Norma Técnica: Fitoplâncton de Água Doce: Métodos Qualitativo e Quantitativo

NORMA TCNICA
L5.303
4 Edio
Outubro 2012
24 pginas

Fitoplncton de gua doce: Mtodos qual i tati vo e quanti tati vo

Title in English:

Freshwater phytoplankton: qualitative and quantitative assays

Resumo:

Descreve os principais mtodos de preservao e de anlises qualitativas e quantitativas para a
contagem de organismos fitoplanctnicos de gua doce, como tambm os mtodos de contagem de
clulas de cianobactrias. O estudo do fitoplncton de gua doce uma ferramenta importante na
avaliao da estrutura e funcionamento dos ecossistemas aquticos. Alm disso, a comunidade tem
sido utilizada como indicadora de qualidade de gua principalmente em lagos e reservatrios, e sua
anlise permite avaliar alteraes ambientais e eventuais problemas que possam surgir quanto ao uso
da gua.

Palavras chave

Anlise da gua, gua doce, Fitoplncton,
Cianobactrias, comunidade fitoplanctnica, algas.
Key words

Analysis of water, Freshwater, phytoplankton,
cyanobacteria, phytoplankton, algae

Companhia Ambiental do Estado de So Paulo
Avenida Professor Frederico Hermann Jr., 345
Alto de Pinheiros CEP 05459-900 So Paulo SP
Tel.: (11) 3133 3000 Fax: (11) 3133 3402 http://www.cetesb.sp.gov.br

CETESB 2013

(CETESB / L5.303 / outubro / 2012)
Cod.014-verso 01 28/02/2002
2/24

Primeira Edio
Dezembro/1977, homologada pela Deciso de Diretoria D.D. n. 002/1978/ DDPET, de 10/01/1978.

Segunda Edio
Agosto/1991, homologada pela Deciso de Diretoria D.D. n. 100/91/P/ N, de 28/08/1991.

Terceira Edio
Dezembro/2005, homologada pela Deciso de Diretoria D.D. n. 042/2006/E, de 23/03/2006.
Publicada no Dirio Oficial do Estado de So Paulo Caderno Executivo I, v.116, n. 74, de
20/04/2006, Poder Executivo, Seo I, pg. 27.

Quarta Edio
Outubro/2012, homologada pela Deciso de Diretoria D.D. n. 171/2013/E, de 21/05/2013. Publicada
no Dirio Oficial do Estado de So Paulo Caderno Executivo I, v.123, n. 97, de 24/05/13, Poder
Executivo, Seo I, pg. 52 a 56.

CETESB 2013
permitida a reproduo total ou parcial deste documento, desde que citada a fonte. Direitos
reservados de distribuio.

Sumrio pgina

01 Introduo 02
02 Objetivo 04
03 Documentos complementares 05
04 Definies 05
05 Equipamentos e reagentes 06
06 Procedimento de coleta, preservao e preparao de amostras 07
07 Execuo do ensaio 08
08 Expresso dos resultados 16
09 Controle laboratorial e estocagem 16
10 Registro de dados e apresentao dos resultados 16
11 Referncias bsicas para identificao do fitoplncton de gua doce 17
12 Referncias 18
Anexo A-Figuras dos acessrios para anlise de fitoplncton 20
Anexo B-Exemplo de ficha de anlise para contagem de clulas de cianobactrias 22
Anexo C-Exemplo de ficha de anlise de fitoplncton 23
Anexo D-Exemplo de boletim de anlise de fitoplncton 24

1 Introduo

Fitoplncton a comunidade de organismos microscpicos fotossintetizantes que flutuam livremente
nas diversas camadas dos corpos dgua e que constituda principalmente por algas microscpicas:
clorofceas, diatomceas, euglenofceas, crisofceas, dinofceas, xantofceas e tambm cianobactrias
(anteriormente denominadas cianofceas).

O termo alga considerado um termo popular, utilizado para designar organismos clorofilados que
podem se distinguir em funo de sua morfologia, reproduo, fisiologia e ecologia. Entretanto, segundo
alguns autores, algas so organismos vegetais unicelulares ou multicelulares que fazem parte da
comunidade produtora primria de um ecossistema aqutico, podendo constituir a base da cadeia
alimentar desse ambiente. Utilizando a energia solar transformam nutrientes minerais em matria
orgnica, fenmeno conhecido como fotossntese.

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Em geral, guas limpas e pobres em nutrientes apresentam uma comunidade fitoplanctnica pouco
abundante, com alta diversidade, enquanto guas ricas em nutrientes apresentam grande nmero de
organismos, pertencentes a poucas espcies.

Alm da quantidade de nutrientes presentes na gua, outros fatores influenciam a composio e
distribuio espacial e temporal da comunidade fitoplanctnica, tais como: correntes, estratificao
trmica, circulao, hora do dia, profundidade de penetrao da luz, intensidade luminosa, temperatura
e presena de substncias txicas.

Mananciais que recebem despejos domsticos, industriais ou de fontes agrcolas difusas, tendem a
apresentar altas concentraes de nutrientes, principalmente fsforo e nitrognio. Este fenmeno de
desequilbrio ecolgico, conhecido como eutrofizao ou enriquecimento das guas, favorece a
proliferao rpida de algas e cianobactrias, fato que pode acarretar vrios problemas no ambiente
aqutico, tais como: flutuaes extremas da concentrao de oxignio dissolvido e pH; dificuldade de
penetrao de luz na coluna dgua pelo acmulo de algas na superfcie, prejudicando o
desenvolvimento de outras formas de vida; mudanas de colorao; conferir odores e sabores
desagradveis e toxicidade gua. Estas situaes so indesejveis, principalmente em mananciais
utilizados para abastecimento pblico e recreao, pois dificultam e oneram o processo de tratamento
de gua.

Alguns organismos fitoplanctnicos, principalmente do grupo das diatomceas, podem provocar
entupimento de filtros com consequentes problemas em estaes de tratamento.

Certas espcies de algas e cianobactrias podem ainda contribuir para acelerar a corroso de concreto
submerso e estruturas de metal, tanto diretamente nos locais onde crescem aderidas, quanto por
alteraes fsicas e/ou qumicas da gua.

O exame dos componentes do fitoplncton, sua identificao e quantificao so de grande interesse
para avaliar as condies ecolgicas de um ecossistema aqutico, prevenir ou controlar situaes
indesejveis ou incompatveis com a finalidade de utilizao de um determinado manancial e, inclusive,
para o desenvolvimento de culturas de interesse econmico, como a piscicultura.

O grupo das cianobactrias o mais problemtico do ponto de vista sanitrio. So organismos
procariotos, ou seja, com estrutura celular semelhante das bactrias, e possuem um sistema
fotossintetizante semelhante ao das algas.

Esse grupo tem capacidade de crescimento nos mais diversos ambientes, porm ocorre
preferencialmente em pH variando entre 6,0 e 9,0, temperatura entre 15 e 30C e alta concentrao de
nutrientes, principalmente nitrognio e fsforo.

Todas as cianobactrias so consideradas potencialmente txicas, embora algumas espcies ainda no
tenham toxicidade comprovada. Existem relatos na literatura de casos de intoxicao de animais e de
seres humanos causados pela ingesto de gua contaminada e pelo uso em clnicas de hemodilise ou
indstria farmacutica de guas contendo espcies txicas e/ou toxinas liberadas pelas suas floraes.
O nico relato comprovado de morte de seres humanos ocorreu em Caruaru PE (1996), quando uma
clnica de hemodilise administrou gua contaminada com cianotoxinas por via endovenosa a seus
pacientes. As toxinas de cianobactrias so conhecidas como cianotoxinas, e por seu efeito podem ser
classificadas como neuro ou hepatotxicas.

Os gneros Dolichospermum (antiga Anabaena), Aphanizomenon, Oscillatoria, Cylindrospermopsis,
entre outras, so produtores potenciais de neurotoxinas que podem causar insuficincia respiratria e
levar morte de animais entre 2 e 30 minutos.

As hepatotoxinas apresentam uma ao mais lenta, causando o tipo mais comum de intoxicao e
provocando hepatoenterites. Alguns gneros produtores dessas toxinas so Microcystis,
Dolichospermum (antiga Anabaena), Planktothrix, Oscillatoria, Radiocystis e Cylindrospermopsis. Alm
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do efeito agudo essas toxinas tambm podem causar efeitos crnicos, como por exemplo, o
desenvolvimento de tumores.

O controle das cianobactrias em mananciais de abastecimento importante devido ao seu potencial
txico. A Portaria n 2914 do Ministrio da Sade (BRASIL, 2011), relativa s Normas de Qualidade para
gua de Consumo Humano (Potabilidade), estabelece que os responsveis por estaes de tratamento
de gua para abastecimento pblico devem realizar monitoramento de cianobactrias nos mananciais e
controle de cianotoxinas. Tambm a Resoluo CONAMA n 357 (BRASIL, 2005) contempla o
monitoramento destes organismos.

O estudo da comunidade fitoplanctnica pode ser til para:

1) Avaliar a estrutura e funcionamento dos ecossistemas aquticos;

2) Subsidiar aes de controle nas estaes de tratamento de gua para abastecimento pblico em
relao a alteraes de cor, turbidez, odores indesejveis, partculas visveis na gua, obstruo de
filtros e aplicao de algicidas. Determinar a eficincia de vrios estgios do tratamento e auxiliar na
determinao da dosagem de cloro a ser adicionada gua;

3) Identificar a origem de uma fonte de emisso ou efluente misturado na gua;

4) Subsidiar a interpretao de anlises qumicas, por exemplo, correlacionando a presena ou
ausncia de certas espcies com a deficincia ou excesso de determinados elementos no ambiente
aqutico;

5) Detectar a presena de espcies potencialmente txicas em guas de abastecimento ou
recreacionais,que possam causar impacto na sade humana, e fornecer subsdios para a tomada de
decises em programas de monitoramento e gerenciamento de reservatrios;

6) Indicar a natureza, extenso e efeitos biolgicos da poluio;

7) Detectar e acompanhar o processo de autodepurao em corpos dgua e o desenvolvimento e
sucesso de formas fitoplanctnicas em processos de tratamento de esgotos domsticos de lagoas
de estabilizao;

8) Explicar os mecanismos de ao dos fatores biolgicos de guas residuais ou avaliar sua
efetividade;

9) Documentar a curto e longo prazo a variabilidade na qualidade da gua, como conseqncia de
mudanas naturais e/ou provocadas pelo homem, especialmente por despejos ricos em nutrientes ou
contaminados por metais;

10) Fornecer dados sobre o estado trfico de ecossistemas aquticos;

11) Acompanhar o desenvolvimento de culturas ou bioensaios com algas e cianobactrias;

12) Avaliar a eficincia de aes de manejo para melhoria e recuperao de corpos dgua;

13) Subsidiar investigao de mortandade de peixes ou outros animais.

2 Objetivo

Esta Norma descreve os principais mtodos de preservao e de anlises qualitativas e quantitativas de
organismos fitoplanctnicos de gua doce e tambm estratgias para contagem de clulas de
cianobactrias. Alm disso, indica referncias para os procedimentos de coleta.
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3 Documentos complementares

Os documentos relacionados a seguir contm disposies que constituem fundamento para este
procedimento. As edies indicadas estavam em vigor no momento desta publicao. Como toda norma
est sujeita a revises e alteraes, aqueles que realizam procedimentos com base nesta, devem
verificar a existncia de legislao superveniente aplicvel ou de edies mais recentes das normas e
publicaes citadas.

Na aplicao desta norma sugere-se consultar:

BRANDO, C. J. et al. (Org.). Guia nacional de coleta e preservao de amostras: gua,
sedimento, comunidades aquticas e efluentes lquidos. So Paulo: CETESB; Braslia: ANA, 2011.
325 p. Disponvel em:
<http://www.ana.gov.br/bibliotecavirtual/arquivos/20120321181900_Guia_Nacional_de_Coleta.pdf>.
Acesso em: nov. 2012.

BICUDO, C.E.M.; BICUDO, D.C. (Org.). Amostragem em limnologia. 2.ed. So Carlos: RiMa, 2004.

BRASIL. Ministrio da Sade. Portaria n 2914, de 12 de dezembro de 2011. Dispe sobre os
procedimentos de controle e de vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu padro
de potabilidade. Dirio Oficial da Unio: Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia,
DF, n. 239, 14 dez. 2011. Seo 1, p. 39-46. Disponvel em:
<http://www.in.gov.br/visualiza/index.jsp?data=14/12/2011&jornal=1&pagina=39&totalArquivos=192>.
Acesso em: fev. 2013.

BRASIL. Ministrio do Meio Ambiente. CONAMA. Resoluo n 357, de 17 de maro de 2005.
Dispe sobre a classificao dos corpos de gua e diretrizes ambientais para o seu enquadramento,
bem como estabelece as condies e padres de lanamento de efluentes, e d outras providncias.
Dirio Oficial da Unio: Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia, DF, n. 53, 18 mar.
2005. Seo 1, p. 58-63. Disponvel em:

Referncias bsicas para identificao do fitoplncton de gua doce, citados no final desta Norma.

4 Definies

Para os efeitos desta Norma, aplicam-se as seguintes definies:

4.1 Biomassa
Quantidade de material vivo que pode ser expressa em peso, volume ou rea.

4.2 Cianotoxinas
Toxinas produzidas por cianobactrias que causam efeitos adversos sade do homem e de alguns
animais.

4.3 Ecossistema
Unidade de natureza ativa que combina comunidades biticas e fatores abiticos com os quais interage.
Os ecossistemas apresentam grande variabilidade em relao s suas dimenses e caractersticas.

4.4 Eutrofizao
Processo de aumento da concentrao de nutrientes, principalmente nitrognio e fsforo, tendo como
consequncia o aumento da produtividade do ambiente aqutico.

4.5 Fitoplncton
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Comunidade vegetal microscpica que vive em suspenso nas diversas camadas de gua onde, graas
presena de energia luminosa, promove o processo fotossinttico, principal responsvel pela base da
cadeia alimentar no meio aqutico.

4.6 Florao
Crescimento intenso de algas ou cianobactrias, potencialmente txicas ou no, geralmente causado
por aumento de nutrientes como nitrognio e fsforo. Essas altas densidades de organismos podem
ocorrer em curtos perodos ou durante todo o ano.

4.7 Frstula
Parede celular dura, silicosa, das diatomceas, constituda por duas partes que se assemelham s
partes superior e inferior de uma caixa perfeitamente ajustada. Essas partes so chamadas de valvas
ou epiteca e hipoteca.

4.8 Fotossntese
Processo de converso de dixido de carbono para carbono orgnico (carboidrato) que ocorre nos
cloroplastos, pela ao da energia luminosa absorvida pelos pigmentos fotossintetizantes,
especialmente a clorofila.

4.9 Procarioto
Clula ou organismos destitudo de um ncleo distinto.

4.10 Unidade Padro de rea (UPA)
Unidade aceita internacionalmente para quantificar o plncton em guas de abastecimento, com valor
de 400m
2
.

5 Equipamentos e reagentes

Os equipamentos, reagentes, solues e demais materiais, necessrios para a anlise apresentam-se
listados nos itens 5.1 e 5.2.

5.1 Equipamentos e materiais para execuo da anlise
Os equipamentos e materiais utilizados na execuo do ensaio encontram-se listados abaixo:

a) Pipetas graduadas;

b) Contador manual de uma ou de vrias teclas;

c) Retculo de Whipple (Anexo A, figura 1);

d) Microscpio binocular comum, com ocular de aumento de 10X ou 12,5X e objetivas com aumento
de 10X, 20X, 40X, 63X e 100X, com retculo de Whipple calibrado. Contraste de fase e
epifluorescncia so recomendados para auxiliar na anlise;

e) Microscpio invertido (invertoscpio), com ocular de aumento de 10X ou 12,5X e objetivas com
aumento de 10X, 20X e 40X (63X e 100X so opcionais), com retculo de Whipple calibrado.
Contraste de fase e epifluorescncia so recomendados para auxiliar na anlise;

f) Cmaras de Utermhl (tambm chamadas de cmaras de invertoscpio ou cmaras de
sedimentao), com capacidade de 2, 5, 10, 25, 50 ou 100mL (Anexo A, figuras 2 e 3);

g) Cmaras de Sedgwick-Rafter com capacidade de 1mL (S-R). Estas cmaras apresentam 20mm
de largura por 50mm de comprimento e 1mm de profundidade (Anexo A, figura 4);

h) Lmina micromtrica (para verificar/calibrar o retculo);
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i) Lminas e lamnulas comuns e lamnula para cmara de Utermhl;

j) Ficha de anlise (Anexo B e C);

k) Pipetas Pasteur;

l) Cmara mida: recipiente fechado, umidificado, utilizado para manter a umidade das cmaras de
contagem;

m) Centrfuga;

n) Balana com preciso de 0,1g;

o) Provetas graduadas.

5.2 Reagentes e Solues
Os reagentes e solues utilizados na execuo do ensaio encontram-se listados abaixo:

a) Formalina Formaldeido 40% neutralizado com tetraborato de sdio (20g/L) ou bicarbonato de
sdio (5g/L), chegando a uma concentrao final na amostra de 2%;

b) Soluo de lugol: dissolver 10g de iodo puro, 20g de iodeto de potssio, 20mL de cido actico
glacial em 200mL de gua destilada. Esta soluo deve ser armazenada em frasco escuro.
Recomenda-se adicionar de 0,3 a 1,0mL/100mL amostra, dependendo da concentrao de
organismos;

c) Soluo Transeau: 6 partes de gua, 3 partes de lcool etlico 95GL e 1 parte de formalina;
utilizada na proporo 1:1 com a amostra;

d) Glutaraldedo neutralizado com tetraborato de sdio (20g/L) ou bicarbonato de sdio (5g/L), em
concentrao final de 1 a 2%;

e) Hidrxido de Sdio (NaOH) ou de potssio (KOH) 0,1M. Utilizado na proporo de 1:1, de forma
que a concentrao final seja 0,05M para o KOH e 0,075M para o NaOH ;

f) Tinta nanquim (para evidenciar bainhas e mucilagem de cianobactrias).

6 Procedimentos de coleta, preservao e preparao de amostras

A seguir sero apresentados os procedimentos de coleta, preservao e preparo das amostras.

6.1 Coleta de amostras
Para o planejamento amostral e detalhamento dos procedimentos de coleta, consultar o Guia Nacional
de Coleta e Preservao de Amostras (BRANDO et al., 2011), considerando sempre os objetivos do
estudo e o tipo de anlise que ser realizada.

6.2 Preservao da amostra
Para anlise quantitativa necessrio que a amostra seja preservada, uma vez que os organismos do
plncton presentes na amostra possuem mobilidade, prejudicando as contagens.

A amostra poder ser preservada com formalina, lugol ou soluo Transeau, preferencialmente at 24
horas aps a coleta. Para a identificao de determinados grupos de cianobactrias e flagelados,
necessria a observao do material antes da preservao, para verificao de movimento e de
estruturas s visveis no organismo vivo. Havendo necessidade de observao dos organismos vivos, a
amostra deve ser transportada do local de coleta ao laboratrio em ambiente resfriado.
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Na tabela 1 encontram-se descritas as vantagens e desvantagens de cada conservante.

Tabela 1 Descrio das vantagens e desvantagens de cada conservante

TIPO VANTAGENS DESVANTAGENS
LUGOL Preservao de flagelos e aumento
do peso especfico das clulas,
facilitando a sedimentao.
Dissolve frstulas de diatomceas mais delicadas
e escamas de silicoflagelados.
No possvel utilizar a epifluorescncia em
amostras preservadas com lugol.
FORMOL Pode ser estocado por vrios anos
e no muda a colorao das algas.
Distorce a forma da clula de flagelados nus,
provoca perda de flagelos; apresenta toxicidade
sade humana.
TRANSEAU Mantm as caractersticas das
clulas como flagelos e plastos.
Grande volume utilizado.
Fonte: APUD CETESB (2005), modificado.

6.3 Cuidados na preparao da amostra
Para a preparao da amostra necessrio que se realizem os seguintes procedimentos:

importante que a temperatura da amostra e a do ambiente estejam a mais prxima possvel para
evitar a formao de bolhas no preenchimento da cmara, para no haver alterao de volume;

Homogeneizar delicadamente a amostra cerca de dez vezes para promover a distribuio uniforme
dos organismos;

O local para a preparao e sedimentao dos organismos nas cmaras de contagem dever
apresentar superfcie plana e estar abrigado da luz direta, vento e movimentos.

A avaliao quantitativa de amostras para anlise de fitoplncton de gua doce requer, com grande
frequncia, que os organismos nelas presentes sejam concentrados. Vrias tcnicas de concentrao
foram desenvolvidas, todas elas apresentando vantagens e desvantagens, e cada qual deve ser
aplicada de acordo com o objetivo do estudo. Os mtodos de concentrao mais utilizados so o de
centrifugao e o de sedimentao (item 7.2).

importante considerar que para cada etapa deste procedimento, diferentes fatores de converso
devero ser calculados e aplicados para a obteno do resultado final.

7 Execuo do ensaio

A seguir sero apresentados os mtodos de preparo da amostra para a realizao do ensaio e o
procedimento de anlise.

7.1 Princpio do mtodo
O mtodo a ser utilizado para anlise do fitoplncton de gua doce depende do objetivo que se
pretende alcanar. Algumas anlises tm o objetivo de determinar a composio da comunidade
fitoplanctnica e avaliar suas concentraes relativas. Em outros casos, suficiente a identificao da
espcie dominante que pode estar causando problemas, como por exemplo, produo de sabor e/ou
odor desagradveis na gua de abastecimento ou obstruo de filtros em estaes de tratamento.
Nestas situaes, uma avaliao qualitativa suficiente.

Em estudos de monitoramento, de diagnstico ou ecolgicos, quando se deseja comparar locais ou
diferentes pocas do ano, importante uma anlise quali-quantitativa.
Informaes sobre a temperatura da gua, turbidez, pH, oxignio dissolvido e nutrientes so valiosas e
podem facilitar a interpretao dos resultados sobre a comunidade fitoplanctnica propriamente dita.

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7.2 Concentrao das amostras
Normalmente amostras para anlise de fitoplncton de gua doce precisam ser concentradas. No
entanto, isso no necessrio para amostras provenientes de ambientes que apresentam grande
quantidade de algas, como lagoas de estabilizao.

Para rios ou corpos dgua que apresentem muito material em suspenso pode ser necessrio diluir a
amostra e, se a concentrao fitoplanctnica for baixa, analisar vrias subamostras e proceder aos
clculos correspondentes.

7.2.1 Concentrao das amostras por centrifugao
Este mtodo d uma resposta mais rpida, porm pode causar perda de organismos, alterao de seu
aspecto e rompimento de clulas. O volume a ser centrifugado ir depender da concentrao dos
organismos na amostra, pois se a concentrao final para a anlise for muito elevada, a contagem ser
mais trabalhosa e demorada.

Se em funo da capacidade da centrfuga, houver necessidade de dividir a amostra em dois volumes,
procede-se da seguinte forma: para 100mL, por exemplo, aps a centrifugao de cada um dos dois
tubos de 50mL referentes mesma amostra, so desprezados os 45mL dos sobrenadantes.
Homogenezam-se os 5mL restantes de um dos tubos e verte-se ao outro, obtendo-se desta forma
10mL de amostra concentrada 10 vezes. As amostras devem ser centrifugadas a 2500rpm durante 20
minutos.

A anlise do material centrifugado pode ser feita em cmaras de Sedgwick-Rafter ou utilizando-se uma
micropipeta e adicionando uma gota de volume definido em lmina normal de microscpio com lamnula
selada. Este ltimo mtodo recomendado apenas na ausncia do anterior, uma vez que devido ao
pequeno volume utilizado pode ocorrer perda de material.

7.2.2 Concentrao das amostras por sedimentao
Outro mtodo de concentrao de amostra o de sedimentao de organismos em cmaras de
Utermhl, nas quais a amostra preservada colocada na cmara de sedimentao e levada a uma
cmara mida, onde permanece durante 12 horas ou mais. Alguns autores recomendam 2 horas de
repouso da amostra para cada centmetro de altura da coluna, enquanto outros sugerem de 3 a 4 horas
por centmetro.

Quando a amostra estiver preservada com formalina, o tempo necessrio para sedimentao ser o
dobro do estabelecido para outras amostras.

Dependendo da quantidade de algas presentes na amostra, utilizam-se cmaras de volumes diferentes,
sendo as mais comumente empregadas de 2,5 e 10mL (Anexo A, figuras 2 e 3), podendo variar at 50
ou 100mL.

Para a preparao de uma cmara de Utermhl deve-se proceder da seguinte forma:

Colocar a cmara em posio plana e horizontal;

Homogeneizar delicadamente a amostra preservada e retirar, com auxlio de uma pipeta, uma
subamostra em quantidade suficiente para preencher o volume da cmara de Utermhl;

Com a lamnula, recobrir cuidadosamente a cmara, evitando a formao de bolhas;

Levar a subamostra preparada a uma cmara mida onde deve permanecer durante o tempo
necessrio para sedimentao dos organismos.

Se no houver disponibilidade de um microscpio invertido ou centrfuga, tambm possvel sedimentar
a amostra em proveta e desprezar o sobrenadante.

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Observao 1: Todo o material utilizado, principalmente as cmaras de Sedgwick-Rafter e Utermhl,
deve estar limpo, isento de poeira ou gordura.

7.3 Procedimento de anlise
Dependendo da quantidade de organismos, a subamostra ser analisada integralmente ou
parcialmente, por meio da contagem de transectos ou campos aleatrios, com o auxlio do retculo de
Whipple calibrado. Para auxiliar na visualizao de estruturas hialinas, como flagelos, por exemplo,
pode ser utilizado o contraste de fase, e para distinguir as cianobactrias de pequenas dimenses de
bactrias que no devem ser quantificadas na amostra, pode-se usar epifluorescncia (exceto para
amostras preservadas com lugol). O uso de nanquim para visualizao de bainhas, principalmente para
as cianobactrias, tambm recomendado.

7.3.1 Calibrao do retculo de Whipple
O microscpio binocular comum e o invertoscpio, ao serem utilizados para contagem de
microrganismos, devem estar equipados com retculo de Whipple (Anexo A, figura 1) na ocular. O
retculo de Whipple dever ser previamente calibrado, com o auxlio de um micrmetro (rgua
micromtrica), para a objetiva e a ocular que sero utilizadas durante o exame. Para se realizar a
calibrao, o micrmetro colocado na platina do microscpio e superposto a um dos lados do retculo
de Whipple. Procura-se um ponto de correspondncia entre as graduaes do retculo e do micrmetro,
a fim de que seja medido o lado do retculo. Encontrado o ponto de correspondncia, pode-se calcular o
valor da menor diviso do retculo e a rea do mesmo.

Exemplo: Em um microscpio binocular comum, usando-se objetiva com aumento de 20X e ocular com
aumento de 10X, superpondo-se o retculo de Whipple e o micrmetro, verificou-se que houve
correspondncia de escalas no quinto quadrado do retculo e a medida no micrmetro foi 190m. Assim,
dez quadrados que compem o lado do retculo de Whipple equivalem a 380m, um quadrado equivale
a 38m e a menor subdiviso do retculo, a 7,6m.

Observao 2: importante salientar que essa calibrao deve ser feita para cada equipamento
individualmente, e este procedimento deve ser repetido aps as manutenes do microscpio.

7.4 Mtodo para contagem de organismos e clulas
Dependendo do objetivo, a anlise da comunidade fitoplanctnica, pode ser realizada contando
organismos e/ou clulas de cianobactrias.

7.4.1 Contagem de organismos
Os organismos fitoplanctnicos podem ser unicelulares, multicelulares, filamentosos ou coloniais.
Assim, pela variedade de formas e configuraes, a contagem pode ser um problema para o analista.
Por exemplo: uma clorofcea com 4 clulas, como Scenedesmus, contada como um organismo. J
para as diatomceas, como por exemplo uma Asterionella, conta-se cada clula como um organismo,
pois os indivduos esto unidos apenas por espinhos ou por mucilagem.
No uso do retculo para a contagem de organismos, necessrio estabelecer alguns critrios para
contagem: por exemplo, quando os indivduos no esto totalmente dentro da grade, como mostrado no
esquema a seguir, pode-se estabelecer que se o organismo estiver com mais de 50% da sua rea fora
do retculo, este no dever ser contado, e se estiver com mais de 50% da sua rea dentro, dever ser
contado (Figura 1).

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Figura 1 Exemplo de contagem de organismos no Retculo de Whippe
No contar
este
organismo
Contar este
organismo

Fonte: APUD CETESB (2005).

Observao 3: O aumento ideal para a contagem em microscpio invertido de 400X.

Dependendo da concentrao de organismos, a subamostra ser analisada integralmente ou
parcialmente por meio da contagem de transectos ou campos aleatrios, com o auxlio do retculo de
Whipple calibrado, como esquematizado na figura 2.

Figura 2 Esquema de contagem por transecto ou por campos


7.4.2 Contagem de clulas de cianobactrias
Para atender Portaria MS n 2914 (BRASIL, 2011) e Resoluo CONAMA n 357 (BRASIL, 2005),
as estaes de tratamento de gua devem providenciar a contagem de clulas de cianobactrias para o
manancial de abastecimento. A metodologia descrita nessa Norma Tcnica foi desenvolvida com base
nas orientaes descritas em Lawton et al. (1999) e Chorus e Bartram (1999).

O grupo das cianobactrias possui formas filamentosas, coloniais e solitrias. Para a contagem de
clulas das colnias e filamentos, podem ser utilizados os seguintes mtodos:

a) Formas coloniais As clulas de cianobactrias coloniais so agregadas por bainhas ou
mucilagens. Para facilitar a contagem de clulas, quando estes organismos so dominantes, por
exemplo, em floraes, recomendvel dissolver estas mucilagens e desmembrar as colnias em
clulas soltas.

Uma das metodologias de dissoluo da mucilagem a hidrlise alcalina. Adiciona-se hidrxido de
potssio (KOH) ou de sdio (NaOH) 0,1mol/L na amostra, na proporo de 1:1, de forma que a
concentrao final seja 0,05M para o KOH e 0,075M para o NaOH. Colocar a soluo em estufa
entre 80C e 90C por 30min (o recipiente dever ser tampado para evitar a evaporao da amostra).
Aps este perodo, colocar numa cmara de Utermhl e visualizar no microscpio invertido para
confirmar se toda a mucilagem foi dissolvida. Em caso positivo, contar as clulas soltas. Se a
mucilagem ainda no estiver completamente dissolvida ou a amostra estiver muito densa, pode ser
diluda outras vezes, sempre lembrando de multiplicar o resultado da contagem pelo nmero de
diluies para se obter a concentrao final.

Aps o procedimento de dissoluo de mucilagem, a amostra pode ser preparada em cmaras de
Sedgwick-Rafter ou em cmaras de Utermhl para quantificao. Com este mtodo no possvel
identificar os organismos.
Transectos
Campo
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Outra metodologia consiste em utilizar o retculo de Whipple (figura 3) como auxiliar na contagem de
clulas de formas coloniais. Pode-se contar quantas clulas ocupam cada quadrado do retculo,
calcular a mdia dos resultados obtidos para 10 a 30 quadrados e multiplicar esse nmero pelo
nmero de quadrados ocupados pela colnia.

Figura 3 Ilustrao do Retculo de Whipple


b) Formas filamentosas As cianobactrias filamentosas so formadas por clulas conectadas por
parede celular, formando os filamentos que, envoltos pela bainha, so denominados tricomas. As
clulas podem ser cilndricas, quadrticas, mais longas que largas, mais largas que longas ou
esfricas, dependendo da ordem, famlia ou gnero a que pertenam.

A contagem de clulas de cianobactrias filamentosas pode ser feita de duas maneiras. Em caso de
amostras com filamentos de comprimento uniforme, contam-se as clulas dos primeiros trinta
filamentos e calcula-se uma mdia de clulas por filamento para cada espcie, valor que
posteriormente ser multiplicado pelo nmero de filamentos contados. No caso de amostras com
filamentos de comprimento muito varivel, pode-se contar o nmero de clulas por quadrado do
retculo e multiplicar pelo nmero de retculos que os filamentos ocupam.

c) Amostras mistas com formas coloniais e filamentosas Em amostras com colnias e filamentos
nas quais no seja possvel a dissoluo da mucilagem, pode-se utilizar o retculo de Whipple para
auxiliar na contagem. Caso as colnias sejam muito densas, e levando-se em conta que estas
podem possuir vrias camadas de clulas, pode-se multiplicar o nmero de clulas contado em cada
quadrado do retculo por 2, ou pelo nmero de camadas existentes, para obter uma estimativa mais
precisa.

Quanto s filamentosas, caso no seja possvel a visualizao das clulas em aumento de 40X, pode
ser medido o comprimento do tricoma e, com auxlio de bibliografia especializada, verificar o
comprimento celular e assim estimar o nmero de clulas por tricoma.

7.4.3 Clculo para contagens realizadas em cmara de Sedgwick-Rafter
A contagem de organismos de uma faixa horizontal corresponder ao nmero de organismos contidos
no retngulo cuja largura ser delimitada pelo retculo de Whipple (que igual a 380m, ou 0,038cm, no
exemplo citado no item 7.3.1) e o comprimento ser o da prpria cmara (5cm). A rea desse retngulo
do exemplo ser igual a 0,19cm
2
. Como a rea da cmara de Sedgwick-Rafter (Anexo A, figura 4) de
10cm
2
e a rea examinada de 0,19cm
2
, dividindo-se a primeira pela segunda, obter-se- o fator de
contagem para esse microscpio.

(1)

Onde:
F = fator de contagem
Colnia
Filamento
F=A/a
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A = rea da cmara

a = rea de faixa horizontal

Observao 4: As duas reas devem ser expressas na mesma unidade, no caso em cm.
Exemplo: F = 10 / 5 x 0,038 = 52,63

Para a contagem de organismos numa faixa vertical, utiliza-se o mesmo raciocnio. Neste caso, o fator
de contagem obtido com a mesma frmula acima, porm o comprimento da cmara 2 cm.

(1)

Onde:
F = fator de contagem

A = rea da cmara

a = rea da faixa vertical

Exemplo: F = 10/2 x 0,038 = 131,58

Multiplicando-se o nmero de clulas ou organismos de um mesmo gnero ou espcie encontrados em
uma faixa da cmara pelo fator de contagem, obter-se- o nmero de clulas ou organismos deste
gnero ou espcie contidas em 1mL da amostra preservada com lugol. Se a amostra foi concentrada 10
vezes, o fator de contagem ser dividido por 10 antes de se calcular o nmero de organismos por mL.
O fator de contagem de organismos em 1 ou mais campos obtido dividindo-se a rea da cmara pela
rea total dos campos delimitados pelo retculo de Whipple.

(2)

Onde:
F= Fator de contagem

A = rea da cmara

n = nmero de campos analisados

a = rea do retculo de Whipple

Exemplo: Se forem analisados 10 campos, o fator ser
F = 10/10 x (0,038)
2
= 692,52

Quando se tem uma densidade muito elevada de organismos por campo (10 ou mais), a contagem por
campos aleatrios, utilizando-se uma rea menor, mais indicada do que a por transectos, que
demanda maior tempo e esforo. O nmero de campos ir depender da densidade da amostra e da
acuracidade desejada.

O nmero de organismos/mL ou clulas/mL calculado multiplicando-se o nmero de unidades
contadas pelo fator de contagem. Quando a amostra fixada com formol 2%, este representa 5% do
volume total da amostra, e nesse caso, o fator deve ser dividido por 0,95.

F = A/ n . a
F=A/a
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7.4.4 Clculo para contagens realizadas em cmara de Utermhl
Em microscpio invertido pode-se fazer a contagem da cmara por transectos correspondentes ao
dimetro da cmara, e multiplicar pelo fator de concentrao, obtendo-se o nmero de organismos. A
determinao do fator de concentrao feita dividindo-se a rea da cmara pela rea total dos
transectos lidos.

Exemplo: Um invertoscpio com objetiva de 40X e ocular de 10X, equipado com retculo de Whipple
que mede 192m de lado. A rea interna de uma cmara de invertoscpio corresponde de um crculo
cujo dimetro igual a 2,6cm.
Portanto:

(3)

Onde:
A= rea da cmara de Utermhl

R= raio da cmara de Utermhl

= 3,1416

A= 3,1416 x (1,3)
2
= 5,3093cm
2

O transecto ter 0,0192cm de largura (lado do retculo de Whipple) por 2,6cm de comprimento (dimetro
da cmara).

Assim:

(4)

Onde:
F = Fator de concentrao

A = rea da cmara de Utermhl = 5,3093cm
2

a'' = rea de um transecto = 0,0192 x 2,6 = 0,0499cm
2

v= volume da cmara (mL)

Em uma cmara com volume de 2mL para a qual foram lidos dois transectos, teremos:

a = 0,0499 x 2 = 0,0998

F =
2
0998 , 0 / 3093 , 5
= 26,5997= 26,60

Multiplicando-se o fator assim obtido pelo nmero de organismos ou clulas encontrados nos dois
transectos, ter-se- o nmero de organismos ou clulas por mL de amostra preservada com lugol. A
localizao de um transecto na cmara feita pelo retculo de Whipple, superpondo-o a borda da
cmara. A partir deste ponto, inicia-se o exame at que o retculo atinja o outro lado da cmara. Quando
a amostra preservada com formol 2%, este representa 5% do volume total da amostra. Neste caso,
para o clculo do fator, deve-se subtrair 5% do volume da cmara.
A =R
2

F =
A / a''
v
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Observao 5: Transectos facilitam a contagem pela maior rapidez e porque minimizam os efeitos da
distribuio no-homognea dos organismos na amostra, j que raramente a sedimentao
totalmente homognea, tendendo a concentrar organismos mais na borda ou no centro. Devem ser
contados tantos transectos quanto forem necessrios para se atingir o nmero mnimo de
organismos/clulas, definido pelo limite de erro aceitvel; portanto, devem ser calculados fatores de
concentrao que reflitam o nmero de transectos lidos.

7.5 Estimativa de biomassa: clculo de UPA
Em exames de gua para abastecimento, alm da contagem e identificao, pode ser calculada a rea
de cada organismo, sendo adotada para isso uma unidade padro de rea (UPA), cujo valor 400
2
.

Utiliza-se um fator de correo para o retculo de Whipple do microscpio, para a unidade padro 400
2
.
Por exemplo, se o quadrado menor do retculo de Whipple medisse 20 de lado, sua rea seria
exatamente a de 1UPA. Como difcil adaptar o microscpio de tal forma que a rea do quadrado
menor seja de 1UPA, calcula-se o fator de correo da seguinte maneira: para um retculo que possua
380 de lado, o quadrado menor ter 7,60 de lado. A rea deste quadrado menor ser de 57,76
2
.

Dividindo-se 400
2
por 57,76
2
verifica-se que a rea deste quadrado 6,93 vezes menor que 1UPA,
portanto 6,93 ser o fator de correo.

Durante o exame, cada alga superposta aos quadrados pequenos do retculo de Whipple, anota-se o
nmero de quadrados que ela ocupa. Como no exemplo acima, cada quadrado tem uma rea 6,93
vezes menor que 1UPA. Dividindo-se o nmero de quadrados ocupados por uma alga por 6,93, tem-se
o nmero de UPA que ela realmente ocupa.

7.6 Estimativa do erro na contagem
Na determinao do nmero de organismos fitoplanctnicos presentes em uma amostra procura-se,
para assegurar a representatividade da mesma, que o nmero quantificado seja o mais prximo
possvel do tamanho da populao natural. No entanto, em funo dos erros inerentes ao mtodo,
procura-se avaliar a probabilidade de que o valor medido se encontre, dentro de certos limites, em torno
do valor verdadeiro. Ao se iniciar a contagem, essencial avaliar o nvel de preciso requerido para a
determinao em questo. importante verificar se a distribuio dos organismos no fundo da cmara
aleatria, e caso no seja, preciso fazer uma nova cmara.

Para um limite de confiana de 95%, o erro de contagem expresso em porcentagem pode ser estimado
pela frmula:

(5)

Onde N o nmero de unidades contadas (organismos ou clulas).

7.7 Identificao dos organismos fitoplanctnicos
O nvel de identificao depende dos objetivos do estudo e do treinamento dos analistas. O treinamento
de tcnicos para a contagem de fitoplncton, mesmo com experincia anterior em microscopia e
conhecimento prvio de morfologia celular, demorado, at para identificao apenas em nvel de gnero.

As espcies dominantes, ou problemticas, devem ser avaliadas em nvel especfico.

Para estudos mais gerais e monitoramento de estaes de tratamento pode-se utilizar identificao em
nvel de gnero, porm estudos ecolgicos requerem identificao em nvel especfico.

Conforme discutido no item 6.2, para a correta identificao de espcies de cianobactrias filamentosas,
diatomceas e flagelados, importante a observao prvia da amostra no preservada, pois o tipo de
movimento pode ter carter taxonmico e a forma e colorao podem ser alteradas na preservao.

erro de contagem (%) = x 100 %

2
N
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Aps reconhecimento da amostra viva, procede-se a preservao, identificao e contagem dos
organismos.

Para a identificao dos organismos deve ser utilizada bibliografia especializada (Referncias bsicas
para identificao do fitoplncton de gua doce).

8 Expresso dos resultados

A seguir sero apresentadas as maneiras de expresso dos resultados.

8.1 Exame qualitativo e semi-quantitativo
O resultado do exame da comunidade fitoplanctnica de um manancial pode ser expresso
qualitativamente, por meio da listagem dos txons observados na amostra analisada, ou semi-
quantitativamente, pela frequncia ou abundncia relativa dos organismos presentes na amostra,
quando no h condies de avaliar o volume da amostra. Neste ltimo caso a quantidade de
organismos presentes na alquota contada convertida para frequncia de ocorrncia, segundo a
expresso:

(6)

Onde:
Sp
i
= espcie i

N
i
= nmero de organismos da espcie i

N = nmero total de organismos na alquota.

8.2 Exame quantitativo
O resultado do exame de fitoplncton em mananciais expresso geralmente em nmero de
organismos/mL. O resultado do exame de fitoplncton em guas para abastecimento pode ser
expresso, alm do nmero de organismos/mL, em nmero de UPA/mL ou de clulas, como cls./mL.

Observao 6: Certos tipos de organismos, quando excedem determinado nmero de UPA/mL ou
nmero de clulas, podem causar problemas de sabor e/ou odor, obstruo de filtros e/ou toxicidade na
gua.

9 Controle laboratorial e estocagem

Para uma eventual necessidade de re-ensaio ou exame complementar, sugere-se que uma
subamostra seja mantida em um frasco devidamente etiquetado. A etiqueta deve conter todas as
informaes necessrias para a pronta identificao da amostra. recomendado manter um registro
de todas as amostras analisadas e estocadas. A estocagem, especialmente de amostras preservadas
com lugol, deve ser no escuro, com reposio peridica do conservante que tem durao de at 3
meses. O prazo de estocagem depende do preservativo utilizado e do armazenamento adequado, e
pode variar de meses (amostras preservadas com lugol) a alguns anos (amostras preservadas com
formol).

10 Registro de dados e apresentao dos resultados

% Sp
i
=

Ni x 100
N
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17/24

O laboratrio deve manter um sistema informatizado, com possibilidade de backup, para fazer o
registro e armazenamento dos dados analisados. O sistema deve permitir que os resultados sejam
apresentados na forma de Boletim de Anlise impresso ou eletrnico (Anexo D).

11 Referncias bsicas para identificao do fitoplncton de gua doce

ANAGNOSTIDIS, K.; KOMREK, J. Modern approach to the classification system of cyanophytes: 1
introduction. Arch. Hydrobiol., Algological Studies, v. 38/39, p. 291-302, 1985. Suppl. 71.

_____. Modern approach to the classification system of cyanophytes: 3 oscillatoriales. Arch.
Hydrobiol., Algological Studies, v. 50-53; p. 327-472, 1988. Suppl. 80.
BOURRELLY, P. Les algues deau douce: initiation la systematique. Paris: N. Boube,1968. Tome 2:
Les algues jaunes et brunes. 438 p.

_____. Les algues deau douce: initiation la systematique. Paris: N. Boube, 1970. Tome 3: Les
algues bleues et rouges. 512 p.

_____. Les algues deau douce: initiation la systematique. Paris: N. Boube, 1972. Tome 1: Les
algues vertes. 569 p.

DILLARD, G. E. Common freshwater algae of the United States: an illustrated key to the genera
(excludingthe diatoms). Berlin: J. Cramer, 1999. 173 p.

ETTL, H. Xantophyceae. Stuttgart: Gustav Fischer, 1978. 530 p. (Swasserflora von Mitteleuropa,
band 3, teil 1)

GEITLER, L. Cyanophyceae. In: RABENHORST, L. (Ed.). Rabenhorsts Kryptogamen-Flora von
Deutschland, sterreich und der Schweiz. Leipizig: Akademische Verlagsgesellchaft, 1932. v. 14, p.
1356.

HUBBER-PESTALOZZI, G. Das phytoplankton des swassers: systematik und Biologie. Unter
Mitwirkung von Fachgenossen herausgegeben von Dr. August Thienemann. Stuttgart: E.
Schweizerbartsche, 1938. 342 p. (Die Binnengewsser: Einzeldarstellungen aus der Limnologie und
ihren Nachbargebieten, band 16, teil 1).

_____. Das phytoplankton des swassers: Cryptophyceae, Chloromonadophyceae, Dinophyceae.
Unter Mitwirkung von Fachgenossen herausgegeben von Dr. August Thienemann. Stuttgart: E.
Schweizerbartsche, 1968. 322 p. (Die Binnengewasser: Einzeldarstellungen aus der Limnologie und
ihren Nachbargebieten, band 16, teil 3, auflage 2).

_____. Das phytoplankton des swassers: Euglenophyceen. Unter Mitwirkung von Fachgenossen
herausgegeben von Dr. August Thienemann. Stuttgart: Schweizerbartsche, 1955. 606 p. (Die
Binnengewasser: Einzeldarstellungen aus der Limnologie und ihren Nachbargebieten, band 16, teil 4).

_____. Das phytoplankton des swassers: Chlorophyceae (Grnalgen) Ordnung: Volvocales. Unter
Mitwirkung von Fachgenossen herausgegeben von Dr. August Thienemann. Stuttgart:
Schweizerbartsche, 1961. 744 p. (Die Binnengewasser: Einzeldarstellungen aus der Limnologie und
ihren Nachbargebieten, band 16, teil 5).

_____. Das phytoplankton des swassers: Chrysophyceen. Unter Mitwirkung von Fachgenossen
herausgegeben von Dr. August Thienemann. Stuttgart: E. Schweizerbartsche, 1976. 365 p. (Die
Binnengewsser: Einzeldarstellungen aus der Limnologie und ihren Nachbargebieten, band 16, teil 2,
hlfte 1).
JOHN, D. M.; WHITTON, B. A; BROOK, J. A. (Ed.). The freshwater algal flora of the British isles: an
identification guide to freshwater and terrestrial algae. United Kingdon: Cambridge University, 2002. 702 p.
Cod.014-verso 01 28/02/2002
18/24

KOMREK, J.; ANAGNOSTIDIS, K. Modern approach to the classification system of cyanophytes. 2
Chroococcales. Arch. Hydrobiol., Algological Studies, v. 43, p. 157-266, 1996. Suppl. 73.

KOMREK, J.; ANAGNOSTIDIS, K. Cyanoprokaryota: Chroococcales. Jena: Gustav Fischer, 1999.
548 p. (Swasserflora von Mitteleuropa, band 19, teil 1).

KOMREK, J.; FOTT, B. Chlorophyceae (Grnalgen) Ordnung Chlorococcales: das phytoplankton
des swassers. Stuttgart: E. Schweizerbartsche, 1983. 1044 p. (Die Binnengewsser, band 16, teil 7,
hlfte 1).
KRAMMER, K.; LANGE-BERTALOT, H. Bacillariophyceae: Naviculaceae. Jena: Gustav Fischer, 1997.
876p. (Swasserflora von Mitteleuropa, band 2, teil 1).

_____. Bacillariophyceae: Bacillariaceae, Epithemiaceae, Surirellaceae. Jena: Gustav Fischer, 1997.

_____. Bacillariophyceae: Centrales, Fragilariaceae, Eunotiaceae. Stuttgart: Gustav Fischer, 1991.

_____. Bacillariophyceae: Achnanthaceae. Stuttgart: Gustav Fischer, 1991. 437p. (Swasserflora von
Mitteleuropa, band 2, teil 4).

_____. Bacillariophyceae. Heidelberg: Spektrum Akademischer Verlag, 2000. 311p. (Swasserflora
von Mitteleuropa, band 2, teil 5).

PASCHER, A. Volvocales -Phytomonadinae. Flagellatae IV -Chlorophyceae. 1 In: HUBER-PESTALOZZI.
Swasser flora Deutschland, Osterreichs und der Schwweiz. Jena: Gustav Fischer, 1927. 506 p.

SMITH, G.M. The freshwater algae of the United States. New York: McGraw-Hill, 1950. 719 p.

WEST, W.; WEST, G.S. A monograph of the british desmidiaceae. New York: Johnson, 1971. 5 v.

12 Referncias

APHA; AWWA; WEF. Standard methods for the examination of water and wastewater on line.
Washington, DC, c2006. Disponvel em: <http://www.standardmethods.org>. Acesso em: fev. 2013.

ARAJO, A.P. Desenho 2.dwg. Dados eletrnicos (1 arquivo: 63 KB). So Paulo, 2012. AutoCAD 2004.

BICUDO, C.E.M.; BICUDO, D.C. (Org.). Amostragem em limnologia. 2.ed. So Carlos: RiMa, 2004.

BOX, J. D. Enumeration of cell concentration in suspension of colonial freshwater microalgae, with
particular reference to Microcystis aeruginosa. Br. Phycol.J., v. 16, p. 153-164, 1981.

BRASIL. Ministrio do Meio Ambiente. CONAMA. Resoluo n 357, de 17 de maro de 2005. Dispe
sobre a classificao dos corpos de gua e diretrizes ambientais para o seu enquadramento, bem como
estabelece as condies e padres de lanamento de efluentes, e d outras providncias. Dirio
Oficial da Unio: Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia, DF, n. 53, 18 mar. 2005.
Seo 1, p. 58-63. Disponvel em :

BRASIL. Ministrio da Sade. Portaria n 2914, de 12 de dezembro de 2011. Dispe sobre os
procedimentos de controle e de vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de
potabilidade. Dirio Oficial da Unio: Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia, DF, n.
Cod.014-verso 01 28/02/2002
19/24

239, 14 dez. 2011. Seo 1, p. 39-46. Disponvel em:

BRANDO, C. J. et al. (Org.). Guia nacional de coleta e preservao de amostras: gua, sedimento,
comunidades aquticas e efluentes lquidos. So Paulo: CETESB; Braslia: ANA, 2011. 325 p.
Disponvel em:
<http://www.ana.gov.br/bibliotecavirtual/arquivos/20120321181900_Guia_Nacional_de_Coleta.pdf>.

CETESB. L5.303: Determinao de fitoplncton de gua doce mtodos qualitativo e quantitativo:
mtodo de ensaio. So Paulo, 2005. 23 p.

CHORUS, I.; BARTRAM, J. Toxic cyanobacteria in water: a guide to their public health consequences,
Monitoring and Management. London: E&FN Spon, 1999. 416 p.

HOPKINS, G. J.; STANDLKE, S. J. Phytoplankton methods manual with special emphasis on
waterworks operation internal. Ontario: Ministry of the Environment, 1992.

HTZEL, G. J.; CROOME, R. A phytoplankton methods manual for australian freshwaters.
Camberra, Austrlia: Land and Water Resources Research and Development, 1999.

JARDIM, F. A. et al. Metodologia para a contagem de cianobactrias em clulas/mL: um novo desafio
para o analista de laboratrio. Revista Engenharia Sanitria e Ambiental, Rio de Janeiro, v. 7, n
o
. 3 /4,
p. 109-111, 2002.

LAWTON, L. et al. Determination of cyanobacteria in the laboratory. In: CHORUS I.; BARTRAM, J.
Cyanobacteria in water: a guide to their public health consequences, monitoring and management.
London: E&FN Spon, 1999. 416 p.

REYNOLDS, C. S.; JAWORSKI, G. H. M. Enumeration of natural microcystis populacions. Br. Phycol.
J., v. 13, p. 269-277, 1978.

.../Anexo A
Cod.014-verso 01 28/02/2002
20/24

Anexo A Figuras dos acessrios para anlise de fitoplncton

Figura 1 Retculo de Whipple.


Figura 2 Cmaras de Utermhl de 2 mL

Fonte: Araujo (2012).

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Figura 3 Cmaras de 10 mL e 5 mL

Figura 4 Cmara de Sedgwick Rafter

.../Anexo B

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Anexo B Exemplo de ficha de anlise para contagem de clulas de cianobactrias
No. da amostra: _____________ Data da Anlise :_______________________
Local de Coleta: _______________________________ Preservao:___________________________
Fator de Concentrao (F.c): Erro de Contagem:
N
2
X100 = _______________
Analista: ___________________

CONTROLES: Ausncia de bolhas: Distribuio homognea: Boa sedimentao:

SEDIMENTAO Incio:________ LEITURA Campos: TRANSCRIO: Data:__________
Trmino:______ Transectos : VERIFICAO: Data:_________

CIANOBACTRIAS(1) No. Cls. (2) TOTAL (1) x (2) x F.c.
Aphanizomenon 1

Cuspidothrix

Aphanocapsa 1

Aphanocapsa 2

Dolichospermum-Anabaena 1

Dolichospermum - Anabaena 2

Cylindrospermopsis raciborskii

Cylindrospermopsis/Raphidiopsis

Geitlerinema amphibium

Microcystis 1 = 20

Microcystis 2 = 16

Microcystis 3 = 12

Microcystis 4

Sphaerocavum 1 = 20

Sphaerocavum 1 = 16

Sphaerocavum

Fonte: Adaptado do formulrio interno da CETESB (2012).
Nota: Exemplo meramente ilustrativo, os formulrios internos esto sujeitos a alteraes.
.../ Anexo C
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Anexo C Exemplo de ficha de anlise de fitoplncton
No. da amostra: _____________ Data da Anlise :_______________________
Local de Coleta: __________________________Preservao:_______________________
Fator de Concentrao (F.c): Erro de Contagem:
N
2
X100 = __________
Analista: ___________________

CONTROLES: Ausncia de bolhas: Distribuio homognea: Boa sedimentao:

SEDIMENTAO Incio:________ LEITURA Campos: TRANSCRIO:Data:__________

Trmino:______ Transectos : VERIFICAO: Data:__________

Fonte: Adaptado de formulrio interno da CETESB (2012).
.../Anexo D
Cd. Alga CIANOBACTRIAS No. Organismos No. UPA

DIATOMCEAS No. Organismos No. UPA

CLOROFCEAS No. Organismos No. UPA

FITOFLAGELADOS No. Organismos No. UPA

DINOFLAGELADOS No. Organismos No. UPA

XANTOFCEAS No. Organismos No. UPA

Observao:

Cod.014-verso 01 28/02/2002
24/24

Anexo D Exemplo de boletim de anlise de fitoplncton
SIGLA/ Nro./Ano
BOLETIM DE ANLISES
FITOPLNCTON CONTAGEM DE CLULAS DE CIANOBACTRIAS

N Amostra: 122222 N da O.S.: 22.222.222 Descrio da amostra: B1-gua Doce
Data Coleta: 02/02/12 Data Entrada: 02/02/12 Data Emisso: 12/02/12

Dados do Cliente:
Nome: CETESB
Endereo: Av. Professor Frederico Herman Jr n345
Municpio: So Paulo UF: SP

Dados de Campo:
Manancial: Reservatrio Principal Cdigo Ponto:
Local: So Paulo
Coletor: Jos

Fator de concentrao: 58.34

RESULTADOS ANALTICOS

Grupo Identificao NORG/mL

CIANOBACTRIAS

Aphanizomenon gracile 58
Aphanocapsa delicatssima 350

CLOROFICEAS

Desmodesmus comunis 117
Chlorella sp. 58

DIATOMACEAS

Aulacoseira granulata 117

FITOFLAGELADOS
Trachelomonas volvocina 58

TOTAL: 758

Nmero estimado de clulas de CIANOBACTRIAS = 820 CL./ML
Observaes:
OS DADOS DESTE BOLETIM NO SO REAIS.
Metodologia:

______________________ ____________________
BILOGO RESPONSVEL GERENTE DE SETOR
CRBio: CRBio:
REG: REG:

Este Boletim de Anlise s pode ser reproduzido por inteiro e sem nenhum alterao.
Os resultados desta anlise referem-se to somente amostra encaminhada.

Fonte: Adaptado do Boletim da CETESB (2012).

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