CAPTULO 11 CIANOBACTRIAS E CIANOTOXINAS

Luciano Felcio Fernandes Ana Carolina Wosiack Leuni Domingues Cludia Vitola Pacheco Patrcia Esther Lagos

11.1. CARACTERSTICAS GERAIS

As cianobactrias so organismos fotoauttrofos procariontes de organizao talina simples, geralmente unicelulares isolados ou formando colnias envolvidas por mucilagem, e filamentos. Elas possuem clorofila-a e vrios pigmentos acessrios, cujos principais so a ficocianina e aloficocianina. O produto de reserva a cianoficina, tambm ocorrendo lipdeos. A parede celular das cianobactrias composta por vrias substncias, entre elas a murena (peptidoglicana) e alguns aminocidos e glucosaminas de estrutura idnticas s de bactrias gram negativa. Isso evidencia bem a afinidade evolutiva entre as cianobactrias e as bactrias. No h celulose. Estes organismos reproduzem-se assexuadamente, atravs de divises da clula ou formao de esporos e clulas de resistncia. Algumas tambm podem atuar secundariamente na reproduo, j que podem formar novos indivduos ou resistir condies ambientais desfavorveis, germinando posteriormente, como o caso dos hetercitos e acinetos. O hetercito uma clula de parede espessada, contedo claro, e responsvel pela assimilao do nitrognio gasoso (N2) e sua converso em formas inicas assimilveis pelas outras clulas vegetativas. O acineto armazena substncias de reserva, apresentando contedo escuro e, freqentemente ornamentaes na parede espessa. Os primeiros registros fossilferos datam de aproximadamente 3,6 bilhes de anos, sendo as primeiras algas a aparecer na Terra. No decorrer deste longo perodo, houve tempo suficiente para que o processo evolutivo originasse diferentes adaptaes entre as espcies, gerando estratgias adaptativas interessantes e eficientes, especialmente importantes em situaes de stress ambiental, como nos processos de eutrofizao. A taxonomia do grupo est fundamentada na organizao do talo, nas medidas das clulas vegetativas e reprodutivas, presena e espessura da bainha de mucilagem, nmero, localizao e espaamento dos acinetos e hetercitos, presena de vesculas de gs e grnulos de polifosfato, entre outras. Mais recentemente, os padres de diviso celular (orientao do eixo de diviso celular) e morfologia ultraestrutural das lamelas tem sido utilizados para a identificao das espcies. A literatura para identificao das espcies vasta, mas citamos algumas obras bsicas que contemplam vrios gneros e que certamente auxiliaro o profissional que necessita identificar gneros e espcies ocorrentes no Brasil: Bourrely, Clia Santana, Anagnostidis & Komark (1985, 1988, 1990), Komark & Anagnostidis (1986, 1989). Para aqueles que no possuem experincia com o grupo, recomendamos que sejam feitas fotografias em escala da espcie encontrada bem como as medidas mencionadas acima e posterior envio destes dados a um especialista para confirmao, citando o mesmo quando da divulgao ou publicao dos resultados. Os sistemas de classificao mais modernos, como os de Anagnostidis & Komark (1985, 1988, 1990), Komark & Anagnostidis (1986, 1989), tm incorporado no somente as caractersticas morfolgicas e ultraestruturais do grupo, mas tambm a gentica molecular, permitindo uma viso mais filogentica das cianobactrias. A ecologia do grupo bastante diversificada em virtude das estratgias adaptativas interessantes que as cianobactrias apresentam, as quais sero detalhadas neste captulo. Estas adaptaes explicam seu

sucesso em responder rapidamente eutrofizao de reservatrios e lagos naturais, tornando-se dominantes na comunidade fitoplanctnica. Os fatores biticos e abiticos que regulam a dinmica temporal e espacial das cianobactrias j foram descritas no Captulo 10, juntamente com os outros grupos do fitoplncton.

11.2. EVOLUO EM AO: AS ESTRATGIAS ADAPTATIVAS DAS CIANOBACTRIAS

As principais estratgias adaptativas que tem conferido grande sucesso evolutivo s cianobactrias so descritas a seguir, bem como comentrios mais especficos sobre algumas espcies ou gneros que ocorrem em reservatrios do sul do Brasil. Embora o objetivo principal do captulo anterior corresponda informao bsica sobre ecologia do fitoplncton, uma ateno especial foi dispensada s cianobactrias neste captulo, devido ao seu papel preponderante como formadoras de floraes e as implicaes sanitrias que da se originam. Esta discusso reflete uma sntese de trabalhos mais especficos sobre cianobactrias (Reynolds, 1984, 1999; Sandgren, 1990; WHO, 1999) bem como de observaes "in vivo" das espcies sob microscpio tico e das atividades desenvolvidas durante o Projeto Ira. Algumas espcies de cianobactrias (diazotrficas ou no) so capazes de assimilar compostos orgnicos de baixo peso molecular, e podem subsistir inteiramente deles na ausncia de luz. Esta forma de aproveitamento extremamente vantajosa em ambientes com elevada turbidez e baixa penetrao de RFA, limitando a fotossntese, ou em guas com zona ftica extensa na qual uma estratgia heterotrfica seria conveniente para manter o metabolismo celular e a viabilidade das clulas para um prximo evento de crescimento intensivo. Alm disso, a utilizao dos compostos orgnicos atravs de respirao aerbica gera reas anxicas ao redor do hetercito, impedindo a inativao da nitrogenase durante a fixao do nitrognio gasoso pelo hetercito. Muitas cianobactrias produzem quelantes (hidroxamatos) eficientes em seqestrar metais trao da gua presentes em baixssimas concentraes, desta forma garantindo o funcionamento normal das clulas. Substncias orgnicas tambm podem atuar como quelantes naturais, mas imobilizando metais txicos s cianobactrias, extremamente sensveis a eles, e permitindo seu crescimento. Concluindo, a presena de matria orgnica dissolvida tende a incrementar o crescimento das cinobactrias atravs da facilitao de processos de assimilao de macronutrientes (N e P) e micronutrientes (Fe, Mg, etc.), e devem constituir uma das vrias explicaes para a dominncia e sucesso das cianobactrias em ambientes eutrofizados, especialmente aqueles sujeitos s conseqncias negativas das atividades humanas. Se estas adaptaes coincidem com variveis ambientais favorveis como temperatura elevada (superior a 25C), estratificao trmica diria ou sazonal, ento a possibilidade de ocorrncia de floraes aumenta substancialmente. Em reservatrios temperados, as floraes de cianobactrias nocivas tendem a concentrar-se no vero; por outro lado, nas regies subtropicais e tropicais estes eventos se intensificam, ocorrendo por vrios meses, pois as condies climticas so mais constantes e a temperatura mais elevada. Estas caractersticas evidenciam a necessidade de maior cuidado quanto s atividades antrpicas que geram eutrofizao nos trpicos, pois elas tero seus efeitos intensificados (Lewis, 2000, e captulo 10). Vrias espcies so capazes de assimilar ortofosfato em excesso (luxury consumption) durante perodos de elevadas concentraes do nutriente na gua, armazenando-o intracelularmente na forma de polifosfatos atravs de fosfatases, e que podem ser visualizados em microscopia tica como grnulos (p.e. Anabaena spp, Aphanizomenon flos-aquae). Durante perodos de depleo de fsforo, as reservas so utilizadas. Em alguns casos, em perodos de forte estratificao trmica, pode ocorrer rpida migrao vertical para guas da zona aftica, e as clulas armazenarem fosfato em excesso e, em seguida, retornarem ao epilmnion para realizar intensa fotossntese. Alguns grupos formam uma clula especial denominada hetercito, responsvel por fixao de nitrognio na forma gasosa (N2) quando no h concentrao mnima crtica de nitrognio na forma inica assimilvel na gua, proporcionando-lhe vantagem competitiva em relao s outras espcies algais, que no possuem esta adaptao. O hetercito se desenvolve a partir de uma clula vegetativa normal, que se torna maior, com parede espessada e contedo claro. Nestas cianobactrias o N 2

transformado em NH4 atravs da enzima nitrogenase, a qual contm ferro e desnaturada em presena de oxignio. Entretanto, o mais interessante e paradoxal que geralmente a fixao de N2 ocorre em guas bem oxigenadas mas, obviamente, a alga necessita da energia gerada pela fotossntese, a qual produz oxignio, e deste modo inviabilizaria a fixao do nitrognio pelo hetercito. Como ter sido resolvido o dilema? A resposta est no prprio hetercito, como descrito abaixo no Quadro 11.1. Quadro 11.1. Caractersticas qumicas do hetercito que permitem a fixao do nitrognio gasoso (N2). o hetercito consome oxignio em altas taxas durante a respirao; sua parede espessa restringe a entrada de O2 e N2; a nitrogenase se satura concentrao baixssima de N2 (0,2 atm), ento a fixao no afetada pela reduo de permeabilidade do gs, e: o hetercito no possui o fotossistema II, a parte do aparato fotossinttico que produz O2. o resultado a anoxia no interior do hetercito , permitindo o funcionamento da nitrogenase. Quando as outras fontes de nitrognio (NO4, NO3, NO2) esto reduzidas ocorrem as floraes de vero ou outono de cianfitas fixadoras de N2 (Aphanizomenon, Anabaena, Cylindrospermopsis, Nostoc, Nodularia, entre outras) em lagos eutrficos do mundo onde ocorre estratificao trmica. Ento o N 2 pode representar frao significativa do estoque de nitrognio na gua. Naturalmente, os metais de transio (ferro e molibdnio) devem estar presentes pois eles controlam a atividade da nitrogenase. Alm disso, as concentraes de nitrato e amnia devem ser pequenas, pois eles controlam a formao dos hetercitos (Horne, 1987; Howart et al., 1988). importante ressaltar que algumas espcies fixam N gasoso sem a formao de hetercito. O fosfato tambm pode ser armazenado no interior da clula na forma de cristais durante perodos de maior concentrao deste nutriente. Aps seu consumo por outras microalgas do fitoplncton, elas crescem intensivamente, atingindo propores de floraes. Vrias espcies de Anabaena ou de gneros prximos respondem rapidamente perodos de turbulncia da coluna de gua ou chuvas intensas (ressuspendendo nutrientes do fundo) seguidos de perodos calmos e ensolarados. Estas condies lhes permitem otimizar a fotossntese na superfcie da gua. A produo de vesculas gasosas (aertopos) uma importante adaptao para viabilizar a suspenso das clulas na gua. Elas ocorrem em tricomas (como Anabaena) e colnias (Microcystis), e lhes permitem posicionar-se nas zonas mais superficiais da coluna de gua, otimizando a fotossntese, ao mesmo tempo em que podem causar o efeito de "sombreamento" das outras espcies localizadas mais abaixo e, portanto, recebendo menor intensidade luminosa para a fotossntese. Alm disso, o posicionamento prximo superfcie da gua permite-lhes aumentar a assimilao de nitrognio gasoso, uma vez que este elemento ocorre em maiores concentraes na superfcie, a partir de difuso com a atmosfera. Simultaneamente, como apresentam elevada eficincia fotossinttica mesmo quando submetidas intensidade luminosa excessiva (para outras algas) vrias espcies mantm ou aumentam seu crescimento, ao mesmo tempo em que a maioria da comunidade fitoplanctnica apresenta fotossntese inibida pelo excesso de luz. A produo de bainhas ou matriz de mucilagem espessada ao redor da parede celular dificulta a manipulao e ingesto das clulas pelos organismos do zooplncton, diminuindo significativamente as taxas de herbivoria. Muitas espcies nocivas como Microcystis spp, Anabaena spp. apresentam esta adaptao, alm das outras citadas acima, ajudando a explicar o sucesso destas cianobactrias em reservatrios eutrofizados. Finalmente, seria interessante perguntarmos porque as cianobactrias no ocorrem em abundncia em ambientes no eutrofizados. A resposta parece simples: no h aporte suficiente de N e P suficientes para sustentar o crescimento rpido e massivo das espcies nocivas, especialmente as coloniais, que necessitam de maiores quantidades de nutrientes para otimizar a reproduo. No caso das filamentosas, com taxa de crescimento mais lenta quando comparada com outros grupos (diatomceas, clorfitas, crisfitas, etc.), o problema se aprofunda. Em certas situaes, a ausncia de um micronutriente como Fe ou Mg em concentraes mnimas pode ser a causa preponderante. Obviamente, outras espcies de cianobactrias podem crescer em ambientes oligotrficos a mesotrficos, mas normalmente no so espcies nocivas. Um exemplo a ocorrncia de

Cyanogranis ferruginea no Reservatrio de Piraquara I, Piraquara, Paran, a espcie mais abundante em termos de densidade celular, com pequenas dimenses (dimetro 2m) e organizadas em colnias esfricas de 3-5 clulas. Neste reservatrio jamais se observou qualquer cianobactria nociva em contagens com microscpio invertido, apenas no plncton de rede, desde sua construo em 1979.

11.3. ESTUDO DE CASO NO RESERVATRIO DO IRA

Um dos reservatrios que compem o sistema de abastecimento da Regio Metropolitana de Curitiba (RMC) o Reservatrio do Rio Ira localizado no municpio de Pinhais, Paran e responsvel por cerca de 40% da gua tratada para consumo. Desde o trmino de seu enchimento no incio de 2001, o reservatrio vem sofrendo processo contnuo de degradao ambiental, afetando inclusive a qualidade de suas guas (IAP, 2001, relatrio no publicado). O reservatrio vem apresentando sucessivas e massivas floraes das microalgas cianobactrias Anabaena sp. e Microcystis sp., as quais tm comprometido seriamente a qualidade de gua e resultado em elevados custos de tratamento por parte da SANEPAR, empresa responsvel pelo abastecimento pblico na RMC. Este problema foi particularmente percebido pela populao da capital durante a florao intensa ocorrida em Maio/Agosto de 2001, quando mesmo a gua tratada apresentou elevadas concentraes de molculas organolpticas (isoborneol e metil-geosmina), conferindo forte odor e sabor gua consumida. Estas floraes de cianobactrias so a conseqncia mais visvel, e talvez mais significativa, do processo de degradao ambiental no Ira originada das atividades antrpicas, causando a eutrofizao artificial do reservatrio. As algas e suas toxinas tambm representam mais um material orgnico que dever ser eliminado durante o processo de tratamento de gua, aumentando os custos devido necessidade de se utilizar maior quantidade de substncias floculantes, cloro, carvo ativado, etc., encarecendo significativamente o processo de tratamento da gua (Branco, 1978 e 1984; Rebouas et al., 1999; Chorus & Bartram, 1999). Como resultado final, as taxas pblicas de consumo de gua tratada aumentam, prejudicando especialmente o consumidor domstico. Um dos ncleos temticos do Projeto Ira foi denominado Ecologia De Cianobactrias cujos principais objetivos de investigao foram: desenvolver um estudo temporal (maro de 2002 a Agosto de 2003) e nictemeral (Vero e Inverno) sobre a abundncia e biomassa da comunidade fitoplanctnica em relao aos fatores abiticos no Reservatrio do Ira e; determinar os fatores ambientais que conduzem eutrofizao e proliferao massiva de cianobactrias. O Reservatrio do Ira ocupa uma rea de 15 km2, volume til de 5,25x106 m3, comprimento de 6,45km, tempo de residncia estimado em 8-13 meses e prof. mdia de 4,7m. As amostras foram coletadas quinzenalmente em trs profundidades (sup., base da zona ftica e fundo) na rea mediana da barragem (PC502), regio mais profunda do reservatrio e em outras estaes mensalmente. Dados de temperatura, disco de Secchi, pH, oxignio dissolvido, densidade celular, clorofila a parmetros qumicos e dados climatolgicos tambm foram obtidos. A determinao de abundncia dos grupos e espcies do fitoplncton foi feita atravs de contagem em microscpio invertido. Os dados fornecidos a seguir referem-se geralmente Estao PC 502, que representa razoavelmente bem os resultados para as outras estaes. As diferenas observadas entre as estaes tambm foram estudadas de modo a detectar os fatores envolvidos na distribuio horizontal das cianobactrias.

11.3.1. Resultados principais e Discusso

As principais cianobactrias encontradas no perodo analisado foram Aphanocapsa delicatissima, C. raciborskii, M. aeruginosa, Microcystis spp e Pseudanabaena mucicola (v. Pranchas de figuras). Tambm foram observadas concentraes elevadas de Synechococcus sp. e Synechocystis sp. Diferenas significativas de densidades dos txons nas trs profundidades foram registradas (Fig. 2). Na superfcie houve concentrao maior de M. aeruginosa, Microcystis panniformis, M. weisenbergii e P. mucicola. Na base da zona ftica destacaram-se as formas filamentosas, como C. raciborskii. A. delicatissima distribuiu-se por toda a coluna dgua. C. raciborskii e Microcystis spp. foram os organismos dominantes em abril, variando de 4311 7207inds/ml. Neste perodo a clorofila-a oscilou de 46,0 71,7 g/l. Microcystis. spp apresentaram seu pico de abundncia em dezembro com 8956

43183cls/ml; a clorofila de 9,2 25,6g/l no mesmo perodo. Elakatothrix sp, Closteriopsis sp, Scenedesmus spp e Tetrastrum sp foram importantes gneros dentre as clorfitas estando presentes em grande parte das amostras. Aulacoseira spp. ocorreram ao longo de todo o perodo, e especialmente abundantes de Junho a Agosto. Em dinfitas, Peridinium umbonatum apresentou um pico de densidade em agosto, perodo de inverno atpico aps alguns dias sem chuva e altas temperaturas. Embora a correlao entre os valores de clorofila-a e as densidades de fitoplncton ou cianobactrias tenha sido pequena (R2=0,488) ela foi significativa, e a comparao entre os grficos da Figura 1 mostra que h uma coincidncia de ocorrncia entre estes parmetros. Alm disso, se apenas os dados com maiores valores de clorofila-a so tomados em considerao, ento a correlao aumenta. A partir da Fig. 2, nota-se a sucesso entre as espcies de cianobactrias no decorrer do perodo estudado. O primeiro pulso de crescimento foi essencialmente dominado por Microcystis aeruginosa em Fevereiro (no representado no grfico), quando havia maior concentrao de nutrientes, especialmente fsforo. Aps o consumo dos nutrientes e diminuio do aporte devido a um perodo menos chuvoso, C. raciborskii foi observada em elevadas densidades, quando a temperatura da gua manteve-se elevada, e com baixas concentraes de P e N. A estratgia de C. raciborskii inclui a formao de hetercitos e o acmulo em excesso de fosfato, permitindo seu crescimento em perodos em que estes nutrientes j tenham sido consumidos por outras algas no reservatrio. A formao destas estruturas foi observada aproximadamente 30 dias aps o crescimento intensivo, indicando que houve uma rpida absoro de N no reservatrio. Provavelmente, aps o consumo de P e a queda de temperatura, bem como da maior circulao do reservatrio, a florao de C. raciborskii entrou em declnio.
P r o fu n d id a d e ( m ) 0

5
19

S 2

N 0 0 1

M 2

J 0

J A 0 2

A M J 2 0 0 3

Fig. ?: Distribuio vertical de temperatura entre 2001 e 2003 no reservatrio do Ira. H tendncia de estratificao no vero, mas as circulaes dirias e aps poucos dias de estratificao so freqentes, caracterizando o reservatrio como polimtico.

Em Julho e Agosto de 2002 uma cianobactria filamentosa foi responsvel pela maior abundncia. De Setembro a Fevereiro M. aeruginosa foi dominante e representou mais do que 99% do fitoplncton. Seu crescimento foi favorecido pelo perodo de maior pluviosidade, carreando maior quantidade de nutrientes para o reservatrio, o que favoreceu tambm seu rpido crescimento, ao contrrio das espcies filamentosas, com crescimento mais lento. Em Janeiro e Fevereiro tambm observou-se um pequeno perodo de crescimento de A. solitaria, logo aps a florao M. aeruginosa. Como os valores de P e N foram mais baixos naquele perodo, h a possibilidade que a presena de A. solitaria tenha sido resultante de sua capacidade de formar hetercitos e acumular P em excesso. Sempre importante relembrar que o elevado tempo de residncia no reservatrio do Ira um fator que intensifica os processos discutidos acima, alm de auxiliar na reteno das clulas e, em conseqncia, da abrangncia geogrfica e durao das floraes Na Fig. 3 est mostrada a variao anual do fitoplncton e da clorofila-a. A comunidade foi inteiramente dominada pelas cianobactrias (97,0-99,9%). Os valores de clorofila-a geralmente foram elevados, superiores a 24g/l, caracterizando o reservatrio como eutrfico na maior parte do ano, e como hipereutrfico em alguns meses, quando ocorreu intensa florao de cianobactrias. Os resultados de duas coletas foram selecionados para exemplificar a hiptese de interao entre a meteorologia e a distribuio horizontal de cianobactrias dominantes no reservatrio. Na coleta de 18/03/2002, C. raciborskii distribuiu-se de modo aproximadamente homogneo em todas as estaes no reservatrio (Fig. 1). Sua densidade variou de 2628 a 19565 indivduos/ml; a clorofila-a de 19,7 a 40,6 g/l. Os ventos predominantes nos 03 dias que antecederam coleta foram dos quadrantes N

(25%), NE (21%) e E (16%); portanto, geralmente tendendo a transportar clulas para a barragem e/ou para sua margem esquerda. Na coleta de 07/10/2002, Microcystis spp. apresentou ntido acmulo no lado esquerdo do reservatrio. Sua densidade variou de 2685 a 52734 cs/ml; a clorofila-a de 29,9 a 96,4 g/l. Os ventos predominantes nos 03 dias que antecederam coleta foram N (18%), NE (26%) e E (16%). Na Figura ??, a distribuio nas duas coletas est representada pela clorofila-a, considerando que cada uma das cianobactrias mencionadas foi responsvel por 99% das densidades. Nas duas coletas a velocidade mdia dos ventos foi 1,9 m/s. Observaes visuais da florao tambm evidenciaram o acmulo na margem esquerda do reservatrio. Naturalmente, nas outras coletas tambm foram observados acmulos na margem direita, mas em freqncia bem inferior da margem oposta. A modelagem da hidrodinmica do reservatrio, gerada a partir da mdia mensal da intensidade de vento (2,0m/s) e da freqncia da direo (dominando ventos de NE, N e E) (Fig. 2), mostrou que a distribuio horizontal das cianobactrias significativamente influenciada pelos ventos, pois este fator incrementa o transporte de material em suspenso na gua para a margem esquerda e a barragem do reservatrio at o ponto de tomada da gua (tulipa). Sua morfometria (espelho de gua extenso), reduzida profundidade e situao topogrfica tambm devem facilitar este processo advectivo. A tendncia a acmulo nas reas prximas barragem do reservatrio foi INSERIR AQUI A FIGURA COLORIDA. MENCIONAR QUE ELA VAI JUNTO COM AS PRanCHAS DE ESPECIES. particularmente evidente para M. aeruginosa e Anabaena solitaria. Espcies que reduzem sua densidade, por exemplo produzindo vesculas de gs e mucilagem, para aumentar o tempo de suspenso prximo superfcie so mais facilmente transportadas e acumuladas na margem esquerda. Por outro lado, C. raciborskii, uma espcie que evita a superfcie e exibe intensa migrao vertical, foi menos afetada pelos ventos e hidrodinmica, distribuindo-se de modo aproximadamente homogneo na regio lntica, embora com concentrao um pouco maior prximo barragem. Os resultados observados em campo corroboram o modelo de circulao do reservatrio desenvolvido pela equipe do Dr. Eduardo Gobbi (v. Captulo ??). Um prximo passo seria investigar a hidrodinmica in situ do reservatrio e sua influncia real sobre a distribuio horizontal das cianobactrias txicas, de modo a ratificar as observaes mencionadas acima.

11.3.2. Causas das floraes no Reservatrio do Ira

A partir dos resultados encontrados, e incorporando as informaes geradas pelas outras equipes cientficas do Projeto Ira, os fatores ambientais potencialmente responsveis pela sucesso e crescimento intensivo das cianobactrias so mostrados no Quadro 11.2. Quadro 11.2. Fatores causais do crescimento intensivo de cianobactrias no Reservatrio do Ira.

a. elevado aporte de nutrientes no incio da primavera e vero, resultantes de efluentes domsticos e carreados

pelas chuvas, favorecendo M. aeruginosa, com taxa de crescimento maior do que as espcies filamentosas; b. temperatura elevada no final do vero simultnea depleo de nutrientes devido ao consumo por Microcystis, favorecendo C. raciborskii e A. solitaria, mas no Microcystis spp; c. auto-regulao pelas prprias espcies dominantes, ou seja, quando uma espcie de rpido crescimento (como Microcystis) consome os nutrientes nos perodos de maior concentrao, ocorre sua reduo em abundncia, cedendo espao para espcies filamentosas com estratgia de assimilao de N gasoso por meio de hetercitos, e que exibem fisiologia tipo consumo em excesso de P. Estas estratgias tambm so dependentes dos fatores ambientais descritos acima. d. Influncia da climatologia regional sobre a sucesso das cianobactrias; por exemplo, quando as freqentes entradas de frentes frias influenciavam a regio, as concentraes de clorofila-a e de cianobactrias reduziam, paralelamente ao aumento de diatomceas, mais adaptadas s baixas temperaturas e menores intensidades luminosas, especialmente no Outono e Inverno; e. Aporte regular de nutrientes em concentraes que permitem o desenvolvimento de floraes (e manuteno de clorofila >20g/L) em quase todos os meses do ano, restringindo em parte a magnitude do efeito de fatores climatolgicos sobre as cianobactrias; f. acmulo de clulas nas margens a partir da interao entre a circulao atmosfrica e a gua e, portanto,

intensificao dos parmetros de biomassa algal (abundncia e clorofila-a), causando um efeito de florao em determinadas reas ainda maior do que aquelas observadas no restante do reservatrio. g. O reservatrio apresenta profundidade mdia reduzida (4 metros), particularmente quando comparada sua rea superficial, cujo espelho de gua extenso (v. Figura ??), gerando uma relao superfcie/volume muito elevada, especialmente quando comparada outros reservatrios. Esta caracterstica morfomtrica facilita a ressuspenso dos nutrientes do fundo, bem como aumenta a rea disponvel para fotossntese do fitoplncton no reservatrio. Adicionalmente, h extensas reas inundadas muito rasas (< 1 metro de profundidade), facilitando a troca de nutrientes entre o sedimento e a gua e contato destas substncias com as algas, promovendo ainda mais seu crescimento. Finalmente, o tempo de residncia do reservatrio longo (8-14 meses), causando a maior reteno dos nutrientes e das algas, impedindo portanto a renovao das guas e sua substituio por guas com melhores qualidades fsica e qumica.

Evidentemente, preciso levar em considerao que o reservatrio do Ira entrou em funcionamento apenas recentemente (Janeiro de 2001) e, portanto, a comunidade fitoplanctnica est em processo de adaptao s suas condies ambientais. E estas mesmas condies ainda no apresentam um ciclo anual estvel, o que certamente traz conseqncias para a sucesso sazonal das espcies. Uma evidncia disto a ocorrncia de florao intensa de A. solitaria de Julho a Setembro de 2001, e seu desaparecimento posterior, sendo substituda por M. aeruginosa e C. raciborskii. Apenas em Janeiro e Fevereiro de 2003, A. solitaria ocorreu em densidades um pouco mais elevadas. Por outro lado, o excessivo aporte de nutrientes, as caractersticas morfomtricas do reservatrio e a presena de espcies com estratgias tpicas de guas eutrofizadas permitem prever que as cianobactrias nocivas sero o grupo dominante aps a estabilizao ambiental do reservatrio Ira, como tem acontecido em outros reservatrios do Brasil.

11.3.3. Implicaes para o manejo do reservatrio do Ira

A partir dos resultados obtidos algumas aplicaes prticas podem ser implementadas ou estudadas mais profundamente em projetos futuros:

O planejamento amostral do monitoramento de cianobactrias pela SANEPAR e rgos de fiscalizao deve levar em conta a distribuio horizontal e a migrao vertical das espcies-alvo (incrementando a portaria GM 518, Maro de 2004); A periodicidade amostral deve adaptar-se dinmica de crescimento das cianobactrias: intervalo mximo de 15 dias, e de at 05 dias em perodos de floraes mais intensas; Iniciar o monitoramento de P e N (total) e clorofila-a para futuras aes de manejo, etc., e dentro dos limites de deteco desejveis para algas; Aprofundamento e validao dos nveis de alerta, discutidos no Captulo ??; Testar a eficincia do manejo das comportas da barragem em relao altura de tomada de gua dependendo da espcie causadora de florao; Verificar a possibilidade de reduo do tempo de residncia no reservatrio em perodos de maior pluviosidade; Dar continuidade e estabelecer parcerias para apoios financeiro e logstico a projetos com foco bem definido em eutrofizao como cultivos algais p/ determinao dos gatilhos ambientais e de toxicidade das cepas, validao dos modelos de hidrodinmica e interao com as floraes, estimativas das cargas de nutrientes (P e N) no reservatrio e sua relao com a produtividade primria, clorofila-a e abundncia de espcies-alvo de cianobactrias, etc.

11.4. CIANOTOXINAS
11.4.1. Conceitos Gerais
As cianotoxinas so substncias produzidas pelas cianobactrias. A razo da sua sntese ainda no esta esclarecida, mas sugere-se que seja para minimizar o efeito da herbivoria, como acontece com os vegetais superiores.

O mau uso dos recursos hdricos tem causado o crescimento intensivo das cianobactrias.Muitos eventos relacionados intoxicao de organismos animais em decorrncia das cianobactrias foram relacionados cronologicamente no Guia da A.W.W.A Cyanobacterial Blue-Green Algae, 1995. Neste estudo so relatados casos de intoxicaes por cianotoxinas desde 1878 at 1991. Foram 94 casos descritos de intoxicaes de animais domsticos, rurais e selvagens, nos seguintes pases: Austrlia, USA, Canada, Finlndia, USSR, S. frica, Bermuda, Nova Zelndia, Inglaterra, Argentina, Frana, Esccia e Alemanha. Este estudo nos mostra que no so raros os eventos txicos e cada vez mais casos de intoxicaes vem sendo relacionados a presena de toxinas no meio ambiente, como por exemplo a sndrome de Caruaru, como ficou conhecida a morte de 52 pacientes com sintomas de hepatotoxicose aguda causada por microcistinas em Caruaru- Pe Brasil (Azevedo, 1996). Alguns casos de presenas de cianotoxinas no estado do Paran sero relatados neste captulo. As Cianotoxinas so divididas de acordo como os seus mecanismos de ao em trs grupos: Neurotoxinas, Hepatotoxinas e Dermatotxicos.

Fig. ??: Estrutura qumica das toxinas de cianobactrias mais comuns (de Kaebernick & Neilan, 2001, FEMS Microbiol. Ecol. 35:1-9)

11.4.2. Cianotoxinas quanto aos modos de ao

Neurotoxinas: atuam no sistema nervoso e esto descritos trs tipos: Anatoxina-a, Anatoxina-a(s) e Saxitoxinas. Anatoxina-a : um alcalide neurotxico que age como um potente bloqueador neuromuscular ps sinptico de receptores nicotnicos e colinrgicos. A anatoxina-a liga-se irreversivelmente a receptores de acetilcolina, que degradada pela acetilcolinesterase. A DL 50 por injeo intraperitonial (i.p.) em camundongos, para a toxina purificada, de 200 g/Kg de peso corpreo, com um tempo de sobrevivncia de 1 a 20 minutos(Carmichael, 1992; Falconer, 1998). Os sinais de envenenamento por esta toxina em animais selvagens e domsticos incluem: desequilbrio, fasciculao muscular, respirao ofegante e convulses. A morte devida a parada respiratria e ocorre de poucos minutos a poucas horas, dependendo da dosagem e consumo prvio de

alimento. Doses orais produzem letalidade aguda em concentraes maiores, mais a toxicidade das clulas mesmo assim alta o suficiente para que os animais precisem ingerir de poucos mililitros a poucos litros de gua da superfcie das floraes para receber uma dose letal (Carmichael, 1994). No existem ocorrncias determinadas destas toxinas em floraes no Pas. Anatoxina-a(s): um organofosforado natural (N-hidroxiguanidina fosfato de metila) e tem um mecanismo de ao semelhante a Anatoxina-a, pois inibe a ao da Acetilcolinesterase, impedindo a degradao da Acetilcolina ligada aos receptores. Devido a intensa salivao observada em animais intoxicados por esta Neurotoxina, ela foi denominada Anatoxina-a(S) . A DL50(i.p.) em camundongos de 20 g/Kg de peso corpreo e, portanto, dez vezes mais potente que a Anatoxina-a, porm no h registro de intoxicao humana por esta toxina. Devido a pouca ocorrncia deste tipo de neurotoxina, ainda no foi estabelecido um limite mximo aceitvel para consumo oral humano (Carmichael,1994; Falconer, 1998). Devido a falta de mtodos analticos precisos e de padres de referncia para toxina utiliza-se o mtodo de inibio enzimtica da acetilcolinesterase (AChE ), para estimar a sua presena em florao de cianobactrias (Monserrat et al, 2001). Para o estado do Paran detectou-se 5,11% de inibio da acetilcolinesterase em amostras contendo Anabaena spiroides na represa de Alagados em Ponta Grossa no ano de 2000 (Yunes et al 2003).

Saxitoxinas: So um grupo de Neurotoxinas conhecido popularmente como venenos paralisantes

de mariscos, ou PSPs, que foram primeiramente isoladas de dinoflagelados marinhos, responsveis pela ocorrncia de mars vermelhas. Estas neurotoxinas so um grupo de alcalides carbamatos que podem ser no sulfatados (Saxitoxinas e NEO), com um nico grupamento sulfato (G- toxinas) ou com dois grupamentos sulfatos (C-toxinas). Alm dessas, estruturas com grupamentos decarbamoil (dcSTX ou dcGTX) e novas toxinas relacionadas tm sido recentemente isoladas (tabela 1). A toxicidade desse grupo de alcalides varia, sendo a Saxitoxina a mais potente. A DL50(ip) em camundongos para Saxitoxina purificada de 10 g/Kg de peso corpreo, enquanto que por consumo oral a DL50 de 263,0 g/Kg de peso corpreo (Chorus e Barthram, 1999). As saxitoxinas inibem a conduo nervosa por bloqueamento dos canais de sdio, afetando ou a permeabilidade ao potssio ou a resistncia das membranas. Os sinais clnicos de intoxicao humana incluem tontura, adormecimento da boca e de extremidades, fraqueza muscular, nusea, vmito, sede e taquicardia. Os sintomas podem comear 5 minutos aps a ingesto e a morte pode ocorrer entre 2 a 12 horas. Em casos de intoxicao com dose no letal, geralmente os sintomas desaparecem de 1 a 6 dias (Carmichael,1994). Entretanto, no se tem conhecimento de efeitos crnicos por falta de estudos de longa durao com animais. Embora a Organizao Mundial da Sade (OMS) considere que ainda no h dados suficientes para o estabelecimento de um limite de concentrao mximo aceitvel para as Saxitoxinas em gua potvel (Chorus e Bartram, 1999), uma anlise dos dados de eventos de intoxicao humanas demonstra que a maioria dos casos esteve associada ao consumo de aproximadamente 200 g de Saxitoxinas (STX) por pessoa. Baseado nesses dados e considerando 60 Kg como peso corpreo, 2 L de gua como consumo dirio e fatores de incerteza para variaes entre espcies distintas e entre organismos da mesma espcie, Fitzgerald et al.(1999) propuseram 3 g/l como limite mximo aceitvel de Saxitoxinas em gua para consumo humano. Este limite j foi adotado por autoridades de sade do Brasil em portaria recente do Ministrio da Sade(www.funasa.org.br). No Brasil, a anlise desse grupo de neurotoxinas em amostras de gua para consumo humano est se tornando de extrema importncia, visto que em vrios mananciais de abastecimento, desde a regio nordeste at a regio sul do pas, um grande nmero de ocorrncias de cepas do gnero Cylindrospermopsis produtoras de neurotoxinas tem sido registradas (Azevedo, 2003 manual para o curso de Ecotoxicologia de Cianobactrias e qualidade de gua). Em muitos reservatrios, inclusive alguns recm-construdos, este gnero j dominante, atingindo um nmero de clulas muito acima dos limites mximos aceitveis para no conferir risco para a sade humana, de acordo com o proposto por Chorus e Bartram (1999).

Tabela 1: Tipos de saxitoxinas j caracterizadas a partir de diferentes cepas de Cianobactrias, de acordo com Chorus e Barthram, (1999).

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NOME DA TOXINA
STX GTX2 GTX3 GTX5 C1 C2 NEO GTX1 GTX4 GTX6 DcSTX DcGTX2 DcGTX3 LWTX1 LWTX2 LWTX3 LWTX4 LWTX5 LWTX6

GRUPOS QUMICOS VARIVEIS NAS SAXITOXINAS R1 R2 R3 R4

H H H H H H OH OH OH OH H H H H H H H H H H H OSO3H H OSO3H H OSO3H H H OSO3OSO3OSO3H H H H H OSO3H H OSO3H H OSO3H H H OSO3H H H OSO3H H H CONH2 CONH2 CONH2 CONHSO3CONHSO3CONHSO3CONH2 CONH2 CONH2 CONHSO3H H H COCH3 COCH3 COCH3 H COCH3 COCH3

R5
OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH H OH OH H OH H

Legenda: STX: Saxitoxina GTX: Goniautoxinas C:C Toxinas NEO: Neosaxitoxina

dcSTX: decarbamoilsaxitoxinas dcGTX: decarbamoigoniautoxinas LWTX: toxinas de Lyngbya wollei

11.4.3. Ocorrncias Saxitoxinas no Paran

No estado do Paran registrou-se a presena de cianobactrias produtoras de Saxitoxinas em dois mananciais de abastecimento pblico ( tabela 2). Tabela 2: Ocorrncias de Saxitoxinas( STX, NEO, GTX1, GTX2, GTX3,GTX4) em g/l, nos reservatrios com predominncia de cianobacterias no Paran, entre 2002 a 2004.

Local 02/06/02
Represa Alagados, Ponta Grossa 4,95 (STX)

Datas de Coletas: 17/06/02 06/01/03

76,7 (STX) 92,6 (NEO) 470,3 (GTX1) 5,3 (GTX2) 0,2 (STX) 1,9 (NEO) 0,1 (GTX3) 0,1 (GTX4)

24/02/03
0,9 (STX) 1,3 (NEO) 0,2 (GTX2) 0,1 (GTX3) 0,2 (GTX4)

01/12/03

Represa Ira, Curitiba

11,6 (GTX3) 2,3 (GTX4)

A florao de Cylindrospermopsis em Alagados (Ponta Grossa), indicou a presena de pelo menos cinco Saxitoxinas ao longo dos anos de 2002 e 2003, confirmando o potencial neurotxico daquelas floraes e sua dominncia ao longo do tempo e no ambiente. Em outro episdio txico na Represa do Irai, em uma florao de predominncia de Cianobactrias da ordem Nostocales, identificou-se a presena de pelo menos duas neurotoxinas, entretanto isto foi um evento nico, sem repetio ate o presente momento.

11.4.4. Hepatotoxinas

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A intoxicao por hepatotoxinas apresenta uma ao mais lenta, podendo causar morte num intervalo de poucas horas a poucos dias. As espcies j identificadas como produtoras dessas hepatotoxinas esto includas nos gneros Microcystis, Anabaena, Nodularia, Oscillatoria, Nostoc e Cylindrospermopsis (Carmichael, 1994). As hepatotoxinas peptdicas j caracterizadas so heptapeptdeos cclicos conhecidos como microcistinas e os pentapeptdeos designados como nodularinas. A toxicidade dessas microcistinas em animais de laboratrio apresenta DL50 (i.p.) entre 25 e 150 g/Kg de peso corpreo e entre 5.000 a 10.900 g/Kg de peso corpreo por administrao oral (Chorus e Bartram,1999). As nodularinas foram primeiramente identificadas na espcie Nodularia spumigena (Sivonen et al., 1989), e atualmente so conhecidas oito nodularinas distintas, classificadas de acordo com as variaes no grau de metilao, composio e isomerizao de seus aminocidos. A DL50(i.p.) em camundongos varia entre 50 a 200 g/Kg de peso corpreo (Rinehart et al.,1994). As hepatotoxinas chegam aos hepatcitos por meio de receptores dos cidos biliares (Runnegar et al. 1981; Erikson et al., 1990; Falconer, 1991) e promovem uma desorganizao do citoesqueleto dos hepatcitos. Como conseqncia, o fgado perde sua arquitetura e desenvolve graves leses internas. A perda de contato entre as clulas cria espaos internos que so preenchidos pelo sangue que passa a fluir dos capilares para esses locais, provocando uma hemorragia intra-heptica (Hooser et al.1991; Carmichael, 1994: Lambert et al.,1994). A toxicidade dessas microcistinas em animais de laboratrio apresenta DL50(i.p.) entre 25 e 150 g/Kg de peso corpreo e entre 5.000 e 10.900 g/Kg de peso corpreo por administrao oral (Chorus e Bartram, 1999).

11.4.4.a Ocorrncias de Microcistinas em mananciais do estado do Paran.

Os mananciais de abastecimento da regio metropolitana de Curitiba so os mais impactados pela presena de espcies de cianobactrias produtoras de hepatoxinas (tabela 2). Tabela 2. Ocorrncia de Microcistinas em g/L, em mananciais e estaes de tratamento no estado do Paran.

Local: 25/10/01
Represa Ira Curitiba ETA Ira In-Natura ETA Ira Tratada ETA Iguau Tratada ETA Tarum Tratada > 10.000 1,1 0,1 0,11 0,06

DATAS DE COLETAS 03/05/02 04/08/03 23/09/03 09/02/04

2094 2146 7,9 0,04 0,05 0,05 0,1 0,05 0,08 87,1 5,8 0,1 0,06 0,03

01/03/04
226

0,07 0,08 0,06

O maior episdio txico com Microcystis ocorreu no ano de 2001, tendo se repetido com menor intensidade nos anos subseqentes, at 2004. Os pontos especificados na tabela como represa do Irai e ETA Irai, so respectivamente na Barragem e no canal de captao da gua. Este ltimo recebe diluio de gua do rio Iraizinho, o que justifica os valores menores na ETA Irai. Pelos valores das amostras tratadas se verifica uma eficincia na remoo de toxinas pelos processos das ETAS.

11.5. AS CIANOTOXINAS E SUAS IMPLICAES

As cianotoxinas possuem caractersticas prprias quanto sua forma de ao e doses letais, as quais variam de acordo com o gnero de cianobactria , conforme listados na tabela 3.

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Tabela 3. Cianotoxinas e as suas implicaes. Chorus e Bartham,1999.

Grupo de toxinas Microcistina rgo Alvo Fgado Principais Sintomas Desorganizao do citoesqueleto dos hepatcitos, hemorragia Intra-heptica. Inibidores das protenas fosfatases, tumores hepticos Desequilbrio, Fasciculao muscular, respirao ofegante, convulses, parada respiratria. Os mesmos que a Anatoxina-a, porm com intensa salivao. Dose Letal Dose Letal Oral Injetvel DL50 (i.p.) 5.000 a 25 a 150 g/Kg 10.900 g/Kg 50 a 200 g/Kg Nodularia 200 g/Kg Anabaena, Planktothrix (Oscillatoria), Aphanizomenon Limite Mximo aceitvel * 1 g/L Gneros Microcystis, Anabaena, Planktothrix (Oscillatoria), Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis, Aphanocapsa

Nodularinas Anatoxina-a

Fgado Sinapse Nervosa

Anatoxina-a(s) Aplisiatoxinas Cilindrospermopsinas

Sinapse Nervosa pele Fgado

20 g/Kg
Anabaena

Ao lenta de 5 a 7 dias, 6 mg/Kg no bioensaio com camundongos o fgado se torna de cor amarelada. Lingbiatoxinas Pele, Ap. Irritao da pele e das digestivo mucosas. Saxitoxinas Axnios Bloqueiam os canais de 263 g/Kg (Conhecida como Nervosos sdio, das clulas nervosas, PSP) tonturas, adormecimento da boca e de extremidades, fraqueza muscular, Nusea, vmito, sede e taquicardia. Lipopolissacardeos Pele Irritantes em potencial (LPS) afetam qualquer tecido exposto *:Port. 518 Min. da Sade.

Para 5 dias 0,2mg/Kg. Para 24 horas de 2,0 mg/Kg.

Lyngbya, Schizothrix, Planktothrix (Oscillatoria) Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Umezakia Lyngbya

10 g/Kg

3g/L

Todos

11.6. REMOO DE CIANOTOXINAS NO PROCESSO DE TRATAMENTO CONVENCIONAL DE GUA DE MANANCIAIS

A experincia da Sanepar em tratar guas de mananciais impactados por cianobactrias no estado do Paran tem demonstrado que a intensidade das floraes (n. de cels/ml) um parmetro decisivo para a introduo de intervenes corretivas e preventivas no processo convencional. Nestes aspectos tem-se seguido os critrios definidos na portaria 518 do Ministrio da Sade, e o nvel de 20.000 cels/ml de cianobactrias tem sido um patamar adotado com sucesso. Medidas corretivas como adio de carvo ativado no pr-tratamento, novos floculantes e flotao tem sido procedimentos adotados efetivamente pela empresa.

11.7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:

Yunes JS, Cunha NT, Barros LP, Proena LAO, & Monserrat JM. Cyanobacterial neurotoxins from southern brazilian freshwaters.Comments on toxicology, 9:103-115,2003. Yoo R. Scott, Carmichael Wayne W. American Water Works Association,Cyanobacteial ( Bluegreen algae) toxius:A resource guide,61-70, 1995.

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EXPLICAR O QUE DL, o que i.p, in natura, tratada, ETA H vrios erros nas referencias: verificar Incluir figuras da estrutura molecular das cianotoxinas mais importantes. Na Tabela 3, para saxitoxinas h um valor 3g que est na lista de gneros.
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