TOXICOLOGIA EXPERIMENTAL ou BIOENSAIOS TOXICOLGICOS

Prof. Dr. Andreimar M. Soares andreims@hotmail.com

TICA NA EXPERIMENTAO ANIMAL

TICA NA EXPERIMENTAO ANIMAL

1. HISTRICO
Hipcrates (450 aC) j relacionava o aspecto de rgos humanos doentes com o de animais, com finalidade claramente didtica. Pitgoras (582-500 aC) acreditava que a amabilidade para com todas as criaturas no-humanas era um dever. Galeno (129-210 dC), em Roma, foi talvez o primeiro a realizar vivisseco. Claude Bernard (1860) fisiologista, o cachorro de estimao. A primeira associao para a defesa dos animais de laboratrio.

Uso dos animais de laboratrio

Antes de 1900 Tratamento da raiva- ces e coelhos Tratamento do beriberi - galinhas Tratamento da varola bovinos 1900-1920 Tratamento da pelagra - ces e macaco Rhesus Tratamento do raquitismo - ces Desenvolvimento da tcnica de cateterizao cardaca - ces e coelhos

1920-1930 Descoberta da tiroxina - vrias espcies animais Descoberta da insulina - ces 1930-1940 Preveno do ttano - vrias espcies Desenvolvimento dos anticoagulantes gatos Desenvolvimento de modernos anestsicos - ces

1940-1950 Tratamento da artrite reumatide coelhos e macacos Uso teraputico dos antibiticos - vrias espcies Descoberta do fator Rh - macaco Rhesus Preveno da difteria - macacos Tratamento do pertussis - cobaias e coelhos 1970-1980 Preveno do sarampo - vrias espcies Tratamento da lepra - macacos e tatus Avanos na cardiologia - ces

1980-1990 Desenvolvimento de anticorpos monoclonais para tratamento de doenas camundongos e coelhos Tcnica de transplante de rgos vrias espcies Pesquisas em habilidade de comunicao - macacos Desenvolvimento de terapia gentica

A evoluo da cincia e os constantes questionamentos sobre o uso de animais em experimentao cientfica alteraram as relaes entre o ser humano e os animais transformando o bem-estar animal em uma importante rea de estudos.

COBEA Colgio Brasileiro de Experimentao Animal

http://www.cobea.org.br/

 A questo da tica na experimentao animal continuava a ser um tema desconfortvel para o meio didtico-cientfico e, ento, o Colgio Brasileiro de Experimentao Animal/Cobea, em 1991, cria os Princpios ticos na Experimentao Animal, postulando Artigos que passam a nortear a conduta dos professores e dos pesquisadores na prtica do uso de animais.

2. CONFORTO E BEM-ESTAR DOS ANIMAIS DE LABORATRIO

A cincia de animais de laboratrio considera a condio do bem-estar animal como um dos principais fatores que influenciam o resultado de um experimento e valoriza o uso tico dos animais retomando o principio dos trs Rs desenvolvido por Burch e Russel (1959), aprimoramento (Refinement), reduo (Reduction) e substituio (Replacement).

 Replace - A substituio de animais j avanou muito. culturas de clulas, modelos matemticos e simuladores, ENSAIOS IN VITRO e IN SILICO, entre outros.

Reduce - A reduo do nmero de animais pode ser obtida de maneira bastante simples e rpida. PROJEES MATEMTICAS: o clculo de tamanho da amostra que iro utilizar no projeto.

Refine - O refinamento dos projetos de pesquisa acarreta um aprimoramento metodolgico e tico dos mesmos. Experimentos melhor planejados e instalaes adequadas. Questionamento dos deveres dos pesquisadores para com os animais de experimentao.

As preocupaes expressas pela sociedade no se limitam simples noo de dor, ou seja, no somente a presena ou ausncia de dor que indicar o bem-estar dos animais. Independentemente da dor, o grau de bemestar est ligado situao em que se encontra o animal e poder ser reduzido ou elevado. As preocupaes so mais amplas e substituem os termos negativos da dor, sofrimento e estresse, pelos termos positivos de conforto e bem-estar.

O primeiro passo para alcanar um grau elevado de bem-estar para os animais de experimentao atravs da educao das pessoas que trabalharo com esses animais. O desenvolvimento da cincia a favor do homem no pode nem deve servir de alicerce para o uso indiscriminado e o desrespeito com os animais. A credibilidade do resultado da pesquisa depende do bem-estar vivenciado pelo animal durante sua realizao, da sensibilidade do pesquisador para o entendimento de seus sofrimentos e necessidades e do bom senso nas tomadas de deciso e atitudes.

INDICADORES DE CONFORTO E BEM-ESTAR 1 Critrios zoopatolgicos e zootcnicos 2 Critrios fisiolgicos 3 Critrios comportamentais 3.1 Descoberta de anomalias comportamentais 3.2 Estudo das preferncias

TICA, BEM-ESTAR E LEGISLAO

Moral 4.1. Legislao Decreto Lei n 24.645 de julho de 1934 6 638 DE 08 de maio de 1979 Anteprojeto de Lei - 1996 LEI AROUCA - 2008

 EUTANSIA
1. Seleo dos mtodos de eutansia 2. Critrio para escolha do mtodo de eutansia
Utilizao de mtodos sem dor; Os animais devem atingir rpido estado de inconscincia e morte; Requerer um mnimo de conteno, e evitar a excitabilidade do animal; Apropriado para a idade e estado de sade do animal em questo Causar um mnimo de sofrimento e estresse; Simples de administrar (em pequenas doses, se possvel); Seguro para o operador e tanto quanto possvel, esteticamente aceitvel para este; Deve ser realizada distante de outros animais.

3. Mtodos recomendveis 1. Agentes inalveis 2. Frmacos no inalveis 3. Mtodos fisicos 4. Mtodos aceitveis condicionalmente 1. Frmacos inalveis 2. Mtodos fisicos Deslocamento cervical Decapitao Perno cautivo penetrante Eletrocuo 5. Mtodos restringidos 6. Mtodos proibidos 1. Devido ao risco da pessoa que aplicar o mtodo 2. Devido ao fato de no ser considerado humanitrio

BIBLIOGRAFIA
1. Russell, W.M.S. and Burch, R.L., The Principles of Humane Experimental Technique. Methuen, London, 1959. 2. FRAJBLAT, M.; AMARAL, V. L. L.; RIVERA, E.A.B. Bem Estar em Animais de Laboratrio. In: Rogerio Christofoletti e Alfeu Antnio Hausen Beck. (Org.). tica, Cincia e Desenvolvimento. Itaja: Editora da Universidade do Vale do Itaja, 2006, v. , p. 117128. 3. VALLE, S.; TELLES, J.L. Biotica Biorrisco, Abordagem Transdisciplinar. Rio de Janeiro: Editora Intercincia, 2003.

 Toxicidade ou Toxicidez a capacidade de um material provocar danos biolgicos a um organismo. uma propriedade de todas as substncias, inclusive do acar (sacarose), do sal de cozinha (cloreto de sdio) ou at mesmo, da gua . Os efeitos txicos dependem da dose, das vias e do tempo de exposio da entidade ao material.

Principais efeitos deletrios

1. Alteraes cardiovasculares e respiratrias; 2. Alteraes do sistema nervoso; 3. Leses orgnicas: hepatotoxicidade, nefrotoxicidade, etc; 4. Leses carcinognicas / tumorignicas; 5. Leses teratognicas (malformaes do feto); 6. Alteraes genticas aneuploidizao - ganho ou perda de um cromossomo inteiro. clastognese - aberraes cromossmicas com adies, falhas, re-arranjos de partes de cromossomos. mutagnese - alteraes hereditrias produzidas na informao gentica armazenada no DNA (ex. radiaes ionizantes).

7. Infertilidade - masculina, feminina ou mista. teratognese - provocada por agentes infecciosos ou drogas. aborto - precoce ou tardio 8. Alteraes da capacidade reprodutora 9- Alguns exemplos: Vitamina A - Atraso mental; crebro e corao. Talidomida - Corao e membros. Fenobarbital - Palato; corao; atraso mental. lcool - Defeitos faciais; atraso mental. Cloranfenicol - Aplasia medular

Classificao da Toxicidade

 CLASSIFICAO DE TOXICIDADE POR VIA DE EXPOSIO

Diversos so os ndices de toxicidade disponveis na literatura tcnica pertinente toxicologia, e cada um deles destina-se a uma aplicao relacionada proteo da sade humana ou de sistemas ecolgicos especficos. Como j visto anteriormente, a toxicidade tambm depende da via de exposio. Relacionam-se, a seguir, as principais vias pelas quais os produtos perigosos podem atingir os seres vivos.

Tabela de Toxicidade Relativa por Ingesto

CLASSE DE TOXIDADE
Super Txico Extremamente Txico Muito Txico Moderadamente Ligeiramente Txico Praticamente Atxico

Provvel DL50 (via Oral) < 5mg/kg 5,1-50 mg/kg 51-500 mg/kg 0,51 - 5 g/kg 5,1 - 15 g/kg Maior do que 15 g/kg

Faixas de doses letais de vrias substncias

Dose Letal Substncias Naturais Substncias Sintticas

(g/ kg)
> 10 1 0,1 0,01 0,001 acar NaCl (sal) e etanol cafena nicotina Toxina da cascavel Aflatoxina-B (amendoim) Toxina do ttano e do botulismo malation DDT, tilenol Paration, estricnina

(mg/kg)
0,01 0,001 0,00001

RELEMBRANDO

SEM ELES NO H AVANO

Experincias com animais seguem imprescindveis, ao contrrio do que dizem ativistas

Edio 144 - Fevereiro 2008

reas da Toxicologia

Toxicologia de alimentos

Toxicologia ambiental

Toxicologia de medicamentos

Toxicologia ocupacional

Toxicologia social

Aspectos

Clnico

Analtico

Legislao

Pesquisa

TOXICOLOGIA
Toxicum, em latim, significa veneno.

Classificao da Toxicidade de um Agente Qumico

 CARACTERIZAO DE TOXICIDADE
TOXICIDADE AGUDA A toxidade aguda: testes de curta durao, em geral de 14 dias. Os ndices utilizados para sua caracterizao so a

Dose (DL50) ou Concentrao Letal (CL50): dose ou

concentrao em que 50% dos organismos submetidos ao teste morrem.

A maioria dos efeitos txicos provocados por produtos qumicos so reversveis, porm a recuperao total pode demorar longos perodos. Existem substncias que podem provocar danos irreversveis nos seres vivos.

DL50 x DL100

FATORES QUE PODEM INFLUCIAR A DL50

 CARACTERIZAO DE TOXICIDADE
TOXICIDADE CRNICA e SUB-CRNICA

Sub-crnica: testes realizados durante 30 a 90 dias Crnica: estudos levam de 18 a 24 meses.

Principais Rotas de Absoro

Vias Intramuscular, Subcutnea e Intradrmica

Fatores que Afetam a Toxicidade

MTODOS DE EUTANSIA
MTODOS RECOMENDVEIS 1 Agentes inalveis Anestsicos (ter, halotano, isoflurano, metoxiflurano,xido nitroso). Bixido de carbono. Monxido de carbono. 2 Frmacos no inalveis A administrao intravenosa de frmacos que causam a morte o mtodo mais rpido e confivel. Barbitricos (pentobarbital sdico e o socobarbital - so os mais baratos). 3 Mtodos fisicos Irradiao com microondas.

 MTODOS ACEITVEIS CONDICIONALMENTE

1 Frmacos inalveis Nitrognio e argo. 2 Mtodos fisicos Deslocamento cervical. Decapitao. perno cautivo penetrante. Eletrocuo.

MTODOS RESTRINGIDOS
Exsanguinao. Descompresso. Congelamento instantneo. O emprego como agente eutansico nico de substncias que induzem a paralisia muscular sem causar inconscincia proibido (curare, succinil colina, galamina, estricnina, sais de magnsio e potssio, entre outros). , tambm, inadmissvel o uso da nicotina sem anestesia prvia.

 MTODOS PROIBIDOS
1 Devido ao risco da pessoa que aplicar o mtodo: Clorofrmio (hepatotxixo, cancergeno). Anestsicos inalveis (mulheres grvidas podem ter abortos espontneos ou bebs com anormalidades congnitas). 2 Devido ao fato de no ser considerado humanitrio: Toro da cabea. Afogamento; Embolismo gasoso (injeo de ar). Agentes que causam a morte por hipoxia (induz convulses antes da inconscincia).

ESPCIE

RECOMENDADOS Barbitricos, anestsicos inalveis (em algumas espcies), Dixido de Carbono (CO), Monxido de Carbono (CO), metano sulfonato de tricana (TMS, MS222), hidrocloreto de benzocana, dupla seco da medula espinhal Barbitricos intra-venosos (IV) ou intraperitonais (IP), anestsicos inalveis, cloreto de potssio com anestesia geral prvia. Barbitricos, anestsicos inalveis, CO, CO, cloreto de potssio com anestesia geral prvia Barbitricos, anestsicos inalveis, CO, CO, pistola Barbitricos, anestsicos inalveis, CO, CO, cloreto de potssio com anestesia geral prvia Barbitricos, cloreto de potssio com anestesia geral prvia, pistola de ar comprimido Barbitricos, anestsicos inalveis, CO, CO, cloreto de potssio com anestesia geral prvia Barbitricos, anestsicos inalveis, CO, CO, cloreto de potssio com anestesia geral prvia

ACEITOS SOB RESTRIO Pistola de ar comprimido, pistola, atordoamento e decapitao, decapitao e seco da medula espinhal

ANFBIOS

ANIMAIS SELVAGENS DE VIDA LIVRE

CO, CO, Nitrognio (N), argnio, pistola de ar comprimido, pistola, armadilhas (testadas cientificamente) N, argnio, pistola de ar comprimido, pistola N, argnio, deslocamento cervical, decapitao N, argnio, pistola de ar comprimido, eletrocusso com sedao prvia Hidrato cloral, (IV, aps sedao), pistola, eletrocusso com sedao prvia N, argnio, deslocamento cervical (<1kg), decapitao, pistola de ar comprimido N, argnio

ANIMAIS DE ZOOLGICOS AVES CES

CAVALOS

COELHOS

GATOS

MAMFEROS MARINHOS PEIXES

Barbitricos, hidrocloreto de etorfina Barbitricos, anestsicos inalveis, CO, tricana metano sulfonato (TMS, MS222), hidrocloreto de benzocana, 2-fenoxietanol Barbitricos Barbitricos, anestsicos inalveis (em algumas espcies), CO (em algumas espcies) Barbitricos, anestsicos inalveis, CO, CO, cloreto de potssio com anestesia geral prvia Barbitricos, cloreto de potssio com anestesia geral prvia, pistola de ar comprimido Barbitricos, CO, cloreto de potssio com anestesia geral prvia, pistola de ar csomprimido

Pistola (cetceos <4m de comprimento) Decapitao e seco da medula espinhal, atordoamento e decapitao ou seco da medula espinhal Anestsicos inalveis, CO, CO, N, argnio Pistola de ar comprimido, pistola, decapitao e seco da medula espinhal, atordoamento e decapitao Metoxiflurano, N, argnio, deslocamento cervical (ratos <200g), decapitao Hidrato cloral (IV, aps sedao), pistola, eletrocusso, com sedao prvia Anestsicos inalveis, CO, hidrato cloral, (IV aps sedao), pistola, eletrocusso com sedao prvia, pancada na cabea (< 3 semanas de idade) N, argnio, eletrocusso, com sedao prvia seguida de deslocamento cervical.

PRIMATAS NO-HUMANOS

RPTEIS

ROEDORES E OUTROS PEQUENOS MAMFEROS RUMINANTES SUNOS

RAPOSAS, E OUTROS MAMFEROS CRIADOS PARA EXTRAO DO PLO

Barbitricos, anestsicos inalveis, CO (vises requerem altas concentraes para eutansia sem agentes suplementares), CO, cloreto de potssio, com anestesia geral prvia

PROJETO DE LEI
Dispe sobre criao e uso de animais para atividades de ensino e pesquisa.

O CONGRESSO NACIONAL decreta:

Captulo I DAS DISPOSIES PRELIMINARES

Art. 1o Esta Lei estabelece critrios para a criao e a utilizao de animais em atividades de ensino e pesquisa cientfica, em todo o territrio nacional. 1o A utilizao de animais em atividades de ensino fica restrita a estabelecimentos de ensino superior ou tcnico de 2o grau. 2o So consideradas como atividades de pesquisa cientfica todas aquelas relacionadas com cincia bsica, cincia aplicada, desenvolvimento tecnolgico, produo e controle da qualidade de drogas, medicamentos, alimentos, imunobiolgicos, instrumentos, ou quaisquer outros testados em animais, conforme definido em regulamento prprio. 3o No so consideradas como atividades de pesquisa as prticas zootcnicas relacionadas agropecuria.

 Art. 2o O disposto nesta Lei aplica-se aos animais das espcies classificadas como Filo Chordata, sub-filo Vertebrata, observada a legislao ambiental.

 Art. 3o Para as finalidades desta lei, entende-se por:

I - Filo Chordata: animais que possuem como caractersticas exclusivas um eixo dorsal de sustentao, um sistema respiratrio derivado da faringe, um sistema nervoso tubular oco e dorsal e um corao localizado ventralmente em relao ao tubo digestivo; II - Sub-filo Vertebrata: animais que possuem notocorda na fase embrionria, substituda gradativamente pela coluna vertebral cartilaginosa ou ssea, encfalo e esqueleto interno cartilaginoso ou sseo; III - Cincia bsica: domnio do saber cientfico cujas prioridades residem na expanso das fronteiras do conhecimento independentemente de suas aplicaes; IV - Cincia aplicada: domnio do saber cientfico cujas prioridades residem no atendimento das necessidades impostas pelo desenvolvimento social, econmico e tecnolgico; V - Imunobiolgicos: derivados biolgicos destinados a imunizaes ou reaes imunitrias; VI - Experimentos: procedimentos efetuados em animais vivos, visando elucidao de fenmenos fisiolgicos ou patolgicos, mediante tcnicas especficas e preestabelecidas; VII - Eutansia: prtica que acarreta a morte do animal, sem provocar dor ou ansiedade, visando a evitar sofrimento, mediante tcnicas especficas e preestabelecidas; VIII - Centro de criao: local onde so mantidos os reprodutores das diversas espcies animais, dentro de padres genticos e sanitrios preestabelecidos, para utilizao em atividades de ensino e pesquisa; IX - Biotrio: local dotado de caractersticas prprias onde so criados ou mantidos animais de qualquer espcie, destinados ao campo da cincia e tecnologia voltado sade humana e animal; X - Laboratrio de experimentao animal: local provido de condies ambientais adequadas, bem como de equipamentos e materiais indispensveis realizao de experimentos em animais, que no podem ser deslocados para um biotrio.

 Captulo II
DO CONSELHO NACIONAL DE CONTROLE DE EXPERIMENTAO ANIMAL (CONCEA) Art. 4o Fica criado o Conselho Nacional de Controle de Experimentao Animal (CONCEA).

 Art. 5o Compete ao CONCEA:

I - expedir e fazer cumprir normas relativas utilizao humanitria de animais com finalidade de ensino e pesquisa cientfica; II - credenciar instituies para criao ou utilizao de animais em ensino e pesquisa cientfica; III - monitorar e avaliar a introduo de tcnicas alternativas que substituem a utilizao de animais em ensino e pesquisa; IV - estabelecer e rever, periodicamente, as normas para uso e cuidados com animais para ensino e pesquisa, em consonncia com as convenes internacionais das quais o Brasil seja signatrio; V - estabelecer e rever, periodicamente, normas tcnicas para instalao e funcionamento de centros de criao, de biotrios e de laboratrios de experimentao animal, bem como sobre as condies de trabalho em tais instalaes; VI - estabelecer e rever, periodicamente, normas para credenciamento de instituies que criem ou utilizem animais para ensino e pesquisa; VII - manter cadastro atualizado dos procedimentos de ensino e pesquisa realizados ou em andamento no Pas, assim como dos pesquisadores, a partir de informaes remetidas pelas Comisses de tica no Uso de Animais, de que trata o artigo 8 o desta Lei; VIII - apreciar e decidir recursos interpostos contra decises das CEUAs; IX - elaborar e submeter ao Ministro de Estado da Cincia e Tecnologia, para aprovao, o seu regimento interno; X - assessorar o Poder Executivo a respeito das atividades de ensino e pesquisa tratadas nesta Lei.

 Art. 6o O CONCEA constitudo por: I - Plenrio; II - Cmaras Permanentes e Temporrias; III - Secretaria-Executiva. 1o So Cmaras Permanentes do CONCEA, a de tica, a de Legislao e Normas e a de Tcnica, conforme definido no regimento interno. 2o A Secretaria-Executiva responsvel pelo expediente do CONCEA e ter o apoio administrativo do Ministrio da Cincia e Tecnologia. 3o O CONCEA poder valer-se de consultores "ad-hoc" de reconhecida competncia tcnica e cientfica, para instruir quaisquer processos de sua pauta de trabalhos

 Art. 7o O CONCEA ser presidido pelo Ministro de Estado da Cincia e Tecnologia e integrado por:
I - um representante de cada rgo e entidade a seguir indicados: a) Ministrio da Cincia e Tecnologia; b) Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq); c) Ministrio da Educao e do Desporto; d) Ministrio do Meio Ambiente, dos Recursos Hdricos e da Amaznia Legal; e) Ministrio da Sade; f) Ministrio da Agricultura e do Abastecimento; g) Universidades Federais; h) Academia Brasileira de Cincias; i) Sociedade Brasileira para o Progresso da Cincia; j) Federao das Sociedades de Biologia Experimental; l) Colgio Brasileiro de Experimentao Animal; m) Federao Nacional da Indstria Farmacutica; II - dois representantes das Sociedades Protetoras de Animais legalmente estabelecidas no Pas. 1o Nos seus impedimentos, o Ministro de Estado da Cincia e Tecnologia ser substitudo, na presidncia do CONCEA, pelo Secretrio-Executivo do respectivo Ministrio. 2o O presidente do CONCEA ter o voto de qualidade. 3o Os membros do CONCEA no sero remunerados, sendo os servios por eles prestados considerados, para todos os efeitos, de relevante servio pblico.