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INSTRUES DE UTILIZAO MEIOS EM PLACAS PRONTOS A USAR

PA-254458.02 Rev.: Junho de 2003

BD Triple Sugar Iron Agar (Agar TSI)


UTILIZAO PRETENDIDA
O BD Triple Sugar Iron Agar, quando utilizado como um meio em placas, utilizado para diferenciao de Enterobacteriaceae, especialmente para diferenciar a Salmonella de outras bactrias entricas.

PRINCPIOS E EXPLICAO DO PROCEDIMENTO


Mtodo microbiolgico. Hajna desenvolveu a formulao do Agar TSI atravs da adio de sacarose formulao com dois acares (glucose e lactose) do Agar de ferro de Kligler.1,2 O Agar de ferro com trs acares contm trs hidratos de carbono (glucose, lactose e sacarose). Quando estes hidratos de carbono so fermentados, a produo resultante de cido detectada pelo indicador vermelho de fenol. As alteraes da cor resultantes so o amarelo para a produo de cido e o vermelho para alcalinizao. Uma vez que a lactose e a sacarose esto presentes em concentraes muito mais elevadas do que a glucose, a formao cida na base deve-se a estes acares, enquanto a formao cida de glucose suprimida por uma oxidao rpida da pequena quantidade de cido na rea inclinada do tubo. Tal resulta numa reaco neutra ou alcalina do pH quando apenas a glucose fermentada. A sacarose adicionada permite a excluso de determinados organismos coliformes e Proteus que podem atacar a sacarose, mas no a lactose, num perodo de incubao de 24 a 48 h. Num pH neutro ou alcalino, o sulfureto de hidrognio (produzido a partir de tiossulfato de sdio) reage ao sal de amnio ferroso, resultando num sulfureto de ferro preto. O cloreto de sdio mantm o equilbrio osmtico do meio. A aplicao original da frmula TSI consiste na sua utilizao como um meio preparado em tubos, contendo uma rea no limite e uma rea inclinada. Este meio permite a diferenciao dos fermentadores da glucose, lactose, e/ou sacarose e a deteco da produo de sulfureto de hidrognio. Quando utilizado como um meio em placas, as reaces observadas na camada de agar da placa esto limitadas formao de produtos alcalinos (produzidos com base nas peptonas do meio, caso no se verifique a fermentao da glucose, lactose, e/ou sacarose), ou produtos cidos da lactose e/ou sacarose que consistem nos principais acares do meio. Alm disso, a produo de sulfureto de hidrognio ocorre se nenhum dos acares for fermentado em produtos cidos, uma vez que a formao deste composto necessita de um pH neutro a alcalino. A maioria das estirpes de Proteus, conhecidas por produzirem sulfureto de hidrognio a um pH neutro ou alcalino, acidificam o meio visto que fermentam a sacarose e no aparecero com uma cor preta. Por outro lado, as estirpes de Salmonella que no fermentam a sacarose nem a lactose produzem colnias pretas.

REAGENTES
BD Triple Sugar Iron Agar Frmula* por Litro de gua Purificada Hidrolisado pancretico de casena 10,0 g Glucose 1,0 g Hidrolisado pptico de tecido animal 10,0 Sulfato de amnio ferroso 0,2 Cloreto de sdio 5,0 Tiossulfato de sdio 0,2 Lactose 10,0 Vermelho de fenol 0,025 Sacarose 10,0 Agar 13,0 pH 7,3 0,2 *Ajustada e/ou suplementada, conforme necessrio, para cumprir os critrios do desempenho.

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PRECAUES
. Apenas para uso profissional. No utilizar as placas que apresentem sinais de contaminao microbiana, descolorao, secura, fissuras ou outros sinais de deteriorao. Consultar as INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO para informao sobre os procedimentos de manuseamento assptico, os riscos biolgicos e os procedimentos de eliminao do produto usado.

ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE


Aps recepo das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8C, dentro do invlucro original at ao momento da utilizao. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As placas podem ser inoculadas at ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e incubadas durante o tempo de incubao recomendado. As placas so fornecidas em pilhas de 10 e, quando uma destas pilhas aberta, as respectivas placas tero de ser utilizadas no prazo mximo de uma semana, se forem conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8C.

CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR


Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO). Incubar as placas em condies aerbias, a uma temperatura entre 35 e 37C, durante 18 a 24 h. Incluir um meio no selectivo como, por exemplo o Agar de Columbia com sangue de ovelha a 5% para servir de referncia de crescimento. Estirpes Resultados de Crescimento Escherichia coli ATCC 25922 Crescimento bom a excelente; colnias amarelas, meio amarelo volta das colnias Crescimento bom a excelente; colnias cor-de-rosa com Salmonella Typhimurium ATCC 14028 centros pretos; meio vermelho Salmonella Abony DSM 4224 Crescimento bom a excelente; colnias cor-de-rosa com centros pretos; meio vermelho Shigella flexneri ATCC 12022 Crescimento bom a excelente; colnias cor-de-rosa; meio vermelho

PROCEDIMENTO
Materiais fornecidos BD Triple Sugar Iron Agar (placas Stacker de 90 mm). Microbiologicamente controlado. Materiais no fornecidos Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessrio. Tipos de amostra Trata-se de um meio para diferenciao que no deve ser utilizado para o isolamento primrio de agentes patognicos a partir de amostras clnicas. Este meio utilizado na diferenciao de culturas puras obtidas em meios de isolamento, podendo tambm ser utilizado como um meio para repicagem de caldo de enriquecimento de Salmonella (consultar tambm CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAES DO PROCEDIMENTO). Procedimento do teste Inocular o BD Triple Sugar Iron Agar com uma colnia suspeita de uma placa de isolamento primrio ou uma ansa cheia de meio de um caldo de enriquecimento de Salmonella (por exemplo, caldo Selenite). Incubar numa atmosfera aerbia, a uma temperatura entre 35 e 37C, durante 18 a 24 h. No incubar as placas numa atmosfera aerbia enriquecida com dixido de carbono nem por um perodo superior a 24 h, dado que podero ser produzidos resultados errados. Resultados As reaces tpicas verificadas em placas de BD Triple Sugar Iron Agar so as seguintes:
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Organismos Escherichia coli Klebsiella/Enterobacter Proteus Salmonella (estirpes positivas para H2S) Shigella e Salmonella negativa para H2S Enterococcus

Resultados de Crescimento Colnias amarelas, meio amarelo Colnias mucides amarelas, meio amarelo Colnias em proliferao avermelhadas a acinzentadas; meio vermelho; estripes positivas sacarose podero produzir colnias amarelas circundas pelo halos amarelos Colnias cor-de-rosa com centros pretos; meio vermelho Colnias cor-de-rosa; meio vermelho Colnias amarelas de pequena dimenso, o meio volta das colnias vermelho

O crescimento deste meio deve ser diferenciado atravs de testes bioqumicos e/ou serolgicos para fornecer uma identificao completa das estirpes isoladas.

CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAES DO PROCEDIMENTO


O BD Triple Sugar Iron Agar um meio no selectivo utilizado para a diferenciao entre colnias suspeitas de Salmonella de outras Enterobacteriaceae obtidas em meios de isolamento, ou como um meio para a repicagem de caldo de enriquecimento de Salmonella. As maioria das estirpes de Salmonella iro produzir colnias cor-de-rosa com um centro preto neste meio, enquanto as colnias de outros organismos so vermelhas ou amarelas e no apresentam um centro preto. No entanto, determinadas estirpes de Salmonella no tero o centro preto e podero no ser detectadas caso no sejam novamente diferenciadas. Alm disso, o meio no permite uma diferenciao entre a Shigella e outras Enterobacteriaceae. Por essa razo, todas as colnias cor-de-rosa sem um centro preto devero tambm ser examinadas quanto a Salmonella e Shigella, realizando por exemplo, testes de aglutinao em lmina com os anti-soros apropriados. Os resultados obtidos neste meio devero ser confirmados com mais testes bioqumicos ou serolgicos.3 As reaces obtidas no BD Triple Sugar Iron Agar, fornecido como um meio em placas, podero ser diferentes das descritas para o agar de ferro com trs acares fornecido em tubos.4 O BD Triple Sugar Iron Agar no considerado um meio de isolamento primrio para Salmonella ou outros agentes patognicas. Avaliao do desempenho Numa avaliao realizada a nvel interno (consultar Tabela 1), trinta estirpes de Enterobacteriaceae, Enterococcus spp. e Staphylococcus aureus, incluindo dez estirpes de Salmonella de vrios sertipos, foram testadas no BD Triple Sugar Iron Agar.5 As placas foram incubadas numa atmosfera ambiente durante 20 h, a uma temperatura entre 35 a 37C. Das dez estirpes de Salmonella, nove produziram colnias vermelhas com centros pretos, enquanto uma no apresentou o centro preto da colnia. Todas as restantes espcies includas demonstraram as reaces esperadas. Esta avaliao resultou numa sensibilidade de 96,8% de todas as estirpes testadas e de 91% relativamente s estirpes de Salmonella.

BIBLIOGRAFIA
1. Hajna, A. A. 1945. Triple-sugar iron agar medium for the identification of the intestinal group of bacteria. J. Bacteriol. 49:516-517. 2. Kligler, I. J. 1918. Modifications of culture media used in the isolation and differentiation of typhoid, dysentery, and allied bacilli. J. Exp. Med. 28:319-322. 3. Bopp, C. A., F. W. Brenner, P. I. Fields, J. G. Wells, and N. A. Stockbrine. 2003. Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for the isolation cultivation maintenance of medical bacteria. Volume 1. Williams and Wilkins, Baltimore, London
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5. Data on file. BD Diagnostic Systems Europe. Heidelberg, Germany.

EMBALAGEM/APRESENTAO
BD Triple Sugar Iron Agar No. de cat. 254458 Meios em placas prontos a usar, 20 placas

INFORMAES ADICIONAIS
Para obter informaes adicionais, contacte o representante local da BD.

BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergs 38800 Le Pont de Claix/France Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292

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BD, BD logo and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton, Dickinson and Company

Tabela 1: Resultados de desempenho


Espcie (No. de estirpes) Enterococcus faecalis (1) Enterococcus faecium (1) Escherichia coli, positiva lactose (4) Escherichia coli, negativa lactose (1) Morganella morganii (1) Proteus mirabilis (2) Proteus penneri (1) Proteus vulgaris (1) Providencia alcalifaciens (1) Providencia rettgeri (1) Providencia stuartii (1) Salmonella Abony (1) Salmonella Augustenborg (1) Salmonella Bovismorbificans (1) Salmonella Enteritidis (1) Salmonella Gallinarum (1) Salmonella Hadar (1) Salmonella Saintpaul (1) Salmonella Senftenberg (1) Salmonella Typhimurium (1) Salmonella Typhimurium (1) Shigella boydii (1) Shigella flexneri (1) Shigella sonnei (1) Staphylococcus aureus (2) PA-254458.02 Resultados de Crescimento no BD Triple Sugar Iron Agar Colnias amarelas de pequena dimenso, meio amarelo Colnias amarelas de mdia a grande dimenso, meio amarelo Colnias cor-de-rosa de mdia a grande dimenso, meio vermelho a cor-de-rosa Colnias cor-de-rosa de mdia a grande dimenso, meio vermelho a cor-de-rosa Colnias cor-de-rosa de mdia a grande dimenso com zonas de proliferao, meio vermelho a cor-de-rosa Colnias amarelas de mdia a grande dimenso com zonas de proliferao, meio amarelo Colnias cor-de-rosa de mdia a grande dimenso, meio vermelho a cor-de-rosa

Colnias cor-de-rosa de mdia a grande dimenso com centro preto, meio vermelho a cor-de-rosa

Colnias cor-de-rosa de mdia a grande dimenso, meio vermelho a cor-de-rosa Colnias cor-de-rosa de mdia a grande dimenso, meio vermelho a cor-de-rosa Colnias amarelas de pequena a mdia dimenso, meio amarelo -4-