MATERIAL E MTODOS Efeito da citocinina BAP no desenvolvimento de brotaes em embries cultivados in vitro: Frutos no estdio verde-cana , coletados de plantas

adultas de Coffea arabica c.v. Acai Cerrado, foram utilizados como fonte de embries. Aps a coleta, os frutos foram: 1. Desinfestados em cmara de fluxo laminar por meio da imerso em hipoclorito de sdio; 2. Lavados em gua destilada e autoclavada; 3. Foram transferidos para placas de Petri esterilizadas, contendo papel de filtro; 4. Os embries foram imersos em soluo de cido ascrbico por 5 min. 5. Inoculados em tubos de ensaio contendo 15 ml de meio MS (MURASHIGE & SKOOG, 1962); 6. O pH do meio foi ajustado em 5,8 e o meio de cultura foi autoclavado a 121C por 15 minutos; 7. Aps a inoculao, os embries foram transferidos para sala de crescimento a 27 2C e mantidos na intensidade luminosa de 13 mol s-1 m-2 durante 30 dias; 8. Ocorreu a avaliao do comprimento das brotaes e o nmero de folhas formadas. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado com 10 repeties por tratamento, sendo cada repetio constituda por trs embries. As anlises estatsticas foram realizadas atravs de regresso polinomial.

Efeito da auxina AIB no enraizamento in vitro das brotaes obtidas da germinao in vitro de embries: 1. Brotaes, oriundas da cultura de embries (90 dias de cultivo in vitro), foram inoculadas em meio MS; 2. O pH do meio de cultura foi ajustado para 5,8 e o meio foi autoclavado por 20 minutos a 120C; 3. Inoculou-se, em cmara de fluxo laminar, uma brotao em cada tubo; 4. Posteriormente, as brotaes foram mantidas em sala de crescimento, a 251C, durante 30 dias, quando foram avaliados a porcentagem de enraizamento, o nmero mdio de razes por brotao e o comprimento mdio das razes. O delineamento estatstico foi o inteiramente casualizado, com 10 repeties por tratamento, e cada repetio, composta por uma brotao. A anlise estatstica foi realizada por regresso polinomial. Aclimatizao e enraizamento ex vitro: 1. As plntulas para aclimatizao e as brotaes para o enraizamento in vitro obtidas da germinao in vitro de embries, aps 90 dias de cultivo foram transferidas para caixa tipo gerbox contendo vermiculita;

2. Aps a transferncia, as plntulas e as brotaes foram envolvidas por sacos plsticos transparentes e mantidas em sala de crescimento sob temperatura controlada de 251C e sob sombrite 70% por 7 dias; 3. Para proporcionar um aumento gradual da intensidade luminosa, esse sombrite foi substitudo por sombrite 50%, 30% e posteriormente a zero; 4. Aps 7 dias das plntulas sem sombrite (total de 35 dias), a cobertura plstica e o sombrite foram retirados, quando, ento, foram avaliados o percentual de plntulas aclimatizadas e brotaes enraizadas.