A Citologia: avanços e desafios

Prof. Dr. Jacinto da Costa Silva Neto

Departamento de Histologia e Embriologia
Universidade Federal de Pernambuco
Grupo de Pesquisas em Doenças Crônico-Degenerativas - CNPq/UFPE
Histórico

Rudolph Virchow (1821 – 1902)

Desenvolveu o conceito:
cellular pathology

Sua crença: Omnis cellula e cellula

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Histórico

– Real iniciador da citologia clínica.

– Em 1838, 17 anos antes da Cellular Pathology de Virchow,

Muller publicou sua monografia:

“On the Nature and Structural Characteristics of Cancer and

Those Morbid Growths Which May Be Confounded With It”

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Histórico
George N. Papanicolaou
(1883-1962)
Um grego, formado em medicina pela Universidade de Athenas,
Doutor em zoologia pela Universidade de Munique em 1910.

1928

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Citologia do Trato Genital Feminino

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Citologia Não-Ginecológica:
Citologia Ocular (Conjuntival)

Coleta com swab

ou imprint

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Citologia Oral

• Lesões brancas (que não destacam)

• Lesões vermelhas
• Queilite actínica
• Verrucosidades
• Nódulos
• Úlceras

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 Punção Aspirativa PAAF

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Citologia das Secreções Papilares
(mamilar)

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Atenção !

• COLETAS INVASIVAS:
O Biomédico não está
autorizado a realizar
coleta por metodologia
invasiva e sim por
exfoliação.
• Punções por agulha fina
(mama, toracocentese e
outros tecidos).

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 Citologia Mamária
PAAF

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Mamografia

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 PAAF - Tireóide

– Redução do número de cirurgias (+50%)

– Sistema Bethesda 2009

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A US pode estimar o
tamanho do nódulo,
bem como monitorar
seu crescimento

Clark PD; Faquim CW. Thyroid Cytopathology. Springer, 2007

 Distribuição da
amostra na lâmina
As principais áreas de utilização do
amianto:
◆ Fibrocimento
◆ Revestimentos de proteção ao fogo;
◆ Tubulações de fibrocimento para a
distribuição de água potável e rede
de esgotos;
◆ Papelão, papéis, tecidos isolantes e de
vedação;
◆ Revestimentos de pisos industriais e
domésticos;
◆ Lonas de freios e embreagens na
indústria automobilística;
◆ Tintas, revestimentos e revestimentos
de vedação.
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Também têm sido utilizados em uma variedade de
equipamentos:
-Fornos, estufas, fornos de cozinha e aquecimento,
caldeiras, ferros e tábuas de passar, superfícies de
trabalho, conexões hidráulicas/instalações sanitárias,
geladeiras, aquecedores de água, motores e
alternadores, veículos (lonas de freio, peças para
embreagem, juntas), equipamentos ferroviários,
navios, aviões, equipamento elétrico e componentes
utilizados pela engenharia civil em
obras públicas (sistemas de esgoto, distribuição de
água e superfícies de rodovias) e em bedifícios
(telhas, portas de elevadores, válvulas anti-
incêndios, juntas, divisórias, etc.).
Austrália - Brisbane

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1o. Método para estudar a efusão citologia

Problemas no diagnóstico diferencial entre citologia

reativa, mesotélio-reativo e mesoteliomas

Utilização de técnicas adicionais

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Imuno-citoquímica

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Imuno-citoquímica

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Histórico
George N. Papanicolaou
(1883-1962)
Herbert Traut (ginecologista)
Descrição das lesões pré-invasivas
(1940)

Ernest Ayre (ginecologista

canadense)
Coleta de amostras diretamente
1928 da cérvix com uma espátula de
madeira, antes retirado com
uma pipeta por Papanicolaou

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Coloração

• Giemsa
• Hematoxilina e eosina
• Papanicolaou
• Imunocitoquímica

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Coleta – Ginecológica

Espátula de ayres
Escova citológica -Cytobrush
(modelos)
Lâmina montada.
Confecção da Lâmina

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 Coleta

Responsável por até 90% entre os 15-50% de resultados falsos

negativos encontrados com citologia convencional. (Bolick e Hellman,
 Citologia do Trato Genital
Feminino

-Local de coleta

-Problemas na
coleta
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Citologia em base líquida:
Cytospin (Citocentrifugado)

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Citologia Meio líquido

• Evita solicitação de nova coleta

• Diminuição das taxas de insatisfatórios

(dessecamento, escassez de material, inflamações,
hemorragias).

• Disposição de material para testes

moleculares

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ThinPrep

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Citologia em base líquida:
SurePrep (Autocyte)

O debris é
encurralado e Concentrado
removido celular

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 Comparação

ThinPrepTM SurePathTM

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Prof. Jacinto Costa
Screening Automatizado

Atualmente 2 sistemas:

-TP imaging System (Cytyc Corp., Marlborough)

-FocalPoint Slide Profiler (TriPath Inc, Burlington, NC)

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Screening Automatizado

TP imaging System (Cytyc Corp., Marlborough)

-Screening primário
-Processador de imagens, PC, Software.
-300 lâminas/dia – 120 campos/20mm de diâmetro.
-Armazena imagens

-22 campos com células anormais para revisão.

-Algumas células são marcadas para revisão.

Microscópio automatizado

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Screening Automatizado

FocalPoint Slide Profiler (TriPath Inc, Burlington, NC)

-Totalmente automatizado para classificação Pap sem intervenção

humana;
-Aprovado pelo FDA para o screening primário oriundo do SP e do
Pap convencional.
-288 lâminas/dia.
-Software que mede características nucleares: tamanho, densidade
óptica, membrana, R-N/C;
-25% são arquivadas para revisão;
-75% -controle de qualidade de pelo menos 15%

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Screening Automatizado

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Sistema Bethesda
• Desenvolvido em 1988

• TBS 2001 – Descrição da qualidade do esfregaço

Prof. Jacinto Costa http://nih.techriver.net/

 Papilomavirus Humano – HPV
E
Cancer Cervical

Alexander Meisels e Fortin R, 1976

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 Principal agente etiológico do câncer de colo
uterino: Papilomavirus Humano - HPV

Prêmio Nobel de Medicina 2008

E os Diagnósticos Moleculares?

Prof. Jacinto Costa

 Mano Crick Silva,
eu tava pensado!
Será que a citologia
está acabando,
será que restará
apenas a biologia Talvez, Mano
molecular? Watson Cabral,
talvez...

Atenção!
Qualquer semelhança é mera coincidência!
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 SSCP - Single Strand
Conformation
Polymorphism
(Polimorfismo de conformação de
filamento único ou polimorfismo de
conformação de fita simples)

Técnica de diferenciação de
filamentos únicos de DNA de
comprimentos idênticos como
induzidos por diferenças nas
sequências sob certas condições
experimentais.

Permite distinguir as seqüências por

meio de eletroforese em gel, que
separa as diferentes conformações.

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Células malignas numa efusão pode ser sinal
inequívoco de metástase

O exame dos líquidos é muito importante para

diagnósticos, estadiamento, prognóstico e até
terapêutica

Quando raras células neoplásicas nas efusões – usar

técnica: PERDA DE HETEROZIGOSIDADE (LOH) – perda
de segmentos de cromossomos.
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Prof. Jacinto Costa
 Desafios do Citologistas

• Detectar as alterações moleculares envolvidas na

progressão do câncer

• Identificar os agentes etiológicos e participar nas

decisões das opções terapêuticas

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O Problema: Câncer do Colo Uterino

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Representação espacial das taxas brutas de incidência por 100.000 mulheres estimadas
para o ano 2010, segundo a Unidade da Federação (neoplasia maligna do colo do
útero).

Fonte:
INCA –Acesso: http://www1.inca.gov.br/estimativa/2010/index.asp?link=mapa.asp&ID=5
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Natural history of human papillomavirus-induced cervical cancer. Reprinted from
Schiffman M, Kjaer SK. 2003:15, Fig 1. From: Wiley: Obstet Gynecol Surv, Volume
61(6) Supplement 1.June 2006.S3-S14
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• Mais 150 tipos de HPV – 40 tipos: mucosos
• 15 tipos HPV-HR
• 70% - HPV16 e HPV18
•HPV16: 50-55% CE - 15-20% - Adenoc
•HPV18: +freq Adenoc
+16= 85-90% - Adenoc
HPV
• Meta-análise
•243 estudos publicados entre 1990-2010 e 30.848
mulheres
•HPV de alto risco: 16, 18, 58, 33, 45, 31, 52, 35, 59,
39, 51 e 56 – Genótipos mais associados ao câncer
de colo do útero.
•5 mais frequentes:
•HPV 16: 53,5% Fonte: Li N, Franceschi S, Howell-Jones R,
Snijders PJ, Clifford GM. Human
•HPV 18: 17,2% papillomavirus type distribution in
•HPV 45: 6,7% 30,848 invasive cervical cancers
worlwide: Variation by geographical
•HPV 31: 2,9% region, histological type and year of
•HPV 33: 2,6% publication. Int J Cancer. 2010 Apr 19.
 Principal agente etiológico do câncer de
colo uterino: Papilomavirus Humano - HPV

– Mais de 90% dos tumores

– Detectar DNA-HPV

– Métodos aprovados e testados:

• Captura Hibrida (II, III) – Dois grupos
• Baseados em PCR

– Genotipagem
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 Rastreamento convencional

Programas de screening

Citologia

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 Van Oortmarssen et al., 1992

Linos & Riza, 2000

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Problemática
• Citologia somente: • Inconsistência:
– Falso-negativos LSIL x HSIL
– Subjetividade

• Teste molecular: • Teste molecular:

– Detecta o DNA-HPV – Não indica lesão

• Outros métodos

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Problemática
• Vacina • Acompanhamento
– HPV 16, 18, 6, 11 das mulheres
• 16 e 18 (oncogênicos) vacinadas?
• 6 e 11 (verrucosos)
• E os demais vírus?
– Falsa - proteção
Ex. HPV 31 na Grécia

• Infecções com
associações (Co-
infecções)?
Prof. Jacinto Costa
HPV

-Europa/Ásia – HPV 16 (mais prevalente). HPV 33,

segundo subtipo na Ásia (não tem importância na
Europa).

-América do Sul e Central – HPV 16. Agora o HPV 58

em segundo lugar.

-África (Nigéria) – HPV 35, cuja frequência é baixa na

Europa.

Prof. Jacinto Costa

Problemática
• Vacina
– Encontrou-se apenas uma proteção cruzada muito boa
para HPV45 e apenas parcial para HPV31 (Harper et al.,
2006).

– Vale investir em estudos ou fabricação de vacinas para

outros tipos de vírus, já que HPV16 e 18 representam
maioria das lesões?

– Vacinação em massa – anormalidades oriundas de

HPV16 e 18 diminuirá drasticamente e causará impacto
no número de citologias anormais.
Prof. Jacinto Costa
Pergunta
• Qual seria o método mais adequado para um
programa de screening?

– Só citologia?
– Só molecular?
– Citologia + molecular?
– Outros métodos: enzimáticos???

– Custos?
– Qual o intervalo de tempo/volta: 3, 5, 6, 8?
Prof. Jacinto Costa
Experiências – Países Nórdicos
• Início dos programas:
entre 1960-70

• Muitas adaptações
– Islândia/Finlândia/Nor
uega: aumento das
taxas nos últimos 10
anos
• Melhoramentos nos
programas!

Journal of Cytopathology, 20(1):8-20 – Blackwell Publishing Ltd.

Prof. Jacinto Costa
Experiências – Países Nórdicos

• Finlândia e Suécia: Resultados

– Automação inconsistentes
– HPV – Teste Encontram-se mais
– Amplamente testados lesões pré-invasivas
e falso-positivos

Journal of Cytopathology, 20(1):8-20 – Blackwell Publishing Ltd.

Prof. Jacinto Costa
• Finlândia e Suécia: Conclusão

O Sucesso parece está mais relacionado:

•Cobertura
•Atendimento
•Organização sistemática do serviço
Não

Refinamento tecnológico ou teste de screening

Ahti et al. Alternative technologies in cervical cancer screning: A randomised
evaluation trial. BMC Public Health 2006;6;252.
Journal of Cytopathology, 20(1):8-20 – Blackwell Publishing Ltd.
Considerações Finais
• Questões:
– Uso de RNA
• Vantagem: detecção de transformação neoplásica
• RNAm E6/E7
• Marcador precoce – valor preditivo positivo
• Maior especificidade – câncer cervical

M. Nasioutziki, K. Dinas, A. Danielides, G. Koutsos, A. Loufopoulos, J. Tzafettas. HPV DNA

– versus RNA – Based testing in clinical practice. 2nd University Dept Obstetrics &
Gynaecology, Hippokration General Hospital, Thessaloniki, Greece.

Prof. Jacinto Costa

 O screening pelo Papanicolaou demonstrou efetiva
redução na incidência e mortalidade por câncer cervical
em vários países, porém essa redução varia
significativamente.

A variação depende do acesso

e
qualidade no screening
Ahti et al. Alternative technologies in cervical cancer screning: A
randomised evaluation trial. BMC Public Health 2006;6;252.
www.jacintocosta.com.br
 Obrigado!
Jacintocosta@hotmail.com