Avaliao da atividade antioxidante dos compostos fenlicos naturalmente presentes em subprodutos do pseudofruto de caju (Anacardium occidentale L.

)
Evaluation of the Antioxidant Activity of Phenolic Compounds Naturally Contained in By-products of the Cashew Apple (Anacardium occidentale L.)

Priscila Regina Bolelli BROINIZI1, Elma Regina Silva de ANDRADE-WARTHA1, Ana Mara de Oliveira e SILVA1, Alxis Jess Vidal NOVOA3, Rosngela Pavan TORRES1, Henriette Monteiro Cordeiro AZEREDO2, Ricardo Elesbo ALVES2, Jorge MANCINI-FILHO1* Resumo
O presente trabalho teve como proposta avaliar a capacidade antioxidante do bagao e do extrato bruto concentrado (EBC) do pednculo de caju, tendo em vista o seu aproveitamento. O potencial antioxidante dos extratos aquoso (EAq) e alcolico (EAlc) e das fraes de cidos fenlicos livres (AFL) e estericadas (solvel AFS e insolvel AFI) desses subprodutos do pednculo de caju clone CCP-76 foi avaliado em sistema -caroteno/cido linolico, pelo teste de varredura de radical livre [2,2 difenil-1-pricril-hidrazil (DPPH)] e de Rancimat. Alm do mais, o contedo de fenlicos totais e o perl de cidos fenlicos foram determinados usando-se o reagente de Folin-Ciocateau e por cromatograa gasosa, respectivamente. O EAq e a frao AFL dos subprodutos apresentaram o maior contedo de fenlicos. As fraes de cidos fenlicos exibiram expressiva atividade antioxidante, superior aos extratos estudados nos sistemas -caroteno e DPPH. Entretanto no teste Rancimat, os extratos apresentaram maior proteo oxidao em relao s fraes e ao BHT. Nas fraes foram identicados os cidos glico, ferlico, cafico, protocatecuico, qunico, cinmico, gentssico, p-cumrico e saliclico, os quais lhes conferem o potencial antioxidante. Estes resultados caracterizaram in vitro o potencial antioxidante do bagao e do EBC do pednculo de caju clone CCP-76. Palavras-chave: pseudofruto de caju; cidos fenlicos; atividade antioxidante; sistema modelo -caroteno/cido linolico; DPPH; Rancimat.

Abstract
This study aimed to determine the antioxidant capacity of cashew apple pulp and raw concentrated extract. The antioxidant potential of aqueous (EAq) and alcoholic (EAlc) extracts and of free phenolic acids (FPA) and esteried (soluble SPA and insoluble IPA) fractions of the by-products of the cashew apple clone CCP-76 were evaluated in a -carotene-linoleate system by the free radical [2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)] scavenging assay and the Rancimat test. In addition, the total phenolic content and phenolic acid profile were determined using Folin-Ciocateau reagent and gas chromatography, respectively. The EAq and the FPA fraction of the by-products showed the highest phenolic content. The phenolic acid fractions generally displayed stronger antioxidant activity than the extracts tested with the -carotene-linoleate and DPPH systems. However, in the Rancimat test, the extracts showed higher antioxidant activity than the fractions and BHT. Nine phenolic acids (gallic, ferulic, caffeic, protocatechuic, quinic, cinnamic, gentisic, p-coumaric and salicylic acids), which give the fractions their antioxidant potential, were identied and quantied (both free and esteried forms). These results characterized the in vitro antioxidant capacity of the pulp and raw concentrated extract of the cashew apple clone CCP-76. Keywords: cashew apple; phenolic acids; antioxidant activity; -carotene-linoleate system; DPPH; Rancimat assay.

1 Introduo
Pesquisas envolvendo compostos antioxidantes oriundos de fontes naturais tm sido desenvolvidas em diferentes centros de estudos devido a sua importncia na preveno do desencadeamento das reaes oxidativas, tanto nos alimentos como no organismo animal. Os antioxidantes podem agir retardando ou prevenindo a oxidao do substrato envolvido nos processos oxidativos impedindo a formao de radicais livres9. No sculo passado, a partir dos anos 80, deu-se o incio s pesquisas com antioxidantes naturais visando substituio total ou parcial dos antioxidantes sintticos, aos quais se atribuem efeitos deletrios ao organismo animal quando utilizados em doses elevadas7. Alm dos possveis riscos que o uso irregular e/ou indiscriminado dos antioxidantes sintticos pode acarretar ao homem, soma-se a rejeio generalizada dos aditivos alimentares sintticos. nfase tem sido dada identicao e puricao de novos compostos com atividade antioxidante, oriundos de fontes naturais, que possam agir sozinhos ou sinergicamente com outros aditivos, como uma forma de prevenir a deteriorao oxidativa de alimentos e restringir a utilizao dos antioxidantes sintticos24. Frutas e outros vegetais contm substncias antioxidantes distintas, cujas atividades tm sido bem comprovadas nos ltimos anos. A presena de compostos fenlicos, tais como avonides, cidos fenlicos, antiocianinas, alm dos j conhecidos; vitaminas C, E e carotenides contribuem para os efeitos bencos destes alimentos1,25. Somando-se a isto, estudos tm demonstrado que polifenis naturais possuem efeitos signicativos na reduo do cncer, e evidncias epidemiolgicas demonstram correlao inversa entre doenas cardiovasculares e consumo de alimentos fonte de substncias fenlicas, possivelmente por suas propriedades antioxidantes12,22.

Recebido para publicao em 3/5/2007 Aceito para publicao em 30/7/2007 (002475) 1 Departamento de Alimentos e Nutrio Experimental, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo USP, So Paulo - SP, Brasil, E-mail: jmancini@usp.br 2 Centro Nacional de Pesquisa de Agroindstria Tropical, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria EMBRAPA, Fortaleza - CE, Brasil 3 Departamento de Bioqumica, Facultad de Biologia, Universidad de la Habana, Havana, Cuba *A quem a correspondncia deve ser enviada

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No grande grupo dos compostos fenlicos, os avonides e os cidos fenlicos so os que mais se destacam e, so considerados os antioxidantes fenlicos mais comuns de fontes naturais. Estas substncias apresentam-se amplamente distribudas no reino vegetal; sendo, desta maneira, encontradas em todas as frutas e outros vegetais12. O caju (Anacardium occidentale L.) um fruto tpico do nordeste brasileiro e cada vez mais o seu cultivo adquire maior importncia socioeconmica4. Do total produzido anualmente na regio Nordeste, 15% aproveitado para a fabricao do suco. O restante destinado produo da castanha de caju. Nos dois casos, o bagao descartado. Dessa forma, pesquisas na Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria (EMBRAPA) esto sendo realizadas no sentido de desenvolver formas de utilizao desse bagao como, por exemplo, farinha para formulao de pes e biscoitos e na composio de rao animal. Assim, pode-se amenizar o desperdcio e aproveitar as sobras nutritivas. O presente estudo teve como objetivo investigar os constituintes fenlicos, em particular os cidos fenlicos, em subprodutos (bagao e extrato bruto concentrado) do pednculo de caju e avaliar sua atividade antioxidante por meio da capacidade de seqestro do radical DPPH e pela inibio da oxidao lipdica em sistema modelo -caroteno e em teste de Rancimat.

Pednculo do caju

Prensagem Prensa tipo Expeller

Bagao (Congelado por 4 dias)

Suco

Macerao em gua 1:1 (1 hora) Filtrado tamis (0,3 mm)

Prensagem Prensa tipo Expeller

Extrato bruto Concentrado rotaevaporador (50 C) 20% do volume inicial

Bagao final

2 Material e mtodos
2.1 Material
As amostras de pednculo de caju CCP-76 foram provenientes da Estao Experimental de Pacajus/CE - EMBRAPA, as quais foram submetidas a um tratamento especial, conforme protocolo elaborado pela EMBRAPA (Figura 1), e produzidos o bagao e o extrato bruto concentrado (EBC) utilizados neste estudo. Todos os reagentes e solventes utilizados foram de grau analtico. Os padres de cido saliclico, trans-cinmico, phidroxibenzico, vanlico, gentssico, protocatecuico, qunico, o-cumrico, p-cumrico, glico, ferlico, cafico, sinptico, clorognico, (cido 5-O-cafeoilqunico), cido linolico, hidroxitolueno de butila (BHT), -caroteno, DPPH (2,2-difenil1 picrilhidrazila), monopalmitato de polioxietilenosorbitana (Tween 40) e ster metila de cido heptadecanico foram obtidos da Sigma Chemical Co. (St. Louis, EUA). O reativo de Folin Ciocalteau, proveniente da Merck (Darmstadt, Alemanha).

Extrato concentrado Figura 1. Etapas do processamento para obteno do bagao e extrato bruto concentrado (EBC) do pednculo de caju.

recuperado a cada extrao e usado para obteno dos extratos subseqentes, usando como solventes: lcool etlico (extrato alcolico - EAlc) e gua destilada (extrato aquoso - EAq), na mesma proporo inicial e seguindo o mesmo procedimento.

Determinao do contedo de fenlicos totais

O contedo total de fenlicos foi medido em triplicata para cada extrato conforme o mtodo de SWAIN e HILLS26 usando o reagente Folin-Ciocalteau e padro de cido glico. Os resultados foram expressos em mg de equivalentes de cido glico/g de amostra.

Extrao, hidrlise e identicao e quanticao dos cidos fenlicos

Os cidos fenlicos livres e estericados foram identicados por cromatografia a gs (CG) empregando a metodologia descrita por DABROWSKI e SOSULSKI5, com modicaes realizadas por MOREIRA e MANCINI-FILHO18. Um grama de amostra liolizada foi extrado 6 vezes em Ultra-Turrax (modelo DI 25 basic, IKA, Staufen, Alemanha) com 20 mL de tetrahidrofurano (THF) temperatura ambiente. As fraes obtidas foram combinadas e evaporadas em evaporador rotativo (B525, Micronal, So Paulo, Brasil) sob vcuo, a 30 C, o concentrado foi ressuspenso em 5 mL de metanol. Esta frao foi analisada para os cidos fenlicos livres (AFL). O resduo restante foi novamente extrado 6 vezes em Ultra-Turrax com soluo de metanol:acetona: gua (1:1:1) temperatura ambiente. As

2.2 Mtodos
Preparo dos extratos alcolico e aquoso
Os compostos fenlicos presentes tanto no bagao quanto no EBC foram extrados sequencialmente por solventes de diferentes polaridades segundo mtodo descrito por KRYGIER etal.13 e modificado por MOREIRA e MANCINI-FILHO18. Foi feita extrao com ter etlico na proporo de 1:5 (g da amostra: solvente) durante 1 hora em agitador magntico (modelo RO15 power, IKA, Staufen, Alemanha) temperatura ambiente. A soluo foi ltrada a vcuo em funil de Bchner e o resduo foi

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Atividade antioxidante do pseudofruto de caju

fraes combinadas foram evaporadas em evaporador rotativo sob vcuo a 40 C at a fase aquosa. Posteriormente, a suspenso aquosa e o resduo foram hidrolisados com NaOH 4N (mesmo volume e 20 mL, respectivamente) por 4 horas sob uxo de nitrognio e temperatura ambiente. Os sobrenadantes foram acidicados com HCl 6N a pH 2 e extrados 6 vezes com ter etlico: acetato de etila: THF (1:1:1). Estas fraes foram combinadas e evaporadas em evaporador rotativo sob vcuo a 40C e, em seguida, ressuspensas em 5 mL de metanol, as quais foram analisadas para as fraes de cidos fenlicos livres de steres solveis (AFS) e insolveis (AFI), provenientes do sobrenadante aquoso e do resduo, respectivamente. Os cidos fenlicos liberados das fraes obtidas (0,25mL) foram transferidos para vials contendo 0,1 mL de padro interno (ster metila de cido heptadecanico) e o metanol foi evaporado com nitrognio antes do processo de sililao realizado pela adio de BSA (0,2 mL). A soluo foi incubada a 60 C por 30 minutos, obtendo-se as amostras para serem injetadas no cromatgrafo.

SPECTRONIC 20, GENESYSTM, Rochester, USA). Considerouse como oxidao total (100%) os tubos contendo apenas o substrato sem o antioxidante e os clculos foram obtidos por meio de correlao a partir desse valor. A ecincia do antioxidante foi tambm expressa a partir dos fatores cinticos F1 e F2, de acordo com YANISHILIEVAe MARINOVA27, calculados por meio das curvas cinticas de oxidao. Na parte inicial da curva (perodo entre 15 e 45 minutos de incubao) mensurada a ecincia do antioxidante em bloquear a reao em cadeia (F1) por meio de interao com os radicais perxidos (Equao 1): F1 tg amostra
(15 45) /tg

controle 15 45

(1)

Condies cromatogrca e equipamento

As determinaes cromatogrficas foram realizadas em cromatgrafo a gs (modelo GC 17 A, Shimadzu, Kyoto, Japo), equipado com detector de ionizao de chama. A separao foi feita em coluna capilar de slica fundida DB5 (30mx0,25mmx0,25 m) com a fase estacionria composta por 5% de fenil e 95% de dimetilpolisiloxano (J & W Scientic, USA). O gs de arraste foi hlio com vazo de 1 mL.min1; modo split (split ratio 1:50), sendo 300 C a temperatura da interface, com o seguinte gradiente de temperatura da coluna: 150 C (3minutos); 5 C.min1 at 300 C (3 minutos) e volume de injeo 1 L. As reas dos picos foram calculadas por um integrador modelo GC Wortkstation Class-GC-10 (Shimadzu, Kyoto, Japo). Os cidos fenlicos foram identicados comparando os tempos de reteno com os dos padres (quando disponveis) e baseando-se no padro interno.

No intervalo nal da curva (perodo entre 75 e 105 minutos), infere-se a possibilidade do antioxidante participar de outras reaes durante o processo oxidativo, como por exemplo, decomposio dos hidroperxidos com oxignio, produzindo espcies radicalares que aceleram a oxidao no sistema (F2). Estas medies foram utilizadas para estabelecer uma relao entre as tangentes das curvas cinticas das amostras e do controle, a qual expressa a ecincia do antioxidante (Equao 2): F2 tg amostra 75 105 /tg controle (75 105) (2)

Atividade antioxidante em sistema de varredura de radicais livres (DPPH)

A atividade antioxidante dos extratos e das fraes, tanto do bagao liolizado quanto do EBC, foi tambm avaliada pelo ensaio DPPH segundo BLOIS2 e BRAND-WILLIANS et al.3, que tem por base a reduo do radical DPPH. Ao fixar um H, re movido do antioxidante em estudo, observa-se uma diminuio da absorbncia, o que permite calcular, aps o estabelecimento do equilbrio da reao, a quantidade de antioxidante gasta para reduzir 50% o radical DPPH. Uma alquota de 0,5 mL de amostra, contendo diferentes concentraes de extratos ou fraes, foi adicionada a 1,5 mL de soluo metanlica de DPPH 6 x 105 mol.L1. Todas as determinaes foram acompanhadas de um controle sem as amostras antioxidantes. A reduo do radical DPPH foi medida a 515 nm em espectro fotmetro (SPECTRONIC 20 GENESYSTM, Rochester, USA) logo aps 30minutos de repouso. O decrscimo nos valores de densidade tica das amostras foi correlacionado aos do controle e estabelecida a percentagem de descolorao do radical DPPH, isto , o seqestro de radicais livres, expressa pela Equao 3: % de proteo

Atividade antioxidante em sistema modelo -Caroteno-cido linolico

A capacidade antioxidante dos extratos e das fraes foi avaliada em sistema modelo de co-oxidao de substratos: -caroteno/cido linolico, mtodo desenvolvido por MARCO15 e modificado por MILLER17. Para o preparo do meio emulsionado, adicionou-se 20 L de soluo -caroteno (20 mg.mL1 de clorofrmio), 40 L de cido linolico, 400 mg de emulsicador Tween 40 e 1 mL de clorofrmio. Posteriormente, o clorofrmio foi totalmente evaporado com nitrognio. Em seguida, adicionou-se 100 mL de gua, previamente saturada com oxignio num perodo de 30 minutos, e agitou-se vigorosamente. Este meio apresentou-se lmpido com absorbncia entre 0,6 e 0,7 em 470 nm. Alquotas de 5 mL da emulso foram transferidas para tubos espectrofotomtricos contendo os extratos (EAq e EAlc) ou as fraes (AFL, AFS e AFI) em diferentes concentraes. O BHT foi utilizado como padro-referncia. Os valores da densidade tica foram obtidos no perodo de 120minutos a intervalos de 15 minutos, enquanto as amostras eram mantidas em banho-maria a 50 C, em espectrofotmetro (modelo

Abscontrole

Absamostra / Abscontrole

(3)

Atividade antioxidante em modelo lipdico (Rancimat)

O princpio da determinao da condutividade no teste Rancimat se baseia na resistncia da medio da soluo dos cidos volteis recuperados16. A capacidade antioxidante dos extratos e das fraes do bagao e do EBC do pednculo de caju sobre o leo vegetal

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foi determinada pela medio do tempo de induo para oxidao do leo de soja comercial sem antioxidante (fornecido pela Cargill Agrcola S.A.) atravs do analisador Rancimat (modelo 743, Metrohm Ltd., Herisau, Sua) com o software PC 743Rancimat 1.0. Amostras de 5 g do leo contendo EAq e EAlc e/ou fraes de cidos fenlicos do bagao e do EBC nas concentraes de 100 ppm foram submetidas oxidao a 110C (uxo de oxignio 20 L/h). Todos foram comparados ao BHT nas mesmas concentraes. Os perodos de induo - PI (h) foram registrados automaticamente. Os fatores de proteo (FP) foram calculados de acordo com a frmula (Equao 4)8: FP PI amostra / PI controle (4)

Tabela 1. Contedo nas fraes de cidos fenlicos livres (AFL) e estericadas solvel (AFS) e insolvel (AFI) de bagao e EBC de pednculo de cajua.
Frao de cidos fenlicos Saliclico Cinmico Gentssico Protocatecuico Qunico p-cumrico Glico Ferlico Cafico
a

Bagao AFL AFS 1270 984 0,1 0,1 0,2 0,03 20 0,1 0,04 36 0,02 0,05 0,1 0,04

AFI 610 0,01 0,1 0,03 0,04

EBC AFL AFS 1660 741 19,6 0,2 38,3 0,1 0,05 145,2 0,1 31,4 33,6 0,15 0,05 0,05 0,05

Os resultados esto expressos como mdia e mg.g 1.

Anlise estatstica
Os resultados foram expressos como mdia desvio padro (n = 3) para cada extrato e frao. O tratamento estatstico dos dados se deu pela anlise de varincia (ANOVA) e Teste de Tukey, utilizando o software Prisma 3.0 ( GraphPad). O valor de p < 0,05 foi considerado estatisticamente signicativo.

representada na Figura 2. O BHT (0,01 mg) exibiu um potencial antioxidante elevado (83,5%). No entanto, como se pode observar nos resultados, as fraes de cidos fenlicos se mostraram mais efetivas do que o antioxidante sinttico e os extratos (Tabelas 2 e 3).
0,7 0,6 Absorbncia 470 nm 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 0 15 30 45 60 75 Tempo (minutos) BHT EAq EBC AFS Bagao AFI Bagao 90 105 120

3 Resultados e discusso
3.1 Contedo de fenlicos totais
Os teores de fenlicos totais para o EAq foram de 2,8e10,4mg de cido glico/g de bagao e de EBC, respectivamente. Enquanto que para o EAlc, estes contedos foram de 2,3 e 0,3 mg de cido glico/g tambm de bagao e de EBC, respectivamente. Estes valores foram signicativamente diferentes (p<0,05) entre si. Tanto o bagao quanto o EBC apresentaram contedo de compostos fenlicos elevados. Analisando polpa de vrias frutas, HASSIMOTTO et al.10 quanticaram um teor de 2,34 mg de catequina/g para a polpa de caju, valor prximo daquele encontrado no bagao mesmo aps o tratamento para a sua obteno.

3.2 cidos fenlicos

Os principais cidos fenlicos nas fraes AFL, AFS e AFI do bagao e do EBC do pednculo de caju encontram-se na Tabela 1. Um total de nove cidos fenlicos foram identicados, dos quais quatro foram derivados hidroxilados de cido benzico (glico, protocatecuico, gentssico e saliclico) e cinco derivados de cido cinmico (cafico, ferlico, cinmico, qunico e p-cumrico). Alm disso, outros compostos no identicados se apresentaram em todas as fraes. Dentre os cidos fenlicos identicados, o cido saliclico foi o mais abundante em todas as fraes. Nas fraes AFL de ambos os subprodutos do pednculo, alm do cido salcilico, o pcumrico encontra-se presente em expressivas concentraes. O cido glico foi o segundo predominante nas fraes AFS das amostras analisadas.

Controle EAq Bagao EAlc EBC

EAlc Bagao AFL Bagao AFL EBC AFS EBC

Figura 2. Atividade antioxidante dos extratos e fraes de cidos fenlicos do bagao e extrato bruto concentrado (EBC) do pednculo de caju em sistema modelo -caroteno/cido linolico.

3.3 Atividade antioxidante em sistema modelo -caroteno/cido linolico

A atividade antioxidante das fraes e dos extratos mensurada em sistema modelo -caroteno/cido linolico est

Os extratos provenientes do bagao inibiram a oxidao do -caroteno na ordem de 30% na menor concentrao (2,5mg), sendo esta o limite de ecincia da capacidade antioxidante para o EAq do bagao (Tabela 2). Vale salientar que o pednculo de caju clone CCP76, submetido a um tratamento especial, manteve a atividade antioxidante em patamares de deteco analtica. Sendo assim, o pednculo de caju alm de possuir elevado contedo de compostos fenlicos totais, ainda demonstra capacidade antioxidante em sistema de co-oxidao -caroteno/cido linolico. As fraes de cidos fenlicos (AFL e AFS) apresentaram elevada atividade antioxidante com valores superiores ao

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Atividade antioxidante do pseudofruto de caju

Tabela 2. Atividade antioxidante dos extratos aquoso (EAq) e alcolico (EAlc) de bagao e de EBC de pednculo de cajua.
Extratos EAq Bagao EAlc Bagao EAq EBC EAlc EBC
a

Inibio da oxidao em modelo sistema -caroteno (%) 2,5 mg 5 mg 10 mg 33 3,2b 34 1,6b 5,8 0,01c 7,6 2,7c 33 5,2b 32 7,9b 12 0,1c 11 3,3c 17 0,4b 50 4,2c 17 0,4b 27 6,4d

Atividade de varredura do radical DPPH (%) 0,125 mg 54 4,2b 57 1,3b 65 5,4c 36 3,2d 0,25 mg 90 0,2b 93 2,4c 88 0,6b 65 1,0d 0,5 mg 88 0,2a 95 0,3b 90 0,2c 93 0,1d

Os resultados esto expressos como mdia desvio padro (n = 3); e Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem estatisticamente (p > 0,05).

Tabela 3. Atividade antioxidante das fraes de cidos fenlicos livre (AFL) e estericadas solvel (AFS) e insolvel (AFI) de bagao e de EBC de pednculo de cajua.
Fraes AFL Bagao AFS Bagao AFI Bagao AFL EBC AFS EBC
a

Inibio da oxidao em modelo sistema -caroteno (%) 50 g 70 0,3b 73 2,0b 37 6,1 70 3,5 71 1,0
c b b

Atividade de varredura do radical DPPH (%) 12,5 g 40 0,6b 94 0,1c 51 2,9 42 0,4 40 1,3
d b b

100 g 75 0,6b 85 2,3c 49 6,4 80 1,7 82 1,5

d bc bc

250 g 80 0,7b 90 1,1c 62 5,5 86 1,9 89 0,6

d bc ec

25 g 56 5,7b 93 1,2c 87 0,9 58 0,1 58 0,3

cd b b

50 g 77 0,3a 93 0,2b 90 0,6c 66 0,3d 82 0,2e

Os resultados esto expressos como mdia desvio padro (n = 3). Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferem estatisticamente (p > 0,05).

BHT, o que caracteriza o excelente potencial antioxidante dos cidos fenlicos isolados nestas fraes (Tabela 3), os quais so representados pelos cidos glico, p-cumrico, protocatecuico, ferlico, cafico cinmico, qunico, gentssico e saliclico ( Tabela 1). Os derivados de cidos cinmicos, dentre eles, cido cafico e protocatecuico, e derivados de cidos benzicos, cido glico, demonstraram grande potencial antioxidante em ensaios utilizando ons de Cu2+ para a catlise da LDL oxidada20. Somando-se a isto, destaca-se a propriedade do cido ferlico como seqestrante de radicais livres, at mesmo em concentraes muito reduzidas11, o que d subsdio para supor que a elevada atividade antioxidante em todas as fraes de cidos fenlicos dos distintos subprodutos estaria tambm correlacionada com a presena do cido ferlico em todas as fraes de cidos fenlicos, presentes como trao. O cido glico tambm possui um potencial antioxidante bem caracterizado. Em um estudo realizado em ratos com senescncia acelerada e suplementados com cido glico, vericou-se que, alm de restabelecer a atividade das enzimas antioxidantes CAT e GPx, houve reduo do nvel aumentado de peroxidao lipdica, levando diminuio signicativa da quantidade de substncias reativas ao cido tiobarbitrico no fgado, crebro e rim14. MOREIRA e MANCINI-FILHO19 identicaram numa infuso, a partir de uma mistura de especiarias (mostarda, canela e erva-doce) os cidos fenlico saliclico e cafico. Este ch base de ervas apresentou um percentual de inibio da oxidao signicativo em torno de 90%. Conquanto, destaca-se que a elevada capacidade antioxidante das fraes no se deve apenas a um cido fenlico, mas possivelmente a associao deles, a qual conduz a uma potencializao desta atividade. Complementando a avaliao da ao antioxidante in vitro dos extratos e fraes, foi vericada a sua ecincia pela anlise cintica das curvas traadas pela descolorao do -caroteno versus tempo de incubao (Figura 2) estabelecido pelo clculo dos fatores F1 (estabilizao) e F2 (proteo). De acordo com os resultados dos extratos (Tabela 4) e das fraes (Tabela 5), os valores de F1 indicam uma grande capacidade de bloqueio

Tabela 4. Fatores cinticos caracterizando a inibio da oxidao do sistema -caroteno/cido linolico pelos extratos aquoso e alcolico do bagao e de EBC do pednculo de cajua.
2,5 mg F1 F2 0,4 3,0 0,4 2,9 Fatores cinticos 5 mg F1 F2 0,6 2,5 0,4 2,5 10 mg F1 F2 0,5 3,0 0,3 1,5

EAq Bagao EAlc Bagao

a

F1 < 1, indica que os antioxidantes so capazes de inibir os radicais livres durante o perodo de induo; F2 < 1, indica que os antioxidantes podem regenerar o radical antioxidante formado; e F1 e F1 1 indicam atividade pr-oxidante.

Tabela 5. Fatores cinticos caracterizando a inibio da oxidao do sistema -caroteno/cido linolico pelas fraes de cidos fenlicos do bagao e de EBC do pednculo de cajua.
Fatores cinticos 50 g BHT AFL Bagao AFS Bagao AFI Bagao AFL EBC AFS EBC
a

F1 0,5 0,1 0,04 0,03 0,2 0,2

F2 3,1 0,7 0,5 5,6 4,4 1,2

100 g F1 F2 0,3 2,1 0,03 0,3 0,01 0,3 0,04 2,0 0,1 1,7 0,1 0,9

250 g F1 F2 0,2 3,1 0,2 0,8 0,01 0,1 0,14 1,4 0,05 1,5 0,05 0,7

F1 < 1, indica que os antioxidantes so capazes de inibir os radicais livres durante o perodo de induo; F2 < 1, indica que os antioxidantes podem regenerar o radical antioxidante formado; e F1 e F1 1 indicam atividade pr-oxidante.

da formao inicial de radicais livres in vitro. Nesta fase inicial do processo de oxidao, a ecincia das fraes foi melhor do que a do BHT em todas as concentraes testadas. Para a fase de propagao, vericada pelos valores de F2, apenas as fraes AFL e AFS do bagao e AFS do EBC demonstraram ecincia antioxidante.

3.4 Atividade antioxidante em sistema de varredura de radical DPPH

A capacidade de seqestrar o radical DPPH (expressa em percentual de inibio) exibida pelos extratos e fraes

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do bagao e EBC do pednculo de caju CCP-76 encontra-se nas Tabelas 2 e 3. Este mtodo se baseia na transferncia de eltrons de um composto antioxidante para um radical livre, o DPPH, que ao se reduzir perde sua colorao prpura. Desta forma, avalia apenas o poder redutor do antioxidante, que ao doar um eltron se oxida, e por este motivo no detecta substncias pr-oxidantes6. Todos os extratos, diferentemente das fraes, apresentaram comportamento distinto daquele observado no sistema -caroteno/cido linolico, mostrando efetiva atividade de varredura do radical, principalmente na maior concentrao (0,5 mg), com percentuais acima de 88% (Tabela 2). Com base nestes dados, evidencia-se que os compostos bioativos presentes tanto nos extratos como nas fraes podem agir como seqestradores de radicais pela capacidade de atuar como doador de hidrognio24.

4,5. Estes valores corroboraram o potencial antioxidante dos extratos metanlicos e de matria seca de plantas aromticas da Grcia, ricas nestes compostos fenlicos. Analisando o potencial antioxidante do EBC e do bagao do pednculo de caju nos trs sistemas, verica-se que a capacidade antioxidante de compostos fenlicos depende de vrios fatores: que vo desde o sistema de oxidao, grau de glicolisao concentrao e s variveis mensuradas, sugerindo que o potencial antioxidante o resultado da combinao de diferentes compostos existentes nas frutas e outros vegetais. Alm dos estudos dos constituintes qumicos do pednculo do caju, deve-se tambm considerar pesquisas que abranjam outros parmetros como: a absoro, o metabolismo, a excreo e o comportamento em modelos experimentais e humanos.

3.5 Fator de proteo medido pela condutividade em Rancimat

O leo de soja sem antioxidante (controle) oxidado aps 6,5 horas. Contudo, o tempo necessrio para o perodo de induo da oxidao do leo foi maior quando os extratos e o aditivo (BHT) foram adicionados. A capacidade antioxidante (expressa como valores de FP) est ilustrada na Figura 3. Os valores de FP dos extratos EAq e EAlc foram mais elevados (1,2 em ambos) quando comparados ao antioxidante sinttico BHT (1,0) (p < 0,05). A frao AFI foi a que demonstrou menor proteo antioxidante (0,9) no sistema lipdico. As demais fraes no diferiram estatisticamente do BHT (p > 0,05). Frutas tropicais, tais como: manga, mamo, abacate, maracuj, abacaxi, carambola e banana, apresentaram FP acima de 1,1, ou seja, maior do que os antioxidantes sintticos BHT e BHA (em torno de 1,0) valores prximos dos encontrados neste trabalho21. PROESTOS et al.23 examinaram os valores de FP para padres de cidos fenlicos: cidos gentssico, cafico, p -cumrico, vanlico, sirngico, ferlico, p-hidrobenzico (adio de 0,02%) para leo de girassol e vericaram uma mdia de variao de 1,2 a 1,5, excetuando-se o cido glico cuja mdia foi de

4 Concluses
Pode-se identicar a atividade antioxidante nos extratos e nas fraes dos subprodutos do caju (bagao e EBC) por meio de trs diferentes mtodos utilizados. As fraes AFL e estericadas (AFS e AFI) do bagao e do EBC do pednculo de caju demonstraram atividade antioxidante superior aos extratos (EAq e EAlc) e ao BHT. Estes resultados abrem a perspectiva de se ter um melhor aproveitamento dos resduos resultantes do processamento do pednculo de caju.

Agradecimentos
Os autores agradecem EMBRAPA, ao CNPq e FAPESP pelo suporte nanceiro.

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2. 3.

1,4 1,2 Fator de proteo em Rancimat 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 BHT EAq EAlc AFL AFS AFI c b c b,c b,c d

4.

5.

6.

7.

Figura 3. Fator de proteo obtido para leo de soja renado sem antioxidante a partir de extratos aquoso (EAq) e alcolico (EAlc) e de fraes de cidos fenlico livre (AFL) e de estericados (solvel - AFS e insolvel - AFI) comparado a um aditivo alimentcio comum (BHT) em meio lipdico por teste de Rancimat a 110 C.

8.

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Atividade antioxidante do pseudofruto de caju

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