URI - Universidade Regional Integrada do Alto Uruguai e das

Misses Campus Santo ngelo

Departamento de Cincias exatas e da terra
CURSO DE QUMICA INDUSTRIAL
MICROBIOLOGIA E CONTROLE DE QUALIDADE




AULA PRTICA
CONTAGEM DE COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES PELO
NMP




Acadmicos: Daniele Perin
Ariane Lara


Professora: Claudia Viegas

Santo ngelo, 22 de outubro de 2012.




Introduo

A contaminao microbiana do leite interfere na sua qualidade e reflete as
condies sanitrias de produo e a sade do rebanho (GUERREIRO, et. al. 2005). Por
ser capaz de eliminar microrganismos patognicos e de reduzir riscos ao consumidor, a
pasteurizao exigida pela Instruo Normativa n. 51 (BRASIL, 2002). Entretanto, na
cidade de Bom Jesus, a cadeia produtiva do leite ainda precria e o leite , em sua
maioria, transportado sem refrigerao, em baldes e vendido de forma crua e
clandestina, em ruas e feiras.
A presena e o nmero de micro-organismos patognicos ou bioindicadores
acima dos padres estabelecidos no leite, alm de diminuir a qualidade e a
durabilidade, podem representar srio risco sade do consumidor, sendo um
problema de sade pblica.
Dentre alguns micro-organismos importantes em alimentos, destacam-se o
grupo dos coliformes totais e termotolerantes, que colonizam o trato intestinal de
animais de sangue quente, incluindo o homem, sendo, portanto, empregados como
indicadores da qualidade higinica, e que podem causar alteraes organolpticas,
como as fermentaes e estufamento do produto. A presena destes micro-
organismos indica as ms condies higinico-sanitrias durante o processamento,
como tambm, um tratamento trmico inadequado (FRANCO; LANDGRAF, 2004).
Na perspectiva de avaliar a carga microbiana do leite in natura torna-se
necessria a utilizao de micro-organismos indicadores de contaminao cuja
quantidade observada no alimento possa ser comparada com os parmetros
estabelecidos na legislao vigente. Para tanto, a utilizao dos coliformes tem se
demonstrado representativa, especialmente no que se refere deteco de
Escherichia coli (SILVA et al., 1997).
Os coliformes totais compem os grupos de bactrias gram-negativas que
podem ser aerbicas ou anaerbicas (isto depender do ambiente e da bactria), no
originam esporos e fermentam a lactose, capazes de crescer na presena de sais
biliares ou outros compostos ativos de superfcie (surfactantes), com propriedades
similares de inibio de crescimento, e que fermentam a lactose com produo de
aldedo, cido e gs a 35/37C em 24-48 horas. O grupo inclui os seguintes gneros:
Escherichia, Citrobacter, Enterobacter e Klebisiela. O grupo de bactrias determinado
coliformes totais so aquelas que no causam doenas, que habitam o meio ambiente
e tambm o intestino de animais mamferos inclusive o homem (BARCELLOS, 2006).
O uso da bactria coliforme termotolerantes para indicar poluio sanitria
mostra-se mais significativo que o uso da bactria coliforme total, porque as bactrias
fecais esto restritas ao trato intestinal de animais de sangue quente. A determinao
da concentrao dos coliformes assume importncia como parmetro indicador da
possibilidade da existncia de micro-organismos patognicos, responsveis pela
transmisso de doenas de veiculao hdrica, tais como febre tifide, febre
paratifide, desinteria bacilar e clera (BARCELLOS, 2006).
J os coliformes termotolerantes so tambm conhecidos como "fecais" por
suportarem uma temperatura superior a 40C, convivem em simbiose com humanos,
bois, gatos, porcos e outros animais de sangue quente. So excretados em grande
quantidade nas fezes e normalmente no causam doenas (quando esto no trato
digestivo). Neste grupo est presente a bactria gram-negativa Escherichia coli, e ao
ingerir alimentos por ela contaminados, os resultados desagradveis (como uma
gastrenterite, por exemplo) podem ser brandos ou desastrosos, dependendo do grau
de contaminao. O principal componente deste grupo Escherichia coli, sendo que
alguns coliformes do gnero Klebisiela tambm apresentam essa capacidade
(MARTINS et al., 2006).

O teste presuntivo utilizado tanto para determinao de coliforme total como para coliforme
fecal (termotolerante). Geralmente aplicado em trs sries de tubos.



Objetivos da Prtica

O presente trabalho teve como objetivo verificar a qualidade atravs da ocorrncia de
coliformes totais e termotolerantes em amostras de leite in natura (Amostra A)
fornecida para a anlise.

Materiais e Mtodos

Para a atividade prtica utilizou-se:
- Caldo Escherichia coli (EC).
- Caldo Verde brilhante (VB)
- Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST)
- Tubo de ensaio
- Tubo de Durham
- Placa de Petri estril
- Pipetas
- gua peptonada 0,1%



Importante

As seguintes normas devem ser seguidas nas inoculaes dos meios de cultura:
A) O fio e a ala de platina devem sempre ser flambados antes e depois de qualquer
inoculao, ou seja, devem ser aquecidos ao rubro no cone interno da chama do bico
de Bunsen. Para a coleta de material, devem ser esfriados na parte interna do
recipiente com meio de cultura:
B) Os recipientes (tubos de ensaio, placas de Petri, etc.) com meio de cultura devem
sempre ser abertos prximos ao bico de Bunsen:
C) A boca dos tubos de ensaio deve ser aquecida aps a retirada e antes da colocao
da tampa. A tampa nunca deve ser colocada sobre o balco, sendo retirada e mantida
segura pelo dedo mnimo da mo direita durante a inoculao.

Descries das Atividades Realizadas


1) Tcnica de Inoculao em meio liquido
- Flambou-se a ala de platina
- Mergulhou-se a ala esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli)
- Mergulhou-se a ala carregada no tubo contendo o meio de cultura
- Agitou-se a ala no meio liquido
- Retirou-se do tubo
- Flambou-se a ala de platina novamente
- Fechou-se o tubo e inoculou-se.

2) Tcnica de Inoculao em meio slido (inclinado)
- Flambou-se a ala de platina
- Mergulhou-se a ala esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli)
- Encostou-se a ala de platina levemente na parte mais baixa do plano inclinado e
subiu-se fazendo estrias na superfcie.
- Flambou-se a ala de platina novamente
- Fechou-se o tubo e inoculou-se.

3) Tcnica de inoculao em meio slido (coluna)
- Flambou-se a agulha
- Mergulhou-se a agulha esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli)
- Com a agulha fez-se uma nica perfurao na coluna do meio de cultura slido (2/3
do meio)
- Flambou-se a agulha novamente
- Fechou-se o tubo e inoculou-se.

4) Tcnica de inoculao em meio slido em Placa de Petri (esgotamento)
- Flambou-se a ala de platina
- Mergulhou-se a ala esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli)
- Encostou-se levemente a ala na superfcie do meio fazendo estrias em trs divises
da placa de petri
- Flambou-se a ala de platina novamente
- Fechou-se a placa de petri e inoculou-se.
9mL H2O p 0,1%


Resultados e discusso

Obtivemos como resultados aps a encubao por 48 horas em estufa a 35C, o
crescimento...

Concluso