Jos D.

Fontana

CAROTENIDES

Mestre, Doutor e Professor

Titular em Bioqumica no
LQBB-UFPR Universidade
Federal do Paran; 11 Prmio
Paranaense em C&T (1997)
jfontana@bio.ufpr.br

Sabrina V. Mendes

Nutricionista e Doutoranda
em Bioqumica na UFPR

Daniele S. Persike

PESQUISA

Mestre em Bioqumica pela

UFPR

Cores Atraentes e Ao Biolgica

Luiz F. Peracetta

Eletrotcnico do SCB-UFPR

Mauricio Passos

Bolsista AT-NS do CNPq

O Laboratrio de Quimio/Biotecnologia de Biomassa (LQBB) da UFPR ,

na dcada de 1990, acumulou experincia em Biotecnologia aperfeioando o substituto temporrio de pele humana base de celulose
bacteriana para terapia de queimaduras, otimizando a produo
microbiana de anidrido de difrutose a partir de inulina de razes de
dlia como potencial edulcorante diettico e consolidando nova
tecnologia de isolamento e purificao de acetogeninas de sementes de
anonceas (graviola) como praguicidas e antitumorais. O projeto
biotecnolgico ora reportado e pioneiro no Brasil visa, no interregno
entre 1996 e 2000, produo microbiana de carotenides oxigenados
(astaxantina) a partir de insumos nacionais de baixo custo (caldo de
cana e uria) para emprego em piscicultura e avicultura e o
encapsulamento destes pigmentos combatentes de radicais livres (e.g.,
bixina de urucum) em ciclodextrinas para incremento de sua natural
baixa solubilidade em gua e para proteo contra o ambiente fsico
desfavorvel (ar e luz).

Ocorrncia natural
Os carotenides compreendem uma
famlia de compostos naturais, dos
quais mais de 600 variantes estruturais
esto reportadas e caracterizadas, a
partir de bactrias, algas, fungos e
plantas superiores. A produo natural
mundial estimada em 100 milhes de
toneladas por ano, e encabeada
pela fucoxantina das algas fotossintticas marrons. Os mamferos no esto
bioquimicamente capacitados para a
biossntese de carotenides, mas podem acumular e / ou converter precursores que obtm da dieta (e.g., converso de -caroteno em vitamina A). No
plasma humana predominam o -caroteno e o licopeno. Os carotenides
mais comumente encontrados nos alimentos vegetais so o -caroteno (cenoura; Daucus carota), licopeno (tomate; Lycopersicum esculentum), vri40

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

as xantofilas (zeaxantina, lutena e

outras estruturas oxigenadas do milho, Zea mays; da manga, Mango
indica; do mamo, Carica papaya e
da gema de ovo) e a bixina (aditivo
culinrio e corante drmico usado
por indgenas amaznicos, obtido do
urucum, Bixa orellana). Outras ocorrncias naturais de uso culinrio so
a capsaxantina e capsorubina ( pprica, Capsicum annuum ) e a crocina
(aafro, Crocus sativus), excepcionalmente solvel em gua e um dos
raros glicosdeos diterpnicos (C20)
encontrados em plantas.
Variabilidade estrutural
e anlise laboratorial
As frmulas qumicas de parte dos
carotenides acima mencionados esto representadas na figura 1. As
respectivas coloraes vo desde o

amarelo, passando pelo laranja, at o

vermelho intenso e resultam da multiplicidade de duplas ligaes conjugadas na estrutura mais freqente do
tipo C40 e se prestam caracterizao
de cada variante estrutural por meio
da espectrofotometria no visvel com
comprimentos de onda mximos de
absoro (mx ) na faixa de 410 a 510
nm (Figura 2).
Os carotenides apresentam muitas possibilidades de ocorrncia de
isomrica geomtrica (especialmente
induzida por temperatura) e tica.
Para fins de quantificao, um extrato
organossolvente (clorofrmio; acetona; etanol) apresentando uma absorbncia de 0,25 unidades de absorbncia corresponde, aproximadamente, a uma concentrao de 1 g de
carotenide / mL em funo do coeficiente de extino A1%1cm= 2500. Uma
atmosfera de nitrognio durante o
isolamento, processamento e embalagem , via de regra, requisitada
para anular o efeito altamente daninho do oxignio sobre a cadeia polinica dos carotenos mais lbeis como
o licopeno e -caroteno. A incluso
de antioxidantes como BHT (Butylated Hydroxy Toluene), palmitato de
ascorbila ou pirogalol , por vezes,
adotada como cautela protetora na
fase final de formulao de preparaes medicamentosas ou alimentares.
Entre as metodologias alternativas para monitoramento do isolamento, purificao e determinao
quantitativa de carotenides esto a
cromatografia em camada delgada
(TLC; Figura 3) acoplada densito-

metria e a cromatografia lquida de alta

presso ou performance (HPLC; Figura
4), cujo limite de sensibilidade se situa
na faixa de 5 a 10 g de carotenide
por litro. Este tipo de anlises no
LQBB-UFPR tem indicado que na levedura rsea-alaranjada Xanthophyllomyces dendrorhous (antes Phaffia rhodozyma) a astaxantina varia de
27% a 63% dos carotenides totais.
Apelo mercadolgico
e ao biolgica
A sensao da cor um quesito de
valor na motivao do consumidor de
carnes e ovos (lembrado tambm o
apelo do mercado cosmetolgico),
alm de achar-se popularizado o conceito de que os carotenides so efetivamente saudveis. Um exemplo convincente a capacidade 250 vezes
superior da astaxantina em combater
radicais livres (espcies ativas do oxignio) quando comparado com o tocoferol. A ocorrncia de radicais
livres refere-se ao oxignio singlet
(1O2) e s ditas espcies reativas do
oxignio ou ERO(s) :
Estas ERO(s) so geradas no curso
do metabolismo normal, mas so intensificadas aps exposio a xenobiticos (e.g., pesticidas). Como efetores
malficos clivam o DNA, peroxidam
lipdios insaturados, alteram a atividade enzimtica e depolimerizam polissacardeos. O efeito global o envelhecimento e a morte celular. Compostos naturais ricos em duplas ligaes
conjugadas atuam, por seu efeito antioxidante, na destruio (seqestro,
varredura; quenching, scavenging)
destes radicais livres. Este exatamente o efeito mais benfico que os carotenides da dieta ou de formulaes
medicamentosas podem desempenhar
no organismo humano ou animal em
geral, ou seja, o seqestro e a extino
de radicais livres.
Medidas via fotoemisso indicam
que a capacidade de seqestro de
oxignio singlet por parte de carotenos e xantofilas mxima para o
licopeno, alta para astaxantina ou cantaxantina, intermediria para -caroteno ou bixina e menor para lutena e
crocina.

A base da proteo conferida por carotenides contra reaes de fotossensibilizao repousa

num mecanismo de
transferncia de
energia (physical
quenching), que devolve o oxignio singlet a seu estado basal, facilmente mensurvel por espectroscopia de fotoemisso (atravs de near-infrared;
1270 nm)
1

Figura 1: Estrutura qumica de

alguns carotenides

O2 + Car 3O2 + 3Car

somada capacidade que tem o carotenide triplet de dissipar a energia incorporada na forma de calor em favor do
ambiente, retornando a seu estado original:

Car Car+calor (energia trmica)

b) R-COO+carotenoR-COO-caroteno
e, paralelamente, sob uma tenso
adequada de oxignio, o curso das
reaes se completa como abaixo:

Particularmente malfica a gerao de radicais peroxil a partir da

reao entre as ERO(s) e os lipdios
insaturados da arquitetura da membrana celular:
R-COOH + OHR-COO+ H O
2

Um carotenide pode atuar sobre

estes radicais, segundo diferentes mecanismos de reao, resultando na
extino do radical livre inicial peroxil segundo as reaes a ou b :
a) R-COO+carotenoR-COOH+caroteno

c) caroteno + O caroteno-O-O
2

d)caroteno-O-O+R-COOprodutos inativos
Um indicativo do curso destas
reaes o fenmeno de descolorao (bleaching) experimentado pela
molcula de caroteno, diretamente
mensurvel por espectrofotometria
no visvel ou acoplando-se outras
reaes cromognicas como, p.ex.,
para o dialdedo malnico (MDA)
gerado no curso da peroxidao lipdica, pois o MDA facilmente detectvel com cido tiobarbitrico (TBA)
resultando em produto corado em

Figura 2: Espectro de
absoro de carotenides quimiossintticos e microbianos

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

41

Figura 3: Cromatografia em
camada delgada de carotenides
(TLC em cromatoplaca de slica
gel 60 Merck) corrida com
tolueno : acetato de etila :
acetona (85 : 8 : 7), inicialmente
fotografada para as cores
naturais (A) e depois nebulizada
com o reagente de p-anisaldedo
: metanol : cido sulfrico (1 : 94
: 5) a quente (B) para revelao
de todos componentes lipdicos.
Amostras: OO=triolena;
-C=beta-caroteno;
C=Cantaxantina; A1 e
A2=astaxantina; Pr e Pr=extratos
organosolventes cru e purificado
da levedura Xanthophyllomyces;
m=mistura dos padres de
astaxantina, cantaxantina e betacaroteno; Hp = extrato da alga
Haematococcus (no encistada)
CY = ster etlico do cido
apocarotenico; B = extrato de
urucum; P = extrato de pprica;
S = extrato de aafro. (Notar,
em B, a contaminao de
gorduras neutras e fosfolipdios
nas amostras Pr e P)
rosa.
A influncia do nmero de duplas
ligaes conjugadas (incluindo-se as
terminais das cabeas cclicas tipo ionona presentes no -caroteno, cantaxantina e astaxantina) na ao antioxidante e destruidora de radicais
livres pode ser comparativamente
medida utilizando-se um complexo
do tipo heme-proteina-Fe2+ como
gerador de radicais livres e TBA como
sensor final. A astaxantina revela-se
como o mais eficiente scavenger de
radicais peroxil (dose efetiva mdia
42

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

Figura 4: Cromatografia Lquida de Alta Resoluo (HPLC) em coluna

Supelcosil LC-18 com solvente isocrtico acetonitrila : clorofrmio :
metanol : gua (60 : 25 : 10 : 5, v/v/v) a 0,5 mL/min e presso de
650 psi. (Notar a dominncia de astaxantina e de -caroteno
respectivamente nos extratos organosolventes da levedura X.
dendrohous e do fungo P. blaskeleeanus)
ou ED50= 0,2 M), seguida, em ordem
decrescente de eficincia, por zeaxantina, cantaxantina, lutena, tunaxantina e -caroteno (ED50= 0,4 a 1,0 M)
atuando o -tocoferol, como composto referencial, ainda menos eficientemente (ED50 = 3,0 M).
Vrias outras reaes atestam a
polivalncia reacional protetora dos
carotenides, tais como a gerao de
radicais ction (Car+) e sua dismutao (Car + Car2+), adio (Car-OOR ) e
simples doao de hidrognio para
inativar radical hidroxila.
O on ferroso (Fe2+), ainda que
essencial para a estruturao de cromoprotenas fundamentais no transporte de gases e eltrons (hemoglobina e mioglobina; citocromos), exerce
eficiente catlise na decomposio da
gua oxigenada, gerando ERO ainda
mais danosa do que o prprio perxido: o radical hidroxila:
Fe2+ + H2O2 + H+Fe

3+

+ H2O + OH

cal livre relativamente estvel de forte

colorao azulada e suficientemente
solvel nos lcoois miscveis com gua
(e.g., isopropanol 25%):
(DPPH)+carotenide (DPPH):H+carotenideox
sendo que mesmo uma soluo clorofrmica 0,5 mM de DPPH, num intervalo de 10 min, progressivamente descorada pela adio de igual volume de
soluo isomilimolar de bixina. Alternativamente, construimos um ozonizador, no qual o O3 gerado numa cuba
envoltria para aquela que contem a
soluo de carotenide, propiciando o
contato da atmosfera de gs oxidante e
evitando a imerso dos eletrodos na
cuba reacional central. Abaixo est
esquematizada uma das possveis reaes iniciais entre carotenide e o
oznio:

Esta a clssica reao de Fenton,

particularmente eficiente na degradao oxidativa de carboidratos.No curso das reaes de interao entre caroteno e radicais livres, vrios produtos do tipo epxido podem ser
gerados (e.g.,5,6-epoxi-,-caroteno e
o 5,6,5,6-diepoxi-,-caroteno).
A ttulo de ensaios para acompanhar a eficincia comparativa de carotenides selecionamos, por um lado, a
difenipicrilhidrazina (DPPH; um radi-

Por ao do arco gerador de oznio

(3 kVolts), no interregno total de tempo de 25 minutos, a efincia de ozonlise foi maior com astaxantina (t1/2 = 6
min) do que com bixina (t1/2 = 14 min,
amplificado para > 28 min quando a
bixina pr-encapsulada em -ciclodextrina como capa protetora molecular).
Nos animais, a concentrao de
carotenides coloridos em determinados tecidos (pele, plumas, carapaa),
alm da proteo anti-oxidante, inte-

diceto--caroteno), presente na levedura basidiomiceta rseo-alaranjada

Xanthophyllomyces dendrorhous (antes Phaffia rhodozyma) e a cantaxantina (4,4-diceto--caroteno), pigmento das plumas do flamingo, do guar
maranhense e do champignon Cantharellus cinnabarinus. Somente para
o par astaxantina e cantaxantina, o
mercado internacional alcanar, no
ano 2000, a notvel cifra de US$ 150
milhes, dada sua crescente absoro pelas atividades industriais de
aquicultura (fish farming) e avicultura. A via microbiolgica de produFigura 5: Avaliao de mercado em intervalos quinqeniais para a
o de carotenides de interesse coproduo mundial por ano de astaxantina mais cantaxantina {grfico
mercial, quando comparada contraa partir dos dados de K. L. Dean, Industrial Bioprocessing 14(5): 4-5 :
parte oriunda de sntese qumica,
o incremento da via biotecnolgica projetado para o ano 2000 em
vem alcanando progressiva aceitarelao a 1996 de 100% comparativamente a 45% alcanado pela
o expressa por uma duplicao do
via quimiossinttica)
porte de mercado a cada quinqunio
(Figura 5). Conforme demonstrado
gra a complexa rede de sinais de se. Diferentemente do -caroteno, uma pelo LQBB da UFPR (tese de doutocomunicao envolvidos na atrao, xantofila como a astaxantina (di-hi- rado da Profa. Tania M.B. Bonfim, coadvertncia e camuflagem. Como droxi-di-ceto--caroteno) interage forexemplo, no peixe Gastrosteus acule- temente com carreadoatus, a progressiva pigmentao ala- res naturais (carotenoproranjada do abdmen no macho indi- tenas) atravs de stios de
ca para a fmea a aptido para o acomodao em certos doacasalamento, enquanto que, para mnios da molcula prooutros machos, sinal de advertncia tica para as cabeas pode defesa de uma base territorial. A larizadas (oxigenadas) do
vitamina A ou retinol (derivado dire- pigmento. o caso da
to do -caroteno mediante cisso e firme fixao da astaxantioxidao) est envolvida no proces- na na carne do salmo e
so de viso, reproduo e desenvol- na carapaa de crustceos
vimento normal da pele. Nos vege- como o camaro e a latais, concentrados nos cloroplastos, gosta. O binding e dissociao do
os carotenides esto envolvidos na pigmento so acompanhados de efeiFigura 7: Crescimento (biomassa)
captao e transferncia da energia to batocrmico: as carapaas frescas
e pigmentao celular (astaxantiluminosa no processo de fotossnte- de crustceos nos parecem mais cinnognese da levedura basidiomiza-azuladas enquanto que, aps o ceta X. dendrorhous (antes P. rhocozimento, se tingem mais fortemente dozyma) cultivada em meio lquiem vermelho-rosado.
do base de caldo de cana bruto
Via alternativa de obteno:
biotecnologia microbiana

Figura 6: Trs modelos de microorganismos carotenognicos.

(Esq.) cultivo em placa (caldo de
cana + uria) da levedura P.
rhodozyma, hoje X. dendrorhous
(acima) e de uma bactria carotenognica do solo (abaixo).
(Dir.) microfotografia tica de
um cisto pigmentado da alga H.
pluvialis

O -caroteno ou pr-vitamina A,
como alternativa sntese qumica,
pode ser obtido de cepas geneticamente melhoradas dos fungos filamentosos Blakeslea trispora e
Phycomyces blaskeleeanus, um avano biotecnolgico obtido pelo grupo
de E. Cerd-Olmedo, em Sevilha, na
Espanha. Dentre os carotenides mais
intensamente oxigenados destacamse a astaxantina (3,3-dihidroxi-4,4-

diludo a 1:10 e suplementado

com concentraes crescentes de
uria, durante 5 dias a 26oC e 100
rpm de agitao.
{ Dada a forte associao do carotenide com as clulas, estas,
aps liofilizao, foram embebidas
com dimetilsulfxido (DMSO) por
h e, em seguida, extradas com
acetona, seguida de uma mistura
de clorofrmio : metanol 2:1 para
fins de quantificao espectrofotomtrica dos pigmentos carotenides }
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

43

Figura 8: Esquema da complexao entre -ciclodextrina e do

ster etlico do cido apocarotenico, um aditivo para raes
destinadas alimentao de
frangos e ao reforo da pigmentao da carne e ovos
orientada pela Profa. Miriam B. Chociai;
1999), a levedura Xanthophyllomyces
(Figura 6) pode ser cmoda e economicamente cultivada para a produo de
astaxantina em caldo de cana bruto e
uria (Figura 7) ou em bagao de cana
hidrolisado. Mesmo a vinhaa, um subproduto poluidor da indstria sucroalcooleira, tem um efeito benfico no
incremento da biossntese de astaxantina. Nos cultivos adicionados de 0,1 a
0,5 mL% de vinhaa, o teor de astaxantina, em g / g clulas, aumenta de 120
(caldo de cana no suplementado) para
420. A possvel explicao a presena
de mevalonato no vinhoto, um precursor natural de carotenides. Estes procedimentos biotecnolgicos tiram vantagem de duas enzimas-chaves abundantes na levedura, a invertase e a
urease, e tambm da excepcional habilidade bioqumica desta levedura, qual
seja, a capacidade de fermentao de
vrios dissacardeos presentes ou derivados de biomassa, tais como lactose,
celobiose, xilobiose e maltose. Outro
resultado relevante encontrado no
LQBB-UFPR foi o incremento ainda
maior da astaxantinognese quando o
caldo de cana suplementado com
pequeno teor (< 0,1g%) de gruposchaves de aminocidos glicognicos ou
cetognicos. Em relao suplementao com 0,1% de uria + fosfato de
sdio, as misturas de aminocidos vali44

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

na / treonina / metionina / leucina ou

de tirosina / triptofano / cistena propiciam pigmentao carotenide 10% ou
50% superiores, respectivamente. Noutra simplificao experimental, 0,1g%
de glutamato (e.g., molhos do tipo
Shoyu) resultou em pigmentao equivalente obtida com a mistura 0,1% de
extrato de levedura + extrato de malte,
dois insumos de custo elevado para
fermentaes industriais. Tambm como
alternativa vlida para substituir a proteose / peptona como fonte de N (suplemento caro) consolidamos a farinha
de soja ou aparas de couro (subproduto
de curtume, de baixssimo custo). Interessante ressaltar que tais aparas, a
exemplo de outros resduos colagenosos, so ricas em glicina (ca. 30%), um
aminocido exclusivamente glicognico. Como derradeira alternativa para
suprir nitrognio levedura foi tambm
empregada a milhocina (CSL = Corn
Steep Liquor), um subproduto do processamento do milho contendo 40% de
slidos totais e correspondendo gua
de lavagem e embebio dos gros
quando do fracionamento em amido e
germe (leo). Em relao ao caldo de
cana no suplementado, a milhocina
pode duplicar ou triplicar o teor da
carotenodes totais se adicionada na
base de 0,1 ou 0,2mL%.
Para contemplar, num pas que colhe > 200 milhes de toneladas de cana
de acar por ano-colheita, uma viso
biotecnolgica integral do emprego
desta agrocommodity, bagao de cana
(125 kg de peso seco por ton de cana
fresca; alto excedente nas usinas de
aucar) foi separado em cerne e casca
previamente hidrolisados com enzimas
celulolticas comerciais (CelluclastR). Os

Figura 9: Hidrossolubilidade do
ster etlico do cido apocarotenico induzida pela complexao
com -ciclodextrina. (A) o carotenide insolvel em gua; (B) soluo de -ciclodextrina; (C) complexo hidrossolvel carotenide /
ciclodextrina

acares simples derivados da celulose

e hemicelulose (glucose, celobiose; xilose, xilobiose), foram utilizados como
fonte de C alternativa sacarose do
caldo de cana. A casca resultou em
padro de pigmentao levemente superior ao miolo do bagao e ambos os
resultados foram similares aos obtidos
com o caldo. Final e curiosamente, o
acar mascavo (cristais de castanho a
marrom, obtidos na coco e concentrao do caldo de cana nativo), na mesma
concentrao, resulta em produo de
astaxantina cerca de 20% superior em
relao ao caldo de cana nativo que lhe
d origem. O melao de cana (gua-me
da cristalizao da sacarose) igualmente
se presta ao cultivo e pigmentao de
Xanthophyllomyces. Outros microrganismos passveis de explorao para
astaxantina so a alga clorofcea unicelular Haematococcus pluvialis (figura 6dir.) e a bactria marinha Agrobacterium
aurantiacum. Na alga, tratamos de induzir o encistamento, pois, nesta fase,
onde dispara a biossntese de astaxantina.
Valorizao biotecnolgica
Como regra geral, os carotenides
so lipossolveis. No plasma de mamferos so transportados em associao
s lipoprotenas. Excepcionalmente adquirem alguma hidrossolubilidade como
resultado de processos oxidativos ou
derivatizaes naturais como no caso da
norbixina do urucum (ambas funes
carboxilas terminais demetiladas) e dos
carotenides sulfatados de organismos
marinhos. Do ponto de vista biotecnolgico, a obteno de derivados hidrossolveis de carotenides uma interessantssima perspectiva comercial e no LQBBUFPR tais complexos tm sido obtidos
por meio do encapsulamento em , ou
-ciclodextrinas (Figura 8) ou seja hexa, hepta ou octa-maltossacardios cclicos
derivados do amido que ainda podem
ser modificadas quimicamente (metilao, hidroxipropilao) para incremento de propriedades como a hidrossolubilidade e capacidade de captao de
substncias lipoflicas de interesse farmacolgico, cosmtico ou culinrio. Em
nossa experincia, a RAMEB (Random
Methylated -CycloDextrin) e a HP-CD (HydroxyPropyl--CycloDextrin)
tm se revelado as estruturas mais aptas

na captao oclusiva de pigmentos carotenides de interesse mdico-farmacutico. Nas figuras 8 e

9 representa-se o fenmeno do
encapsulamento e a conseqncia desejvel: formulaes caracterizadas pela hidrossolubilidade
e que, absorvidas a partir da dieta,
podem, lenta e progressivamente,
liberar o pigmento dentro do organismo consumidor.
A estratgia de encapsulamento, alm da liberao modulada
do princpio carotenide retido
na cavidade funcional da ciclodextrina, propicia mecanismo protetor de alta eficincia justamente contra
os fatores ambientais que so altamente
destrutveis estrutura nativa e livre dos
carotenos: vapores cidos ou oxidantes,
luz, calor e oxignio. A combinao destes fatores leva, indubitavelmente, gerao de alteraes estruturais, as quais, no
obstante a manuteno da cor (ainda que
alterada) podem no mais responder pela
propriedade biolgica otimizada desejada. Na figura 10 esto nossos dados
quanto estabilidade da bixina de urucum frente a diferentes ambientes fsicos:
a combinao oxignio (ar) e luz a mais
deletria. O urucum uma fonte fitofarmacutica cujo plantio e explorao experimenta crescimento no pas e, para
alguns preparados comerciais (anatto),
atribui-se tambm uma ao hiperglicemiante.
No Brasil, uma iniciativa de produo
de ciclodextrinas acha-se em avano no
grupo de Engenharia Qumica da FUEM
(Maring, PR), o que pode viabilizar uma
indstria nacional de novos biofrmacos,
j que a matria-prima (amido de mandioca) intensamente cultivada nesta zona
geogrfica.
Como o projeto de pesquisa aplicada
que est sendo desenvolvido no LQBBUFPR pretende o domnio de uma vertente biotecnolgica que contemple, alm do
pleno uso de cana-de-acar, tambm
uma aplicao completa da biomassa celular de Xanthophyllomyces, foi avaliada a
qualidade nutricional da protena unicelular (SCP = Single Cell Protein) da levedura. Os valores encontrados para 17
aminocidos foram similares aos obtidos
com o levedo de panificao ou cervejaria
(Saccharomyces), exceto pelo teor um
pouco inferior de metionina (1.5 versus
2.2%), mas nossa anlise no incluiu o

lular da levedura, facilitando

ou incrementando o acesso
ao pigmento intracelular para
os animais alimentados com
a mesma.
Agradecimentos

Figura 10: Influncia do

ambiente fsico na degradao da
bixina. Amostras de soluo
clorofrmica de bixina foram
separadamente submetidas s
condies fsicas explicitadas na
figura e as respectivas anlises
espectrais no campo do visvel
executadas ao 6 dia de
experimentao. {Na exposio
cumulativa e mais adversa (luz +
O2) cerca de 40% da bixina
sofreu degradao}

teor especifico de cisteina, o outro

aminocido sulfurado. Todos os 8
aminocidos essenciais (no sintetizados pelo homem) mais os 2 semiessenciais (biossintetizados aqum
da necessidade diria) esto presentes nos hidrolisados da proteina de
Xanthophyllomyces. Cromatografias
preliminares (revelao com vapores
de iodo, confirmando os perfis das
amostras Pr versus OO da Fig. 3-B)
indicam que a matria lipdica principal da levedura (TAG = triacilgliceris e PL = fosfolipdios) predominantemente insaturada, outro ponto
favorvel para o emprego da levedura integral na formulao de raes
animais para aquacultura e avicultura
ou de neo-alimentos para consumo
humano. Prosseguem no LQBB, como
etapas sendo desenvolvidas e a vencer, dois desafios: a) obteno de
mutante de Xanthophyllomyces estvel e hiperprodutora de astaxantina
(e.g., via mutagenizao com nitroso-compostos) e b) co-emprego de
enzima ou complexo hidroltico que
rompa ou permeabilize a parede ce-

O primeiro autor agradece a colaborao da Hoffmann - La Roche (Antnio R.

Chagas Lima) pela doao
das amostras de carotenides quimiossintticos da srie Carophyll, da CYCLOLAB (Drs. J. Szejtli e L. Szente; Budapest, Hungria) e da CERESTAR
(Dr. R. Beck, Vilvoorde, Blgica) pela
proviso das ciclodextrinas. A colaborao pregressa da Profa. Dra. M. Baron
(vice-coordenadora do projeto PADCT-SBIO/CNPq) e das Profas. Dras.
T.M.B.Bonfim e M.B.Chociai (Departamento de Farmcia) foi importante no
produtivo encaminhamento do projeto.
Referncias Bibliogrficas
(ordem de abordagem neste texto)
T. LATSCHA Carotenoids their
nature and significance in animal
feeds, Department of Animal Nutrition and Health, F. Hoffmann-La Roche
Ltd., Basel, Switzerland, 1990.
G. BRITTON, S.LIAAEN-JENSEN &
H. PFANDER Carotenoids: isolation
and analysis, vol. 1-A, Birkhauser
Verlag, Berlin, Germany, 1995.
J.D. FONTANA, M.F. GUIMARES,
N.T. MARTINS, C.A. FONTANA & M.
BARON Culture of the astaxanthinogenic yeast Phaffia rhodozyma in lowcost media. Appl. Biochem. Biotechnol., 57/58, 413-422, 1996
J.D. FONTANA & M. BARON Lowcost media save in astaxanthin production Industrial Bioprocessing, vol.
18(9), p. 1, 8 & 9, 1996.
L. Parker (ed) Carotenoids, Part A:
Chemistry, Separation, Quantitation, and
Antioxidation Methods in Enzymology, vol. 213, 538p, 1992.
B. HALLIWELL & J.M.C. Gutteridge
Free Radicals in Biology and Medicine. Oxford University Press, 3rd ed.,
London, 1996.
J. SZEJTLI Cyclodextrin Technology, Kluwer Acd. Publ., Dordrecht,
The Netherlands, 437p., 1988.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento

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