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Caminhando Pela Bioquimica PDF
Caminhando Pela Bioquimica PDF
BIOQUMICA...
Uma viso objetiva e acadmica
Sumrio
Captulo 1
??
Viso geral sobre os primeiros trabalhos em Bioqumica
??
Os organismos vivos so organizados
??
Como a matria viva composta? tomos, molculas e outros
bichos...
??
A menor unidade da matria viva
Captulo 2
??
Complexidade da Matria Viva
??
Princpios da Lgica Molecular da Vida
??
Evoluo Qumica: A Origem da Vida
Captulo 3
??
A Clula e Ciclo Celular
??
Fenmenos de Transporte Transmembrana
Captulo 4
??
Informao Hereditria
??
Como as Protenas so Formadas?
??
Qual a Constituio das Protenas?
??
Consideraes sobre as Protenas...
Captulo 5
??
Alimentos
??
Hormnios
??
Enzimas
Captulo 6
??
Lipdeos
??
Digesto e Absoro de Lipdeos e Vitaminas
??
L-Acetil-Carnitina
Captulo 7
??
Carboidratos
??
Carboidratos: Vias Especiais
Captulo 8
??
Viso Geral do Metabolismo
??
Metabolismo e Transportadores de Energia
??
Metabolismo do Glicognio e Mecanismos da Degradao
Oxidativa de Carboidratos (Respirao Celular)
Captulo 9
??
Metabolismo Lipdico: Degradao e Biossntese
??
Degradao Oxidativa de Protenas
Captulo 10
??
Metabolismo dos cidos Nuclicos
??
Regulao da Expresso Gnica
??
Importao e Secreo de Protenas
Captulo 11
??
Tecnologia do DNA Recombinante
Anexo
??
Bioqumica da Respirao: Transporte de Gases e Equilbrio
cido-Base
??
Consideraes sobre a Contrao Muscular
??
Acetil-Colina: Importncia
??
Diabetes
Referncias Bibliogrficas
Captulo 1
Conforme mencionado por Michael Behe, em sua primorosa obra Darwins black box: the
biochemical challenge to evolution2, o maior bilogo grego foi tambm seu maior filsofo, Aristteles.
Nascido ao tempo em que Hipcrates3 ainda vivia, Aristteles compreendeu que o conhecimento da
natureza requeria observao sistemtica. Mediante cuidadoso exame, reconhecu um volume
espantoso de ordem no mundo vivo, o que constituiu um primeiro passo de importncia crucial. Foram
poucos os investigadores biolgicos importantes no milnio que se segui a Aristteles. Um deles,
Galeno, um mdico de Roma, viveu no sculo II d.C. Erroneamente, Galeno sups que o sangue era
bombeado para irrigar os tecidos, e que o novo sangue era produzido de forma ininterrupta para
reabastecer o corao. Foi somente no sculo XVII que um ingls, William Harvey, apresentou a teoria
que o sangue flui sem cessar em uma direo, fazendo um circuito completo, e que volta ao corao.
1
Por bioqumica entende-se todo e qualquer tipo de cincia que estuda a vida no nvel molecular, mesmo que a cincia seja praticada em
disciplinas com outros nomes, tais como biologia molecular, gentica ou embriologia.
2
A Caixa Preta de Darwin, 1997, Ed. Cincia e Cultura (vide referncias)
3
Cerca de 400 a.C., denominado o pai da medicina.
Na Idade Mdia, o ritmo de investigao cientfica acelerou. O exemplo dado por Aristteles foi
seguido por nmeros crescentes de naturalistas. A biologia progrediu rapidamente nos sculos XVII e
XVIII, medida que os cientistas fundiam os exemplos dados por Aristteles e Harvey, de observao
atenta e raciocnio inteligentes.
A primeira qumica mdica
A primeira tentativa para reduzir os processos biolgicos a fenmenos materiais, consiste em
interferir nas conexes de poca da alquimia ou de qumica e no estudo de suas vias. Esse sistema era
denominado quimiatria ou iatroqumica, que etmologicamente significa qumica mdica. Geralmente
se considera Paracelso como um dos precursores da quimiatria. Philip Theophrast Bombast von
Hohenheim (1493-1451), mdico e alquimista suo adotou a forma latinizada de Philippus Aureolus
Theophrastus Bombastus Paracelsus. Em sua obra, que se difundiu muito, feita atravs de uma certa
incoerncia entre os pares: fisiologia/alquimia, magia/astrologia, tambm apresentando discordncias
entre a medicina hipocrtica e galnica. Tambm foram relevantes os aportes fisiolgicos de mdico
Jean Baptista Van Helmont (1577-1664), mdico, qumico e filsofo flamenco, o qual se entrega
sucessivamente teologia, magia astrologia e medicina. Van Helmont desenvolveu uma teoria
sobre a digesto dos alimentos, seus trabalhos representando febris indcios para o animismo e o futuro
da revoluo qumica. Van Helmont aplica a medio a problemas de qumica e biologia, estudando
aspectos de fisiologia vegetal. Na qumica, estuda vapores que a matria produz, inventando o nome de
gs para as substncias liberadas ao ar.
O iatromecanicismo, baseado na crena que um animal funciona segundo os princpios da
mecnica, resulta incompatvel com o funcionamento harmnico dos seres vivos. Ao contrrio do
iatromecanicismo, reage George Ernest Stahl (1660-1734), qumico e mdico alemo, professor da
Universidade de Halle. A doutrina proposta por Stahl utiliza a anima para explicar o fundamento da
vida e toda patologia humana. O nima o que se constitui o princpio da vida, que mantm reunidas
ls partculas constituintes do organismo, que dirige o funcionamento dos rgos, sustenta a circulao
e evita a putrefao. Stahl tambm fez contribuies no mbito da qumica. Formula, em 1702 a
Teoria do Flogstico, a qual explica o fenmeno da combusto, reformulando, de modo cientfico, o
antigo princpio do fogo, dos quatro elementos formadores da matria.
At o sculo XIX, a maioria das pessoas pensava que a vida era composta de um tipo diferente
de material, diferente do observado na composio dos objetos inanimados. Em 1828, no entanto,
Friedrich Whler aqueceu cianato de amnio e descobriu que o produto formado era uria, um produto
biolgico. A partir desse sucesso, formulou a idia de metabolismo, atravs do qual o corpo compe e
decompe substncias por meio de processos qumicos. Ernst Hoppe-Seyler cristalizou o material
vermelho do sangue (a hemoglobina) e demonstrou que se ligava ao oxignio para transport-lo via
sangue. Emil Fisher demonstrou que a grande classe de substncias denominadas de protenas era
constituda, sem exceo, por apenas vinte tripos de blocos de cosntruo (aminocidos). Na primeira
metade do sculo XX, a cristalografia de raios X era usada para determinar a estrutura de pequenas
molculas. A cristalografia implica em lanar um feixe de raios X sobre o cristal de um elemento
qumico; os rais so dispersos por um processo denominado difrao. Aplicar as armas da
cristalografia de raios X s protenas lhes revelaria a estrutura. Uma nova tcnica veio a ser adotada
para complementar e suplementar a cristalografia: a ressonncia nuclear magntica (RMN). Com o
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emprego da RMN, uma molcula pode ser estudada enquanto em soluo. Encerra, no entanto,
limitaes que a tornam aplicvel apenas a uma parte das protenas conhecidas. Juntas, porm, a RMN
e a cristalografia de raios X conseguiram esclarecer as estruturas de protenas em nmero suficiente
para dar aos cientistas uma compreenso detalhada de como elas so (BEHE, 1997).
A Matria Viva composta por molculas intrinsecamente inanimadas tal como a matria no-viva!
Assim, de onde vem a incrvel diferena? A Bioqumica, portanto, procura responder a esta pergunta4!
Todo organismo vivo extremamente complexo e organizado. Cada parte de um organismo vivo tem
um propsito ou funo especfica, seja esta parte uma estrutura complexa como um rgo ou
aparelho, estruturas submoleculares ou mesmo molculas individuais.
Os organismos vivos so capazes de extrair e utilizar energia do seu ambiente seja na forma de
nutrientes orgnicos, seja na forma de luz solar. Os organismos vivos so capazes de autoduplicar,
gerando uma descendncia que perpetua o estado vital.
Vide Referncias: The Blind Watchmaker (O relojoeiro cego), de Richard Dawkins, 1985.
As clulas vivas so mquinas qumicas muito complexas e organizadas, que funcionam a base de
energia qumica.A energia de todo ser vivo vem, direta ou indiretamente, do Sol. Os organismos vivos
fabricam substncias capazes de REGULAR todo o seu conjunto complexo de reaes qumicas. As
ENZIMAS so capazes de realizar e controlar todos os processos bioqumicos que caracterizam um
organismo vivo. Os processo metablicos so regulados para operar no princpio da economia mxima
Os organismos vivos so capazes de se REPRODUZIR com incrvel preciso ao longo de milhares de
geraes, atravs de um sistema de replicao auto-reparvel. Toda a informao necessria para a
construo de um novo ser vivo est armazenada e codificada no DNA de todas as clulas que o
compe. Esta informao cabe em 0,000000000006 g de DNA, para a clula do ser humano.
Captulo 2
Todo organismo vivo extremamente complexo e organizado. Cada parte de um organismo vivo tem
um propsito ou funo especfica, seja esta parte uma estrutura complexa como um rgo ou
aparelho, estruturas submoleculares ou mesmo molculas individuais. Os organismos vivos so
capazes de extrair e utilizar energia do seu ambiente seja na forma de nutrientes orgnicos, seja na
forma de luz solar. Os organismos vivos so capazes de autoduplicar, gerando uma descendncia que
perpetua o estado vital.
O fato de que todas as clulas vivas possurem molculas formadas a partir de algumas poucas
unidades fundamentais em comum sugere um ANCESTRAL NICO. Baseados nestas pesquisas
pode-se listar os principais eventos relacionados ao surgimento das primeiras formas de vida como,
provavelmente:
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Captulo 3
Quase todas as clulas bacterianas e vegetais esto tambm encapsuladas numa parede celular grossa e
slida, composta de polissacardeos, externa membrana plasmtica. Todas as clulas contm
informao hereditria codificada em molculas de cido desoxirribonuclico (DNA); esta informao
dirige a atividade da clula e assegura a reproduo e a transmisso dos caracteres descendncia.
Ncleo: o rgo mais importante em quase todas as clulas animais e vegetais; esfrico, mede cerca
de 5 m de dimetro, e est rodeado por uma membrana dupla. A interao com o citoplasma acontece
atravs de orifcios chamados de poros nucleares. Dentro do ncleo, as molculas de DNA e protenas
esto organizadas em cromossomos, que costumam aparecer dispostos em pares idnticos. O ncleo
controla a sntese de protenas no citoplasma. O RNA mensageiro (RNAm) sintetizado de acordo
com as instrues contidas no DNA e deixa o ncleo atravs dos poros. J no citoplasma, o RNAm
une-se a corpos pequenos chamados ribossomos e codifica a estrutura primria de uma protena
especfica.
Citoplasma: compreende todo o volume da clula, com exceo do ncleo. Engloba numerosas
estruturas especializadas e organelas.
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Citoesqueleto: uma rede de filamentos proticos do citossol que se encarrega de manter a estrutura e
a forma da clula. Tambm responsvel por muitos dos movimentos celulares8.
Mitocndrias: uma das organelas mais importantes do citoplasma e encontrada em quase todas as
clulas eucariticas. So as organelas produtoras de energia. Os cloroplastos so organelas ainda
maiores, encontradas nas clulas de plantas e algas.
Outras organelas: a maior parte dos componentes da membrana celular forma-se numa rede
tridimensional irregular de espaos, rodeada, por sua vez, por uma membrana e chamada de retculo
endoplasmtico (RE), no qual formam-se tambm os materiais expulsos pela clula. O aparelho de
Golgi formado por pilhas de sacos planos envoltos em membranas. Este aparelho recebe as
molculas formadas no retculo endoplasmtico, transforma-as e dirige-as para diferentes lugares da
clula. Os lisossomas so pequenas organelas que contm reservas de enzimas necessrias digesto
celular de vrias molculas indesejveis. As membranas formam muitas outras vesculas pequenas,
encarregadas de transportar materiais entre organelas.
Diviso celular: todas as clulas de qualquer planta ou animal surgiram a partir de uma nica clula
inicial - o vulo fecundado - por um processo de diviso. O vulo fecundado divide-se e forma duas
clulas-filhas idnticas, cada uma das quais contm um jogo de cromossomos igual ao da clula
parental. Depois, cada uma das clulas-filhas volta a se dividir, e assim continua o processo. Nesta
diviso, chamada de mitose, duplica-se o nmero de cromossomos (ou seja, o DNA) e cada um dos
jogos duplicados constituir a dotao cromossmica de cada uma das duas clulas-filhas em
formao. Na formao dos gametas, acontece uma diviso celular especial das clulas germinais chamada de meiose, na qual se reduz metade sua dotao cromossmica; s se transmite a cada
clula nova um cromossomo de cada um dos pares da clula original.
Cada compartimento fabrica dentro de si um conjunto especfico de protena e enzimas que vo
conferir a essa organela uma srie de propriedades especiais, ou seja, a compartimentalizao de
protena e enzimas vai conferir a cada organela uma funo especial dentro da clula para que de uma
maneira geral no seja exercida por outras organelas. Dentro dessas organelas existentes nos
organismos eucariontes a maior delas e, talvez a mais importante, o ncleo celular que a primeira
caracterstica que distingue esses organismos dos procariontes, onde o material gentico est solto no
citoplasma.Entretanto, essa organela no tem s a funo de compartimentalizar o DNA, ou seja,
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Ciclose
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separar o material gentico do citoplasma. Alm disso, est relacionado com a fisiologia desse cido
nuclico, pois alm de armazenar tambm contm dentro de si um conjunto de protena, um sistema
enzimtico, responsvel pela replicao dessa informao gentica no processo de diviso celular: na
mitose e na meiose.
Esse ncleo tambm replica ou duplica a informao gentica para ser passada em quantidades iguais
para as clulas-filhas. Possui tambm um conjunto de protena responsvel por detectar alteraes na
informao gnica, ou seja, na estrutura do cido desoxirribonucleico e uma vez detectadas alteraes
essas enzimas conseguem reparar, retornando a informao ao estado original e evitando acumulo de
mutaes no organismo. Entretanto, no abole completamente, pois qualquer processo biolgico tem
uma taxa de erro inerente. tambm responsvel pelo processamento dessa informao porque de uma
maneira geral no acessvel aos outros componentes celulares, ento, transformada em outro tipo
de informao que possa ser compreendida por determinadas maquinarias da clula. E o modo como
processada atravs da sntese de uma molcula complementar: RNA que pode ser transportador,
ribossomal e mensageiro. Tem funes no processo de sntese protica, mas existem certos RNAs que
podem funcionar como cofatores de atividade enzimtica telomerase.
Existe ainda a regulao da expresso gnica controlada pelo ncleo, quais os gens vo ser impedidos
e quais vo ser sintetizados. Esse controle feito por um conjunto de protenas existentes no ncleo,
chamadas de protenas regulatrias, integrando sinais recebidos por receptores da membrana
citoplasmatica e transformam-nos em padro especfico para a expresso gnica para que a clula
possa exercer bem suas funes fisiolgicas sob aquelas condies num determinado momento. A
informao gnica armazenada num tipo de molcula que cido desoxirribonucleico, que se
apresenta como fita dupla que seria duas cadeias lineares de bases nitrogenadas ordenadas numa
determinada seqncia, dispostas numa orientao antiparalela e formando pareamento entre as bases
nitrogenadas de uma fita com a outra. A forma mais comum de asssociao de DNA a ? -hlice
encontrada na maioria dos organismos.
1) Vrus bateriofago que tem uma capsula com o genoma do vrus, o DNA circular; no organismo
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2) Cada fita de DNA formada por uma sequncia de nucleotdeos, mleculas de fosfato e uma parte
de base nitrogenada (T, A, C, G), conferindo um cdigo gentico que pode ser lido por determinados
componentes celulares. Em RNA ocorre a uracila em lugar da timina. Essa informao gentica vai ser
transformada parte numa molcula que pode ser entendida pela clula que o RNA mensageiro e esse,
junto com determinados grnulos proticos que so os ribossomas, vai ser primeiro traduzido numa
sequncia linear de aminocido e esses aminocidos na presena de um meio de composio
apropriada e com a ajuda de determinadas protenas citoplasmticas vo adquirir uma estrutura
tridimensional (ativa) onde a protena vai ter funo biolgica maximizada que o produto final da
informao do ncleo.
3) Exemplificao de uma das funes do ncleo que a duplicao do DNA na fase S do ciclo
celular, onde cada fita representa um molde para a produo da fita complementar.
4) Processo de transcrio gnica, a informao gentica contida na dupla fita de DNA processada
por complexos proteicos dentro do ncleo que so as RNAs polimerases que transcrevem varias
sequncias de nucleotdeos , formando os RNA transportador (tRNA ou RNAt), mensageiro
(mRNA ou RNAm) e ribossmico (rRNA ou RNAr).
Em relao transcrio, existe uma caracterstica que diferencia os organismos eucariontes dos
procariontes: na dupla fita de DNA, existe uma regio do gen que funciona como um pacote de
informao gnica especfica que ser transcrita para a celula atravs da RNA polimerase. Essa enzima
sintetiza a fita complementar de cido ribonucleico e medida que ocorre a sntese ela j promove
uma modificao no RNA em uma guanina ligada a uma extremidade 5 que uma modificao do
RNAm que chamado de cap, ocorrendo em eucariontes e procariontes. E aps a sntese do RNAm ,
tem-se uma modificao na maior parte dos RNAs que a adio de uma cauda de poli-A e que serve
para regular a meia vida dos RNAm dentro da clula. Logo aps a ao da RNA polimerase, tem-se a
formao de um transcrito que chamado transcrito primrio ou RNA heterogneo que na clula
eucarionte no vai estar pronto ainda para o processo de traduo, ou seja, no pode ser utilizado pelo
ribossoma. Outra funo do ncleo processar esse transcrito primrio, fazendo o processamento do
RNAm , retirada dos introns e soldagem dessas estruturas que codificam a sequncia primria das
protena que fica contnua e a sim estar pronta para ser mandada para o citoplasma para ser traduzida
pelos ribossomas.
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Ainda nas clulas eucariontes, os RNAs so monocistrnicos, RNAm que codifica apenas um
polipeptdeo, enquanto que nos procariontes o RNAm pode ser policistrnico, ou seja, a partir de uma
mesma sequncia codifica polipepontodeos diferentes. Enquanto que nos organismos procariontes, a
nica forma de regular a expresso da informao gnica a nivel transcricional, os eucariontes tm
diversas formas de regulao como o descrito acima, controle do processamento de RNA, do
transporte do RNAm para o citosol (90%fica no ncleo e degradado), o ribossoma pode ser inativado
e alguns RNAs podem ser destrudos no citosol.
E o que a cromatina? Refere-se associao de DNA e protena, essas ltimas tem como funes:
coordenar o metabolismo de DNA (protenas no-histnicas) e organizao fsica do DNA dentro do
ncleo (histonas9), as quais formam um conjunto bastante homogneo de protena. As histonas so
divididas em nucleossomais (H2A, H2B, H3 e H4) e no-nucleossomais (H1). Tm baixo peso
molecular e possuem grande nmero de aminocidos bsicos, ou seja, carregados positivamente, como
a lisina e arginina. Essas cargas conferem s protenas a capacidade de se ligar ao DNA por interaes
eletroestticas, interagindo com as cargas negativas do cido fosfrico no esqueleto do DNA.
O nucleossoma um complexo octamrico formado pelas quatro histonas nucleossomais, onde cada
histona apresentada em um conjunto duplo. Ento, a primeira forma de organizao d
aproximadamente duas voltas sobre esse nucleossoma, diminuindo o comprimento da fita de DNA e
ajudando a organiz-lo. O DNA enovelado ao redor dos nucleossomas se apresenta como um colar de
contas com um dimetro de 10 nanmetros (10 x 10-9 metro). Nunca vai se encontrar numa clula
eucarionte um DNA desnudo. Essa estruturao com 10 nanmetros corresponde primeira forma de
compactao de DNA correspondendo forma eucromatina, estrutura menos compacta de DNA sendo
transcricionalmente ativa, gen presente nessa regio est sendo transcrito na forma de RNA. Alm
dessa forma de compactao do DNA, existe outra, que seria o enrolamento dessa estrutura em forma
de um colar de contas sobre uma mola formando tipo uma fibra mais espessa com 30 nanmetros e
uma forma mais compactada do DNA, correspondendo a estrutura da heterocromatina, que uma
regio transcricionalmente inativa, ou seja o gen dali no esto sendo transcritos na forma de RNA.
Duas diferenas entre eu e heterocromatina: a primeira morfolgica, que seria dada pelo tipo de
enovelamento, eucromatina menos e a hetero mais enovelada; a segunda funcional, a eucromatina
apresenta regio transcricionalmente ativa enquanto que a hetero inativa. E num determinado
filamento de DNA, geralmente tm regies de eucromatina interespaadas com regies de hetero e elas
podem intercambiar de forma, hetero se transforma em eucromatina e vice-versa, dependendo do
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estado de expresso dos gens daquela regio. Se um determinado gen no est sendo transcrito fica na
forma de heterocromatina...
Quando a clula comea a trancrever um gen, ela no procura fazer uma cpia de cada vez, comeando
a trancrever o gen atravs da RNA polimerase, quando ela sai desse incio de transcrio, vem uma
outra polimerase e se liga, ento se tem um mesmo gen transcrito ao mesmo tempo por vrias
polimerases, porque a nica coisa que limita as polimerases o tamanho. Enquanto tiver espao elas
entram. Depois que esses RNAm forem mandados para o citoplasma so traduzidos justamente de
forma sequencial por ribossomas. Do mesmo modo, enquanto existir espao para os ribossomas se
ligarem, eles o fazem. No processo de traduo, ele fica ligado at que seja mandada uma mensagem
contrria ao ncleo, ou pelo aumento da concentrao de protena ou por uma alterao do processo
fisiolgico onde h o desligamento da expresso daquele gene.
? Resumo: A informao gnica armazenada sob a forma de DNA, essa dupla fita se estrutura ao
redor dos nucleossomas podendo se estruturar na forma de eu ou heterocromatina e essa DNA +
nucleossomas forma a cromtide ou cromossoma interfsico. Precisa de estruturas adicionais para se
manter estvel dentro da clula e se manter estvel ao longo das geraes. No qualquer segmento de
DNA ligado a histonas (protena cida que tem como funo empacotar o DNA) e no-histonas que
caracteriza um cromossoma eucarionte! Ento, no filamento de DNA ativo deve haver nas duas
extremidades (telmeros) e numa regio entre essas extremidades (centrmero), regies especializadas
para caracteriz-lo como cromossoma. Alm disso, precisa possuir centenas de regies ao longo do
cromossoma chamadas de Ori, onde comea a replicao de DNA. Os telmeros so sequncias de
DNA especficas onde ao redor dessa seqncia so montadas estruturas proteicas, eles tm como
funo evitar o ataque de nucleases, que destri DNA a partir de uma extremidade livre. Essa
extremidade do telmero tambm importante para no haver fuso de cromossomas, mantendo o
nmero constante. Por que existem essas nucleases? Para degradar DNA invasor (de vrus) e tambm
pode existir as nucleases dos prprios vrus para atacar o DNA da clula. Normalmente dentro da
clula quando tem duas extremidades livres, atravs do sistema de reparo, automaticamente liga-se
uma ponta na outra, para manter constante tambm o nmero de cromossomas. E uma ltima funo
seria promover a duplicao completa (corretamente) do DNA atravs da telomerase. O centrmero
tambm uma seqncia especfica de DNA onde vai ser montada uma placa protica chamada
cinetcoro onde as fibras do fuso se ligam na mitose ou meiose.
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8) Comossoma mittico, diferente do interfsico, pois j est duplicado (cpia fiel da molcula), tem
uma regio chamada de primria que contem a sequncia do centrmero e ao redor dessa regio do
centrmero montada a placa proteica chamada de cinetcoro e ele se liga os filamentos e
microtbulos para puxar o cromossoma para o plo da clula.
9) Alguns cromossomas eucariontes, alm de possuir todas essas sequncias, possui uma determinada
regio onde tem a repetio em sequncia de um mesmo tipo de conjunto de gens que codificam o
RNAr. Ento, como o RNAr muito importante para a clula, no se satisfaz em ter apenas uma
cpia de cada gen, deve ter centenas de cpias desse gen e no apenas em um tipo cromossoma, ela
(clula) espalha essas cpias em vrios cromossomas diferentes. No caso humano, tem-se pelo
menos seis tipos de cromossomas que contm essas regies de mltiplas cpias de RNAr chamadas
de RON (regio organizadora de nuclolo) que se agregam numa regio distinta da clula,
emparelham-se lado a lado as regies contendo as sequncias dos RNAr ou as RONs. E ao redor
dessa regio de RONs montado uma estrutura proteica que forma a matriz do nuclolo. E de
acordo com as tarefas que se realizam nessas regies do nuclolo cria-se uma diferenciao
morfolgica que vai estar associada a uma funo especfica. Ento, na regio central que
fibrilar, tem-se a sntese e processamento do RNAr e na regio perifrica que granular, tem-se a
montagem das subunidades ribossomais. Cada subunidade formada por tipo de protena
diferentes produzidas por gens diferentes, nos eucariontes, na maior, tem-se 31 tipos de protena e
dois tipos de RNAr e na menor 21 protenas e um tipo de RNAr. No caso dos eucariontes, tem-se a
menor com 40 S (33 protenas e um tipo de RNAr) e a maior com 60 S (50 protena diferentes e
trs tipos de RNAr). Nos procariontes, por ser mais simples o ribossoma consegue ser montado
sem ajuda, j eucarionte precisa da ajuda de determinados componentes da regio fibrilar do
nuclolo, Ento, na clula eucarionte, tem-se a transcrio dos RNAr que so enviados para o
citoplasma, onde so traduzidos em protena ribossomais que so enviadas para ncleo e
compartimentalizadas no nuclolo onde atravs da ao do molde de RNAr mais ajuda de protenas
especficas do nuclolo, montam-se as subunidades menor e maior, que so enviadas
separadamente para o citoplasma onde vo ser montadas em um ribossoma ativo e serem engajadas
na sntese proteica. Costuma-se chamar, de maneira imprpria, ncleo na clula em repouso. No
entanto, nesse perodo a clula est em constante atividade para sua manuteno e do organismo,
s no est se reproduzindo. A clula para atender funes especiais dentro do organismo ou para
manter constante o nmero de clulas ou para gerar clulas que iro funcionar como gametas para
poder atender s reprodues sexuadas, ela ir realizar dois processos distintos: mitose, onde a
clula tem como funo gerar duas clulas-filha com informao gnica igual a da clula me e
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meiose, onde essas clulas geram quatro clulas-filha onde a informao gnica metade da
clula-me original. O que iremos ver hoje so os processos de mitose e meiose, alm do ciclo
celular para que a clula possa entrar em diviso (intrfase). O ncleo quando a clula entra em
diviso celular sofre vrias modificaes que visam a atender o objetivo final que transmitir ou
dividir a informao gentica para as clulas-filha. Para a clula entrar em diviso precisa antes
passar por um processo preparatrio chamado intrfase. A intrfase mais a mitose formam o ciclo
celular.
? Ciclo Celular
Programa Universal seguido por todas as clulas para se dividirem. Esse ciclo celular atribudo nica
e exclusivamente para o processo de mitose e geralmente no usado para o processo de meiose. Esse
programa universal significa que todas as clulas tanto de eucariontes como em procariontes possuem
uma srie de sistemas regulatrios realizados por protenas regulatrias e dotadas de transmisso de
sinais que iro integrar as mensagens recebidas tanto do meio externo (disponibilidade de nutrientes e
sinais quimcos) quanto do interno (tamanho da clula) que ao chegar o momento propicio para a a
clula se dividir ela dispara uma srie de eventos que ir levar a duplicao do DNA e a montagem do
aparato protico necessrio para a separao desse DNA duplicado para cada plo que ir para clulasfilha, alm de fazer a ciso do citoplasma para formar duas clulas diferentes. Todo esse sistema de
diviso celular regulado por uma srie de protenas e a ao integrada dessas protenas o chamado
ciclo celular. Podemos dividir o ciclo celular em quatro fases distintas: G1, S, G2 e M.
1) Na fase G1, a clula que acabou de se reproduzir e gerou a clula filha e de modo geral tem
um tamanho menor que a me, mas durante esse perodo ela sintetiza novos constituintes celulares,
para atingir o tamanho de uma clula adulta e poder desenvolver seu potencial dentro do organismo. A
partir da ela pode tomar dois caminhos distintos, um destes seria entrar em processo de diviso celular
passando para a fase S onde h a duplicao do material gentico seguindo para a fase G2, e aps esse
processo preparatrio ocorre ento a diviso do citoplasma e da membrana formando duas clulas,
num processo chamado Mitose ou fase M. De uma maneira geral, os organismos unicelulares sofrem
ciclos continuos de diviso celular, que quer dizer que se voc encontra uma soluo com nutrientes
eles iro se duplicar at exaurir a quantidade de nutrientes do meio. A nica coisa que restringe o
processo de diviso a quantidade de nutrientes do meio. No caso de organismos pluricelulares, os
ciclos de diviso so regulados, ou seja, no bastam apenas nutrientes no meio de cultura para essas
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clulas se dividirem, pois se isso acontecesse estaramos constantemente crescendo. Alm dos
nutrientes as clulas necessitam de determinados hormnios chamados de fatores de crescimento que
esto no organismo em quantidades grandes estimulando cada um determinada regio do organismo.
Assim pode-se regular o crescimento da populao de clulas e evitar que se tenha um crescimento
exagerado de um determinado rgo em relao a outro.
Retomando: o ciclo celular se divide em quatro fases distintas G1 (que se caracteriza pelo crescimento
celular, ou seja, a clula sintetiza os componentes necessrios a sua funo no organismo). Ao fim
dessa fase ela opta por dois caminhos: o mais comum ir para a fase G0 ou de no-crescimento onde a
maior parte das clulas do nosso organismo est estacionada. Essa fase G0 pode ser temporria, como
ocorre com os leuccitos que s comeam a se dividir na presena do antgeno, ou permanente, onde
nessas clulas que optam por esse tipo, diferenciam-se e no mais voltam a se dividir como o caso
das fibras musculares e dos neurnios. Os neurnios no podem ser repostos, ou seja, a quantidade de
neurnios de um indivduo adulto a mesma de quando nasceu. Um outro caminho para a fase G1
seguir para a fase S (S de sntese de DNA) para se iniciar a diviso celular.
Para passar da fase G1 para a fase S a clula deve receber um sinal regulatrio formado por um ponto
chamado Start onde ocorre a regulao. Esta regulao feita por uma protena quinase e uma protena
regulatria. A protena quinase a p34 encontrada sempre dentro da clula em qualquer fase da vida
dessa, e ativada por uma protena regulatria chamada de ciclina. A fase S ser ativada o complexo
p34-ciclina. A p34 sozinha inativa e ativada pela ciclina que sintetizada no final da fase G1 e aps
30 minutos ela completamente degradada. S que ainda a formao desse complexo no suficiente
para ativar a fase S, ele pega diversas vias de sinalizao compostas por vrias protenas quinases e
vrias fosfatases que iro ser estimulados pela presena de hormnios, nutrientes, tamanho da clula e
assim sucetivamente ativando o complexo p34-ciclina que ir atuar na transcrio gnica e faz com
que ela sintetize toda maquinaria necessria a duplicao de DNA. Entre as protenas sintetizadas
temos a DNA polimerase que faz a sntese da fita complementar de DNA, protenas regulatrias,
helicases, protenas ligadoras de fita...
Retomando: no final da fase G1 num ponto chamado Start h formao de ciclina que ir juntar-se
protena quinase p34 formando o complexo p34-ciclina que ir fosforilar protenas alvo nucleares que
modulam a transcrio gnica induzindo a formao de, por exemplo: DNA polimerase (responsvel
pela duplicao do DNA), a SSBP (protena ligadora de fitas simples do DNA), helicases, protenas
19
ligadoras de origem de replicao e assim por diante. A DNA polimerase iria separar as fitas de DNA
em duas fitas simples e assim a ssb promoveria a ligao dessas fitas simples com nucleotdeos
formando duas fitas duplas. Alm dessas protenas regulatrias, h a induo da formao de protenas
estruturais para a formao da lamina nuclear. Ainda no h o mapeamento de todas protenas que
sinalizam esse estimlo da diviso do DNA.
2) Ento na fase S ocorre a duplicao da fita de DNA.
A palavra cromossomo em Biologia utilizada para designar duas estruturas completamente
diferentes: o interfsico e o mittico. O interfsico representado pelas duas fitas de DNA mais as
protenas asssociadas, a fita simples seria a cromtide ou o cromossomo n. Ns humanos possumos 46
cromossomos n, 23 de origem paterna e 23 de origem materna. O cromossomo mittico formado por
uma estrutura em forma de X, onde h duas fitas de DNA unidas pelo centrmero. Nesse caso temos
46 cromossomos e 92 cromtides. As duas fitas so exatamente iguais e herdadadas de um nico
genitor. Durante esse breve perodo nossa clula fica tetraplide, ou seja, fica com quatro cpias de um
mesmo tipo de cromossomo. Na mitose ser dividida em 46 cromossomos para cada clula.
3) Ao terminar a sntese de DNA, a clula entra automaticamente na fase chamada G2, uma
fase de verificao para verificar se a clula atende a todos pr-requisitos para diviso. Se todos prrequisitos forem atendidos, novamente entra em ao o complexo p34-ciclina diferente do anterior que
ir promover o processo de mitose que envolve dois processos distintos: separao dos cromossomos
para plos opostos da clula e diviso da clula (citocinese).
4) A fase seguinte a fase M, com durao bastante curta em relao as outras etapas do ciclo
celular e em alguns organismos pode demorar 30 min, e em outros 2 horas. Duas modificaes
interessantes entre essa fase e a intrfase so: o citosqueleto, que na intrfase se espalha
homogeneamente pela clula e na mitose reestruturado para formar o fuso mittico para poder mover
os cromossomos para polos opostos da clula; outra modificao ser dentro do ncleo com a
condensao dos cromossomos e dissoluo do ncleo com a formao de uma placa equatorial de
cromossomos.
20
de [ ]), a diferena na quantidade de qualquer substncia entre dois meios (podendo ser meio intra ou
extra celulares). rea de seco reta, o espao pelo qual ocorrer a difuso (seria o tamanho "porta"
pelo qual ocorrer a difuso). A difuso ser maior em ambientes quentes, locais com temperaturas
elevadas aceleram o movimento das molculas.A distncia corresponde o percurso que a molcula ir
percorrer para difundir, isto , a distncia entre os dois meios.
E o peso molecular refere-se ao prprio peso da molcula, molculas pesadas dificultam os seus
transportes. Assim sendo, a diferena de [ ], rea de seco reta e temperatura so diretamente
proporcionais, isto , esses fatores aumentando, aceleram a difuso. A demais, distncia e peso
molecular so inversamente proporcionais, e, portanto, a diminuem.
TRANSPORTE ATIVO
Estudando difuso podemos concluir que no possvel uma molcula difundir contra o seu gradiente.
No entanto, ocorrem determinadas situaes nos quais uma determinada substncia difunde-se contra
seu gradiente, por exemplo: uma substncia em [ ] reduzida no lquido extracelular e mesmo assim, h
necessidade de [ ] elevada no meio intracelular. Ou ainda, substncia que difunde para o meio
intracelular e h necessidade de sua remoo, mesmo que apresente reduzida [ ] no meio intracelular
em relao ao extracelular.Esse transporte de substncia contra seu gradiente denomina-se de
TRANSPORTE ATIVO. Podemos caracteriz-lo como um transporte que GASTA ENERGIA e utiliza
CARREADORES. Como ocorre na difuso facilitada, as protenas carreadoras se estendem por toda a
espessura da membrana e nesse caso, transporte a substncia contra o gradiente com o uso de energia.
A. Bomba de Sdio e Potssio
As concentraes de Na+ e K+ so diferentes entre os meios, e assim sendo, tendem a difundir atravs
dos canais proticos para dentro e fora da clula, respectivamente. Caso ocorra, a homeostase da clula
se perde. Para que no ocorra essa perda da homeostase, a clula utiliza um transporte ativo
denominado de bomba de Na+ e K+ . A intensidade dessa bomba suficiente para retornar as
concentraes aos valores ideais.Sendo um meio de transporte, a bomba de Na+ e K+ possui duas
protenas carreadoras, a menor sem funo conhecida e a maior, apresenta trs stios especficos. A
parte voltada para o meio interno da clula possui um stio com afinidade a trs ons Na+, a parte
voltada para o meio exterior da clula possui um stio com afinidade a dois ons K+ , a parte prxima
ao stio de afinidade ao Na+ apresenta atividade energtica (ATPase).
23
Quando na poro interna da protena fixarem trs ons Na+ e na poro externa dois ons K+, esse ons
so transportados para o meio externo e meio interno, respectivamente. Aps o transporte, utiliza-se
energia da molcula do ATP para ativar a protena para no transporte.
B. Bomba de Clcio
O on clcio muito importante para o mecanismo de contrao muscular, tanto esqueltica quanto
miocrdica. No corao a [Ca++] no meio intracelular insuficiente para promover a contrao do
corao, e elevada no meio externo. Assim sendo, o Ca++ difunde-se para o meio interno. Porm, ainda
assim, insuficiente. Dentro do citoplasma da clula, existe uma organela denominada de retculo
sarcoplasmtico que rico em Ca++, que tambm, permitir a difuso desse on para o citoplasma.
Com o Ca++ do meio extracelular mais o Ca++ do retculo, a [ ] desse on suficiente para promover a
contrao do corao.Aps a contrao, o on Ca++ dever retorna aos seus respectivos locais de
origem, entrando em o transporte ativo do Ca++. A bomba de Ca++ apresenta caractersticas
importantes:
1. a bomba de Ca++ encontrada em dois locais, nas membranas celulares e nas membranas do retculo
sarcoplasmtico (mitocndrias);
2. sua funo s transportar Ca++ do meio intra para dentro do retculo (e mitocndrias) e para o meio
extra.
TRANSPORTES ATIVOS SECUNDRIOS
So denominados de transportes ativos secundrios, trs mecanismos que no apresentam as mesmas
caractersticas das bombas e das difuses anteriores.
A. Co-transporte de Sdio com Glicose ou Aminocidos
Nas clulas intestinais, a glicose e os aminocidos, so absorvidos do bolo alimentar por meio de uma
protena carreadora que utiliza o transporte do sdio. A energia para esse transporte no vem do ATP,
mas sim da diferena do gradiente de concentrao desse on entre os meios. A protena transportadora
est localizada na membrana da parede do intestino e apresenta dois stios de fixao. Sendo um deles
para o Na+ e o segundo para a glicose ou para os aminocidos.
24
B. Contra-transporte ou antiporte
Esse transporte muito comum nos rins, onde o organismo necessita excretar hidrognio (H+) para
formar a urina e no alterar o pH. O mecanismo desse transporte funciona da seguinte maneira, o
movimento de uma substncia em uma direo fornece energia para o movimento acoplado de uma
segunda na direo oposta. O contra-transporte muito comum, quando excretado o H+ e absorvido
o Na+.
C. Transporte Dependente
Ocorre tambm nos rins, sem alterar as cargas eltricas, realizado quando os rins absorvem o Na+ junto
com o cloro (Cl-).
25
Captulo 4
INFORMAO HEREDITRIA
Os cidos Nuclicos so as molculas com a funo de armazenamento e expresso da informao
gentica.
o
Os Nucleotdeos:
o
So as unidades fundamentais dos cidos nuclicos. Ligam-se uns aos outros atravs de ligaes
fosfodister, formando cadeias muito longas com milhes de resduos de comprimento. Alm de
participarem da estrutura dos cidos nuclicos, os nucleotdeos atuam tambm como
componentes na estrutura de coenzimas importantes no metabolismo oxidativo da clula, e como
forma de energia qumica - ATP, por exemplo. Atuam ainda como ativadores e inibidores
importantes em vrias vias do metabolismo intermedirio da clula.
26
Tanto o DNA como o RNA, possuem as mesmas bases pricas, e a citosina como base pirimdica. A
timina existe apenas no DNA, e no RNA, substituda pela uracila - que possui um grupo metil a
menos. Em alguns tipos de DNA virais e no RNA de transferncia podem aparecer bases incomuns
As Pentoses:
O Fosfato:
A adio de um ou mais radicais fosfato pentose, atravs de ligao tipo ster com a hidroxila do
carbono 5 da mesma, d origem aos Nucleotdeos. Os grupos fosfato so responsveis pelas cargas
negativas dos nucleotdeos e dos cidos nuclicos. A adio do segundo ou terceiro grupo fosfato
ocorre em seqncia, dando origem aos nucleotdeos di e trifosfatados.
O DNA:
Est presente no ncleo das clulas eucariticas, nas mitocndrias e nos cloroplastos, e no citosol das
clulas procariticas. Nas clulas germinativas e no ovo fertilizado, dirige todo o desenvolvimento do
organismo, a partir da informao contida em sua estrutura. duplicado cada vez que a clula
somtica se divide.
O RNA:
27
Atua como uma espcie de "cpia de trabalho", criada a partir do molde de DNA e utilizada na
expresso da informao gentica. A sntese de uma molcula de RNA a partir de um molde de DNA
chama-se "TRANSCRIO". Nesta transcrio, modificaes podem ocorrer sobre a molcula de
RNA transcrita, convertendo-a de uma cpia fiel em uma cpia funcional do DNA.
??
??
por mais de uma molcula de RNAt. So em nmero de cerca de 50 RNAt no ser humano, para 61
cdons diferentes;
??
A hiptese "wobble", ou de oscilao, tenta explicar como um RNAt pode reconhecer mais de um
cdon; nesta hiptese, o pareamento da primeira base do anticdon (5) no necessariamente feita
do modo tradicional. Assim, nesta posio, G pode parear com C ou U, e U com A ou G, por
exemplo;
??
O RNA Mensageiro: Produzido a partir de um molde de DNA no ncleo da clula, vai ao citosol
para ser traduzido em uma seqncia polipeptdica;
??
Ribossomos: So organelas formadas por uma complexa associao entre protenas e RNA
ribossmico, localizadas no citosol na forma livre ou associadas ao retculo endoplasmtico,
quando sintetizam protenas que sero "exportadas" da clula. So formados por duas subunidades,
uma maior e outra menor, cujas caractersticas so expressas em termos de coeficientes de
sedimentao, ou "S" (de Svedberg). O ribossomo eucaritico formado por uma subunidade 60S
e outra 40S; o procaritico, por uma subunidade 50S e outra 30S.
??
Compem um ribossomo:
??
??
??
??
Fatores Proticos:
Fontes de Energia
29
Em etapas:
30
??
Em etapas:
O Fator de Elongamento eEF-1 dirige a seleo do RNAt correto para o posicionamento no stio "A"
do complexo de iniciao. Este posicionamento depende ainda da hidrlise de um GTP e ocorre com
posterior liberao do eEF1.
H a formao da ligao peptdica entre os dois aminocidos adjacentes. A enzima
peptidiltransferase, componente da subunidade ribossmica 60S, faz a transferncia da metionina
inicial do stio "P" para o aminocido do stio "A", formando um dipeptidil-RNAt. O ribossomo movese - s custas do GTP - na direo 5-3 em uma distncia de 3 nucleotdeos, com a ajuda do eEF-2, ou
"translocase", posicionando o peptdeo no stio "P" e liberando o stio "A" para o posicionamento de
um novo aminocido. O RNAt livre liberado, e o processo se repete at a traduo completa do
RNAt.
Liberao da Cadeia Polipeptdica: O surgimento de um cdon de trmino - UAG, UGA ou
UAMINOCIDO - determina a ligao de um "Fator de Liberao", ou eRF, associado ao GTP. Este
fator de liberao determina o rompimento da ligao entre o ltimo aminocido e seu RNAt. A
dissociao do eRF do ribossomo depende da hidrlise do GTP.
Modificaes Ps-Traducionais
Vrias modificaes podem ser impostas cadeia polipeptdica aps a sua biossntese. As principais
modificaes so:
Reduo do Tamanho = Converso de protenas inativas e zimognios nas suas formas ativas, por
remoo de seqncias de aminocidos catalisadas por endoproteases especficas.
Alteraes Covalentes = Fosforilao, glicosilao, hidroxilao, etc.
Algumas protenas so ainda endereadas a organelas especficas da clula ou mesmo ao meio
extracelular.
31
A presena de um carbono central alfa, quase sempre assimtrico; nas protenas encontramos apenas
"L" aminocidos. Ligados a este carbono central, h um grupamento CARBOXILA, um grupamento
AMINA e um tomo de hidrognio. O quarto ligante um radical chamado genericamente de "R",
responsvel pela diferenciao entre os 20 AMINOCIDOS. a cadeia lateral dos aminocidos. o
radical "R" quem define uma srie de caractersticas dos aminocidos, tais como polaridade e grau de
ionizao em soluo aquosa. a polaridade do radical "R" que permite a classificao dos
aminocidos em trs classes:
Classificao dos Aminocidos
Alanina, Valina, Leucina, Isoleucina, Prolina - Forma anel imina, Fenilalanina, Triptofano, Metionina
- "R" contm enxofre.
Aminocidos com Radical "R" Polar No-Carregado:
32
aminocidos. As protenas exercem na clula uma grande variedade de funes, que podem ser
divididas em dois grupos:
Dinmicas ? Transporte, defesa, catlise de reaes, controle do metabolismo e contrao, por
exemplo.
Estruturais ? Protenas como o colgeno e elastina, por exemplo, que promovem a sustentao
estrutural da clula e dos tecidos.
A Ligao Peptdica
Ocorre entre os grupamentos amina e carboxila ligados ao carbono alfa dos aminocidos, com a sada
de uma molcula de gua. As ligaes peptdicas possuem propriedades especiais, tais como um
carter de dupla ligao parcial, rgida e planar, e configurao quase sempre "TRANS". Apesar disso,
o peptdeo tem grande mobilidade rotacional, pois as ligaes entre o carbono alfa dos resduos do
aminocido e seus radicais carboxila e amina possuem giro livre sobre seus eixos:
Ligao y (psi) ? Entre o carbono alfa e o carbono da carbonila
Ligao f (phi) ? Entre o carbono alfa e o nitrognio do grupamento amina
Quanto Composio:
Protenas Simples ? Por hidrlise liberam apenas aminocidos.
Protenas Conjugadas ? Por hidrlise liberam aminocidos mais um radical no peptdico,
denominado
GRUPO
PROSTTICO.
Ex:
metaloprotenas,
hemeprotenas,
lipoprotenas,
glicoprotenas, etc.
Quanto ao Nmero de Cadeias Polipeptdicas:
Protenas Monomricas ? Formadas por apenas uma cadeia polipeptdica
Protenas Oligomricas ? Formadas por mais de uma cadeia polipeptdica; so as protenas de
estrutura e funo mais complexas
34
Quanto Forma:
Protenas Fibrosas ? De estrutura espacial mais simples
Protenas Globulares ? De estrutura espacial mais complexa
Protenas Homlogas:
So protenas que desempenham a mesma funo em tecidos ou em espcies diferentes. Estas
protenas possuem pequenas diferenas estruturais, reconhecveis imunologicamente. Os segmentos
com seqncias diferentes de aminocidos em protenas homlogas so chamados "SEGMENTOS
VARIVEIS", e geralmente no participam diretamente da atividade da protena. Os segmentos
idnticos das protenas homlogas so chamados "SEGMENTOS FIXOS", e so fundamentais para o
funcionamento bioqumico da protena. As protenas possuem complexas estruturas espaciais, que
podem ser organizadas em quatro nveis, crescentes em complexidade:
Estrutura Primria: Dada pela SEQNCIA DE AMINICIDOS E LIGAES PEPTDICAS da
molcula (esqueleto covalente da molcula, dele deriva todo o arranjo espacial da molcula). Pode
variar em trs aspectos, definidos pela informao gentica da clula: nmero de aminocidos;
seqncia de aminocidos e natureza dos aminocidos. A estrutura primria da protena resulta em
uma longa cadeia de AMINOCIDO semelhante a um "colar de contas", com uma extremidade
AMINO TERMINAL" e uma extremidade "CARBOXI TERMINAL". A estrutura primria de uma
protena destruda por HIDRLISE qumica ou enzimtica das ligaes peptdicas, com liberao de
peptdeos menores e aminocidos livres.
Estrutura Secundria: dada pelo arranjo espacial de aminocidos prximos entre si na seqncia
primria da protena. o ltimo nvel de organizao das protenas fibrosas, mais simples
estruturalmente. Ocorre graas possibilidade de rotao das ligaes entre os carbonos a dos
aminocidos e seus grupamentos amina e carboxila. O arranjo secundrio de um polipeptdeo pode
ocorrer de forma regular; isso acontece quando os ngulos das ligaes entre carbonos a e seus ligantes
so iguais e se repetem ao longo de um segmento da molcula. So dois os tipos principais de arranjo
secundrio regular:
alfa-Hlice: a forma mais comum de estrutura secundria regular. Caracteriza-se por uma hlice em
espiral formada por 3,6 resduos de aminocidos por volta. As cadeias laterais dos aminocidos se
35
Pontes de hidrognio
Interaes hidrofbicas ? Tendncia dos aminocidos com radical "R" apolar de se acomodar no
interior de uma estrutura dobrada, "fugindo" do contato com a gua.
Interaes Inicas ? Foras de atrao entre aminocidos com radicais "R" carregados com cargas
opostas.
Cadeias polipeptdicas muito longas podem se organizar em DOMNIOS, regies com estruturas
tercirias semi-independentes ligadas entre si por segmentos lineares da cadeia polipeptdica. Os
domnios so considerados as unidades funcionais e de estrutura tridimensional de uma protena.
Estrutura Quaternria:
Surge apenas nas protenas oligomricas. Dada pela distribuio espacial de mais de uma cadeia
polipeptdica no espao, as subunidades da molcula. Estas subunidades mantm-se unidas por foras
covalentes, como pontes dissulfeto, e ligaes no covalentes, como pontes de hidrognio, interaes
hidrofbicas, etc. As subunidades podem atuar de forma independente ou cooperativamente no
desempenho da funo bioqumica da protena.
Processo de Enovelamento das Protenas: Como dirigido o processo de novelamento da cadeia
polipeptdica? Por muito tempo aceitou-se a explicao de que a estrutura tridimensional das
molculas proticas dependia exclusivamente das suas estruturas primrias. O enovelamento das
protenas um processo que depende da participao de outras protenas muito especializadas:
Cis-Trans-Prolil Isomerases ? Enzimas que catalisam a converso entre ligaes cis e trans de
resduos de prolina, buscando uma configurao adequada destas ligaes.
Protena-Dissulfeto Isomerases ? Facilitam o arranjo ideal das ligaes dissulfeto, estabilizando-as.
Chaperonas ? protenas que participam do processo de enovelamento das cadeias polipeptdicas logo
aps a sua biossntese no ribossomo.
O resultado da atuao destas protenas e das foras de estabilizao de estrutura tercirio garante a
formao de estruturas espaciais estveis mais dinmico.
37
Captulo 5
ALIMENTOS
A evoluo das espcies se apia em novas maneiras de se obter energia das mais variadas fontes para
assim melhor aproveitar as matrias-primas que a natureza oferece aos seres vivos. Seres mais eficazes
na forma de obter energia tm-se mostrado mais adaptados e seus descendentes impem-se na
pirmide evolutiva. Um grupo numeroso de seres vivos especializou-se em obter energia a partir da luz
e mais uma srie de compostos qumicos que extrai da terra e do ar: so os auttrofos
(fotossintetizantes, como os as plantas e o plancton), capazes de sintetizar suas prprias fontes
energticas. Acontece que esses compostos so sintetizados em tamanha quantidade que dificilmente
utilizado totalmente pelo auttrofo, sendo necessrio armazen-lo em grandes quantidades (p. ex. o
amido e os leos das sementes) ou excret-lo, como o caso do oxignio.
Aproveitando-se desse "excesso" de alimentos, um outro grupo de seres vivos, os hetertrofos,
especializou-se em obter a energia necessria para suas reaes orgnicas alimentando-se dos seres
auttrofos ou de seus dejetos (os decompositores). Existem, tambm, algumas molculas
indispensveis para o funcionamento das clulas vivas que s so sintetizadas pelos auttrofos, como
alguns aminocidos e as vitaminas. Os auttrofos, por sua vez, tambm necessitam de matria prima
derivada dos hetertrofos como o gs carbnico e os produtos da decomposio de seus tecidos.
De qualquer forma, esta relao, que nasce da tentativa desesperada das espcies em se
autopreservarem, forma um elo indissolvel entre os produtores (auttrofos), consumidores
(hetertrofos) e os decompositores, construindo uma complexa teia alimentar que faz com que a Terra
funcione como um gigantesco ser vivo e prossiga, lentamente, seus passos evolutivos.
A relao entre os consumidores (um herbvoro), os decompositores (bactrias e fungos) e os
produtores (plantas).
O ato de obter substratos para as reaes orgnicas bsicas que ocorrem no interior das clulas dos
seres vivos, em suma, constitui a alimentao. Apesar de as relaes bioenergticas entre as
biomolculas serem fundamentais para a biologia celular, biomolculas que no produzem energia de
forma direta possuem funes chaves neste processo. Basicamente, os nutrientes de origem alimentar
38
so fornecidos pelos carboidratos (acares), lipdios (gorduras) e protenas que possuem funo
primordial a produo de energia a nvel celular. Outros nutrientes fundamentais vida so as
vitaminas, os minerais e as fibras. A gua corresponde ao elemento qumico em maior quantidade nos
seres vivos (cerca de 70% do peso total) e o solvente dos demais compostos qumicos celulares. ,
portanto, indispensvel na alimentao.
CLASSIFICAO DOS ALIMENTOS: pode-se classificar os alimentos de vrias formas, de acordo
com o ponto de vista (composio, consistncia, modo de preparo etc.). Do ponto de vista bioqumico,
a melhor classificao diz respeito s suas propriedades biolgicas:
Energticos: fornecem substratos para a manuteno da temperatura corprea a nvel celular, liberando
energia para as reaes bioqumicas. So os carboidratos, lipdios e protenas. Os carboidratos so os
alimentos energticos por excelncia (4,1 kcal/g), pois so diretamente sintetizados na fotossntese dos
auttrofos e todos os seres vivos possuem as enzimas necessrias para sua degradao. Os lipdios e as
protenas, apesar de possurem poder energtico igual ou superior mesmo aos carboidratos, tm
funes outras no organismo e so absorvidos aps a absoro dos carboidratos, sendo utilizados,
secundariamente, como produtores de energia, apesar do alto poder calrico (9,3 kcal/g dos lipdios e
4,1 kcal das protenas). Os lipdios so os principais elementos de reserva energtica uma vez que so
primariamente armazenados nos adipcitos antes da metabolizao heptica.
Estruturais: atuam no crescimento, desenvolvimento e reparao de tecidos lesados, mantendo a forma
ou protegendo o corpo. So as protenas, minerais, lipdios e gua.
Reguladores: aceleram os processos orgnicos, sendo indispensveis ao ser humano: so as vitaminas,
aminocidos e lipdios essenciais, minerais e fibras.
NECESSIDADE DOS ALIMENTOS: em condies normais, diariamente a energia absorvida deve
ser igual energia gasta pelo indivduo, com a alimentao devendo conter uma quantidade tal de
alimentos das trs classes (energticos, estruturais e reguladores) que possibilitem as atividades
metablicas bsicas do organismo sem carncias ou excessos calricos.
O gasto de energia varia de acordo com o ambiente, com tipo de alimentao e a taxa basal metablica
(quantidade de energia necessria para a manuteno das funes fisiolgicas bsicas) que
proporcional ao peso corpreo, rea corporal e ao sexo (nos homens e nos jovens maior que nas
mulheres e idosos em virtude de suas atividades metablicas serem diferentes). Pode-se medir a taxa
39
basal metablica de um indivduo colocando-o em uma cmara isolada para medir perdas de calor e
produtos excretados em relao alimentao e o consumo de oxignio. Normalmente, um litro de
oxignio consumido equivale a, aproximadamente, 4,83 kcal de energia gasta. Naturalmente no
possvel realizar este teste para cada um de ns, porm conhecendo-se a necessidade mdia por grupo
etrio, sexo e atividade fsica, pode-se sugerir as necessidades calricas mnimas.
Deve-se levar em considerao o efeito termognico dos alimentos, onde uma taxa de cerca de 5 a
10% da energia total que pode ser fornecida pelo alimento, gasta para ser digerida. Esta taxa varia de
acordo com o alimento, dependendo de sua digestibilidade.
Absoro de energia recomendada para homens e mulheres.
Categoria Idade (anos) Peso (Kg) Energia Necessria (kcal)
Homens
23 - 50
70
2.300 - 3.100
Mulheres
23 - 50
55
1.600 - 2.400
Grvidas
+ 300
Lactentes
+ 500
HORMNIOS
Como que o Sistema Nervoso pode detectar variaes fazendo com que o Sistema Endcrino se
responsabilize pelas reaes metablicas que vo se contrapor as essas variaes? Para isso, sero
dados dois exemplos. A variao de temperatura do meio externo a 14o C e nossa temperatura corporal
em torno de 37o C, no h variao da nossa temperatura, porque ela foi detectada por recepontoores
do nosso SNC que enviaram mensagem ao SE, depois de estimular o hipotlamo - centro controlador
da temperatura que sinaliza paraminocidodeno-hipfise que preciso liberar hormnio estimulante da
tireide, com o objetivo de modificar a atividade
aumentar a quantidade de energia livre para trocar com o ambiente. A variao da glicemia outro
exemplo clssico. Mas como pode o SN estar envolvido com essa variao se a insulina que no um
hormnio hipofisrio?
Esquema:
O SN com as variaes do meio ambiente. Essas so detectadas por recepontoores do SNC que
sinalizam atravs de impulsos nervosos estimulam o hipotlamo, que quando estimulado, sintetiza e
libera os neuro-hormnios, mas a maioria dos livros chama de fatores de liberao, que estimulam a
adeno-hipfise (mais precisamente as suas clulas secretoras) a sintetizar os seus hormnios que atuam
em rgos especficos e hormnios de ao inespecfica. O fator de liberao correspondente ao TSH
41
o TRH que estimula adeno-hipfise a sintetizar e liberar TSH na circulao que tem dois nveis de
atuao: em rgo alvo (glndula tireide) a produzir T3 e T4 e pode ter uma ao inespecfica, como
a ao lipoltica, em clulas adiposas. Os glicocorticides tm sua sntese e liberao estimulada pela
ao do ACTH, hormnio adreno corticotrfico que tem como neuro-hormnio correspondente o CRH
que quando liberado estimula a produo de glicorticides pelo crtex das supra-renais, mas esse
ACTH tambm tem ao inespecfica, ou seja, ao lipoltica, as clulas adiposas tambm tm
recepontoores para ACTH. E que tipo de estmulo ocorre para a liberao de CRH e ACTH na adenohipfise? Os nveis de glicocorticides na circulao. o controle por feedback. O mesmo ocorre com
TRH e TSH.
Somente a partir do incio do sculo com o estudo de dois pesquisadores Bayliss e Starling pode se
definir com exatido hormnios que at ento, desde o sculo XVI, eram confundidos com vitaminas
que no fazem parte de nenhum componente estrutural, mas eles tambm no o so. Eles tm uma
vida mdia curta e para desempenhar as suas funes fisiolgicas so exigidos em pequenas
concentraes assim como as vitaminas. Ento, confundia-se hormnio com substncia nutritiva. S
em 1904 com o trabalho desses pesquisadores que se chegou a uma definio do conceito atravs de
uma experincia: eles fizeram um extrato da mucosa duodenal, diluram em HCl
e injetaram
(endovenosa) em rato e o que eles perceberam? Que havia estmulo da liberao de suco pancretico.
Esse extrato deveria conter uma substncia que excitava acordava) o pncreas para liberar o suco e
essa subst. era a secretina, primeiro hormnio descoberto. O conceito : so substncias de ao
sistmica produzidas em clulas especializadas que, quando liberadas, na circulao tem ao
endcrina, modificam a atividade metablica das clulas que contm receptores (contribuindo para o
desenvolvimento do organismo). Observao: As prostaglandinas so colocadas como hormnios por
alguns autores, entretanto, no tem ao sistmica, no tem ao endgena e no so liberadas na
circulao. Por isso, duvidosa a afirmao. De que maneira atuam os hormnios?
Os hormnios que no entram nas clulas, necessitam de segundos mensageiros para fazer o seu papel
dentro delas, ou seja, com exceo dos hormnios tiroidianos e esterides, os outros precisam de
segundos mensageiros. Os tiroidianos entram diretamente nas clulas e se ligam a receptores proticos
da cromatina nuclear com o objetivo de induzir e inibir a sntese de protena. Por exemplo, a sntese
do hormnio do crescimento s feita na presena deles. Enquanto que os esterides se ligam a
recepontoores especficos citoplsmaticos que se dirigem ao ncleo para induzir ou reprimir a sntese
de protena.
carboxilase, glicose-6-fosfatase.
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Metabolizar liberar para reaproveitar os produtos. Como se obtm a partir desse cido fosfatdico o
PIP2? Primeiro combina o cido com inositol (lcool cclico - 6 C, 6 OH), formando fosfatidil inositol
(PI), depois s fosforilar e formar o fosfatidil inositol 4, 5 fosfato.
Qual o mecanismo fisiolgico que leva a formao dos segundos mensageiros IP3 e DAG? O
hormnio se liga a recepontoores de membrana que estimulam a enzima fosfolipase C que catalisa a
transformao de DAG em fosfatidil 1,4,5 trifosfato. Qual a impotncia fisiolgica do IP3? Aumentar
a [Ca+2] citoplasmtico para isso precisa mobiliz-lo de suas reservas (REL10 e mitocndria so as
principais), inclusive aumentando a permeabilidade de clcio (sinalizador celular-contrao muscular,
exocitose de hormnios e coagulao sangunea) na membrana. Mas no citoplasma das clulas no
tem fosfato? Pi + ADP no igual a ATP? Se aumentar [clcio] citoplasmtica, e tem-se fosfato
disponvel, forma-se fosfato de clcio que insolvel. Qual a soluo para evitar a formao desses
10
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sais insolveis? A calmodulina acepontoora de clcio para impedir isso. Ento se forma a
Ca+2calmodulina, que estimula a glicogenlise. Como o IP3 pode estimular a glicogenlise? O clcio
se liga a calmodulina, e esse composto formado uma das subunidades da fosforilase quinase, atua
fosforilando a glicognio fosforilase (fica ativa). Como a Ca+2 uma subunidade da fosforilase
quinase, com o aumento de clcio para a contrao muscular, a fosforilase quinase fica parcialmente
ativa porque a Ca+2calmodulina que uma das suas subunidades aceita Ca+2, ficando ativa
parcialmente.
Qual o papel metablico do DAG (triglicerdeo)? Papel sinrgico ao do IP3, ou seja, potencializador
do IP3. Aumentar a afinidade do Ca+2 pela protena quinase C. E por que sinrgico? O IP3 no
estimula a glicogenlise?
Pois bem, a PKC fosforila a glicognio sintetase, reforando atravs da inibio da sntese de
glicognio. O IP3 e DAG tem vidas mdias curtas, mas como se metaboliza IP3? Pela ao sucessiva
de fosfatases, obtendo inositol. O ltio inibe a reciclagem do inositol, ele defosforilado uma vez, duas
vezes, a terceira fosfatase inibida pelo ltio e deixa-se de obter inositol e impede-se ou pelo menos
diminui, a formao de IP3 por algum tempo. No formando IP3, diminuio da atividade neuronal.
Por que? Dessensibiliza as clulas do SN responsveis pela formao de IP3, diminuindo a circulao
de neurotransmissores.
A tirosina quinase uma protena de membrana. Quando a insulina ou qualquer fator de crescimento
se liga a esse receptor proteico inativo, passa a ter a capacidade cataltica de se auto-fosforilar. Mas
qual a importncia da fosforilao dos resduos de tirosina no lado citoslico? Catalisa a fosforilao
de algumas protenas alfa, como por exemplo, a protena fosfatase- estimulada pela insulina, ficando
fosfoprotena fosfatase que precisa estar fosforilada para estar ativa, ou seja a insulina se liga a tirosina
quinase que se autofosforila e fica capaz de fosforilar protena alfa do tipo fosfoprotena fosfatase 1.
? Propriedades Fisiolgicas de hormnios
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? Funes
presena dos tiroidianos que potencializam a ao daquelas. Hoje se sabe como essa funo do
T3 e T4. Reprimindo a sntese de fosfodiesterase, aumenta a [AMPc] , ento no potencializa a
ao apenas da adrenalina que o usa com segundo mensageiro, potencializa a ao de todos os
hormnios que utilizam o AMPc como tal, desde que celulas que utilizam o AMPc como segundo
mensageiro, respondam aos hormnios tiroidianos. Reprime a sntese de fosfodiesterase induo da
sntese de hormnio do crescimento (GH).
2) Homeosttica (talvez a principal): a ao de um ou vrios hormnios correspondem ao
desenvolvimento. Ex. O barbeiro tem cinco estgios antes de chegar fase adulta e o hormnio
para isso o juvenil, que diminui da hemolinfa na medida que se aproxima da fase adulta.
Entretanto, no nosso organismo o GH fundamental juntamente com os tiroidianos, ele no
desaparece na fase adulta e desempenha diversas funes nesse caso.
4) Integradora: Relao estreita entre Sistema Nervoso (SN) e Sistema Endcrino (SE).
? Classificao
Os proteicos e esterides (glicocorticoides e mineralocorticoides produzidos pelo crtex das suprarenais e os sexuais). Ainda tem os derivados de aminocido, como de tirosina que so as catecolaminas
e os tiroidianos; e os icosanides que so as prostaglandinas derivadas do araquidonato.
? Neuro-hipfise
refinado (controla a vida). Deve haver hormnio ADH para inibir a liberao de gua pela urina
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contendo a variao da presso osmtica. Ao mesmo tempo em que se libera o ADH, estimula-se o
centro da sede, a necessidade de ingesto de gua para diluir o sal que foi ingerido em excesso,
controlando a presso osmtica.
2) Os dois hormnios hipofisrios: ADH e oxitocina (so oligopepontodeos de aminocido, variando
musculatura lisa dos vasos sanguneos, exigindo como 2o mensageiro o IP3. A partir da dcada de
90, vrios trabalhos mostram que no necessidade de concentraes muita elevadas para o efeito
vasopressor como era dito at a dcada passada. O outro efeito em nvel de ductos renais, usando
AMPc como segundos mensageiros que ativam enzimas que catalisam reaes de fosforilao e
essa fosforilao de protena de membrana vai aumentar a permeabilidade da gua, ou seja, s h
reabsoro dela quando certas protena de membrana esto fosforiladas.
Qual o estmulo para a liberao desse hormnio? A variao da presso osmtica pela ingesto de sal
a mais, por exemplo. Essa hipertonicidade do meio provocou o estimulo, atravs dos
osmorrecepontoores que ficam prximos dos ncleos hipotalmicos, formando o ADH quando os
osmorrecepontoores (so receptores do SNC) so ativados. A nusea estimula o centro do vmito que
fica no hipotlamo, nas proximidades dos ncleos hipotalmicos fazendo com que haja a liberao do
ADH. A nusea uma possvel preliminar para perda de lquido atravs do vmito. A nusea, nicotina
e morfina que atuam no centro do vmito estimulam a liberao de ADH. A hemorragia e desidratao
tambm estimulam enquanto que o lcool inibe a liberao do ADH. O estresse agudo (situao de
emergncia) inibe a liberao de ADH, mas crnico estmulo a liberao. (por exemplo, exerccio
fsico prolongado).
A oxitocina, semelhana do ADH, o hormnio que provoca a ejeo do leite e tem dois nveis de
atuao: contrao das clulas mioepiteliais das glndulas mamrias. A prolactina produz o leite.
Como explicar que a ejeo do leite sem o estmulo mecnico? o estimulo do SNC. O segundo efeito
fisiolgico a contrao da musculatura lisa uterina. So controles independentes. O que estimula e o
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O hormnio do crescimento ou GH, um hormnio adeno-hipofisrio que tem como fator de liberao
correspondente ou neurohormnio correspondente GRH. Este hormnio GH uma protena com peso
molecular 21.500 aproximadamente e apresenta na sua estrutura 188 aminocidos. As aes
metablicas do GH so de relativa complexidade. Assim, adotaremos o seguinte mtodo estudaremos
separadamente o efeito desse hormnio sobre o metabolismo dos lipdios, glicdios e aminocidos e na
medida do possvel integrar estes eventos.
Vamos comear pelos efeitos do hormnio do crescimento sobre o metabolismo dos lipdios. Na
medida em que o hormnio de crescimento liberado na circulao vai ocorrendo quase que
simultaneamente uma inibio da captao de glicose pelos tecidos perifricos como musculatura
esqueltica e tecido adiposo, pois, estes so os grandes sugadores de glicose circulante. A
conseqncia desta inibio a hiperglicemia, ento este hormnio considerado hiperglicemiante.
No s o GH que inibe a capontoao de glicose pelos tecidos perifricos, a adrenalina e o glucagon
tambm. Deve haver uma razo metablica e fisiolgica para que isso acontea e essa razo a
necessidade de disponibilizar glicose para as clulas nervosas que utiliza 90% de glicose como
combustvel e isso ocorre principalmente nos intervalos entre as refeies. Assim atendemos a
necessidade de glicose do tecido nervoso. Mas uma questo metablica se coloca: voc inibir a
capontoao de glicose pelos tecidos perifricos para ajudar o tecido nervoso e como que o tecido
perifrico usar energia durante esse perodo? Eles no tero glicose disponvel e que combustvel ser
utilizado neste perodo? cidos Graxos. O GH ter que mobilizar cido graxo para atender a demanda
energtica de nosso organismo. A hiperglicemia no conseqncia apenas deste efeito
conseqncia tambm do fato do GH estimular gliconeognese. A gliconeognese precisa que suas
enzimas principais sejam ativadas o que deve ser realizado pelo GH. A ao de um hormnio
corresponde a uma ao antagnica de outro hormnio. No cado da regulao da glicemia a ao de
vrios hormnios hiperglicemiantes corresponde a ao de apenas um hipoglicemiante (a insulina).
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O que a insulina? um hormnio protico com 51 aminocidos em sua estrutura, duas cadeias
polipepontoidcas uma com 30 aminocidos e outra com 21 aminocidos ligados entre si por duas
pontes dissulfeto. Peso molecular de 5700. um hormnio que liberado quando os recepontoores
proticos da membrana das clulas beta das ilhotas de Langerhans so ocupados pela glicose. Temos
ento liberao de IP3 no meio que ir provocar exocitose das vesculas com insulina. A exocitose
dependente do aumento intracelular de clcio. A insulina um hormnio hipoglicemiante seus efeitos
sobre o metabolismo dos glicidios j forma citados anteriormente. Todo o metabolismo dos glicdios
controlado pela insulina e seus antagnicos (glucagon, por exemplo). A insulina aumenta a absoro
de glicose pela maioria dos tecidos, nem todos o tecido nervoso no depende de insulina, caso
dependesse o diabtico ou a doena diabetes melitus seria de uma gravidade quase letal, pois assim
teria grandes problemas param manter o sistema nervoso funcionando.
intracelular de AMPc, mas ateno, pois somente nas clulas adiposas temos o AMPc como segundo
mensageiro do hormnio GH. Quem disser que estimula a glicogenlise estar completamente errado.
As gorduras sero hidrolisadas em cidos graxos e gliecrol. Os cidos graxos iro para a circulao e
da para os mais variados tecidos inclusive os tecidos perifricos cuja captao de glicose estar
inibida momentaneamente (devido ao quase imediata da insulina). Os cidos graxos passaro a ser
usados como substratos energticos no tecido heptico. O glicerol no pode ser reaproveitado pelas
clulas adiposas, ele ir ento para o fgado onde sofrer a ao daglicerol quinase sendo transformado
em glicerol fosfato que ser substrato para a gliconeognese se transformando em di hidroxi acetona
fosfato que se transformar em gliceraldedo-3-fosfato seguindo o caminho da gliconeognese
formando glicose 6 fosfato. A hiperglicemia provocada pelo GH assegurada pela ativao da
gliconeognese.
A insulina age sozinha contra vrios hormnios hiperglicemiantes. A adrenalina e noradrenalina, por
exemplo, um hormnio derivado de aminocido tirosina ou da fenilalanina, no um hormnio
protico, e produzido na medula da supra-renal. O glucagon um hormnio protico e tem 29
aminocidos em sua estrutura e peso molecular de 3.500, produzido nas clulas alfa das ilhotas
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pancreticas. Adrenalina e glucagon atuam no metabolismo dos lipdios da mesma maneira que o GH,
todos esses so lipolticos. Em relao a glicemia, todos so hiperglicmios tambm. Mas nem em tudo
eles so iguais, apenas nas conseqncias das aes que h semlhana entre eles. A questo da
hiperglicemia , na verdade, um pouco mais refinada. O GH provoca uma hiperglicemia, impedindo a
capontoao de glicose, nas clulas dos tecidos perifricos. J a adrenalina e o glucagon estimulam a
glicogenlise heptica (na verdade dizer glicogenlise heptica uma redundncia j que a quebra de
glicognio para a liberao de glicose ocorre basicamente no fgado) pela ao de AMPc. Por que
todos os livros dizem ento que o glucagon o principal hormnio hiperglicemiante? Isso ocorre
porque ele estimula a glicogenlise heptica e induz a ativao das enzimas da gliconeognese (as
quatro reprimidas pela insulina). A adrenalina no considerada um importante agente
hiperglicemiante por existir no hepatcito enzimas que metabolisam em segundos a adrenalina. Essas
enzimas so: mono amino oxidase e catecol orto metil transferase. Elas metabolisam rapidamente a
adrenalina assim que se ligam aos recepontoores da membrana do hepatcito por isso sua ao no
to eficaz comparada ao glucagon. Isso ocorre por uma razo temporal, de vida mdia, se inibssemos
a atividade cataltica das duas enzimas que degradam a adrenalina ela teria a mesma importncia do
glucagon. Nas clulas musculares, a adrenalina muito mais potente que o glucagon, j que nessas
membranas no se notado a presena das enzimas que degradam a adrenalina, alm disso, o nmero
de receptores para o glucagon bem pequeno nessas clulas deixando seu efeito quase imperceptvel.
Repetindo, glucagon e adrenalina so antagnicos insulina em relao ao metabolismo dos lipdios e
glicdios. Adrenalina produzida na medula da supra renal e glucagon produzido nas clulas alfa das
ilhotas pancreticas, ambos os hormnios liberados por exocitose, ou seja, dependentes de inostol
trifosfato (IP 3). Ambos tm o mesmo efeito do GH no metabolismo dos lipdios. No metabolismo dos
glicdios, adrenalina e glucagon teriam os mesmos efeitos, mas a adrenalina degradada por enzimas
da membrana de hepatcitos assim que se liga a seus receptores. O glucagon ir estimular a
glicogenlise heptica e induz a sntese de enzimas essenciais a gliconeognese o que o GH no faz,
ele estimula a gliconeognese dando a ela seu substrato (glicerol) o que o glucagon tambm faz.
Sobre o metabolismo das protenas, o GH a semelhana do que faz a insulina com os glicdios aumenta
a disponibilidade metablica dos aminocidos no espao intracelular. Ento, na presena de GH h um
aumento no nmero de aminocidos intracelularmente. O destino destes aminocidos prioritariamente
a formao de protenas e quando se tem uma concentrao mais elevada de aminocidos, superando
as necessidades da clula de formar as suas protenas, o destino destes aminocidos ser, serem
desaminados e servirem de substrato energtico ou para a gliconeognese. E, portanto, na presena de
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GH o balano nitrogenado ser positivo. A insulina que um hormnio antagnico do GH, glucagon e
adrenalina no metabolismo dos lipdios e dos glicdios, no ser no metabolismo das protenas. Seu
balano nitrogenado ser positivo tambm. Como se explica este fato? Na presena de insulina h
inibio da gliconeognese, como a glicose est com a sua concentrao elevada no meio intracelular
pela presena de insulina, no h razo de formao de mais glicose a partir de substncias noglicdicas (gliconeognese). Se, temos insulina a glicose est sendo aproveitada como substrato
energtico, os aminocidos ento iro para a biossntese de protenas. Isso ocorre pelo fato de voc
estar carregando a clula com glicose, no necessitando usar aminocidos como substrato energtico.
Como se isso no bastasse a insulina ainda estimula a absoro de aminocidos principalmente pelas
clulas musculares esquelticas.
Antigamente, costumava-se dizer que um estresse ps-cirrgico pode levar a liberao de GH. No
apenas uma ao sobre o sistema nervoso central, pois isso bastaria para estimular a adenohipfise,
devido a relao estreita entre hipotlamo e adenohipfise, mas tambm a leso tecidual que ocorre em
qualquer cirurgia. E para que haja cicatrizao da ferida fundamental que haja sntese de protenas e
para tal necessita-se de GH por motivos j citados.
Mas ser que isso bastaria na discusso do controle do GH? H 20 anos atrs, em 1976, dois
pesquisadores publicaram um artigo que revolucionou o controle da liberao no apenas do GH como
tambm da insulina e do glucagon. Eles isolaram uma substncia com 14 aminocidos, tetra-deca51
Ento temos a entrada rpida da somatostatina nessa via com a funo de estabilizar a hiperglicemia e
este um fato fisiolgico de extrema importncia j que representa um mecanismo poupador de
insulina, ou seja, ao estabilizar a hiperglicemia por um perodo curtssimo em patamares fisiolgicos
estamos economizando insulina. Caso no houvesse este controle ao longo de poucos anos teramos
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um quadro de diabetes. Esta a razo de pessoas obesas, com alimentao baseada em doces e amido,
de vida sedentria e sem histria familiar de diabetes s adquirirem provavelmente esta doena aps os
50 anos devido a diminuio brutal da capacidade do pncreas de liberar insulina. Caso no houvesse
este mecanismo de regulao pela somatostatina este mesmo caso poderia ser visto 15 ou 10 anos antes
do previsto.
Os hormnios sexuais (HS) so produzidos tanto nos ovrios como nos testculos, adrenais e tecido
adiposo. As adrenais e o tecido adiposo representam a fonte hormonal da mulher na menopausa. O
precursor dos HS o colesterol. Ele pode ser da reserva intracelular, vir de lipoprotenas plasmticas
(basicamente LDL) e do acetilCoA. Ento, todos os HS produzidos nos locais acima tm como
precursor o colesterol obtido das fontes descritas acima. O seu caminho na mitocndria e, para que
ele possa entrar nesta organela, ser necessria a presena de calmodulina e clcio. Na mitocndria, o
colesterol se transforma em pregnenolona, o qual deixa a mitocndria se dirigindo para o REL. Neste
local, encerra-se o processo de produo dos HS, que vo, ento, para o Golgi e da so secretados. O
caminho do HS , pois, passar primeiramente mitocndria, onde sintetizada a pregnenolona, a qual
vai para o REL, no qual acaba a sntese do HS, que vai para o Golgi e secretado. No plasma, o HS
estar sempre ligado a protenas transportadoras/ligadoras de hormnios sexuais. Este caminho
vlido tanto para hormnios masculinos como femininos.
Como este processo desencadeado? O hipotlamo, via sistema nervoso, elabora o fator de
liberao de HS que vai agir na adenohipfise, a qual libera o hormnio luteinizante (LH) e o folculo
estimulante (FSH), os quais atuaro no testculo e ovrio, onde so produzidos testosterona, e
progesterona e estrgeno, nos ovrios. O hormnio luteinizante, a nvel testicular, atua nas clulas de
Leydig, na produo de testosterona. Ela tem trs formas de ao. A primeira: circula ligada a
protenas ligadoras de HS. Segundo, ela entra no citoplasma da clula de forma livre (dissociada da
protena ligadora de HS), onde se liga aos seus receptores nucleares, induzindo a sntese de novas
protenas. No caso da prstata, vescula seminal, epiddimo, pele e folculo piloso, a testosterona vai
sofrer a ao da enzima redutase, produzindo diidrotestosterona, que a forma ativa da testosterona
nestes tecidos. Uma terceira maneira da testosterona agira, no hipotlamo e hipfise, ser
transformada em estrgeno. Desta forma, potencializa a atividade andrognica da testosterona: para o
hormnio agir melhor, justamente em locais onde vai ser determinado efeito comportamental,
caracterizao emocional e da personalidade, a testosterona ter seu efeito maior quando parte dela for
transformada em estrgeno. Ento, temos trs maneiras da testosterona agir: ela entra na clula alvo,
desligada da protena ligadora, e induz a sntese de novas protenas, ou transformada em
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progesterona. Da mesma forma que no homem, LH e FSH vo ter locais determinados para atuar. O
LH atua nos ovrios nas clulas da teca interna, ou seja, a camada mais central do folculo. J o FSH
atua nas clulas da granulosa, que a parte mais interna do folculo. O LH vai promover a sntese de
precursores andrgenos, nas clulas da teca interna, que vo para as clulas granulosas, onde haver,
portanto, produo de estrgeno. Na mulher, ento, temos j um fato controlado: somente os
precursores que chegarem nas clulas da granulosa sero transformados em estrgenos.
Em presena de estrgeno, o FSH vai fazer a maturao do folculo ovariano. Tem tambm outros
efeitos: crescimento/diferenciao/manuteno das clulas ciliadas e da atividade motora da Trompa
de Falpio (toda parte de nidao do ovo fecundado ou do percurso feito pelo vulo para ser
fecundado controlado pelo FSH); crescimento do endomtrio - que varia durante o ciclo menstrual e miomtrio (ele vai atuar aumentando a atividade da via glicoltica, sintetizando ATP; ativa a
fosforilase, levando quebra do glicognio, produzindo glicose, que usada tanto para a produo do
ATP e para a diferenciao da clula do endomtrio, como tambm serve de substrato para o
crescimento dos bacilos do Toterham, que mantm o pH de toda a cavidade vaginal e uterina ideal
(cido, pela quebra da glicose em cido lctico) para impedir o crescimento de outros fungos e/ou
bactrias e, com isso, mulheres com deficincia deste hormnio ficaro mais suscetveis a infeces
nestas cavidades. A ativao da deposio de clcio e ossificao das epfises nas mulheres
precocemente), interrompem seu crescimento (ento, quanto mais retardo houver na chegada da
menstruao, mais a mulher poder crescer, porm no tendo sua caracterizao secundria); aumenta
tnus vascular; diminui colesterol plasmtico, enviando-o para as reservas para a sntese de hormnios,
por exemplo.
Ciclo Menstrual: LH e FSH no primeiro dia comeam a ser produzidos, j que a menstruao foi
originada porque no houve nidao do ovo e o corpo lteo regrediu, hormnios (estrgeno e
progesterona) descem da circulao, a preparao para a nidao deixa de existir e a mulher menstrua.
Eles (LH e FSH) atuaro na teca interna e na granulosa. Por volta do 14 dia tem-se a subida do FSH e
do estrgeno. Logo depois, comeam a cair, com o estrgeno permanecendo um pouco mais do que o
FSH. A partir do 14 dia, em funo de muito estrgeno circulante no plasma, teremos feedback
negativo para o FSH e hipotlamo. O LH se mantm mais ou menos constante, j que sua produo
em baixas quantidades (menos que o FSH). Quando o estrgeno atinge a quantidade mxima h,
literalmente, um surto de LH, por volta do 14 dia. Geralmente, cerca de 16 horas aps este surto de
LH ocorre a ovulao, que, portanto, coincide com o pico de estrgeno e o surto de LH. Aps a
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ovulao, o corpo lteo passa a produzir estrgeno e progesterona. Ento, o estrgeno essencial para
que ocorra a ovulao e a progesterona fundamental para a manuteno do ovo fecundado (nidao e
desenvolvimento). Neste surto de LH, costuma ter-se aumento de temperatura corporal. Em caso de
gravidez, a placenta se encarregar de produzir os hormnios para a manuteno do feto e no mais o
corpo lteo. Aps a menopausa, o ovrio no mais produz hormnios femininos, restringindo tal
produo s adrenais e ao tecido adiposo. Porm estes locais produzem muito pouco e, aps a
menopausa, aconselha-se s mulheres a fazerem uso de tratamento hormonal, para evitar problemas,
como a osteoporose, principal problema da mulher aps a menopausa.
O crtex da adrenal utiliza colesterol livre (circulante no plasma) para sintetizar glico e
mineralocorticides. A sntese desses hormnios acontece em dois locais: na mitocndria e no REL. A
primeira reao ocorre a nvel mitocondrial, onde existe um complexo enzimtico chamado de
desmolase que influenciado positivamente pelo ACTH que hormnio da adeno-hipfise que vai
agir no crtex da adrenal para a sntese de glico e mineralocorticoides. O complexo enzimtico est
encarregado basicamente de hidroxilaes no colesterol para formar os hormnios. A fonte para a
sntese desses e as hidroxilaes o NADPH da via das pentoses mas ocorre tambm a participao do
citocromo P450 que citoplasmtico ou mitocondrial. No caso da sntese de hormnios do crtex da
adrenal, a partir do colesterol livre no plasma, o citocromo mitocondrial, mas tambm existe a nvel
citoplasmtico; e no citoplasma, principalmente nos hepatcitos , atua junto s mono e dioxigenases
para detoxificao de metais pesados, aromticos, pesticidas. o agente detoxificador no fgado dos
compostos txicos que o homem tem acesso, sobretudo pela dieta.
A desmolase vai formar a nvel mitocondrial a pregnenolona. At esse passo tudo igual tanto para
hormnio do crtex adrenal, quanto para os hormnios esterides sexuais. Formada a pregnenolona,
vai ao retculoendoplasmtico liso (REL), onde vai ser formado o desoxicortisol que volta para a
mitocndria, onde vai ser formado o cortisol, e esse vai ao plasma. O cortisol o hormnio mais
importante dos glicocorticides. A partir da pregnenolona tambm pode ser formada a aldosterona que
o mais importante mineralocorticide. Ento a via de sntese a mesma. Se a partir da pregnenolona
pode ser formado tento o cortisol como a aldosterona, quem que vai direcionar essa via? A presena
de ACTH vai fazer com que haja a sntese dos dois, mas a aldosterona precisa de outros fatores alm
do ACTH. A aldosterona tambm vai para a circulao. Tanto um como o outro, circulando no plasma
vo estar ligados a transcortina (protena plasmtica especfica para o transporte de cortisol e
aldosterona) e a albumina (protena plasmtica que transporta desde hormnios sexuais como do
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crtex adrenal, como tambm remdios, produtos txicos para serem eliminados por filtrao renal,
ento o transportador-mor do sangue.
Cerca de 90% do cortisol est ligado a essas protenas transportadoras e 10% esto livres, ento
somente 10% do hormnio est sob a forma ativa. Esses 90% so reserva, medida que os 10% forem
consumidos, outros sairo, se desligaro da albumina ou transcortina, passaro ao estado livre e
efetuaro os seus efeitos a nvel tecidual. Apesar de 90% do cortisol estar ligado s protenas
plasmticas, a sua vida mdia na circulao de 70 minutos. Ento desde que liberado pelo crtex da
adrenal, ele tem que resistir dentro ou fora da clula, uma mdia de 70 min. Por o efeito dos
glicocorticoides ser extremamente sistmico e intenso uma garantia que ele tenha a ao apenas de
70 minutos. J a aldosterona tem 50% ligado transcortina e albumina, s que a ligao muito fraca
fazendo com que a meia vida da aldosterona seja menor do que 70minutos. O ACTH, a partir da
formao do cortisol e aldosterona, o cortisol age via AMPc e a aldosterona via AMPc, IP3, DAG e
aumento de clcio intracelular. A aldosterona precisa do influxo de clcio para poder agir porque mexe
com as concentraes inicas.
? Ao dos glicocorticides:
So poupadores de glicose (principal fonte de energia, caminho mais rpido para obteno de
ATP) porque inibe a sntese de protena e, ao mesmo tempo, promove-se a protelise, as peptidases
comeam agir, liberando aminocido. Ento, acontece uma mobilizao de aminocido, a partir da
quebra de protena. O destino desses aminocidos: produzir ATP e gliconeognese. Os aminocidos,
quando desaminados, viram cetocidos que um intermedirio do C.K. Poupando glicose, tem-se que
reverter o processo a partir de outras substncias, nesse caso os aminocidos. A outra via a
gliconeognese, que necessita de enzimas (constitutivas) especficas, que sero ativadas: piruvato
carboxilase, fosfoenol piruvato carboxi quinase, frutose 1,6di-fosfatase, glicognio-6-fosfatase.
Quando o glicocorticide ativa a sintetase, age como a insulina, mas contraditrio. Quando mobiliza
aminocido, age contrariamente, pois aumentando a protelise, anti-insulina. Tambm favorece a
liplise, sendo anti-insulina nesse caso. Quando a pessoa faz regime, est em jejum para fazer
determinado exame, no consegue comer por estresse... Como a pessoa sobrevive? Via
glicocorticides, s que em jejuns prolongados gerais, h a perda de massa muscular, da se explica,
por exemplo, porque uma pessoa fica flcida quando emagrece, porque os glicocorticoides
57
O glicocorticide tem um ritmo circadiano, tem um pico mximo pela manh; e ao anoitecer, o
glicocorticide circulante no sangue prximo de zero. Ento, voc acorda, todas as suas funes
vitais so retomadas at os alimentos entrem nas clulas, voc, entre o despertar e a primeira refeio,
tem um pico de glicocorticides. Quando se levanta, no se deve fazer exerccios porque o corpo est
liberando glicocorticides, tendo protelise, sntese de glicose, produo de ATP, ou seja, ele est
reestabelecendo um equilbrio para que se possa viver aquele dia. O excesso de produo de cortisol
(por exemplo, quando se toma cortisona) vai favorecer a deposio de gordura no pescoo e no tronco,
aparecendo a Doena de Cushing . Na falta total de cortisol, aparece a Doena de Addison, na qual
ocorre diminuio da acuidade auditiva, olfativa e gustativa, aparece insnia, diminuio da
capacidade de concentrao. No plasma, existe circulando uma substncia chamada de
angiotensinognio que vai ser trabalhada por uma enzima chamada renina (produzida nas clulas justaglomerulares dos rins) formando a angiotensina 1 que vai circular no plasma e vai sofrer a ao da
enzima conversora (produzida no pulmo), transformando a angiotensina 1 em 2. A angiotensina 2 vai
produzir no crtex adrenal a aldosterona e fazer o feedback negativo para a enzima renina.O que
acontece ento? Reabsoro de Na+; secreo de K+ e ons hidretos; reabsoro de gua, por causa da
reabsoro de Na+; liberao de ADH. Conseqncias: Aumento do volume lquido extra; aumento da
osmolaridade; aumento do volume sanguneo; aumento do dbito cardaco e aumento da presso
arterial que inconveniente.
58
ENZIMAS
Enzimas so em sua maioria, protenas com atividade cataltica. Praticamente todas as reaes que
caracterizam o metabolismo celular so catalisadas por enzimas. Como catalisadores celulares
extremamente poderosos, as enzimas aceleram a velocidade de uma reao, sem, no entanto participar
dela como reagente ou produto.
As enzimas atuam ainda como reguladoras deste conjunto complexo de reaes. As enzimas so,
portanto, consideradas as unidades funcionais do metabolismo celular
Existem 3 mtodos para nomenclatura enzimtica:
Nome Recomendado: Mais curto e utilizado no dia a dia de quem trabalha com enzimas; Utiliza o
sufixo "ase" para caracterizar a enzima. Exs: Urease, Hexoquinase, Peptidase, etc.
Nome Sistemtico: Mais complexo, nos d informaes precisas sobre a funo metablica da enzima.
Ex: ATP-Glicose-Fosfo-Transferase
Nome Usual: Consagrados pelo uso. Exemplos: Tripsina, Pepsina, Ptialina.
As enzimas podem ser classificadas de acordo com vrios critrios. O mais importante foi estabelecido
pela Unio Internacional de Bioqumica (IUB), e estabelece 6 classes:
60
O stio de ligao do substrato capaz de reconhecer inclusive ismeros ticos "D" e "L" de um
mesmo composto.
Este stio pode conter um segundo stio, chamado STIO CATALTICO ou STIO ATIVO, ou estar
prximo dele; neste stio ativo que ocorre a reao enzimtica.
Alguns modelos procuram explicar a especificidade substrato/enzima:
Modelo Chave/Fechadura ? Prev um encaixe perfeito do substrato no stio de ligao, que seria
rgido como uma fechadura.
Modelo do Ajuste Induzido ? Prev um stio de ligao no totalmente pr-formado, nas sim
moldvel molcula do substrato; a enzima se ajustaria molcula do substrato na sua presena.
Evidncias experimentais sugerem um terceiro modelo que combina o ajuste induzido a uma "toro"
da molcula do substrato, que o "ativaria" e o prepararia para a sua transformao em produto.
As enzimas aceleram a velocidade de uma reao por diminuir a ENERGIA LIVRE DE ATIVAO
da mesma, sem alterar a termodinmica da reao, ou seja: A energia dos reagentes e produtos da
reao enzimtica e de sua equivalente no-enzimtica so idnticas. Para se superar a energia de
ativao de uma reao, passa-se pela formao de um estado intermedirio chamado "Estado de
Transio", sempre um composto instvel e de alta energia, representado por "Ts", ligado com
altssima afinidade ao stio cataltico. Nas reaes enzimticas, este composto de transio "Ts" no
pode ser isolado ou mesmo considerado um intermedirio, uma vez que no liberado para o meio de
reao; sua formao ocorre NO STIO CATALTICO da enzima!
Como a afinidade do "Ts" ao stio cataltico muito maior que a afinidade do substrato com o mesmo,
a pequena quantidade de molculas em "Ts" ser rapidamente convertida em produto. Assim, todo o
fator que leva a um aumento do nmero de molculas em "Ts" aumenta a velocidade da reao.
So 04 os mecanismos principais atravs dos quais as enzimas aceleram uma reao, aumentando a
formao de molculas de substrato em "Ts":
a parte da enzimologia que estuda a velocidade das reaes enzimticas, e os atores que influenciam
nesta velocidade.
Uma reao enzimtica pode ser expressa pela seguinte equao:
E + S ?? [ES] ? E + P
O complexo enzima/substrato (ES) tem uma energia de ativao ligeiramente menor que a do substrato
isolado, e a sua formao leva ao aparecimento do estado de transio "Ts". A formao de "P" a partir
de ES a etapa limitante da velocidade da reao. A velocidade de uma reao enzimtica depende das
concentraes de ENZIMA e de SUBSTRATO.
Equao de Michaelis-Menten:
Michaelis e Menten foram duas pesquisadoras que propuseram o modelo acima citado como modelo
de reao enzimtica para apenas um substrato.
A partir deste modelo, estas pesquisadoras criaram uma equao, que nos permite demonstrar como a
velocidade de uma reao varia com a variao da concentrao do substrato. Esta equao pode ser
expressa graficamente, e representa o efeito da concentrao de substrato sobre a velocidade de reao
62
Externos
que
Influenciam
na
Velocidade
de
uma
Reao
Enzimtica:
63
Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando assim como moduladoras do
metabolismo celular. Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos
pela clula.
Modulao Alostrica
Ocorre nas enzimas que possuem um STIO DE MODULAO, ou ALOSTRICO, onde se liga de
forma no-covalente um modulador alostrico que pode ser positivo (ativa a enzima) ou negativo
(inibe a enzima). A ligao do modulador induz a modificaes conformacionais na estrutura espacial
da enzima, modificando a afinidade desta para com os seus substratos. Um modelo muito comum de
regulao alostrica a inibio por "FEED-BACk", onde o prprio produto da reao atua como
modulador da enzima que a catalisa.
Modulao Covalente:
Ocorre quando h modificao covalente da molcula da enzima, com converso entre formas
ativa/inativa. O processo ocorre principalmente por adio/remoo de grupamentos fosfato de
resduos especficos de serina.
Enzimas na Clnica:
As enzimas podem ser utilizadas nas Anlises Clnicas de 2 formas principais:
Como reagentes altamente especficos e sensveis em reaes colorimtricas quantitativas.
Como indicadoras de leso celular e tecidual ? O extravasamento de enzimas do meio intra para o
meio extracelular leva a um aumento da atividade destas no sangue; Esta atividade pode ser medida e
fornece importante informao diagnstica e de evoluo de um quadro clnico.
A distribuio rgo-especfica de algumas destas enzimas permite a localizao da leso com bastante
preciso. Exemplos de doenas que podem ser diagnosticadas e acompanhadas enzimaticamente so:
??
??
As Hepatites
??
Pancreatite
??
Doenas sseas
64
2) Aceleram as reaes metablicas espontneas nas clulas vivas: as reaes estudadas, mesmo
sendo espontneas, precisam da presena de enzimas para ocorrer de modo rpido. Temos, como
exemplo, a urease: seu papel cataltico est envolvido no metabolismo da uria e sua ausncia faria
com que a reao da qual faz parte levasse de 500 a 800 mil anos para completar-se; com a enzima,
leva-se um milissegundo. Outro exemplo o Ciclo de Krebs. Enzimas no retardam nenhuma
reao; apenas aceleram.
Mas o que acelerar uma reao? Sabemos que para uma molcula A se transformar em uma molcula
B ela precisa adquirir energia suficiente para vencer a barreira energtica desta transformao.
Imaginem se colocssemos um corante hidroflico numa bacia com gua. Ocorreria a difuso dele em
funo de um movimento browniano de choque entre as molculas (teoria da coliso) que faria com
que elas adquirissem energia suficiente para romper a barreira energtica deste fenmeno, permitindo
sua realizao. Uma prova para isto que se a bacia fosse aquecida, doaramos energia ao sistema e o
fenmeno (difuso) se processaria mais rpido. como uma energia de ativao. No precisaramos
esperar que as molculas se chocassem para adquirir energia e posteriormente se movimentassem.
Entretanto, no podemos viver permanentemente num caldeiro fervente, at mesmo porque nossas
enzimas so predominantemente protenas e, como tais, desnaturariam, ou seja, perderiam sua
atividade biolgica, fisiolgica, bioqumica. A explicao para a acelerao ser parcial: qual o papel
da enzima? Uma enzima diminui o acaso, ou seja, para uma substncia A se transformar em B
rapidamente indispensvel que A e a enzima se liguem havendo consequente mudana para B.
Quando adicionamos enzimas em concentrao ideal ao meio estamos conferindo maior grau de
organizao ao sistema (as molculas no esto se movendo ao acaso at adquirir energia para virar
B), ou seja, diminumos a entropia deste sistema. Entropia: medida do grau de desorganizao de um
65
sistema. Um sistema organizado (com a enzima atraindo e se ligando a A) requer menor energia de
ativao. Ento, na presena da enzima a reao ocorre mais rapidamente, em funo de uma
diminuio da entropia com o maior grau de organizao ao sistema.
Tem-se agora um exemplo prtico de reao geral enzimtica, no caso, do processo de gliclise na
clula. O cido pirvico pode transformar-se, numa reao reversvel, em cido ltico. Iremos analisar
66
esta reao a partir da transformao do cido pirvico (A) em lctico (B), ou seja, na direo de
formao de cido lctico. Ento, temos que o cido pirvico o substrato S da reao e o cido ltico
o produto P da mesma e, logicamente, A substrato e B, produto. A enzima que cataliza-a em ambos
os sentidos a LDH (lactatodesidrogenase). A equao correspondente : E + S com formao
OBRIGATRIA do complexo ES, ou seja, da ligao enzima-substrato, para que haja transformao
do substrato em produto e forme em E + P. Esta equao importante para salientar que a enzima, ao
final do processo, SEMPRE liberada na sua forma ntegra sob o ponto de vista estrutural, ou seja,
no sofreu alteraes e est pronta para catalisar novamente esta reao. Porm, como explicar que a
carbonila do cido pirvico foi reduzida por dois tomos de hidrognio se a enzima no sofreu
alterao estrutural? fcil: aquele que doou esses tomos foi um auxiliar da enzima, chamado de
coenzima e pode-se concluir que sem este, ou seja, apenas na presena da enzima LDH no ocorreria
reao, pois no haveria quem doasse tomos de H para reduzir a carbonila do cido pirvico. Ento,
muitas (mas no todas) reaes metablicas precisam, alm da enzima, do colaborador denominado
coenzima (co=colaborador). Outras reaes no Ciclo de Krebs tambm so bons exemplos da presena
de coenzimas. Verifica-se, tambm, que para reaes de oxi-reduo a presena da coenzima sempre
indispensvel, e a enzima envolvida neste processo classificada como oxi-redutase. O que
coenzima? No uma macromolcula como a enzima, mas sim uma substncia dialisvel, ou seja,
uma substncia de pequeno peso molecular, que pode se ligar enzima durante a reao ou estar
permanentemente ligado a ela. A maioria das coenzimas alguma vitamina do complexo B. No caso
especfico da reao que vem sendo estudada o NAD reduzido (o NAD uma vitamina do complexo
B, a niacina). Ele, ento, doa seus hidrognios ao cido pirvico e torna-se oxidado. Se a circunstncia
metablica favorecesse a transformao do lactato em piruvato teramos o LDH como enzima e o
NAD oxidado como coenzima (que durante a reao viraria NAD reduzido).
? Conceitos: holoenzima = apoenzima + coenzima. A LDH uma holoenzima. A holoenzima
toda enzima que, para seu perfeito funcionamento, precisa da colaborao, da presena da coenzima.
E apoenzima a prpria enzima.
Observao: somente havendo a ligao entre o piruvato e a LDH que o NAD reduzido pode agir.
O local da enzima no qual se ligar o substrato o centro ativo, tambm conhecido como centro do
substrato ou centro cataltico. Mas o que centro ativo? Centro ativo a regio da enzima qual se
liga ao substrato para que haja formao do produto. Mas como isto acontece? Dois pesquisadores
67
1) Concentrao do Substrato:
Este um sistema de duas variveis: mudando (S) muda-se V. Com isso, admiti-se que todos os
demais fatores esto ideais para a reao. Comearemos pela adio de substrato ao meio, levando ao
aumento linear da velocidade (o aumento proporcional adio). Esta reta tem um limite, porque vai
se formando uma hiprbole at se tornar paralelo as abcissas, tendo, pois, V constante. Este limite
ocorre porque, como a concentrao de enzimas fixa, a partir de uma determinada concentrao de
substrato, encontraramos toda a enzima na sua forma combinada. como se toda enzima estivesse na
sua forma combinada, ou seja, no existiriam enzimas livres no meio, havendo aps esta determinada
concentrao saturao da enzima pelo excesso de substrato. O perfil hiperblico demonstra a
saturao da enzima pelo excesso de substrato (a saturao corresponde ausncia de enzimas livres
no meio, ou seja, todas se encontram como o complexo ES). Caso o grfico volte a subir (tendo uma
nova reta) porque se colocou a concentrao de enzimas num nvel no saturvel para aquela
concentrao de substrato. medida que a concentrao de substrato aumenta, conseguiremos saturar
esta nova concentrao enzimtica, havendo novo perfil hiperblico no grfico. Com isso, podemos
concluir que a velocidade medida quando a enzima est saturada pelo excesso de substrato (no
devemos pensar que a enzima no atua mais, mas sim que ela atua na sua capacidade mxima),
chamada de velocidade mxima da reao, constante para uma determinada concentrao de enzima
- se mudarmos (E), mudamos Vmx.
Normalmente, as enzimas atuam em nossas clulas em cintica de ordem zero, ou seja, com excesso de
substrato.
? Constante de Michaelis-Mentem: kM -- uma constante absoluta, isto , independe de quaisquer
outros fatores. Tem como exemplo na prtica mdica sua importncia para os diabticos no
compensados (que no tomam insulina ou o faz irregularmente). Define-se como sendo a concentrao
de substrato que nos fornece a metade da velocidade mxima de uma reao (no confundir como
sendo a metade de Vmx). Sua importncia provm de outro conceito: existe uma reao em todas as
clulas de todos os tecidos, sem exceo, que a fosforilao da glicose, essencial para que a glicose
possa participar das vias metablicas (fosforilar - adicionar o radical do cido fosfrico glicose
sinnimo de aprision-la no meio intracelular, atravs de uma ligao ster entre as hidroxilas do
cido e da glicose). Esta glicose na presena de ATP (que doar este grupamento de cido fosfrico) e
magnsio (que tem carga positiva e serve para facilitar a atrao enzimtica, funcionando como reforo
de carga) dar origem glicose-6-fosfato. Esta reao, em todos os tecidos, catalisada pela
hexoquinase (hexo: a glicose uma hexose - possui seis carbonos; quinase: terminao de qualquer
enzima que catalise uma fosforilao) que tem Km = 0,1 mM, ou seja, esta a concentrao de
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substrato que nos fornecer a metade da Vmx. No fgado, rgo considerado o centro do nosso
metabolismo por todas as reaes metablicas importantes serem realizadas nele - da o perigo de
doenas como a hepatite, h a maior concentrao relativa de glicognio (em termos absolutos no
tecido muscular), que a nossa reserva de glicose, e h outra enzima para esta reao, a glicoquinase.
Porm, a glicoquinase quando catalisa esta reao tem KM = 10 mM, ou seja, precisa de uma
concentrao 100 vezes maior de glicose para atingir a metade de Vmx. A hexoquinase tem
preferncia metablica porque em funo de um menor valor de KM capaz de atingir a cintica de
ordem zero em menores concentraes de substrato (glicose). Mas a glicoquinase assumir a
preferncia quando houver um excesso de glicose circulante, para no haver hiperglicemia,
aprisionando no meio intracelular a glicose (depois, veremos que ela distribui equalitativamente esta
glicose - um papel filantrpico do fgado). De tudo isso, temos uma outra definio para Km, como
sendo uma medida do grau de afinidade entre a enzima e o seu respectivo substrato.
Quanto menor o KM, maior a afinidade e vice-versa, porque com baixas concentraes de substrato
atinge-se a metade de Vmx. A insulina um hormnio hipoglicmico e entre vrias enzimas que ela
induz a sntese de DNA, temos a glicoquinase. Num diabtico no compensado o nvel de insulina
circulante pouco ou quase nenhum e a glicoquinase no tem sua sntese estimulada, restando apenas
a hexoquinase, que se saturaria pelo excesso de glicose entrando na clula. A glicose que no for
fosforilada retorna corrente sangunea, levando a um quadro de hiperglicemia e glicosria (excesso
de glicose sai pela urina). Foi a partir deste estudo que se pode o que era e como aparecia a
hiperglicemia e, conseqentemente, a glicosria.
? Inibio enzimtica: competitiva e no-competitiva
1) Inibio competitiva:
Vamos pegar uma reao do ciclo de Krebs: a transformao do succinato ou cido succnico
em fumarato ou cido fumrico, a reao reversvel e a enzima que cataliza essa reao nos dois
sentidos a succinato desidrogenase. Essa uma holoenzima (enzima que precisa de coenzima), pois
necessita do FAD (um dos estados ativos da riboflavina B2) que se transforma em FAD reduzido. Nas
mitocndrias ocorre uma substncia conhecida como cido malnico ou malonato que muito
semelhante ao cido succnico (difere apenas num CH2) com isso ocorre a enzima enganada pelo
malonato. Ento na verdade se ligar a enzima o anlogo estrutural que estiver em maior concentrao.
Por exemplo, imaginemos que tenhamos colocado uma concentrao maior do inibidor competitivo do
70
que do verdadeiro substrato ento a enzima ter maior chance de se ligar ao falso substrato. Essa
situao pode ser revertida basta que se acrescente maior quantidade de verdadeiro substrato.
2) Inibio no-competitiva:
? Alosteria
nome que se d aos estudos da cintica das enzimas alostricas. Essas enzimas ocorrem em nmero
bem menor do que as enzimas normais. So chamadas de enzimas regulatrias ou de marca-passo,
controlando a velocidade de vias metablicas. Elas possuem alm do centro ativo, um centro alostrico
onde se ligam moduladores da atividade enzimtica. Quando o modulador positivo temos os
ativadores alostricos e quando negativos temos os inibidores alostricos. O ciclo de Krebs, por
exemplo, das 7 ou 8 enzimas que participam desse ciclo s 3 so alostricas. Elas controlam a
velocidade do ciclo de Krebs e consequentemente a cadeia respiratria. Quando a quantidade
necessria de ATP for produzida, o excesso de ATP se ligar aos centros alostricos dessas enzimas
diminuindo a velocidade do ciclo de Krebs, diminuindo a formao de ATP. Quando se diminui a
formao de ATP, o excesso hidrolisado em ADP + Pi. Assim a quantidade de ATP vai baixando e a
de ADP subindo, o ADP se ligar ento aos centros alostricos acelerando o cilco de Krebs e
consequentemente aumenta a produo de ATP. O modulador positivo, nesse caso, ser o excesso de
ADP e o negativo ser o excesso de ATP. Esta regulao ocorre em milissegundos e funciona como
72
uma inibio por feedback ou retroalimentao. Ento, essas enzimas so muito importantes na
regulao das vias metablicas de um modo geral.
Essas enzimas so muito mais complexas do que as enzimas normais tendo que ter no mnimo 2
subunidades proteicas para serem ativas. Exemplo: fosforilase (4 subunidades proticas). Assim, por
ser mais complexa, os primeiros substratos que se ligam tero que desbravar o caminho, ou seja,
alterar a conformao do centro ativo realizando rotaes das ligaes covalentes para facilitar a
ligao dos prximos substratos. Ento, na presena dos ativadores h um aumento da afinidade
(expondo o seu centro ativo) e dos inibidores (dificultando o acesso ao centro ativo) h uma
diminuio da afinidade.
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Captulo 6
LIPDEOS
LIPDIOS so biomolculas insolveis em gua, e solveis em solventes orgnicos. Desempenham
vrias funes no organismo, entre elas:
1. Reserva de energia
2. Combustvel celular
3. Componente estrutural das membranas biolgicas
4. Isolamento e proteo de rgos
A maioria dos lipdios derivada ou possui na sua estrutura, CIDOS GRAXOS. So cidos
orgnicos, a maioria de cadeia alquil longa, com mais de 12 carbonos. Esta cadeia alquil pode ser
saturada ou insaturada.
cidos graxos saturados
No possuem duplas ligaes. So geralmente slidos temperatura ambiente. Gorduras de origem
animal so geralmente ricas em cidos graxos saturados
cidos graxos insaturados
Possuem uma ou mais duplas ligaes ? so mono ou poliinsaturados. So geralmente lquidos
temperatura ambiente. A dupla ligao, quando ocorre em um AG natural, sempre do tipo "cis". Os
leos de origem vegetal so ricos em AG insaturados. Quando existem mais de uma dupla ligao,
estas so sempre separadas por pelo menos 3 carbonos, nunca so adjacentes nem conjugadas.
Nomenclatura de cidos Graxos: O nome sistemtico do cido graxo vem do hidrocarboneto
correspondente.
cidos Graxos Essenciais:
O homem capaz de sintetizar muitos tipos de cidos graxos, incluindo os saturados e os
monoinsaturados. Os AG poliinsaturados, devem ser obtidos da dieta, pois so sintetizados apenas por
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vegetais. Estes cidos graxos participam como precursores de biomolculas importantes como as
PROSTAGLANDINAS, derivadas do cido linoleico e com inmeras funes sobre contratibilidade
de msculo liso e modulao de recepo de sinal hormonal.
Triacilglieris:
Os triacilgliceris so lipdios formados pela ligao de 3 molculas de cidos graxos com o glicerol,
um trilcool de 3 carbonos, atravs de ligaes do tipo ster. So tambm chamados de "Gorduras
Neutras", ou triglicerdeos. Os cidos graxos que participam da estrutura de um triacilglicerol so
geralmente diferentes entre si. A principal funo dos triacilgliceris a de reserva de energia, e so
armazenados nas clulas do tecido adiposo, principalmente. So armazenados em uma forma
desidratada quase pura. Fornecem por grama aproximadamente o dobro da energia fornecida por
carboidratos. Existem ainda os mono e diacilgliceris, derivados do glicerol com um ou dois AG
esterificados, respectivamente.
Fosfolipdios:
Ou "Lipdios Polares", so lipdios que contm fosfato na sua estrutura. Os mais importantes so
tambm derivados do glicerol - fosfoglicerdeos - o qual est ligado por uma ponte tipo fosfodister
geralmente a uma base nitrogenada, como por exemplo:
??
??
Serina ? Fosfatidilserina
??
Etanolamina ? Fosfatidiletanolamina
Lipoprotenas:
So associaes entre protenas e lipdios encontradas na corrente sangunea, e que tem como funo
transportar e regular o metabolismo dos lipdios no plasma. A frao protica das lipoprotenas
denomina-se Apoprotena, e se divide em 5 classes principais - Apo A, B, C, D e E - e vrias
subclasses. A frao lipdica das lipoprotenas muito varivel, e permite a classificao das mesmas
em 5 grupos, de acordo com suas densidades e mobilidade eletrofortica:
Quilomcron = a lipoprotena menos densa, transportadora de triacilglicerol exgeno na corrente
sangunea.
VLDL = "Lipoprotena de Densidade Muito Baixa", transporta triacilglicerol endgeno.
IDL = "Lipoprotena de Densidade Intermediria", formada na transformao de VLDL em LDL.
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recebe seu equipamento de reduo, entrega-o cadeia respiratria, reoxida-se e volta ao incio do
ciclo. NAD participa, por exemplo, da gliclise, ciclo de Krebs e o primeiro elemento da cadeia
respiratria. Tambm participa da quebra de lipdios para a sntese de ATP. As reaes de oxi-reduo
podem ser comandadas pelo NAD. H ainda o NADP, que se liga enzima quando oxidado. Ele
usado para a sntese redutora. Exemplos: carboidratos, lipdios, frutose-6-fosfato.
? Riboflavina: Atua nas formas FAD e FMN nas reaes de oxi-reduo O FAD, que a forma
atuante no metabolismo, estar sempre ligado enzima, ao contrrio do NAD e NADP que se separam
da enzima no processo. quase um componente eterno da enzima. Sua estrutura fixa permite que ele
carreie a molcula de hidrognio (H2), sempre ligado enzima, levando-a para seu destino: a cadeia
respiratria. Participa do Ciclo de Krebs, da oxidao/quebra dos cidos graxos, do metabolismo dos
aminocidos. Com isso, temos vrias fontes de hidrognio para a cadeia respiratria. J a FMN um
dos componentes da cadeia respiratria.
? Piridoxina: Atua como piridoxal fosfato no metabolismo dos aminocido, sntese da serotonina
(neurotransmissor) e sntese do heme da hemoglobina.
? Cobalamina (B12): Atua na sntese da mielina.
? cido Pantotnico: um dos componentes da coenzima A. Qualquer substrato, para entrar numa via
metablica (de oxidao ou de sntese), tem de ser ativado para atingir um patamar energtico superior
ao patamar anterior e serem reconhecidas pelas enzimas dessa via metablica. Uma das maneiras
unir esta molcula nucleotdeos (ATP, GTP) ou coenzima A, que , portanto, responsvel pelo
patamar mais alto de energia de uma molcula que vai participar de uma via metablica. O fosfato
tambm ativa molculas.
? cido Ascrbico: Em excesso, retira Ca+2 dos reservatrios intracelulares, o que pode elevar em
excesso os nveis de Ca+2 no sangue, que se acumularia nos rins, levando formao do clculo renal.
Efeito semelhante tem o stress sobre o paratormnio. As vitaminas hidrossolveis so obtidas
principalmente das bactrias intestinais. Da a importncia de quando houver ingesto de antibiticos,
haver reposio artificial de vitaminas, exceo do cido ascrbico. So outras fontes vitamnicas:
legumes, frutas, cereais integrais, leite, ovos, peixe, carnes em geral: dieta equilibrada.
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? Vitamina K: Pr-pro-trombina tem vrios aminocido na composio mas o cido glutmico o que
nos interessa porque, quando ela reage com bicarbonato e vitamina K, se transforma em protrombina
porque o cido glutmico ganhou mais uma molcula de CO2, virando cido gamacarboxiglutmico.
A importncia da transformao desse aminocido que o carboxiglutmico. capaz de quelar
(seqestrar, guardar, unir) o clcio, fundamental para a coagulao.
? Vitamina E: Famlia dos tocoferis: funciona como antioxidante. Exemplo: Em todas as nossa
membranas temos lipdios insaturados, ou seja, com duplas ligaes que interagem com o oxignio e
radicais livres, os quais as quebram, tornando estes lipdios saturados. Se o lipdio exercia uma
funo, tendo como caracterstica a dupla ligao, agora sendo saturado ele no a exercer mais. A
caracterstica de pessoas mais velhas que no cuidam da sade ter na pele muitas manchas marrons,
que so, na verdade, lipdios que mudaram sua estrutura pela ao do oxignio e radicais livres. Em
linguagem cientfica, o mesmo que ocorre com a manteiga que, se exposta ao ar livre por muito
tempo, ransifica-se, ou seja, entra em contato com o oxignio, perde as duplas ligaes, tornando-se
saturada e muda de forma (mais mole), funo e gosto. A vitamina E cobre estas estruturas lipdicas e,
quando o oxignio e radicais livres chegam, interagem com a vitamina E, mantendo intacto os lipdios
de membrana, lipoprotenas e todas as outras estruturas que, por ventura, tenham cidos graxos. A
vitamina E , ento, protetora dessas macromolculas. Encontra-se nos leos vegetais (milho e,
principalmente, girassol), azeite de oliva e gros integrais.
? Vitamina D: Na nossa derme h colesterol que automaticamente torna-se mais estvel hidratando-se
e formando deidrocolesterol, o qual recebe radiao UV virando colecalciferol. Pensava-se que esta
forma fosse a vitamina D ativa, mas observou-se que apenas 72h aps formao dele observava-se
vitamina D formada, concluindo-se que nesse prazo, o colecalciferol deveria passar por uma srie de
reaes para se tornar vitamina D ativa. A radiao UV no atravessa vidro, ento, receber sol diante
da janela fechada no saudvel sob o aspecto da formao de vitamina D. O colecalciferol formado
na derme vai ao fgado pela circulao. L h uma enzima, a hidroxilase, a qual ir por uma hidroxila
no colecalciferol no carbono 25, tornando-o 25-hidroxi-colecalciferol. Este ir se dirigir ao rim, onde
outra hidroxilase acrescentar uma nova hidroxila ao carbono 1, chamando-se 1,25-dihidroxicolecalciferol, que a vitamina D ATIVA!
Quando uma substncia qumica capaz de alterar a atividade, o metabolismo de uma clula,
induzindo-a sntese de novas protenas, esta substncia um hormnio. Estas protenas so protenas
79
transportadoras e ligadoras de clcio. nvel intestinal, estas protena aumentam a absoro de clcio
para a clula e, no osso, haver sada do clcio (chamado de desmineralizao) do osso. Isto acarretar
um aumento do nvel de clcio no sangue. O paratormnio, PTH, auxilia a vitamina D nesta atividade,
impedindo a sada de clcio via renal. A vitamina D atua mantendo a constante. Se h pouco clcio na
dieta alimentar, este sair dos ossos. A calcitonina tem ao oposta, ativando a excreo do clcio e o
seu depsito nos ossos. Quando se toma vitamina D para evitar que reaes dependentes do clcio,
como a coagulao do sangue e Ca como segundo mensageiro, se interrompam devido a um baixo
nvel de Ca no sangue. A participao do Ca nos osso funo mnima. Osteoporose - perda da matriz
ssea; osteomalsia - m formao ssea, desintegrao dos ossos por falta de vitamina D,
ocorrendo, por exemplo, com mulheres islmicas que esto sempre vestidas no corpo inteiro.
? Vitamina A: A forma de vitamina A encontrada em todos os vegetais de cor amarela ou laranja o
betacaroteno, utilizado como maior anti-oxidante que se tenha conhecimento, inclusive sendo utilizado
com auxiliar na preveno de cncer intestinal, provocado pela ao de radicais livres produzidos. Na
mucosa intestinal h uma enzima, a oxigenase, que, em presena de ferro e oxignio, quebra o
betacaroteno em duas molculas de retinol. O retinol um lcool e pode seguir vrios caminhos:
?? O retinol origina retinil palmitato, que um cido graxo (lipdio), sendo estocado no fgado.
?? O retinol pode receber um grupamento fosfato, virando retinil-fosfato.
?? O retinol ainda pode ser oxidado, via NAD, transformando-se em retinal que poder virar cido
retinico.
Vitamina A polivalente porque ativa sob 4 formas: cido retinico, retinil fosfato,
betacaroteno e retinol. Retinol e o cido retinico so hormnios que atuam ligando-se ao DNA das
clulas epiteliais e gonadais, induzindo o crescimento e diferenciao celular destes tecidos.
Antigamente, atribuia-se isto vitamina E, mas hoje se sabe que no. Retinil-fosfato serve para a
sntese de mucopolissacardeos, cuja base qumica so as glicoprotenas. Este mucopolissacardeo
um dos componentes da mucosa, hidratando-a. Sua carncia leva pele spera, propensa a rachaduras,
que pode ocasionar infeco bacteriana ou virtica. Isto extende-se a outras mucosas, com boca e
olhos, onde o ressecamento com subsequente queratinizao e infeco levam cegueira noturna ou
at mesmo total.
O retinal se junta a opsina para formao do nosso pigmento fotossensvel, a rodopsina. Quando um
fton de luz incide sobre a rodopsina, h separao da parte vitamnica da parte protica, modificando
o potencial, liberando clcio e transmitindo um impulso nervoso que no centro ptico leva formao
da imagem. A falta de retinal leva cegueira noturna (nictalopia). Apesar da identificao de uma
80
lipase lingual secretada pelas clulas da base da lngua, no h a digesto salivar dos lipdios devido a
no haver um refluxo para a boca. Dessa forma, a identificao de uma lipase gstrica provavelmente
corresponde quela secretada pela lngua. Porm, o pH extremamente cido do estmago no
possibilita a ao integral desta lipase gstrica, diminuindo a velocidade de sua ao enzimtica,
havendo apenas a quebra de algumas ligaes de steres de cidos graxos de cadeia curta. Em crianas
lactentes, entretanto, o pH gstrico aproxima-se bastante da neutralidade o que indica que a lipase
gstrica pode ter ao na digesto das gorduras do leite. Mesmo assim, esta digesto no eficiente
devido s gorduras no estarem emulsificadas, o que dificulta a ao desta enzima hidroltica.
A ao gstrica na digesto dos lipdios, portanto, est relacionada com os movimentos peristlticos do
estmago, produzindo uma emulsificao dos lipdios, dispersando-os de maneira equivalente pelo
bolo alimentar. A chegada do bolo alimentar acidificado no duodeno induz a liberao hormnio
digestivo colecistocinina (um peptdeo de 33 aminocidos, tambm denominado pancreozimina) que,
por sua vez, promove a contrao da vescula biliar, liberando a bile para o duodeno. Os cidos biliares
so derivados do colesterol e sintetizados no fgado. So denominados primrios (cido clico,
tauroclico, glicoclico, quenodesoxiclico e seus derivados) quando excretados no duodeno, sendo
convertidos em secundrios (desoxiclico e litoclico) por ao das bactrias intestinais. A bile, ainda,
excreta o colesterol sanguneo em excesso, juntamente com a bilirrubina (produto final da degradao
da hemoglobina).
A colecistocinina possui, ainda, funo de estmulo do pncreas para a liberao do suco pancretico,
juntamente com outro hormnio liberado pelo duodeno, a secretina. O suco pancretico possui vrias
enzimas digestivas (principalmente proteases e carboidratases) sendo a lipase pancretica a
responsvel pela hidrlise das ligaes steres dos lipdios liberando grande quantidades de colesterol,
cidos graxos, glicerol e algumas molculas de mono-acil-gliceris. Os lipdios livres so, ento,
emulsificados pelos sais biliares em micelas e absorvidos pela mucosa intestinal que promove a
liberao da poro polar hidrfila (sais biliares) para a circulao porta heptica e um processo de
ressntese dos lipdios absorvidos com a formao de novas molculas de tri-acil-gliceris e steres de
colesterol, que so adicionados de uma protena (apo-protena 48, ou apo-48) formando a lipoprotena
quilimocron, que absorvida pelo ducto linftico abdominal, seguindo para o duto linftico torcico e
liberada na circulao sangnea ao nvel da veia jugular.
81
VITAMINAS
FUNO
VITAMINAS
FORMA ATIVA
BIOQUMICA
B1
Tiamina-Pirofosfato (TPP)
Coenzima na
TIAMINA
descarboxilao
oxidativa de
alfacetocidos
B2
RIBOFLAVINA
Coenzima de
transferncia de
hidrognio
B3
NICOTINAMIDA
Coenzima de
transferncia de
Hidrognio
B5
Componente da Co-A
CIDO
Transferncia de grupos
acil e acetil
PANTOTNICO
B6
PIRIDOXINA
Transaminao
descarboxilao de
aminocidos
B12
Cofator de reaes de
CIANOCOBALAMINA
cobalamida)
metilao
BIOTINA (H)
Biocitina ou Biotinilisina
Transporte de grupos
CO2
cido tetrahidroflico
Transferncia de grupos
82
CIDO FLICO
(THF)
formil (sntese
nucleotdica)
VITAMINA C
Cofator em reaes de
CIDO ASCRBICO
hidroxilao
VITAMINA A
11-cis-retinal
1,25 diidroxi-colecalciferol
Antioxidante (lipdios
RETINOL
VITAMINA D
COLECALCIFEROL
VITAMINA E
alfa -TOCOFEROL
insaturados)
VITAMINA K
Sntese heptica da
2-metil-1,4-
protrombina e fatores da
naftoquinoina
coagulao sangnea
L-ACETIL-CARNINTINA
uma melhora na conduo do impulso nervoso nas sinapses de caracterstica colinrgica, como pr
exemplo na conduo do estmulo para a contrao muscular.
Doena de Alzheimer: uma das causas da doena um distrbio no sistema colinrgico cerebral. Pelo
fato da L-Acetil-Carnitina ser colinomimtica, ela repara parcialmente esse distrbio dando uma
melhora nos sintomas da doena, como demncia, inteligncia lgica, habilidade crtica verbal(senso
crtico), memrias verbais de longo termo, ateno seletiva.
Reinervao muscular: regenerao de nervos lesionados e a remodelagem da juno neuro-muscular distrofia muscular progressiva e esclerose mltipla.
Efeito anti-depressivo: quanto maior o sintoma clnico da depresso, melhor ser o efeito da L-AcetilCarnitina. No estado depressivo, ocorre uma somatizao em relao ao sistema cardio-vascular, que
eliminada ou diminuda coma L-Acetil-Carnitina.
Isquemia cerebral: numa condio de isquemia cerebral, a protena oxidada como fonte de energia.
Com a administrao da L-Acetil-Carnitina, ocorre melhora do metabolismo energtico cerebral,
sendo a L-Acetil-Carnitina utilizada no suprimento de energia, poupando as protenas.
Fluxo sanguneo cerebral: melhora o fluxo sanguneo cerebral em pacientes com infarto cerebral
crnico.
L-Acetil-Carnitina, que como resultado temos essas melhoras. Usando a L-Acetil-Carnitina, temos
esses resultados sem fazer o exerccio.
Dosagem: a dose usual 1,5g/dia. Sugere-se o uso de cpsulas de 500mg 3 vezes ao dia. A dosagem
pode variar conforme a indicao. Nas dosagens teraputicas no existem efeitos colaterais.
85
Captulo 7
CARBOIDRATOS
Monossacardeos:
So os carboidratos mais simples, dos quais derivam todas as outras classes. Quimicamente ? So
polihidroxialdedos (ou aldoses) - ou polihidroxicetonas (ou cetoses), sendo os mais simples
monossacardeos compostos com no mnimo trs carbonos: O Gliceraldedo e a Dihidroxicetona.
Feita exceo dihidroxicetona, todos os outros monossacardeos - e por extenso, todos os outros
carboidratos - possuem centros de assimetria (ou quirais), e fazem isomeria ptica. A classificao dos
monossacardeos tambm pode ser baseada no nmero de carbonos de suas molculas; assim sendo, as
TRIOSES so os mais simples, seguidos das TETROSES, PENTOSES, HEXOSES, HEPTOSES.
Destes, os mais importantes so as Pentoses e as Hexoses. As pentoses mais importantes so:
??
Ribose
??
Arabinose
??
Xilose
86
Glicose
??
Galactose
??
Manose
??
Frutose
87
Dissacardeos:
So carboidratos ditos Glicosdeos, pois so formados a partir da ligao de dois monossacardeos
atravs de ligaes especiais denominadas "Ligaes Glicosdicas". A Ligao Glicosdica ? Ocorre
entre o carbono anomrico de um monossacardeo e qualquer outro carbono do monossacardeo
seguinte, atravs de suas hidroxilas e com a sada de uma molcula de gua.
Os glicosdeos podem ser formados tambm pela ligao de um carboidrato a uma estrutura nocarboidrato, como uma protena, por exemplo. O tipo de ligao glicosdica definido pelos carbonos
envolvidos e pelas configuraes de suas hidroxilas. Exemplos:
Na Maltose ? Gli alfa (1,4)-Gli
Sacarose ? Gli alfa (1,2)-beta Fru e Lactose ? Gal beta (1,4)-Gli
Polissacardeos:
So os carboidratos complexos, macromolculas formadas por milhares de unidades monossacardicas
ligadas entre si por ligaes glicosdicas. Os polissacardeos mais importantes:
O Amido:
o polissacardeo de reserva da clula vegetal. Formado por molculas de glicose ligadas entre si
atravs de numerosas ligaes alfa (1,4) e poucas ligaes alfa (1,6), ou "pontos de ramificao" da
cadeia. Sua molcula muito linear, e forma hlice em soluo aquosa.
O Glicognio:
o polissacardeo de reserva da clula animal. Muito semelhante ao amido, possui um nmero bem
maior de ligaes alfa (1,6), o que confere um alto grau de ramificao a sua molcula. Os vrios
pontos de ramificao constituem um importante impedimento formao de uma estrutura em hlice.
A Celulose:
88
o carboidrato mais abundante na natureza. Possui funo estrutural na clula vegetal, como um
componente importante da parede celular. Semelhante ao amido e ao glicognio em composio, a
celulose tambm um polmero de glicose, mas formada por ligaes tipo beta (1,4). Este tipo de
ligao glicosdica confere molcula uma estrutura espacial muito linear, que forma fibras insolveis
em gua e no digerveis pelo ser humano.
Os carboidratos mais simples so denominados monossacardeos, possuindo pelo menos um tomo de
carbono assimtrico que caracteriza a regio denominada centro quiral, pois fornece ismeros pticos.
Possuem de 3 a 8 carbonos, sendo denominados, respectivamente, trioses, tetroses, pentoses, hexoses,
heptoses e octoses.
Os monossacardeos de ocorrncia natural mais comum, como a ribose (5C), glicose (6C), frutose (6C)
e manose (6C), existem como hemiacetais de cadeia cclica (e no na forma linear), quer na formas de
furanose (um anel de 5 elementos, menos estvel) ou de piranose (um anel de 6 elementos, mais
estvel). Esta forma cclica (hemiacetal), resulta da reao intramolecular entre o grupamento
funcional (C1 nas aldoses e C2 nas cetoses) e um dos carbonos hidroxilados do restante da molcula
(C4 na furanose e C5 na piranose), ocorrendo nas formas isomricas a e b (cis ou trans), conforme a
posio da hidroxila do C2 em relao hidroxila do C1. Tais formas so interconvertidas atravs do
fenmeno da mutarrotao.
Alm das vias clssicas de produo de energia, existem vrios outros processos metablicos
envolvendo carboidratos, e com diferentes objetivos:
A Via das Pentoses Fosfato ? Produz NADP reduzido e pentoses para serem utilizadas pela
clula em vias de biossntese, por exemplo.
As vias de interconverso entre acares ?So numerosas vias de produo de
monossacardeos a partir principalmente da glicose.
89
Em algumas clulas, mais NADP reduzido necessrio do que Ribose-5-Fosfato. Nestes casos, um
sistema de rearranjo entre acares ativado. Este sistema permite a sntese de trioses, pentoses,
hexoses, heptoses, todos processos interligados, alm de servir como um "link" reversvel entre a via
das pentoses fosfato e a cadeia glicoltica. Assim, um possvel excesso de ribose-5-fosfato pode ser
convertido em intermedirios da cadeia glicolticafrutose-6-fosfato e gliceraldedo-3-fosfato, e ser
utilizado para a produo de ATP. O processo pode repetir-se ciclicamente, envolvendo seis molculas
de glicose-6-fosfato, com liberao de 12 NADPH2, e resultando em um balano lquido de oxidao
total da glicose e liberao de 6 CO2.
O NADPH2 produzido:
Como no pode ser reoxidado na Cadeia Respiratria, o NADPH2 produzido nesta via utilizado
como transportador principal de eltrons para as vias anablicas que os utilizam em reaes de
reduo. A manuteno da integridade das membranas dos eritrcitos, a biossntese de cidos graxos e
de esterides so exemplos de vias anablicas que dependem do NADPH2.
A Interconverso entre Acares e a Formao de Nucleotdeos:
A maioria dos monossacardeos encontrados na clula pode ser sintetizada a partir da glicose, atravs
de uma srie complexa de reaes bioqumicas. Estas reaes muitas vezes envolvem a formao de
nucleotdeos associados a carboidratos - tais como a UDP-Gli, UDP-Gal, GDP-Man.
As reaes mais comuns so:
Isomerizao e Fosforilao:
Permitem a formao de monossacardeos a partir da glicose de maneira direta. Como exemplos temos
a converso de Gli-6-P em Fru-6-P, a converso de Fru-6-P em Man-6-P e a modificao da posio
do fosfato na mesma molcula, como na converso da Gli-1-P em Gli-6-P.
Epimerizao:
um tipo muito comum de reao de converso entre carboidratos. Depende da formao de um
intermedirio ligado a um nucleotdeo, como por exemplo, a UDP-Gli e a UDP-Gal. A converso mais
comum envolve estes dois monossacardeos-nucleotdeos:
UDP-Gli + Gal-1-P ? UDP-Gal + Gli-1-P
91
A enzima catalizadora desta reao a Galactose-1-P Uridil Transferase, e est ausente nos pacientes
com Galactosemia Clssica, uma doena gentica que leva ao surgimento de catarata, de leses
neurolgicas e falncia heptica.
Oxidao:
A oxidao da UDP-Gli leva formao do Glicurnico, um precursor do Ascrbico em animais que
sintetizam esta vitamina, e da L-Xilose, por descarboxilao.
UDP-Gli + 2 NAD+ ? UDP-c. Glic. + 2 NADH + 2 H+
O homem, assim como outros primatas e a cobaia no possuem uma das enzimas que converte o cido
glicurnico em cido ascrbico, e necessita desta vitamina na dieta.
Descarboxilao e Transaminao:
A nica via de descarboxilao conhecida de um acar-nucleotdeo a de formao de UDP-Xilose a
partir do UDP-cido. Glicurnico. A UDP-Xilose necessria sntese de proteoglicanas. Reaes de
transaminao com formao de aminoacares so importantes pois, estes so precursores da sntese
de muitos oligo e polissacardeos. Exemplos: A formao de Glicosamina-6-P pela reao entre a Fru6-P com a Glutamina:
Fru-6-P + Glutamina ? Glutamato + Glicosamina-6-P
A reao catalisada por uma transamidase. Um outro produto da converso da N-Acetilglicosamina
o cido Acetilneuramnico, um acar de 9 carbonos da famlia dos cidos Silicos.
Biossntese de Carboidratos Complexos:
Carboidratos complexos so oligo ou polissacardeos formados sempre a partir de um mecanismo em
comum. Neste mecaninsmo, a ligao glicosdica formada pela doao do resduo glicosil de um
acar-nucleotdeo para um acar aceptor. Exemplo (onde NDP um nucleosdeo difosfato):
NDP-Gli + Gli ? Glicosil-O-Glicose + NDP
A reao catalisada por uma glicosiltransferase especfica. Existem pelo menos 55 tipos diferentes de
ligao glicosdica, o que sugere uma grande variedade de compostos possveis e uma possvel funo
92
informacional para estas molculas. Sabe-se, por exemplo que a especificidade de muitas biomolculas
se deve ao seu contedo em carboidratos. A especificidade imunohematolgica, por exemplo, se deve
a acares.
N-Acetilglicosamina o acar determinante do tipo sanguneo "A", e Galactose, do tipo "B"; A
remoo destes resduos da membrana dos eritrcitos os converte em tipo "O".
Glicoprotenas:
So macromolculas formadas por uma frao predominante protica cujo grupo prosttico um ou
mais carboidratos. A porcentagem de carboidrato nas glicoprotenas muito varivel, indo de 4 a 80
%. Estes carboidratos podem estar distribudos ao longo de toda a protena, ou concentrados em
algumas regies da molcula. Em diferentes espcies, muitas vezes protenas homlogas possuem
idnticas estruturas proticas primrias, mas diferem entre si na composio em carboidratos. As
glicoprotenas exercem variadas e importantes funes na clula humana, como protenas de
membrana, protenas de exportao ao meio extracelular, hormnios, etc. A ligao entre carboidratos
e protenas se d por ligaes N-glicosil ou O-glicosil, ligaes covalentes de 3 tipos principais:
Ligao N-glicosil com a Asparagina
Ligao O-glicosil com a Serina ou Treonina
Ligao O-glicosil com a Hidroxilisina
Proteoglicanas:
Antigamente chamadas de Mucopolissacardeos, so macromolculas que diferem das glicoprotenas
por conterem 95% ou mais de carboidratos em relao a protenas em suas estruturas. Estas molculas
possuem, portanto propriedades mais prximas dos polissacardeos do que das protenas. A frao
carboidrato destas molculas chamada Glicosaminoglicanas
As proteoglicanas so polinions formados por um ncleo protico ao qual se ligam muitas
glicosaminoglicanas diferentes. Estas glicosaminoglicanas so formadas sempre por longas cadeias
no ramificadas de unidades repetitivas de dissacardeos, geralmente uma hexosamina e um cido
urnico, e so freqentemente sulfatadas. Entre as funes das proteoglicanas esto a lubrificao e
sustentao de tecido conjuntivo e seus elementos celulares, receptores celulares para fatores de
93
94
Captulo 8
95
??
Transportadores de Eltrons:
Em termos energticos, eltron equivale energia para a clula. Logo, reaes de oxidao que
liberam eltrons so catablicas, pois liberam energia, e reaes de reduo so anablicas, pois
utilizam eltrons/energia. Os principais transportadores de eltrons na clula so trs, e funcionam de
maneira muito parecida:
Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo NAD:
Coenzima formada por um dinucleotdeo contendo adenina, capaz de aceitar um par de eltrons do
tomo de hidrognio no catabolismo, e liberar este par de eltrons para ser utilizado no anabolismo. A
reao de oxi-reduo do NAD:
NAD+ + 2 e- + 2 H+ ? NADH+H+
Forma Oxidada
Forma Reduzida
Flavina-Adenina-Dinucleotdeo FAD
Nucleotdeo de adenina como o NAD, atua de maneira idntica, reduzindo-se no catabolismo e
oxidando no anabolismo. Reao de oxi-reduo do FAD:
FAD + 2 e- + 2 H+ ? FADH2
Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo Fosfato NADP:
Muito semelhante ao NAD, possui um fosfato a mais na sua estrutura; atua de forma idntica ao NAD.
Sua reao de oxi-reduo :
NADP + 2 e- + 2 H+ ? NADPH2
Transportadores Fosfatados de Alta Energia:
96
O principal composto fosfatado de alta energia presente na clula, e que tambm o principal
transportador de energia, a ADENOSINA TRIFOSFATO ou ATP.
Alm deste, a Fosfocreatina tambm desempenha papel importante no metabolismo energtico.
Adenosina Trifosfato: ATP:
um mononucleotdeo de adenina trifosfatado, que por hidrlise, libera grande quantidade de energia
para a clula. Termodinamicamente:
ATP ? ADP + Pi
? G = - 7,3 Kcal/Mol
O ATP pode ser hidrolisado, em determinadas condies, a AMP + PPi, mas a energia liberada no
processo quase na mesma quantidade que a hidrlise acima!! A energia liberada pelo catabolismo
utilizada na sntese do ATP, que a transporta ao anabolismo, onde esta liberada pela hidrlise do
ATP a ADP + Pi.
Fosfocreatina: Presente no msculo estriado e no tecido nervoso, principalmente, este composto
fosfatado de alta energia atua como uma reserva de grupos fosfato, na regenerao rpida do ATP: A
Reao:
Fosfocreatina + ADP ? Creatina + ATP
E1
E2
E3
E4
E5
A?B?C?D?E?P
98
Existem na clula vias anablicas e catablicas correspondentes, muito parecidas entre si, mas com as
etapas enzimticas com o sentido da reao trocado. No entanto, sempre existem diferenas em pelo
menos uma destas etapas.
Compartimentalizao Celular
Viabilidade Energtica:
Muita vezes, a simples inverso do sentido da reao no possvel por ser a reao no, sentido do
anabolismo, energeticamente invivel para a clula.
METABOLISMO
DEGRADAO
DO
GLICOGNIO
OXIDATIVA
E
DE
MECANISMOS
DA
CARBOIDRATOS
(RESPIRAO CELULAR)
Metabolismo do glicognio
Por que estudar a sntese e degradao do glicognio? Por ser a principal forma de reserva de glicose
dos animais. Pode ser sintetizado na maioria dos tecidos apesar de quantitativamente, ter importncia
em dois basicamente: o tecido estriado esqueltico e o heptico. Outros tecidos que tenham a
capacidade de armazenar glicose sob forma de glicognio, se o fazem, em quantidade desprezvel
para a prpria clula e para o organismo. Mesmo sendo os tecidos heptico e muscular capazes de
armazenar glicognio, sob o ponto de vista qualitativo e fisiolgico mais importante faz-lo no
fgado do que nas clulas musculares. Nominalmente, a quantidade de glicognio do fgado muito
maior do que das clulas musculares, mas tambm preciso levar-se em conta que a massa de tecido
muscular muito maior. Relativamente s clulas do fgado armazenam muito mais. Sob o aspecto
fisiolgico, o fgado o rgo nobre do metabolismo celular, o centro nervoso do metabolismo
celular, de forma que armazenar glicose sob forma de glicognio no fgado extremamente importante
porque neste h uma enzima a glicose-6-fosfatase (que tambm existe nas clulas renais e intestinais)
99
O fgado, ento, capaz de armazenar glicose sob a forma de glicognio para uma posterior utilizao
quando, degradando os seus depsitos de glicognio e utilizando-se da enzima glicose-6-fosfatase
pode liber-la no meio extracelular, sustentar os outros tecidos, mantendo o equilbrio hiperglicemia e
hipoglicemia. O fgado tem esse papel por que consegue armazenar maior quantidade relativa e porque
possua enzima que libera a glicose para a circulao. Ao contrrio, a musculatura esqueltica capaz
de armazenar uma quantidade bruta de glicose, maior do que o fgado, no entanto, essa no possui
glicose-6-fosfatase. O msculo precisa muito da glicose, de forma que no pode armazen-la. Ela o
seu combustvel mais facilmente mobilizvel. Por que, ento estudar o metabolismo do glicognio?
?? Por que a principal forma de reserva de glicose nos animais.
?? Por que principalmente depositrio da glicose nas clulas musculares e no fgado.
?? Por que fgado por sintetizar a maior quantidade do glicognio e por conter a enzima que catalisa a
transformao da glicose-6 em glicose livre, alimenta de glicose os tecidos entre as refeies.
Armazena na hiperglicemia e libera na hipoglicemia.
O msculo no faz isso, por que ele armazena para a sua prpria utilizao. A glicose que entra na
clula muscular ser obrigatoriamente oxidada. Na clula renal h a tal enzima, mas essa no tem
importncia na manuteno da glicemia A cl do intestino interfere na glicemia, pois possui a enzima
depois que h a absoro dos nutrientes ela precisa utiliz-la para liberao da glicose na circulao.
? Degradao do glicognio ou glicogenlise
Como as clulas nervosas, que vivem essencialmente do metabolismo da glicose, viveriam no intervalo entre as refeies? Vale uma
discusso...
12
Enzimas dependentes do on magnsio (Mg++)
100
A gliclise tem a utilidade de produzir ATP, principal forma de conservao de energia no meio
intracelular de forma que, degradar o glicognio, significa aumentar os nveis de ATP intracelular.
Altas concentraes de ATP significam tendncia a polimerizao da glicose para posterior utilizao.
? Parte qumica e regulao hormonal
1) Glicogenlise
Ligao glicosdica a sada de uma molcula de gua e a formao de uma ponte de oxignio entre os
carbonos 1 e 4. Alfa porque a hidroxila (estrutura M acetlica) est direita. E as ramificaes so
iniciadas com um carbono alfa 1, 6 seguido de ligaes alfa 1, 4. Assim, as enzimas que devem estar
presentes para a degradao do glicognio devem atuar basicamente nas ligaes alfa 1,6 e alfa 1,4.
Por outro lado, para a polimerizao do glicognio a mesma especificidade de enzimas sero
necessrias (para alfa 1,4 e alfa 1,6). A principal enzima para a degradao do glicognio para as
ligaes alfa 1,4, alfa glicognio fosforilase ou somente fosforilase, mas essa enzima possui uma
especificidade refinada, de forma que s atua nas ligaes alfa 1,4 que estejam at quatro unidades de
glicose do ponto de ramificao. uma enzima que catalisa a hidrlise (fosforlise) do polissacardeo
(nas ligaes alfa 1,4) com a introduo de um cido fosfrico (H3PO4) ou fosfato inorgnico Pi tendo
como produto a glicose 1 fosfato cujo caminho metablico ser se transformar em glicose 6 fosfato
pela fosfoglicomutase que um enzima dependente do magnsio (Mg++).
Agora, no fgado, a molcula de glicose-6-fosfato pode ser transformada em glicose livre pela glicose6-fosfatase. Mas temos ainda uma cadeia de glicose com as ramificaes e quatro subunidades de
glicose ao lado de cada molcula de glicose alfa 1,6, porm a enzima que catalisa a fosforlise da
molcula alfa 1,6 s atua quando as molculas envolvidas no esto ligadas a outras subunidades. Para
solucionar esse problema, temos uma enzima que faz a transferncia das molculas de glicose ligadas
em alfa 1,6 para outras cadeias. Esta enzima uma transferase ou enzima desramificante. Esta uma
enzima multifuncional, possuindo dois centros ativos em uma nica cadeia polipepontodica
(subunidade protica) sem que se trate de uma enzima alostrica. Um centro ativo responsvel pela
transferncia das trs subunidades de glicose ao lado da ligao alfa 1,6 para a estrutura linear ou
qualquer outra ramificao de forma que seja catalisada a fosforlise dessa ligao pelo outro centro
ativo quando a enzima assume o nome de alfa 1,6-glicosidase.
101
O excesso de glicose tende a ser armazenado sob a forma de glicognio para isso, a glicose
intracelular (glicose-6-fosfato) deve ser transformada em glicose-1-fosfato, que o monmero do
glicognio pela ao da fosfoglicomutase, na presena de Mg++, porm notou-se que a presena de
glicose-1-fosfato no era o suficiente para a formao do glicognio, o UTP (uridina tri fosfato) era
fundamental nesse processo, sem a qual o processo no ocorre. O seu papel se ligar com a glicose,
formando o UDPG, e ser seu carreador, um intermedirio que vai liberar a glicose quando for formar
o glicognio. Da reao entre a glicose-1-fosfato e o UTP catalisada pela UDPG pirofosforilase temos
como subprodutos o UDPG e PPi , o pirofosfato, que ira se quebrar em dois Pi 14. A principal enzima
na sntese do glicognio a glicognio sintetase porque ela quem forma as ligaes glicosdicas do
tipo alfa 1,4. Do mesmo modo tem de se ter pelo menos mais uma enzima para a formao dos pontos
de ramificao. Mas a montagem do glicognio no toda linear de forma que ao se chegar na 11
unidade de glicose entra a enzima ramificante que pega um grupo de, em mdia, sete unidades de
glicose de uma cadeia qualquer e faz uma ramificao que dista obrigatoriamente no mnimo quatro
unidades de glicose de uma outra.
3) Primer
A molcula de glicognio precisa de um molde para ser sintetizada. Esse molde chamado de
primer. S a partir dele que o glicognio se forma. O primer formado de uma protena, a
glicogenina que tem atividade cataltica ( uma enzima), e tem em uma das extremidades um resduo
de tirosina que um aminocido hidroxilado e o fato de ela ter uma hidroxila fenlica, favorece a
ligao com a molcula de glicose (que um aldedo polialcolico) cedida pelo UDPG15. Quando
13
A hipoglicemia exagerada causa o desmaio, pois um recurso de emergncia para a economia de glicose.. impedindo uma pane
metablica irreversvel.
14
Esse fosfato inorgnico fundamental na formao do ATP.
15
Ligao ster
102
tiverem no mnimo oito molculas de glicose ligadas, a glicognio sintetase passa a atuar. O primer
nunca se desliga do glicognio.
? Degradao do glicognio
1) Ciclo de Cori
Mais precisamente Ciclo de Cori and Cori. A primeira dvida que paira com relao j vista gliclise
: em anaerobiose o piruvato transforma-se em lactato que em altas concentraes nas clulas
musculares ir voltar a se transformar em piruvato na presena de uma holoenzima (lactato
desidrogenase + NAD reduzido (no sentido do lactato) ou NAD oxidado (no sentido do piruvato). Mas
nos msculos h uma situao de anaerobiose portanto, a transformao do lactato em piruvato
invivel. Ento, sendo o lactato uma molcula pequena (de apenas trs carbonos) e por meio do
16
Resduo
Aminocido cataltico
18
Serina um aminocido cataltico que s se liga ao seu substrato estando fosforilada
17
103
gradiente de concentrao esse lactato em excesso ir para circulao. Quando se inunda a circulao
com lactato ocorre queda do pH sanguneo, por isso ele vai rapidamente para o fgado, clula heptica
onde este lactato em meio aerbico vai ser transformado em piruvato. Este piruvato foramado ser
extra e no ser necessrio ao metabolismo da clula heptica, pois derivado de uma lactato de uma
outra clula, no caso a muscular fazendo falta nesta clula. O fgado possui uma forma alternativa de
formao de glicose ou glicognio atravs de substncias no-glicidicas - a gliconeognese. Por
exemplo, o piruvato no um glicdio e sim um cetocido. Esta cota extra de piruvato pode ento
formar por gliconeognese glicose-6-fosfato que pela ao da glicose-6-fosfatase (uma enzima de
membrana) ir formar glicose livre que ir para a clula muscular. L, pela ao da hexoquinase na
presena de Mg++ teremos a glicose-6-fosfato. Ou seja, o casal Cori descobriu, ento que o lactato
extra da clula muscular acolhido pelo fgado onde por algumas reaes transformado em glicose
livre que retorna a clula muscular onde transformado em ATP.
Lembrando: so produzidos quatro ATP em anaerobiose e gastos dois ATP com um saldo positivo de
dois ATP. Ou seja, em anaerobiose a formao de ATP mnima. Por isso a necessidade de muito
glicogenio armazenando glicose e do ciclo de Cori alimentando a clula muscular.
O que fazer com o NAD reduzido j que a via glicolitica para funcionar precisa do NAD oxidado? O
NAD red precisa ser reoxidado ento. E ele assim ser de duas formas: uma em aerobiose e outra em
anaerobiose. O NAD uma vitamina hidrossolvel que no pode ser armazenado por isso necessrio
reutiliz-lo. Assim o NAD ser reoxidado na transformao do piruvato em lactato. O NAD oxidado
voltar, ento, a ser usado na via glicoltica.
? Via das Pentoses
uma via alternativa da oxidao da glicose-6-fosfato que ao contrrio da via glicolitica no tem
finalidade de obter ATP, alm de ser essencialmente citoplasmtica. No ocorrem em todos os tecidos,
apenas no fgado, nas hemcias, crtex das adrenais, tireide, tecido adiposo e glndulas mamrias em
lactao. Mesmo nesses tecidos, essa via no mais importante que a via glicolitica. S 30% da
glicose nesses tecidos oxidada pela via das pentoses.
104
Ao contrrio da via glicolitica, no h uma outra forma de se estudar a via das pentoses, seno por
frmulas que devero servir apenas como instrumento de entendimento e no devem ser memorizadas.
Deve ser usado o raciocnio, sobretudo. Por exemplo, se iremos obter pentoses a partir de uma hexose
(glicose-6-fosfato) deveremos ter uma descarboxilao.
1) Fase Oxidativa
Com a 6-fosfoglicona lactona para formarmos de vez a carboxila, devemos adicionar gua na presena
de lactonase formando o 6-fosfogliconato, um cido, j com a carboxila no carbono 1. Agora haver
perda de CO2 do carbono 1 numa reao de desidrogenao com descarboxilao na presena da
enzima 6-fosfatogliconato desidrogenase, tambm induzida pela insulina. A desidrogenao ocorrer
com a transformao do NADP em NADP reduzido.
Formar-se- ento um ismero da ribose: a ribulose que ir se transformar na presena de uma enzima
chamada fosfopentose isomerase teremos a formao da ribose-5-fosfato aproveitada para formao de
nucleotdeos, substrato para a fase no oxidaditiva da via das pentoses e forma a desoxirribose. Um
outro substrato para a fase no oxidativa da glicose obtido pela fosfopentose epimerase (epimero =
so ismeros que variam em apenas um carbono que no seja o funcional) agindo sobre a ribulose-5fosfato formando a xilulose-5-fosfato. Nessa fase obteve-se duas molculas de NADP reduzido por
glicose-6-fosfato oxidada. A insulina foi fundamental nessa fase.
2) Fase No-Oxidativa
Os intermedirios da via glicolitica sero obtidos nessa fase como a frutose-6 fosfato e o gliceraldedo3-fosfato. A unio da xilulose-5-fosfato mais ribose-5-fosfato catalisada pela transcetolase na
presena de Mg++ e tem como coenzima vitamina B1, a TPP (pirofosfato de tiamina), ou seja, a
transcetolase uma holoenzima, que catalisa a transferncia de um radical de dois carbonos que
contivesse um grupamento cetona, obtendo gliceraldedo-3-fosfato e sectohepontoulose 7 fosfato. Uma
parte desse gliceraldedo-3-fosfato formado, segue a via glicolitica e outra parte continua na fase nooxidativa da via das pentoses, para formar o outro intermedirio: a frutrose 6 fosfato. Para isso, o
106
Como exemplo, um fibroblasto em cultura, onde se encontra dezenas de mitocndrias espalhadas pelo
citoplasma que so distribudas sobre a rede de microtbulos da clula, que d sustentao mecnica a
elas e responsvel atravs de protena motoras pelo transporte dessas mitocndrias e localizao em
um determinado local do citoplasma onde h uma maior demanda de energia, ou seja, tm uma
tendncia a se concentrarem nos locais que precisam mais de ATP, como nas clulas musculares.
Essas mitocndrias tm uma caracterstica peculiar que se repete em todos os organismos eucariontes
com algumas excees. Possui um sistema duplo de membrana que so as membranas mitocondriais
externa e interna, formando dois compartimentos mitocondriais distintos, ou seja, o espao
intermembranar e a matriz mitocondrial. Alm disso, a membrana mitocndria interna forma projees
para o interior da matriz, formando as cristas mitocondriais. A morfologia e o tamanho mitocondrial
so variveis, dependendo da sua fase de vida.
107
Podem ser encontradas, na matriz mitocondrial, estruturas eletrodensas, os grnulos mitocondriais que
so deposies de um tipo de sal chamado fosfato de clcio, devido fisiologia da mitocndria que
armazena grande quantidade de fosfato para produo de ATP e de clcio por causa da funo de
retir-lo do citoplasma. As bactrias Gran negativas como a E. coli apresentam tambm um sistema
duplo de membrana como a mitocndria, alm do fato de ambas: a membrana mitocndria externa e a
externa da bactria apresentarem pouca seletividade, devido existncia de uma protena integral de
membrana chamada porina que forma canais hidroflicos que selecionam a passagem somente pelo
tamanho das molculas. (substncias < 10000 Da conseguem passar, enquanto que macromolculas
como protenas e RNA ficam retidas).
Para as substncias passarem do espao intermembranar para a matriz existem transportadores
especficos. As bactrias Gran positivas s tm uma membrana. O espao intermembranar se
caracteriza por possuir baixas concentraes de protena, refletida pela presena de poucos tipos de
protena que tenham alguma funo nessa regio. Exemplos, o citocromo c, que protena solvel e a
enzima dinucleotdeo quinase, que realiza a reao ATP+NDP ?
utilizado em reaes cujas enzimas envolvidas preferem outro nucletdeo diferente do ATP. A
composio desse espao bem mais fluida do que a matriz e citoplasma devido a essa baixa
concentrao de protena.
A membrana mitocondrial interna tem como caracterstica a seletividade, parte dessa seletividade se
deve a presena de um lipdio especial cardiolipina que serve para aumentar a impermeabilidade da
passagem de ons e substncias hidroflicas. Ento, tendo uma membrana altamente seletiva e
impermevel, precisa-se de transportadores especficos para promover a passagem de substncias
necessrias ao metabolismo da mitocndria. A presena de grandes quantidades de transportadores,
que vo controlar a passagem de substncias da matriz para o espao intermembranar, a outra
caracterstica. Tem-se tambm a presena das protena da cadeia respiratria??? Como?? A prtonATPase que fica mais concentrada nas cristas mitocondriais. A H+ATPase sintetiza ATP e protena
da cadeia respiratria transporta eltrons.
A mitocndria se difere das outras organelas no que se refere ao sistema duplo de membrana
como j foi dito e ao sistema gentico muito complexo, tendo um genoma na forma de um DNA
circular similar ao dos organismos procariontes, alm de possuir RNA e DNA polimerases e
ribossomas do tipo 70S19 que traduzem a informao gentica sob a forma de protena dentro da matriz
mitocondrial. Essas caractersticas mostram a semelhana entre bactrias e mitocndrias. Por isso,
19
108
prope-se que a mitocndria se originou a partir de um organismo procarionte que inicialmente passou
a viver simbioticamente dentro das clulas eucariontes primitivas e que depois de algum tempo foi
perdendo a capacidade de viver independentemente, ou seja, perdendo parte do genoma e ficando
dependente do genoma nuclear para sobreviver. A membrana externa da bactria tem a funo de
proteo contra anticorpos, agentes nocivos, enquanto que a mitocndria, protegida dentro do meio
intracelular, no teria necessidade de tal membrana Entretanto, nunca foi testado um mutante
mitocondrial para ver se a membrana til ou no a fisiologia da clula. Na matriz mitocondrial, temse a presena de uma srie de protena que participam de vias metablicas importantes para a fisiologia
da clula como o Ciclo de Krebs e as enzimas que participam da ? -oxidao dos cidos graxos que vo
ter funo especfica na produo de energia, h outras enzimas que participam da sntese de outras
macromolculas e o sistema gentico que consta de vrias cpias do DNA circular contendo parte do
genoma necessrio para a fisiologia da clula e enzimas necessrias a transcrio e traduo da
informao gentica (RNA polimerase que sintetiza os RNAm e RNAt; os ribossomas que sintetizam
as protena a partir informao contida na fita de RNAm e as protena necessrias a duplicao desse
DNA circular para que ao longo da diviso das mitocndrias a informao gentica no seja perdida).
? Biognese
Existe na membrana externa um receptor e um transportador proteico. Por exemplo, uma protena
mitocondrial e uma nuclear, como reconhecer? Pela seqncia, mas no existe uma para cada protena,
na realidade uma seqncia especfica que funciona como sinalizador para indicar que a protena
109
deve ser enviada para o interior da mitocndria. Mais comumente, tem-se nessas protenas uma
seqncia N-terminal, como ocorre nas protena que vo ser importadas para o RER, que vai compor
um sinal de importe mitocondrial. Algumas protenas podem t-lo (o sinal) em seu meio e outras no o
apresentam, devendo usar outro mecanismo ainda desconhecido. Quando as protenas se formam
(esto no seu estado biolgico funcional) no citoplasma, primeiro, so desenoveladas por uma protena
citoplasmtica que a Hsc 70, que permanece a elas ligadas at serem transportadas atravs da
membrana por um sistema de transportador que envolve uma protena de membr que abre uma
passagem com dimetro fixo, determinando o tamanho das molculas que iro passar. A protena
enovelada (ativa) no consegue, por isso necessrio desenovel-la para que, na forma linear, seja
bombeada atravs dessa passagem.
A protena da membrana formada por um receptor e um transportador, que estosempre juntos, o
sinal reconhecido pelo receptor e, aps isso, esse receptor vai bombear a protena atravs da
membrana e, medida que atravessa, solta a Hsc 70. Esse mecanismo dependente de ATP.
Na membrana interna, existe tambm um segundo receptor que capaz, se necessrio, de pegar esse
peptdeo sinal e continuar o transporte da protena para a matriz ou membrana mitocndria interna. De
uma maneira geral, nessa regio da mitocndria onde tem o transporte de protena, encontra-se atravs
do M.E.20 uma regio de contato entre membrana da mitocndria externa e interna. Pode acontecer
duas coisas, a protena ter um sinal de integrao na MME, quando entra na membrana atravs desse
transportador que abre uma passagem para a membrana mitocndria externa e ela no atravessa a
membrana toda, mas fica atravessada na membr mitocndria externa ou segundo sinal de liberao da
protena no espao intermembranar. Se no tiver algum desses, captada pelo segundo receptor que
comea a bombear a protena atravs da MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA e a pode ter
um sinal que indique a integrao na MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA e se no tiver sinal
algum, passa direto para a matriz.
20
Microscpio Eletrnico
110
no ATP. Mas para fazer isso, ela primeiro extrai energia da ligao qumica e armazena na forma de
eltrons numa molcula energtica que o NADH. De uma maneira geral, os compostos orgnicos
oxidados parcialmente, tanto no citoplasma quanto na mitocndria, so transformados numa molcula
de Acetil-CoA, que entra no Ciclo de Krebs oxidado e a energia armazenada nas ligaes qumicas
do acetato ligado Acetil-CoA vai ser armazenada sob a forma de uma molcula com poder redutor que
o NADH. So produzidas poucas molculas de ATP e energia armazenada sob a forma de NADH,
que vai fornecer indiretamente a energia necessria para a sntese de ATP. De que forma? Essa energia
do NADH vai ser utilizada por um complexo de citocromos na MEMBRANA MITOCONDRIAL
INTERNA e por dois outros transportadores (ubiquinona, presente dentro da membrana, e citocromo c,
protena solvel dentro do espao intermembranar) que levam o eltron de um citocromo para o outro.
Inicialmente o que esse NADH faz doar os eltron dele para o primeiro complexo citocromo que o
NAD.H redutase, que utiliza a energia desse eltron para transportar prtons do interior da matriz para
o espao intermembranar, o eltron doado a ubiquinona que transfere para o complexo 2, chamado
de citocromo c redutase e a energia adquirida desse eltron ser utilizada da mesma forma, depois o
eltron transferido para o citocromo c que transfere para o complexo 3 que vai utilizar para
transportar mais prtons de dentro da matriz para o espao. E a vai ser transferido para um aceptoor
final que o oxignio, formando gua. (quatro prtrons mais uma molcula de oxignio = 2 gua).
A clula no tem um jeito eficiente de transformar a energia do NADH em ATP ento, ela cria um
gradiente de prtons que tem dois componentes: eltrico e qumico (eletrotnico) atravs da
MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA.
Cria-se uma diferena de concentrao muito grande de prtons entre o espao e a matriz, a energia
armazenada nesse gradiente vai ser utilizada para sntese de ATP atravs de uma protena especial
presente nessa membrana interna que a prton ATPase. O que ela faz? Composta por duas pores, a
primeira poro transmembranar chamada de FO (zero) e a segunda globular de F1. FO compe um
canal de prtons e F1 uma regio cataltica que promove a converso de ADP em ATP. A passagem
de prtons pelo canal de prton ATPase que fornece energia para a formao e liberao de ATP
dentro da matriz. E grande parte dessa energia deve ser enviada para o citoplasma, atravs do antiporte
do ATP-ADP para continuar o ciclo de sntese.
Aproximadamente 85% da energia armazenada na ligao entre os fosfatos ? e ? do ATP e os outros
15% so dissipados sob a forma de calor. Ento, a prpria mitocndria, em estado fisiolgico normal,
111
capaz de gerar calor e controlar a temperatura do corpo. Existem tambm mitocndrias que tem a
finalidade de gerar calor que se localizam no tecido adiposo marrom, mas para isso precisa ter uma
protena especial na MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA chamada de termogenina que um
canal de prtons que permite a dissipao do gradiente de prtons gerado pela cadeia transportadora de
eltrons sem que essa energia armazenada seja utilizada para realizar algum tipo de trabalho. Como
no acoplada a nenhuma reao qumica, a energia perdida sob a forma de calor. E como o tecido
marrom altamente vascularizado, o calor produzido naquela regio captado pelo fluxo sanguneo
que passa por aquele tecido e transferido para o resto do organismo, ajudando em muitos animais
terminais e recm natos a manter a temperatura corporal constante.
Respirao celular
Estudaremos no seu sentido intracelular, ou seja, sem englobar as trocas gasosas no pulmo21. A
formao de CO2 e o consumo de O2 para a oxidao da glicose principalmente nas mitocndrias.
? Ciclo de Krebs
No citoplasma a glicose-6-fosfato forma piruvato que, em aerobiose, transportado por protenas
carreadoras da membrana interna da mitocndria para o interior da mesma onde se transforma em
acetil-CoA. Esta reao no pertence ao Ciclo de Krebs, mas responsvel pela sua regulao. O
complexo multienzimtico que catalisa essa reao controlado alostericamente e por modificao
covalente (fosforilar e defosforilar). O acetil-CoA intermedirio do ciclo de Krebs. A glicose-6fosfato obtida no meio intracelular a partir da glicose circulante que, em ltima anlise, foi obtida
pela ingesto de amido, glicognio e outros polissacardeos e gorduras22 da nossa alimentao. O
catabolismo aerbico implica necessariamente na formao da acetil-CoA23.
Durante o ciclo de Krebs h grande formao de coenzimas reduzidas ( AD e FAD - ambas vitaminas
do complexo B, hidrossolveis). Para isso, necessria a disposio de coenzimas oxidadas por esse
motivo o CICLO DE KREBS est to integrado Cadeia Respiratria24 que responsvel por esse
processo, caso contrrio o CICLO DE KREBS ficaria momentaneamente paralizado.
? Transformao do priruvato em acetil-CoA
21
Apresentadas no Anexo.
O fgado, por ser o rgo responsvel por controlar a glicemia, utiliza principalmente as gorduras no seu metabolismo.
23
Mesmo quando temos a oxidao de protenas pois alguns aminocidos geram diretamente acetil Co.A, outros geram piruvato que gera
acetil Co.A, ou ainda outros intermedirios do ciclo de Krebs atribuindo ao mesmo o titulo de ponto de convergncia do catabolismo
aerbico.
24
Esse fato faz da cadeia respiratria o principal formador de ATP da respirao apesar de sus funo prima no ser esse.
22
112
Na presena de glucagon a piruvato desidrogenase fica inativa por que seu segundo mensageiro o
AMPc que estimula protenas quinases que so enzimas que catalisam reaes de fosforilao. Ento a
PDH inativa na sua forma defosforilada. Preservar o piruvato significa preservar a glicose-6-fosfato
para que ela possa ir para a circulao. A insulina por ser hopoglicemiante deve aprisionar a glicose
dentro da clula, estimulando a via das pentoses, a sntese de glicognio e a gliclise, assim, estimula
o ciclo de Krebs. Ela estimula protena fosfatase que catalisa reao de retirada de radical fosfato, a
PDH fica ativa transformando piruvato em acetil-CoA.
Uma substncia orgnica ao ser oxidada, fornece obrigatoriamente o nmero de molculas de CO2 ao
seu nmero de carbonos (um cido graxo de 18C fornecer 18 molculas de CO2). Dessa forma, a
glicose, ao ser oxidada integralmente at CO2 e H2O fornecer seis CO2. As duas primeiras na reao
de piruvato26 at acetil-CoA.
Acetil CoA, o representante das demais substncias27 a serem oxidadas, se combina sempre com
oxaloacetato formando citrato28 (da chamar o CICLO DE KREBS e de cidos tricarboxlicos)
liberando CoA. O fato mais importante da reao que nela est o primeiro dos trs marcapassos do
CICLO DE KREBS, ou seja, primeira das trs enzimas alostricas que controlam a velocidade do
CICLO DE KREBS. A citrato sintetase, que catalisa a transformao do acetil-CoA somado ao
oxaloacetato em citrato, alostrica que pode ser modulada negativamente pelo excesso de NADred,
25
113
e citrato. Por outro lado, altas concentraes de NAD oxidado, ADP e baixas concentraes de citrato
so seus moduladores negativos29.
3) Quarta reao
Nesta etapa o isocitrato (6C) se transforma em a ceto glutarato (5C), onde h liberao de mais uma
molcula de CO2, portanto, a reduo de uma molcula de NAD oxidado (este vai para a Cadeia
Respiratria para ser reoxidado). A enzima que catalisa essa reao a isocitrato desidrogenase, uma
enzima alostrica modulada positivamente por altas de ADP e negativamente por altas de ATP30.
Agora o a ceto glutarato (5C) se transforma em Succinil-CoA (4C).Temos novamente e pela ltima
vez a liberao de CO231 . Aqui temos tambm a formao de coenzimas reduzidas que vai para o
CICLO DE KREBS. A enzima que catalisa essa reao a alfa ceto glutarato32 desidrogenase a ltima
enzima alostrica do CICLO DE KREBS que modulada negativamente por altas concentraes de
NAD reduzido (ATP) e succinil-CoA e negativamente por altas concentraes de NADox (ADP) e
baixas concentraes de succinilCoA .
5) Sexta reao
Depois da quinta reao, j obtivemos as trs enzimas alostricas, coenzimas reduzidas e as duas
molculas de CO2 que deveramos produzir no CICLO DE KREBS. A partir de agora o CICLO DE
KREBS continua com o objetivo de regenerar o oxaloacetato. Como a acetil-CoA pode ser obtida a
29
Alguns autores mencionam a possibilidade de que o excesso de succinil-Co.A (intermedirio do CK) inibe competitivamente a citrato
sintetase por ser um anlogo estrutural do acetil Co.A. Para que ocorra essa inibio so necessrias altssimas concentraes de succinil
Co.A no meio.
30
Alguns autores consideram o excesso de NAD oxidado e NAD reduzido como moduladores positivos e negativos, respectivamente, da
isocitrato desidrogenase.
31
O cido palmtico uma cido graxo de 16C e, quantitativamente o principal c graxo do nosso organismo. O nico produto final da
oxidao dos cidos graxos o acetil Co.A . O c palmtico, ento libera 8 molculas de acetil Co.A, logo 16 molculas de CO2.
32
um complexo multienzimtico muito semelhante piruvato desidrogenase (vrias enzimas e vrias coenzimas).
114
partir de vrias substncias a quantidade dessa molcula muito grande enquanto que so poucas as
maneiras de se obter o oxaloacetato. Se o CICLO DE KREBS no fosse uma via metablica fechada
poderia ser paralisada por falta de oxaloacetato ento a partir da sexta reao o nico motivo de existir
do CICLO DE KREBS a regenerao do oxaloacetato.
O succinil-CoA (4C) vai se transformar em cido succnico - 4C (succinato) pela ao da succinil CoA
sintetase. Na formao do acetil CoA a partir do piruvato, retirado o CO2 e formada uma ligao
tioster, caso contrrio teramos a formao de cido actico. Apesar de se tratar de uma reao de alta
energia, no h gasto de ATP porque o ambiente mitocondrial rico em energia. Ao se transformar o
succinil-CoA em succinato h quebra dessa ligao de alta energia liberando-a. Parte dessa energia
captada pelo GDP, transformando o em GTP que por sua vez promove a formao de um ATP a partir
de um ADP. A formao do GTP no ciclo de Krebs equivale formao de um ATP. Muitos autores
destacam a importante formao de ATP no CICLO DE KREBS que no verdade, formada apenas
uma molcula de ATP por volta.
6) Stima reao
7) Oitava reao
115
a uma de ATP; o CICLO DE KREBS no uma via metablica aberta porque fundamental a
regenerao do oxaloacetato.
? Papel anfiblico (duplo papel metablico) do Ciclo de Krebs
Ter papel anfiblico significa ter papel catablico e anablico34. A grande maioria das reaes
reversvel e, assim, o controle alostrico se torna extremamente importante. O papel de contribuir com
o anabolismo se d em circunstncias de alta de ATP. Quando isso acontece observa-se altas
concentraes de intermedirios do CICLO DE KREBS pela diminuio da velocidade da via. Alguns
intermedirios nessas condies contribuem para o anabolismo.
O oxaloacetato em altas concentraes sofre transaminao e se transforma em aspartato (aminocido).
Do mesmo modo o a ceto glutarato da origem ao glutamato (aminocido). Por sua vez o piruvato por
ao da piruvatocarboxilase se transforma em oxaloacetato. Essa enzima modulada alostericamente
por altas concentraes de acetil-CoA. Essas reaes so chamadas de reaes de preenchimento ou
reaes anaplerticas.
Ao final do assunto anterior, estudvamos o segundo papel metablico do CICLO DE KREBS que
ocorria em casos excesso de ATP, NAD reduzido e acetil-CoA, assim, teramos uma menor velocidade
da via e, conseqentemente, maior concentrao dos intermedirios que no so mais utilizados no
sentido do metabolismo aerbico mas sim de vias biossintticas como o da formao de aminocidos
no essenciais para a formao de protenas; a formao de acetil-CoA no citoplasma (excesso de
citrato na mitocndria vai para o citoplasma onde oxidado em acetil-CoA e oxaloacetato) que vai ser
substrato para a biossntese de lipdios; o oxaloacetato que vai servir de substrato para a formao de
glicose6P no citoplasma, gliconeognese.
A gliconeognese a formao de glicose-6-fosfato a partir de substncias no glicdicas como
oxaloacetato que um cetocido dicarboxlico. Na presena de GTP o oxaloacetato se transforma em
fosfoenol piruvato pela ao da fosfoenol piruvato carboxiquinase com a sada de CO2. O fosfoenol
34
O Ciclo de Krebs, alm de ser uma via anfiblica, tambm uma via anaplertica, ou seja de preenchimento, fornecendo
intermedirios metablicos para outras vias.
116
O oxaloacetato precisa ser obtido no citoplasma, via citrato ou via malato porque a membrana
mitocondrial interna absolutamente impermevel ao oxaloacetato. Depois desse by pass o caminho
do fosfoenol piruvato retornar os caminhos da gliclise.
? Resumindo: A gliconeognese ocorre em casos de excesso de NAD reduzido, acetil-CoA e ATP,
quando os intermedirios esto em alta e so utilizados para a sntese de aminocidos no essenciais
um deles usado para fornecer, no citoplasma, substrato para a biossntese de cidos graxos (citrato).
Quando o citrato clivado, no s fornece acetil-CoA mas tambm oxaloacetato. Transformando o
oxaloacetato em fosfoenol piruvato pode-se obter glicose6P. Existe ainda uma outra forma de se obter
oxaloacetato no citoplasma: a transformao do oxaloacetato em malato. Para que esse oxaloacetato
aparea no citoplasma, necessrio que aumente a sua concentrao na mitocndria isso ocorre atravs
da inibio da piruvato desidrogenase e o estmulo simultneo da piruvato carboxilase, ambas pela
modulao da acetil-CoA. O substrato da ao da piruvato carboxilase o piruvato que no foi mais
transformado em acetil-CoA .
? Cadeia Respiratria
35
Derivao.
117
Chegamos ao ponto central da Cadeia Respiratria, pois a ubiquinona receptora de eltrons do NAD
e do FAD. Pela diferente entrada na cadeia respiratria, vai haver diferena na quantidade de ATP
produzidos entre o FAD e o NAD, respectivamente dois e trs molculas ATP. A partir desse
momento, os H+ so liberados no meio e apenas os pares de eltrons sero carregados de forma que os
inibidores da Cadeia Respiratria causam morte celular no por falta de ATP, mas por acidose como
o caso do CO e do CN-. O O2 no pode ser reduzido para formar gua. Os citocromos so protenas
hemnicas (como a hemoglobina) contm grupamento M42 no radical prosttico. O cyt a3, alm do
ferro tem cobre.
36
38
118
ADP + Pi = ATP
NAD/NADH = -0,32 v
O2 = +0,82 v
? G = nF ? E
Quanto mais negativo o seu potencial de oxireduo, maior sua capacidade de ceder eltrons, ou seja,
se oxidar. Assim, o potencial redoxi do citocromo C, por exemplo, mais positivo que o do citocromo
B. Fazendo que a ordem da Cadeia Respiratria seja vigorosa j que depende dos potenciais redoxi.
2) Desacopladores da fosforilao oxidativa43
A formao de ATP na mitocndria fundamental Cadeia Respiratria uma vez que o fluxo de
eltrons na cadeia libera a energia necessria para a formao de eltrons em um processo conhecido
como fosforilao oxidativa. Desacoplar a fosforilao oxidativa significa impedir que a energia
liberada no seja utilizada na formao de ATP. T3 e T4 so desacopladores da fosforilao oxidativa
e, por isso, sente-se muita fome em ambientes frios, pois para compensar a grande parte da energia
liberada em forma de calor (para manter a temperatura corporal) sem prejudicar a produo de ATP
necessrio excedente calrico. Um outro desacoplador, esse sinttico, o NITROFENOL.
So substncias que impedem o fluxo de eltrons. A inibio de um stio inibe todo o fluxo. Isso
impede a formao de gua metablica, que causa morte por acidose. No stio 3 os principais
inibidores so o CO, o H2S e o CN-. No stio 2 a antinicina que um antibitico e no stio 1 a rotenona
43
119
(cetona usada pelos ndios para pescar. Algumas plantas continham essa substncia que matava o peixe
pela inibio da cr) e os barbitricos (como o fenobarbital).
Relembrando a gliclise, na reao catalisada pela aldolase (ciso da frutose 1,6-bifosfato, tendo como
produto o aldedo 3-fosfoglicrico e dihidroxicetona fosfato) obtinha-se muito mais quantidade de
diidroxicetona-fosfato, gerando uma dvida: por que formar mais dela se seria transformada em
aldedo fosfoglicrico para dar continuidade gliclise? Um dos motivos justamente a reoxidao do
NAD em aerobiose. Isso se d atravs da enzima glicerol-fosfato desidrogenase (citoplasmtica) onde
o grupamento cetona da DHAP reduzido produzindo NAD oxidado e DHA reduzida at glicerolfosfato44.
Por que no reoxidar esse NAD na mitocndria? Por que a membrana mitocondrial impermevel ao
NAD, mas para gerar mais ATP, esse NAD produzido na glicolise se utiliza de uma lanadeira para
que os tomos de hidrognio vo para a cadeia respiratria. Assim o glicerol-fosfato vai para a
mitocndria onde o FAD reduzido a partir dos hidrognios que o glicerolP captou do NAD
citoplasmtico e vai para a Cadeia Respiratria. Depois o glicerol-fosfato volta para o citoplasma. Essa
a via do glicerol-P.
H ainda uma segunda lanadeira que usa o malato como transportador. Esse malato obtido a partir
do oxaloacetato. Esse possui um grupamento cetona que pela malato desidrogenase recebe os
hidrognios do NAD, oxidando-o. O malato vai para a mitocndria onde oxidado por uma NAD
mitocondrial que vai para Cadeia Respiratria onde produz trs ATPs e o oxaloacetato, por sua vez, vai
para o CICLO DE KREBS.
A ingesto excessiva de acares engorda j que no se pode armazenar toda a glicose ingerida sob a forma de glicognio que, por ter
uma gde camada de solvatao, ocupa muito espao, j que o glicerol P um importante substrato pra a formao de gorduras.
120
Respiratria. Por ltimo as duas molculas de acetil-CoA vai para o Ciclo de Krebs onde d uma volta
cada um onde temos a formao de 1 GTP, correspondente a um ATP; trs NAD reduzidos,
equivalendo a 6 ATP e 1 FAD reduzido (2ATP), ou seja 12 ATP por volta no Ciclo de Krebs (24 ATP
j que so duas de CoA). Dependendo, ento, da via de reoxidao dos NAD citoplasmticos,
formaremos 36 ou 38 ATP no total.
121
Captulo 9
papel do Ciclo de Krebs, vimos isso, quando temos excesso de ATP, de NAD reduzido, de acetil-CoA,
significa que o Ciclo de Krebs vai diminuir de velocidade e os seus intermedirios estaro em altas
concentraes. Entre eles, o que nos interessa para estudo da biossntese dos cidos graxos, o citrato
que foi formado na mitocndria pela reao do oxaloacetato (4C) com acetil CoA na presena de uma
enzima alostrica: citrato sintetase. Para que o citrato fornea molcula de acetil-CoA para o
citoplasma e l ocorra a biossntese, a circunstncia metablica preferencial deve ser o estmulo ao
anabolismo, ou seja, preciso ter um excesso de ATP.
Ento, o excesso de citrato vai para o citoplasma atravs do transporte de protena tricarboxlicas. Este
citrato ser oxidado, na presena de CoA e da enzima ATPcitrato liase, transformar-se- em acetil
CoA e oxaloacetato. A ATPcitrato liase uma enzima que pode ser controlada por modificao
covalente,ou seja, por fosforilao. Est ativa quando no-fosforilada. O glucagon inibe a ATPcitrato
liase por que o seu segundo mensageiro (AMPc) estimula quinases que fosforilam. Se estivssemos
discutindo a sntese de cidos graxos nas clulas adiposas, onde no ocorre a gliconeognese, o destino
do oxaloacetato no poderia ser substrato para glicose-6-fosfato, ento se transforma em malato pela
via do malato. Essa reao no ocorrer em alta velocidade, pois a fosfofrutoquinase 1 inibida pelas
altas concentraes de citrato, ou seja, o seu modulador negativo. Desse modo, forma-se menos
NAD reduzido na gliclise e assim menos NAD reduzido para ser reoxidado na via do malato.
Quando a biossntese dos cidos graxos est ocorrendo vai haver a transformao do oxaloacetato em
malato s que numa velocidade muito baixa por que fundamental que haja a participao do NAD
reduzido que se transforma em oxidado, mas ele vem gliclise, que est produzindo pouco NAD
reduzido por causa do citrato que o modulador negativo da PFK1. A principal fonte de NAD
reduzido para a biossntese de cidos graxos (via das pentoses - fato que justifica o seu estudo:
formao de NADred para a biossntese...) no a via das pentoses e sim o proveniente da ao de
uma tal enzima mlica.
Quem ela? a enzima que catalisa a transformao do malato (4C) em piruvato (3C), quando h a
formao de um NAD reduzido. No h sada para o oxaloacetato na cel. adiposa. ou ele forma
aminocido por transaminao ou se transforma em malato na presena de NAD reduzido e da enzima
mlica. Vamos considerar que a principal fonte de NAD reduzido para a biossntese (ocorre em alta
velocidade) proveniente da via das pentoses tendo em vista que outra via tem velocidade muito
123
diminuda pela presena de citrato. O destino do piruvato a mitocndria, onde vai se transformar em
acetil CoA que vai se ligar ao oxaloacetato, formando mais citrato.
Agora, teremos que estudar a juno dessas duas substncias. Quando se pensou nisso, verificou-se a
presena de um problema: acetil-CoA e malonil-CoA no reagem entre si, ou seja, o malonil (radical
do cidos malnico) quando transportado pela CoA no podia reagir com o radical acil, acetil.
Sabendo-se que essa reao acontece, ento, s restava uma sada, trocar de carreador. Essa outra
substncia carreadora de radicais acil chamada de ACP-SH (protena carreadora de radicais acil), tem
uma sufidrila no seu radical prosttico fosfopantetena (o peso molecular de 9000).
No lugar da CoA entra ACP45, ficando acetil-S-ACP (verdadeiro cido graxo iniciador) e
malonil~SACP(verdadeiro ag. continuador), e h a liberao de CoA-SH. A sntese de cido graxo no
45
124
citoplasma feita pelo sistema cido graxo sintetase (P.M.=400.000). Esse sistema composto por
sete protenas, uma delas no tem atividade cataltica (ACP-SH) e as outras seis so enzimas, duas
foram utilizadas acetil ACP transacilase e malonil ACP transacilase.
A prxima etapa reagir o acetil ACP com malonil ACP. Para se construir um cido graxo de nmero
par de carbonos, usa-se uma molcula de acetil e todas as outras estaro sob a forma de malonil. Mas
toda vez que o malonil entrar p/ alongar um cidograxo, haver a liberao de um CO2. Ento, tem um
acetil, entra um malonil, sai sempre um CO2, ficando uma molcula de 4C... Isso acontece at a
formao do cido graxo desejado. Para a formao do cido palmtico, por exemplo, tem-se uma
molcula de acetil e sete de malonil (doador de 2C para a sntese).
1) Na primeira reao, sai o gs carbnico e ACP-SH e forma acetoacetil SACP, na presena da ceto
acil-ACP sintetase (terceira enzima do complexo cido graxo sintetase); as prximas reaes tem
objetivo de retirar grupamento cetona, da seguinte maneira: hidrogenao, desidratao, e
finalmente a hidrogenao (o inverso da ? -oxidao quando se queria a formao de um
grupamento cetona).
2) Na segunda reao, reduo do grupamento cetona atravs do NADP reduzido (via das pentoses e
via enzima mlica), forma ? -hidroxiacil SACP na presena de cetoacil ACP redutase;
3) Na terceira reao, desidratao (liberao de gua estabelecendo uma dupla ligao entre os
NADP reduzido, na presena da enoil ACP redutase, forma um composto de 4C que vai se juntar com
malonil... formar um cido graxo de 6C... at formar, o cido palmtico na maioria das vezes, por que
ele mesmo controla toda a sntese de ac graxos modulando negativamente a acetil-CoA carboxilase.
No citoplasmtico, no se dispe mais do malonil por que o cido palmtico formado est inibindo a
formao de malonil-CoA. Quantas molculas de NADP reduzido foram utilizadas para a formao do
cido palmtico? Quatorze. Por que para cada entrada de malonil utiliza-se dois NADP reduzidos,
como so sete de malonil... No final, obtm-se o palmitoil-SACP. Para transform-lo, em palmitato,
125
preciso retirar a ligao tio-ester, para deslig-lo da protena carreadora e para isso, reage na presena
de gua com a ao de enzimas desacilases que retiram o ACP e recompem a carboxila.
? O alongamento da cadeia de cidos graxos
A sntese extramitocondrial de cidos graxos tinha uma limitao no especfica do sistema cido
graxo sintetase, mas, da acetil-CoA carboxilase (enzima que catalisa a transformao do agente
continuador desta sntese-malonil CoA). A acetil-CoA carboxilase inibida por altas concentraes de
cido palmtico. Metabolicamente, isto significa que na medida em que for formando o cido graxo de
16 carbonos comea a inviabilizar, ao menos diminuir a formao de malonil-CoA, diminuindo a
velocidade de biossntese. Isso poderia criar um paradoxo metablico.
Daremos o exemplo apenas da obteno de cido esterico de 18C46. Existem dois sistemas de
alongamento classicamente conhecidos nos livros textos e nos artigos cientficos: um ocorre no REL e
outro na mitocndria. O primeiro muito ativo e o segundo praticamente inativo porque como os
cidos graxos de at 16C so formados no citoplasma, para que ocorresse o alongamento mitocondrial
eles teriam que ser ativados, ligados ao complexo acil carnitina e atravs da translocase serem
transportados para o interior da mitocndria onde seria cindido para ento poder ser alongado pelo
acetil-CoA. Para que o cido palmtico seja sitetisado as vias de biossntese precisam estar ativadas
existindo grande disponibilidade de malonil-CoA no citoplasma que representam o nico modulador
alostrico negativo da CAT I.
126
estmago. A ingesto demasiada de AAS47 e aspirina pode, ento causar danos mucosa estomacal e
intestinal. As estruturas mencionadas so originrias do cido aracdnico, cido esse que tem 20C e 4
duplas ligaes duplas (=). Estudar a formao de cidos graxos insaturados no uma mera
elocubrao terica, mas saber a formao do cido graxo fundamental para a formao de
prostaglandinas, tromboxanas e o cido graxo fundamental na estrutura do diacil gliceerol, segundo
mensageiro (cido araquidnico48 e cido esterico). Ento a questo : o cido aracdnico excencial,
ou seja, obtido a partir da dieta? No, ele sintetizado no nosso organismo apesar da sua
complexidade. Por sinal, nossas clulas s so capazes de sintetizar um cido graxo com mais de uma
insaturao que o cido araquidnico. Os demais cidos graxos possuem apenas uma insaturao.
Como fazer essa insaturao?
Tomemos por exemplo o cido olico49 que possui 18 carbonos e uma dupla entre C9 e C10. Para
formar essa insaturao foi necessrio a retirada de dois hidrognios, um de cada carbono (9 e 10) pela
ao de enzimas conhecidas como oxidases e que usam o NADP reduzido como coenzima formando
duas molculas de gua. cidos graxos com duas ou trs insaturaes so essenciais como o linolico
e o palmitolico. O cido araquidnico, portanto, no essencial, obtido a partir do linolnico com o
uso do malonil-CoA .
? Formao de triacil gliceris (TAGs) e fosfolipdeos
O glicerol vai se combinar com novas molculas de cidos graxos para formar molculas de gordura.
No entanto, o substrato para a formao de novas molculas de gorduras (TAG)50 so respectivamente:
cidos graxos + glicerol fosfato. Isto significa que os cidos graxos no representam uma forma de
armazenamento. Quando muito, representam uma forma de armazenamento de acetil CoA j que esse
seu nico substrato. O glicerol obtido a partir da hidrlise de gorduras nas clulas adiposas, deve ser
fosforilado em uma reao catalisada por uma enzima conhecida como glicerolquinase (a glicero
quinase). O problema que essa enzima praticamente inexistente nas clulas adiposas, sendo
encontrada em alta atividade em outros tecidos, principalmente no heptico.
Assim, por gradiente de concentrao, vai para a circulao de onde vai para o fgado. L ele vai
transformar-se em glicerol-fosfato que, por sua vez pode seguir os seguintes caminhos metablicos:
47
127
fosfolipdeos de membrana, ser substrato para gliconeognese (se o glicerol-fosfato for transformado
em diidroxi-cetona-fosfato e da a gliceraldedo-3-fosfato ou ser transformado em cido pirvico),
substrato para formao de molculas de gordura no fgado, servir de substrato para a via do glicerol
fosfato (reoxidao do NADred formado na gliclise). O diabtico no compensado, por exemplo, tem
deficincia grave com o aproveitamento de glicose porque a insulina estimula a absoro de glicose na
clula. Sem mobilizao de glicose, a clula utiliza cidos graxos como fonte principal de energia.
A deficincia de carnitina pode gerar o fgado gordo porque o cido graxo no vai ser oxidado,
acumulando no citoplasma. Os cidos graxos transportados para o citoplasma para serem fosforilados
ao encontrarem cidos graxos em abundncia formaro muita gordura. A glicose se transforma em
glicose-6-fosfato que forma gliceraldedo-3-fosfato e diidroxicetona-fosfato que, na presena de
glicerol-fosfato desidrogenase e NAD reduzido, saturam a dupla ligao formando o glicerol-fosfato.
As hidroxilas 1 e 2 so esterificadas por, principalmente cido palmtico e cido esterico formando o
cido fosfatdico de onde obtemos tanto as gorduras como os fosfolipdeos. Quando esse cido
fosfatdico se une a uma base nitrogenada como a colina, forma uma fosfolipdeo muito importante, a
LECITINA. Quando o cido se liga a serina ou etanolamina, formando a CEFALINA. Esses so dois
dos principais fosfolipdeos de membrana. J os TAG, so formados na presena de uma fosfatase
obtendo um DAG que, com a entrada de outro cido graxo, esterificado na sua ltima hidroxila,
formando o TAG.
? Formao e utilizao de corpos cetnicos
O nico local onde isso ocorre nas mitocndrias das clulas hepticas. Dois deles so cidos fortes:
acetoacetato (4C) e beta-hidroxibutrato (4C) e o outro a propanona-3C (acetona). So formadas a
partir de um nico substrato: acetil-CoA. Quando h, momentneamente, uma excesso de acetil-CoA
em relao ao oxaloacetato. Como o fgado obrigado a manter a glicemia se utiliza mais de cido
graxo como principal substrato energtico o que gera um excedente grande de acetil-CoA, que forma
corpos cetnicos ao invs de fgado gordo. A membrana mitocondrial interna permevel a esses
compostos indo para a circulao. L o acetoacetato e o beta-hidroxibutirato iro para as clulas dos
tecidos extra-hepticos.
O jejum prolongado leva as clulas nervosas a utilizarem corpos cetnicos com substrato energtico
aps voltarem a se transformar em acetil-CoA nas mitocndrias dessas clulas. O primeiro corpo
cetnico o acetoacetato. A partir da juno de duas molculas de acetil-CoA com a retirada de uma
128
molcula de CoA, reao catalisada pela tiolase, forma-se o acetoacetol CoA. Esse ser hidratado pela
ao da desacilase, perdendo tambm a outra molcula de CoA. A acetona a descarboxilao do
acetoacetato. Essa descarboxilao pode ser espontnea e muito lenta ou catalisada pela acetoacetato
descarboxilase, vitamina B6dependente.
O beta-hidroxibutirato formado pela hidrogenao do grupamento cetona do carbono b com a
oxidao de um NAD reduzido, reao reversvel que catalisada pela beta-hidroxibutirato
desidrogenase. Cerca de 25% do acetoacetato so transformados em acetona e 75% em betahidroxibutirato, j que o ltimo rende mais energia a clula, pois a sua transformao em acetoacetato
rende um NAD reduzido.
Nas mitocndrias de clulas de tecidos extra-hepticos o beta-hidroxibutirato deve ser transformado
novamente me acetoacetato usamos uma molcula de NAD oxidado. O acetoacetato deve se
transformar em acetil-CoA pela ao da tioquinase actica pois esse precisa ser ativado. Essa enzima
no h no fgado e por isso os corpos cetnicos no so utilizados no fgado. Existe uma outra forma
de se obter acetoacetil-CoA a partir do acetoacetato, a sua combinao com o succinil CoA numa
reo de dupla troca. Esse doa CoA para o acetoacetato que se transforma em acetoacetol-CoA e o
succinil-CoA transforma-se em succinato pela ao da tioforase, que tambm no existe no fgado.
? Patologias
A utilizao excessiva de cidos graxos como substrato metablico gera um excedente brutal de acetilCoA o que tambm eleva a produo de corpos cetnicos, que vo para circulao. A acetona, por ser
voltil, gera o conhecido hlito de ma, pois a no ingesto prolongada de glicose gera o aumento
do consumo de gordura. O jejum prolongado causa ento a acidose (cetoacidose) por serem o betahidroxibutirato e cetoacetato cidos fortes. lem disso, as clulas de tecidos extra-hepticos, que no
necessitam desse excedente de corpos cetnicos, ficam saturadas liberando esse excedente pela urina,
s que esses cido vo ser eliminados na urina sob a forma de sal de sdio b hidroxi butirato de sdio e
aceto acetato de sdio. A sada excessiva de sais pela urina inibe os antidiurticos para diluir os sais, o
que causa a desidratao.
glicerol fosfato a glicose por que a glicose vai para a gliclise se transforma em gliceraldedo-3fosfato, diidroxicetona-fosfato que transformada em glicerol-fosfato. Pois isso mais de 95% do
produto da ao da aldolase a diidroxicetona-fosfato.
Ativao Dos cidos Graxos
A ativao dos cidos graxos consiste na entrada destes na mitocndria, na forma de acil-CoA. O
processo depende:
1. Da ligao do cido graxo com a Coenzima A, formando o acil-CoA no citosol. A reao
catalisada pela enzima Acil-CoA Sintetase, localizada na membrana mitocondrial externa:
3. Do lado da matriz mitocondrial, a carnitina doa novamente o radical acila para a CoA,
regenerando o acil-CoA no interior da mitocndria. A reao catalisada pela Carnitina-AcilTransferase II, localizada na face interna da MMI, e exatamente o inverso da descrita acima.
Consiste na quebra por oxidao do cido graxo sempre em seu carbono beta, convertendo-o na nova
carbonila de um cido graxo agora dois carbonos mais curto. O processo repetitivo, e libera a cada
quebra:
130
1 NADH+H+
1 FADH2
1 Acetil CoA
So 4 as enzimas envolvidas em cada etapa de oxidao da via. Exemplo:
CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-S-CoA+CoA-SH
?
CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-S-CoA + Acetil-CoA
?
CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-S-CoA + Acetil-CoA
?
CH3-CH2-CH2-CO-S-CoA + Acetil-CoA
?
Acetil-CoA + Acetil-CoA
Regulao da beta-Oxidao:
131
132
Outro motivo de estudarmos em separado a parte de anabolismo ser a sua constante atualizao
devido aos progressos nesta rea. Mas sero os aminocidos to importantes quanto os cidos graxos e
glicose na obteno de energia? Podemos dizer que no, j que cerca de 90% da energia requerida para
funcionamento do nosso organismo vem da oxidao de cidos graxos e glicose e s 10% ou 15% vem
da oxidao de aminocidos. evidente que isso tem excesses. Uma dieta rica em protenas ir
provocar um execesso de aminocidos no tecido, os aminocidos tm um caminho prioritrio que
formar protenas intracelulares no dependendo de altas e baixas de ATP para isso, nesses casos de
excesso haver um maior uso de aminocidos como fonte de energia. Em que condies ns utilizamos
aminocidos como fonte enegtica? S h trs condies:
1o) quando os aminocidos aparecem no meio intracelular provenientes da taxa de renovao
de nossas protenas intracelulares (turn over) (exemplo: paratormnio: vida-mdia 18 minutos e
tirocalcitonina: vida mdia 11 minutos). As protenas so hidrolisadas pelas proteases lisossomiais.
2o) quando h um excedente de aminocidos em relao a necessidade de formao de nossas
protenas intracelulares. Quando, por exemplo, nas clulas betas do pncreas quando a aminocidos
suficientes para formao de insulina e ainda sobra, esse excesso ir ser usado na formao de energia.
3o) condio em estado anormal - desnutrio, jejum prolongado, diabetes no controlado
(compensado), ou seja, utiliza pouca glicose e cido graxo e passa a utilizar aminocidos. Mesmo um
jejum de 12 horas, j que h um esgotamento de glicognio nesse meio tempo com apenas as
atividades cotidianas sem contar atividades fisicas. As gorduras podem durar at dois meses, mesmo
assim h utilizao de aminocidos como complementao da obteno de energia.
133
O que oxidar aminocidos? transform-los em CO2 e H2O com a retirada de seu grupamento amina
que sair na forma de amonia (NH3), substncia txica ao nosso organismo e que no necessariamente
deve ser eliminada, s em caso de excesso, caso contrrio pode ser usada para construo de
substncias fisiologicamentes ativas. Caso a amnia no fosse aproveitada em nosso organismo todos
os aminocidos seriam essenciais, j que no poderamos formas grupamentos aminocidos nos
esqueletos de carbono. Substncias obtidas pela amnia: nucleotdeos (base nitrogenada dessa
substncia), aminocidos no-essenciais e outras aminas importantes. A amnia em grande quantidade
excretada na forma de uria.
Os aminocidos ao perderem o grupamento amina formam cetocidos que alimentam o ciclo de Krebs.
So obtidos vrios intermedirios do ciclo de Krebs pela desaminao dos aminocidos, que iro
movimentar tambm a cadeia respiratria para formar ATP, ou tambm iro realizar a gliconeognese.
H
|
CH3 - C - COOH
|
H -N -H
Na presena de sua L-aminoxidase correspondente e tendo o FMN como coenzima que ser reduzida
formando FMN reduzido. Haver perda de dois hidrognios formando um iminocido correspondente
a alanina. Esse fenmeno ir ocorrer principalmente, no unicamente, no citoplasma de clulas
hepticas e renais. O iminocido, uma substncia instvel, com a adio de gua sem necessidade de
qualquer enzima ir liberar amnia entrando no lugar do grupamento amina um grupamento cetona.
Ser formado ento o cetocido correspondente a alanina: o cido pirvico cujo destino j sabido. A
134
FMN reduzido no vai para mitocndria ser reoxidada na cadeia respiratria, ela se combinar com
xignio molecular e formao de perxido de hidrognio (H2O2 - gua oxigenada) e para que esses
perxidos formados no sejam prejudiciais as clulas eles sero transformados em gua e oxignio
pela ao das catalases (tecido renal e heptico so ricos em catalases). Assim a FMN reoxidada.
SERINA
CISTEINA
OH
SH
CH2 - C - COOH
|
NH2
H
|
CH2 - C - COOH
|
NH2
135
A serina ento pela sua L-amino-acil desidratase perde uma molcula de gua e a cistena perde uma
molcula de H2S pela sua L-amino-acil desidratase. A partir da as vias de desaminao se igualam
para os dois aminocidos. O iminocido formado pela perda do grupamento hidroxila, no caso da
serina e o grupamento sulfidrila, no caso da cistena. Assim esse iminocido, recebe uma molcula de
gua e perde o grupamento amina, formando cetocido: no caso desses dois aminocidos o cetocido
formado o cido piruvico.
? Transaminao
Antes de comear a transaminao, devemos alertar que as L-amino oxidases so enzimas que se
apresentam em baixissimas concentraes mesmo nos tecidos heptico e renais. Qual ento a
principal forma de retirada do grupamento amina para formao de cetocido? a transaminao que
a transferncia do radical amina de um aminocido para um cetocido que em mais de 90% das
situaes o alfa ceto glutarato, que recebe o grupamento amina transformando-se em glutamato
(aminocido) e o aminocido quando perde seu grupamento amina se transforma no seu cetocido
correspondente. O que acontecer ento com o ciclo de Krebs que ficaria na falta do alfa ceto glutarato
que seria usado na transaminao de quase todo aminocido? Haveria uma paralizao do ciclo por
falta de alfa ceto glutarato logo deve haver uma sada.
Importncia mdica da Transaminao: essas duas transaminases (TGO e TGP) so muito usadas no
diagnstico de doenas. A TGO uma enzima que existe em maior quantidade (no apenas) na
mitocndria, ao contrrio da TGP que existe em maior quantidade (no apenas) no citoplasma. No
infarto algumas enzimas so liberadas na circulao em funo da leso tecidual, a segunda enzima em
maior quantidade (a primeira sem importncia no momento a creatina fosfo quinase) a TGO j que
o tecido cardco rico em mitocndrias. A leso poder ser medida pela quantidade de enzimas na
circulao, quanto maior a quantidade maior a leso assim podemos diagnosticar enfartamento
assimtomticos atravs da medida da leso tecidual. J em leses em tecido heptico como em
hepatite, cirrose e ictiercia h o controle da cicatrizao heptica pelo nvel de transaminases sendo
que a primeira que sai a TGP.
Outro exemplo o caso de operrios que se intoxicam em indstrias quimcas principalmente as que
usam solventes orgnicos como tetra cloreto de carbono como clorofrmio. Tais solventes orgnicos
provocam a degenerao do tecido heptico, assim poderamos acompanhar o nvel de leso pela
dosagem de transaminase.
Regenerao do alfa ceto glutarato: para evitar que ocorra paralisao do ciclo de Krebs por falta de
alfa ceto glutarato, preciso regenerar o alfa ceto glutarato. A oxidao dos aminocidos sempre
ocorre com liberao de amnia, no entanto na transaminao no ocorreu at agora essa liberao.
Essa regenerao se d exclusivamente nas mitocndrias devido presena de elevadas concentraes
da enzima L glutamato desidrogenase (LGDH) que uma protena complexa com seis sub-unidades
proteicas com peso molecular de aproximadamente 330.000 e controlada alostericamente. Essa
enzima ir retirar o grupamento amina do glutamato, ou seja, que enquanto a enzima que retira o
137
grupamento amina da alanina, do aspartato, da cisteina e da serina est em baixa quantidade, essa
enzima est em alta quantidade nas mitocndrias das clulas.
O glutamato obtido no citoplasma (em maior quantidade pela TGP e em menor pela TGO) passa pela
membrana mitocondrial interna por uma protena transportadora de glutamato. No interior da
mitocndria haver formao de alfaceto glutarato e amnia na presena de LGDH que tem como
coenzima o NAD que se transforma em NAD reduzido que ir ser reoxidado na cadeia respiratria
com formao de cadeia respiratria. O controle alostrico dessa enzima realizado tendo como
moduladores positivos (alta de ADP e GDP) e como moduladores negativos (alta de ATP e GTP). A
reao reversa da LGDH usar como coenzima o NADP reduzido que se transformar em NADP
oxidado.
? Transdesaminao
Balano nitrogenado a medida da quantidade de nitrognio fixado aos tecidos (na sntese de
protenas) em relao ao nitrognio excretado (amnia na forma de uria). medida ao longo de 24
horas tirando-se uma mdia dos balanos nitrogenados positivos e negativos de um indivduo ao longo
dessas 24 horas. Essa medida em pessoas normais deve dar como resultado um equilbrio, ou seja,
excreo igual fixao do nitrognio. O balano positivo quando h maior fixao do que
excreo, como por exemplo, no caso de fase de crescimento, gravidez, ps-operatrio e ps-infeco
aguda so casos em que deve haver um balano nitrogenado positivo. O negativo ocorre em situaes
de fome, desnutrio, diabtico no-controlado e jejum prolongado quando a excreo supera a fixao
de nitrognio. Como as reaes do catabolismo de aminocidos so todas reversveis, no balano
nitrogenado positivo as reaes ocorreram no sentido de sntese de protenas, formao de
aminocidos no-essenciais e formao de amnia, ou seja, balano nitrogenado positivo sinnimo
de alta de ATP e GTP.
J no caso de balano nitrogenado negativo, as reaes ocorrem no sentido de expulso de amnia,
sendo sinnimo de altas de ADP e GDP.
138
Captulo 10
1) O de RNA bastante seletivo (apenas uma das fitas de DNA ser transcrita na forma de RNA), ao
passo que a replicao de DNA tem que ser fiel e dar origem a uma cpia idntica ao DNA
pariental, a sntese de RNA altamente seletiva, ou seja, a famlia de RNAm de uma clula
diferente da de outra clula, que caracteriza o teor de protena daquela determinada clula.
enzima da sntese de RNA capaz de comear a replicao sem precisar de um pedao j iniciado,
uma ncora.
A principal enzima que atua na transcrio gnica a RNA polimerase DNA dependente. Nos
procariontes, existe apenas uma enquanto que nos eucariontes existem trs RNA polimerases. A
equao geral de biossntese de RNA a adio de nucleotideos trifosfato (NTP) mais nucletideo
mono-fosfato (NMP) crescente na presena da RNA pol, vai dar origem a uma cadeia de RNA
alongada mais pirofosfato que dever ser posteriormente clivado, garantindo a irreversibilidade e a
proteo do processo. Caractersticas gerais dessa enzima: multi-subunitria, ou seja, tem muitas subunidades e seu peso molecular gira em torno de 500 quilodalton (alto peso). As subunidades so: 2? ,?
(responsvel pela ligao fosfodiester), ? (reconhece o molde de DNA) e ? (essas subunidades so a
parte cataltica) que fazem parte do cerne da enzima. Mas para se tornar uma holoenzima biogicamente
ativa, tem a necessidade de se unir a outras subunidades reguladoras chamadas ? (sigma) e ?(rh).
139
Cada subunidade faz um papel especfico dentro do processo de sntese de RNA. As protenas
reguladoras no fazem parte do cerne da enzima. Durante a polimerizao do RNA, as subunidades
reguladoras devem reconhecer o incio da sntese.
A RNA polimerase, diferente da DNA pol, capaz de se ligar ao molde de DNA em ? - helice e
escane-lo at achar um stio de iniciao e a subunidade ? que ajuda a fazer essa associao. Protena
de hit shock ou choque trmico refere-se ao fato de, quando uma clula submetida a uma alta
temperatura, ela responde a essa variao sintetizando as protena de choque trmico, so altamente
conservadas do ponto de vista evolutivo. Se comparar um animal inferior com um superior, so as
mesmas protenas sintetizadas quando submetidas alta temperatura. Elas so ditas de proteo da
clula. Ns, de certa forma interferimos na produo dessas protenas na medida em que quando
desenvolvemos uma febre, antes at de chegar um limite para comear a entrar com um antitrmico, de
um modo geral, j se d logo o antitrmico. Acontece que o nosso organismo tem esse mecanismo de
proteo prprio que a protena de choque trmico na medida em que ele invadido por um agressor
(microrganismo) e para se proteger, eleva a temperatura do corpo, na medida que faz isso, muda o
padro de sntese de protena, sintetizando as de hit shock: protena que defendem a clula de uma
possvel desnaturao proteica posterior. A famlia mais importante at agora pesquisada a HSP 70.
O choque trmico tem sido muito utilizado em agricultura e medicina. A diferena das outras protenas
para as de choque trmico est na subunidade ? , nas protenas normais, protena ? 70 (protena cujo
peso molecular 70 quilodalton) e a de choque trmico tem 32 de peso molecular. Ento, quando
submetida a altas temperaturas, a subunidade ? 32 compete com a 70 e se associa a RNA pol e um
grupo de protenas especiais ser selecionado porque um essa subunidade que seleciona o stio de
iniciao. Ento, se houve a troca dessa subunidade sigma significa dizer que a sntese de RNA
comear em local diferente do usual. a subunidade ? que determina o lugar que iniciar a
transcrio, seleciona o stio de sntese de RNA.
O processo de sntese de RNA pode ser dividido em iniciao, alongamento e terminao. A iniciao
do processo pode ser definida como o reconhecimento e identificao de uma regio chamada
promotora. Quem ela? a regio de ligao da RNA polimerase no DNA. Tem como caracterstica
regies de consenso, seqncias comuns a essas regies. Quando vai determinar o stio de inicio da
sntese de RNA, o primeiro nucleotideo que vai determinar um aminocido chamado de +1 dentro do
mapeamento do DNA e a medida em que voc afasta desse stio, h nmeros negativos para a esquerda
-1, -10, -35, (promotora) ,+1, +2 (estrutural), ou seja , dentro do DNA podemos mape-lo a partir do
incio da mensagem que dar origem a um aminocido e finalmente a uma protena. Costuma-se
140
representar a parte que vai codificar uma protena como positiva e a negativa, a regio reguladora ou
moduladora que vai ligar a RNA pol, chamada tambm de promotora. Essa regio adjacente a que dar
origem a uma protena compreende a regio promotora (tem sempre uma seqncia pppG ou pppA) a
reguladora que a negativa. O que h de consenso nessa regio promotora nos vrios promotores
analisados em funo da sntese de RNA? Existe uma regio consenso na posio -10 e -35 do DNA
que caracteriza a regio promotora , que apresenta seqncias comuns chamadas de catablicas.
141
Em potencial, cada vez que o processo de sntese ocorrer, haver todos esses produtos. Mas existe a
regulao da expresso gnica que faz com que seja processado mais RNAm do RNAt por exemplo,
havendo ento um sincronismo dependendo do estado metablico da clula. A clula eucaritica sofre
maior regulao, uma vez que foi compartimentalizada, ou seja, guarda sua informao gnica dentro
do ncleo. Formas de regulao: transporte do RNA do ncleo para o citoplasma e os vrios
processamentos que os RNAs sofrem. Por exemplo, o RNA, em eucarionte, sintetizado com um
nmero muito maior de base do que quando est ativo, sofre perda de pedaos, na medida em que ele
quer modificar aquele gen, ele transmuta esses pedaos que tem. O tempo de transporte, nas clulas
eucariticas j que compartimentalizada, enquanto que nos procariontes, quando o RNA acaba de ser
sintetizado, j entra na maquinaria de sntese de protena. A meia-vida do RNA tambm um processo
de regulao j que transportado para o citoplasma e existe um balano da sntese de RNAm em
termos de necessidade metablica.
? Processamento de RNAs (eucariontes)
Retirada de introns, adio de cap (7-metil guanosina) no terminal 5, adio de uma cauda de poli-A
no terminal 3. Para que serve o cap que o RNA recebeu? Acredita-se que essa estrutura tenha como
funo o reconhecimento de ribossoma na traduo, auxiliando o RNAm no stio de sntese de protena
no processo de traduo. Acredita-se que a cauda de poli-A tenha como funo a estabilizao do
RNA como se ele proporcionasse ao RNA uma menor sucetibilidade a degradao enzimtica. Outro
tipo de processamento o splicing que o corte ou perda de regies introns. Ao ser sintetizado no
ncleo a molcula de RNAm chamada de RNAhn (precursor do RNAm). No ncleo, a forma do
RNAm irregular devido aos introns, que intercalam os exons que so regies que codificam uma
seqncia de aminocido.
52
142
Inibidores da Transcrio:
Existem antibiticos que atuam na transcrio. A rifampicina capaz de se ligar subunidade ? da
RNA pol, bloqueando (mais especficamente o estabelecimento da primeira ligao fosfodiester) a
transcrio em procariontes. Ento, esses antibiticos que tem especificidade por enzimas so muito
teis por que possvel fazer o tratamento com esse antibitico na medida em que no vai atingir o
processo de transcrio nos eucariontes. Quando se usa a ? -amanitina, ele se liga a RNA polimerase
253 (mRNA) em eucarionte. A actinomicina D (AMD) bloqueia a traduo, mas que de forma conjunta
tambm replicao, muito utilizada no tratamento de cncer. um acoplador que se insere entre as
bases C e G do DNA, antibitico intercalante. Atualmente, alm da resistncia das bactrias, existe a
tolerncia, dose necessria para matar uma bactria e inibir o crescimento dessa. A diferena de
resistncia para tolerncia tem a ver com a dose para matar ou inibir a bactria. Quando se tem uma
cepa resistente, ela tem o cnb= cni. No caso de tolerncia, ela adquiriu uma diferena numrica em
termos de concentrao do cni para o cmb. Ela precisa de uma dose diferente para matar ou inibir o
53
Pol II
143
crescimento dela. Quem confere essa tolerncia a elas? J se sabe que os plasmdeos so elementos
importantes para trocar gens de resistncia entre as bactrias. Os elementos genticos mveis, blocos
de DNA, trocados de uma para outra, permitindo a uma molcula antes sensvel a um antibitico agora
se torne resistente. O plamideo, que um DNA extracromossomial, DNA dupla-hlice que capaz de
se replicar, independente do DNA da bactria. Ento, as bactrias que so sensveis a determinados
antibiticos, se desenvolvem essa resistncia ou tolerncia. Uma vez sintetizados esses RNA, vo se
agregar para formar as unidades de sntese de protena. Traduo o processo atravs do qual a
mensagem gentica transformada na linguagem dos 20 aminocidos. Podemos dividi-la em etapas:
1 Ativao dos aminocidos
2 Iniciao da sntese de protena
3 Alongamento da cadeia polipeptdica
4 Terminao da cadeia polipeptdica
5 Processamento da protena
Ativar os aminocidos, significa lig-los aos tRNAs correspondentes. Essa etapa ocorre atravs da
tRNA acilsintetase. O conjunto de tRNAs que existem dentro das clulas + aminocido+ ATP atravs
da aminoacil tRNA sintetase, dando aminoacil tRNA + AMP+ PPi. Desmembrando a reao:
aminocido + ATP, dando aminoacil adenilato + PPi. Primeiro, ento, o aminocido se liga ao AMP e
numa segunda etapa, ocorre a transferncia, aminocido-AMP +t RNA que vai dar aminocido-tRNA
+ AMP, de tal forma que fica aminoacil t-RNA. Ento, a ligao dos aminocidos ao tRNA para
formar o aminocido ativado, por definio aminocido ligado ao tRNA, ocorre em duas etapas.
Primeiro, o aminocido dentro do stio cataltico da aminoacil tRNA sintetase se liga ao AMP, clivado
a partir do ATP, dando origem ao aminoacil adenilato e sai pirofosfato. Numa segunda etapa, o tRNA
compete com o AMP e o desloca e liga-se ao aminocido, formando aminoacil tRNA + AMP. Dando
origem a reao global e uma vez feito isso, a enzima fica livre para atuar de novo.
A seguir teremos o processamento das protenas. A protena ao sair do ribossomo sai com sua estrutura
primria que ir adquirir suas estruturas secundrias, tercirias e quartenrias por processamento.
Atravs do radical R de cada aminocido poderemos estabelecer ligaes do tipo SS, pontes de
144
hidrognio e fracas formando as outras estruturas. Os aminocidos hidrofbicos ficaro voltados para o
interior da estrutura, expondo na sua estrutura mais externa os aminocidos ditos hidroflicos. Em
soluo formaremos a camada de solvatao, quando alteramos essa camada precipitamos a protena
por expormos os aminocidos hidrofbicos do seu interior. Temos como exemplo de precipitadores de
protenas, o tricloro actico (TCA), quando se trata a protena com cido, suas estruturas secundrias,
tercirias e quartenrias so desfeitas, sofrendo, portanto, desnaturao e precipitao. Podemos
tambm adicionar sal para haver alterao da camada de solvatao e consequente precipitao.
Contrariando o que acreditvamos antes podemos renaturar uma protena desnaturada com cido, s
que um processo de extrema dificuldade.
A protena sofre ento processamento. Como exemplos de processamento pode-se citar a aquisio de
sua estrutura formando uma estrutura final secundria, terciria ou quaternria; alm disso, se ela for
uma lipoprotena ela adquirir um lipdio, se for uma glicoprotena receber um carboidrato, se a
protena for uma enzima ela dever se dobrar para formar seu stio cataltico. Dependendo do papel
biolgico que a protena v assumir dentro da clula, ela poder perder seu aminocido iniciador (Met)
e caso seja uma protena de exportao ganha um pepontodeo sinalizador e se direciona para o
reticlo endoplasmtico rugoso e da para o Golgi e de l para o exterior.
O teor de uma protena numa determinada clula vai depender do que chamamos de regulao gnica.
As clulas so movidas por economia celular, ou seja, para que sintetizar uma determinada protena se
ela no ser usada pela clula. Ento dependendo da necessidade uma determinada expresso dever
ser traduzida ou no. Quem ir regular o teor da protena na clula ser o processo de transcrio do
RNA e o processamento propriamente dito. No que diz respeito a procariontes,h maior controle da
expresso gnica na traduo, j em eucariontes h tanto na transcrio como na traduo.
gnica, ou seja, porque uma determinada protena sintetizada em maior quantidade em dado
momento do metabolismo e em menor em outro momento. O que leva na estrutura do DNA a essa
regulao? Os estudos foram feitos tomando como base o Operon da lactose, que chamamos de
Operon Lac, assim foi feito o modelo da expresso gnica em procariontes. O modelo do Operon da
Lactose tenta explicar a induo e represso gnica.
Para fazer esses estudos eles observaram as reaes de bactrias na ausncia ou presena de glicose.
Assim eles propuseram que o DNA composto de regies reguladoras e regies que expressam o gen
a ser codificado, de tal forma que temos o DNA formado de regies que determinam a expresso e
regulao do cdigo gentico. As regies reguladoras estaro sempre adjacentes regio do gen
estrutural a quem ela deve re___M
inibidora ou repressora, a regio p chamada promotora que tem como funo ser o stio de ligao da
RNA polimerase e a regio o ou operadora. Adjacente a esta regio temos a regio do gen estrutural
que ir codificar a protena que no caso do Operon Lac se chamaro z, y e a. Cada gene estrutural
temos regies reguladoras. Assim foi observado que medida que as bactrias (no caso E. coli)
cresciam na presena de glicose o Operon Lac se encontrava reprimido. Na medida em que cresciam
na ausncia de glicose o Operon Lac era induzido. Por que isso ocorreu? Se ela est crescendo na
presena de glicose, principal ose utilizada como combustvel para produo de energia, ela a utilizar.
Mas, se houver falta de glicose no meio uma nova fonte de energia deve ser utlizada que ser a lactose.
Assim a lactose ser clivada por uma enzima chamada beta galactosidase formando glicose e
galactose. Acontece que o Operon Lac do DNA correspondente para sntese de beta galactosidase se
expressa em quantidades pequenas (cinco cpias), ela um exemplo clssico de enzima induzvel, mas
quando transferimos a clula para uma situao de falta de glicose a clula passa a produzir 5000
cpias da beta galactosidase. Isso se explica pelo fato do operon da beta galactosidase estar reprimido
na presena de glicose. Na regio chamada inibidora ou i haver sntese de um RNA pelo processo de
transcrio que ser traduzido dando origem a uma protena que se chama protena R ou i de inibidora
que se posicionar na regio o ou operadora do DNA. Assim a RNA polimerase que est localizada na
regio p no consegue ultrapassar esta protena R para fazer a leitura dos gens estruturais e formar a
enzima. Esse um exemplo de represso gnica.
O processo de induo gnica ocorrer na falta de glicose no caso do Operon Lac. Assim ser
transcrito um gen pela regio o ou operadora que dar origem a uma protena chamada IPONTOG
(isoproiltiobetagalactosidase) que se ligar protena R ou inibidora impedindo-a de se ligar a regio
146
operadora. Assim uma protena chamada CAP (protena ativadora do catablito) ativada pelo AMPc,
que ir estar em alta com a falta de glicose, ir se ligar a regio p ou promotora onde o RNA
polimerase est, estimulando a participar da transcrio dos gens estruturais. A regio z dar origem a
beta galactosidase, a regio y dar origem a beta galactosidase permease e finalmente a regio a dar
origem protena a transacetilase, todas essas enzimas necessrias a sntese de glicose via lactose.
Hoje, sabe-se que a parede do RER tem certas protenas que o REL no possui, as quais formam
canais, sulcos, (aberturas, passagens) para a insero no lmen do RER das protenas que esto sendo
sintetizadas, chamadas de porinas ou riboforinas. Tm-se as riboforinas I e II, ambas servindo de ponto
de apoio, acoplamento, para que o ribossoma chegue ali, se ligue, atravs da subunidade maior, a elas e
possa reiniciar a sntese traducional. Como sabemos, o ribossoma l no RNAm o peptdeo sinal e
dirige-se ao RER, que deve possuir mecanismos de aprisionar, acoplar, este ribossoma nele; dentre
147
estes mecanismos esto as riboforinas. Podemos ver isto pelo fato de que se o ribossoma caminha ao
REL, ele no vai conseguir fazer tal aderncia. Agora, preciso algum mais para fazer a ligao
complementar, para que o ribossoma se acople para injetar a protena. Este apoio e reconhecimento so
feitos por receptores ribossmicos. H ainda outros elementos de orientao parede do retculo.
O ribossomo inicia a traduo invariavelmente no citoplasma, mesmo que estas protenas sejam para
exportao. As molculas orientadoras mais importantes so as SRP (peptdeo reconhecedor de sinal),
as quais reconhecem a protena ainda no incio da sua sntese (assim que surge o pepontodeo
sinalizador). Atravs de uma poro, SRP se liga ao sinal e, por outra poro, far a aderncia com
seus recepontoores, localizados prximos as riboforinas. Este SRP, alm de orientar, tambm
interrompe a sntese protica: ela comea no citoplasma, SRP se liga, e h interrupo na traduo a
fim de que o ribossoma se desloque do citossol para se fixar parede do RER. Esse SRP o mais
importante elemento na translocao do ribossomo, funcionando como veiculador, orientador em
direo ao ribossomo. Ento quando chega ao RER, os recepontoores de SRP ligam-se a ele (SRP) e
os recepontoores ribossmicos subunidade maior. Este SRP, por sua vez, j est ligado extremidade
da cadeia nascente de peptdeo e a protena nascente vai sendo injetada no lmen atravs dos
canais/poros criados por protenas complexas denominadas riboforinas.
Como concluso, vemos que no basta a presena da seqncia sinalizadora no RNAm (que, em
eucariotos, varia muito de tamanho); tambm preciso a participao de outras molculas, como as
riboforinas, o SRP, os receptores. Quando o ribossoma estiver totalmente preso, haver deslocamento
do SRP, que sair. Esta sada se faz necessria tambm porque o SRP interrompe a sntese protica
quando presente. Com o ribossoma livre, ento, pode-se prosseguir com a sntese ribossomal. Como se
pode entender, medida que a traduo ocorre, a protena vai sendo injetada no interior do RE. A
cabea, o chamado peptdeo de sinal, vai, atravs da ao de enzimas presas face luminal da
membrana do retculo (a membrana reticular tem duas faces: uma voltada ao meio externo, chamada
face C, citosslica, e outra voltada ao meio interno, a face L, luminal - ambiente interno do retculo),
chamadas pepontoidases de sinalizao, ser retirado, cortado: o peptdeo foi necessrio apenas para
enderear a protena. A clula faz dois tipos de protenas: com e sem o pepontodeo de sinal. Uma vez
concluda sua funo, o peptdeo retirado. A protena, ento, poder sair do RE, ir ao Golgi e tomar
caminhos diferenciados, como, por exemplo, ir ao lisossoma (geralmente hidrolases, especializadas em
quebras), ser inseridas em vesculas que posteriormente sero exocitadas e as protenas liberadas.
148
H ainda casos em que a protena pode seguir inserida na membrana da vescula, no que, durante a
exocitose, as membranas vesicular e citoplasmtica se fundem, e a protena no expulsa, ficando
inserida na membrana. Esta protena uma transmembrana, integral, bi/tripartirte. Estas protenas, ao
contrrio das demais, possue uma seqncia de sinal intermediria, localizada no meio da molcula,
que mantm esta protena inserida na membrana, podendo, por exemplo, vir a fazer parte do glicoclix.
diferente, por exemplo, da insulina, que uma molcula grande, que precisa ser processada. Ela
possui, alm da regio pr (a regio sinalizadora da extremidade a chamda pr e a intermediria,
pro), uma regio intermediria chamada pro. O primeiro, um sinal orientador e o segundo ativador
e no de ligao como nas protenas transmembrana. Uma molcula poder conter at mltiplos sinais.
O ribossoma sintetiza uma protena, a qual ser processada no interior do retculo e depois
encaminhada ao complexo de Golgi. Esta sntese inicia-se no citossol, identifica-se a regio de sinal, e
o SRP se liga ao peptdeo sinal, interrompendo o processo e orientando a translocao em direo
parede do retculo, onde temos os recepontoores (ribossmicos e SRP) e as riboforinas I e II. Com isto,
o SRP j ter cumprido seu papel, e poder ser descartado, saindo. A sntese, ento, reinicia-se. Mais a
frente, o sinal vai ser clivado por enzimas da face L do RE.
traduo, o RE tambm tem outras funes. O RE tem certa diferenciao quando vistos ao ME: o
rugoso laminar e sacular (sacos achatados) e o liso canalicular ou tubular. O RER pode ter certa
fragmentao na sua constituio. O RER caracteriza-se principalmente pela traduo, enquanto que o
liso pela glicosilao. A maior parte das protenas sintetizadas para proveito prprio da clula, feitas
por ribossomos livres, no tendo desenvolvido ainda grande capacidade de exportao, exceo, por
exemplo, do movimento dos folhetos embrionrios durante o desenvolvimento54, o qual orientado
por protenas de exportao.
Normalmente o Golgi polarizado tanto na sua estrutura quanto na sua localizao, enquanto que a
tendncia do retculo espalhar-se (exceto nos casos dos plasmcitos e clulas pancreticas). As
membranas dos dois retculos podem ser estudadas pela fragmentao do retculo em vesculas
menores, chamadas microssomas. Se houver ribossomas aderidos, chamado rugoso (onde se estuda
boa parte da sntese protica). Os microssomos servem, por exemplo, para a anlise bioqumica da
membrana. De acordo com a origem, tero constituio, principalmente protica, diferente.
54
149
A protena ser encaminhada ao Golgi, para o que fundamental a dobra e empacotamento da mesma,
a fim de que seja aceita pelo Golgi. O complexo de Golgi tem vrias funes dentro da clula. Ele
formado de unidades chamadas dictiossomos (Golgi = soma, dictiossomas). Cada uma dessas unidades
formada de vesculas achatadas e esfricas, de formao sacular. Os dictiossomas vo se localizar
numa regio determinada da clula, prpria ao complexo de Golgi, chamada de zona de efuso
150
citoplasmtica. Esta rea est normalmente prxima ao retculo e em associao com ele atravs do
trnsito vesicular. O Golgi extremamente polarizado: cis ? trans, constituindo um sentido direcional
ao trfego das protenas. Isto faz com que a cis fique bem prxima regio proximal do ncleo,
carioteca. J a regio trans, fica voltada aos pontos de liberao das vesculas.
Funes do Golgi:
?? secreo celular, na direo cis ? trans
?? glicosilao de protenas e lipdios, fruto da ao de enzimas de glicosilao
?? hidrlise de inibidores moleculares, principalmente nas hidrolases, que se locarizaro
posteriormente nos lisossomas.
151
Captulo 11
Recolhe-se o tecido a ser analisado. Por um tratamento especial retiram-se as protenas por uso de
proteases, permitindo o acesso ao DNA. Pe-se, ento, o DNA extrado junto da sonda. Aquece-se
para permitir a clivagem das pontes de hidrognio da fita de DNA. Diminuindo a temperatura,
permite-se a renaturao e, possivelmente, a hibridizao: nesse caso, houve complementariedade
entre os DNAs na anlise feita (j que pde observar-se as molculas devido marcao radioativa
que sofreram), e conclui-se que h a infeco viral pesquisada. Caso no haja infeco, na anlise no
obteremos a complementariedade entre as fitas. O resultado impressionado num filme para
visualizao e antes deve ser feita uma lavagem para retirada de substncias inespecficas.
55
Reao em Cadeia da Polimerase (incio em 1985; Polymerase Chain Reaction): amplificao de um segmento de DNA, utilizando-se
uma polimerase termoestvel.
152
Na tcnica de PCR tem-se a imitao da DNA polimerase em vitro. Lana-se mo do DNA purificado
de uma enzima para a polimerizao. Termociclador: uso de temperaturas diferentes nos vrios
estgios do processo (para desnaturar, inserir primer - j que para replicar o DNA precisamos de uma
seqncia especfica de primer56 - etc...). Inicialmente, ento, insere-se o DNA purificado e aumenta-se
a temperatura para causar desnaturao57. Posteriormente adiciona-se o primer, cuja seqncia
especfica, anelando-o e pe-se a taq-polimerase, que uma enzima de polimerizao resistente s
altas temperaturas (nas primeiras experincias utilizaram DNA polimerase, mas era preciso adicionar
uma nova enzima a cada ciclo, devido desnaturao).
A amplificao tambm pode ser feita por sistemas biolgicos, inserindo o DNA a ser amplificado em
bactrias, leveduras e bacterifagos, entre outros. Nosso exemplo compreender o uso da E.coli, visto
que sistemas bacterianos so mais baratos, de manuseio mais fcil e com alta velocidade no processo.
Neste precisamos de um vetor, um veculo transportador, do DNA para o interior da clula, enquanto
que no PCR bastava a insero dos materiais (enzima e DNA purificado), regulando diferentes
temperaturas durante o processo. O primeiro passo purificar o DNA. O segundo, ligar esse DNA ao
vetor, que podem ser plasmdeos, bacterifagos ou cosmdeos, de acordo com o objetivo. Os mais
conhecidos so os plasmdeos, que so DNA extracromossmicos, circulares, de dupla fita e com
duplicao autnoma. Podem ser comprados prontos, atendendo especificidade da demanda. Este
plasmdeo tem vrios stios em que atuam enzimas de restrio, que so tesouras moleculares (picotam
o DNA) responsveis tambm pelo corte do pedao do DNA a ser amplificado (visto que o DNA
muito grande e no pode ser todo transportado para dentro da bactria de uma s vez). O DNA unido
ao plasmdeo, primeiro se tratando com as enzimas de restrio. O plasmdeo comprado pode conter
stios de resistncia se pedido (inclusive, muito da resistncia bacteriana a antibiticos provm de
plasmdeos, que de fcil troca entre as bactrias), como, por exemplo, a ampicilina. Ento, une-se o
plasmdeo com o DNA, formando o DNA recombinante (recombinando o DNA de origens distintas).
Para unir necessrio cort-los com a enzima de restrio e lig-los atravs da DNA ligase. A prxima
etapa fazer com que o veculo entre na clula hospedeira (bactria). O hospedeiro ideal aquele
capaz de receber o vetor e amplific-lo: a bactria deve transcrever DNA ? RNA e, depois, RNA ?
protena. Vamos supor que o DNA introduzido seja para a insulina. Quando o vetor inserido na
bactria temos o seguinte quadro: ela tem o DNA normal e o DNA recombinante (referente ao
plasmdeo).
56
57
153
Esta a chamada etapa de transformao. A bactria rapidamente transcreve este DNA recombinante.
Produzindo insulina, de modo rpido, fcil e barato, principalmente se compararmos ao mtodo antigo
de isolamento do extrato do pncreas e subsequente obteno de insulina. No gel de eletroforese,
verifica-se a presena da insulina. O problema que, ao colocar o vetor junto s clulas hospedeiras,
nem todas vo incorpor-lo, receb-lo. Para o xito (comercial, por exemplo) do processo, deve-se ter
apenas bactrias possuidoras do plasmdeo. A diferenciao entre quem recebeu ou no se faz do
seguinte modo mais fcil: dispe-se a colnia de bactria a crescimento em contato com a ampicilina;
como o plasmdeo possui um stio que torna a bactria resistente a este antibitico, as bactrias com
este DNA recombinante sobrevivero; as demais, sem plasmdeo, morrero (antes de todo o processo,
verifica-se se todos os plasmdeos a serem utilizados contm o DNA a ser amplificado).
Aps ser sintetizado a protena de interesse, pode-se fazer gel, por exemplo, de poliacrilamida. O que
se v so bandas (tanto para protena como para DNA), revelando grupos de protenas. Na foto
mostrado, utilizou-se eletroforese em protenas marcadas com aminocido radioativo. Mostra a
importncia (as diferenas entre as situaes) deste mtodo para a anlise da infeco, ou no, da
clula estudada. As observaes so feitas em filmes (se marcadas radioativamente), papel de filtro e
papel celofane. Este processo , por exemplo, utilizado em testes para o HIV. H, tambm,
identificao de vrus que paralisam a maquinaria celular, monopolizando-a para seu prprio benefcio
e depois, matam-na.
Atualmente, uma srie de novas tcnicas permite ao pesquisador a anlise detalhada da estrutura
molecular do DNA e, por conseqncia, do material gentico de um ser vivo. Esta anlise permite, por
sua vez, o isolamento e a amplificao de um segmento de DNA, o seu sequenciamento, identificao
e manipulao58. O Projeto Genoma, por exemplo, pretende, atravs destas tcnicas, identificar toda a
seqncia de cerca de 3 bilhes de pares de bases do genoma humano - 50.000 a 100.000 genes! Esta
abordagem permitir a identificao de genes relacionados a doenas genticas especficas, a abre a
possibilidade de diagnstico e at tratamento estas doenas a nvel molecular.
Seqenciamento do DNA:
Duas tcnicas, surgidas no final dos anos 70, so empregadas para o sequenciamento de fragmentos de
nucleotdeos:
58
Exemplos: Genoma de Xyllela fastidiosa (bactria do amarelinho em ctricos) e Projeto Genoma Humano.
154
??
??
Em ambos os casos, possvel definir com preciso a seqncia exata de nucleotdeos de um segmento
de DNA.
155
.CGA-
-AGC.
...T-
-GG
-CCGG-
-CC
CCGG-
59
Corte
156
Envolve a unio de um fragmento de DNA a uma molcula maior, utilizando-se uma endonuclease de
restrio e a DNA ligase. A clivagem do DNA com a mesma enzima de restrio, cria extremidades
complementares adesivas que so unidas pela ao da DNA ligase. Desta forma, um fragmento de
DNA pode ser inserido em uma molcula maior, que passa a ser recombinante. Assim, um
determinado gene do genoma humano pode ser inserido no genoma de uma bactria, por exemplo, e l
ser amplificado ou mesmo, transcrito vrias vezes.
Os Vetores:
Um vetor uma molcula de DNA qual o fragmento de DNA a ser clonado est ligado. Os principais
vetores utilizados so plasmdeos, e vrus de animais. Os plasmdeos so os mais utilizados para a
clonagem de pequenos fragmentos de DNA; so geralmente obtidos a partir de clulas bacterianas,
facilmente reintroduzidos nestas clulas e possuem capacidade autnoma de replicao. Um exemplo
amplamente utilizado de plasmdeo o pBR322, que possui os genes de resistncia tetraciclina e
ampicilina. Alguns tipos de vrus, como o bacterifago l, so utilizados na clonagem de fragmentos
maiores de DNA. Os Cosmdeos so estruturas hbridas que possuem caractersticas do bacterifago
associadas do plasmdeo pBR322, e so utilizadas para a clonagem dos maiores segmentos de DNA.
Bibliotecas de DNA:
Uma biblioteca de DNA uma coleo de fragmentos de DNA obtidos a partir da ao das
endonucleases de restrio, ligados aos vetores apropriados e clonados. Quando a biblioteca inclui a
totalidade do genoma de uma clula ou organismo, ela dita "Biblioteca Genmica". Quando a
biblioteca inclui apenas moldes de cDNA, obtidos por ao de uma transcriptase reversa, esta
biblioteca dita "Biblioteca de DNA Complementar". A deteco de um determinado segmento de
DNA em uma biblioteca genmica feita com a utilizao de SONDAS de DNA.
Sondas:
As sondas de DNA so seqncias de fita nica de DNA que hibridizam - pareiam - com a seqncia
de interesse, destacando-as do restante da biblioteca. Estas sondas podem ser marcadas com um
istopo radioativo, um anticorpo, uma substncia fluorescente ou outro mtodo de deteco. A
utilizao em conjunto das sondas e de enzimas de restrio permitiu o desenvolvimento de tcnicas de
deteco de DNA muito precisas, como o "Southern Blot". No "Southern Blot", um determinado gene
157
pode ser identificado entre milhes de fragmentos por separao eletrofortica em gel com posterior
identificao dos fragmentos atravs de sondas especficas. Variaes deste mtodo permitem hoje a
identificao de fragmentos de RNA - Northern Blot - e de protenas - Western Blot, este ltimo
utilizando um anticorpo no lugar da sonda.
158
Anexo
No existe no transporte de gases, tanto do oxignio como de gs carbnico, transporte ativo, todo
transporte de gases sempre se faz por difuso de onde est mais concentrado, para o local de menor
concentrao. A lei de difuso dos gases obedece ordem de locais mais concentrados para locais
menos concentrados. Por exemplo, se em nvel de tecidos temos uma alta de pCO2 e em nvel de
sangue temos uma alta de pO2 por difuso teremos o CO2 que passa para o sangue e o oxignio que
passa para os tecidos. Ao pulmo temos uma alta de pO2 e no sangue temos uma alta de pCO2, o CO2
ir para o pulmo e o O2 para o sangue. A lei bsica ser ento do mais concentrado para o menos
concentrado. Existem outros fatores que podem acelerar essa passagem de O2 para os tecidos e CO2
para o pulmo alm da simples difuso. Mas basicamente tudo acontece pelo processo de difuso.
A clula encarregada pelo transporte de gases na circulao o eritrcito, uma clula anucleada e
bicncava. Como ele anucleado ele no ter sntese de protena e consequentemente uma meia vida
muito curta. O eritrcito vive graas a gliclise e via das pentoses como fonte de ATP, alm disso ele
guarda em seu interior uma alta concentrao de glicose. Quando essa glicose oxidada, um dos
intermedirios que se forma 1,3-difosfoglicerato, no eritrcito esse produto ir formar 2,3difosfoglicerato que ser importante na manuteno da estrutura quaternria da hemoglobina. A
estrutura que nos interessa dentro do eritrcito a hemoglobina. Quando se faz uma hidrlise cida ou
alcalina na hemoglobina obteremos heme mais globina. Logo sua estrutura formada por grupamento
heme mais uma parte protica a globina. Cada hemoglobina formada por quatro cadeias proticas, ou
seja, para cada hemoglobina temos quatro globinas, alfa 1, alfa 2, beta 1 e beta 2. Cada globina possui
um grupamento heme. Ento uma hemoglobina formada por quatro radicais heme e quatro radicais
proticas chamadas globinas. Cada globina possui as estruturas primria, secundria e terciria e
quando as quatro se renem formam uma estrutura quaternria. Para formar a estrutura quaternria da
hemoglobina temos pontes salinas entre alfa 1 e alfa 2, alfa 1 e beta 1, alfa 2 e beta 2. Sendo que as
cadeias beta esto ligadas entre si pelo 2,3-difosfoglicerato. Da a glicose em excesso dentro do
159
eritrcito para que parte dessa glicose forme 2,3-difosfoglicerato para servir de ligao das cadeias
beta da hemoglobina. Outro detalhe, no interior do grupamento heme, temos o ferro 2+, nessa
caividade no interior do heme uma cavidadde hidrofbica formada por aminocidos hidrofbicos.
Essa cavidade do heme deve ser hidrofbica porque se os aminocidos forem hidroflicos haver
entrada de gua no interior e entrando gua forma-se superxido, e esse superxido impede que o
grupamento heme transporte oxignio, alm de ser danoso para as membranas celulares.
Sendo a cavidade do heme uma rea hidrofbica, pensava-se que a combinao do heme com o
oxignio se desse de maneira linear, ou seja, a medida que se aumentava a concentrao de oxignio
aumentaria a saturao dos grupamentos heme. No entanto, quando montamos um grfico de
concentrao de oxignio por saturao de hemoglobina temos uma curva sigmide idntica ao
comportamento das enzimas alostricas. Se no temos uma reta, e sim uma curva sigmide, isso indica
que existe uma ordem de entrada do oxignio na hemoglobina e que o efeito cooperativo, ou seja, a
medida que a primeira globina oxigenada ela abre espao para a oxigenao da segunda que abre
espao para a oxigenao da terceira e em seguida da quarta globina. Quando o primeiro oxignio se
aproxima da globina alfa 1, as pontes salinas entre alfa 1 e alfa 2 se rompem, significando que alfa 1
est sendo oxigenada e alfa 2 est pronta para se oxigenar. Quando alfa 2 oxigenada, 2,3
difosfoglicerato sai, abrindo a possibilidade de oxigenao de beta 1 e beta 2. Isso est expresso na
curva sigmide. Ento a oxigenao da hemoglobina cooperativa e ordenada. O ferro tem spin
contrrio ao oxignio no mudando a sua valncia quando ligado a ele, assim, a ligao ferro-oxignio
uma ligao eletromagntica, pois eles possuem spin contrrio. O gs mais abundante em nosso
organismo o CO2. Dentro do eritrcito o CO2 se rene com a gua e pela ao da enzima anidrase
carbnica (presente dentro do eritrcito) formar cido carbnico que ir se dissociar via anidrase
carbnica em bicarbonato (HCO3-) e on hidreto (H+).
Dois problemas a serem resolvidos pelo eritrcito: o bicarbonato possui carga negativa e uma base,
j o on hidreto tem carga positiva e tem o poder de baixar o pH. Quando ele est vindo do pulmo, o
eritrcito est trazendo suas hemoglobinas combinadas com oxignio formando oxiemoglobinas,
quando chega ao tecido todo o CO2 chega no eritrcito forma cido carbnico que se dissocia. O
bicarbonato formado vai para o plasma, j o on hidreto ter outro destino. O eritrcito tem em
abundncia o aminocido histidina que possui o grupamento imidazlico, os ons hidreto iro se
combinar com esse grupamento. O CO2 pode ser transportado ento na forma de bicarbonato e sob a
forma de cido carbnico formando o tampo bicarbonato, ou seja, todo CO2 produzido no ciclo de
160
Krebs ir ser transportado na forma de tampo bicarbonato. Mas o que um tampo? a sua base e
seu cido conjugado. Vamos supor que haja ingesto de cido, Coca-Cola, por exemplo, o organismo
ir ter que manter o pH do sangue, simplesmente estes cidos que entrarem sero retirados por uma
base, que sequestrar o cido correspondente, tirando-o de circulao, aumentando a quantidade de
cidos carbnicos. Quando os ons hidreto surgem dentro do eritrcito, o pH abaixa e os oxignios
presos aos grupamento heme iro sair para os tecidos. Ento, ao mesmo tempo que, temos a formao
da hemoglobina reduzida pelo on hidreto do cido carbnico, temos a sada do oxignio para os
tecidos. Essa reao to importante que 0,7 moles de H+ entram nos grupamentos imidazlicos da
histidina por mol de oxignio que sai da hemoglobina. Com isso, o abaixamento de pH originado da
alta de CO2 do eritrcito ir provocar a liberao do oxignio do eritrcito para as clulas, ao mesmo
tempo como o hidreto sequestrado pela histidina o pH volta a ser normal. O sequestro de hidreto pela
histidina recebe o nome de troca isodrica. Isodrica significa manuteno do pH constante e isso
ocorre no tecido. A oxiemoglobina tem um pK de 6,17 e a desoxiemoglobina tem um pK por volta de
7,0. O cido mais forte ser a oxiemoglobina, ou seja, sua dissociao ser mais rpida do que a
desoxiemoglobina, que a hemoglobina reduzida. Uma parte muito pequena de CO2 (0,5 milimol por
litro de CO2) transportado tambm ligado a histidina formando a carbamiloemoglobina mas, a
maioria transportada por tampo bicarbonato. Na desoxiemioglobina ou hemoglobina reduzida o
ferro est livre.
Voltando curva sigmide. Para que a hemoglobina esteja saturada de oxignio a p CO2 deve ser de
40mm de Hg que vai dar um pH de 7,4. O oxignio tem de estar entre 20 e 80 mm de Hg para se ter
uma saturao completa da hemoglobina pelo oxignio. Isso significa que o sangue com 100% de
saturao mostra, que ele acabou de sair do pulmo. No sangue da musculatura de um atleta, a pCO2
ir ser maior do que 40, ocasionando um recebimento de muito bicarbonato, muito cido carbnico e
muito on hidreto ocasionando uma queda maior de pH, deixando a saturao da heme em 60 a 70%.
No fgado, teremos o limite da anoxia, isso significa que teremos uma p CO2 maior do que 40 e um pH
muito menor do que 7,4, a curva de saturao ir baixar ainda mais. Se fixarmos uma concentrao de
oxignio, iremos ver que a curva de saturao caminhou para a direita, medida que ela foi passando
para os tecidos (msculo e pulmo)a curva foi caindo para a direita. Quanto maior o deslocamento
para a direita haver alta de CO2, baixa de pH e maior oxigenao dos tecidos. Se a curva continuar
saturada (100%) indica que no ir haver correta oxigenao dos tecidos, j que a curva caindo indica
que os tecidos esto sendo oxigenados. Esse efeito se chama efeito Bohr. Na vida sedentria haver
pouca alterao de pH, a hemoglobina ir e voltar oxigenada.
161
Quanto mais o efeito Bohr for pronunciado, maior a oxigenao dos tecidos. A hemoglobina reduzida
sair dos tecidos indo para o pulmo. Quando chegam nos pulmes, temos um ambiente oxidado, logo
o pH ser alto. No sangue temos bicarbonato e no eritrcito temos a hemoglobina reduzida, no pulmo
teremos pO2 alto. O on hidreto ir se reunir com o bicarbonato formando cido carbnico que ir se
dissociar em gua e gs carbnico que sero expirados. O oxignio como houve sada de on hidreto, o
pH aumenta e o oxignio se liga ao grupamento heme. A curva que chega, ento, ao pulmo est
pouco saturada. A medida que os ferros da hemoglobina se combinam com o oxignio ela volta a taxa
de saturao. Ento essa curva, ao invs de ir para a direita ir para a esquerda da curva-padro. Esse
o efeito Haldane que ocorre a nvel pulmonar, j o efeito Bohr ocorre a nvel tecidual. Quanto mais
acentuado para a direita, melhor a oxidao a nvel tecidual e quanto mais acentuada a curva para a
direita melhor a oxidao das hemoglobinas no pulmo.
? Equilbrio cido-Base
Quando falamos em pH lembramos logo da famosa equao que pH = -log [H+]. Mas o nosso pH
dos lquidos de nosso corpo no dado apenas pela concentrao de hidrognio, pois somos uma
soluo de ctions, nions, sais, cidos e bases. O que mais temos sais, bases e cidos, mas todos eles
bastante fracos. Mas apesar de todos nossos cidos e bases serem fracos, eles possuem uma gradao
(qual mais forte que outro) dada pelo pK. O pK o pH da dissociao.
Por exemplo, a oxiemoglobina para ela se dissociar, ou seja, para ela perder seu oxignio ela deve ter
um pH de 6,17 logo esse seu pK. J a desoxiemoglobina para se dissociar, ela precisa de um pH 7,71,
logo esse o seu pK. O pH de nosso lquidos ser o pK mais logaritmo da concentrao do sal ou base
sobre a conentrao do cido. Essa a equao de Henderson-Hasselbach. Ento para se dar o pH
teremos que falar em ponto de dissociao do cido formando o sal ou a sua base. Quais as estruturas
que mantm o nosso pH sanguneo a 7,4 que o ponto ideal de nosso pH? Primeiro, vimos que a
histidina da hemoglobina do eritrcito ajuda a manter nosso pH constante. Isso ocorre tambm com
todas as nossas protenas, principalmente as plasmticas. O prprio eritrcito, albumina, lipoprotena
ir funcionar tanto como cido como base ajudando a manter o pH constante.
O tampo fosfato que existe no sangue mas tem uma importncia minma, j que o fosfato tem outras
prioridades como participar da formao de cidos nucleicos como da fosforilao de protenas. O
tampo mais disponvel de nosso organismo o bicarbonato. Nosso pH dado ento pela relao entre
162
Se o problema ocorreu na clula que passou para o sangue aumentando a concentrao de cido e
diminuindo a de bicarbonato, a soluo quando o problema no denominador (cido carbnico) vir
pelo pulmo que hiperventilar eliminando mais CO2. Esse quadro ser uma acidose metablica. Esse
problema ocorre tambm em pessoas com diarria e insuficincia renal e drogas a base de cido. Uma
163
pessoa com bronquite, pneumonia ou uma infeco pulmonar no pode expirar grande quantidade de
CO2. A hemoglobina continuar reduzida, no haver efeito Bohr ou efeito Haldane. Temos ento um
quadro de acidose respiratria, e se o pulmo no pode realizar o seu papel a soluo ser encontrada
no rim. O rim trabalha com o numerador (bicarbonato), aumentando a absoro de bicarbonato.
Vmito prolongado, obstruo intestinal e a ingesto excessiva de bicarbonato para se fazer a digesto
teremos uma alcalose metablica. Ela provoca um aumento do numerador. O problema ocorre no
sangue, logo o problema poder ser solucionado ao pulmo hipoventilando. Doenas do sistema
nervoso central, histeria (que ocorre tanto em homens como em mulheres), envenenamento com
salicilato iro provocar uma alcalose respiratria. A pessoa ir hiperventilar pelo pulmo que ser
compensado nos rins pelo aumento da eliminao de bicarbonato.
Descoberto quase que simultaneamente por Karl Lohmann (Alemanha) e Cyrus Fiske e Yellapragada
Subbarw (EUA) em 1929 quando estudavam extratos de msculos esquelticos. Inicialmente
acreditava ser encontrado apenas ns msculos e estivesse relacionado na atividade muscular. Mas em
1941, Fritz Lipmann postulou o conceito unificador de ser o ATP o transportador de energia universal
das clulas. Basicamente, o ATP constitudo por um nucleotdeo (a adenosina e uma ribose),
formando a adenosina que se encontra ligada a trs molculas de fosfato (ligaes de alta energia).
Da o nome de fosfato de adenosina. Estudos recentes afirmam que o ATP est localizado no ncleo e
em outras organelas clulas, e no somente no citoplasma celular.As ligaes entre os dois grupos
164
A ligao de fosfato mais externa desfeita e libera-se energia e forma-se ADP. A energia liberada
pela degradao ou hidrlise do ATP utilizada para a produo e transporte de material biolgico,
manter a temperatura e contrao muscular. A hidrlise do ATP se processa com ou sem
disponibilidade de oxignio. Essa uma reao imediata, ANAERBICA, e que libera energia. A
capacidade da clula em hidrolisar o ATP permite gerar energia para uso imediato, isto no ocorreria
se sempre fosse necessrio oxignio para o metabolismo energtico.
Ressntese do ATP
ATP intracelular discreta. Alm disto, o ATP no pode ser fornecido atravs do sangue nem a partir
de outros tecidos. O que possibilita a degradao COMPLETA da glicose e seu uso em atividade fsica
de BAIXA INTENSIDADE E LONGA DURAO? Repouso e exerccios.
A. Repouso
Durante repouso 2/3 dos nutrientes utilizados para a ressntese de ATP provm da gordura e o 1/3
restante pelos carboidratos. A contribuio das protenas muito pequena. Entre os processos, o
aerbio o predominante. Isto comprovado porque nossos sistemas de captao e transporte de
oxignio (sistema cardiorrespiratrio) so capazes de fornecer a cada clula oxignio suficiente. O
motivo da produo de cido lctico se deve a presena da enzima desidrogenase lctica nas clulas.
Esta enzima catalisa a reao de transformao do cido pirvico em cido lctico. Mas o nvel de
cido lctico permanece constante e no se acumula.
B. Exerccio
Todos os trs processos contribuem com a ressntese do ATP, mas a predominncia depender dos
seguintes fatores: tipo de exerccio realizado, estado ou nvel de treinamento e dieta do atleta.
So exerccios realizados em curtos perodos de tempo, mas que exigem esforos mximos. Estes
exerccios incluem: 100, 200, 400 e 800m ou qualquer exerccio que o tempo s possa ser mantido por
dois ou trs minutos.O processo predominante o anaerbio. O principal nutriente a glicose. A
gordura e protenas so participantes, mas sua participao negligencivel. Os nveis de creatina
forsfato (CP) chegaro a valores baixos e continuaro baixos at o encerramento do exerccio. Mas,
aps o trmino, cerca de 70% de toda a CP utilizada ser reposta em 30 segundo e 100% em cerca de 3
minutos. Com o predomnio do processo anaerbio, ocorre acmulo de cido lctico. Para que possa
continuar o exerccio, haver necessidade de diminuir a intensidade do mesmo ou at par-lo. O nvel
de cido lctico no sangue um importante indicador de qual processo predominante durante o
exerccio.
So exerccios que podem ser realizados por longos perodos de tempo, mas com uma intensidade
baixa. Entende-se por perodos longos, acima de 3 minutos. Os nutrientes utilizados so: glicose,
gordura e protenas. Mas o predomnio destes depender da durao. Em atividades fsicas com
durao de 20 minutos, a glicose representar a fonte de nutriente dominante, enquanto a gordura
desempenhar um papel secundrio.
O nvel de cido lctico ser alto, porm no mximo. Para atividades fsicas com durao de uma
hora, os depsitos de glicognio muscular comeam a mostrar redues e as gorduras passam a ser a
principal fonte de ressntese do ATP. Esta proporo variar de atleta para atleta devido ou ao seu
estado de treinamento, ou a proporo da fibra muscular ou ainda, reservas iniciais de glicognio.
O principal fornecedor de energia para a ressntese do ATP o processo aerbio, os processos
anaerbios s contribuem no inicio do exerccio.
Os nveis de cido lctico so mantidos e no alcanam nveis muito altos durante o exerccio aerbio.
O msculo pode ser comparado a uma mquina que transforma energia qumica em trabalho,
produzindo calor. Quando em atividade, pode alterar sua tenso e seu comprimento.
As propriedades fisiolgicas dos msculos so diferentes nos diferentes estados: relaxamento, incio da
contrao, contrao propriamente dita e retorno ao relaxamento. A fora exercida pelo msculo na
contrao medida pela unidade de tenso (P), que permite a correo para o tamanho do msculo
(medida pela rea de maior seco transversal do msculo em questo). O tamanho do msculo
expresso como uma frao do comprimento do msculo em que ele capaz de exercer maior tenso
167
isomtrica (lo). Um msculo relaxado pode ser estendido at certo comprimento, quando ento oferece
resistncia ao aumento do comprimento. Esta resistncia caracteriza a existncia de um componente
elstico no msculo em repouso. No entanto, quando um msculo estimulado tetanicamente no se
permitindo a mudana de comprimento (contrao isomtrica), observa-se a situao de tenso
mxima. A tenso varia muito conforme o estado do msculo (relaxado, pouco contrado, muito
contrado, contrao mxima).
Se o peso for diminudo gradativamente (diminuindo assim a tenso exercida pelo msculo), a
velocidade de contrao ir aumentando proporcionalmente (peso prximo de zero implica em
velocidade de contrao mxima).
Contrao isotnica: aquela em que a velocidade diferente de zero e a tenso constante. A produo
de calor por um msculo em contrao isotnica proporcional mudana de comprimento do
msculo e no depende da velocidade de contrao ou do peso que foi levantado. Nas contraes
isomricas, onde no h alterao do comprimento do msculo, existe a liberao de calor de
manuteno. Esta quantidade de calor proporcional ao tamanho do msculo e corresponde energia
necessria para manter a tenso.Quando parte de um msculo est envolvido na manuteno da tenso,
esta parte no estaria necessariamente impedida de participar na gerao de calor.
168
Miosina:
A miosina uma molcula longa com uma cauda e duas cabeas. As cabeas podem se mover em
relao a si mesmas e em relao cauda. Miosina pode ser separada por enzimas proteolticas em
dois pontos diferentes. Se tratada com tripsina, a miosina dividida em meromiosina pesada
(fragmento que retm a atividade ATPsica) e meromiosina leve (que no possui atividade
enzimtica). Meromiosina pesada solvel em baixas concentraes de sal enquanto o fragmento
meromiosina leve s solvel em concentraes salinas bastante altas. Para estudo dos polipeptdeos
que compem a estrutura quaternria da miosina, basta romper as pontes dissulfeto e proceder
eletroforese para separao por peso molecular. Existem duas cadeias pesadas na cauda e dois ou trs
pares de cadeias leves nas cabeas. As cadeias leves estariam relacionadas atividade ATPsica. O
peso molecular e o nmero destas cadeias leves variam de acordo com o msculo estudado e o tipo de
fibras (rpidas ou lentas).
Magnsio o nico ction, com efeito, acelerador da atividade ATPsica da miosina. O substrato
realmente hidrolisado pela miosina parece ser Mg-ATP. A actina estimula de forma significativa a
hidrlise de ATP, e in vivo, a interao destas duas protenas deve ser o fenmeno responsvel pela
hidrlise do ATP durante uma contrao.
Actina:
A actina uma protena globular com uma nica cadeia polipeptdica e peso molecular de 45KD. No
estado monomrico (actina-G), possui uma molcula de ATP e uma de clcio incorporadas em sua
169
estrutura. Em soluo de alta fora inica, a actina se polimerizar, ficando filamentosa com uma
dupla fileira de monmeros enrolados sobre si mesmos. Na passagem da forma monomrica para a
forma filamentosa, o ATP hidrolisado.
Actina/Miosina: se colocadas juntas numa soluo, com o passar do tempo a soluo se torna mais
viscosa (formao de complexos actina/miosina) e h aumento de fosfato livre s custas da diminuio
de ATP. O ADP formado estvel. A queda de ATP mantem as molculas de actina e miosina juntas e
colocao de novo ATP na soluo diminui sua viscosidade. Durante a contrao e distenso de uma
clula muscular no ocorre um deslizamento livre sobre os dois tipos de filamentos. No relaxamento,
uma lenta hidrlise de ATP ocorre e mantem uma certa tenso entre os filamentos. Com a constante
regenerao de ATP, no se observa um estado de inextensibilidade das fibras musculares, a no ser
nos casos de rigor mortis, onde no existe novo influxo de ATP para o complexo. A concentrao de
ATP se mantm constante devido regenerao a partir de ADP e fosfocreatina, reao catalisada pela
creatinoquinase. Uma fibra em contrao isomtrica em um dado comprimento, responde com
mudana de seu comprimento em alguns milisegundos, e se estabiliza na nova situao. A alterao
por que passa a tenso nesse tempo chamada de um transiente. No transiente observa-se que a
tenso varia de forma linear com a mudana de comprimento, at atingir um plat.
170
transmisso sinptica gera despolarizao levada ao interior da fibra pelos tbulos em T; liberao de
calcio armazenado no interior de vesculas; clcio + TN-C = alterao conformacional da troponina;
deslocamento da tropomiosina = libera os stios de ligao actina/miosina; bomba de clcio retorna o
clcio para o retculo sarcoplasmtico (uso de ATP); TN-C perde o calcio = troponina e tropomiosina
retornam ao estado anterior.
ACETIL-COLINA: IMPORTNCIA
A acetilcolina (ACh) um neurotransmissor que funciona como propagador do impulso nervoso nas
fendas sinpticas. Os receptores neuronais de acetilcolina (nACHRs) esto distribudos no sistema
nervosos central e perifrico onde funcionam tanto pr quanto ps sinapticamente como canais inicos
abertos por ligantes.
Os receptores de acetilcolina so divididos em duas classes: Uma primeira inibida por agonistas
nicotnicos e uma segunda insensvel a estes agonistas e a alfa neurotoxinas. Quando a ACh liberada
pelos neurnios de placa motora estimulam clulas musculares esquelticas. Receptores na fibra
muscular reconhecem a ACh como um sinal para contrao. Muitos animais como serpentes venenosas
e o baiacu (um peixe venenoso) produzem toxinas que causam paralisia por bloquear os receptores de
ACh. H tambm uma doena denominada Miastenia gravis que envolve os receptores de ACh,
pacientes com esta doena produzem anticorpos contra os receptores que se ligam a ele impedindo que
recebam os sinais para contrao, como resultado os msculos no contraem. O tratamento envolve a
administrao de drogas que causam uma liberao de ACh pelos terminais nervosos maiores que o
normal.
Precursores: Colina e Acetil-CoA
Enzima: Colina Acetil Transferase
Enzima: Acetilcolinesterase
Metablitos: Colina e acetato
A chegada de um impulso nervoso promove a exportao sincrnica do contedo de cerca de 300
vesculas de acetilcolina elevando a concentrao desta na fenda sinptica de 10nM para 500 ? M em
menos de 1 milisegundo. A ligao da acetilcolina membrana ps-sinptica aumenta a corrente de
entrada dos ons sdio e diminui a de sada dos ons potssio o que eleva a despolarizao da
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membrana ps-sinptica e dispara o potencial de ao. O receptor possui cinco subunidades em alfa
hlice, distribudas simetricamente em torno do poro: 2 alfa,1 beta, 1 gama e 1 delta. As subunidades
alfa possuem o sitio para ligao da acetilcolina. A ligao de duas molculas de acetilcolina abre,
transitoriamente o poro o que ocorre em aproximadamente 1000 microsegundos. O canal permanece
aberto por cerca de um milisegundo pois a acetilcolina hidrolisada pela acetilcolinesterase que se
encontra ancorada na membrana ps-sinaptica por um grupamento glicolipdico unido covalentemente.
A acetilcolinesterase atingiu a perfeio cintica o que permite que potenciais de ao possam ser
transmitidos com alta freqncia.
Organofosforados (inseticidas agrcolas, gases neurotxicos para fins militares) inibem a
acetilcolinesterase por formarem complexos covalentes fosforil-enzima muito estveis. A forma aberta
do canal nunca foi visualizada por ocorre em espaos muito curtos de tempo.
DIABETES MELLITUS
1 - A INSULINA:
um hormnio peptdico produzido pelas clulas beta das Ilhotas de Langerhans pancreticas.
Formado por duas cadeias oligopeptdicas ligadas entre si por duas pontes dissulfeto intercadeias e
uma ponte dissulfeto intracadeia. Sintetizado a partir de um pr-hormnio (Pr-insulina).
Pr-insulina (84 AA) = Insulina (51 AA) + Peptdeo C (33 AA)
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2 - AES DA INSULINA:
3- O "DIABETES MELLITUS"
Doena causada pela deficincia relativa ou absoluta da insulina e, consequentemente, em ambos os
casos, de seus efeitos sobre o metabolismo energtico intermedirio. Dois mecanismos principais:
1 - Destruio autoimune das clulas beta do pncreas: tpica do diabetes tipo I ou insulinodependente. geralmente condicionada geneticamente, ou desencadeada por vrus/drogas.
2 - Resistncia perifrica insulina somada falncia gradual das clulas beta pancreticas: tpica do
diabetes tipo II ou no insulino-dependente. Nestes casos a leso primria desconhecida.
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