A UNIQUE CLASS OF NEAR-INFRARED

FUNCTIONAL FLUORESCENT DYES WITH

CARBOXYLIC ACID MODULATED FLUORESCENCE
ON/OFF SWITCHING: RATIONAL DESIGN,
SYNTHESIS, OPTICAL PROPERTIES, THEORETICAL
CALCULATIONS AND APPLICATIONS FOR
FLUORESCENCE IMAGING IN LIVING ANIMALS
Ana Lusa Morotti
Introduo
Imagem pro fluorescncia: Uma das tcnicas mais
potentes no monitoramento de biomolculas em
sistemas vivos.

Muitos biomarcadores fluorescentes j foram
sintetizados: A maioria com absoro e emisso na
regio do visvel.

Biomarcadores que tm absoro e emisso prximas
da regio do IV (NIR) provocam mnimo dano s
amostras biolgicas, possuem boa penetrao nos
tecidos e e apresentam mnima interferncia causada
pelo fundo.


Introduo
Corantes de cianina: tipo de corante com absoro e
emisso NIR amplamente utilizado.






Introduo
Nagano et al.: Mecanismo on-off switching dos
corantes de cianina atravs de fotoinduo dificultado
visto que possuem orbitais moleculares (HOMO) com
altos nveis de energia.

Murphy et al.: Apresentaram uma estratgia diferente
para ativar a fluorescncia destes corantes atravs da
desconjugao de eltrons .

Shabat et al. mostrou uma estratgia de sensor para
ativar a fluorescncia de corantes de cianina atravs do
desmascaramento analito-especfico de um derivado
quinona de Cy7.
Introduo
Corantes de rodamina tm
boas propriedades
fotoqumicas, alto
coeficiente de extino, alto
rendimento quntico de
fluorescncia e tolerncia
fotodegradao.

O grupamento carboxlico
dos derivados de rodamina
pode sofrer ciclizao. A
forma aberta apresenta
fluorescncia e a fechada
no. Em pH fisiolgico, a
forma aberta
predominante.

O N R
R
N
R
R
COOH
Corantes de Rodamina.
Emisso entre 500-600nm.
Introduo
Os derivados amida de corantes de rodamina nao tm
fluorescncia em pH fisiolgico j que a forma
espirolactmica predominante.






Czarnik e colaboradores construram um sensor de
ativao de fluorescncia atravs da hidrlise
especfica por cobre da Rodamina B (no fluorescente)
para a Rodamina (fluorescente).
Introduo
Desde ento, a rodamina espirolactmica tem sido
empregada para a construo de diversos derivados
com sistemas de ativao por ons, baseada na
abertura do anel lactmico.

Porm, esses derivados possuem apenas absoro e
emisso na regio do visvel

Deseja-se construir derivados de rodamina que tenham
absoro e emisso na regio prxima do IV.
Introduo
Alguns anlogos de
rodamina tem sido
construdos. Por exemplo,
rodamina 800, que tem um
grupamento CN no lugar
de cido benzico da
rodamina. No tem o
processo de abertura do
anel espirolactnico. um
corante NIR, porm, no
possui um mecanismo de
ativao/ desativao
Rodamina 800
Introduo
Introduo
Nagano e col.: Uma Si-Rodamina com sensor de
fluorescncia atravs de interao com cido
hipocloroso, com absoro e emisso localizadas na
regio do IV e opera com o mecanismo de
espirociclizao. (Si tem baixos nveis de energia no
orbital molecular LUMO)

Para se obter anlogos de rodamina com maior
absoro e emisso, e mant-los com o mecanismo de
ciclizao para ativao da fluorescncia, so
necessrias novas estratgias.

Introduo
Merocianina A tem mxima absoro em torno de
700nm na regio NIR. Porm, as propriedades
fluorescentes ainda no so conhecidas.
Decidiu-se sintetizar e analisar o perfil de fluorescncia
da merocianina A. Os estudos revelaram que esta tem
um pico de emisso forte em 734nm alto rendimento
quntico de 0.34 em MeOH.
difcil de controlar as propriedades pticas da
merocianina A, pois ela no possui um mecanismo
de ativao/desativao. Porm, ela poderia ser
um bloco para a construo de outros compostos
com fluorescncia passveis de se ter um
mecanismo de ativao/desativao.
Introduo
Baseando-se nas estratgias anteriores, desenvolveu-
se novos tipos de corantes chamados CHANGSHA
(CS), com absoro e emisso na regio NIR e
tambm com propriedades pticas controlveis.

Tambm foi construdo um novo sensor de ativao de
fluorescncia a partir da reao com HClO (endgeno)
em animais vivos.

Sntese de corantes CS
Sntese de corantes CS
Sntese de corantes CS
Controles para avaliao da atividade atravs das
propriedades pticas
Propriedades pticas
Propriedades pticas
Propriedades pticas
Propriedades pticas
Propriedades pticas
Fotoestabilidad
e
Irradiao com lmpada de Xe
(150W) no comprimento de
onda mximo de absoro de
CS1-6
Mais de 97% da intensidade
da fluorescncia inicial foi
mantida aps uma hora de
experimento.
Propriedades pticas
Propriedades pticas
CS2

.
OH
H
2
O
2
100M: HClO
TBHP
.
OtBu
30 min
Propriedades pticas
Propriedades pticas
Propriedades pticas
160 nanomol CS2 em
camundongo
anestesiado
Quantificao da
intensidade da emisso
de fluorescncia
Sensor de Ativao
Sensor de ativao
Sensor de Ativao
Processos
Inflamatri
os e outras
patologias
Sensor de Ativao
In vitro
Clulas macrofgicas RAW264.7.
In vivo
In vivo
In vivo
Concluso
Foi introduzida uma nova estratgia para corantes
funcionais NIR, com fluorescncia ativada/desativada
atravs de mecanismo de espirociclizao de cido
carboxlico.

Baseados nessa estratgia, foram sintetizados uma
srie de CHANGSHA (CS1-6) fluorforos NIR que
contm excelentes propriedades fotofsicas enquanto
mantm o mecanismo de ativao/desativao da
rhodamina de fluorescncia. CS1-6 so melhores do
que os corantes de rodamina por terem tanto absoro
quanto emisso na regio prxima ao IV.


Concluso
Utilizando CS2 como plataforma, foi sintetizado um
novo sensor de ativao de fluorescncia atravs da
interao com HClO endgeno em animais vivos.

esperado que esta nova estratgia seja utilizada no
desenvolvimento de novos corantes funcionais NIR com
um mecanismo de fluorescncia controlvel .