CE) de ratos jovens e velhos. Material e Mtodos: Ratos Wistar machos (180-200 g) foram tratados com sulpirida (100 mg/kg, v.o.) uma vez por dia durante 7, 15 e 30 dias e sacrificados 24 horas aps o ltimo tratamento. A densidade dos receptores D2 foi determinada atravs de ensaios de binding em CE de rato usando [3H]-espiroperidol como radioligante. Resultados: Nenhuma alterao foi observada no nmero de receptores dopaminrgicos D2 em animais jovens e velhos, exceto por uma diminuio de 17% no valor dos receptores D2 observado aps 15 dias de tratamento em ratos velhos. Concluso: A densidade desses receptores foi menor em ratos velhos quando comparados aos jovens, indicando que nesses animais os receptores sofrem um processo de degenerao em funo da idade. Palavras-chave: receptores dopaminrgicos, sulpirida, corpo estriado.

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Autor para correspondncia:

Dra. Silvnia Vasconcelos Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Cear. Rua Cel. Nunes de Melo 1127 CEP 60431-270 Fortaleza, Cear, Brasil Telefone: 55(85) 3366-8337 Fax: 55(85) 3366-8333. e-mail: silvania_vasconcelos@yahoo.com.br

Recebido: 16 ago 2007 Revisado: 21 nov 2007 Aceito: 27 nov 2007 Apoio financeiro: CNPq e FUNCAP

REPM Vol 1(4): 15 - 20, 2007

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Revista Eletrnica Pesquisa Mdica volume 1 no. 4 Out - Dez 2007

eurolpticos so drogas tambm conhecidas como antipsicticos ou tranquilizantes maiores, que possuem em comum a propriedade farmacolgica de antagonizar as aes da dopamina (Vasconcelos et al., 2003) e, por isso, so considerados efetivos no tratamento da esquizofrenia (Rang et al., 2007). Os neurolpticos so considerados drogas antiesquizofrnicas por bloquearem os receptores dopaminrgicos D2 no sistema mesolmbico (Matsubara et al., 1993; Bressan et al., 2003). Entretanto, o mecanismo de ao dessas drogas no tem sido bem elucidado (Ellenbroek et al., 1991). As drogas neurolpticas no interagem somente com receptores D2, mas tambm com outros receptores cerebrais, dentre eles RD1, 5HT2, muscarnicos e alfa adrenrgicos (Lang et al., 1994, Vasconcelos, 1997). Entretanto, o papel desses receptores na ao dos neurolpticos permanece ainda por ser estabelecida. As drogas neurolpticas so classificadas em tpicas e atpicas, onde o haloperidol e a sulpirida encontra-se no grupo dos tpicos e atpicos, respectivamente (Brunton et al., 2006). Estes termos so amplamente usados, mas no claramente definidos. A distino baseia-se na capacidade dos neurolpticos tpicos em produzir efeitos colaterais extrapiramidais, enquanto isto parece ocorrer pouco nos atpicos (Ellenbroek et al., 1991; Rang et al., 2007, Leito-Azevedo et al., 2006). A sulpirida atua quase que exclusivamente sobre os receptores D2, embora o seu grupo tambm possua uma atividade antiserotoninrgica (Alter et al., 1986; Hollister, 1992). Essa droga somente age em receptor D2 no corpo estriado em altas doses (Matsubara et al., 1993). Entretanto, foi observado que quando administrada em baixas doses bloqueia preferencialmente receptores D2 pr-sinpticos controlando assim a liberao de dopamina no corpo estriado (Sigala et al., 1991). Dentro da famlia de D2 (D2-smile), apresenta maior potncia em D4 do que em D3 (Seeman and Van

Tol, 1994) e apresenta preferncia por receptores dopaminrgicos nas regies do corpo estriado e do sistema lmbico (Kohler, 1984). Vrios estudos relatam uma reduo idadedependente na densidade de receptores D1 e D2 em vrias regies cerebrais de mamferos (Henry et al., 1986; Hyttel, 1987). Os estudos da relao entre receptores dopaminrgicos e idade tm sido frequentemente contraditrios. Memo et al. (1980) no mostraram mudana na densidade de receptores D2 com a idade e de maneira semelhante De Keyser et al. 1991) tambm no encontraram nenhuma alterao na densidade de receptores D1 e D2 na substncia negra em humanos. Quanto ao uso dos neurolpticos em ratos em desenvolvimento, Campbell et al. (1988) relataram que ratos sofrem uma grande diminuio na sensibilidade quando tratados com haloperidol desde o perodo do desmame at os primeiros 18 meses de idade. Contudo, poucos estudos mostram a relao entre sulpirida e alterao de receptores dopaminrgicos em ratos jovens e velhos. Desse modo, os objetivos do presente trabalho foram comparar a densidade de receptores dopaminrgicos D2-smile (RD2) em corpo estriado de ratos jovens e velhos depois do tratamento com sulpirida em diferentes tempos de administrao. Material e Mtodos Ratos Wistar, machos (n = 5 - 6 animais/grupo), pesando entre 180 e 200 g, divididos em duas faixas etrias (jovens: 2 - 3 meses e velhos: 12 - 20 meses), provenientes do Biotrio Central da Universidade Federal do Cear, foram tratados diariamente durante 7, 15 ou 30 dias com sulpirida (100 mg/Kg, v.o.). Esse tratamento foi realizado apenas uma vez ao dia (8 h da manh). Os animais controle receberam soluo salina 0,9%. Os animais foram decapitados 24 h aps a ltima administrao; imediatamente o corpo estriado foi dissecado sobre gelo para preparao de homogenato a 10%. Os experimentos foram realizados de acordo com o guia de cuidados e usos de animais de laboratrio do Departamento

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Tabela 1. Efeitos da administrao da sulpirida sobre a densidade de receptores D2 em corpo estriado de ratos jovens e velhos tratados durante 7, 15 e 30 dias e sacrificados 24 h aps o ltimo tratamento
Tratamento Binding de [3H]-espiroperidol (fmol/mg de protena) Ratos Jovens 7 dias Controle Sulpirida 15 dias Controle Sulpirida 30 dias Controle Sulpirida 370,7+16,1(05) 315,8+44,1(06) 329,2+35,7(05) 349,9+33,5(04) 383,9+21,5(06) 381,5+41,2(05) 330,7+15,4(06) 276,9+11,2(06)* 427,9+36,9(06) 425,8+24,1(06) 293,5+14,4(06) 268,8+11,9(05) Ratos Velhos

Os nmeros representam mdia + E.P.M. de animais tratados com sulpirida (100 mg/Kg, v.o.). Em parnteses o nmero de animais por grupo. O binding dopaminrgico foi realizado com 3H-espiroperidol e os resultados expressos em fmol/mg de protena. Em parnteses, o nmero de animais por grupo. *p<0.05 (controle versus sulpirida)- ANOVA e teste de Fisher como teste post hoc.

de Sade e Servios Humanos dos Estados Unidos da Amrica. A densidade de RD2 foi determinada atravs de ensaio de binding de acordo com o mtodo de Kessler et al. (1991), utilizando o ligante especfico [3H]-espiroperidol (109 Ci/mmol), um antagonista dopaminrgico que possui alta afinidade pelos receptores D2, possuindo tambm afinidade, embora em menor grau, pelos receptores serotoninrgicos do tipo 5HT2. Para bloquear os receptores serotoninrgicos, os homogenatos (60-120 g de protena) foram incubados em tampo de Tris-HCl (50 M, pH 7,4), na presena de 10 M de mianserina (Organon, Brasil) e 5 M de dopamina para bloquear os receptores dopaminrgicos. Em seguida o ligante [3H]-espiroperidol foi adicionado em concentrao que variava de 0,102 a 7,14 nM. O volume final do ensaio foi de 0,2 mL. A reao foi terminada por filtrao a vcuo em filtros GF/B Whatman utilizando aparelho de filtrao. A radioatividade foi medida em um contador de cintilao lquida Beckman LS-6500 com uma

eficincia de 68%. A ligao especfica foi calculada como a diferena entre a ligao total e a ligao no especfica feita na presena da dopamina. Os resultados foram expressos em fmol/mg de protena. A protena foi determinada segundo o mtodo de Lowry et al. (1951), utilizando-se albumina srica bovina como padro. Para anlise estatstica foi utilizada a ANOVA e teste de Fisher como teste post hoc (comparando trs ou mais grupos) e teste t de Student (comparao entre dois grupos). As diferenas foram consideradas estatisticamente significantes para p < 0,05. Resultados Nenhuma alterao nos nveis de receptores dopaminrgicos D2 foi observada em ratos jovens em relao ao controle aps tratamento com sulpirida durante 7, 15 ou 30 dias e sacrificados aps 24 h da ltima administrao. A densidade de receptores dopaminrgicos D2-smile no corpo estriado de ratos velhos aps tratamento com sulpirida (100 mg/kg, v.o.) tambm no apresentou nenhuma alterao significativa com relao aos controles, exceto aps o tratamento de 15 dias onde uma downregulation dos receptores dopaminrgicos foi observada (Tabela 1). Diminuio da densidade de receptores dopaminrgicos D2 foi observada no grupo controle dos animais velhos no stimo [t(10)=3,393; p<0,0034] e dcimo quinto [t(10)= 2,012; p=0,0360]
500
fmol/mg de protena

Jovem Velho

400 300 200 100 0 7d 15 d Tratamento 30 d

Figura 1. Comparao da densidade de receptores D2 entre controles de ratos jovens e velhos.

Os animais foram tratados com salina 0,9% durante 7, 15 ou 30 dias e sacrificados 24 h aps a ltima administrao. O binding dopaminrgico foi realizado no corpo estriado com 3H-espiroperidol e os resultados expressos em fmol/mg de protena. * p<0,05 significativo no teste tde Student

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dia de tratamento quando comparado ao controle dos animais jovens (Figura 1). Discusso A ausncia de efeito observado aps o tratamento com sulpirida em trs diferentes tempos de tratamento (7, 15 e 30 dias) indica que nas condies estudadas, a sulpirida, neurolptico atpico, no foi capaz de alterar a densidade dos receptores dopaminrgicos D2 em corpo estriado de ratos jovens. Rupniak et al. (1985), trabalhando com ratos Wistar jovens, demonstraram que sulpirida (112-126 mg/Kg/dia,v.o.), em corpo estriado, no alterou os receptores D2 aps uma semana de tratamento. Outros autores tambm corroboram os dados do presente trabalho (Bannet et al., 1980; Ryan-Jastrow and Gnegy, 1989; Parson et al., 1995). O efeito inicial dos neurolpticos consiste em bloqueio dos receptores D2, enquanto que o efeito tardio uma upregulation (Rang et al., 2007). Entretanto, o mecanismo de ao exato da sulpirida no est bem elucidado. Nakazato et al. (1998) mostraram que a sulpirida pode causar um aumento da liberao de serotonina em corpo estriado de ratos e esse efeito parece envolver a regulao de outros neurotransmissores como o cido gama-aminobutrico (GABA), dopamina e acetilcolina. Jaworski et al. (2001) tambm sugerem que o mecanismo de ao da sulpirida seja um bloqueio de receptores dopaminrgicos pr-sinpticos com conseqente aumento de liberao de dopamina. Uma diminuio da densidade de receptor dopaminrgico D2 foi observada apenas em animais velhos aps 15 dias de tratamento com sulpirida. Esse resultado pode sugerir que, em animais velhos, a sulpirida pode apresentar efeitos adaptativos que podem ser influenciados pelo tempo de tratamento. Pode-se tambm admitir que o bloqueio observado com a sulpirida seja decorrente de uma maior sensibilidade aparente em ratos velhos em relao aos ratos jovens.

De maneira geral, neste trabalho, foi observada uma diminuio na densidade de receptores D2 estriatais em grupos controles de ratos velhos, quando comparado com controles de ratos jovens. H diversos relatos, na literatura, sugerindo que as concentraes de receptores D2 esto diminudas com a idade em vrias espcies, incluindo a humana (Roth & Joseph, 1994; Harada et al., 2002; Reeves et al., 2002). Roth & Joseph (1994) sugerem que dois mecanismos sejam responsveis por essa diminuio dos RD2 com a idade: a perda de neurnios que contm receptores e uma reduo na taxa de sntese desses receptores. Em suma, pode-se afirmar que a sulpirida apresentou poucos efeitos em receptores dopaminrgico D2 em corpo estriado de ratos. Isso parece ser devido a sua ao seletiva por neurnios dopaminrgicos no sistema mesolmbico e pode justificar seus efeitos como um neurolptico atpico, com baixos efeitos colaterais extrapiramidais. Segundo Hemsley & Crocker (1999) efeito colateral como rigidez muscular pode estar relacionado com alterao de receptores dopaminrgicos no corpo estriado. Uma outra vantagem quanto ao uso clnico da sulpirida a sua ao nas formas negativas da esquizofrenia (Mauri et al., 1994; Lidow et al., 1998). Pode-se concluir com este trabalho que a administrao de sulpirida em diferentes dias de administrao, nos dois grupos estudados, no induziu alterao na densidade de receptores D2smile em corpo estriado de ratos jovens e velhos, exceto pela presena de uma downregulation aps tratamento de 15 dias em animais velhos. Em geral, a densidade de receptores D2-smile foi maior nos grupos controle de animais jovens comparados aos de animais velhos, indicando que nesses animais os receptores sofrem um processo de degenerao em funo da idade.

Agradecimentos Ao CNPq e FUNCAP pelo suporte financeiro.

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Abstract Introduction: Sulpiride (sulp) is an atypical neuroleptic drug used as an antipsychotic. The objective of this work was to verify the effects of sulpiride after treating during different days on D2-like dopaminergic receptors in corpus striatum of young and old rats. Materials and Methods: Wistar male rats (180-200 g) were treated with sulpiride (100 mg/Kg, p.o.) once a day during 7, 15 and 30 days and sacrificed 24 hours after the last treatment. The D2 receptors density was determined by binding essays in rats corpus striatum using [3H]-spiperone radioligand. Results: No alteration was found in number of dopaminergic D2 receptors in young and old rats, except for a decrease of 17% in D2 receptor concentration in old rats after 15 days of treatment. Conclusion: The receptors density was smaller in old rats as compared to young ones, suggesting degeneration in receptors related to age. Key-words: receptors; dopamine; sulpiride; corpus striatum.

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