UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS UFAM INSTITUTO DE EDUCAO, AGRICULTURA E AMBIENTE IEAA CURSO: LICENCIATURA EM CINCIAS - BIOLOGIA E QUMICA DISCIPLINA:

A: INTRODUO AOS MTODOS CROMATOGRFICOS PROF: ELIANE MERKLEIN

Deteco de Cafena em Cpsulas de Ch Verde atravs da Cromatografia em Camada Delgada

Rafael da Fonseca Prietsch Maria Regina Soares Lopes

Daniel Camilo
Humait/AM 2014

INTRODUO
A planta que caracteriza o verdadeiro ch pertence famlia das Teceas, denominada Camllia sinensis (SCHMITZ, et al., 2005). No Brasil, o arbusto cultivado principalmente na regio do Vale do Ribeira no estado de So Paulo, onde utilizado para fazer ch preto (BLANCO, 2007).
A Camellia sinensis um arbusto de 3-4m de altura, de copa piramidal e densa. Folhas simples, denteadas, pontudas, curtas e pecioladas de 4-7cm de comprimento. Flores de cor branca, regulares, hermafroditas, com corola de cinco ptalas e numerosos estames, aromticas, solitrias ou em grupo de duas ou trs nas axilas foliares. Os frutos so cpsulas com 1-3 sementes (LEON, 1987; LORENZI & MATOS, 2002).

INTRODUO
Existem algumas de Camellia Sinensis disponveis, conforme o mdodo de preparao das suas folhas aps a colheita. Folhas recm coletadas e imediatamente estabilizadas caracterizam-se como ch verde (sem fermentao), quando submetidas fermentao rpida ou prolongada constituem o tipo oolong (parcialmente fermentado) e o ch preto (totalmente fermentado), respectivamente (BELITZ & GROSCH, 1997). O processo fermentativo favoree a oxidao enzimtica dos polifenis presentes no vegetal, conferindo menor adstringncia e cor mais intensa (SIMONETTI, 1990 in DUARTE, MENARIM, 2006).

Popularmente, a Camellia Sinensis tem sido usada em dietas alimentares, pois seus componentes qumicos majoritrios, os flavonides e catequinas apresentam uma srie de atividades biolgicas, como antiinflamatria, antioxidante, quimioprotetora e anticarcinognica (SCHMITZ, et al., 2005).

INTRODUO
A aceitabilidade do ch como bebida depende do gosto e do aroma do produto no momento de seu consumo. Este por sua vez depende da composio original da planta e das mudanas bioqumicas que sofre durante seu processamento. A sua composio qumica caracterizada principalmente pela presena de polifenis que perfazem cerca de 30% do extrato seco total e a partir desses compostos que ocorrem as principais mudanas bioqumicas onde esto os principais princpios benficos sade (CUNHA et al., 2003).

COMPOSIO QUMICA
A composio dos chs refere-se composio das folhas do ch verde ou ch preto, matria-prima para obteno da infuso, sendo que esta pode variar dentro de um limite amplo de acordo com sua fisiologia, idade, condies de cultivo e tipo de processamento. A aceitabilidade do ch como bebida depende do gosto e do aroma do produto no momento de seu consumo. Este, por sua vez, depende da composio original da planta e das mudanas bioqumicas que sofre durante seu processamento, em funo da enzima polifenoloxidase que, embora presente nas folhas, s age sobre os polifenis durante o processo de fabricao, principalmente de ch preto. Embora com compostos diferentes, todos os chs apresentam substncias com poder antioxidante (VARNAN & SUTHERLAND, 1994).

COMPOSIO QUMICA
O ch uma das fontes mais ricas em flavonides. Flavonides so polifenis que ocorrem naturalmente em alimentos de origem vegetal e so comuns em dietas de todo o mundo. So metablitos secundrios de plantas e podem ser subdivididos em seis classes: flavonas, flavanonas, isoflavonas, flavonis, flavanis e antocianinas. Acredita-se que os flavonides presentes em chs fazem deles alimentos funcionais. Os efeitos benficos so geralmente atribudos s catequinas e teaflavinas (MATSUBARA e RODRIGUES, 2008).

COMPOSIO QUMICA
Os constituintes mais importantes de folhas de ch so as catequinas, que perfazem mais de 80% dos polifenis e as teaflavinas, ambas responsveis pela cor e sabor do ch. A enzima polifenoloxidase, da frao protica, catalisa as reaes de escurecimento, a cafena, confere o efeito estimulante da bebida e os compostos volteis, so responsveis pelo aroma. Os minerais contribuem com 5%, fibras com 26%, aminocidos livres com 4%, carboidratos com 7% e lipdios, alm de taninos e cidos fenlicos. A Tabela 1 apresenta a composio do extrato seco (%) das folhas frescas e fermentadas e da infuso de ch (CUNHA et al., 2003).

COMPOSIO QUMICA

CATEQUINAS
As catequinas pertencem a um grupo de polifenis, flavonides, encontrados nas folhas de ch, so compostos incolores, hidrossolveis, que contribuem em cerca de 75% para o amargor e adstringncia do ch verde. As catequinas so classificadas em epicatequina (EC), epicatequina galato (EGCG), epigalocatequina (EGC) que juntas representam 30-50% dos slidos do ch verde e cerca de 10% do ch preto. O teor menor no ch preto, pois o processo de fermentao elimina grande parte destas substncias. O ch verde e o ch preto possuem antioxidantes, mas de tipos diferentes, o ch verde mais rico em catequinas, especialmente o galato de epigalocatequina, enquanto que o ch preto contm uma maior variedade de flavonides. As catequinas do ch verde possuem atividade antioxidante 100 vezes maior do que a Vit.C e 25 vezes maior do que a Vit.E (GRASSI et al., 2008).

CATEQUINAS
No processamento do ch preto as catequinas das folhas sofrem oxidao, o que muito importante para o desenvolvimento de cor e sabor da bebida. A oxidao enzimtica. por ao da enzima catecol oxidase presente nos vacolos das clulas (VARNAN & SUTHERLAND, 1994).

CATEQUINAS

TEAFLAVINAS
As teaflavinas so formadas a partir da oxidao enzimtica das catequinas. So compostos responsveis por parte da qualidade do ch como cor alaranjada e sabor adstringente da infuso de ch preto (MATSUBARA e RODRIGUES, 2008).

TEAFLAVINAS

CAFENA
A cafena um composto que pertence ao grupo dos alcalides. Na sua forma pura a cafena uma substncia cristalina e apresenta um gosto amargo. Entre os efeitos da cafena no organismo humano de salientar a sua ao estimulante do Sistema Nervoso. A folha de ch contm teores normalmente compreendidos entre 2,5 e 5,5% do extrato seco, resultando de grande importncia para o sabor do ch. O teor de cafena varia nas diferentes partes da planta, sendo maior no gomo terminal e primeira folha. Quanto menor a folha de ch, maior a quantidade de cafena. Um copo comum de 180 mg de ch verde contm aproximadamente 130 mg de cafena e ch preto 40 mg. Quanto maior o tempo de infuso em gua do ch verde ou preto, maior a concentrao de cafena. A quantidade de cafena pouco alterada durante o processamento (VARNAN & SUTHERLAND, 1994; VENTURINI FILHO, 2005).

CAFENA
As folhas de ch contm a mesma quantidade de cafena que o caf, com base na matria seca, mas o seu teor torna-se de 20% a 30% menor quando preparadas as infuses, pois so consumidas diludas. A cafena do ch tem um efeito mais suave que a cafena do caf no organismo, porque est ligada a taninos, o que assegura uma liberao suave e prolongada. O ch verde no fermentado tem 1/3 da quantidade de cafena e o ch semi fermentado possui do contedo de cafena quando comparado ao ch fermentado (VARNAN & SUTHERLAND, 1994; VENTURINI FILHO, 2005).

ANLISE DE ALCALODES
(MATERIAL E MTODO)

OBTENO DA AMOSTRA
Cpsulas de ch verde de 500 mg compradas em 5 farmcias de manipulao, foram adquiridas a fim de servirem como material vegetal a ser realizada a prospeco. O material adotado para anlise passou pelo processo de seleo onde foram pesadas 3 alquotas de 1,0 g de material, utilizada para extrao de alcalide.

ANLISE DE ALCALODES
(MATERIAL E MTODO)

EXTRAO
As alquotas obtidas conforme descrito no item anterior foi submetido ao refluxo com 10 ml de gua e 10 ml de cido sulfrico 1N (Merck), por 10 minutos a uma temperatura de 80 C. Os extratos foram filtrados a vcuo, alcalinizado com hidrxido de amnia 6N at atingir pH aproximadamente 10, medido com papel indicador de pH Merck. O extrato aquoso alcalino foi extrado por decantao trs (3) vezes com 10 ml de clorofrmio.

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

A cromatografia de camada delgada (CCD) foi escolhida por dar informaes rpidas e, portanto, aplicada frequentemente para um screening inicial (DRGER, 2002). A identificao qualitativa dos alcalides dos extratos obtidos das cpsulas de ch verde foi realizada atravs de cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC), utilizando-se placas do tipo slica-gel G F254 (20x20) Merck. Os resduos das amostras e os padres de referncia (sigma) foram dissolvidos em metanol Merck para HPLC na proporo (25 metanol e 75 de gua purificada), sendo preparadas conforme a Farmacopia Portuguesa VII (2002).

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

As amostras foram aplicadas na linha base. A placa foi transferida para cuba cromatogrfica saturada contendo: gua R, metanol R, acetato de etilo R, (10:30:77 V/V/V). Depois que o eluente ascendeu pela placa, at atingir o front de 10 cm. A placa retirada da cuba e seca at que esteja livre do solvente (Farmacopia Portuguesa VII, 2002). Cada mancha corresponde a um componente separado na mistura original. Se os componentes so substncias coloridas, as diversas manchas sero claramente visveis. Para a visualizao deve-se revelar a placa. (COLLINS et al., 1995).

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

Um parmetro freqentemente usado em cromatografia o ndice de reteno (Rf). O Rf obtido definido como a razo entre a distncia percorrida pela mancha do componente e a distncia percorrida pelo eluente Portanto: Rf = dc / ds Onde: dc = distncia percorrida pelo componente da mistura. ds = distncia percorrida pelo eluente.

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA

CONCLUSO
Este experimento foi realizado com o objetivo de oferecer uma alternativa mais simples e menos onerosa de trabalho, principalmente como um mtodo para detectar os alcalides teobromina e cafena, em cpsulas de ch verde (Camellia sinensis), realizado em cromatografia de camada delgada contra padro. O resultado obtido demonstra a similaridade das manchas, comprovando a presena da cafena nas amostras analisadas. A proximidade entre os valores de Rf obtidos nos padres e nas amostras e o espectro de absoro no UV detectou a presena de cafena

O presente trabalho demonstrou a viabilidade de realizao deste processo para um controle de qualidade para sais ou formas farmacuticas que contenham metilxantinas.

CONCLUSO

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
BELITZ, H. D.; GROSCH, W. Qumica de los Alimentos . 2.Ed. Zaragoza: Acribia, 1997. 1063p. BLIVEAU, RICHARD. Os alimentos contra o cncer: a preveno e o tratamento do cncer pela alimentao . Petrpolis: Vozes, 2007. BLANCO, A. R. Os benefcos do ch verde (Camellia http://jardimdeflores.com.br/sinergia/S08chaverde.htm Acesso em 18 set. 2008. Sinensis). Disponvel em

CUNHA, A; SILVA, A; ROQUE, O. Plantas e produtos vegetais em fitoterapia. Lisboa Lisbora: Fundao Calouste Gulbenklan, 2003. 498p. DUARTE, R. M.; MENARIM, O. D. Morfodiagnose da anatomia foliar a caulinar de Camellia Sinensis (L.) Kuntze, Theaceae. Revista Brasileira de Farmacognosia, v. 16, p. 545-551, 2006, DRGER, B. Analysis of tropane and related alkaloids . Journal of Chromatography A. Elsevier.com. Vol. 978, Issues 1-2, 29 November 2002, Pag. 1-35.. FARMACOPIA PORTUGUESA, 7.Ed., Lisboa: Imprensa Nacional, 2002, p.1309. GRASSI D. et al. Tea, Flavonoids, and Nitric Oxide-Mediated Vascular Reactivity . The Journal of Nutrition, v.138, p.1554S-1560S, jun.2008. LEN, J. Botnica de los Cultivos Tropicales. San Jos: IICA, 1987. 445p. LORENZI, H; MATOS, F. A. Plantas Medicinais no Brasil Nativas e Exticas . 2.Ed. So Paulo: SP: Instituto Plantarum, 2002. 578p. MATSUBARA, S; RODRIGUES, D. Teores de catequinas e teaflavinas em chs comercializados no Brasil . Disponvel em: http://www.scielo.br/pdf/cta/v26n2/30189.pdf Acesso em: 10 set. 2008. SCHMITZ, W.; SAITO, Y. A.; ESTEVO, D.; SARIDAKIS, O. H. Gren tea as a chemoprotector: Cincias Biolgicas e da Sade, v.26, n.2, p. 119-130, 2005.