Concentrao de hidroxiprolina como marcador

bioqumico do dano msculo esqutico aps

treinamento de resistncia de fora.
Hydroxyproline of concentration as biomarker of muscle skeletal damage after endurance
training
NOGUEIRA,A.C.; SIMO R.; CARVALHO M.C.G.A.; VALE, R.G.S.; DANTAS P.M.S.
Concentrao de hidroxiprolina como marcador bioqumico do dano msculo esqutico aps
treinamento de resistncia de fora. R. bras. Ci e Mov. 2007; 15(2): 33-38.
Resumo: A gerao de fora elevada nas aes musculares excntricas pode afetar as estruturas
musculares e tendneas do tecido conjuntivo. Por isso, o objetivo deste estudo foi comparar a
concentrao de hidroxiprolina antes e depois de um treino de resistncia de fora em 30RM,
j que a hidroxiprolina pode ser utilizada como marcador do dano msculo esqueltico. Foi
necessrio ento, comparar o efeito agudo do treino de resistncia de fora na concentrao de
hidroxiprolina em oito homens com idades variando entre 17 e 25 anos. Uma coleta de urina
basal e trs testes de 30RM foram realizados, e aps recuperao, executaram trs sries de
30RM com outra coleta de urina feita duas horas depois. O tratamento estatstico dado para
as mdias da concentrao de hidroxiprolina de pr e ps-treino, atravs do teste t-Student
pareado, mostrou no haver diferena significativa (p>0,05). Assim, no foi possvel inferir que
houve algum dano por este mtodo de anlise.
Palavras-chave: tendo, excntrico, colgeno, hidroxiprolina, resistncia de fora.

Antonio de Carvalho Nogueira1,

Roberto Simo2,
Mauro Csar Gurgel de Alencar
Carvalho1,
Rodrigo Gomes de Souza Vale1,
Paulo Moreira Silva Dantas1,
Estlio Henrique Martin Dantas1,

Mestrado em Cincia da Motricidade Humana

(Rio de Janeiro UCB) LABIMH/ PROCIMH.
Escola de Educao Fsica e Desportos Universidade Federal do Rio de Janeiro (EEFD/UFRJ).

NOGUEIRA,A.C.; SIMO R.; CARVALHO M.C.G.A.; VALE, R.G.S.; DANTAS P.M.S.

Hydroxyproline of concentration as biomarker of muscle skeletal damage after endurance
training. R. bras. Ci e Mov. 2007; 15(2): 33-38.
Abstract: The increased force due to the concentric and eccentric muscle actions may affect
the connective tissue structures in muscle and tendon. So, this paper goal was to compare the
hydroxyproline concentration before and after 30RM muscle endurance training, since hydroxyproline can be used as a biomarker of connective tissue damage. For such it was necessary to
compare the muscle endurance training acute effect on the hydroxyproline concentration of 8
trained men whose ages varied between 17 and 25 years. A basal urine collection and a three
30RM test were performed. After the recovery, they performed three sets of 30RM and another
urine collection two hours later was taken. The statistical treatment used to compare the averages oh the hydroxyproline concentration before and after training across paired Student t-test
showed no significant difference (p>0.05). So, it is not possible to infer that there was no damage through this method of analysis.
Keywords: tendon, eccentric, collagen, hydroxyproline, muscle endurance.

Recebimento: 14/09/2006
Aceite: 21/12/2006

Correspondncia: Estrada do Lameiro, 661, casa trs. Santssimo RJ. E-mail: atpase@ig.com.br

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Hidroxiprolina como marcador bioqumico do dano msculo esqutico

Introduo
O treinamento de fora hoje o mtodo
mais utilizado para aumentar a sobrecarga
com intuito de provocar adaptaes na
musculatura esqueltica. Tal sobrecarga
pode estar relacionada a um determinado
percentual da maior carga possvel de ser
levantada em um nico movimento mximo
(1RM), ou relacionada com uma quantidade
estipulada de repeties mximas (8, 10,
12.... RM)10. O msculo-esqueltico
um tecido extremamente plstico que se
adapta rapidamente as demandas impostas.
O estmulo mecnico, como aumento
da sobrecarga, provoca adaptaes e
alteraes nas caractersticas contrteis
das fibras musculares. Com o intuito
de maximizar os ganhos de fora, aes
musculares concntricas ou excntricas
ou ainda, a combinao das duas, podem
ser empregadas para provocar alteraes
no msculo-esqueltico, principalmente
com objetivo de promover a hipertrofia
muscular. No entanto, durante as aes
excntricas, o msculo se alonga sob tenso,
distendendo assim os elementos do tecido
conjuntivo associados tanto aos tendes
quanto s clulas musculares. Em contraste,
durante as aes concntricas, apenas os
tecidos conjuntivos associados aos tendes
so distendidos9.

hidroxiprolina, quando comparados antes

e depois do treinamento, podem identificar
o grau de dano sobre o tecido conjuntivo.
O maior risco de dano muscular ocorre
durante a ao muscular excntrica intensa,
pois neste tipo de ao realiza-se trabalho de
fora e de alongamento simultaneamente,
aumentando assim o estresse sobre os
tecidos6,19. No entanto, prvias aes
musculares concntricas de alta intensidade
podem aumentar a susceptibilidade do
msculo ao dano, quando acompanhada
por aes musculares excntricas8,18.
A maioria da literatura abordada, no faz
referncia ao risco de dano sob o treinamento
de resistncia de fora com implementos
de pesos livres e sim com equipamentos
isocinticos2,5. Alm disso, os estudos
encontrados analisaram as aes musculares
concntricas e excntricas de forma isolada4.
Com isso, tm-se como objetivo verificar os
nveis de hidroxiprolina antes e depois de
um treinamento de resistncia de fora, com
velocidade controlada nas aes excntricas
e concntricas associadas.

Materiais e Mtodos
Amostra

Participaram da amostra oito homens

voluntrios (22,7 4 anos; 177 4 cm;
72,6 4,8 kg). Todos referiram serem
saudveis e fisicamente ativos, realizando
atividades de fora, pelo menos trs vezes
por semana e familiarizados com exerccios
e equipamentos utilizados neste estudo.
Para seleo da amostra respeitaram-se os
seguintes critrios de incluso: a) prtica
regular de atividades de fora h pelo menos
seis meses; b) IMC 25 Kg.m-2 evitando-se
nveis de sobrepeso que comprometessem a
qualidade de execuo dos movimentos; c)
questionrio PAR-Q negativo.

As aes musculares quando impostas

aos msculos esquelticos com sobrecarga
promovem danos aos tecidos conjuntivos,
e o aumento na excreo urinria de
hidroxiprolina indica os referidos danos
teciduais. O colgeno tem como parte
fundamental a hidroxiprolina que formada
preferencialmente atravs da oxidao da
prolina e entra no metabolismo durante
a degradao do prprio colgeno. Nesta
degradao se formam peptdeos contendo
hidroxiprolina que em parte no sofrem
Adotaram-se como critrios de excluso: a)
hidrlise posterior e so eliminados pela
20
uso
de medicamentos que tivessem influncia
urina .
sobre o comportamento das respostas
Regimes de treinamento intenso
funcionais; b) problemas osteomioarticulares
aumentam a fora de tenso no osso e no
que poderiam limitar a realizao dos
tendo e isso pode acarretar mudanas na
exerccios propostos; c) falta de familiarizao
taxa da sntese e degradao do colgeno.
com os exerccios propostos. Tambm foi
A gerao de fora elevada durante as
sugerido que o padro nas horas de sono e o
aes musculares excntricas, pode
tipo de alimentao no fossem modificadas
afetar o metabolismo do colgeno e at
do habitual. Este estudo foi apresentado ao
as estruturas musculares e tendneas do
Comit de tica em Pesquisa da Universidade
tecido conjuntivo. Portanto, os nveis de
Castelo Branco (UCB-RJ) e todos os voluntrios
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A. de C. Nogueira, et al.

assinaram um termo de consentimento, de aquecimento especfico, executado no SH e

acordo com a Resoluo 196/96 do Conselho LP respectivamente, composto por uma srie
Nacional de Sade do Brasil.
de 30 repeties com 40% da carga obtida
em 30RM. Posteriormente, realizaram-se trs
sries com carga para 30RM nos respectivos
Testes de 30RM
Os dados foram coletados em trs dias exerccios sempre na mesma ordem (SH e
distintos. Na primeira visita, os indivduos, LP). Os intervalos foram fixados em dois
aps realizarem as medidas antropomtricas, minutos e 30 segundos entre as sries e
executaram o teste de 30RM no aparelho exerccios. A velocidade de execuo foi
de leg-press 45 (LP) e supino horizontal controlada por meio de um metrnomo

(SH) com a barra longa (Fitness equipment; (Casio HS-30W ), estabelecendo-se trs
segundos
para
cada
movimento completo,
Franklin Park, IL). A incluso dos indivduos,
totalizando
90
segundos
nas 30RM. Um
nas seqncias dos exerccios testados foi
profissional
experiente
em
treinamento de
determinada na forma de delineamento
fora
acompanhou
os
voluntrios,
de modo
alternado. Aps a obteno das cargas
que
os
avaliados
conseguissem
executar
todas
mximas no teste de 30RM, os indivduos
as
repeties
dentro
do
tempo
previsto,
em
descansaram por 24 horas e foram reavaliados
cada
movimento,
e
no
tempo
total
de
cada
para obteno da reprodutibilidade das cargas
no teste de 30RM em mais dois dias, com srie. Dessa forma, os voluntrios foram
intervalo de 24 horas entre os mesmos. Para levados exausto, sem risco de reduo no
tanto, considerou-se como 30RM a maior volume total do treinamento.
carga estabelecida nos trs dias, com diferena
Anlise da Hidroxiprolina
menor que 5%. Nos intervalos entre as
sesses de testes no foi permitida a realizao
A coleta da urina para verificao da
de exerccios, a fim de evitar qualquer variao da concentrao de hidroxiprolina
interferncia nos resultados obtidos.
foi feita antes do protocolo da sesso de
Visando reduzir a margem de erro nos treinamento. Os indivduos realizaram um
testes de 30RM, foram adotadas as seguintes jejum de 12 horas (perodo da noite) e logo
estratgias14: a) instrues padronizadas aps eliminarem a primeira urina, fizeram
foram fornecidas antes do teste, de modo que uma hidratao com gua e a partir da, um
o avaliado estivesse ciente de toda a rotina perodo de duas horas foi dado para que
que envolvia a coleta de dados; b) o avaliado iniciassem a coleta nos frascos previamente
foi instrudo sobre a tcnica de execuo distribudos. A mesma foi imediatamente
do exerccio; c) o avaliador estava atento acondicionada no gelo e levada para o
quanto posio adotada pelo praticante laboratrio para anlise.
no momento da medida, pois pequenas
variaes no posicionamento das articulaes
envolvidas no movimento poderiam acionar
outros msculos, levando a interpretaes
errneas dos escores obtidos; d) estmulos
verbais foram realizados a fim de manter alto
o nvel de estimulao; e) os pesos adicionais
utilizados no estudo foram previamente
aferidos em balana de preciso. Os intervalos
entre as tentativas em cada exerccio durante
o teste de 30RM foram fixados entre dois a
trs minutos.
Procedimento para coleta de dados

No quarto dia, 48 horas aps a realizao

do ltimo teste de 30RM, os indivduos foram
submetidos sesso de treinamento para
coleta de dados. Anteriormente a conduo
do protocolo, os voluntrios realizaram

Aps a sesso de treinamento, os

indivduos aguardaram duas horas e
imediatamente aps esse tempo, realizaram
a coleta da urina, que a partir da, seguiu
os mesmos procedimentos anteriormente
citados. Vale ressaltar que neste caso a
hidratao foi feita durante os intervalos de
recuperao entre as sries.
Tratamento Estatstico

Para o tratamento dos dados, utilizou-se

um teste-t student para amostras pareadas.
Em adio, aplicou-se a ANOVA de uma
entrada para medidas repetidas, com intuito
de verificar as cargas nos teste de 30RM nos
exerccios avaliados. Os dados foram tratados
no software Statistica 5.5 (Statsoft, USA).O
nvel de significncia adotado foi de 5%.

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Hidroxiprolina como marcador bioqumico do dano msculo esqutico

Resultados
Inicialmente so ilustrados os resultados
referentes s cargas obtidas nos testes de 30RM.
No foram verificadas diferenas significativas
entre as cargas obtidas para 30RM nos
exerccios LP (p=0,256) e SH (p=0,351).
Na tabela 1, verifica-se que no pstreino as medidas da mdia e da mediana
se aproximaram. O coeficiente de variao
obteve reduo em virtude de uma diminuio
dos valores do desvio padro e da mdia. Isso
mostra uma tendncia convergncia dos
dados da amostra. A mdia de hidroxiprolina
excretada no ps-treino foi menor que a

excretada no pr-treinamento (13,3 mg/d

< 21,1mg/d). O desvio padro mostra
que a variabilidade na concentrao de
hidroxiprolina foi muito maior no pr-treino
(26,88 mg/d), do que no ps-treino (5,53
mg/d). O erro padro apresentado explica
que h uma possibilidade de erro de (9,50
mg/d e 1,95 mg/d) para o pr e o ps-treino
respectivamente. Portanto, uma menor
possibilidade de erro na concentrao de
hidroxiprolina excretados no ps-treino.
Como a amostra ficou prxima da distribuio
normal foi possvel usar testes paramtricos
para comparar as mdias.

Tabela 1 - Anlise descritiva dos nveis de hidroxiprolina em mg/d.

HP

Min

Mx

Mdia

Md

DP

EPE

Ass

Pr

4,0

Ps

5,4

Curt

CV %

86,9

21,1

13,5

26,88

9,50

22,7

13,3

14,3

5,53

1,95

2,69

7,44

127,10

0,13

-0,02

41,56

HP = Hidroxiprolina; Min = Mnimo; Mx = Mximo; Md = Mediana; DP= desvio padro; EPE = Erro
Padro; Ass = Assimetria; Curt = Curtose; CV = Coeficiente de Variao.

No grfico 1, pode-se observar a

diminuio da concentrao de hidroxiprolina
no ps-treino. Contudo, a estatstica adequada
(Teste t-Student pareado) mostrou no haver
diferena significativa entre as comparaes
do pr e ps-teste (p = 0,368).
G RF I C O 1 concentrao mdia de
hidroxiprolina pr e ps-treino.

Discusso
Diversos estudos indicam que a ao
muscular excntrica mais comumente
associada ao dano no tecido msculoesqueltico1,4,16. Portanto, era de se esperar
que um determinado grau de dano pudesse
ser observado ao final das aes musculares
excntricas associadas s aes concntricas
em 30RM com velocidade controlada.
No entanto, no verificamos na literatura
estudos que suportassem a evidncia de
dano no tecido conjuntivo aps uma sesso
de resistncia de fora em dois exerccios
distintos. O principal resultado encontrado
nesse experimento foi diminuio do nvel
da varivel hidroxiprolina no ps-treino,

mas sem ocorrer diferena significativa entre

as comparaes do pr e ps-teste.
Com o intuito de sustentar esses
resultados, buscamos na literatura estudos
com anlises similares de hidroxiprolina.
Nessa busca, encontramos dois estudos
aproximados no tempo de anlise de
urina ps-treino. Os mesmos analisaram a
concentrao de hidroxiprolina nos tempos
de 5 min. e 1h ps-treino, e como no presente
estudo, tambm no encontraram diferenas
significativas,. Esses autores justificam
seus achados hipotetizando que o tempo de
coleta ps-treino pode ter sido insuficiente
para que se detectasse uma concentrao
mais elevada de hidroxiprolina. Portanto, o
tempo de duas horas dado para a coleta de
urina e posterior anlise de hidroxiprolina
neste experimento, pode tambm ter sido
insuficiente para que se conseguisse uma
concentrao mais elevada desta varivel e
o respectivo dano no tecido conjuntivo. As
referncias supra citadas,, alm de serem
justificativas para os achados deste estudo,
tambm corroboram com outros achados.
Por exemplo: outros autores mostraram
concentrao mais elevada de hidroxiprolina
com coletas aps 24 horas do trmino
do treinamento7,15. Tais achados sugerem
que imediatamente aps a degradao do
colgeno existe a necessidade de regenerao
imediata ou do rearranjo das clulas do
colgeno e somente aps vrias horas, a

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A. de C. Nogueira, et al.

prolina ento hidrolisada e liberada na

urina como hidroxiprolina. Entende-se com
isso, que a concentrao de hidroxiprolina
logo aps, e at 2 horas depois do treino,
deve ser inferior a concentrao pr-treino,
exatamente como mostrou este estudo,
apesar do tratamento estatstico no ter
apresentado diferena significativa.
Essa hiptese pode ser fundamentada
pelas declaraes de um importante estudo13.
O mesmo relata que ocorre na literatura um
consenso no que se refere identificao da
concentrao de colgeno relacionados aos
componentes bioqumicos, que por sua vez,
so determinantes na regenerao dos danos
pelo aumento da bioatividade molecular.
Diferentemente
dos
resultados
encontrados
pelos
estudos
citados
anteriormente7,15, Brown et al., reportam que
no encontraram diferena significativa na
quantidade de hidroxiprolina plasmtica 24 e
216 horas (1 e 9 dias), ps-exerccio. Porm, a
concentrao de colgeno foi aumentada em
46,6 e 44,3% respectivamente. Contudo, tal
aumento da concentrao de colgeno, sem
identificao do aumento da hidroxiprolina
plasmtica e conseqentemente de qualquer
dano, justifica uma possvel regenerao do
dano pela alta concentrao de colgeno
encontrada. J que como referenciado, ele
determinante na regenerao dos danos.

duas horas depois de trs sries de 30RM,

para essa amostra, no foi tempo suficiente
para que se conseguisse observar, atravs
da sobrecarga aplicada, um efeito agudo
elevado na concentrao de hidroxiprolina
e conseqentemente algum grau de dano
no tecido conjuntivo. Talvez a necessidade
imediata de formao de colgeno para
regenerar o tecido conjuntivo, provavelmente
via metaloproteinases, seja prioritria e absorva
rapidamente a hidroxiprolina do meio para a
referida regenerao. Alm disso, a adaptao
dos indivduos s aes musculares utilizadas,
pode tambm no ter permitido a deteco de
uma concentrao elevada de hidroxiprolina,
e conseqentemente, algum grau de dano
no tecido conjuntivo, j que indivduos
treinados podem estar bem adaptados s
aes musculares estudadas, obtendo com
isso um efeito protetor e conseqentemente
menor mudana nos indicadores do dano
muscular5,16.

Contudo, o presente estudo apontou

algumas limitaes que podem ter interferido
nos resultados. Dentre elas destacamse o nmero de participantes, o nvel de
estresse, o estado psicolgico dos indivduos
e o jejum de 12 horas que foi controlado
pelos prprios indivduos. Entretanto
esta pesquisa levantou desdobramentos
para futuras investigaes e interessantes
questionamentos relacionados dinmica
Mackey et al., reportam que o
do processo de turnover do colgeno e da
estiramento muscular pode ser um estmulo
liberao da hidroxiprolina no sangue e
para a proliferao do colgeno. Assim,
posterior excreo pela urina. So eles:
apesar deste estudo no ter mensurado a
concentrao do colgeno, pode ser que os 1) Como ocorre esse processo de turnover e
a liberao da hidroxiprolina em funo
90 estiramentos utilizados (trs sries de
do tempo?
30 RM), tenham provocado a captao de
componentes bioqumicos, como a prolina 2) necessrio mais tempo para filtragem
nos rins de modo que haja maior
e a prpria hidroxiprolina, para aumentar
quantidade de hidroxiprolina na urina?
a concentrao do colgeno. Isso pode ter
impedido a deteco de concentraes mais
Recomendam-se ainda outros estudos
elevadas de hidroxiprolina no tempo de sobre este assunto, levando-se em
duas horas ps-treino. Sendo assim e de considerao outras formas de treinamento
acordo com os resultados encontrados na e tempos de coleta de hidroxiprolina
presente investigao, pode-se concluir que diferentes do realizado aqui.

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Hidroxiprolina como marcador bioqumico do dano msculo esqutico

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