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INCIDNCIA DE FUNGOS EM SEMENTES DE PINHO-MANSO1

Leimi Kobayasti2, Andressa Iraides Adoriam2, Vespasiano Borges de Paiva Neto3, Charline Zaratin Alves3, Mnica Cristina Rezende Zuffo3

ABSTRACT
FUNGI INCIDENCE ON Jatropha curcas L. SEEDS

RESUMO
O conhecimento de patgenos associados a sementes essencial para a elaborao de recomendaes de manejo de uma cultura. Dessa forma, objetivou-se determinar os patgenos associados a sementes de pinho-manso, para possibilitar o desenvolvimento de estratgias de controle dos mesmos. Para o teste de sanidade, utilizou-se o mtodo do papel de filtro (blotter test), modificado com restritor hdrico NaCl - 1,0 MPa, e avaliao aps sete dias de incubao, a 25C, com fotoperodo de 12 horas. As sementes de pinho-manso analisadas apresentaram alta frequncia de espcies fngicas, independentemente da desinfestao superficial das mesmas. Foram observados 19 gneros de fungos, destacando-se Alternaria alternata, Colletotrichum sp., Fusarium spp. e Rhizoctonia solani, os quais so comumente patognicos e devem ter sua relevncia considerada. PALAVRAS-CHAVE: Jatropha curcas L.; teste de sanidade; fungos fitopatognicos.

The knowledge on seed pathogens is essential for setting management recommendations. Thus, aiming to determine the pathogens associated with Jatropha curcas L., in order to develop strategies to control them, the blotter test, modified with hydric restrictor NaCl - 1.0 MPa, and evaluation after seven days of incubation, at 25C, with a 12-hours photoperiod, was used. The Jatropha seeds evaluated presented a high level of fungal species, regardless of their surface disinfection. Nineteen different fungi genera were identified, especially Alternaria alternata, Colletotrichum sp., Fusarium spp., and Rhizoctonia solani, which are commonly pathogenic and whose relevance must be taken into account. KEY-WORDS: Jatropha curcas L.; blotter test; pathogenic fungi.

INTRODUO O pinho-manso (Jatropha curcas L.) uma planta oleaginosa tropical e bem adaptada a diversas regies do Brasil, sendo seu plantio incentivado, nos ltimos anos, como alternativa ao fornecimento de matria-prima para a fabricao de biodiesel. Adicionalmente capacidade de produzir leo vegetal, a planta tolerante ao dficit hdrico, menos exigente em nutrientes e apresenta capacidade de recuperao de reas degradadas, por possuir razes profundas e que crescem em solos de baixa fertilidade (Teixeira 2005). Devido s suas vantagens, verifica-se crescente demanda por sementes de boa qualidade fisiolgica e sanitria, e, para isto, deve ser avaliada a ocorrncia de patgenos nas mesmas. A semente de pinho-manso constituda por tegumento (25%) denso e escuro, envolvendo o embrio (75%), rico

em leo. Apresenta, ainda, pequena variao de tamanho e densidade, sem problemas de dormncia (Shepetina & Sevastyanova 1986). Inmeros danos podem ser provocados por patgenos associados a sementes, dentre eles, a morte em pr-emergncia, podrido radicular, tombamento de mudas, manchas necrticas em folhas, caules e frutos, deformaes, como hipertrofias e subdesenvolvimento, descolorao de tecidos, infeces latentes e outros (Neergaard 1977). Outros danos podem ser provocados na prpria semente, como podrido e perdas do poder germinativo. Para culturas agronmicas, estes danos resultam em reduo do stand e da produtividade (Machado 1988). Assim, a semente contaminada ou infectada um dos meios mais eficientes de introduo, disseminao e acmulo de inculo de patgenos, em reas de cultivo (Neergaard 1977), alm de ser eficiente meio de

1. Trabalho recebido em ago./2010 e aceito para publicao em set./2011 (n registro: PAT 10948/ DOI: 10.5216/pat.v41i3.10948). 2. Universidade Federal do Mato Grosso, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria, Cuiab, MT, Brasil. E-mails: leimikobayasti@yahoo.com.br, andressa_adoriam@hotmail.com. 3. Universidade Federal do Mato Grosso do Sul, Chapado do Sul, MS, Brasil. E-mails: vespasiano@nin.ufms.br, charline@ufms.br, mczuffo@nin.ufms.br.

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sobrevivncia de patgenos na natureza (Massola Jnior & Bedendo 2005). Segundo Aguiar et al. (2001), sementes so eficientes meios de disseminao e de introduo de patgenos em reas isentas. O inculo inicial de epidemias pode depender da transmisso do patgeno pela semente, assim como reduzir a qualidade fisiolgica da mesma. Danos decorrentes da associao de micro-organismos patognicos com sementes no se limitam a perdas diretas da populao em campo, mas envolvem outras implicaes, que podem provocar srios danos, em todo o sistema de produo (Machado 1994, Marcos Filho 2001). Os resultados de pesquisas com a cultura do pinho-manso so ainda incipientes e preliminares, principalmente com relao a doenas. Devido atual expanso da rea cultivada com esta espcie, h necessidade de maiores informaes sobre os patgenos e as doenas potenciais que os mesmos causam cultura. Desta forma, este trabalho teve como objetivo determinar os patgenos associados a sementes de pinho-manso, com a finalidade de se obter informaes para o estabelecimento de futuras estratgias de controle de doenas, em reas de produo. MATERIAL E MTODOS O experimento foi conduzido por meio de parceria entre a Universidade Federal do Mato Grosso do Sul (UFMS), Campus de Chapado do Sul, e a Universidade Federal do Mato Grosso (UFMT), Campus de Cuiab. Os frutos de pinho-manso foram coletados em julho de 2009, em plantas do Banco de Germoplasma ex situ estabelecido em 2006, em rea cedida pela Fundao de Apoio Pesquisa Agropecuria de Chapado, localizada no municpio de Chapado do Sul (MS). Aps a coleta, as sementes foram removidas dos frutos e o lote maduro foi colocado para secar temperatura ambiente (27C 5oC) e sombra, e, em seguida, enviadas para o Laboratrio de Fitopatologia da Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria da UFMT, onde as anlises de sanidade das sementes foram realizadas, em agosto de 2009. As amostras de sementes de pinho-manso foram divididas em quatro lotes (tratamentos): fruto maduro (pericarpo amarelo) com desinfestao; fruto maduro sem desinfestao; fruto seco (pericarpo escuro e desidratado) com desinfestao; e fruto seco sem desinfestao.

Os tratamentos com desinfestao foram realizados com imerso das sementes em hipoclorito de sdio (1,0% de cloro ativo), por 20 minutos, seguido de etanol 70% (v/v), por 2 minutos. O teste de sanidade das sementes foi realizado com o mtodo do papel de filtro (blotter test), modificado com restrio hdrica, utilizando-se, como soluto, NaCl -1,0 MPa. As sementes foram distribudas uniformemente em placas de Petri de 15 cm de dimetro, tendo como substrato trs folhas de papel de filtro esterilizadas e umedecidas com soluo de NaCl. Em seguida, foram incubadas em BOD, temperatura de 25C 2C, e mantidas, por sete dias, sob regime alternado de 12 horas de luz. Aps este perodo, foi feita a identificao dos fungos, com base em suas caractersticas morfolgicas (Barnett & Hunter 1987, Alexopoulos et al. 1996), e quantificada a incidncia. Adotou-se o delineamento inteiramente casualizado, com diferentes nmeros de repeties. Para sementes oriundas de frutos maduros, foram realizadas cinco repeties, com 20 sementes/placa. Para as sementes oriundas de frutos secos, foram efetuadas dez repeties, com 20 sementes/placa. Os dados foram submetidos a anlise de varincia e as mdias comparadas pelo teste Tukey (p < 0,05), utilizando-se o programa estatstico Sisvar (Ferreira 2002). RESULTADOS E DISCUSSO Nas anlises de sementes de pinho-manso, foram detectados 19 gneros de fungos (Tabela 1), com destaque para Alternaria alternata, Colletotrichum gloeosporioides, Penicillium sp. e Rhizoctonia solani, alm das espcies de Fusarium (Tabela 1). Sementes sem desinfestao apresentaram maior percentagem de infestao e maior diversidade de fungos, provavelmente localizados nas camadas mais externas da semente (Figuras 1A e 1B). S et al. (2009) detectaram a presena de Colletotrichum, Curvularia, Verticillium, Fusarium, Penicillium, Aspergillus e Alternaria, restrita ao tegumento das sementes de pinho-manso de diferentes procedncias. Mira & Sierra (2008) relataram a presena de Fusarium sp. e Rhizoctonia sp. em frutos, ramos e folhas de pinho-manso cultivado na Colmbia. Melo et al. (2007) observaram diversificada incidncia de fungos em sementes desinfestadas de pinho-manso, como Monilia sp., Fusarium sp., Rhizopus sp., Trichoderma sp., Aspergillus spp, Curvularia sp.,

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Incidncia de fungos em sementes de pinho-manso Tabela 1. Incidncia de fungos (%) em sementes desinfestadas (SD) e sem desinfestao (SSD), em frutos secos e maduros de pinho-manso, provenientes de Chapado do Sul, MS (Cuiab, MT, 2009).
Frutos secos SD SSD Alternaria alternata 2,5 b 9,5 a Absidia sp. 1,0 b 12,0 a Acremonium sp. 1,0 a 0,5 a Ascochyta sp. 22,0 Aspergillus ochraceus Aspergillus sp. Bipolaris sp. 1,0 a Chaetomium sp. 1,0 b 29,0 a Cladosporium cladosporioides 4,5 d 43,5 b Colletotrichum gloeosporioides 18 Curvularia sp. Epicoccum sp. Fusarium graminearum 31,5 a Fusarium pallidoroseum 1,5 b 1,0 b Fusarium sp. 2,5 b Fusarium verticillioides 2,5 c Nigrospora sp. Penicillium sp. 2,0 b Periconia sp. 1,5 b Pestalotia sp. Phomopsis sp. Rhizoctonia solani 2,5 Trichothecium sp. 1,0 a Fungos Frutos maduros SD SSD 8,0 a 7,0 12,0 3,0 a 12,0 c 85,0 a 1,0 13,0 1,0 b 26,0 a 11,0 a 27,0 a 11,0 b 3,0 26,0 a 6,0 b 17,0 a 1,0 2,0 1,0 a 2,0 a

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Mdias seguidas de mesma letra, na linha, no diferem significativamente, pelo teste Tukey (p < 0,05).

Alternaria spp., Chaetomium sp e Penicillium sp., em ordem decrescente de incidncia. J em sementes no desinfestadas, os fungos detectados, pelos mesmos autores, foram Aspergillus sp. (57%), Fusarium sp. (39%), Colletotrichum sp. (31%), Rhizopus sp. (27%), Monilia sp. (24%), Alternaria sp. (16%) e Penicillium sp. (6%).

Popinigis (1977) ressaltou que as espcies dos gneros Aspergillus sp. e Penicillium sp. se encontram entre os principais agentes deterioradores de sementes. Neves et al. (2009), trabalhando com sementes de pinho-manso, observaram que sementes com alta incidncia conjunta de Fusarium, Aspergillus e Penicillium apresentaram baixo poder de germinao. Os fungos dos gneros Aspergillus e Penicillium geralmente esto presentes em sementes recm-colhidas, em percentagens muito baixas, e so capazes de sobreviver em ambientes com baixa umidade, proliferando-se em sucesso aos fungos de campo e causando a deteriorao das sementes, culminando com a perda da viabilidade e do valor comercial das mesmas (Berjak 1987, Carvalho & Nakagawa 1988). Goldfarb et al. (2010) afirmaram que a crioconservao no reduziu a incidncia de patgenos presentes em sementes de pinho-manso armazenadas. Nas temperaturas criognicas, ocorreu a preservao da integridade do material biolgico, devido reduo das taxas metablicas, sendo a micoflora presente tambm preservada. Os fungos de armazenamento observados com maior frequncia, aps a tcnica de crioconservao, foram os pertencentes aos gneros Aspergillus sp., seguidos de Cladosporium sp. e Fusarium sp. A presena de Alternaria alternata (Figuras 1B e 1C), que causa a alternariose ou mancha de alternaria, encontrada em frutos secos e maduros, foi de 2,5% e 9,0%, respectivamente. A ocorrncia da associao de sementes com A. alternata pode produzir grandes prejuzos, pelo fato de causar infeces em

Figura 1. Imagens ilustrativas do experimento: A - presena de fungos na superfcie das sementes (Barra = 2 cm); B - Alternaria alternata presente na superfcie do tegumento e observado em estereomicroscpio (Barra = 200 m); C - Alternaria alternata observado em microscpio ptico (Barra = 10 m) (Cuiab, MT, 2009).
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sementes e ser por elas transmitido (Neergaard 1977). Alm disto, este fungo causa reduo na germinao e tombamento de plntulas (Rotem 1995), manchas foliares e queda prematura de folhas, na cultura do pinho-manso (Franco & Gabriel 2008). O fungo Colletotrichum gloeosporioides foi observado apenas em frutos secos e sem desinfestao, com incidncia de 18%. O gnero Colletotrichum frequentemente relatado em diferentes espcies de plantas cultivadas em todo o mundo, causando doenas e/ou de forma saprfita (Lopez 2001). Em pinho-manso, a doena conhecida como antracnose caracterizada por manchas foliares, que podem evoluir para a queima completa das folhas. Os frutos tambm podem ser infectados com leses de colorao marrom escura (Franco & Gabriel 2008). No Brasil, a doena j foi relatada nos Estados do Cear e Mato Grosso do Sul (Roese & Freire 2009). Os fungos Alternaria alternata, Colletotrichum gloeosporioides e Rhizoctonia solani so reconhecidamente patognicos, possuindo, portanto, potencial para provocar processos de interferncia fisiolgica em pinho-manso. A doena conhecida como tombamento pode ter, como agente causal, diversos patgenos, dentre eles Rhizoctonia solani, Colletotrichum gloeosporioides e Fusarium spp., todos observados nos lotes analisados. Rhizoctonia solani foi encontrado em apenas 2,5% das sementes secas no desinfestadas, considerada uma percentagem baixa. De acordo com Lima et al. (2001), fungos do gnero Rhizoctonia sp. podem causar tombamento de plntulas de mamoneira. Vale ressaltar que, embora as sementes tenham sido obtidas de frutos colhidos diretamente nas plantas matrizes, portanto sem contato direto com o solo, a presena de Rhizoctonia solani pode ser atribuda presena de ventos intensos na regio de cultivo, resultando em constantes suspenses de solo, ou ainda durante o processo de secagem, no qual as sementes ficaram expostas em bancadas. Nas sementes no desinfestadas, foi observada a presena de Fusarium pallidoroseum (26%) e Fusarium graminearum (31,5%), provenientes de frutos maduros e frutos secos, respectivamente. Nas sementes desinfestadas e provenientes de frutos maduros, a presena de Fusarium verticillioides (27%) pode ser explicada por sua localizao interna, na semente. As espcies de Fusarium so comumente associadas a sementes de diversas culturas, ocasionando perda de germinao e vigor, e auxiliando,

tambm, no complexo de patgenos que causam tombamento em plantas. Segundo Sharma et al. (2001) e Gour (2006), F. verticillioides j foi encontrado associado podrido de razes de pinho-manso, na ndia. Tambm j foi relatada a presena de Fusarium sp., associada podrido seca dos ramos: pequenos ramos com folhas jovens nas pontas secam e quebram facilmente (Padilha & Monterroso 1999). Outros fungos observados, como Penicillium sp. e Aspergillus spp., so considerados tpicos de armazenamento e podem causar depreciao de gros ou sementes, principalmente quando armazenadas sob condies inadequadas. Alm destes fungos, Chaetomium sp. e Absidia sp. esto, tambm, associados deteriorao de sementes e sua ao dependente das condies fsicas e fisiolgicas das mesmas, por ocasio do incio do armazenamento e dos fatores ambientais predominantes no decorrer deste perodo (Ruiz Filho et al. 2004). Santos et al. (2009), ao avaliarem a qualidade sanitria de sementes de pinho-manso produzidas no norte de Minas Gerais, por meio do mtodo do papel de filtro (blotter test) e meio de cultura BDA, detectaram os gneros Fusarium, Aspergillus, Penicillium e Colletotrichum, corroborando os dados apresentados na Tabela 1. Cladosporium cladosporioides foi observado com percentagens variando de 4,5% a 85%, com maiores valores nos tratamentos sem desinfestao. As espcies de Cladosporium ocorrem em inmeras espcies vegetais, especialmente como componente da micoflora de sementes. Alm da perda de vigor, certas espcies de fungos, como Cladosporium cladosporioides, so passveis de causar manchas no tegumento, resultando em aspecto indesejvel, e provocam a depreciao dos lotes (Neergaard 1980). Este fungo tem sido relatado como agente patognico, em diversas culturas, como maracuj (Fischer et al. 2005), tomate (Kurozawa & Pavan 2005) e mamo (Silva & Soares 2001). Bipolaris sp., Phomopsis sp. e Pestalotia sp. foram observados em baixa percentagem (1-3%). Alm destes, Ascochyta sp. (22%) considerado patognico a diversas espcies hospedeiras, causando prejuzos considerveis. Em sementes, apresenta importncia varivel, dependendo do hospedeiro e da espcie encontrada, como, por exemplo, em ervilha (Ascochyta sp.), gramneas (Bipolaris sp.), soja (Phomopsis sp.) e frutferas (Pestalotia sp.) (Kimati et al. 2005).

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Fungos como Acremonium sp., Chaetomium sp., Curvularia sp., Periconia sp., Epicoccum sp., Nigrospora sp., Trichothecium sp. e Absidia sp. so considerados saprfitas e sempre esto presentes nas sementes, podendo afetar o vigor destas. Machado (1988) relatou que fungos transmissveis ou no por sementes podem afetar o vigor destas no campo. Assim, o uso de sementes com baixo vigor pode ter reflexos negativos dos mais variveis, considerando-se no somente o baixo desempenho das plantas, em termos de stand, como, tambm, a maior vulnerabilidade destas ao ataque de patgenos, conforme relatado por Neves et al. (2009). Observou-se que, entre os tratamentos com e sem desinfestao, as sementes desinfestadas apresentaram menor percentagem de fungos e menor nmero de gneros presentes. Este resultado concorda com Melo et al. (2007), que observaram, em sementes desinfestadas de pinho-manso, menor incidncia de fungos pertencentes aos gneros encontrados, e discorda do estudo de Vanzolini et al. (2010), no qual no foi constatada diferena acentuada na incidncia de fungos entre as sementes desinfestadas ou no com hipoclorito de sdio. Os fungos Alternaria alternata, Fusarium pallidoroseum, Acremonium sp., Chaetomium sp. e Cladosporium cladosporioides foram observados nos dois tratamentos aplicados em frutos secos, sendo em menor percentagem nos frutos desinfestados, enquanto, em frutos maduros, Fusarium verticillioides, Penicillium sp., Aspergillus sp. e Cladosporium cladosporioides foram os mais representativos, com taxas variando de 12% a 27%. Estes fungos, provavelmente, estavam alojados internamente semente, visto que a assepsia tende a eliminar boa parte do inculo presente externamente. Segundo Machado (1988), um mesmo patgeno pode estar presente em um lote, ou em uma nica semente, sob uma ou mais formas de localizao. As sementes analisadas apresentam micoflora bastante diversificada, o que pode comprometer a sua qualidade para o plantio. Moreira (2010) observou a associao constante nas sementes de quatro diferentes oleaginosas dos fungos Aspergillus niger, Fusarium sp., Penicillium sp., Rhizoctonia solani, Rhizopus stolonifer e Sclerotium sp., sendo, esta associao mantida em todos os municpios avaliados, independentemente da oleaginosa (mamona, girassol, amendoim e gergelim). Fungos fitopatognicos podem associar-se s sementes, em todas as etapas de produo. Esta

associao responsvel, muitas vezes, pela reduo da qualidade fisiolgica das sementes, disperso de patgenos a longas distncias e transmisso destes da semente planta, bem como em meio eficiente de sobrevivncia do patgeno, em contato direto com o hospedeiro (Machado 1982). CONCLUSES 1. Sementes de pinho-manso apresentaram alta incidncia de espcies fngicas, mesmo aps a desinfestao superficial. 2. Os fungos Alternaria alternata, Colletotrichum gloeosporioides, Penicillium sp. e Rhizoctonia solani, alm das espcies de Fusarium, detectados em sementes de pinho-manso, so potencialmente patognicos e devem ter sua relevncia considerada. REFERNCIAS
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e-ISSN 1983-4063 - www.agro.ufg.br/pat - Pesq. Agropec. Trop., Goinia, v. 41, n. 3, p. 385-390, jul./set. 2011