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So Carlos
2012
Tese
apresentada
Engenharia
de
Escola
de
So
Carlos,
da
So Carlos
2012
DO
AGRADECIMENTOS
Dra. Eny Maria Vieira, pela oportunidade, orientao, pacincia e dedicao.
amiga Daniela Cordeiro por toda a ajuda com as anlises de gua.
amiga Luciana Teresa Dias Cappelini pelas analises cromatogrficas.
Ao amigo Egberto da Fonseca Casazza pela ajuda no desenvolvimento dos mapas.
Renata Pereira pela amizade e horas e horas de laboratrio.
Ao amigo Raphael Teixeira Verbinnen pela ajuda no laboratrio.
Ao amigo Dr. Ricardo Luvizotto Santos pela grande colaborao.
Dra. Adriana S. Marcantonio pelo auxlio na conduo do experimento no
Laboratrio Experimental do Setor de Aquicultura do Polo Regional do Vale do
Paraba.
Dra. Katia Cristina Barbaro e Dra. Claudia Maris Ferreira Mostrio, por todo o
ensinamento, desde a iniciao cientfica.
Aos amigos da Rep. Morada do Escorpio: Ubarana, Maranho, Claudinei, Marcio,
Kenji, Yuri, Ricardo, Mateus...
A todos aqueles que de alguma forma colaboraram para a realizao deste trabalho.
Ao Instituto de Qumica de So Carlos da Universidade de So Paulo pelo auxlio e
colaborao.
Ao Polo Regional do Vale do Paraba pelo auxlio e colaborao.
Ao Programa de Ps-Graduao em Cincias da Engenharia Ambiental pela
oportunidade.
Fundao de Amparo Pesquisa (FAPESP) pela concesso da bolsa de
doutorado e pelo auxilio financeiro.
Ao CNPq pela concesso da bolsa de doutorado.
RESUMO
A poluio da gua doce no estado de So Paulo ocorre por diversas causas. Entre
elas est a ineficincia do servio de tratamento de esgoto sanitrio. Alguns
componentes do esgoto sanitrio so desreguladores endcrinos, entre eles esto
os hormnios naturais e sintticos excretados pelos seres humanos. Estas
substncias causam modificaes no sistema reprodutivo como, por exemplo,
cncer, feminizao, alteraes na transcrio gentica, alterao nas gnadas,
induo sntese de vitelogenina, entre outros. O objetivo desse trabalho foi testar a
atividade endcrina das guas do rio Paraba do Sul, em Pindamonhangaba, SP.
Para tanto, amostras de gua do rio foram utilizadas para a quantificao dos
hormnios, 17-etinilestradiol, 17-estradiol e levonorgestrel por meio da tcnica de
cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC). Alm disso, foram realizados testes
crnicos com peixes (Danio rerio) no interior do rio e em laboratrio, e uma posterior
quantificao de vitelogenina. Os resultados no indicaram concentraes
detectveis dos hormnios pelo mtodo empregado. Entretanto, foi detectada a
induo de vitelogenina nos machos de Danio rerio. Esse fato indica a atividade
estrognica da gua utilizada. So necessrios outros estudos para a avaliao de
quais substncias presentes na gua, esto causando as alteraes endcrinas nos
peixes, entre eles a utilizao de ndices para priorizar o local inicial dessas
pesquisas. Esses estudos so importantes para a conservao da biodiversidade
aqutica do rio Paraba do Sul.
Palavras-chave: Danio rerio. 17-etinilestradiol. 17-estradiol. Levonorgestrel.
Vitelogenina.
ABSTRACT
Keywords:
Danio
rerio.
Hormone,
17-ethinylestradiol.
17-estradiol.
Levonorgestrel. Vitellogenin.
SUMRIO
1
INTRODUO................................................................................... 1
OBJETIVOS....................................................................................... 2
REVISO DA LITERATURA.............................................................
3.1
Poluio.............................................................................................
3.2
Contaminantes emergentes............................................................... 9
3.2.1
Desreguladores endcrinos............................................................... 10
3.3
3.4
3.4.1
14
3.5
19
3.5.1
Vitelogenina.......................................................................................
20
3.6
21
3.7
26
3.8
reas crticas.....................................................................................
28
3.8.1
Mapeamento...................................................................................... 28
3.8.2
MATERIAIS E MTODOS................................................................. 35
4.1
4.1.1
35
4.1.2.
4.2
Identificao e quantificao dos hormnios sintticos 17etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol
e de amostras do rio Paraba do Sul.................................................
38
4.3
40
4.4
4.4.1
45
45
4.4.3
46
4.5
49
4.6
52
4.6.1
56
RESULTADOS E DISCUSSO......................................................... 60
5.1
5.2
Identificao e quantificao dos hormnios sintticos 17etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol
e de amostras do rio Paraba do Sul atravs de anlise
cromatogrfica...................................................................................
72
5.2.1
Levonorgestrel...................................................................................
72
5.2.2
17-estradiol......................................................................................
78
5.2.3
17-etinilestradiol............................................................................... 82
5.3
5.3.1
88
5.3.2
89
5.3.3
5.3.4
94
96
5.3.5
125
5.4
127
10
5.4.1
Qualidade de gua............................................................................
5.4.2
128
135
5.4.3
137
5.5
145
CONCLUSES.................................................................................. 149
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 151
11
1 INTRODUO
1 1
populacional,
conseqentemente
tem-se
presena
de
2004,
SLOWIKOWSKA-HILCZER,
2006).
municpio
de
2. OBJETIVOS
Identificar
quantificar
os
hormnios
sintticos
17-etinilestradiol
Realizar teste crnico com Danio rerio em tanques rede mantidos no rio Paraba
do Sul;
Realizar teste crnico com peixe Danio rerio, em laboratrio com a utilizao de
amostras de gua do rio Paraba do Sul;
3
3
3 REVISO DA LITERATURA
3.1 Poluio
Poluio do ar
5 5
substncias que possuem atividade estrognica (fenis), alm disso, podem agir
negativamente sobre a atividade da progesterona (WANG et al., 2005a). Os
contaminantes presentes no ar podem chegar, por deriva, ao solo e aos recursos
hdricos.
A poluio do solo
De acordo com Snchez (1998), existem vrios termos utilizados como
sinnimo de rea contaminada como, por exemplo, terreno contaminado, solo
contaminado ou mesmo solo poludo. A definio de rea contaminada segundo
Van Dyck (1995) a de um local onde, como resultado de atividades antrpicas,
encontram-se resduos ou onde a poluio do solo ocorre ou ir ocorrer.
A contaminao do solo pode ter como origem a poluio difusa ou por
deposio atmosfrica (HANN, 2007; GIROTTO et al., 2007). A forma mais
comum de contaminao ao homem a ingesto de alimento contaminado
(REYS, 2001; AMARAL MENDES, 2002).
A contaminao pode ser atribuda bioacumulao nos animais criados
com a finalidade de alimentao. Esses animais recebem hormnios sintticos
para estimular o crescimento que podem ficar acumulados e atingir o homem,
alm disso, so eliminados no solo contaminando o mesmo (SHARPE, 2003). A
presena de hormnios provenientes de sunos e de bovinos descrita por
Lange et al. (2002), e a concentrao de hormnios da ordem de 2300 g/dia
e 540 g/dia, respectivamente. Ainda destaca-se o fato de que muitas vezes
esses dejetos com a presena de hormnios e outras substncias serem
utilizados como adubo na agricultura.
So muitos os problemas causados por reas contaminadas e Snchez
(1998) indica quatro principais: risco segurana da populao ou das
propriedades; riscos sade pblica e dos ecossistemas; impedimento do
desenvolvimento urbano e a reduo do valor imobilirio de propriedades.
Sabe-se que uma vez o poluente estando presente no solo o destino final
poder ser os recursos hdricos e os organismos aquticos.
Poluio da gua
Atmosfera
Fontes Pontuais
Esgoto domstico
Esgoto industrial
Fontes Difusas
Agrcolas
Dragagem
Navegao e Portos
Fontes Mistas
Escoamento Urbano e
depsitos de lixo
Depsitos de cargas
industriais
Nutrientes
Pesticidas
/Herbicidas
3-G
3
1
2
1
3
1
1
3-G
2
2
1
Bactria
MIcropoluentes
Orgnicos
Industriais
leos/
Graxas
3-G
3
3-G
3
1
1
3
(1) Fonte de significncia local; (2) de moderada significncia local/regional; (3) de significncia
regional; (G) de significncia global. Fonte: Tucci (1998)
7 7
9 9
(DAUGHTON;
TERNES,
1999),
mas
agora
os
novos
Termo utilizado pela primeira vez por Theo Colborn e seus colaboradores
em 1991, sendo que a primeira publicao que citou o termo data de 1992
(MATTHIESSEN, 2003; GEROLIN, 2008).
Algumas das substncias encontradas em ambientes naturais e que
podem causar estresse aos animais, so conhecidas como desreguladores
endcrinos (DE). Existem diversas definies para desreguladores endcrinos,
uma delas, adotada pelo Programa Internacional de Segurana Qumica (IPCS),
em conjunto com o Japo, os EUA, o Canad, a OECD e a Unio Europia,
define da seguinte maneira: Um desregulador endcrino uma substncia ou
um composto exgeno que altera uma ou vrias funes do sistema endcrino e
tm, conseqentemente, efeitos adversos sobre a sade de um organismo
intacto, sua descendncia, ou subpopulaes (CEC, 1999).
De acordo com outra definio, desta vez com coautoria de Ribeiro et al.
(2006), substncias de origem natural ou qumica com a capacidade de causar
interferncia no sistema endcrino de organismos alterando sua sade,
reproduo e crescimento so denominados desreguladores endcrinos, ou inda
podem ser chamados de perturbadores ou interferentes endcrinos. As
alteraes causadas por estas substncias ocorrem nos stios receptores das
clulas, modificando os nveis de produo referentes a essa clula. Essa
10
10
Damstra
(2002),
desreguladores
endcrinos
possuem
que
podem
ser
prejudiciais
esses
organismos.
11
11
Aditivos
industriais
subprodutos
(ex.
conservante
dioxina,
bisfenois,
Hormnios e esteris
Lquidos inicos
Estudos demonstram uma grande diversidade destas substncias
encontradas em ambientes naturais, tais como: esterides naturais, produtos
farmacuticos, produtos qumicos industriais, substncias tensoativas, polmeros
de baixa massa molecular, alquifenois, hidrocarbonetos poli-aromticos (HPAs),
nonilfenol, octilfenol, pesticidas, bisfenol A, surfactantes, ftalato, estireno, entre
outras (GRAY et al., 2000; BIRKETT; LASTER, 2003; LINTELMANN et al., 2003;
UNEP, 2003; HEINSTERKAMP; GANRASS; RUCK, 2004; SUZUKI et al., 2004;
BARRA et al., 2005; MOZAZ; LOPEZ DE ALDA; BARCEL, 2005; PETROVIC et
al, 2005; CHAPMAN, 2006, MCGOVERN; MCDONALD, 2003; GROSS et al.,
12
12
Durante anos os estudos tendo como objeto a gua, na maioria dos casos
levavam em conta apenas a concentrao de oxignio, nitratos, fosfatos e
slidos em suspenso presentes, para determinar a sua qualidade. Esse quadro
vem mudando gradualmente e atualmente outras substncias como, por
exemplo, os desreguladores endcrinos, tm sido estudadas (CIRJA et al.,
2008). Contudo, ainda no so suficientemente estudadas as caractersticas de
cada um desses compostos (BRAGA et al., 2005). Muitas dessas substncias
que esto presentes nos recursos hdricos, contaminando-os, ainda no tm
seus efeitos em longo prazo bem definidos (WISE; OBRIEN; WOODRUFF,
2011).
H aproximadamente duas dcadas os estudos que tem como alvo
substncias com potencial de causar alteraes endcrinas tem aumentado
gradativamente. Esses contaminantes so capazes de, mesmo em pequenas
quantidades (na ordem de ng L-1 e g L-1), interagir e trazer danos a organismos
que habitam o subsolo, sedimentos, mares, rios e lagos (WANG et al., 2003b;
LAMBROPOULOU; ALBANIS, 2004).
Entretanto, a ocorrncia da desregulao endcrina no novidade, pois
nas dcadas de 1970 e 1980 foi comprovado que o dietilestilbestrol (DES),
criado inicialmente para servir como medicamento antiabortivo causou
problemas
nos
sistemas
reprodutivos
femininos
masculinos
(SOTO;
13
13
indcios
de
alteraes
hormonais.
Existem
estudos
que
SARCINELLI;
MOREIRA,
1999;
RITTLER;
CASTILLA,
2002;
14
Tipos de Fontes
Efluente Industrial
Pontual
Efluente Sanitrio
Pontual
Deflvio Pecurio
Difusa
Natural
Difusa
15
15
16
16
17
17
18
18
17estradiol
Estrona Estriol
17etinilestradiol
Homens
1,6
3,9
1,5
--
Mulheres frteis
3,5
4,8
--
2,3
--
259
600
6000
--
--
--
--
35
Mulheres na
menopausa
Mulheres grvidas
Mulheres
19
19
excretado pela
urina (g/dia)
Bovino
Suno
Ovino
Total de
estrognio
Total de estrognio
excretado pelas
excretado (g/dia)
fezes (g/dia)
Bezerros
15
30
45
Vacas
99
200
299
Prenhes
320 104320
256 7300
576 111620
Porcos
82
21
103
Prenhes
700 17000
61
Ovelhas
20
23
Carneiros
22
25
fsicas,
qumicas
bacteriolgicas,
no
conseguem
fornecer
deve-se
utilizar
os
mtodos
analticos
juntamente
com
os
20
20
ser
denominados
como
biomarcadores
(GRINEVICIUS,
2006).
utilizados
para
deteco
de
modificaes
especificas
(SILVA;
21
21
3.5.1 Vitelogenina
22
22
23
23
24
25
25
expostos
estradiol,
foi
detectada
uma
maior
ocorrncia
de
desreguladores
endcrinos,
fetos
podem
ter
seu
desenvolvimento
26
26
Alteraes causadas pelo DDT e DDE foram observadas em aves por Fry
e Toone (1981), e foram causadoras da feminizao de gaivotas machos,
diminuio da espessura da casca dos ovos (com conseqente quebra da
mesma) e anomalias do sistema reprodutor. Tambm foram observadas
alteraes detectadas atravs da alterao na produo de VTG em falces
peregrino (JIMENEZ et. al, 2007)
Em rpteis os efeitos do DDT e DDE elevaram a concentrao de
hormnios sexuais no plasma alm de trazer anomalias morfolgicas s
gnadas de crocodilos, alterao da produo de esterides e variao na
concentrao de hormnios sexuais em fmeas e machos (GUILLETTE et al.,
1999; MILNES et al., 2002; WHALEY; KEYES; KHORRAMIL, 2001), mesmo no
havendo deteco de pesticidas, a substncia foi encontrada nos animais e seus
ovos (NRDC, 2007). A exposio ao estradiol tambm levou a induo da
sntese de VTG e a alteraes na produo de ovos de tartarugas (IRWIN;
GRAY; OBERDORSTER, 2001). No caso de anfbios, foi observado por Bogi et
al.(2003) que o efluente de uma estao de tratamento de esgoto causou a
induo da sntese de VTG e hermafroditismo em rs.
Como descritos em diversos estudos os peixes sofrem as aes da
presena dos desreguladores endcrinos sintticos 17-etinilestradiol e
levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol. A presena dos mesmos,
ainda que em baixas concentraes, provocou distrbios como a feminizao
(RODGER-GRAY et al., 2001; KNORR; BRAUNBECK, 2002; BOMBARDELLI;
HAYASHI, 2005; EDWARDS; MOORE; GUILLETTE, 2006), alteraes na
transcrio gentica (ZUCCHI; CASTIGLIONI; FENT, 2012), alterao nas
gnadas (PANTER; THOMPSON; SUMPTER, 2000; LABADIE; BUDZINSKI,
2006), hermafroditismo (KOGER et al., 2000), incidncia de testculos-vulos
nas gnadas (KANG et al., 2002) e induo sntese de vitelogenina (PANTER;
THOMPSON; SUMPTER, 2000; ROSE et al., 2002; MONCAUT; NOSTRO;
MAGGESE, 2003; GORDON et al.; 2006; HINCK et al., 2006; REMPEL et al.,
2006; ANDERSSON et al., 2007).
Como
determinado
por
diversos
estudos,
so
extremamente
de
desreguladores
endcrinos
no
ambiente.
ameaa
27
27
28
28
29
29
que
possui
atributos,
podendo
estar
associado
vrias
representaes grficas;
Produto de sensoriamento remoto: imagens obtidas por satlites e
fotografias areas;
Modelo numrico do terreno: reproduz uma superfcie real a partir de
algoritmos e de um conjunto de pontos, em um referencial qualquer, que
descrevem a variao contnua da superfcie.
30
30
31
31
das
guas
contaminantes
emergentes
considerando
(STAVRAKAKIS
contaminao
et
al.,
2008;
atravs
de
PICKERING;
STUMPTER, 2003; CEC, 2004) fato que deveria ocorrer tambm no Brasil.
De acordo com Who (2006), quando se considera a sade pblica como
questo a ser tratada, a presena de contaminantes deve ter trs questes
primordiais:
Probabilidade de exposio
32
32
33
33
no
municpio
de
So
Joo
da
Barra,
percorrendo
aproximadamente 1.150 km. Sua bacia distribui-se na direo leste oeste entre
as serras do Mar e da Mantiqueira, chegando a mais de 2.000 m de latitude nos
pontos mais elevados (ANA, 2001).
Por apresentar diferentes caractersticas fsicas, o rio Paraba do Sul pode
ser dividido em quatro partes:
a) Curso Superior inicia-se desde a nascente at a cidade de Guararema, em
So Paulo, caracteriza-se por apresentar declives acentuados e regime
torrencial, tem extenso de 317 km.
b) Curso Mdio Superior possui 208 km de extenso e vai de Guararema (SP)
at Cachoeira Paulista (SP), nesse percurso o rio sinuoso e meandrado.
c) Curso Mdio Inferior est localizado entre os municpios de Cachoeira
Paulista (SP) e So Fidlis (RJ), tem uma extenso de 480 km, apresentando-se
com reas de cachoeiras.
d) Curso Inferior o trecho terminal do rio, indo de So Fidlis (RJ) sua foz,
em So Joo da Barra e possui 95 km.
O rio Paraba do Sul tem como seus principais afluentes, em sua margem
direita, os rios Bananal, Pira, Piabanha e Dois Rios, em sua margem esquerda,
os rios Jaguar, Paraibuna, Pirapetinga, Pomba e Muria (ANA, 2001). A bacia
do rio Paraba do Sul abrange 180 municpios e seu sistema hidrulico
composto por cinco reservatrios, Paraibuna, Jaguari, Santa Branca, Funil e
Santa Ceclia. A parte paulista da bacia est localizada entre as coordenadas
22o24 e 23o39 de latitude Sul e 44o10 e 46o26 de longitude Oeste (AGEVAP,
2010).
34
34
Captao (m3s-1)
Consumo (m3s-1)
Abastecimento pblico
16,84
3,37
Uso industrial
13,65
6,19
Irrigao
49,73
30,28
Pecuria
3,45
1,73
Total
83,67
41,57
35
35
4 MATERIAIS E MTODOS
36
36
37
37
38
4.2
Identificao
quantificao
dos
hormnios
sintticos
17-
quantificao
dos
hormnios
sintticos
17-etinilestradiol
39
39
40
40
Figura 5 - Pontos de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste crnico
com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em laboratrio e coleta
de amostras de gua.
Ponto 1- estao de captao para abastecimento pblico (Sabesp)
Ponto 2- local de despejo de efluente da estao de tratamento de esgoto
41
41
Figura 6 - Imagem do ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao
de teste crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido
em laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 1- estao de
captao para abastecimento pblico (Sabesp)
Figura 7 - Ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 1- estao de captao
para abastecimento pblico (Sabesp). Foto: Guilherme Casoni da Rocha.
42
42
Figura 8 - Ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 1- estao de captao para
abastecimento pblico (Sabesp). Foto: Guilherme Casoni da Rocha.
Figura 9 - Foto area aproximada do ponto de coleta de gua no rio Paraba do Sul
para realizao de teste crnico com espcie de peixe padronizada (Danio
rerio) mantido em laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 2- local
de despejo de efluente da estao de tratamento de esgoto.
43
43
Figura 10 - Pontos de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 2- local de despejo de
efluente da estao de tratamento de esgoto. Foto: Guilherme Casoni da
Rocha.
Figura 11 - Pontos de coleta de gua no rio Paraba do Sul para realizao de teste
crnico com espcie de peixe padronizada (Danio rerio) mantido em
laboratrio e coleta de amostras de gua. Ponto 2- local de despejo de
efluente da estao de tratamento de esgoto. Foto: Guilherme Casoni da
Rocha.
44
44
45
45
Foram utilizados tanto nos ensaios in situ, quanto nos ex situ exemplares
de Danio rerio adquiridos junto a um produtor comercial de peixes ornamentais.
Os 300 animais (aprox.) adquiridos para cada um dos trs perodos de teses
eram do mesmo lote e ficaram em aclimatao por um perodo de 15 dias
antes de serem utilizados nos experimentos. Os animais foram mantidos em um
tanque contendo gua desclorada e recebendo rao comercial Tetra duas
vezes ao dia (manh e tarde).
4.4.2 Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no
rio Paraba do Sul
46
Figura 14 - Tanque rede utilizado no teste crnico in situ com Danio rerio mantidos no
rio Paraba do Sul, municpio de Pindamonhangaba (Ponto 1). Foto:
Guilherme Casoni da Rocha.
4.4.3 Teste crnico ex situ com espcie de peixe padronizada (Danio rerio)
47
47
48
49
49
50
50
anlises
da
vitelogenina
foram
feitas
atravs
de
ensaios
Para a
51
51
52
52
Caapava,
Guaratinguet,
Jacare,
Lorena,
Paraibuna,
53
53
Qualidade de gua
Coliformes termotolerantes
Uma alta concentrao de coliformes termotolerantes um dos mais
importantes e precisos indicadores da presena de esgoto sanitrio em corpos
dgua. A metodologia utilizada pela CETESB a tcnica de membrana filtrante,
Norma Tcnica CETESB L5.221, (CETESB, 2012).
54
IVA
Dinmica Populacional
55
55
Populao
Instituto
Brasileiro
de
Geografia
Estatstica
IBGE.
Fundao SEADE.
As populaes aqui apresentadas resultam de projees elaboradas pelo
mtodo dos componentes demogrficos. Este mtodo considera as tendncias
de fecundidade, mortalidade e migrao, a partir das estatsticas vitais
processadas na Fundao SEADE, e a formulao de hipteses de
comportamento futuro para estes componentes. A populao de base, por idade
e sexo, considera os resultados correspondentes aos diversos Censos
Demogrficos realizados pelo IBGE. As populaes projetadas referem-se a 1
de julho de cada ano.
Razo de sexos - Fundao SEADE
Nmero de homens para cada 100 mulheres na populao residente em
determinada rea, no ano considerado.
Taxa Geomtrica de Crescimento Anual da Populao 2000/2010 (% a.a.) Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica IBGE e Fundao SEADE
Expressa, em termos percentuais, o crescimento mdio da populao em
determinado perodo de tempo, no caso 2000 - 2011. Geralmente, considera-se
que a populao experimenta um crescimento exponencial ou geomtrico.
56
56
Fator de multiplicao do
(mdia em g/dia/animal)
IPM
Bovinocultura
172
Suinocultura
103
0,5988
Ovinocultura
24
0,1395
Atividade
57
57
58
58
VII
VIII
Populao total
Populao masculina e
feminina
IX
Crescimento populacional
Produo pecuria
VARIVEIS
FONTE
Coliformes termotolerantes
CETESB
ICTEM
CETESB
IQA
CETESB
IAP
CETESB
IVA
CETESB
IET
CETESB
IBGE
Razo de sexos
IBGE
Taxa de geomtrica de
IBGE.
crescimento
SEADE
Bovinocultura, suinocultura e
ovinocultura
IBGE
59
59
II
III
IV
VI
VII
VIII
IX
VARIVEIS
VALORES NA EQUAO
Coliformes
superficiais
termotolerantes
Coleta e tratamento de
efluentes
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais
Qualidade das guas
superficiais
Populao total
Populao masculina e
feminina
Crescimento
populacional
ICTEM
IQA
IAP
IVA
Produo pecuria
>Mdia estadual= 2
Pssimo=1; Ruim= 2; Regular= 3;
Bom= 4; timo= 5
Pssimo=1; Ruim= 2; Regular= 3;
Bom= 4; timo= 5
Pssimo=1; Ruim= 2; Regular= 3;
Bom= 4; timo= 5
Hipereutrfico=1; Supereutrfico=2;
IET
Eutrfico=3; Mesotrfico=4;
Oligotrfico=5; Ultraoligotrfico=6
Nmero total de
habitantes
Razo de sexos
Taxa de
geomtrica de
crescimento
Bovinocultura,
<Mdia estadual= 1
suinocultura e
ovinocultura
>n mulheres= 1
<n mulheres= 2
>Mdia dos municpios estudados= 1
<Mdia dos municpios estudados= 2
>Mdia dos municpios estudados= 1
<Mdia dos municpios estudados= 2
60
60
Com
base
nos
resultados
obtidos
foram
desenvolvidos
mapas
61
61
5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 Validao de mtodo analtico para a quantificao dos hormnios
sintticos 17-etinilestradiol e levonorgestrel e do hormnio natural 17estradiol utilizando-se cromatografia liquida de alta eficincia (HPLC)
Seletividade
62
62
branco
-1
40 g.L
300
250
LU
200
150
100
50
0
0
10
min
LU
360
340
320
300
280
260
240
220
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
-20
Branco
-1
40 g.L
10
min
63
63
140
Branco
-1
100 g.L
120
100
mAU
80
60
40
20
0
0
10
15
20
25
min
desenvolvidos
por
diversos
autores
(GHISELLI,
2006;
64
25
100
17 estradiol
100
150
Levonorgestrel
50
150
65
65
Tabela 10 - Preciso e exatido do limite de quantificao dos hormnios 17etinilestradiol, 17-estradiol e levonorgestrel, volume de injeo: 20
L.
Hormnio
LIQ (ngL-1)
DPR (%)
Exatido (%)
17-etinilestradiol
100
5,48818
105,318
17-estradiol
150
5,24162
113,813
Levonorgestrel
150
7,906
88,6457
Linearidade
Para cada curva foram feitas seis concentraes diferentes e para cada
concentrao foram feitas trs amostras.
17-etinilestradiol
66
66
3,5
log [rea]
3
2,5
2
y = 1,159x + 2,1364
R = 0,983972
1,5
1
0,5
0
0,2
0,4
0,6
log
0,8
1,2
[g.L-1]
67
67
y = 73,443x + 1062,8
R = 0,99358
Figura
68
24 -. Linearidade do hormonio
concentraes de 10,0 a 50,0 gL-1.
17-etinilestradiol
em
68
17-estradiol
y = 198,46x + 42,369
R = 0,9973
y = 68,197x + 784,04
R = 0,99489
69
69
Levonorgestrel
y = 38,416x + 20,933
R = 0,99116
y = 33,729x + 306,01
R = 0,98311
70
70
Preciso e exatido
Tabela 11 - Determinao da preciso e exatido para hormnio 17etinilestradiol em cinco solues com concentraes diferentes,
abrangendo concentrao baixa, mdia e alta.
Primeiro dia
Segundo dia
gL-1
DPR (%)
Exatido (%)
DPR (%)
Exatido (%)
0,1
6,35743
96,4983
9,01885
89,3539
1,0
0,30124
89,8335
2,7288
86,9982
10,0
2,02653
98,4252
1,17071
97,2027
20,0
3,32837
115,479
1,25749
110,623
40,0
4,66123
104,16
1,47401
116,735
71
71
Segundo dia
gL
DPR (%)
Exatido (%)
DPR (%)
Exatido (%)
0,15
4,09172
108,425
0,15
6,68967
1,40938
99,9965
1,91738
20
5,51276
113,654
20
4,65724
35
2,56289
108,652
35
0,56995
Segundo dia
gL-1
DPR (%)
Exatido (%)
DPR (%)
Exatido (%)
0,15
1,91733
114,358
0,15
2,63658
10
0,73377
104,694
10
0,32234
150
4,47935
111,797
150
0,43879
300
14,6866
88,3412
300
2,61569
72
72
Recuperao
-1
17-estradiol
Recuperao (%)
gL
0,1
84,34565842
1,0
-1
Levonorgestrel
-1
Recuperao (%)
gL
Recuperao (%)
0,15
83,69035333
0,15
83,90236513
87,3191796
96,41461402
10
85,98774593
10,0
87,01146621
20
88,60509742
150
94,8447753
20,0
87,61957872
35
87,4859852
300
81,05947567
40,0
103,458294
17-estradiol
levonorgestrel
concludas,
seguindo
as
73
73
5.2
Identificao
quantificao
dos
hormnios
sintticos
17-
5.2.1 Levonorgestrel
74
74
140
Branco
-1
100 g.L
120
100
mAU
80
60
40
20
0
0
10
15
20
25
min
75
75
76
76
77
77
Azul 150 g L
-1
ETA
Vermelho - amostra
78
78
-1
79
79
5.2.2 17-estradiol
LU
eficincia.
360
340
320
300
280
260
240
220
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
-20
Branco
-1
40 g.L
10
min
Figura 36 - Cromatograma demonstrando o tempo de reteno do hormnio 17estradiol (40 gL-1) analisado por HPLC/FLU. Branco= gua ultra pura.
80
80
81
81
82
82
83
83
5.2.3 17-etinilestradiol
branco
-1
40 g.L
300
250
LU
200
150
100
50
0
0
10
min
84
84
Figura 45 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 2
do rio Paraba do Sul, local prximo ao lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto (ETE) do municpio de
Pindamonhangaba, no perodo do vero. Segundo o mtodo para
anlise do hormnio 17-etinilestradiol.
85
85
Figura 46 - Cromatograma do extrato da amostra de gua coletada no Ponto 1
do rio Paraba do Sul, local prximo estao de captao de gua
para
abastecimento
(ETA)
pblico
do
municpio
de
Pindamonhangaba, no perodo do inverno (junho). Segundo o
mtodo para anlise do hormnio 17-etinilestradiol.
86
86
-1
87
87
88
88
89
89
5.3.1 Aclimatao dos exemplares de Danio rerio utilizados nos testes com
gua do rio Paraba do Sul
90
90
Mortalidade 8 ao
Sobrevivncia
7 dia
15 dia
(15 dias)
Lote n animais
350
17
4,85
2,57
324
92,57
350
21
6,00
13
3,71
316
90,28
350
10
2,85
2,57
331
94,57
Teste 1
91
91
Temperatura (C)
pH
Oxignio
dissolvido (mg L-1)
Mdia D.P.
Controle
23,78 0,62
7,02 0,28
5,97 0,37
ETA 100%
23,78 0,55
7,28 0,17
5,82 0,71
ETA 50%
23,75 0,52
7,17 0,28
6,03 0,44
ETE 100%
23,81 0,59
7,38 0,15
5,55 0,55
ETE 50%
23,91 0,48
7,28 0,15
5,89 0,85
pH potencial hidrogeninico. Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50%- 50% gua captao para abastecimento + 50% gua
desclorada; ETE 100%- gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento
de esgoto+ 50% gua desclorada.
92
92
Rplica
Teste 1
Sobrevivncia
(%)
Controle
ETA 100%
ETA
50%
ETE
100%
ETE
50%
90
90
80
100
90
90
100
90
70
90
100
80
100
90
100
90
90
90
90
90
92,5
90
90
87,5
92,5
Tratamento
Mdia
90,5%
Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para abastecimento 100%; ETA 50%50% gua captao para abastecimento + 50% gua desclorada; ETE 100%- gua do ponto de
despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto
de despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.
Teste 2
93
93
Tabela 18 - Mdia e desvio padro (D.P.) dos parmetros da gua dos aqurios
utilizados para o teste crnico com Danio rerio durante o teste 2
Oxignio
Teste 2
Temperatura (C)
pH
dissolvido (mg L-1)
Mdia D.P.
Controle
19,06 1,61
6,91 0,12
7,01 0,57
ETA 100%
19,03 1,42
7,49 0,05
7,07 0,11
ETA 50%
19,4 1,38
7,44 0,06
7,16 0,57
ETE 100%
19,26 1,7
7,57 0,04
7,03 0,29
ETE 50%
19,36 1,61
7,40 0,03
7,28 0,30
pH potencial hidrogeninico. Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50%- 50% gua captao para abastecimento + 50% gua
desclorada; ETE 100%- gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento
de esgoto+ 50% gua desclorada.
Rplica
Teste 2
Sobrevivncia
(%)
Controle
ETA 100%
ETA
50%
ETE
100%
ETE
50%
100
100
90
100
100
100
100
100
90
100
100
90
100
90
100
100
100
90
100
90
Mdia
100
97,5
95
95
97,5
Tratamento
97%
Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para abastecimento 100%; ETA 50%50% gua captao para abastecimento + 50% gua desclorada; ETE 100%- gua do ponto de
despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto
de despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto + 50% gua desclorada.
94
94
Teste 3
Tabela 20 - Mdia e desvio padro (D.P.) dos parmetros da gua dos aqurios
utilizados para o teste crnico com Danio rerio durante o teste 3
Oxignio
Teste 3
Temperatura (C)
pH
dissolvido (mg L-1)
Mdia D.P.
Controle
16,96 1,96
6,92 0,06
7,97 0,55
ETA 100%
17,13 2,01
7,35 0,07
6,84 0,19
ETA 50%
17,16 2,02
7,42 0,12
7,10 0,33
ETE 100%
17,00 1,76
7,48 0,16
7,08 0,33
ETE 50%
17,03 1,84
7,34 0,05
7,16 0,15
pH potencial hidrogeninico. Controle- gua desclorada; ETA 100% - gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50% - 50% gua captao para abastecimento + 50% gua
desclorada; ETE 100%- gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% e ETE 50% - 50% gua do ponto de despejo do efluente da estao de tratamento
de esgoto + 50% gua desclorada.
95
95
Rplica
Teste 3
Controle
ETA 100%
ETA
50%
ETE
100%
ETE
50%
100
90
100
100
90
100
100
100
100
100
100
100
100
100
90
100
100
100
90
100
Tratamento
Mdia
100
97,5
100
97,5
95
98%
Controle- gua desclorada; ETA 100%- gua da captao para abastecimento 100%; ETA 50%50% gua captao para abastecimento + 50% gua desclorada; ETE 100%- gua do ponto de
despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50%- 50% gua do ponto
de despejo do efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.
5.3.3 Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no
rio Paraba do Sul
96
96
Teste 1
Ponto 1. A sobrevivncia dos animais foi de 73% (22/30 peixes). Aps o perodo
de 21 dias, os animais foram anestesiados com benzocana diluda a uma
concentrao de 4%, pesados e separados por sexo e tratamento a que foram
submetidos e imediatamente congelados. Os animais sobreviventes do
experimento apresentaram peso mdio de 0,51g.
Ponto 2. O tanque rede localizado no ponto prximo estao de tratamento de
esgoto do municpio de Pindamonhangaba, foi furtado durante a realizao do
teste, aps o 5 dia de experimento.
Teste 2
Teste 3
Ponto 1. A sobrevivncia foi de 63% dos peixes (19/30 peixes). Aps o perodo
de 21 dias, os animais foram anestesiados com benzocana diluda a uma
concentrao de 4%, pesados e separados por sexo e tratamento a que foram
submetidos e imediatamente congelados. Os animais sobreviventes do
experimento apresentaram peso mdio de 0,46g
97
97
Ponto 2. Aps dois insucessos da manuteno dos animais nas guas do rio
Paraba do Sul, no Ponto 2, no houve uma terceira tentativa de colocao do
tanque rede, devido aos problemas com desaparecimento dos mesmos.
98
5,00
4,50
Teste 1 - Machos
4,60
VTG g mL-1
4,00
3,53
3,50
3,00
2,50
2,00
1,50
1,00
0,72
0,50
0,00
C M
ETA
100
M
Tratamento
ETA 50 M
VTG g mL-1
3,00
Teste 1 - Machos
3,20
2,73
2,50
2,00
1,50
1,00
0,72
0,50
0,00
C M
ETE 100 M
ETE 50 M
Tratamento
Figura 52 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos mantidos em aqurios
com gua efluente da estao de tratamento de esgoto 100% (ETE 100%) e gua
efluente da estao de tratamento de esgoto 50% - 50% gua do rio e 50% gua
desclorada (ETE 50%). ETE estao de tratamento de esgoto
99
99
Fmeas
50,00
45,00
45,06
Teste 1 - Fmeas
VTG mg mL-1
40,00
35,00
30,00
25,00
20,00
15,97
15,00
13,12
10,00
5,00
0,00
C F
ETA 100 F
ETA 50 F
Tratamentos
Figura 53 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas mantidas em
aqurios com gua do local de captao para abastecimento 100% (ETA
100%) e gua do local de captao para abastecimento 50% - 50% gua do
rio e 50% gua desclorada (ETA 50%). ETA- estao de tratamento para
abastecimento
100
100
VTG mg mL-1
50,00
45,00
40,00
35,00
30,00
25,00
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00
45,06
Teste
1
-
Fmeas
36,45
12,13
C F
ETE 100 F
ETE 50 F
Tratamentos
Figura 54 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas mantidas em
aqurios com gua efluente da estao de tratamento de esgoto 100% (ETE
100%) e gua efluente da estao de tratamento de esgoto 50% - 50% gua
do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE estao de tratamento de
esgoto
Teste 2
Machos
Por ocasio do teste 2 foi quantificada a VTG de peixes seguindo os
mesmos tratamentos e procedimentos utilizados no 1 teste.
Analisando os resultados obtidos observou-se que os animais machos
submetidos manuteno com gua do rio Paraba do Sul coletada prxima
estao de captao de gua (Ponto 1), apresentaram nveis de VTG superiores
aos dos animais do grupo controle (Figura 55). Os resultados mostram uma
quantidade 11,6 vezes maior de VTG nos peixes da ETA 100 e 8,1 vezes
superior da ETA 50% em comparao ao controle. No entanto, na relao entre
as duas diferentes diluies, a ETA 100 foi 1,4 vezes maior.
101
101
8,00
Teste 2- Machos
7,53
VTG g mL-1
7,00
6,00
5,29
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
0,65
C
M
ETA 100 M
ETA 50 M
Tratamento
102
102
14,00
Teste 2 - Machos
VTG g mL-1
12,00
11,86
10,00
8,00
5,84
6,00
4,00
2,00
0,00
0,65
C
M
ETE 100 M
ETE 50 M
Tratameto
Figura 56 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio machos
mantidos em aqurios com gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% (ETE 100%) e gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 50% - 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE
estao de tratamento de esgoto
Fmeas
103
103
70,00
VTG mg mL-1
60,00
58,23
Teste 2 - Fmeas
50,00
42,36
40,00
25,59
30,00
20,00
10,00
0,00
C F
ETA 100 F
ETA 50 F
Tratamentos
Figura 57 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio fmeas
mantidas em aqurios com gua do local de captao para
abastecimento 100% (ETA 100%) e gua do local de captao para
abastecimento 50% - 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETA
50%). ETA- estao de tratamento para abastecimento
80,00
VTG mg mL-1
70,00
60,00
Teste 2 - Fmeas
70,19
61,91
58,23
50,00
40,00
30,00
20,00
10,00
0,00
C F
ETE 100 F
ETE 50 F
Tratamentos
Figura 58 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio fmeas
mantidas em aqurios com gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 100% (ETE 100%) e gua efluente da estao de tratamento de
esgoto 50% - 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE
estao de tratamento de esgoto
104
104
Teste 3
Machos
Quando analisados os resultados obtidos das amostras do 3 teste,
verificada a mdia entre os animais machos submetidos ao tratamento do grupo
controle de 0,88 g mL-1 de VTG. A quantidade de VTG presente no exemplares
de Danio rerio mantidos em aqurios contendo gua proveniente do Ponto 1 do
rio Paraba do Sul (9,34 g mL-1 ETA 100 e 9,13 g mL-1 - ETA 50) foi 10,5
vezes quando comparada com os animais do controle (0,88 g mL-1) (Figura 59).
A quantificao de VTG dos animais utilizados nos testes com gua do rio
no ponto em que o efluente da estao de tratamento de esgoto lanado
indicou uma mdia de 9,45 g mL-1 para o tratamento ETE 100; e 9,31 g mL-1
para o ETE 50 (Figura 60).
10,00
9,00
Teste 3 - Machos
9,34
9,13
ETA
100
M
Tratamento
ETA 50 M
VTG g mL-1
8,00
7,00
6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
0,88
C M
105
105
10,00
9,00
Teste 3 - Machos
9,45
9,31
ETE
100
M
Tratamento
ETE 50 M
VTG g mL-1
8,00
7,00
6,00
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
0,88
C
M
Fmeas
106
106
40,00
Teste 3 - Fmeas
VTG mg mL-1
35,00
30,00
33,87
34,52
ETA 100 F
ETA 50 F
25,47
25,00
20,00
15,00
10,00
5,00
0,00
C F
Tratamentos
Figura 61 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio machos
mantidos em aqurios com gua do local de captao para abastecimento
100% (ETA 100%) e gua do local de captao para abastecimento 50% 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETA 50%). ETA- estao de
tratamento para abastecimento
60,00
VTG mg mL-1
50,00
Teste 3 - Fmeas
52,95
40,00
30,00
30,25
25,47
20,00
10,00
0,00
C F
ETE 100 F
ETE 50 F
Tratamentos
Figura 62 - Concentrao de VTG encontrada nas amostras de Danio rerio fmeas
mantidas em aqurios com gua efluente da estao de tratamento de esgoto
100% (ETE 100%) e gua efluente da estao de tratamento de esgoto 50% 50% gua do rio e 50% gua desclorada (ETE 50%). ETE estao de
tratamento de esgoto
107
107
Machos
A indicao de atividade estrognica da gua utilizada nos diversos
tratamentos testados foi observada, quando da comparao dos tratamentos
com o grupo controle atravs de testes estatsticos. Para isso foi utilizado o
Teste de Dunnett, no qual, a relao entre o controle e todos os demais
tratamentos testados apresentou uma diferena estatisticamente significativa, ou
seja, P < 0,05 (Tabela 22).
Tabela 22 - Resultados da aplicao do teste de Dunnett aos resultados obtidos
nos testes ex situ com machos de Danio rerio.
Diferena entre
Mdia
LI
LS
P-Valor
ETA 100 M - CM
6221,035941
1536,209369
10905,86251
0,005825492
ETA 50 M - CM
4955,708245
270,8816734
9640,534817
0,035140867
ETE 100 M - CM
7094,846723
1989,675324
12200,01812
0,00365074
ETE 50 M - CM
5377,953958
439,7131549
10316,19476
0,028857557
Nveis
CM Grupo controle macho- gua desclorada; ETA 100M - macho, gua da captao
para abastecimento 100%; ETA 50M - macho, 50% gua captao para abastecimento +
50% gua desclorada; ETE 100M - macho, gua do ponto de despejo do efluente da
estao de tratamento de esgoto 100% e ETE 50M - macho, 50% gua do ponto de despejo
do efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada. LI limite inferior e
LS limite superior
108
108
Diferena Crtica
Diferena
CM - ETA 100 M
27,68181818
17,4480043
Sim
CM - ETA 50 M
22,5
17,4480043
Sim
CM - ETE 100 M
22,67045455
19,01352188
Sim
CM - ETE 50 M
21,54545455
18,39181141
Sim
5,181818182
17,4480043
No
5,011363636
19,01352188
No
6,136363636
18,39181141
No
0,170454545
19,01352188
No
ETA 50 M - ETE 50 M
0,954545455
18,39181141
No
1,125
19,88315586
No
Fatores Comparados
CM Grupo controle macho- gua desclorada; ETA 100M - macho, gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50M - macho, 50% gua captao para abastecimento + 50%
gua desclorada; ETE 100M - macho, gua do ponto de despejo do efluente da estao de
tratamento de esgoto 100% e ETE 50M - macho, 50% gua do ponto de despejo do efluente
da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.
109
109
que variaram abaixo do limite de deteco (40 ng mL-1) at 560 ng mL-1a mdia
obtida foi de 132 ng mL-1 (BRION, et al., 2002).
No estudo desenvolvido por Fenske et al. (2001) so apresentados nveis
de VTG, em amostras de D. rerio expostos do grupo controle mantidos por um
perodo de 21 dias, na ordem de 0,84 0,73 g mg-1. Rose et al. (2002)
quantificaram entre 0,04 g e 0,06 g de VTG em suas amostras do grupo
controle de machos.
Petersen et al. (2000), detectou uma media de 702 ng g-1 (VTG peixe) em
suas amostras de peixes machos adultos no grupo controle aps 20 dias de
testes, enquanto que com 30 dias de testes esses nveis atingiram um aumento
chegando a 247 103 ng de VTG/g-1 de peixe.
Aps 3 semanas de testes com exemplares machos de D. rerio, Van den
Belt, Verheyen e Witters (2001) no conseguiram detectar nveis de VTG acima
do limite de deteco de seu teste. Os mesmos autores em um estudo posterior
(VAN DEN BELT et al., 2002), tiveram como resultado da quantificao de VTG
dos machos de seu grupo controle, 2,08 0,83 g mL-1.
Orn et al. (2003), em um estudo em que no houve a separao entre
machos e fmeas, mas sim a utilizao de juvenis de D. rerio que no deveriam
ter a expresso de VTG ativa, quantificou em 70 23 ng g-1 de peixe a VTG de
seu grupo controle.
Uma provvel causa da deteco de baixas quantidades de VTG nos
exemplares machos de Danio rerio dos grupos controle, ou seja, nos animais
que no foram expostos s substncias testadas, a presena de fmeas nos
aqurios dos testes ou nos tanques de aclimatao dos animais. Essas fmeas
liberam na gua estrgenos atravs de suas excretas, outra possibilidade a
liberao de baixos nveis de estrgeno endgenos dos prprios machos
(KRAMER et al., 1998; HARRIES et al., 2000).
110
110
1,00
C M 3T
0,90
VTG g mL-1
0,80
CM Media
C M 1T
0,70
C M 2T
0,60
0,50
0,40
0,30
0,20
0,10
0,00
Tratamentos 1
111
111
10,00
ETA 100 M 3T
9,00
8,00
ETA 100 M 2T
VTG g mL-1
7,00
6,00
ETA
100
M
1T
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
1
Tratamento
Figura 64 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo ETA. ETA
100% - 100% gua do local de captao para abastecimento. ETA 100 M 1Tmacho teste 1; ETA 100 2T- macho teste 2 e ETA 100 3T- controle macho teste
3.
10,00
ETA 50 M 3T
9,00
8,00
VTG
g
mL-1
7,00
6,00
ETA
50
M
Media
ETA
50
M
2T
5,00
4,00
ETA 50 M 1T
3,00
2,00
1,00
0,00
1
Tratamento
112
112
10,00
9,34
9,13
9,00
8,00
7,53
7,16
VTG g mL-1
7,00
6,00
5,00
ETA 100 M 1T
5,98
5,29
4,60
ETA 100 M 2T
ETA 100 M 3T
3,53
4,00
ETA 50 M Media
3,00
ETA 50 M 1T
2,00
ETA 50 M 2T
ETA 50 M 3T
1,00
0,00
ETA 100
ETA 50
Figura 66 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos dos grupos ETA 100
e ETA 50. ETA 100% - 100% gua do local de captao para abastecimento.
ETA 100 M 1T- macho teste 1; ETA 100 2T- macho teste 2 e ETA 100 3Tcontrole macho teste 3. ETA 50% - 50% gua do local de captao para
abastecimento. ETA 50 M 1T- macho teste 1; ETA 50 2T- macho teste 2 e ETA
50 3T- macho teste 3.
113
113
114
uma
alterao
endcrina,
provavelmente,
os
animais
cuja
concentrao de VTG foi menor, tiveram contato com uma menor quantidade de
desreguladores, ou ainda, j estavam em fase de reverso dos efeitos causados
por esses contaminantes. A reverso dos efeitos provocados pela exposio
durante 24 dias ao hormnio sinttico 17-etinilestradiol observada tanto em
machos quanto em fmeas de D. rerio em um perodo de recuperao de
tambm 24 dias (VAN DER BELT et al,, 2002).
14,00
ETE
100
M
2T
12,00
ETE 100 M 3T
VTG g mL-1
10,00
8,00
6,00
4,00
ETE 100 M 1T
2,00
0,00
1
Tratamento
Figura 67 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo ETE 100.
ETE 100% - 100% gua do local de lanamento de efluente da estao de
tratamento de esgoto; ETE 100 M 1T - macho teste 1; ETA 100 2T- macho
teste 2 e ETA 100 3T macho teste 3.
115
115
10,00
ETE 50 M 3T
9,00
8,00
VTG
g
mL-1
7,00
ETE 50 M Media
ETE 50 M 2T
6,00
5,00
4,00
ETE 50 M 1T
3,00
2,00
1,00
0,00
Tratamento 1
Figura 68 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos do grupo ETE 50.
ETE 50% - 50% gua do local de lanamento de efluente da estao de
tratamento de esgoto, ETE 50 M 1T - macho teste 1; ETA 50 2T- macho teste
2 e ETA 50 3T macho teste 3.
14,00
11,86
12,00
9,45
VTG g mL-1
10,00
8,00
9,31
ETE 100 M 1T
8,02
ETE 100 M 2T
6,12
5,84
6,00
4,00
3,20
2,73
ETE 100 M 3T
ETE 50 M Media
ETE 50 M 1T
ETE 50 M 2T
ETE 50 M 3T
2,00
0,00
1
Tratamentos
Figura 69 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio machos dos grupos ETE 100
e ETE 50. ETE 100% - 100% gua do local de lanamento de efluente da
estao de tratamento de esgoto; ETE 100 M 1T - macho teste 1; ETA 100 2Tmacho teste 2 e ETA 100 3T macho teste 3. ETE 50% - 50% gua do local de
lanamento de efluente da estao de tratamento de esgoto, ETE 50 M 1T macho teste 1; ETA 50 2T- macho teste 2 e ETA 50 3T macho teste 3.
116
116
Fmeas
Atravs
de
testes
estatsticos
no
foi
observada
diferena
Mdia
LI
LS
P-Valor
ETA 100 F - CF
14057505,29
46444968,02
18329957,45
0,650177256
ETA 50 F - CF
21013953,49
53401416,22
11373509,24
0,305316441
ETE 100 F - CF
8690063,425
25449319,86
42829446,71
0,919220541
ETE 50 F - CF
9742494,715
-43881878
24396888,57
0,884611123
CF Grupo controle fmea- gua desclorada; ETA 100F - fmeas, gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50F - fmeas, 50% gua captao para abastecimento + 50%
gua desclorada; ETE 100F - fmeas, gua do ponto de despejo do efluente da estao de
tratamento de esgoto 100% e ETE 50F - fmeas, 50% gua do ponto de despejo do
efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada. LI limite inferior e LS
limite superior
117
117
Diferena
Observada
Diferena Crtica
Diferena
CF - ETA 100 F
6,818181818
17,79354288
No
CF - ETA 50 F
8,545454545
17,79354288
No
CF - ETE 100 F
0,287878788
18,75604105
No
CF - ETE 50 F
4,434343434
18,75604105
No
1,727272727
17,79354288
No
7,106060606
18,75604105
No
2,383838384
18,75604105
No
8,833333333
18,75604105
No
ETA 50 F - ETE 50 F
4,111111111
18,75604105
No
4,722222222
19,67150181
No
CF Grupo controle fmea- gua desclorada; ETA 100F - fmeas, gua da captao para
abastecimento 100%; ETA 50F - fmeas, 50% gua captao para abastecimento + 50%
gua desclorada; ETE 100F - fmeas, gua do ponto de despejo do efluente da estao de
tratamento de esgoto 100% e ETE 50F - fmeas, 50% gua do ponto de despejo do
efluente da estao de tratamento de esgoto+ 50% gua desclorada.
118
70
C
F
2T
60
VTG mg mL-1
50
C F 1 Mdia
C F 1 T
40
30
C F 3 T
20
10
0
1
Tratamentos
119
119
45
ETA 100 F 2T
40
VTG mg mL-1
35
ETA
100
F
3T
ETA
100
F
Mdia
30
25
20
ETA 100 F 1T
15
10
5
0
1
Tratamentos
Figura 71 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETA. ETA
100% - 100% gua do local de captao para abastecimento. ETA 100 F 1Tfmeas teste 1; ETA 100 2T- fmeas teste 2 e ETA 100 3T- fmeas teste 3.
120
120
40
ETA
50
F
3T
35
VTG mg mL-1
30
25
ETA 50 F 2T
ETA 50 F Mdia
20
ETA
50
F
1T
15
10
5
0
Tratamentos 1
Figura 72 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETA. ETA
50% - 50% gua do local de captao para abastecimento. ETA 50 F 1Tfmeas teste 1; ETA 50 2T- fmeas teste 2 e ETA 50 3T- fmeas teste 3.
45
42,36
40
VTG mg mL-1
35
34,52
33,87
30,73
30
25
20
ETA 100 F 1T
ETA 100 F 2T
ETA 100 F 3T
ETA 50 F Mdia
15,97
13,12
15
ETA 50 F 1T
ETA 50 F 2T
10
ETA 50 F 3T
5
0
25,59
24,41
1
Tratamentos
Figura 73 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas dos grupos ETA
100 e ETA 50. . ETA 100% - 100% gua do local de captao para
abastecimento. ETA 100 F 1T- fmeas teste 1; ETA 100 2T- fmeas teste 2 e
ETA 100 3T- fmeas teste 3. ETA 50% - 50% gua do local de captao para
abastecimento. ETA 50 F 1T- fmeas teste 1; ETA 50 2T- fmeas teste 2 e
ETA 50 3T- fmeas teste 3.
121
121
80
ETE 100 F 2T
70
VTG mg mL-1
60
ETE 100 F 3T
50
40
ETE 100 F 1T
30
20
10
0
Tratamentos
Figura 74 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETE 100.
100% gua do local de lanamento de efluente da estao de tratamento de
esgoto. ETE 100 F 1T- fmeas teste 1; ETE 100 2T- fmeas teste 2 e ETE 100
3T- fmeas teste 3.
122
70
ETE
50
F
2T
60
VTG mg mL-1
50
40
ETE
50
F
Mdia
ETE
50
F
3T
30
20
ETE 50 F 1T
10
0
1
Tratamentos
Figura 75 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas do grupo ETE 50. 50%
gua do local de lanamento de efluente da estao de tratamento de esgoto. ETE
50 F 1T- fmeas teste 1; ETE 50 2T- fmeas teste 2 e ETE 50 3T- fmeas teste 3.
123
123
80
70,19
70
VTG mg mL-1
60
61,91
53,2
52,95
ETE 100 F 1T
50
40
36,45
ETE 100 F 2T
34,76
30,25
30
ETE 50 F Mdia
20
12,13
10
0
ETE 100 F 3T
ETE 50 F 1T
ETE 50 F 2T
ETE 50 F 3T
1
Tratamentos
Figura 76 - Concentrao de VTG em amostras de Danio rerio fmeas dos grupos ETE 100
e ETE 50. . ETE 100% - 100% gua do local de captao para abastecimento.
ETE 100 F 1T- fmeas teste 1; ETE 100 2T- fmeas teste 2 e ETE 100 3Tfmeas teste 3. ETE 50% - 50% gua do local de captao para
abastecimento. ETE 50 F 1T- fmeas teste 1; ETE 50 2T- fmeas teste 2 e
ETE 50 3T- fmeas teste 3.
5.4.2 Teste crnico in situ com Danio rerio em tanques rede mantidos no
rio Paraba do Sul
124
124
Teste 1
dados
Centro
Integrado
de
Informaes
Agrometeorolgicas
(CIIAGRO, 2012).
Os animais mantidos em tanque rede no Ponto 1 apresentaram mdias de
quantificao de VTG de 7,67 g mL-1 nos exemplares machos e de 17,25 mg
mL-1 nas fmeas. No houve resultados para os animais do tanque rede
colocado no Ponto 2, devido ao furto do mesmo.
Teste 2
125
125
8,21
VTG g mL-1
8,10
8,00
7,90
7,80
7,70
7,67
7,60
7,50
7,40
7,30
TR1 M
TR3 M
Teste
1
Teste
3
Figura 77 - Quantificao de VTG de Danio rerio machos, utilizados em teste crnico com
tanque rede no Ponto 1 do rio Paraba do Sul.
126
126
25
VTG mg mL-1
20
22,13
15
10
5
0
TR1F
TR2F
Teste
1
Teste
3
Figura 78 - Quantificao de VTG de Danio rerio fmeas, utilizados em teste crnico com
tanque rede no Ponto 1 do rio Paraba do Sul.
127
127
128
128
Caapava,
Guaratinguet,
Jacare,
Lorena,
Paraibuna,
129
129
IVA
(CETESB, 2012)
130
Municpio
Paraibuna*
Rio Guaratinguet
Guaratinguet
Caapava
Pindamonhangaba
Santa Branca**
So Jos dos Campos**
Trememb
Aparecida
Lorena
Queluz
Jacare
Rio Una
Taubat
131
131
que cada rio apresenta um limite aceitvel de acordo com a sua classe (Tabela
27). Para os municpios de Paraibuna, Santa Branca e So Jos dos Campos
que apresentam dois pontos de coleta cada um, foi considerado a mdia dos
resultados entre os dois pontos de coleta. Os resultados indicam que em apenas
dois pontos de coleta (Paraibuna e Santa Branca) dos 12 municpios estudados
a quantificao de coliformes termotolerantes ficou abaixo do desejvel,
segundo a Resoluo CONAMA 357/05 (BRASIL, 2005) (Figura 79).
Tabela 27 - Concentrao de coliformes termotolerantes, em ponto dos 12
municpios de interesse do estudo
Coliformes
Termotolerantes (UFC/100mL) - Coletas
1
2
3
4
5
6
2
6
<1
<1
<1
5
Paraibuna
12
34
<1
18
<1
10
Guaratinguet
920
1.080
480
10.400
1.880
780.000
Caapava
6.700
18.000
4.400
3.500
1.140
4.400
Pinda.
3.400
4.900
6.500
5.200
2.400
4.200
720
112
60
288
352
156
Santa Branca
480
1.280
144
460
45
52
38.000
47.000
6.300
14.600
3.900
22.000
S. J. Campos
10.500
30.000
2.900
5.800
1.040
5.800
Trememb
6.600
5.200
1.080
7.800
3.800
2.800
Aparecida
11.000
22.000
45.000
23.000
36.000
7.300
Lorena
4.200
5.100
2.200
5.800
2.600
24.000
Queluz
22.000
6.700
1.760
840
1.520
2.500
Jacare
2.600
5.900
1.040
1.200
1.200
1.140
Taubat
92.000
25.000
2.000
5.400
3.300
3.800
Pinda= Pindamonhangaba.
Municpio
132
Padro
Conama
< 200
< 200
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
< 1.000
132
Coliformes Termotolerantes
Acima
GuaraDnguet
Caapava
Pinda
S.
J.
dos
Campos
Trememb
Aparecida
Lorena
Queluz
Jacare
Taubat;
83,5
Abaixo
Paraibuna
Santa
Branca;
16,5
133
133
Atendimento
(%)
Municpio
Total
Urbana
Coleta
Aparecida
35.015
34.506
79
Caapava
85.414
73.107
87
Guara
112.675
107.338
90
Jacare
212.743
209.804
Lorena
82.886
Paraibuna
17.417
Pinda
Queluz
a
Trat.
Carga Poluidora
(kg DBO/dia)
Efici.
Pot.
Reman.
1.863
1.863
99
90
3.948
874
18
89
5.796
4.965
89
14
92
11.329
10.022
80.505
95
100
68
4.347
1.539
5.250
85
283
283
148.604
143.250
93
100
90
7.736
1.229
11.478
9.407
67
508
508
St . Branca
13.821
12.190
80
36
658
641
S.J. Campos
636.876
624.765
87
85
51
33.737
20.964
Taubat
281.336
275.268
92
100
86
14.864
3.172
Trememb
41.457
37.354
76
100
90
2.017
637
88
55
83
2 153.237
1 168.373
Estado de SP
41 586.892 39 874.754
12
10
ICTEM
Acima da Mdia
Abaixo da Mdia
8
Valor
Mdia
6
4
2
0
Municpios
134
134
135
135
IQA
IAP
IVA
IET
Paraibuna
87
Guaratinguet
Caapava
Pindamonhangaba
63
54
57
51
46
2.9
3.3
2.1
49
42
44
Santa Branca
72
70
2.2
38
57
53
2.1
44
Trememb
Aparecida
Lorena
Queluz
Jacare
Taubat
59
50
54
60
67
54
52
41
61
35
2.6
2.6
2.8
1.8
2.3
3.1
44
46
48
41
40
44
IQA - ndice de Qualidade das guas; IAP- ndice de Qualidade das guas Brutas para Fins
de Abastecimento Pblico; IVA ndice de qualidade de gua para proteo da Vida
Aqutica e IET- ndice de Estado Trfico
Legenda
IQA/IAP/IVA
tima
Boa
Regular
Ruim
Pssima
136
IET
Ultraoligotrfico
Oligotrfico
Mesotrfico
Eutrfico
Supereutrfico
Hipereutrfico
136
Queluz
Aparecida
Guaratinguet
Lorena
Caapava
Jacare
Paraibuna
Santa Branca
So Jos dos Campos
Pindamonhangaba
Taubat
Trememb
Mdia
11.535
35.018
112.827
82.971
85.593
213.155
17.425
6.912
638.990
149.095
282.098
41.604
139.769
Taxa de
crescimento
(a.a.%)
2,18
0,03
0,73
0,57
1,08
1,00
0,23
0,58
1,57
1,56
1,34
1,65
1,04
Razo de
sexos
103,69
93,37
92,83
93,4
98,23
95,37
103,37
99,81
96,07
96,79
96,36
112,1
137
137
700.000
Abaixo da Mdia
Acima da Mdia
Mdia
Populao Total
600.000
Habitantes
500.000
400.000
300.000
200.000
100.000
0
Municpios
2,5
Taxa de crescimento
2,18
Acima da Mdia
Abaixo da Mdia
Mdia
1,65
(% a.a.)
1,57 1,56
1,5
1,34
1,08
1,04
1
0,73
0,5
1
0,58
0,57
0,23
0,03
0
Municpios
Figura 82 - Classificao quanto mdia da taxa de crescimento da populao dos
12 municpios estudados
138
138
Razo de sexos
Maior n de mulheres
Maior n de homens
120
100
80
60
40
20
0
Municpios
139
139
Sunos
Ovinos
Total (fator de
(n cabeas)
(n cabeas)
(n cabeas)
multiplicao)
Queluz
8.725
681
116
9.149
Aparecida
1.984
701
2.404
Guaratinguet
32.881
3.057
11
34.713
Lorena
20.186
451
11
20.458
Caapava
22.474
500
600
22.857
Jacare
20.500
815
1.581
21.209
Paraibuna
26.948
1.600
650
27.997
Santa Branca
12.000
179
12.025
60.812
3.680
380
63.069
Pindamonhangaba
44.899
1.118
5.620
46.352
Taubat
39.061
720
248
39.527
Trememb
8.500
380
8.728
Municpio
Mdia
140
25.707
140
70.000
60.000
Pecuria
Mdia
Acima da Mdia
Abaixo da Mdia
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0
Municpios
141
141
Qualidade da gua
Populao
142
142
Produo Pecuria
Em relao produo pecuria dos municpios estudados, criou-se um
mapa com a utilizao do nmero de cabeas de bovinos, sunos e ovinos,
considerando o fator de multiplicao para dar equivalncia potencial
quantidade de produo de hormnio por conta desses animais. A classificao
utilizada no mapa, acima da mdia e abaixo da mdia, foi referente mdia
determinada entre os 12 municpios estudados (Figura 87). Os municpios
determinados como acima da mdia foram 42% do total (5 municpios) enquanto
a maioria, 58% (7 municpios) est abaixo da mdia entre os produtores
pecurios.
143
143
144
144
145
146
146
147147
148
148
149
Figura 88 - ndice de Prioridade dos Municpios considerando dados de qualidade de gua, populao e produo pecuria
149
150
150
6 CONCLUSES
A validao do mtodo de quantificao dos hormnios sintticos 17-etinilestradiol
e levonorgestrel e do hormnio natural 17-estradiol com a utilizao da tcnica de
cromatografia liquida de alta eficincia seguindo as recomendaes propostas pela
ANVISA (2003) foi atingida.
Os animais indicaram, atravs da alterao nos nveis de VTG, que h efeitos da
ao estrognica na gua do rio Paraba do Sul nos dois pontos testados. A
alterao da VTG ocorreu tanto nos testes in situ quanto no ex situ.
Os resultados semelhantes obtidos nos testes in situ e ex situ com machos de Danio
rerio, indicam a possibilidade da reproduo, no interior de um laboratrio, dos
efeitos causados por desreguladores endcrinos aos animais em seu ambiente
natural.
No
foram
detectados
os
hormnios
17-etinilestradiol,
17-estradiol
levonorgestrel nas amostras coletadas, entretanto esse fato no indica que se deve
negligenciar a existncia de desreguladores endcrinos nas guas do rio Paraba do
sul, pois efeitos foram detectados nos testes in vivo atravs da verificao da
induo da sntese de VTG em Danio rerio.
H a indicao da ao estrognica da gua do rio Paraba do Sul, comprovada pela
induo da sntese de VTG nos machos de Danio rerio, portanto, indicado que
haja o acompanhamento desses compostos no corpo dgua.
Sistemas de monitoramento da atividade estrognica presente nas guas do rio
Paraba do Sul devem ser instalados, tendo como prioritrios pontos localizados nos
municpios de Pindamonhangaba, So Jos dos Campos, Aparecida e Taubat.
151151
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152
153153
154
154
155155
156
156
em:
of
human
157157
158
159159
160
160
161161
162
162
163163
164
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