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FISIOLOGIA BACTERIANA

O crescimento e diviso celulares necessitam de um ambiente propcio com todos os constituintes qumicos e fsicos necessrios para o seu metabolismo. Essas necessidades especficas so dependentes de informaes genticas para cada espcie bacteriana. Algumas espcies com vasta flexibilidade nutricional, como as Pseudomonas, so capazes de sintetizar muitos de seus metablitos a partir de precursores simples, enquanto outras espcies so mais exigentes, como as Porphyromonas e Treponemas, que necessitam de nutrientes complexos para o crescimento e reproduo.

NUTRIO A anlise das estruturas bacterianas revela que sua arquitetura formada por diferentes macromolculas, em particular, protenas e cidos nuclicos. Os precursores das macromolculas podem ser retirados do meio ambiente ou ser sintetizados pelas bactrias a partir de compostos mais simples. A alternativa escolhida vai depender da disponibilidade do composto no meio e da capacidade de sntese do microrganismo. As substncias ou elementos retirados do ambiente e usados para construir novos componentes celulares ou para obter energia so chamados nutrientes. Os nutrientes podem ser divididos em duas classes: macronutrientes e micronutrientes. Ambos os tipos so imprescindveis, mas os primeiros so requeridos em grandes quantidades por serem os principais constituintes dos compostos orgnicos celulares e / ou serem utilizados como combustvel. Macronutrientes Carbono: est presente na maioria das substncias que compem as clulas. As bactrias podem utilizar o carbono inorgnico existente no ambiente, na forma de carbonatos ou de CO2 como nica fonte de carbono. So neste caso chamadas de autotrficas. Os microrganismos que obrigatoriamente requerem uma fonte orgnica de carbono so denominados heterotrficos e as principais fontes, so os carboidratos. Oxignio: requerido na forma molecular como aceptor final na cadeia de transporte de eltrons aerbia. Tambm elemento importante em vrias molculas orgnicas e inorgnicas. Hidrognio: como componente muito freqente da matria orgnica e inorgnica, tambm constitui um elemento comum de todo material celular. Nitrognio: componente de protenas e cidos nuclicos, alm de vitaminas e outros compostos celulares. Est disponvel na natureza sob a forma de gs (N2) ou na forma combinada. Sua utilizao como N2 restrita a um grupo de bactrias cujo principal habitat o solo. Na forma combinada, o nitrognio encontrado como matria inorgnica (NH3 , NO3 , etc.) ou matria orgnica: aminocidos, purinas e pirimidinas.

Enxofre: faz parte de aminocidos (cistena e metionina), de vitaminas e grupos prostticos de vrias protenas importantes em reaes de xido-reduo. Da mesma forma que o nitrognio, o enxofre pode ser encontrado no ambiente nas formas elementar, oxidada e reduzida; estas duas ltimas aparecem como compostos orgnicos e inorgnicos. Todas as alternativas citadas podem ser utilizadas pelas bactrias, porm so os sulfatos (SO4 -2) inorgnicos ou os aminocidos as formas preferencialmente assimiladas. Na forma oxidada, tambm pode ser aceptor final de eltrons das cadeias de transporte de eltrons anaerbias. Fsforo: encontrado na clula na forma combinada a molculas importantes como os nucleotdeos (ATP, CTP, GTP, UTP, TTP) e como fosfato inorgnico; nesta ltima forma incorporado atravs de poucas reaes metablicas, embora uma delas seja de fundamental importncia: a sntese de ATP a partir de ADP e fosfato. As substncias fosforiladas podem estar envolvidas com o armazenamento de energia ( como o ATP) ou atuar como reguladoras de processos metablicos: muitas enzimas tornam-se ativas ao serem fosforiladas. Micronutrientes Os elementos ferro, magnsio, mangans, clcio, zinco, potssio, sdio, cobre, cloro, cobalto, molibdnio, selnio e outros so encontrados sempre na forma inorgnica, fazendo parte de minerais. So necessrios ao desenvolvimento microbiano, mas em quantidades variveis, dependendo do elemento e do microrganismo considerados. Os micronutrientes podem atuar de diferentes maneiras, incluindo as seguintes funes principais:

componentes de protenas, como o ferro que participa da composio de vrias protenas enzimticas ou no, de citocromos, etc.; cofatores de enzimas, como o magnsio, potssio, molibdnio, etc. Componentes de estruturas, como o clcio, presente em um dos envoltrios dos esporos; Osmorreguladores.

Condies de Cultivo Para se cultivar microrganismos deve-se obedecer a requisitos bsicos obrigatrios, quais sejam incub-los em meios de cultura adequados e incub-los em condies ambientais igualmente adequadas. Um inculo uma amostra de material contendo geralmente uma pequena quantidade de microrganismos; obedecidas as condies citadas, os microrganismos contidos no inculo multiplicam-se, aumentando em nmero e massa e, com isto, atingindo o objetivo desejado. Meios de Cultura

Meio de cultura uma mistura de nutrientes necessrios ao crescimento microbiano. Basicamente deve conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindveis vida das clulas. A formulao de um meio de cultura deve levar em conta o tipo nutritivo no qual o microrganismo pertence, considerando-se a fonte de energia (luz ou substncia qumica), o substrato doador de eltrons (orgnico ou inorgnico) e a fonte de carbono (orgnica ou inorgnica). Estabelecidas as condies gerais, o meio de cultura deve ainda atender as necessidades especficas do grupo, da famlia, do gnero ou da espcie que se deseja cultivar. Assim, imprescindvel acrescentar ao meio vitaminas, cofatores, aminocidos, etc., quando estes compostos no so sintetizados pelos microrganismos que se deseja cultivar. Fatores de crescimento Entre as bactrias heterotrficas h uma imensa variedade de exigncias nutritivas. Algumas so capazes de crescer em meio muito simples, constitudo de uma soluo de glicose, sal de amnio e alguns sais minerais. A partir desses compostos, sintetizam todos os componentes do protoplasma: protenas, polissacardeos, cidos nuclicos, coenzimas, etc. Outras, todavia, so incapazes de sintetizar determinados compostos orgnicos essenciais para o seu metabolismo. Para que estes microrganismos possam crescer, tais compostos devem ser obtidos do meio natural ou artificial em que vivem. Essas substncias so denominadas fatores de crescimento. Muitos desses fatores so componentes de coenzimas, que, para o homem, so vitaminas. Na realidade, certas vitaminas, como o cido flico, foram descobertas por serem necessrias ao crescimento de determinadas bactrias. As composies dos meios de cultura, portanto, podem ser muito variadas. Um meio pode ter uma composio simples, contendo um nico carboidrato como fonte de energia e carbono e alguns sais minerais; em outro extremo esto os meios requeridos por microrganismos mais exigentes, apresentando composio complexa, contendo vrias fontes de carbono e energia, vitaminas e aminocidos, podendo ainda ser acrescidos de sangue ou soro de animais. Alm da composio qualitativa, o meio de cultura deve obedecer aos limites de quantidade de cada componente suportveis pelos microrganismos. Muitas vezes o meio de cultura deve conter substncias para neutralizar a ao de produtos txicos lanados pelos prprios microrganismos, que sofrem os efeitos de seu acmulo. Um exemplo rotineiro adio de tampes para impedir a queda de pH provocada pelos cidos orgnicos produzidos por fermentao bacteriana. Os meios podem ser lquidos, quando so uma soluo aquosa de nutrientes, ou slidos, quando a soluo aquosa gelificada por um polissacardeo extrado de algas, o gar. O meio slido obrigatoriamente usado quando se pretende separar clulas. Cada clula individualizada ou agrupamento isolado d origem, por multiplicao, a um aglomerado que constitui uma colnia. Colnias de diferentes espcies geralmente apresentam caractersticas morfolgicas diferentes. Os meios de cultura podem ser seletivos, quando contm uma substncia que inibe o crescimento de um determinado grupo de microrganismos, mas permite o desenvolvimento de outros.

Influncia de fatores ambientais A tomada de nutrientes e posterior metabolismo so influenciados por fatores fsicos e qumicos do meio ambiente. Os principais fatores so: temperatura, pH, presena de oxignio, presso osmtica e luz. Temperatura Cada tipo de bactria apresenta uma temperatura tima de crescimento, em torno desta temperatura observa-se um intervalo dentro do qual o desenvolvimento tambm ocorre, sem, no entanto, atingir o seu mximo. Ultrapassado o limite superior, rapidamente ocorre desnaturao do material celular e, conseqentemente, a morte da clula. As temperaturas inferiores tima levam a uma desacelerao das reaes metablicas, com diminuio da velocidade de multiplicao celular, que em caso extremo, fica impedida. As variaes quanto ao requerimento trmico permite classificar as bactrias segundo a temperatura tima para o seu crescimento, em:

psicrfilas: entre 12 e 17 C mesfilas: entre 28 e 37C termfilas: 57 e 87C

Embora grupos excntricos, que necessitam de altas temperaturas para o seu crescimento, a maioria concentra-se no grupo de mesfilas, principalmente as de interesse mdico, veterinrio e agronmico. pH Os valores de pH em torno da neutralidade so os mais adequados para absoro de alimentos para a grande maioria das bactrias. Existem, no entanto, grupos adaptados a viver em ambientes cidos e alcalinos. Oxignio O oxignio pode ser indispensvel, letal ou incuo para as bactrias, o que permite classific-las em: - aerbias estritas: exigem a presena de oxignio, como as do gnero Acinetobacter. - microaerfilas: necessitam de baixos teores de oxignio, como o Campylobacter jejuni. - facultativas: apresentam mecanismos que as capacitam a utilizar o oxignio quando disponvel, mas desenvolver-se tambm em sua ausncia. Escherichia coli e vria bactrias entricas tem esta caracterstica.

- anaerbias estritas: no toleram o oxignio. Ex.: Clostridium tetani, bactria produtora de potente toxina que s se desenvolve em tecidos necrosados carentes de oxignio. Exoenzimas A seletividade da membrana citoplasmtica impede que macromolculas como protenas, amido, celulose e lipdeos sejam transportadas para o interior da clula. Para essas molculas serem utilizadas pelos microrganismos, necessrio cindidas, dando origem a compostos menores, aos quais as membranas so permeveis. A quebra das molculas promovida por enzimas hidrolticas, denominadas exoenzimas por atuarem fora da membrana citoplasmtica. As exoenzimas apresentam especificidade pelo substrato, atuando sobre protenas ou amidos, ou determinados lipdeos, e constituem um fator de virulncia, uma vez que podem hidrolisar componentes estruturais de tecidos, conferindo ao microrganismo capacidade invasora e de permanncia em outros organismos vivos. Alm de estarem associadas nutrio dos microrganismos, as exoenzimas podem contribuir para a sua sobrevivncia, uma vez que catalisam a hidrlise de substncias que lhes so txicas ou mesmo letais. Reproduo bacteriana - Crescimento: aumento do protoplasma celular pela sntese de cidos nuclicos, protenas, polissacardeos e lipdeos; e, absoro de gua e eletrlitos. Termina na diviso celular. - Multiplicao: resposta necessria presso de crescimento. Modo de reproduo - Cissiparidade: formao de um septo equatorial na regio do mesossomo e diviso da clula-me, em duas clulas filhas. "Cocos" em qualquer direo, "bacilos e espirilos", no sentido transversal. Curva de crescimento bacteriano Embora as bactrias desenvolvam-se bem em meios de cultura slidos , os estudos de crescimento so feitos essencialmente em meios lquidos e as consideraes que seguem so vlidas para essas condies. Quando uma determinada bactria semeada num meio lquido de composio apropriada e incubada em temperatura adequada, o seu crescimento segue uma curva definida e caracterstica. Fase lag (A): esta fase de crescimento ocorre quando as clulas so transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta a fase de ajuste e representa o perodo necessrio para adaptao das clulas ao novo ambiente. As clulas nesta fase

aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, mas no se dividem. Tais Tempo (horas). Clulas esto sintetizando DNA, novas protenas e enzimas, que so um pr-requisito para diviso. Fase exponencial ou log (B): nesta fase, as clulas esto se dividindo a uma taxa geomtrica constante at atingir um mximo de crescimento. Os componentes celulares como RNA, protenas, peso seco e polmeros da parede celular esto tambm aumentando a uma taxa constante. Como as clulas na fase exponencial esto se dividindo a uma taxa mxima, elas so muito menores em dimetro que as clulas na fase Lag. A fase de crescimento exponencial normalmente chega ao final devido depleo de nutrientes essenciais, diminuio de oxignio em cultura aerbia ou acmulo de produtos txicos. Fase estacionria (C): durante esta fase, h rpido decrscimo na taxa de diviso celular. Eventualmente, o nmero total de clulas em diviso ser igual ao nmero de clulas mortas, resultando na verdadeira populao celular estacionria. A energia necessria para manter as clulas na fase estacionria denominada energia de manuteno e obtida a partir da degradao de produtos de armazenamento celular, ou seja, glicognio, amido e lipdeos. Fase de morte ou declnio (D): quando as condies se tornam fortemente imprprias para o crescimento, as clulas se reproduzem mais lentamente e as clulas mortas aumentam em nmeros elevados. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e rico em toxinas produzidas pelos prprios microrganismos. Metabolismo Bacteriano Uma vez garantidos pelo ambiente os nutrientes e as condies adequadas para assimil-los, as bactrias vo absorv-los e transform-los para que cumpram suas funes bsicas, quais sejam, o suprimento de energia e de matria prima. Como matria-prima, os nutrientes vo ser transformados em estruturas celulares ou em molculas acessrias sua sntese e funcionamento. Obteno de energia As substncias com alto valor energtico so sempre aquelas com elevado grau de reduo, e grande parte das bactrias (exceo s fotossintetizantes) vai obter toda energia de que necessita por oxidao desses substratos. As substncias preferencialmente oxidadas por microrganismos so os acares, seguidos de protenas, peptdios e, mais raramente, as gorduras. As bactrias utilizam energia para o transporte de nutrientes, o movimento dos flagelos, mas sobretudo para as biossnteses. WIELAND (1912), reconheceu que a maioria das reaes biolgicas, ocorre na ausncia de oxignio, por desidrogenao. Em biologia, pode-se dizer que a perda de um eltron equivale a perda de um hidrognio. Pode-se, ento, definir oxidao como o ganho de um hidrognio e reduo como a perda de um hidrognio.

Fermentao Metabolismo no qual os compostos orgnicos servem como doadores e receptores de eltrons (hidrognio). A fermentao conduz, geralmente, ciso parcial de molculas de glicose (gliclise). Conceito antigo (clssico): decomposio microbiana de carboidratos na ausncia de oxignio. Dentre os vrios tipos de fermentao, pode-se citar:

Fermentao homoltica: produo de cido ltico como produto final. Fermentao alcolica: produo de lcool como produto final. Fermentao mista: produo de lcool, cido e gs. Fermentao butileno-gliclica: produo do butileno glicol (no cido) como produto final.

Putrefao Decomposio de compostos nitrogenados (protenas), utilizando-se de substncia orgnica como aceptor-doador de eltrons. um tipo de fermentao que produz produtos finais de odor desagradvel: indol, escatol, cido sulfdrico. Respirao Decomposio microbiana de substratos cujo receptor de hidrognio o oxignio. Na respirao ocorrem as seguintes etapas: a) Ciclo de Krebs; b) Cadeia transportadora de eltrons; c) Fosforilao oxidativa. Respirao anaerbica Quando o oxignio substitudo por outro receptor inorgnico de eltrons.